细菌检验

我看了有好多帖子大家都说在什么情况下做什么细菌的程序中为什么这个温度了==的问题，建议大家以后如果在细菌检验的实验过程当中对某一程序有质疑的话，建议把这个检验的整个程序都发上来。以便大家对你的程序中存在的问题能较全面的解释！～～

谁有细菌内毒素 微生物限度检查 检验记录样本有的话,能共享下吗!谢谢

有谁可以指导下自来水水质微生物检验室该怎么布置，要求呀？无菌室到底要不要缓冲间，生物安全柜呀？我看了上篇的实验室分类好像不需要，是不是只要紫外线消毒就可以了？另外培养箱是放在无菌室好还是外面操作间好？我们主要监测细菌、大肠菌群、粪性大肠菌[em44]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=141782]细菌的显微镜学检验[/url]

[size=4][font=黑体]我们都知道：菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。但在水质与食品检验中当细菌培养在平板无菌落生长时，为什么菌落总数报告方式不同？水质：若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以（未检出）报告之。食品：若所有稀释度均无菌落生长，则以小于l(1)乘以最低稀释倍数(l×10或lO)报告之。请各位朋友发表自己的看法或见解![/font][/size]

谈谈你知道的细菌形态学的检验方法，包括所有的方法。

据台湾媒体报道，病菌检测是治疗许多疾病的基础，但检测时间往往费时。近日台湾大学今天发表重大突破新技术，以纳米科技研发的新型检验晶片，相较于传统技术，能使细菌筛检增快百倍。 此项研究的名称为"捕捉与侦测细菌双功能快速检验晶片",研究成果于11月15日刊登在知名国际期刊"自然通讯"（NatureCommunications）。该研究的负责人刘定宇说，就像每种乐器都有特定音色一样，每个分子都有特定的"分子拉曼光谱指纹",因此科学家可藉此光谱来区分细菌种类。"捕捉与侦测细菌双功能快速检验晶片"就是利用表面增强拉曼光谱为基础，晶片表层"万古霉素"可从血液中直接捕捉细菌，再由第2层"银纳米粒子阵列",放大细菌表面分子的拉曼光谱讯号。 "捕捉与侦测细菌双功能快速检验晶片"使用纳米科技新技术，具有超高敏感度，几秒钟内就能取得单只细胞光谱，刘定宇指出，过去要筛检败血症病人血液中细菌，需费时2至5天，如今这样的新技术，可在短短30分钟内就能筛检出败血症病人的血液中细菌，速度增快约百倍。 刘定宇还表示，此技术潜在效益可观，不仅能针对血液临床检体使用，也可推广至环境污染（水质检测）、食品药品微生物（大肠杆菌和塑化剂）甚至病毒、癌症筛检等检测。台湾大学医院创伤医学部主治医师韩吟宜认为，这项新技术相较于传统细菌培养方法，能缩短血液检验时间，增加检测准确率，盼能尽快在临床应用，进而提升疾病治愈率，减少抗生素滥用。

我们在做抗生素检验时,有几次没有细菌生长。菌种在有效期内、选用的培养基也合适。请在这方面经验丰富的专家们帮助分析一下，谢谢了！ http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09510.gif

对387份食品致病菌检验的结果分析 食品中致病菌是指可以引起食物中毒或以食品为传播媒介的致病性细菌。致病性细菌直接或间接污染食品及水源，人经口感染可导致肠道传染病的发生及食物中毒以及畜禽传染病的流行。食源性致病菌是导致食品安全问题的中药来源。现将387份食品中致病菌的检验结果报告如下。1.采样类别及数量（见表1）表1： 食品类别食品品种采样数量婴幼儿食品婴儿、较大婴儿和幼儿配方食品婴幼儿谷类辅助食品每月8份、全年96份肉及肉制品酱卤肉、熏烧烤肉、肉松肉干等熟肉制品每月5份、全年60份膨化食品油炸膨化、焙烤膨化挤压膨化、压力膨化食品每月3份、全年36份地方特色食品凉拌米面食品每月3份、全年36份城市流动早餐各种散装（包括自行简易包装）即食食品每月7份（4月-9月）全年42份速冻面米制品熟制品、生制品每月3份、全年36份冷冻饮品冰激凌、雪糕、棒冰等每月9份（6月-9月）全年36份节令食品粽子5月份10份餐饮食品荤、素烧烤类即食食品每月5份（4月-10月）全年35份2.设备和试剂2.1设备全自动微生物分析系统（

定期检验无菌室空气污染情况，对改进灭菌措施，提高成品率是非常必要的。常用方法步骤如下： 1．平板检验法：用常规培养基，倒成平板，收入接种室。在事先熏蒸好的接种室，使用前半小时或1小时把供试的培养皿或试管打开，按预定时间盖好培养皿或试管。留对照皿不打开。然后一起放入30℃的温箱中培养48小时，检查有无菌殖生长，并由菌落形态，判断杂菌种类。一般要求平板培养基开盖5分钟，菌落不超过3个；叙面培养基开塞 30分钟者，以不出现菌落为合格。 2．斜面检验法：将常用的琼脂斜面培养基各取二管， 放入接种室，按无菌操作各将其中的一管的棉塞取出，放在灭菌的培养皿内。经过一定时间后，再将棉塞通过火焰，塞回试管，连同对照一起培养。经48小时后，检验有无杂菌生长。和上边方法同。 3．空气污染情况检验：在接种过程中，人员的出过、器材的搬放、接种操作的动作等原因造成空气污染，检验方法是在准备工作结束后，接种操作开始时，按上述方法打开培养皿盖子或试管塞，经5分钟、30分钟或直到工作结束时再盖好，以检验在不同的使用时间内，空气污染的程度。 如霉菌较多时；可先用5％石炭酸全面喷射后，再用甲醛熏蒸。如细菌较多时，可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的办法加以杀灭。

我是学检验的哪家有快速细菌检测仪呢什么型号技术参数请发邮件xiangjian966@163.co谢谢

1968年美国科学家Dr. Levin和Bang建立了鲎试验法。此后世界各国对鲎试剂的生产和应用得以迅速发展。1980年美国药典20版首先收载了细菌内毒素检 查法。随后，英国药典、日本药局方、中国药典等也相继收载了该方法。本文主要对中国药典1995年版与英国药典1995年增补本、美国药典23版和日本药局方13版等的细菌内毒素检查法进行了比较。1 检验品种的比较中国药典1995年版二部共收载细菌内毒素检查品种12个，2000年版二部增至47个，而美国药典23版收载了471个品种进行细菌内毒素检查。因此，我们需加紧对更多的品种进行细菌内毒素检查方法的研究，加快该法对药品检验的普及和推广工作，提高我国药品标准和检验水平。2 检验方法的比较细菌内毒素试验的方法有凝胶法、浊度法、显色基质法、免疫学法等。其中凝胶法多为限量 检查法，浊度法和显色基质法为定量检查法，且后两种方法都属于分光光度法。浊度法还可 分为终点浊度法和动态浊度法；显色基质法也可分为终点显色基质法和动态显色基质法。凝胶法是较为经典的方法，各国药典都有收载，而收载了细菌内毒素定量测定法的有美国药典、英国药典、欧洲药典和日本药局方等。中国药典1995年版只收载了凝胶法，2000年版才涉及到定量测定法。因此，我们还需要对细菌内毒素定量测定进行研究，需要有供定量测定 用的标准品、仪器和试剂，以后逐步建立起我国的细菌内毒素定量测定方法。3 细菌内毒素标准品各国药典均设置了细菌内毒素的标准品，其中中国药典、英国药典和美国药典还可采用根据标准品为基准进行标定的工作标准品或对照标准品。除英国药典采用U为内毒素的单位外，其余各国药典都用EU为内毒素的单位。美国药典和中国药典对内毒素标准品每一步稀释时的混匀时间作出了明确规定。除中国药典外，其余各国药典规定了内毒素标准贮备液在冰箱里保存不得超过14d，且用前应在旋涡混 合器上充分混合至少3min。

[size=4] 我们对现今应用较为普遍的VITEK-AMS鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(UIO)菌株作了进一步分析，探讨其发生原因、处理方法，以期建立一套切实可行的仪器与手工方法相结合的细菌鉴定方法。[/size][size=4]　　[b]一、材料与方法[/b][/size][size=4]　　1. 仪器与试剂：VITEK-AMS 60型全自动细菌鉴定仪及其配套GNI、GPI、YBC试验卡（生物梅里埃公司产品)。[/size][size=4]　　2. 试验菌株：1 025株本院1999.10.21-2000.3.3临床标本分离的菌株进行了Vitek- AMS鉴定，其中应用GNI 卡631例、GPI卡334例、YBC卡60例。[/size][size=4]　　3.VITEK-AMS鉴定法：根据细菌表型特征，选择相应GNI+、GPI、YBC卡，严格按仪器操作说明进行，孵育后当检验地带网仪器报告结果为UIO时，挑取生长对照孔(GPI卡第1孔、GNI+卡第3孔、YBC卡第24孔)悬液于非选择性培养基上重新分离，观察是否纯培养，若是，分别按同法及以下两法鉴定。否则， 经纯培养后重新上机鉴定。[/size][size=4]　　4. 双歧检索鉴定法：根据Vitek全自动微生物分析系统技术资料提供的双歧检索表，依生化结果检索至属或种。[/size][size=4]　　5. 常规鉴定法：按照全国临床检验操作规程［1］进行，并经API系统(生物梅里埃公司) 复核鉴定至种。部分菌株鉴定依据文献［2］进行。 [/size][size=4]　　[b]二、结果[/b][/size][size=4]　　1. UIO发生机率：总共1025株细菌鉴定中，共出现UIO 44株，占4.3%。其中GPI卡334株，出现UIO16株，占4.8%；GNI+卡631株，出现UIO 24株，占3.8%；YBC卡60株，出现UIO4株，占6.7%。[/size][size=4]　　2.UIO发生原因：在44株出现UIO中，9株（0.9%)为待检细菌不纯，3株(0.3%)为浊度不合要求，2株(0.2%)为接种物孵育时间过长（超过48h），2株(0.2%)为超出试验卡鉴定范围（均为臭鼻克雷伯菌），1株(0.1%)为菌悬液不乳化（粘液型绿脓假单胞），其他如冲液时气泡过多，或其他原因不确定者27株（2.6%）。[/size][size=4]　　3.处理：（1）9株不纯菌株，经纯培养后，重新上机，均能成功鉴定。（2）35株纯培养但报告UIO菌株中，18株(1.8%)可通过双歧检索法获得结果，并与常规分类法结果完 全一致。3株（0.3%）浊度不合要求者经调整浊度后重新上机获得结果。 2株(0.2%)接种物超过48h菌株，经重新孵育后得以鉴定。1株(0.1%)为悬液不乳化菌株经|检验地带网|配制3个麦氏单位菌悬液，然后低速离心1～2 min(1 000r/min)，取上清液比浊并调节到所需的浓度后，得以鉴定。(3)余下11株(1.1%)菌中，仅2株(1株为大肠埃希菌，另1株为臭鼻克雷伯菌)不能从双歧检索表中查出结果，其他9株(主要为洋葱假单胞菌、琼氏不动杆菌、木糖产碱氧化杆菌等)，虽能从双歧检索表获得结果，但与常规鉴定法结果不相符合，或出现矛盾的生化结果，需增加试验项目，按常规鉴定方法及 API系统报告结果。[/size][size=4]　　[b]三、讨论[/b][/size][size=4]　　实验表明95.7%的临床分离菌株可通过VITEK-AMS正确鉴定，仅4.3%菌株无法一次性成功鉴定。细菌不纯是产生这部分菌株的主要原因（占近1/5），其他如待检菌菌龄、菌液浓度也是关系鉴定成败的关键。由于仪器本身原因（如对于罕见生物型、新种或不典型菌株无法鉴定）也不可忽视。正确处理这部分菌株，有重要的临床意义。实际应用自动化仪器时，必须挑取纯培养菌落，可提高鉴定率，对确认为纯培养而无法鉴定者，可通过传统分类法，参照双歧检索表能成功鉴定将近一半菌株，因此合理应用双歧检索表不失为一种较好的辅助方法。但仍有占总数1.1%菌株需用常规方法或其他方法如API系统重新鉴定。[/size][size=4]　　参考文献[/size][size=4]　　1，叶应妩，王毓三，主编. 全国临床检验操作规程. 第2版. 南京： 东南大学出版社,1997.5.[/size][size=4]　　2，Patrick R. Manual of clinical Microbiology (7th Edition). Washington DC: American Society for Microbiology, 1999.316-647. [/size]

为确保春节期间市民酒店住宿的卫生安全，近日，瓯海区卫生监督所对辖区内10家旅店的公共用品用具开展卫生监测。检验结果显示，所送的样品中三成脸（脚）盆细菌总数超标。 此次行动，瓯海区卫生监督所卫生执法人员对10家住宿旅店的毛巾、茶具、床上卧具（床单）、脸（脚）盆、马桶坐垫、拖鞋做了随机采样，共采集120份样品。经过瓯海区疾病预防控制中心检验，毛巾、茶具、床上卧具（床单）的细菌总数、大肠菌群指标均合格。有4家旅店脸（脚）盆细菌总数超标，3家旅店马桶坐垫细菌总数超标， 2家旅店拖鞋霉菌超标。其中，景山锐思特汽车店的马桶细菌总数超出8倍；温州铜锣湾假日酒店有限公司脸盆细菌总数超标，拖鞋霉菌数超出正常值的56倍。 从监测类别看，脸（脚）盆合格率最低，为70%。其他公共用品用具合格率均在85%以上。合格率从高到低分别为毛巾、茶具、床上卧具、拖鞋、马桶坐垫、脸（脚）盆。

微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：一、糖酵解试验　　不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。　　试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。

奶粉检测微生物，除了 检验细菌总数和大肠菌群，致病菌需要检测什么项目？国家标准规定是多少个以下合格啊？

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=123387]GB-T 18204(1).1-2000 公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定.rar[/url]

用于检验紫外灭菌灯效果的200-250的细菌怎么来的啊？是买的还是自己培养的？

细菌的实验室检测方法进展——金黄色葡萄球菌的鉴定方法摘要：金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界，多存在于人和动物的鼻腔、咽喉、皮肤及与外界相通的腔道。能引起人和动物机体局部、脏器的化脓性感染，重者可引起败血症、脓毒血症等全身感染。金黄色葡萄球菌也是国内外最常见的细菌性食物中毒病原菌之一，在我国由金黄色葡萄球肠毒素引起的食物中毒占细菌性食物中毒事件的前几位。典型的金黄色葡萄球菌为球型，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌肠毒素被分为7 个血清型，A、B、C（C1、C2、C3）、D、E。目前实验室对金黄色葡萄球菌的检验有传统培养法，金黄色葡萄球菌肠毒素的检测方法，脉冲场凝胶电泳检测分型方法和聚合酶链式反应（PCR）技术对金黄色葡萄球菌的检测方法。

微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一，微生物检验中常用的生化反应介绍如下： 　　一、糖酵解试验　　不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。　　试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。　　二、淀粉水解试验　　某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。　　试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。　　淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。

一、生物学性状　　根据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，根据兰氏（Lancefield）血清学分类，可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌（S.faecalis）、屎链球菌（S.faecium）和坚忍链球菌（S.durans）,后者有牛链球菌（S.bovis）和马肠链球菌(S.equinus)。　　粪链球菌菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长,直径0.5-1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑，直径1-2mm，全缘，罕见色素。其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃ 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。　　　近年来，DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌（E.faecalis）和屎肠球菌（E.faecium）。二、致病性　　　粪链球菌引起的感染有尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等。其中败血症最常继发于生殖泌尿性感染，皮肤、胆道、肠道等感染也可作为原发病灶。从天然乳清培养物中分离的菌株，能产生一种细菌素，叫肠球菌素（Enterocin），对单增李斯特氏菌有杀灭作用。三、流行病学　　粪链球菌为条件致病菌，它来源于人和温血动物的粪便，偶尔出现于感染的尿道及急性心内膜炎。它能够通过食品对人类造成感染，因而常见于许多食品，如火腿肠、炸肉丸、布丁及经过巴氏消毒的牛奶等，粪链球菌进入食物链的主要原因是不卫生的加工条件所致的，一般与直接的粪便感染无关。粪链球菌引起的感染大多是由于它的侵袭所造成，感染剂量较高，一般大于107个细菌。人、禽感染率最高，亦见于猪、牛、马、山羊、绵羊及兔。四、检验与控制1、检验：　　样品制备 取25g或25mL样品，放入225mL灭菌生理盐水中，充分混匀，制成1：10样品稀释液。根据样品的污染程度，制成适当的10倍递增稀释液。　　a.多管法：　　用适当的稀释液接种一套叠氮化钠葡萄糖肉汤管。接种量为1mL或以下的，使用10mL单料管；接种量为10mL，使用10mL双料管。35℃培养24-48h，并检查记录各管的混浊情况。用接种环将浑浊管中的培养物划线于PSE平板上，倒置平板于36℃培养24h。平板上出现的带棕色环的黑色菌落，确证为粪链球菌。根据接种的样品量和确证为是粪链球菌的管数，查MPN表，报告每克样品中的粪链球菌MPN值。　　b.滤膜法：　　倾注融化的4-5mL的KF琼脂于平板上，若平板表面有气泡，可用火焰灼除。根据样品的污染程度，使用样液的量为100，10，1.0，0.1或0.01mL。使用灭菌滤膜过滤样液，以能在滤膜上生长出20-100个菌落为宜。将滤过样液的滤膜紧贴在KF琼脂培养基表面上，避免出现气泡。倒置平板于36℃培养48h。粪链球菌在KF平板滤膜上形成暗红色至粉红色菌落。将典型菌落接种于脑心浸液斜面上，36℃培养48h。用其培养物做过氧化氢试验，过氧化氢浓度为3%，阳性反应者为非粪链球菌群细菌。将阴性反应者接种于脑心浸液肉汤，置45.5℃培养48h；同样方式接种一管胆盐肉汤，置36℃培养3天。在上述两种情况下生长者为粪链球菌。选择生长20-100个菌落的滤膜，根据所使用的样品量，计算出样品每克（毫升）中的粪链球菌数。　　c.平板计数法：　　 取1mL适当稀释液加入培养皿内，倾入12-15mL的KF或PSE培养基，转动平板充分混合。凝固后置36℃培养，KF平板培养48h，PSE平板培养24h。粪链球菌在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落，边缘整齐，琼脂表面下菌落呈椭圆或晶体状；在PSE平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。选择有30-300个菌落的平板进行记数。按粪链球菌数/g(mL)报告结果。2、控制　　由于粪链球菌可通过食物对人类造成感染，所以应从以下几个方面加以控制：　　加强生产区域的卫生管理，由于粪链球菌主要来源于人畜粪便，所以厕所要合理布局，避免粪便直接污染；生产人员要严格执行个人卫生制度。　　在加工过程中，严格注意每个关键点的控制，掌握好诸如温度、水源卫生等要素。　　对摆放时间过长的食物，如熟食制品、牛奶或奶制品等，要彻底加热再食用，春夏季尤其要注意。

一、目的和要求(1) 了解水细菌学检验的卫生学意义和基本原理，掌握水中细菌总数的检验方法。(2）了解平板菌落计数原则。二、原理水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求各不相同，无法找到一种在某种条件下使水中所有细菌均能生长繁殖的培养基。因此，通常选择一种大部分细菌能生长的培养基，通过生长出来的菌落大致计算水中细菌总数。目前一般是采用普通肉膏蛋白陈琼脂培养基。三、仪器与试剂(1)高压蒸汽灭菌器。(2）显微镜。(3）灭菌水。(4）肉膏蛋白陈琼脂培养基。蛋白陈 l0g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15-20g蒸馏水 1000m将上列成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4-7.6，过滤，分装于玻璃容器中，经121℃ (151b①/in2）高压蒸汽灭菌20min，冷暗处备用。四、实验步骤1．水样的稀释根据水被污染程度的不同，可用无菌吸管做10倍系列稀释。①11b=0. 453 592掩，下同。2．接种以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，再倾注约15mL已融化并冷却到45℃左有的培养基，并立即转动平皿，使水样与培养基充分混匀。每个水样应倾注3个平皿。每次检验时另用3个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。3．培养待冷却凝固后，翻转平皿，使皿底向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数。3个平皿中的平均菌落数即为水样1mL中的细菌总数。4．菌落计数做平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大状菌落生长时，则不宜采用；而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数；若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。五、数据处理1．按各种不同情况进行计算(1) 首先选择平均菌落数在30-300者进行计算，当有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告。(2) 若有两个稀释度，其平均菌落数均为30-300，则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则报告其中较小的菌落总数。(3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告(4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。(5)若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告。2．菌落计数的报告菌落数在100以内时按实有数报告。大于100时，采用2位有效数字，在2位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示，报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。六、注意事项(1）严格无菌操作，防止污染。(2）根据水样污染程度选择稀释倍数，必要时做预实验。

粪链球菌及检验 一、生物学性状　　根据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，根据兰氏（Lancefield）血清学分类，可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌（S.faecalis）、屎链球菌（S.faecium）和坚忍链球菌（S.durans）,后者有牛链球菌（S.bovis）和马肠链球菌(S.equinus)。　　粪链球菌菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长,直径0.5-1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑，直径1-2mm，全缘，罕见色素。其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃ 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。　　　近年来，DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌（E.faecalis）和屎肠球菌（E.faecium）。二、致病性　　　粪链球菌引起的感染有尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等。其中败血症最常继发于生殖泌尿性感染，皮肤、胆道、肠道等感染也可作为原发病灶。从天然乳清培养物中分离的菌株，能产生一种细菌素，叫肠球菌素（Enterocin），对单增李斯特氏菌有杀灭作用。三、流行病学　　粪链球菌为条件致病菌，它来源于人和温血动物的粪便，偶尔出现于感染的尿道及急性心内膜炎。它能够通过食品对人类造成感染，因而常见于许多食品，如火腿肠、炸肉丸、布丁及经过巴氏消毒的牛奶等，粪链球菌进入食物链的主要原因是不卫生的加工条件所致的，一般与直接的粪便感染无关。粪链球菌引起的感染大多是由于它的侵袭所造成，感染剂量较高，一般大于107个细菌。人、禽感染率最高，亦见于猪、牛、马、山羊、绵羊及兔。

公共场所卫生标准GB/T18204.4-2013公共用品检验 细菌总数的结果报告是根据公式计算的，在计算结果的时候N如果是小数应不应该取整呢？如果说检测结果两个平皿都没长菌，那结果应该报告1还是10呢？公式中有个系数k，这个k值应该怎么算呢？

根据《全国食品药品安全科普行动计划(2011—2015)》要求，每年9月份成为“全国安全用药月”。但媒体采访了解到，当前我国不合理用药现象仍然比较普遍，成为危害公众用药安全的突出问题。专家称，合理安全用药是一项长期的工作，还需要从多层次入手，采取多项措施综合干预。不合理用药情况严重9月初，国家食品药品监督管理总局下发了《局食药总局关于9月开展全国安全用药月的通知》，称9月份举办“全国安全用药月”活动，要求各地食品药品监督管理部门应着重宣传安全用药科学理念和实用知识，对不适当的自我用药、过度使用抗生素和注射剂、盲目轻信进口药和高价药等常见误区进行梳理、解读。安全用药早已被广为呼吁。据统计，2014年全国药品不良反应监测网络共收到国家基本药物的不良反应/事件报告52.0万例(占2014年总体报告的39.2%)，其中严重报告2.9万例，占5.6%。报告涉及化学药品和生物制品病例报告占82.9%，中成药病例报告占17.1%。一项“百姓安全用药调查”结果显示，我国不合理用药情况十分严重，约占用药者的12%到32%。全国每年5000多万住院病人中至少有250万人与药物不良反应有关，引起死亡约达19万人之多。四川大学华西医院临床药学部(药剂科)临床药师于磊介绍，不合理用药会造成治疗效果不佳，容易导致不良反应，还可能会产生耐药性，而很多患者对此缺乏认知，并未意识到这些危害对自身健康有重大伤害。在不合理用药中，抗菌药物的过度和不合理使用导致的毒副作用和细菌耐药就日趋严重，已成为全球严重的公共卫生问题。四川大学华西医院副院长程南生介绍，抗菌药物是具有杀菌或抑菌活性的、主要供全身应用的各种抗生素、磺胺类、抗结核等化学药物。2014年底，美国疾病预防控制中心评出的年度十大公共卫生挑战，其中最终可能导致人类无法抗击各种细菌的抗菌药物耐药性问题，仅次于埃博拉疫情居于第二位，同样，我国抗菌药物耐药情况也日益严峻，不容忽视。程南生说，例如，金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌，青霉素问世后，金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病受到较大控制，但随着青霉素的不合理使用，有些金黄色葡萄球菌产生青霉素酶，进化成为“超级细菌”，一般对三类或三类以上抗生素同时耐药，有些甚至对七种抗生素同时耐药。而据统计，当前我国发生金黄色葡萄球菌感染的患者中，约有50%以上的患者携带这种“超级细菌”。“目前一种新的细菌产生耐药性的周期已经大大缩短，由以前的几十年减少为几年。”四川大学华西医院呼吸与危重症医学科主任梁宗安说，抗生素滥用、抗生素环境污染能够很快加剧细菌耐药性。药店和养殖业滥用抗菌药物普遍在抗菌药物使用方面，程南生介绍，国家2011年出台了《抗菌药物临床应用管理办法》，经过4年的整治，目前大型医院的抗菌药物管理效果较好。以四川大学华西医院为例，该院抗菌药物使用率由整治前的60.15%下降到现在的34.18%，接受特殊级抗菌药物治疗前微生物送检率由整治前的59.92%上升到现在的88.29%。“在内部管理上，医院也进一步加强了抗菌药物的系统管控。”四川大学华西医院医教部科长陈敏介绍，该院于今年7月10日在门诊医嘱系统开单界面添加了处方管控规则，对药物的剂量和疗程加以管控。单日药物剂量分“常用量”和“单日极量”，如果超过“常用量”则进入医院处方点评，超过“单日极量”则无法开出。“目前我国抗菌药监管方面的难点，主要还是在药店和养殖业方面。”梁宗安认为，由于国家出台的制度和政策，抗菌药物滥用目前在医院方面管控较好，但在药店和养殖业方面仍然缺乏有效的监管。尤其是，很多养殖户在养猪、牛、羊等动物的过程中，为了不使动物得病，会喂食大量的抗菌药物。这种做法会带来巨大的健康隐患，使很多细菌产生耐药性，临床许多药物失去作用。“由于动物也会对抗生素产生耐药性，因此养殖户们需要不断投入新的抗生素，添加量会越来越多。”梁宗安说。据了解，今年4月，上海复旦大学公共卫生学院对江苏、浙江、上海等地1000多名在校儿童进行了尿液检验，结果显示：近六成儿童的尿液中含有抗生素。“当前，老百姓自行用药是导致不安全用药的一大原因。”于磊说，很多人身体出现不舒服症状后，往往不去正规医院看病，而是依据病症表现自行买药，自己当药师。但是每个人体质不同，每种症状背后的病因也不一样，因此，很容易用错药。于磊还表示，很多人盲目相信互联网问诊，网上搜索药品用途后就自行用药，这也是十分不安全的，因为即便是感冒的症状，也可能是不同疾病造成的。而且网络上有很多关于用药的谣言，不可轻信。“很多人觉得非处方药不需要医生开处方，就非常安全，因此就自己随意去药店买来吃，这也是一大误区。”于磊说，非处方药也需要遵从医嘱服用。专家建议打出政策“组合拳”合理安全用药是一项长期的工作，全球范围内都非常关注和重视。有关专家学者认为，药物的合理使用还需要从多层次入手，采取多项措施综合干预。于磊建议加大宣传，让大家在日常生活中养成咨询药师的习惯。老百姓有了疾病症状，不能随便自行用药处置，要到正规医院看病，辨清病因，按照医生医嘱或者药师的建议用药。同时，在抗菌药物使用方面，抗菌药物管理是一项涉及多学科、多部门的系统工程，当前我国对大型医院的管控措施较严格，但是在药店销售渠道和养殖业方面，还存在相应的政策“空白”，建议对我国抗菌药物的应用管理打出政策“组合拳”。梁宗安建议，完善相关政策，建立抗菌药物管理长效机制。一方面，需培养一批有细菌、真菌感染诊治能力的中青年骨干队伍，提升我国感染病诊治和抗菌药物使用水平;另一方面，需加强建立各医疗机构完善的抗菌药物临床应用监测系统，完善包括医生、药师、检验科等涵盖在内的抗菌药物管理技术支撑，对抗菌药物临床应用进行监测、分析、评价和培训。执业药师的合理配置也非常重要。按新版GSP的硬性要求，药店应按国家有关规定配备执业药师，负责处方审核，指导合理用药。这对普通药店来说，是一个巨大的考验。截至今年7月31日，全国注册执业药师已达206899人，但是，对于全国将近44万的零售药店而言，执业药师的配备率仅达38.6%。据成都市食品药品监督管理局统计，成都市也只有不到10%的药店配有执业药师，整个四川则仅有不到6%的药店有执业药师。专职执业药师的缺乏，也导致不少用药误区。对此，于磊建议，国家还需要进一步加大对执业药师的规范化培训和管理。