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  • 【转帖】用干细胞在实验室造出小型人类肝脏

    科学家们设法利用干细胞在实验室制造出小型人类肝脏。这一成功增加了制造出可用于移植的新肝脏的希望,尽管专家们说这还需要很多年时间。来自美国韦克福雷斯特大学巴普蒂斯特医疗中心的研究小组在波士顿的一个会议上展示了他们的研究成果。英国专家们说,这是“激动人心的进展”,但目前还不确定是否有可能培养出功能健全的肝脏。对可供移植肝脏的需求远超过所能供应的数量。近年来,研究工作的重点一直放在寻找用细胞技术维持或终有一天替代人体衰退器官的方法上。这些器官的基本构件是干细胞,一种在特定条件下分裂,形成各种人体组织的重要细胞。然而,用干细胞构建一个三维器官是一件困难的工作。韦克福雷斯特大学的研究人员以及世界上其他研究小组所使用的方法是,以现有肝脏结构为平台,生成新的肝脏组织。按照这种方法,研究人员利用一种洗涤剂剥离肝脏细胞,只留下支撑肝脏细胞的胶原框架和毛细血管网络。然后,新的干细胞——发育不完全的肝脏细胞以及用于生成新血管内壁的内皮细胞——被逐渐填入。将这些放入用各种营养物和氧气培养细胞的生物反应器中,一周后,科学家们观察到肝脏结构中出现普遍的细胞发育现象,并且这个小型器官甚至出现一些正常工作的迹象。领导这项研究的谢伊·瑟凯尔教授说:“我们为这项研究展现的可能性感到激动,但必须强调的是,我们还处于初级阶段,还必须克服许多技术障碍才能让病人受益于这项研究。”他说:“我们不仅需要弄清如何一次性培养大量肝细胞,以便为病人制造足够大的肝脏,我们还必须确定使用这些器官是否安全。”英国研究人员认为这项研究成果是可喜的。英国帝国理工学院教授马克·瑟斯说,这些研究成果“鼓舞人心”。他说:“报告显示,这些研究人员攻克了制造人造肝脏的主要障碍之一,即在‘自然生成的’肝脏结构中培养出正常工作的人类肝脏细胞。”他说:“很明显,这些细胞发育良好,但下一步是要证明它们能够像人类正常肝脏组织那样工作。”

  • 【转帖】动物肝脏作“支架” 人类干细胞当填充

    动物肝脏作“支架” 人类干细胞当填充    据英国《每日电讯报》11月1日(北京时间)报道,在波士顿举行的美国肝脏疾病研究大会上,美国维克森林大学浸会医学中心的研究人员表示,他们使用人体干细胞首次在实验室培育出微缩版人体肝脏,新的实验结果有助于在将来制造出全功能的人造肝脏,造福广大肝病患者。  人们对于移植肝脏的需求远远超过了可以获取的数量。最近几年,研究人员一直在想方设法使用细胞技术支撑人体内随着年龄增长不断衰弱的器官正常运转,甚至希望某一天可以用人造器官取而代之。  维克森林大学医学院主管兼教授谢伊·索科尔团队使用人体干细胞制造出该微型肝脏,在一个“支架”上形成新的肝脏组织,而这个“支架”由一个动物肝脏制造而成。  研究人员首先将动物肝脏中的细胞除去,仅仅留下支持细胞生长的胶原蛋白框架以及一个细小的血管网络。接着将新的干细胞,也就是不成熟的人类肝脏细胞和内皮细胞(主要用于形成血管的内壁)逐渐填入“支架”中。随后,再将整个框架移入一个生物反应器中,并使用营养物质和氧气的混合物来培养这些细胞。一周后的观察发现,细胞的生长状况非常好,甚至表现出了很多真正人体肝脏的功能。  索科尔表示,新研究成果令人兴奋,但目前还处于初级阶段,仍有很多技术障碍需要克服。比如,研究人员不仅需要知道如何同时培育出数十亿肝脏细胞,以获得足够大的肝脏供病人使用,同时也必须弄清楚这些器官是否安全。

  • 肝脏组织的的代谢组学

    请问用UPLC-Q-TOF-MS做肝脏组织的的代谢组学可以吗?[b][color=#444444]看了大部分的文献基本都是用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]或者核磁做肝脏组织,用这种方法做的都是血液和尿液,这是这种方法有什么限制吗?[/color][color=#444444]同时请各位大神如有看到类似的文献能分享给我吗[/color][/b]

  • 【金秋计划】四逆散通过维持肝脏氧化平衡和糖/脂代谢稳态来促进肝脏再生

    [size=15px][color=#595959]各种肝脏疾病的临床治疗效果与[b]肝脏的再生能力[/b]密切相关。肝再生不足或失败是暴发性肝衰竭和广泛肝切除术后死亡的直接原因。[b]肝脏再生[/b]主要依赖于肝细胞的增殖能力,肝细胞的快速增殖会产生大量的活性氧(ROS),如H2O2。生理水平的H2O2有助于[b]细胞增殖[/b]、分化和[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]血管[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]生成,而超生理浓度可导致生长停滞、[b]氧化应激损伤[/b]和其他病理过程。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959]四逆散(SNS)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是一种著名的调和肝脾功能的中药方剂,数千年来一直具有减轻肝损伤的临床疗效,广泛用于治疗肝炎、肝纤维化和非酒精性脂肪性肝病等。然而,其作用的确切分子药理学机制尚不清楚。[/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]探讨SNS对肝脏再生的影响并阐明其潜在机制。 [/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]采用[b]70%肝部分切除(PHx)小鼠模型[/b],分析SNS对肝再生的影响。使用[b]水通道蛋白[/b]9敲除小鼠(AQP9-/-)来证明SNS介导的肝再生增强是针对AQP9的。利用tdTomato标记的AQP9转基因小鼠系(AQP9-RFP)测定了AQP9蛋白在肝细胞中的表达模式。通过[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]免疫印[/color][/size][size=15px][color=#595959]迹[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]、实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]、染色技术和生化分析进一步探讨SNS的潜在机制。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]SNS治疗可显著促进70% PHx后野生型小鼠肝再生和肝细胞AQP9蛋白表达(AQP9+/+),但对AQP9-/-小鼠无显著影响。在70% PHx下,SNS通过增加活性氧清除剂谷胱甘肽和超氧化物歧化酶的水平,降低肝组织中氧化应激分子H2O2和丙二醛的水平,帮助维持肝脏[b]氧化平衡[/b],从而保留了肝细胞增殖的这一关键过程。同时,SNS增加了肝细胞对甘油的摄取,刺激糖异生,维持[b]糖/脂代谢稳态[/b],确保肝脏再生所需的能量供应。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][color=#3573b9]结论[/color][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]该研究首次证实了[b]SNS通过上调肝细胞中AQP9的表达,维持肝脏氧化平衡和糖脂代谢稳态,从而促进肝脏再生[/b]。这些发现为SNS促进肝脏再生的分子药理学机制提供了新的见解,并为其在肝脏疾病治疗中的临床应用和优化提供了指导。[/color][/size]

  • 【转帖】吃一包快食面 肝脏需要32天才能解毒

    根据台湾网站《39健康网》上的一篇文章,医学临床实验台湾的快熟面虽然好吃,但却是最“毒”的。吃一包台湾快熟面,肝脏需要解毒32天。   文章提到,因为要有好汤头,台湾快熟面的味精剂量常常是美国营养饼干的20倍之多,也是日本泡面的40倍以上,人体会不胜负荷,常吃的话会患血管瘤、牙齿掉光,甚至胎死腹中。   本地医生:   多吃容易发胖 却没有那么毒   新加坡本地中西医生受询时说,快熟面没有传说中那么“毒”。   刘志华医生受访时表示,快熟面确含有大量碳水化合物,为了保存方便,面都经过油炸,因此脂肪和热量很高,摄取过多会发胖,营养也不够均衡。但他说,没有研究显示它会对人体造成危害。   他说,肝是人体的解毒器官,通常药物和酒这类食品就需要肝脏来解毒,若患上肝硬化、重型肝炎等病,体内有毒物质就会蓄积。   中医师赵戈则表示,快熟面中所含的一些化学成份,可能需要肝脏来分解,但需要多长时间并不确知。   一名食品研究员告诉本报,本地制造的快熟面都受到严格的管制,任何成份都必须清楚列明在包装上,他认为快熟面多少还是包含人体可摄取的营养。  吃快熟面如何 “解毒”?   ①如果面是用泡的,最好自备碗,不要用原有的保丽龙碗。   ②只放三分之一或一半的调味料。   ③可加蛋或蔬菜,以补充蛋白质与维生素。

  • 科学家研制“芯片上的器官”测试药物疗效

    2013年06月20日 来源: 腾讯科学 腾讯科学讯(悠悠/编译) 据国外媒体报道,人们可以不再对小白鼠进行实验了,目前,科学家采用一种硅芯片进行医学测试,这将提供一个更好的方法理解药物的治疗效果。http://www.stdaily.com/stdaily/pic/attachement/jpg/site2/20130620/00241dd2ff15132c901e46.jpg美国科学家工程设计一种芯片能够模拟人体肺器官 科学家们正在研制“芯片上的器官”,在一个硅芯片上“缠绕”重要的细胞,例如肺细胞,之后模拟该器官的关键性功能。之后研究人员测试分析哪种药物将对肺器官具有显著的疗效,这种“芯片上的器官”并不大,仅有几厘米长。 美国默克公司研究人员在实验室使用微芯片模拟设计成一个功能不健全的肺器官,进行一系列药物实验寻求新型哮喘治疗方法。该公司呼吸药物研究部负责人唐-尼科尔森(Don Nicholson)称,公司的科学家们希望“芯片上的器官”帮助他们更好地理解哮喘疾病的生物特征,鉴别发现疗效最好的药物。 如果默克公司的这项医学实验效果显著,药物制造商将拥有一个新的工具,能够节省数百万美元。美国国家推进转化科学中心主管克里斯多夫-奥斯汀(Christopher Austin)称,芯片上的肺器官证实这个概念的可行性。据悉,奥斯汀所在机构致力于复制多样化人体组织和器官。 美国康奈尔大学生物工程系主任迈克尔-舒勒(Michael Shuler)说:“最终我们将建立一个‘10个芯片上的器官’。” 目前为止,这项技术仍在研究之中,药物监管部门尚未准备完全废止动物实验,或者采用当前的方法对临床患者进行药物安全性和有效性测试。 多家药物制造商仍在审核这项技术的可行性,期间多个实验室开始芯片模拟肾脏、肝脏和其它器官的功能。

  • 肝脏 残留检测 酶解

    请问开发肝脏的残留检测方法需要酶解吗?我看有葡萄糖酸酶和磷酸酯酶,请问还有其它的酶解吗?后续可能会做动物实验

  • 【求助】肝脏中的氯霉素检测——酶解方法

    请问各位版友,有无使用酶解检测肝脏中的氯霉素的方法?这方面的资料好像很少,在网上基本查不到,依稀记得在某个国标上见过酶解的方法,而今苦苦追寻无果,如果哪位板油有相关资料,还请不吝赐教,不胜感激。

  • 液质法做了30批河豚肝脏,均未检出,回收率可以做到60-70

    小弟萌新,第一次接触河豚毒素,按照5009.206中[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]法做了30批河豚肝脏,均未检出,回收率可以做到60-70,大致查了一下,肝脏属于剧毒器官,有大神做过吗?真的有那么干净的河豚吗?

  • [求助]大鼠肝脏的FTIR红外光谱的几个问题?

    我现在用的是FTIR红外光谱来做大鼠肝脏。肝脏组织没有经任何处理,直接放在Brucher公司全反射FTIR上测,但是结果很不好。我查了好多文献,看见有人用FTIR装上ATR探头,然后把未处理生物组织紧紧贴在ATR探头上,即可做出。不知道可不可以,请高手指教。

  • 肝脏一天能分解转化多少酒精,您知道吗?

    正常情况下,酒经胃肠道吸收后,在肝脏中经乙醇脱氢酶的作用转化为乙醛,而后生成乙酸,最后分解成二氧化碳和水排出体外。每个健康的成年人都具酒精分解消化能力,不过每个人的解酒能力因先天遗传体质、是否常喝酒、年龄及喝酒当时的健康与心理状况会有所不同。一般成年男子体内每天约可快速消化分解由外摄取的26毫升纯酒精(60-80g),相当于一瓶啤酒的酒精量,超过此量就会有害肝脏。当然,每个人对酒精的耐受力不一样,身体内的酒精分解酶多少也不同,因此不能用统一的标准来衡量酒精安全量。但是过量饮酒时,体内的乙醛来不及转变为乙酸,会生成大量的超氧阴离子自由基,出现醉酒或酒精中毒。要想避免酒精中毒,喝酒在晚餐时最好。因为酒精经肝脏分解时需要多种酶与维生素的参与,可以分解乙醇的乙醇脱氢酶的活性有时间节律性, 即在中午时活性降低,而在晚上特别是夜间活性增加,也就是说在中午,乙醇不容易被代谢成二氧化碳和水,此时喝酒往往比晚上容易醉,对身体造成的危害也较大。 一般情况下,酒的酒精度数越高酒量就应相应减少,一天的总量,白酒一般应控制在50毫升左右,药酒控制在100毫升左右,黄酒可以在100毫升左右,红酒控制在150~200毫升,啤酒控制在500毫升左右为宜。

  • 肝脏组织中多种药物的固相萃取方法

    在动物性食品中,需要检测的不仅有农药残留污染物,还有兽药以及其他添加物。而动物性食品的主要基质干扰来自于蛋白质、多肽、氨基酸和脂肪等。样品萃取净化的主要困难来自于极性药物与强水溶性基质(蛋白质、氨基酸)的分离和弱极性药物与亲脂性基质的分离。由于兽药的化学性质差异很大,使多残留同时检测具有非常大的难度。样品预处理:肝脏组织1 g与3 mL水混合匀浆,取0.4 mL(等于100 mg肝脏组织)中加入1 mL去离子水,并在超声波水浴中振荡5 min后6000 g离心10 min。上清液A供萃取酸性及中性药物。样品离心后得到的沉淀物中加入枯草杆菌蛋白酶的Tris溶液,混合均匀后(pH 10.5),60℃水解1 h。水解完成后,将样品冷却至室温,用10%(体积分数)磷酸将样品的pH调节至6~7,并在6000 g离心10 min。所得到的上清液(B)用于萃取碱性药物。固相萃取柱:Bond E1ut Certify非极性/阳离子交换混合柱,130mg/3 mL,Varian公司。柱预处理:2 mL甲醇,2 mL磷酸缓冲溶液。样品过柱:0.4 mL上清液A过柱。柱洗涤:1 mL水,0.5 mI,磷酸缓冲溶液(pH 4.0)。柱干燥:50μL甲醇,空气。目标物洗脱:4 mL丙酮/氯仿(1:1,体积比),洗脱酸陛和中性药物(馏分A)。柱预处理:2 mL磷酸缓冲溶液(使用上述同一根萃取柱)。样品过柱:上述上清液B过柱。柱洗涤:1 mL 1 mol/L醋酸(pH 2.4),2 mL丙酮/氯仿(1:1,体积比。柱干燥:50μL甲醇,空气。目标物洗脱:2 mL 2%(体积分数)氨化乙酸乙酯,洗脱碱性药物(馏分B)。浓缩/分析:分别将丙酮/氯仿洗脱馏分及氨化乙酸乙酯洗脱馏分在氮气氛40℃浓缩至约100μL,然后进行GC分析。

  • 知母黄柏药对改善肝脏脂肪变性的机制和生物活性成分

    [font=宋体][size=15px]目前,缺乏针对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的药物干预措施,其特征是肝脏甘油三酯的积累。中医的配方已被广泛用于治疗各种疾病,尤其是慢性内分泌疾病。知母黄柏(Zhimu-Huangbai,ZH)药对,由知母和黄柏组成,是一种调节葡萄糖和脂质代谢紊乱的传统中药,这两种草药都记录在《中国药典》。然而,高脂饮食(HFD)诱导的肝甘油三酯预防作用的确切机制仍不清楚。[/size][/font] [font=宋体][size=15px]2024年9月2日,上海中医药大学中药学院张彤/丁越团队在Phytomedicine上发表了题为“Zhimu-Huangbai herb-pair ameliorates hepatic steatosis in mice byregulating IRE1α/XBP1s pathway to inhibit SREBP-1c”的文章,发现知母黄柏药对(ZH)通过调节IRE1α/XBP1s通路降低SREBP-1c的表达改善肝脏脂肪变性,其中5种活性成分可起到相同作用,通过直接靶向IRE1α降低下游XBP1s的表达抑制脂质合成。[/size][/font] [size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0]1[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、ZH降低NAFLD小鼠肝脏脂质积累[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][font=宋体][size=15px]作者首先检测了ZH对NAFLD模型的影响,发现ZH显著减轻肝脏脂肪变性,减轻体重、肝重、肝体重比、肝脏TG含量、血清TG、TC、LDL-C水平。同时,ZH改善肝脏炎症、血糖和胰岛素耐受,降低HFD诱导的血清ALT和AST水平升高[/size][/font][font=宋体][size=15px]ZH降低NAFLD小鼠肝脏脂质积累 [/size][/font][size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0]2[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、ZH降低NAFLD小鼠的脂质生成[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][font=宋体][size=15px]为了研究ZH如何抑制肝脏脂质积累,作者检测了基因与脂质代谢有关的表达,ZH干预明显降低了新生脂肪生成基因的表达和TG合成,而没有明显影响与脂肪酸运输或摄取相关的基因。ZH还能降低SREBP-1c和FASN的表达。SREBP-1c的成熟活性形式是由SREBP-1c转移到细胞核(N-SREBP-1)并结合特定的目标基因启动子上的反应元件。作者发现ZH主要降低了N-SREBP-1c的表达[/size][/font][font=宋体][size=15px]ZH降低NAFLD小鼠的脂质生成 [/size][/font][size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0]3[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、ZH的作用与内质网应激有关[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][font=宋体][size=15px]内质网应激可引发肝细胞内脂质积累。作者发现ZH干预降低了模型小鼠中BIP和CHOP基因及蛋白的表达。在内质网应力存在的情况下,INSIG1-SCAP-SREBP1复合物中的INSIG1降解,促进SCAP-SREBP1复合物进入高尔基体,其中SREBP1被裂解形成N-SREBP-1c并开始合成脂质。作者发现ZH降低ER胁迫下SREBP1与SCAP结合进而降低N-SREBP-1c[/size][/font] [font=宋体][size=15px][/size][/font][size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0]4[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、ZH改善TM诱导的内质网应激和脂质积累[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][font=宋体][size=15px]作者采用Tunicamycin(TM)诱导的急性内质网应激模型研究了ZH对内质网应激诱导过程中脂质代谢的影响。发现ZH能改善肝功能、脂肪变性和肝脏TG、TC含量,降低Bip和Chop基因的表达,以及新生脂质和甘油三酯合成的基因,但没有明显抑制脂肪酸运输或摄取基因,结果表明内质网应激可能是ZH治疗NAFLD的潜在机 [/size][/font][size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0]5[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、IRE1α/XBP1s通路是ZH的潜在靶点[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][font=宋体][size=15px]作者检测了内质网应激三个主要的信号通路蛋白(ER跨膜受体IRE1α,PERK和ATF6),发现NAFLD小鼠IRE1α、磷酸化IRE1α和磷酸化PERK蛋白表达升高,ZH降低了磷酸化IRE1α和磷酸化PERK的表达,而对ATF6的表达无影响。XBP1u(未剪接的XBP1)在内质网胁迫下被IRE1α剪接产生剪接的XBP1(XBP1s),ZH可降低XBP1s表达,提示ZH通过IRE1α/XBP1途径改善肝脏脂肪变性[/size][/font] [font=宋体][size=15px][/size][/font][size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0]6[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、ZH通过XBP1抑制肝脏脂质积累[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][font=宋体][size=15px]作者随后检测了ZH干预后XBP1s对无内质网应激肝脂肪变性相关病理后果的潜在影响,通过XBP1过表达发现XBP1s可在无内质网应激的情况下增加SREBP-1c的表达,而给药ZH后则相反[/size][/font] [font=宋体][size=15px][/size][/font][size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0]7、[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]ZH中潜在的活性化合物抑制IRE1α/XBP1s途径[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][font=宋体][size=15px]为了检测ZH中抑制IRE1α/XBP1s通路的活性物质,作者检测了ZH煎液的潜在活性化合物处理对棕榈酸(PA)诱导的BNL CL.2细胞脂质合成的影响,通过商用生化试剂盒检测各组细胞的甘油三酯水平。结果显示,与空白组相比,PA组甘油三酯水平显著升高,洛伐他汀(脂质合成抑制剂)组甘油三酯水平显著降低,ZH中潜在活性化合物不同程度降低甘油三酯浓度。[/size][/font][font=宋体][size=15px]为了鉴定HZ通过靶向IRE1α抑制脂质合成的潜在活性化合物,作者将ZH中排名前9位的化合物与IRE1α进行分子对接,所有化合物都被认为是潜在活性化合物,对接评分≤- 5kcal/mol。作者选择了5个对接评分≤-9 kcal/mol的化合物进一步分析了IRE1α-五种化合物的结合相互作用模式,并通过CETSA实验进一步证实了这五种化合物与IRE1A的互作。接着作者检测了活性化合物对IRE1α靶点Xbp1s mRNA的表达的影响,发现PA处理后,Xbp1s mRNA表达增加,而五种活性成分(新甘菊素、黄柏碱、芒果苷、麻根碱和小檗碱)处理显著降低xbp1的表达。[/size][/font][font=宋体][size=15px]图7[/size][/font][font=宋体][size=15px] ZH中潜在的活性化合物抑制IRE1α/XBP1s途径[/size][/font][size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0] [/color][/font][font=宋体][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size][font=宋体][size=15px]知母黄柏药对(ZH)通过IRE1α/XBP1s通路抑制srebp1c的转录和SREBP-1c的成熟活性,以减少从头脂肪生成,改善肝脏脂肪变性。从机制上讲,ZH靶向IRE1α并抑制XBP1s mRNA表达以缓解ER应激并抑制SREBP-1c的产生。此外,研究确定了论知母黄柏药对(ZH)中的5种活性成分,它们可以起到知母黄柏药对(ZH)相同的作用,且它们通过直接靶向IRE1α降低下游xbp1的表达抑制脂质合成。[/size][/font]

  • 从动物肝脏中提取DNA

    一、原理 : 在浓氯化钠(1―2mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很大,核糖核蛋白的溶解度很小,在稀氯化钠(0.14 mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很小,核糖核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同浓度的氯化钠溶液,将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。 将抽提得的核蛋白用SDS(十二烷基硫酸钠)处理,DNA或(RNA)即与蛋白质分开,可用氯仿―异戊醇将蛋白质沉淀除去,而DNA则溶解于溶液中。向溶液中加入适量乙醇,DNA即析出。为了防止DNA或(RNA)酶解,提取时加入EDTA(乙二胺四乙酸) 二、实验材料与仪器 : 1、小白鼠肝脏 2、匀浆器 3、离心机5000r/min 4、量筒50ml(×1),25 ml(×1),10 ml(×1) 5、 吸管5 ml(×2) 6、水浴锅 7、真空干燥器 三、试剂 : 1.5 mol/L NaCl 溶液:将292.3g NaCl 溶于水,稀释至1000ml。 2.0.14mol/L NaCl―0.15mol/L EDTA―Na 溶液: 溶8.18g NaCL 及37.2g EDTA―Na 于蒸馏水,稀释至1000ml。 3.25% SDS 溶液: 溶25g 十二烷基硫酸钠于100ml 45% 乙醇 4.0.015 mol/L NaCL―0.0015 mol/L 柠檬酸三钠溶液: 氯化钠 0.828 g及柠檬酸三钠0.341g 溶于蒸馏水,稀释至1000ml。 5.氯仿―异戊醇混合液:氯仿:异戊醇=24:1(V/V)。 6.1.5 mol/L NaCL―0.15 mol/L柠檬酸三钠溶液:氯化钠 82.8 g 及柠檬酸三钠34.1 g溶于蒸馏水,稀释至1000ml。 7.3 mol/L乙醇钠―0.001 mol/L EDTA―Na溶液: 称取乙酸钠 408 g,EDTA―Na 0.372g 溶于蒸馏水,稀释至1000ml。 8.70%乙醇,80%乙醇,95%乙醇,无水乙醇。 9.二苯胺试剂 10.1 mol/L过氯酸溶液:将10ml过氯酸(70%)用蒸馏水稀释至110ml。 四、操作 : 1. DNA的分离纯化: (1)将10头小白鼠迅速杀死,取出肝脏,用0.14mol/LNaCl―0.15mol/l EDTA溶液洗去血浆,剪碎,加入50ml0.14mol/L NaCl―0.15mol/lEDTA溶液,置匀浆器中研磨,待磨成糊状后,将糊状物离心10分钟(4000r/min),弃去上清液,沉淀用0.14mol/LNaCl―0.15mol/L EDTA溶液洗二、三次,所得

  • 低锌饲粮中添加载锌蒙脱石对肉鸡组织微量元素含量、肝脏酶活性及空肠锌转运蛋白基因表达的影响

    【序号】:1【作者】:秦士贞,王海波,武真邑,等.【题名】:低锌饲粮中添加载锌蒙脱石对肉鸡组织微量元素含量、肝脏酶活性及空肠锌转运蛋白基因表达的影响【期刊】:动物营养学报【年、卷、期、起止页码】:秦士贞,王海波,武真邑,等.低锌饲粮中添加载锌蒙脱石对肉鸡组织微量元素含量、肝脏酶活性及空肠锌转运蛋白基因表达的影响[J].动物营养学报,2021,33(10):5895-5907.【全文链接】:https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=WfYi3ZLogAb5La9zgvAuJECDO105uIQIpk4xB-Zftstoe8k1kpxrs7qVmF6KiAThsZIOrAhQ3jurlhN8POk-HjTVhteBgmGuw7rV6PPmV_vCO24t-VQGfgNL9ZCbL2DVhfAm3jBM0CumICQJ5Efx6g==&uniplatform=NZKPT&language=CHS

  • 深入了解组织芯片:制作与应用指南

    [font=宋体][font=宋体]组织芯片[/font][font=Calibri](tissue chip)[/font][font=宋体],也称组织微阵列[/font][font=Calibri](tissue microarrays)[/font][font=宋体],是生物芯片技术的一个重要分支,是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载体(使用载玻片最多)上,进行同一指标的原位组织学研究。该技术自[/font][font=Calibri]1998[/font][font=宋体]年问世以来,以其大规模、高通量、标准化等优点得到大范围的推广应用。其最大优势在于,芯片上的组织样本实验条件完全一致。节省时间、节省试剂更是显而易见的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]TMA[/font][font=宋体]构建原理可以概括为以下四个步骤:[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选取待研究的组织。人们利用组织芯片技术对人体各组织均有研究,包括肝脏,前列腺,心脏,乳房等等,据相关数据显示,在大脑组织中的应用最多。医学上常选取一些病变器官进行研究。根据制作方法来分,微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]经检测后标记出待研究的区域。组织微阵列的检测仪主要是高性能显微镜、荧光显微镜或共聚焦荧光显微镜。适用的检测技术有苏木精—[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色,免疫组织化学[/font][font=Calibri](IHC)[/font][font=宋体]染色,原位杂交[/font][font=Calibri](ISH)[/font][font=宋体],荧光原位杂交([/font][font=Calibri]FISH[/font][font=宋体]),原位[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体],寡核苷酸启动的原位[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成([/font][font=Calibri]PRINS[/font][font=宋体])等。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]使用组织芯片点样仪将标记好的组织按设计排列在空白蜡块模上。首先要利用打孔机在已经标记好的靶位点上进行打孔,将组织芯转入蜡块模孔中,重复操作可转入上千个样品组织芯。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]使用切片机对阵列蜡块进行连续切片即获得组织芯片。根据制作方法来分,微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。后者可以克服上述前者的多种缺陷(含醛基的化合物)可能损伤[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]或使目标抗原结构断裂或破坏抗原——抗体结合位点,另外,石蜡包埋乙醇固定过的组织也无法避免[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]降解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]组织芯片的出现,与基因芯片配合使用在寻找疾病基因中有很好的互补作用。在肿瘤研究中发挥着重要作用。将基因芯片筛选出的基因作成探针,再将探针与组织芯片中众多的肿瘤组织进行荧光原位杂交,寻找肿瘤发生发展的相关因素。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]组织芯片应用:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]组织芯片的应用范围十分广泛,涉及到生命科学的基础研究、临床研究、应用研究以及新药开发等多个领域。它可以应用于多种染色技术,如[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色、免疫组织化学染色、原位杂交、荧光原位杂交、原位[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]、原位[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]以及寡核苷酸启动的原位[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成等。此外,组织芯片还可以与核酸、蛋白质、细胞、组织、微生物等相关技术相结合,分别在基因、转录和表达产物的生物学功能这三个水平上进行深入研究。随着组织芯片的广泛应用,现代医药学、基因组学和蛋白组学的研究将得到极大的推动和发展。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/tissue-tma-array-service][b]石蜡组织芯片定制服务[/b][/url],更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/tissue-tma-array-service[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 生物芯片入门:生物芯片及应用简介

    一、简介生物芯片(biochip)是指采用光导原位合成或微量点样等方法,将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等等生物样品有序地固化于支持物(如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体)的表面,组成密集二维分子排列,然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交,通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机(CCD)对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析,从而判断样品中靶分子的数量。由于常用玻片/硅片作为固相支持物,且在制备过程模拟计算机芯片的制备技术,所以称之为生物芯片技术。根据芯片上的固定的探针不同,生物芯片包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片,另外根据原理还有元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。如果芯片上固定的是肽或蛋白,则称为肽芯片或蛋白芯片;如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或DNA,就是DNA芯片。由于基因芯片(Genechip)这一专有名词已经被业界的领头羊Affymetrix公司注册专利,因而其他厂家的同类产品通常称为DNA微阵列(DNA Microarray)。这类产品是目前最重要的一种,有寡核苷酸芯片、cDNA芯片和Genomic芯片之分,包括二种模式:一是将靶DNA固定于支持物上,适合于大量不同靶DNA的分析,二是将大量探针分子固定于支持物上,适合于对同一靶DNA进行不同探针序列的分析。生物芯片技术是90年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一,是融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术,具有重大的基础研究价值,又具有明显的产业化前景。由于用该技术可以将极其大量的探针同时固定于支持物上,所以一次可以对大量的生物分子进行检测分析,从而解决了传统核酸印迹杂交(Southern Blotting 和Northern Blotting等)技术复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、低通量(low through-put)等不足。而且,通过设计不同的探针阵列、使用特定的分析方法可使该技术具有多种不同的应用价值,如基因表达谱测定、突变检测、多态性分析、基因组文库作图及杂交测序(Sequencing by hybridization,SBH)等,为“后基因组计划”时期基因功能的研究及现代医学科学及医学诊断学的发展提供了强有力的工具,将会使新基因的发现、基因诊断、药物筛选、给药个性化等方面取得重大突破,为整个人类社会带来深刻广泛的变革。该技术被评为1998年度世界十大科技进展之一。二、应用领域1、基因表达水平的检测用基因芯片进行的表达水平检测可自动、快速地检测出成千上万个基因的表达情况。Schena等采用拟南芥基因组内共45个基因的cDNA微阵列(其中14个为完全序列,31个为EST),检测该植物的根、叶组织内这些基因的表达水平,用不同颜色的荧光素标记逆转录产物后分别与该微阵列杂交,经激光共聚焦显微扫描,发现该植物根和叶组织中存在26个基因的表达差异,而参与叶绿素合成的CAB1基因在叶组织较根组织表达高500倍。Schena等用人外周血淋巴细胞的cDNA文库构建一个代表1046个基因的cDNA微阵列,来检测体外培养的T细胞对热休克反应后不同基因表达的差异,发现有5个基因在处理后存在非常明显的高表达,11个基因中度表达增加和6个基因表达明显抑制。该结果还用荧光素交换标记对照和处理组及RNA印迹方法证实。在HGP完成之后,用于检测在不同生理、病理条件下的人类所有基因表达变化的基因组芯片为期不远了。2、基因诊断从正常人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出标准图谱。从病人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出病变图谱。通过比较、分析这两种图谱,就可以得出病变的DNA信息。这种基因芯片诊断技术以其快速、高效、敏感、经济、平行化、自动化等特点,将成为一项现代化诊断新技术。例如Affymetrix公司,把P53基因全长序列和已知突变的探针集成在芯片上,制成P53基因芯片,将在癌症早期诊断中发挥作用。又如,Heller等构建了96个基因的cDNA微阵,用于检测分析关节炎、风湿性关节炎(RA)相关的基因,以探讨DNA芯片在感染性疾病诊断方面的应用。现在,肝炎病毒检测诊断芯片、结核杆菌耐药性检测芯片、多种恶性肿瘤相关病毒基因芯片等一系列诊断芯片逐步开始进入市场。基因诊断是基因芯片中最具有商业化价值的应用。3、药物筛选如何分离和鉴定药的有效成份是目前中药产业和传统的西药开发遇到的重大障碍,基因芯片技术是解决这一障碍的有效手段,它能够大规模地筛选、通用性强,能够从基因水平解释药物的作用机理,即可以利用基因芯片分析用药前后机体的不同组织、器官基因表达的差异。如果再cDNA表达文库得到的肽库制作肽芯片,则可以从众多的药物成分中筛选到起作用的部分物质。还有,利用RNA、单链DNA有很大的柔性,能形成复杂的空间结构,更有利与靶分子相结合,可将核酸库中的RNA或单链DNA固定在芯片上,然后与靶蛋白孵育,形成蛋白质-RNA或蛋白质-DNA复合物,可以筛选特异的药物蛋白或核酸,因此芯片技术和RNA库的结合在药物筛选中将得到广泛应用。在寻找HIV药物中,Jellis等用组合化学合成及DNA芯片技术筛选了654536种硫代磷酸八聚核苷酸,并从中确定了具有XXG4XX样结构的抑制物,实验表明,这种筛选物对HIV感染细胞有明显阻断作用。生物芯片技术使得药物筛选,靶基因鉴别和新药测试的速度大大提高,成本大大降低。基因芯片药物筛选技术工作目前刚刚起步,美国很多制药公司已开始前期工作,即正在建立表达谱数据库,从而为药物筛选提供各种靶基因及分析手段。这一技术具有很大的潜在应用价值。4、个体化医疗临床上,同样药物的剂量对病人甲有效可能对病人乙不起作用,而对病人丙则可能有副作用。在药物疗效与副作用方面,病人的反应差异很大。这主要是由于病人遗传学上存在差异(单核苷酸多态性,SNP),导致对药物产生不同的反应。例如细胞色素P450酶与大约25%广泛使用的药物的代谢有关,如果病人该酶的基因发生突变就会对降压药异喹胍产生明显的副作用,大约5%~10%的高加索人缺乏该酶基因的活性。现已弄清楚这类基因存在广泛变异,这些变异除对药物产生不同反应外,还与易犯各种疾病如肿瘤、自身免疫病和帕金森病有关。如果利用基因芯片技术对患者先进行诊断,再开处方,就可对病人实施个体优化治疗。另一方面,在治疗中,很多同种疾病的具体病因是因人而异的,用药也应因人而异。例如乙肝有较多亚型,HBV基因的多个位点如S、P及C基因区易发生变异。若用乙肝病毒基因多态性检测芯片每隔一段时间就检测一次,这对指导用药防止乙肝病毒耐药性很有意义。又如,现用于治疗AIDS的药物主要是病毒逆转录酶RT和蛋白酶PRO的抑制剂,但在用药3~12月后常出现耐药,其原因是rt、pro基因产生一个或多个点突变。Rt基因四个常见突变位点是Asp67→Asn、Lys70→Arg、Thr215→Phe、Tyr和Lys219→Glu,四个位点均突变较单一位点突变后对药物的耐受能力成百倍增加。如将这些基因突变部位的全部序列构建为DNA芯片,则可快速地检测病人是这一个或那一个或多个基因发生突变,从而可对症下药,所以对指导治疗和预后有很大的意义。5、测序基因芯片利用固定探针与样品进行分子杂交产生的杂交图谱而排列出待测样品的序列,这种测定方法快速而具有十分诱人的前景。Mark chee等用含135000个寡核苷酸探针的阵列测定了全长为16.6kb的人线粒体基因组序列,准确率达99%。Hacia等用含有48000个寡核苷酸的高密度微阵列分析了黑猩猩和人BRCA1基因序列差异,结果发现在外显子11约3.4kb长度范围内的核酸序列同源性在98.2%到83.5%之间,提示了二者在进化上的高度相似性。据未经证实的报道,近年有一种不成熟的生物芯片在15分钟内完成了1.6万个碱基对的测定,96个这样的生物芯片的平行工作,就相当于每天1.47亿个碱基对的分析能力!

  • 【原创大赛】高效液相色谱法分析苯并芘大鼠肝脏线粒体的代谢产物

    【原创大赛】高效液相色谱法分析苯并芘大鼠肝脏线粒体的代谢产物

    高效液相色谱法分析苯并芘大鼠肝脏线粒体的代谢产物 本实验建立了一种用高效液相色谱法分析苯并芘及其在大鼠肝脏线粒体中的六种代谢产物的分析方法。使用乙腈、水梯度洗脱作为流动相,紫外探测器分析得到苯并芘的羟基化代谢产物以及苯并芘酮,包括3-羟基苯并芘、9-羟基苯并芘、苯并芘4,5-二氢二醇、苯并芘-7,8-二氢二醇、9,10-二羟基-9,10-二氢苯并芘、苯并芘二酮。其中苯并芘二酮含量最低。该实验结果对于推断细胞CYP1A1酶在体内体外模型中对于苯并芘增毒和解毒作用奠定了重要的基础。 前言:苯并芘是苯与芘稠合而成的一类多环芳烃,苯并芘和其他多环芳烃主要是有机物的不完全燃烧或热解生成,并且在环境中普遍存在。除了污染空气的吸入,摄入的主要途径有吸烟和饮食以及一些职业的摄入如煤、焦炭、沥青的燃烧以及煤焦油的使用。苯并芘能够导致细胞毒性、致畸致突变的毒性以及致癌的毒性。动物实验长期暴露于苯并芘中可导致动物的皮肤、胃、肺组织的癌变。苯并芘在作用于DNA之前需要代谢活化,这也是苯并芘发挥毒性很重要的代谢步骤。细胞色素P450(CYP)酶和环氧化物酶是主要的苯并芘的活化酶,首先CYP酶将苯并芘氧化为环氧化物然后在环氧化物水解酶的作用下生成二氢二醇,CYP同工酶将其进一步的活化为活性成分苯并芘-7,8 - 二氢二醇-9,10 - 环氧化物(BPDE),其可作用于DNA,其优先在鸟嘌呤残基上形成加合物,该加合物是BPDE在体内体外试验中于DNA主要的加合物。在CYP酶中,CYP1A1和B1认为是BaP代谢活化中重要的酶,但是CYP1A1在体内排毒的作用较大于其活化BaP的作用。为了解释这些发现,BaP的体内体外代谢与解毒作用应该进一步进行评价,定性和定量分析BaP在CYP同工酶和环氧化物酶下的所有代谢产物,以及这些致癌物与DNA加成物的评价也很有必要。本实验优选色谱条件使得BaP在大鼠肝脏线粒体内的代谢产物能够很好的分离以及通过紫外检测器灵敏的检测。苯并芘在生物体内的代谢步骤:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409291248_516273_2360169_3.jpg材料和方法试剂甲醇(色谱级)乙腈(色谱级),苯并芘 ,NADP+,葡萄糖-6-磷酸,二喹啉甲酸,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶微粒体的制备微粒体来自于10只SD大鼠的肝脏,预先用苏丹I处理。微粒体蛋白质浓度通过二辛可宁酸蛋白质测定法测定,牛血清蛋白作对照。CYP同工酶的含量通过示差光谱测定。孵化体系:用于研究BaP代谢的孵化体系包含有100mM磷酸钠缓冲液(pH7.4),NADPH生成体系(1毫NADP+,10mL D-葡萄糖-6 - 磷酸,1U/mL的D-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶),0.5mg的微粒体蛋白质,50μM的BaP(溶于5μl甲醇),总体积为500微升。通过加入50μl的NADPH生成体系来启动反应的发生。孵育体系通过未加入酶体系或无NADPH生成体系或无的BaP来控制。孵化在敞开的试管中进行(37℃),20分钟后,取5μl 1mM的非那西丁乙醇溶液加入作为内标物。BaP的代谢物用乙酸乙酯(2×1毫升)萃取两次,并蒸发至干。将样品溶解在25μl的甲醇,通过HPLC分离。BaP代谢物的HPLC分析:安捷伦液相1200高效液相色谱仪配紫外可见检测器,色谱柱为diamonsil 4.6﹡150﹡5u色谱条件:所用的色谱条件如下表: 时间流动相A(乙腈)流动相B(水)流速00%100%0.6ml/min3530%70%4060%40%4580%20%50100%0%我们还对代谢产物进行了质谱

  • 【转帖】肝脏疾病相关蛋白质结构研究有突破

    中国科学院生物物理研究所刘志杰课题组在肝脏疾病相关蛋白质结构与功能研究方面取得最新成果。9月15日,研究论文《通过N10取代的叶酸类似物抑制人源5,10-次甲基四氢叶酸合成酶的结构基础》以封面文章的形式发表在著名期刊《癌症研究》(《Cancer Research》)上。  据悉,叶酸依赖型单碳代谢途径与一些重要的生命活动密切相关,如嘌呤、胸苷和氨基酸代谢等,对细胞的增殖和分化有着重要的调控作用。该代谢途径中的许多催化酶是癌症化疗和其他代谢类疾病的重要靶标,目前,市场上已有多种以该代谢途径中的催化酶为靶标的药物用于临床。人源5,10-次甲基四氢叶酸合成酶(hMTHFS)位于单碳代谢途径的起始点,对代谢途径下游单碳代谢的调控非常重要。针对癌症引起的基因组甲基化异常、DNA和RNA的完整性、DNA的修复能力等,hMTHFS都是一个非常关键的调控位点。因此,hMTHFS也是一个极具潜力的药物靶点。  由于长期以来缺乏hMTHFS的三维结构,人们对其催化和调控的分子机制缺乏深入的了解,以hMTHFS为靶标的药物研发也进展缓慢。刘志杰课题组研究了该催化酶的4种不同的复合物模型,其中包括hMTHFS-ATP-底物的反应中间态和产物的结构,首次向人们揭示了hMTHFS催化反应活性位点的组成、参与催化反应的重要氨基酸以及催化反应的详细过程。该项研究成果为后续的基于结构的药物设计提供了宝贵的结构信息,为癌症化疗和代谢疾病治疗的新药研制奠定了基础。

  • 生物芯片入门:应用

    基因芯片技术及其研究现状和应用前景生物芯片技术是随着“人类基因组计划”(human genome project,HGP)的进展而发展起来的,它是90年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一,它融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术,具有重大的基础研究价值,又具有明显的产业化前景。生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。本文主要讨论基因芯片技术,它为“后基因组计划”时期基因功能的研究提供了强有力的工具,将会使基因诊断、药物筛选、给药个性化等方面取得重大突破,该技术被评为1998年度世界十大科技进展之一。1、基本概念基因芯片(gene chip)也叫DNA芯片、DNA微阵列(DNA microarray)、寡核苷酸阵列(oligonucleotide array),是指采用原位合成(in situ synthesis)或显微打印手段,将数以万计的DNA探针固化于支持物表面上,产生二维DNA探针阵列,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断,由于常用硅芯片作为固相支持物,且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术,所以称之为基因芯片技术。2、技术基本过程2.1 DNA方阵的构建选择硅片、玻璃片、瓷片或聚丙烯膜、尼龙膜等支持物,并作相应处理,然后采用光导化学合成和照相平板印刷技术可在硅片等表面合成寡核苷酸探针;或者通过液相化学合成寡核苷酸链探针,或PCR技术扩增基因序列,再纯化、定量分析,由阵列复制器(arraying and replicating device ARD),或阵列机(arrayer)及电脑控制的机器人,准确、快速地将不同探针样品定量点样于带正电荷的尼龙膜或硅片等相应位置上,再由紫外线交联固定后即得到DNA微阵列或芯片。2.2 样品DNA或mRNA的准备从血液或活组织中获取的DNA/mRNA样品在标记成为探针以前必须进行扩增提高阅读灵敏度。Mosaic Technologies公司发展了一种固相PCR系统,好于传统PCR技术,他们在靶DNA上设计一对双向引物,将其排列在丙烯酰胺薄膜上,这种方法无交叉污染且省去液相处理的繁锁;Lynx Therapeutics公司提出另一个革新的方法,即大规模平行固相克隆(massively parallel solid-phase cloning)这个方法可以对一个样品中数以万计的DNA片段同时进行克隆,且不必分离和单独处理每个克隆,使样品扩增更为有效快速。在PCR扩增过程中,必须同时进行样品标记,标记方法有荧光标记法、生物素标记法、同位素标记法等。2.3 分子杂交样品DNA与探针DNA互补杂交要根据探针的类型和长度以及芯片的应用来选择、优化杂交条件。如用于基因表达监测,杂交的严格性较低、低温、时间长、盐浓度高;若用于突变检测,则杂交条件相反。芯片分子杂交的特点是探针固化,样品荧光标记,一次可以对大量生物样品进行检测分析,杂交过程只要30min。美国Nangon公司采用控制电场的方式,使分子杂交速度缩到1min,甚至几秒钟。德国癌症研究院的Jorg Hoheisel等认为以肽核酸(PNA)为探针效果更好。2.4 杂交图谱的检测和分析用激光激发芯片上的样品发射荧光,严格配对的杂交分子,其热力学稳定性较高,荧光强;不完全杂交的双键分子热力学稳定性低,荧光信号弱(不到前者的1/35~1/5),不杂交的无荧光。不同位点信号被激光共焦显微镜,或落射荧光显微镜等检测到,由计算机软件处理分析,得到有关基因图谱。目前,如质谱法、化学发光法、光导纤维法等更灵敏、快速,有取代荧光法的趋势。3、应用3.1 测序基因芯片利用固定探针与样品进行分子杂交产生的杂交图谱而排列出待测样品的序列,这种测定方法快速而具有十分诱人的前景。Mark chee等用含135000个寡核苷酸探针的阵列测定了全长为16.6kb的人线粒体基因组序列,准确率达99%。Hacia等用含有48000个寡核苷酸的高密度微阵列分析了黑猩猩和人BRCA1基因序列差异,结果发现在外显子11约3.4kb长度范围内的核酸序列同源性在98.2%到83.5%之间,提示了二者在进化上的高度相似性。3.2 基因表达水平的检测用基因芯片进行的表达水平检测可自动、快速地检测出成千上万个基因的表达情况。Schena等采用拟南芥基因组内共45个基因的cDNA微阵列(其中14个为完全序列,31个为EST),检测该植物的根、叶组织内这些基因的表达水平,用不同颜色的荧光素标记逆转录产物后分别与该微阵列杂交,经激光共聚焦显微扫描,发现该植物根和叶组织中存在26个基因的表达差异,而参与叶绿素合成的CAB1基因在叶组织较根组织表达高500倍。Schena等用人外周血淋巴细胞的cDNA文库构建一个代表1046个基因的cDNA微阵列,来检测体外培养的T细胞对热休克反应后不同基因表达的差异,发现有5个基因在处理后存在非常明显的高表达,11个基因中度表达增加和6个基因表达明显抑制。该结果还用荧光素交换标记对照和处理组及RNA印迹方法证实。在HGP完成之后,用于检测在不同生理、病理条件下的人类所有基因表达变化的基因组芯片为期不远了。3.3 基因诊断从正常人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出标准图谱。从病人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出病变图谱。通过比较、分析这两种图谱,就可以得出病变的DNA信息。这种基因芯片诊断技术以其快速、高效、敏感、经济、平行化、自动化等特点,将成为一项现代化诊断新技术。例如,Affymetrix公司,把P53基因全长序列和已知突变的探针集成在芯片上,制成P53基因芯片,将在癌症早期诊断中发挥作用。又如,Heller等构建了96个基因的cDNA微阵,用于检测分析关节炎、风湿性关节炎(RA)相关的基因,以探讨DNA芯片在感染性疾病诊断方面的应用。现在,肝炎病毒检测诊断芯片、结核杆菌耐药性检测芯片、多种恶性肿瘤相关病毒基因芯片等一系列诊断芯片逐步开始进入市场。基因诊断是基因芯片中最具有商业化价值的应用。3.4 药物筛选如何分离和鉴定药的有效成份是目前中药产业和传统的西药开发遇到的重大障碍,基因芯片技术是解决这一障碍的有效手段,它能够大规模地筛选、通用性强,能够从基因水平解释药物的作用机理,即可以利用基因芯片分析用药前后机体的不同组织、器官基因表达的差异。如果再用mRNA 构建cDNA表达文库,然后用得到的肽库制作肽芯片,则可以从众多的药物成分中筛选到起作用的部分物质。或者,利用RNA、单链DNA有很大的柔性,能形成复杂的空间结构,更有利与靶分子相结合,可将核酸库中的RNA或单链DNA固定在芯片上,然后与靶蛋白孵育,形成蛋白质-RNA或蛋白质-DNA复合物,可以筛选特异的药物蛋白或核酸,因此芯片技术和RNA库的结合在药物筛选中将得到广泛应用。在寻找HIV药物中,Jellis等用组合化学合成及DNA芯片技术筛选了654536种硫代磷酸八聚核苷酸,并从中确定了具有XXG4XX样结构的抑制物,实验表明,这种筛选物对HIV感染细胞有明显阻断作用。生物芯片技术使得药物筛选,靶基因鉴别和新药测试的速度大大提高,成本大大降低。基因芯片药物筛选技术工作目前刚刚起步,美国很多制药公司已开始前期工作,即正在建立表达谱数据库,从而为药物筛选提供各种靶基因及分析手段。这一技术具有很大的潜在应用价值。[/

  • 【分享】嘉顿威化饼干被检出胭脂红超标 超量食用伤肝脏

    向来颇受消费者欢迎的嘉顿饼干,近日被国家质检总局爆出该品牌香港进口的5.28吨威化饼胭脂红超标。据悉,胭脂红是我国允许在食品加工中使用的添加剂,但若超过一定剂量,也可能对人体造成危害。目前该批不合格产品均已销毁或退货,没有流入中国内地市场。  进口嘉顿饼干色素超标  上周,国家质检总局公布了最新的进境风险警示信息,嘉顿威化饼干、雅乐思橙味夹心饼干、格利高比斯克奶油夹心曲奇等142批次进境食品、化妆品不合格。  根据这份最新的公告信息,该批次进境食品、化妆品产品中,大部分是食品。其中5.28吨嘉顿威化饼干(草莓味)被检出胭脂红超标,该问题产品由深圳市鸿丰源实业有限公司从香港进口,生产商为嘉顿有限公司。  此外,由马莎商业(上海)有限公司进口的一批薄荷太妃糖,超过保质期被销毁;格利高比斯克奶油夹心曲奇和小麦胚芽曲奇,也因细菌总数超标而被销毁处理;有0.6吨雅乐思橙味夹心饼干则检出毒死蜱。  记者了解到,胭脂红是一种合成色素,由于其色泽鲜艳、价格低廉,常被用于饮料及其他食品的着色。胭脂红耐热性、耐还原性差,耐光、耐酸性也不理想,一般用于短期食用的食品着色,而不宜用于包装饮料的着色。  广东省食文化研究会会长杨冠丰告诉记者,国家目录的食品添加剂可在部分食品中使用,在标准范围之内使用食品添加剂,没有安全问题;但同时,国家对食品中的胭脂红有严格的限量规定,严禁超量使用,超过则违反食品加工规则即违法。  网购进口饼干或存风险  据质检总局称,这批问题嘉顿饼干已作退货处理。那么,这些退运的饼干“返港”后是否会继续销售?内地同一品牌生产商——华嘉(嘉顿)食品有限公司(以下简称“内地嘉顿”),上周通过其公关公司表示,这批饼干运回香港后,可能销毁或内部消化,应该不会在流通市场销售。  不过记者在内地某知名购物网站发现,有不少来自广东广州、深圳及东莞的卖家皆在出售香港“原装”的嘉顿食品。这当中既包括嘉顿热销的利是糖,也包括多款嘉顿知名的饼干产品。  一名来自深圳的卖家告诉记者,只要顾客“下单”,卖方可以马上联系其在香港的供应商,将顾客所需的任一款嘉顿产品速运过来。该卖家称,这样的产品不需要再经过国家进出口检验检疫部门的检测,可迅速到货。“今天预定的话,明天下午就到货了。”该卖家称。  据内地嘉顿方面透露,在香港胭脂红的含量是不受限制的,这批次产品在香港是合格产品。有消费者就此表示质疑,如此一来,在网上是否亦有可能买到嘉顿胭脂红超标饼干?对此,广东省食文化研究会会长杨冠丰表示,一般来说,胭脂红能对人体造成危害有一个含量值的界限。但若香港方面未对此作出规定,消费者也难以获得知情权,购买还应小心谨慎。(邱春燕)  ●新快词典  什么是胭脂红?  胭脂红又名酸性大红3R,水溶性合成色素,鲜艳的黄光红色,单色品种。可安全地用于食品、饮料、药品、化妆品、饲料、烟草、玩具、食品包装材料等的着色。超量食用将损害人体肝脏。

  • 山东省肉鸡肌肉、肝脏和鸡蛋主要微量元素与部分重金属元素含量调查

    【序号】:2【作者】:张晓丹,王超慧,朱风华.【题名】:山东省肉鸡肌肉、肝脏和鸡蛋主要微量元素与部分重金属元素含量调查【期刊】:黑龙江畜牧兽医【年、卷、期、起止页码】:张晓丹,王超慧,朱风华.山东省肉鸡肌肉、肝脏和鸡蛋主要微量元素与部分重金属元素含量调查[J].黑龙江畜牧兽医,2021(24):20-23+30.DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.04.0096.【全文链接】:https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=WfYi3ZLogAYN6h0Uds3shM1B4MWrfmMvcRTagpnQxF9pdNPkJGFeY_LUzy7nCLsuPE40Vw64sAmqzeBRnw04k1gUPr1dY3eahwHocihptSrzFQobuCrk6c3Fz5Ixzo4cZIaAqHABVqyf_UF8W0ZQ2g==&uniplatform=NZKPT&language=CHS

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