无菌企业

如题，作为无菌室其对环境的要求无比严格，那么如何对其环境进行消毒呢？周期怎么控制？

[font=微软雅黑][size=16px]从事无菌制剂委托生产的药品上市许可持有人质量负责人应在满足《药品生产质量管理规范》（2010版）第二十三条 第一款“质量管理负责人应当至少具有药学或相关专业本科学历（或中级专业技术职称或执业药师资格），具有至少五年从事药品生产和质量管理的实践经验，其中至少一年的药品质量管理经验，接受过与所生产产品相关的专业知识培训”基础上，同时满足132号文第三条要求“委托生产无菌药品的，持有人的生产负责人、质量负责人、质量受权人均应当具有至少五年从事药品生产和质量管理的实践经验，其中至少三年无菌药品生产和质量管理的实践经验”要求。[/size][/font]

来源：第一财经日报字体大小： http://img.dxycdn.com/cms/upload/userfiles/image/2014/01/03/263113128_small.jpg被认为是中国制药业生死大考的新版GMP（《药品生产质量管理规范》）认证正式落下第一道闸门，第一批1319家疫苗、血液制品等无菌药品（无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括无菌原料药、注射剂、疫苗、粉针剂、血液制品等）生产企业中仅60.3%顺利过关，其余523家药企在2014年全部被暂停生产。而在距离2015年12月31日第二轮认证期限之前仅剩的2年时间里，全国其余近4700家制药企业，也将迎来残酷的"生死考验"。523家药企"被停产"2013年12月31日，新版GMP拦下了全国四成的无菌药企。昨日，国家食药监总局公告显示："截至2013年12月31日，已有796家无菌药品生产企业全部或部分车间通过新修订药品GMP认证。"换言之，全国有39.7%的无菌制药企业未能如期通过新版GMP认证，涉及523家制药公司。借鉴欧美成熟医药市场经验的GMP认证，是对制药企业生产过程的合理性、生产设备的适用性和生产操作的精确性、规范性提出强制性要求。中国在上世纪90年代引入，1998年开始推行，2004年6月正式大范围认证，主要涉及硬件方面的改造，未取得GMP认证的企业将不予生产放行。此后不久，1998版GMP注重硬件忽视软件的弊端逐渐显现，当时的国家药监局开始着手推进改良版GMP，将当时国际医药监管中的动态监管、质量稳定、人员配置等软件要求加入其中，并在2010年正式推出。"当时老版GMP要求的只是厂房、生产线，生产要开空调等等，对企业来说要求比较简单，除非本身经营就有问题没钱改造的，一般中型以上企业都顺利过了关，关掉的那一批都是经营不好的小企业。"回忆起10年前经历的第一次GMP改造，东北某制药企业相关负责人昨日向《第一财经（微博)日报》透露。本报查阅公开资料发现，在拥有5500余家制药企业的当时，"多小散乱"是被当时的国家药监局在大小会议上反复提及形容制药工业现状的核心词，而通过GMP强制认证，"关一批"、"停一批"、"倒一批"的优胜劣汰思维，与第二次的新版GMP认证兼并重组的思路一脉相承。中国医药企业管理协会会长于明德表示，根据1998版GMP认证相关资料，GMP曾导致25%药企直接退出市场，通过的4000家药企认证成本超过1500亿元。于明德预计，保守估算，在2011~2013年的缓冲期结束后，新版GMP将导致上千家中小药企倒闭。"新版GMP改造的压力确实太大，纯成本投入就比上次高出不少，一条生产线的投入一般都已经上千万元，再加上牵涉复杂的改造方案设计，对生产低利润普药的公司来说，不说技术能不能达到，仅是这些花费就已经是天文数字。"上述企业负责人向记者表示。贵州益佰此前披露的《关于GMP改造一期项目投资公告》显示，在包括提取车间、质保大楼夹层、污水处理站等系列项目后，仅一期投资额就已经达到了2.71亿元；而其已公布的2013年定增募资11.6亿元，则全部用于二期GMP改造和两家子公司的GMP改扩建项目。"通过新修订药品GMP实施，我国药品生产企业的质量保障能力和风险控制水平明显增强，产业集中度进一步提高，产业结构优化趋势明显。"对于此次新版GMP的目的，国家食药监总局昨日公告再次强调。侥幸不再"因为之前也有议论觉得这次认证标准过高，所以一直到今年（2013年），仍然有不少企业都还有侥幸心理，觉得也许到12月31号最后期限，大家都没过，药监局会顺延，毕竟法不责众。"昨日，某行业协会负责人告诉《第一财经日报》。但企业没想到的是，直到最后，它们也没有等到国家食药监总局政策松动的消息。"之前几次的内部会议和协会组织论坛上，我们都反复强调过，认证标准不降低，期限不放宽，让企业不要有任何侥幸心理，要充分重视。"昨日，接近国家食药监总局人士告诉《第一财经日报》，"到时间没过的，必须暂停生产，如果这一点做不到，我们2015年的认证还有什么严肃性可言。"昨日晚间，未通过认证的天坛生物发布紧急澄清公告，表示"根据整体经营计划安排，于2009年启动本部生产设施向亦庄新产业基地整体搬迁计划。本部原有生产设施（含乙肝疫苗原生产设施）于2013年12月31日停止生产，新生产设施预计最快于2014年下半年起相继投产"。而因同样原因被停产的大连汉信昨日同时发布公告，梅花集团（600873.SH）与西藏谊远实业有限公司达成协议，出资收购谊远实业持有的大连汉信生物制药有限公司100%的股权。根据国家食药监总局昨日披露的信息，目前首批已通过认证企业生产的品种覆盖《国家基本药物目录》（2012年版）中收载的全部无菌药品；国家医保药品目录（2013年）中收载的无菌药品覆盖率也达98.7%；总体产能已达到2012年无菌药品市场实际需求的160%以上，即便在近半数停产的情况下，仍能够满足市场供应。公开资料显示，截至2013年底，我国已有160家企业的450个原料药、103家企业的143个制剂品种通过国外药品GMP认证检查；全国制药五百强企业中涉及注射剂生产的仅有22家未申请新修订药品GMP认证，100强中99家已经通过，仅剩的1家也已提交认证申请。

我想请教一下,我们企业的无菌室现在是用开门式的,但密封性不大好,特别是紫外线消毒后,气味都出来了,有没有什么办法可以解决密封性不好的这个问题呢?

1、洁净室（无菌室）要符合规范要求：无菌室应采光 良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。由1—2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间和缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。 无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18—26℃，相对湿度45%—65%。缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板 内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（2—2.5w/m3），应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40uw/m2。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。 2、建立使用登记制度在登记册中可设置以下项目内容：如使用日期、时间、使用人、设备运行状况、温度、湿度、洁净度状态（沉降菌数、浮游菌数、尘埃粒子数 ）、报修原因、报修结果、清洁工作（台面、地面、墙面、天花板、传递窗、门把手）、消毒液名称等。3、建立使用标准操作规范（SOP）并严格管理:SOP内容至少要有以下几点： （1）规定净化系统使运转时间要求每次实验前应开启净化系统使运转至少1h以上，同时开启净化台和紫外灯。 （2）物品进入洁净室（无菌室）基本要求：凡进入洁净室（无菌室）的物 品必须先在第一缓冲间内对外部表面用消毒剂消毒灭菌，再经物流缓冲间、传递窗1h以上，及无菌空气吹干后送入无菌室。注意带纤维、易发尘物品不得带进净化实验室。无菌室内固定物品不得任意搬出。 （3）人员进入洁净室（无菌室）要求：实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、带手表、戒指等首饰；不得吃东西、嚼口香糖。应清洁手后进入第一缓冲间更衣，同时换上消毒隔离拖鞋，脱去外衣，用消毒液消毒双手后戴上无菌手套，换上无菌连衣帽（不得让头发、衣等暴露在外面），戴上无菌口罩。然后，换或是再戴上第二副无菌手套，在进入第二缓冲间时换第二双消毒隔离拖鞋。再经风淋室30s风淋后进入无菌室。 （4）温湿度观察要求：观察温度计、湿度计上显示的温湿度是否在规定的范围内，并作为实验原始数据记录在案。如发现问题应及时寻找原因，及时报修和及时报告实验室主管，并将报修原因和结果记录归档。 （5）沉降菌落计数与浮游菌测定要求：在每次实验同时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。每周1次，或在无菌检查等必要时，在每次实验同时对操作室和净化台进行浮游菌测定，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。 （6）消毒要求：无菌室每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液（常用消毒剂的品种有：5—20倍稀释的碘伏水溶液、0.1%新洁尔灭溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（来苏儿）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（处方：对羟基苯甲酸甲酯21.5g；对羟基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用的消毒剂品种与使用要进行有效性验证方可使用，并定期更换消毒剂的品种）擦拭操作台及可能污染的死角，方法是用无菌纱布浸渍消毒溶液清洁超净台的整个内表面、顶面、及无菌室、人流、物流、缓冲间的地板、传递窗、门把手。清洁消毒程序应从内向外，从高洁净区到低洁净区。逐步向外退出洁净区域。然后开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1—2h，以杀灭存留微生物。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌30min。 （7）其他要求：如遇停电，应立即停止实验，离开无菌室。关闭所有电闸。重新进入无菌室前至少开启机房运转1h以上。4、洁净度检查的要求与方法：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数，以此来判断无菌室是否达到规定的洁净度，常有沉降菌和浮游菌测定方法。 （1）沉降菌检测方法及标准：以无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区台面左、中、右各放1个；打开平板盖，在空气 中暴露30min后将平板盖好，置32.5℃士2.5℃培养48h，取出检查，3个平板上生长的菌落数平均小于1个。 （2）浮游菌检测方法及标准：用专门的采样器，宜采用撞击法机制的采样器，一般采用狭缝式或离心式采样器，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定时校检，采样器和培养皿进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其他培养基。使用时，先开动真空泵抽气，时间不少于5min，调节流量、转盘、转速 。关闭真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度。置采样口采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。全部采样结束后，将培养皿置32.5℃士2.5培养48h，取出检查，浮游菌落数平均不得超过5个/m3。 每批培养基应选定3只培养皿做对照培养。 无菌操作台面或超净工作台还应定期检测其悬浮粒子，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测，并根据无菌状况必要时置换过滤器。5、定期进行洁净度再验证：定期（每季度、半年、1年）或当洁净室设施发生重大改变时，要按国家标准GB/T16292-16294-1996《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》进行洁净度再验证，以确保洁净度符合规定，保存验证原始记录，定期归档保存，并将验证结果记录在无菌室使用登记册上，作为实验环境原始依据及趋势分析资料。并定期对洁净室的环境检测数据进行趋势分析和评估，根据评估结果，了解洁净室设施环境质量的稳定状况及变化趋势，决定是否有必要修订相应的警戒和纠偏限度。6、定期更换新的紫外灯管、更换净化系统的初效、中效、高效头：定期（至少每年1次）更换新的紫外灯管，以确保紫外灯管灭菌持续有效。并同时在使用登记本上做好更换记录，定期归档保存。至少2年1次，或按洁净度验证实际情况，定期更换初效、中效、高效头。以确保净化系统的功能持续有效，并同时在使用登记本上做好更换记录，定期归档保存。7、使用过程中应尽可能减少人员的走动或活动：平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，同向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。8、洁净度不符合规定时立即停止使用：发现洁净度不符合规定时，应立即停止使用，寻找原因，彻底清洁、必须经洁净度再验证符合规定后，才再使用，并同时将情况记录在无菌室使用登记册上，定期归档保存。9、对进入的外来人员或维修人员进行指导和监督：非微生物室检验人员不得进入洁净室（无菌室），对必须进入的外来人员或维修人员要进行指导和监督。10、洁净室（无菌室）的日常管理：建立安全卫生值日制度，一旦发现通风系统、墙壁、天花板、地面、门窗及公用介质系统等设施有损坏现象，要及时报告并采取相应的修复措施，并保存记录及时归档。从洁净室（无菌室）环境中检测到的微生物应能鉴别至属或种，保留鉴别实验原始记录及菌种，作为无菌生产、无菌检查洁净室环境质量、消毒剂有效性评估及污染源调查的依据，并且也是为无菌检查阳性结果的调查提供第一手资料。

我国GB/T4789.26-2013《食品微生物学检验》对商业无菌的检验主要通过保温试验和微生物培养试验来判定，对保温试验阴性及镜检接种试验阴性的产品，均可判定为商业无菌。韩国和日本对罐头产品的微生物检测要求也包括保温试验和细菌试验，但对保温试验呈阴性的产品仍进行接种培养，若培养介质混浊，则判定为产品细菌生长阳性，为不合格产品。 判定方法与我国国标区别如下：一是保温试验温度，韩国食品药品安全部（MFDS）的保温试验为35/37℃保温10天后，常温放置一天再进行接种试验，日本为35±1℃保温14天后进行接种试验；二是韩国及日本对保温试验未发生胖听或泄露的产品均取样进行硫乙醇酸盐液体培养基（适用于需氧菌和厌氧菌生长）培养，35/37℃培养2天，培养基混浊的则判定为阳性结果。在这种检测方法中，一旦产品中存在未完全杀死的微生物或孢子，则极可能出现阳性结果而被判定为不合格。 日韩罐头商业无菌检测方法与国标的差别，对我国罐头出口日韩带来巨大压力：一是成本增加。日韩保温时间远长于国标，保温温度不同，造成产品销售周期加长，库存压力增大，检测成本增加。据估算，山东输日、输韩出口罐头每个出口批的成本将增加近500美元。二是出口风险增大。运抵后罐头保温试验结果作为投放市场的唯一依据，检验的原始性和可检性不足。再加上保温时间的延长以及保温温度的区别，将导致保温结果不能反映企业对罐头杀菌过程的常规控制；三是通报增多。许多出口企业对日本及韩国对罐头食品的微生物要求及检测判定方法并不了解，出口前并未按照进口国要求对相关产品进行商业无菌试验，导致出口日、韩的罐头产品因微生物繁殖阳性或超标被通报。摘自:中国国门时报

[color=#333333][url=http://www.chinanoted.com/][color=#e53333]无菌均质器[/color][/url]，又称拍打式匀浆机，拍打式匀浆器，无菌均质器的应用范围如下：[/color][color=#333333]1[/color][color=#333333]、无菌均质器广泛用于动物组织、生物样品等均质处理，在食品、药品、化妆品、临床、分子学、毒素及细菌检测等领域均可应用，特别适合于微生物检测样本的制备。[/color][color=#333333]2[/color][color=#333333]、无菌均质器[/color][color=#333333]([/color][color=#333333]拍打式匀浆器[/color][color=#333333])[/color][color=#333333]是在国外系列产品技术基础上改进并放大的先进产品，具有均质柔和、样品无污染、无损伤、不升温、不需灭菌处理，不需洗刷器皿的特点。[/color][color=#333333]3[/color][color=#333333]、无菌均质器也适合肿瘤组织[/color][color=#333333]([/color][color=#333333]如肝癌、肠癌、胃癌、乳腺癌[/color][color=#333333])[/color][color=#333333]的匀浆，既可得到大量的单细胞，必要时，可通过延长均质时间，对组织细胞[/color][color=#333333]([/color][color=#333333]如肝脏等[/color][color=#333333])[/color][color=#333333]实现柔软的破碎。[/color][color=#333333]4[/color][color=#333333]、无菌均质器可有效地分离固体样品表面和被包含在内的微生物均一样品，样品装在一次性无菌均质袋中，不与仪器接触，运行快速、结果准确、重复性好的要求。[/color][color=#333333]该装置设有全开启式玻璃透明窗口门，易于清洗，玻璃透明窗口易于观察。采用大屏幕液晶显示，工作时间和均质速度智能可调，拍击器也可任意调整前后距离。可有效的分离实验样品表面和被包含在内的微生物均一样品，样品使用一次性无菌均质滤袋隔离操作，保证卫生和安全，不与仪器接触，无样品泄露而不需进行系统清洗，具有方便快速、结果准确、均质柔和、样品无污染、无损伤、不升温、不需灭菌处理，不需洗刷器皿的特点，重复性好的要求。本产品也适合肿瘤组织（如肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌）的匀浆，既可得到大量的单细胞。必要时，可通过延长均质时间，对组织细胞实现柔软的破碎。 [/color][color=#333333]biosafer[/color][color=#333333][url=http://www.chinanoted.com/][color=#e53333]无菌均质器[/color][/url]是使从固体样品中提取细菌的过程变得非常简单，只需将样品和稀释液加入到无菌的样品袋中，然后将样品袋放入拍击式均质器中即可完成样品的处理。有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品，确保无菌袋中混合全部的样品。处理后的样品溶液可以直接进行取样和分析，没有样品的变化和交叉污染的危险。应用领域：食品微生物分析；动物组织、生物样品、化妆品的均质处理；鱼、肉、蔬菜、水果、饼干；药品的微生物分析等[/color][color=#333333]。[/color][color=#333333]在使用[/color][color=#333333]biosafer[/color][color=#333333]无菌均质器时正确对待这些问题，可以使均质器更好的为您服务。 [/color][color=#333333]1[/color][color=#333333]） 电源插头必须插紧到位，出现松动可能影响电脑控制器造成死机，如出现死机现象，请关闭后侧电源开关，关机[/color][color=#333333]3[/color][color=#333333]分钟后重新启动。[/color][color=#333333]2[/color][color=#333333]） 在锤击板工作时请不要随意打开均质器门，以免样品液溢出。应按“开[/color][color=#333333]/[/color][color=#333333]停”建，设备自动停止运行。当把门关上后，再按“开[/color][color=#333333]/[/color][color=#333333]停”建，设备自动完成余下工作。切勿颠倒操作。 [/color][color=#333333]3[/color][color=#333333]） 仪器长期不使用应切断电源，拨去插头。防止无菌均质器内部电子元器件老化。 [/color][color=#333333]4[/color][color=#333333]） 均质器门底部为防止均质袋意外破裂，便于清洗溢出物，底部设计为空的，可放置接水盘，所以仪器运转时请勿用手从底部伸入，以免纹伤手指。均质器工作时最好不要打开均质器门，造成不必要的损失。 [/color][color=#333333]5[/color][color=#333333]） 机器在运转前，请仔细查看均质箱内有无异物，以免工作时发生故障和损伤均质袋。[/color][color=#333333]6[/color][color=#333333]） 硬块，骨状，冰状物等坚硬锐利的物质不宜使用，以免破坏均质袋。 [/color][color=#333333]7[/color][color=#333333]） 仪器和均质袋的存放都应避免阳光的直接照射，特别是均质袋应存放在无阳光或避免紫外线照射的地方，以免老化。 [/color][color=#333333]8[/color][color=#333333]） 量少时，需加快速度时，均质物纤维比较坚韧时，则可用后面旋钮调节拍击板与可视窗的间距，来达到更好的均质效果。注意调整的距离，避免发生空击等损伤无菌均质器的情况发生。 [/color][color=#333333][url=http://www.chinanoted.com/][color=#e53333]无菌均质器[/color][/url]正确使用步骤为： [/color][color=#333333]1[/color][color=#333333]、把需处理的试品放入无菌均质袋中。 [/color][color=#333333]2[/color][color=#333333]、打开均质器门（可全开启），将无菌袋开口在关闭均质器门时夹住。 [/color][color=#333333]3[/color][color=#333333]、设定使用程序（如拍击速度、拍击时间等），进行拍击均质工作。 [/color][color=#333333]4[/color][color=#333333]、实验完毕后，打开均质器门，取出样品。 [/color][color=#333333]无菌均质器的使用如果做到以上几点，可以极大延长其使用寿命和使用效果。 [/color]

[font=微软雅黑][size=16px]【问】阳性对照间、微生物限度、[url=http://www.anytesting.com/search/q-%E6%97%A0%E8%8F%8C%E6%A3%80%E9%AA%8C%E5%AE%A4.html]无菌检验室[/url]是否必须各自采用独立的实验室及空调送风系统？[/size][/font][font=微软雅黑][size=16px]【答】企业可参考YY0033无菌医疗器具生产管理规范以及GB50073洁净厂房设计规范等有关标准，根据所生产产品的特性来合理设计厂房，最大限度低降污染，确保产品的质量不受环境的影响。阳性对照室从生物安全以及交叉污染可能影响实验结果等角度考虑，应当与无菌室和微生物限度室分开，不共用一套空调送风系统。更多内容建议参考《中国药典》附录之药品微生物实验室规范指导原则。[/size][/font]

无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。可以用板材和玻璃建造。面积不宜过大，约 4 — 5 平方米即可，高 2.5米左右。无菌室外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室标准化规程与验收规范。1.目的　　本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 2.适用范围　　生测实验室 3.责任者　　QC主管生测员 4.定义　　无 5.安全注意事项　　严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 6.规程　　6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 　　6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 　　6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 　　6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。 　　6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 　　6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。 　　6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 　　6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 　　6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。 　　6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 　　6 .11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 　　6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 　　6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 　　6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 　　6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 　　6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 7.参照　　参照《药品卫生检验方法》 《中国药品检验标准操作规范》中 (无菌检查法)章节 中华人民共和国医药行业标准 YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》

微生物实验室如何进行无菌间灭菌呢？最近经常看到有实验员咨询：我的无菌室空白验证长菌落了，是不是无菌室灭菌不彻底啊！我们的无菌室应该用什么方式灭菌？等等。无菌室作为我们微生物检测的空间，一旦出现这种情况大家都会感到担忧，会有疑问：在这样的环境里检测，结果能准确吗？首先我们应该了解我们的无菌室应该处于什么状态，有什么要求。一般情况下，我们的无菌室达到空间洁净度10000级就可以了，但操作区域例如超净工作台、生物安全柜里需要达到洁净度100级，也就是我们常说的“整体万级，局部百级”。万级洁净度对空间落菌的要求是：静态检测，自然沉降菌≤3CFU/皿，百级洁净度对空间落菌的要求是：静态检测，自然沉降菌≤1CFU/皿。也就是说平时我们做的空间验证，只要不超过这个标准，就是符合要求的，因此也不必太过担忧。那么，怎样能够保证我们的无菌室符合要求？当我们的无菌室出现异常应该如何处理？我们得先从无菌室的灭菌方式开始讲。一般无菌室的灭菌方式分为：紫外线照射、臭氧灭菌、化学熏蒸这几种。这几种灭菌方式各自有各自的特点，大家可以根据自己的实际情况来选择合适的灭菌方式，遇到异常难以解决时，也可以考虑增加一种灭菌方式来解决。紫外线照射：紫外线灭菌是利用适当波长的紫外线破坏微生物机体细胞中的DNA或RNA结构，造成生长性细胞死亡来达到灭菌效果，属于一种物理方式的灭菌，也是我们微生物检测无菌室最常用的灭菌方式。该方法操作简单，使用方便，也比较经济，可以杀灭各种微生物，包括细菌、病毒、真菌、立克次体以及支原体等，因此在实验室里，是最常见的灭菌方式。但紫外线灭菌也有一定的缺点，紫外线只能对直接照射到的微生物起到杀灭作用，因此只能对空间中照射到的地方起作用，一些照射不到的死角或者物品的内部是无法达到效果的，因此使用紫外线灭菌的无菌室，也会辅助以一些化学试剂，例如洁尔灭、酒精等消毒剂对死角进行清理。使用紫外线灭菌，应当定期检测紫外线的强度，若是无法达到要求的强度，就应该考虑更换紫外灯。根据2002年国家卫生部发布的《消毒技术规范》，紫外灯的要求是紫外线强度不得低于70μW/cm2（紫外灯1m处），而空间内的紫外灯的布局也是有要求的，要求平均每m3不少于 1.5W。也就是说，假如你无菌室是5m2，实验室高度是3米，那么你的空间体积就是15m3，你空间中使用的紫外灯的功率就不得低于22.5w。按照这个方式就可以算一下你的无菌室需要多少紫外灯了。当紫外线的强度达不到要求时，就需要更换紫外灯了。臭氧灭菌：臭氧是一种强氧化剂，灭菌过程属生物化学氧化反应。O3灭菌原理一般有以下三种：1.臭氧通过氧化分解细菌内部葡萄糖所需的酶，使细菌灭活死亡。2.直接与细菌、病毒作用，破坏它们的细胞器和DNA、RNA，使细菌的新陈代谢受到破坏，导致细菌死亡。3.透过细胞膜组织，侵入细胞内，作用于膜内的脂蛋白和内部的脂多糖，改变细胞的通透性，导致细胞溶解死亡。使用臭氧灭菌，杀菌彻底，无残留，杀菌广谱，可杀灭细菌繁殖体和芽孢、病毒、真菌等，并可破坏肉毒杆菌毒素。另外，O3对霉菌也有极强的杀灭作用。O3为气体，能迅速弥漫到整个灭菌空间，灭菌无死角。所以，臭氧灭菌也是目前被广泛使用的灭菌方式。用臭氧消毒空气，必须是在封闭空间，且室内无人条件下进行，消毒后至少过 30min 才能进入。另外臭氧的密度比空气大，在空气中会迅速下降到空间的底层，因此臭氧发生器也应当安装在无菌室的顶部。一般灭菌时间选择30min即可，要求空间中臭氧浓度不低于20mg/m3。化学熏蒸：化学熏蒸是一种十分传统的空间灭菌方式，一般是采用易挥发气化的化学物质的蒸汽对空间微生物进行杀灭的目的，一般常用甲醛、戊二醛、过氧化氢、过氧乙酸等。这里以常用的甲醛熏蒸为例。一般甲醛熏蒸又称甲醛高锰酸钾熏蒸，将40%的甲醛溶液加入到高锰酸钾溶液中，二者发生反应，放出大量的热使甲醛蒸发到空间中，从而对无菌室进行灭菌。一般甲醛熏蒸的灭菌效果比较理想，对霉菌等较难清除的污染菌也有较好的杀灭效果，因此在无菌室被霉菌污染时，通常都是使用甲醛进行熏蒸来彻底消灭污染源。但是甲醛熏蒸的缺点也是很明显的，因为甲醛是一种强致癌性的化学品，对人体的伤害较大，在使用过程中需要特别注意，并且残留量也要进行严格的控制。每次熏蒸后，至少需要通风24h才可以使用。目前对熏蒸后甲醛的残留量并没有明确要求，还是要通过经验来判断，目前国家对居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m3，所以我们也可使用甲醛含量测定仪来对熏蒸后的空间进行检测。目前甲醛熏蒸灭菌的方法食品检测无菌室的灭菌中已经较少使用，主要也是因为操作比较繁琐，灭菌时间较长，进行一次甲醛熏蒸之后，会有几天无法使用无菌室进行检测，所以只有在其他灭菌方法无法达到理想的灭菌效果时，才会考虑进行甲醛熏蒸。而其实这种灭菌方式目前在很多药企的无菌室灭菌，还是会经常用到的，另外，有些生产区域如果长期被霉菌污染，也会考虑用甲醛熏蒸的方法来解决。了解了这几种常用的无菌室灭菌方式，在我们日常的工作中也可以根据自己实验室情况进行选择，尤其是长期使用一种灭菌方式若是灭菌效果达不到理想的效果时，可以根据实际情况更换灭菌方式，或者引进一种新的灭菌方式两者结合，以期达到预想的效果。

无菌药品技术转让审批权重新收回总局 从国家食品药品监督管理总局（CFDA）获悉，2015年1月1日起，注射剂等无菌药品技术转让的审评审批权将收回到总局，此前已获总局批复授权的省级药品监管机构也将停止该项工作。 　　CFDA表示，自2015年1月1日起，注射剂等无菌药品的技术转让注册申请，应当按照《药品技术转让注册管理规定》的程序和要求申报补充申请，由国家食品药品监督管理总局进行审评审批；已获总局批复授权的省级药品监管机构，停止受理注射剂等无菌药品的技术转让注册申请；已经受理的注册申请，要认真审查工艺验证、质量对比等研究资料，不符合要求的，坚决不予审批。　　2013年2月，CFDA发布《关于做好实施新修订药品生产质量管理规范过程中药品技术转让有关事项的通知》，对于在药品GMP改造过程中药企整体搬迁、兼并等情形涉及的药品技术转让问题作出规定，并授权省级药监部门管理。其中，注射剂等无菌药品生产企业应在2014年12月31日前提出转让注册申请。此次CFDA是在该时间节点之后，将权力收回到总局。

无菌为一相对概念,大输液无菌检查结果为无菌时,指在一定灭菌工艺条件下,对最终灭菌品相对于抽验样本数量的微生物存活率低于10 - 6 [ 1 ] 。笔者在按照中国药典2000 年版二部对大输液进行无菌检查时,认为需要注意以下环节。1 　环境无菌试验区应为净化区,尽可能除去微生物污染,试验区应定期检测其无菌符合程度,并在使用前采取有效的方法进行无菌处理。若使用开放式薄膜过滤器,要更加严格注意操作区环境,避免外界引入微生物对实验结果造成影响。2 　培养基2. 1 　培养基灵敏度检查　利用不同菌株生长试验来评价培养基灵敏度,只有培养基灵敏度符合要求时,在一定体积范围内才能够检测出大输液中微量残存的活菌,做大输液无菌检查前一定要做培养基灵敏度检查。2. 2 　培养基的pH 值和澄清度　不同微生物生长有相对适宜的pH 值范围,培养基配制后调节到相应的pH 值范围,创造一个最有利于微生物生长的pH 值条件,同时也保证实验的平行性。配制后的培养基应最好通过4 层以上纱布进行过滤后再分装灭菌,这样处理过的培养基细腻、澄清,无杂质和异物,有利于最终结果判断。2. 3 　培养基灭菌时间与温度　中国药典2000 年版二部规定无菌检查用培养基制备时均以115 ℃灭菌30 min ,从灭菌法角度讲,既保证培养基无菌程度,同时又防止营养成分流失。过高的灭菌温度、过长的灭菌时间,会破坏培养基中的葡萄糖成分,使培养基颜色变深,同时需氧菌、厌氧菌培养基中红色厌氧环高度加大,影响无菌检查用培养基的质量。2. 4 　培养基临用前检查　大输液无菌检查中的需氧菌、厌氧菌培养基在使用之前,应做培养基检查。培养基上部红色厌氧环高度为培养基高度的1/ 10～1/ 5 时可以使用,若红色厌氧环超过1/ 5 高度时,说明培养基中厌氧环境发生变化,应在保证培养基无菌程度情况下对培养基做水浴加热处理,除去培养基中游离氧后再使用,加热仅限一次[ 2 ] 。3 　对照实验3. 1 　阳性对照实验　阳性对照实验为无菌结果判定标准参考依据之一,若阳性菌对照管中无菌生长,则对应样品无菌检查结果无效。大输液无菌检查用对照菌株为金黄色葡萄球菌[CMCC( 26003 ][ 2 ] 。加入阳性对照菌液时,只有确认此对照菌液为新近配制,并且活菌数为10～100 个/ ml - 1时,才能保证阳性对照实验结果的有效性。3. 2 　阴性对照实验　阴性对照实验一般能够反映培养基灭菌程度、使用器具无菌程度、操作区域的无菌环境和操作人员的无菌技术等情况,用于对检查结果发生疑问时溯源的依据和问题环节的排除。4 　结果判断4. 1 　浑浊程度变化　大输液无菌检查的培养期为7 d ,若有微生物生长,培养基会因生长代谢而使培养基变浑浊。对于需氧菌、厌氧菌的培养,正常加入阳性对照菌液的培养基,一般在培养第2 天有菌生长,培养基变浑浊,随着培养时间的延长,浑浊程度加大至最后出现沉积现象。有极少量微生物的大输液供试品,接种在需气菌、厌气菌培养基中,其微生物生长一般比阳性对照管缓慢,由于某些细菌经过高压灭菌后,可能以休眠状态、亚致死状态或缺陷状态存在,需要一个恢复期后才能生长繁殖。实验中发现有的微生物在培养的第5 天、第6 天才有生长现象,培养基才发生浑浊,因而对培养基变化情况要逐日观察,及时记录。同时,需氧菌、厌氧菌培养基中为保证厌氧环境加入的少量琼脂在培养过程中,会使培养基本身产生轻微浑浊现象,浑浊程度虽每日略有变化但不发生突然改变时,也不认为有微生物生长。若无法确定,可与阴性对照做平行比对,也可按照中国药典2000 年版二部附录中无菌检查法中要求进行下一步操作。真菌的结果判断相对容易,真菌培养基澄清度大,培养过程中培养基本身几乎无变化,有真菌生长时,可见培养基浑浊,或培养基中出现菌团。4. 2 　颜色变化　真菌培养基颜色均一,结果容易判断。需氧菌、厌氧菌培养基在有微生物生长时,培养基上部红色厌氧环消失,整个培养基发生浑浊并变成浅黄色或黄白色。在培养过程中也出现下面几种情况:红色厌氧环扩散至培养基高度1/ 2 左右 整个培养基颜色变为淡红色 培养基上下部分为淡红色,中部为培养基正常颜色。笔者建议,对无菌结果判断要在保证无外界环境因素及人为因素影响情况下,结合培养基浑浊程度变化和颜色变化共同进行。参考文献:[1 ] 　马绪荣,苏德模主编. 药品微生物学检验手册[M] . 第一版. 北京:科学出版社,2000. 8.[ 2 ] 　中国药典. 二部[ S] . 化学工业出版社,2000 :附录89～91.[收稿日期]2001203205

无菌生产有哪些要求？ 无菌生产过程中主要有哪些要求呢，其实在经清洗后，各组分至少应放在D型洁净区。如未规定要采用灭菌或空气过滤器过滤，阻止微生物流向后续工序，灭菌后的原材料和组分的生产王序应在A型洁净区完成，但在A型区外有B型区作为环境。在生产过程中需要灭菌过滤的溶液均应在C型洁净区生产。如果不需灭菌过滤，则应在A型洁净区进行材料和产品的制备。A型洁净区应位于B型洁净区之内。在无菌条件下制备的产品应在A型洁净区进行产品的再加工和灌装。A型洁净区应以B型洁净区为环境。部分密闭的容器传递（运输），如在脱水干燥时，应在包装之前在A型洁净区完成，A型区应被B型区包围。或者在B型洁净区环境内用密闭传递装置完成运输工作。无菌油膏、软膏、悬浮液和乳化液的制取和灌装应在A型洁净区完成，A型区应位于B型区环境内。其条件是允许产品裸零和不需要后续灭菌过滤。隔离工艺和抽气——充气——密封最重要的进步就是采用隔离工艺和抽气——充气一一密封工艺，保证产品的灭菌性，提高洁净室和洁净区的效率和降低与此有关的费用。隔离或屏障技术的实质就是用密闭装置的物理隔离将工作区与周围空间隔开。此项工艺广泛应用于灭菌产品的生产。GMP规程于1997年规定供无菌生产用的隔离装置应配置在至少不低于D型洁净区的环境空间内。与普通洁净室技术所提出的要求相比，确实这是较为简单的条件。它能显著地降低洁净厂房建造和使用费用。吹气——充气——密封工艺就是在一个连续循环内，用热塑型塑料粒子压制成容器装药，然后密封。所有这一切均由一台综合自动装置完成。如果是无菌生产，有A型洁净区的设备可安设在至少是C型洁净区的环境内，并且要采用符合A/B型洁净区要求的工作服。如果是最终灭菌生产，可将设备安装在至少是D型洁净区的环境内。与传统的工艺相比这也是较为简单的要求。

1.目的本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。2.适用范围 生测实验室3.责任者 QC主管生测员4.定义 无5.安全注意事项严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。6.规程6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。6.11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。

无菌室的要求 1．工作室应矮小、平整，面积只需4米2左右，高2.2―2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及杀菌 2．室内采光面积大，从室外应能看到室内情况。 3．为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。 4．无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以1米为宜 ，其电源开关均应设在室外。 5．无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。 6．无菌室的使用与管理 （1） 无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。&不要放与检测无关的物品 （2） 室内检验用具及凳桌等保持固定位置，不随便移动。 （3） 每2―3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时 （4） 定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底消毒灭菌。/无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个（平板直径均9厘米[fon

液态奶无菌砖包括利乐包、康美包等以纸、铝箔、塑料薄膜等为基材复合而成的可供无菌罐装要求的产品的包装。目前，可供参考的产品标准有：(1) GB 19741-2005 《液体食品包装用塑料复合膜、袋》：适用于总厚度小于0.2mm的由塑料与塑料、塑料与纸和铝箔（或其他阻隔性材料）复合而成的包装材料或包装袋。(2) GB/T 18192-2008 《液体食品无菌包装用纸基复合材料》：适用于以原纸为基体，与塑料、铝箔或其他阻隔性材料经复合而成，以卷筒形式或以单个包装产品形式供无菌灌装液体食品用的材料。(3) QB/T 3531-1999 《液体食品复合软包装材料》：适用于以原纸、低密度聚乙烯（LDPE）、铝箔等为原料经挤压复合而成，专供瑞典利乐公司无菌灌装机包装液体食品的材料。

无菌室的建设要求 　　1、工作室应矮小、平整，面积只需4米2左右，高2.2—2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及杀菌; 　　2、室内采光面积大，从室外应能看到室内情况; 　　3、为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室; 　　4、无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯，杀菌外灯离工作台以1米为宜 ，其电源开关均应设在室外; 　　5、无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。 　　无菌室的使用与管理 　　1、无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等，不要放与检测无关的物品; 　　2、室内检验用具及凳桌等保持固定位置，不随便移动; 　　3、每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时; 　　4、定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底毒灭菌/无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个(平板直径均9厘米)，置无菌室各工作位置上，开盖曝露半小时，然后倒置进行培养，测细菌总数应置37℃温箱培养48小时;测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。细菌`霉菌总数均不得超过10个为; 　　5、无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位(待检物例外)，然后打开紫外灯杀菌30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用; 　　6、进入无菌室前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋; 　　7、操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。 　　器材及场所的灭菌消毒 　　微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对象采用不同的处理方法。 　　1、高压蒸汽灭菌: 工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理; 　　2、火焰灭菌： 接种针、接种环等可直接火焰灭菌; 　　3、高温干燥灭菌： 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃灭菌2小时; 　　4、一 般消毒: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒; 　　5、空气的消毒： 开启紫外灯照射30—60分钟即可。 　　6、 操作要领： 　　1)准备工作 　　. 先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30—60分钟; 　　. 检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒; 　　. 操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室; 　　. 进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作。 　　2)操作过程注意事项 　　. 动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染;玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境; 　　. 操作应在近火焰区进行; 　　. 接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌; 　　. 使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作; 　　. 观察平板时不好 开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能 大开，而是上下盖适当开缝; 　　. 进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤; 　　. 工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，最后用消毒液擦拭工作台。

无菌室的要求 1．工作室应矮小、平整，面积只需4米2左右，高2.2―2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及杀菌。 2．室内采光面积大，从室外应能看到室内情况。 3．为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。 4．无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以1米为宜 ，其电源开关均应设在室外。 5．无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。 6．无菌室的使用与管理。 （1）无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。&不要放与检测无关的物品。 （2）室内检验用具及凳桌等保持固定位置，不随便移动。 （3）每2―3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时。 （4）定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底消毒灭菌。/无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个（平板直径均9厘米），置无菌室各工作位置上，开盖曝露半小时，然后倒置进行培养，测细菌总数应置37℃温箱培养48小时；测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。细菌`霉菌总数均不得超过10个为 。 （5）无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位（待检物例外），然后打开紫外灯杀菌30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用。 （6）进入无菌室前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。 （7）操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。 器材及场所的灭菌消毒微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对象采用不同的处理方法。 1．高压蒸汽灭菌: 工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理。 2．火焰灭菌： 接种针、接种环等可直接火焰灭菌。 3．高温干燥灭菌： 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃灭菌2小时。 4．一 般消毒: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。 5．空气的消毒： 开启紫外灯照射30―60分钟 即可。 操作要领 准备工作 1．先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30―60分钟。 2．检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒。 3．操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室。 4．进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作。 操作过程注意事项 1．动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境。 2．操作应在近火焰区进行。 3．接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌。 4．使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。 5．观察平板时不好 开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能 大开，而是上下盖适当开缝。 6．进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤。 7．工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，最后用消毒液擦拭工作台。

一、无菌室内非请莫入，非本实验室人员未经批准不得在无菌室内工作。 二、所有药品器材均为无菌室专用，一般不得带出无菌室，作为其他用处。三、所有物品用后立即放回原处。 四、进入无菌室工作之前需修剪指甲，手清洗后在用１％新洁尔灭溶液洗手消毒，换鞋进入，使用超静台需着无菌室专用工作服并用酒精棉球擦手消毒。超静台每次使用后都应仔细做好清洁整理工作。 五、卫生值日人员要勤打扫。注意保持无菌室的相对无菌条件，经常用新洁尔灭溶液擦洗地面、桌面、台面和试剂厨。经常将无菌室工作服送至洗涤室清洗消毒，使用后的鼠尸及鼠笼随手带出无菌室。每日为除湿机倒水。注意无菌时使用药品、物品的消耗，及时通知工人准备，或汇报负责老师以便补充。 六、配培养基和其他试剂都应有记录，瓶子上映注明品质、浓度、日期及配制人，使用过的培养基及无菌试剂应自觉注明使用人姓名，以防止交叉污染。 七、严格控制细胞之间或病原之间的交叉污染，容易发生交叉污染的细胞或病毒不能在同一超净台内处理。八、扭力天平使用之后应休止，在将读数盘回零，托盘及天平表面擦洗干净，药勺也应洗净擦干。使用后的药品应将盖拧紧，放回原处。 九、离心机使用时应注意平衡，使用后将离心杯、橡皮套管清洗干净，倒置晾干。 十、ＣＯ２孵箱为通气培养箱，应自觉维护箱内清洁，定期将托板、托盘换出消毒。如培养瓶内培养基漏出，立即用酒精棉讲瓶外表面迹箱内污迹擦拭干净，箱内蒸发用水威无菌蒸馏水，应注意补充。四周水箱内的水定期补加。ＣＯ２浓度、温度控制器等零部件请勿动，发现问题及时报告。 十一、组织培养用眼科剪刀镊子使用后应洗净烘干，防止生锈。 十二、浸泡细胞培养板统一使用７５％酒精（ＣＰ或ＡＲ）或医用酒精。

无菌技术是在医疗护理操作过程中，保持无菌物品、无菌区域不被污染、防止病原微生物 侵入人体的一系列操作技术。无菌技术作为预防医院感染的一项重要而基础的技术，医护人员必须正确熟练地掌握，在技术操作中严守操作规程，以确保病人安全，防止医源性感染的发生。 无菌技术的概念和原则 （一）无菌技术的概念 1.无菌技术（aseptic technique） 是指在执行医疗、护理技术过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。 2.无菌物品(aseptic supply) 经过物理或化学方法灭菌后，未被污染的物品称无菌物品。 3.无菌区域(aseptic area) 经过灭菌处理而未被污染的区域，称无菌区域。 4.非无菌区(non-aseptic area) 未经灭菌或经灭菌后被污染的物品或区域，称非无菌物品或区域。 5.相对无菌区(relative aseptic area) 相对无菌区指无菌物品自无菌容器内一经取出，就认为是相对无菌，不可再放回。无菌区边缘向内3cm为相对无菌区。 6.污染物品 (infectant)污染物品指未经过灭菌处理，或灭菌处理后又被污染的物品。 （二）无菌技术操作原则 1.操作前准备 （1）操作环境应清洁、宽敞、定期消毒；物品布局合理；无菌操作前半小时应停止清扫工作、减少走动、避免尘土飞扬。 （2）工作人员应做好个人准备，戴好帽子、口罩，修剪指甲并洗手，必要时穿无菌衣、带无菌手套。 2.操作中保持无菌 （1）工作人员应面向无菌区，手臂应保持在腰部或操作台台面以上，不可跨越无菌区避免面对无菌区谈笑、咳嗽、打喷嚏。 （2）用无菌持物镊取用物品；无菌物品一经取出，即使未用，也不可放回无菌容器内；一套无菌物品仅供一位患者使用，避免交叉感染。 （3）无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，应予更换并重新灭菌。 3.无菌物品保管 （1）无菌物品必须与非无菌物品分开放置。 （2）无菌物品不可暴露于空气中，应存放于无菌包或无菌容器中，无菌包外须标明物品名称、灭菌日期，并按失效期先后顺序排放。 （3）定期检查无菌物品的灭菌日期及保存情况。无菌包在未被污染的情况下保存期一般为7天，过期或受潮应重新灭菌。

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无菌均质器，又称拍打式匀浆机，拍打式匀浆器。主要用于生物技术领域的组织分散、医药领域的样品准备、食品工业的酶处理以及在制药工业、化妆品工业、油漆工业和石油化工等方面。 　　该装置设有全开启式玻璃透明窗口门，易于清洗，玻璃透明窗口易于观察。采用大屏幕液晶显示，工作时间和均质速度智能可调，拍击器也可任意调整前后距离。可有效的分离实验样品表面和被包含在内的微生物均一样品，样品使用一次性无菌均质滤袋隔离操作，保证卫生和安全，不与仪器接触，无样品泄露而不需进行系统清洗，具有方便快速、结果准确、均质柔和、样品无污染、无损伤、不升温、不需灭菌处理，不需洗刷器皿的特点，重复性好的要求。本产品也适合肿瘤组织(如肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌)的匀浆，既可得到大量的单细胞。必要时，可通过延长均质时间，对组织细胞实现柔软的破碎。 　　BILON品牌无菌均质器是使从固体样品中提取细菌的过程变得非常简单，只需将样品和稀释液加入到无菌的样品袋中，然后将样品袋放入拍击式均质器中即可完成样品的处理。有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品，确保无菌袋中混合全部的样品。处理后的样品溶液可以直接进行取样和分析，没有样品的变化和交叉污染的危险。应用领域：食品微生物分析;动物组织、生物样品、化妆品的均质处理;鱼、肉、蔬菜、水果、饼干;药品的微生物分析等。 　　在使用我公司的无菌均质器时，有八个需要注意的地方，正确对待这些问题，可以使均质器更好的为您服务。 　　1) 电源插头必须插紧到位，出现松动可能影响电脑控制器造成死机，如出现死机现象，请关闭后侧电源开关，关机3分钟后重新启动。 　　2) 在锤击板工作时请不要随意打开均质器门，以免样品液溢出。应按“开/停”建，设备自动停止运行。当把门关上后，再按“开/停”建，设备自动完成余下工作。切勿颠倒操作。 　　3) 仪器长期不使用应切断电源，拨去插头。防止无菌均质器内部电子元器件老化。 　　4) 均质器门底部为防止均质袋意外破裂，便于清洗溢出物，底部设计为空的，可放置接水盘，所以仪器运转时请勿用手从底部伸入，以免纹伤手指。均质器工作时最好不要打开均质器门，造成不必要的损失。 　　5) 机器在运转前，请仔细查看均质箱内有无异物，以免工作时发生故障和损伤均质袋。 　　6) 硬块，骨状，冰状物等坚硬锐利的物质不宜使用，以免破坏均质袋。 　　7) 仪器和均质袋的存放都应避免阳光的直接照射，特别是均质袋应存放在无阳光或避免紫外线照射的地方，以免老化。 　　8) 量少时，需加快速度时，均质物纤维比较坚韧时，则可用后面旋钮调节拍击板与可视窗的间距，来达到更好的均质效果。注意调整的距离，避免发生空击等损伤无菌均质器的情况发生。 　　无菌均质器正确使用步骤为： 　　1、把需处理的试品放入无菌均质袋中。 　　2、打开均质器门(可全开启)，将无菌袋开口在关闭均质器门时夹住。 　　3、设定使用程序(如拍击速度、拍击时间等)，进行拍击均质工作。 　　4、实验完毕后，打开均质器门，取出样品。 　　无菌均质器的使用如果做到以上几点，可以极大延长其使用寿命和使用效果。让我们正确使用无菌均质器从现在开始!

最近在看无菌室的建设方案，发现现在最好的方式就是使用无菌隔离器。但其具体的使用没有接触过，是不是使用其后能真正的达到无菌操作呢？你认为它还有弊端吗？它的空间安放需要什么条件吗？

简介随着时代的进步和发展，人们和国家越来越关注食品的安全和质量安全，而食品问题的一再曝光不仅加快了食品立法的进程，还对食品生产企业提出了更高的要求，食品安全不仅要求在原材料和生产工艺上满足工艺规范要求，食品生产企业的车间环境空气还需按规定进行消毒，这是因为空气中的细菌会直接导致食品细菌超标，轻者影响食品的保质期，导致食品的运输、销售半径缩短，进而影响企业的整体利润；重者因产品细菌超标导致外销出口受阻，在国内被质检部门查处导致产品下架，产生极为严重的企业危机。[img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180831/edfa244973fe4bcbb161bc790c99262e.jpg[/img]食品行业传统消毒灭菌方式食品行业目前的现况现在食品厂消毒的方法主要有二大类：一类是物理消毒法，另一类是化学消毒法；1、物理消毒法 目前物理消毒的方式有三种：（1）机械除菌：通过擦、抹、通风、过滤等达到清除有害微生物和去污目的。（2）热力消毒：包括煮沸、流通蒸汽、巴氏低温消毒（62~65℃ ，30min）红外线消毒等。（3）、辐射消毒：辐射消毒又包括：紫外线消毒，目前紫外线杀菌多用253.7nm紫外线波长进行杀菌；电离辐射消毒，利用r射线电子辐射能穿透物品，杀死其中的微生物所进行的低温灭菌方法，常用有电子辐射和钴60辐射．2、化学消毒法：利用化学药剂进行消毒杀菌的方法。存在弊端：上述所讲二种消毒方式都有各种不完美的地方，总结起来主要有以下几点：就是消毒方法复杂，在技术掌握上有难度。消毒成本高，给工厂运营造成压力消毒不彻底，有死角，给食品安全留下隐患。消毒后有残留特别是化学消毒法，有很多有害物质。[img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180831/c75dd1b0dd954dc4af1bcce5f458c8e4.jpg[/img]目前国家对食品加工企业实行质量准入制度(QS)，对食品加工企业的生产环境提出了更高的要求，对生产厂所的空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]量提出了明确的要求，采用空气杀菌新技术解决食品行业的老难题已经是很多有远见的企业主的一直一致认识。面对国外对我们出口食品设置的品质门槛越来越高，采用传统消毒手段的食品加工企业越来越感到了威胁，采用全新的杀菌手段已经是他们的迫切之选，国内几十万家食品加工企业面临技术升级，这将是巨大的市场机遇。[img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180831/34a5e91ee4854e6a986960caa3793409.jpg[/img]空间消毒解决方案目前食品安全问题非常严峻，我们也经常在各种媒体上知道出现了很多次重大的食品安全问题，给人民的生活健康造成了严重的危害。有什么办法可以解决这些问题呢，有没有一种消毒方式是又快捷、又安全而且不会对食品造成二次污染呢？专业从事食品杀菌技术销售和研发的济南辰宇环保科技有限公司研制的“LS280气溶胶级喷雾器”顺利下线，这是国内第一个真正意义上的食品企业专用的纯生态食品级消毒设备。该机器对人体没有任何伤害，主要用于在有人工作的情况下同步动态杀菌消毒；近年来，LS280气溶胶级喷雾器也广泛用于一些大型食品企业的包装、冷却及灌装环节。[img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180831/53109b7ea40e46a08fa35d43e3674363.jpg[/img]LS280气溶胶级喷雾器LS-280型气溶胶级喷雾器外形新颖，操作简单，携带方便，雾化性能好，粒谱范围小(超低容量)。具有省药，药液挥发快，不湿透表面，腐蚀性小等特点。还具有杀菌效果不受湿度影响，效率高等特点。雾滴直径小（5——110微米，可调）、渗透力强、扩散快。配合奥克泰士消毒杀菌剂可以使药液经特制喷雾装置以10微米以下雾滴高速雾化，迅速弥漫到空气中，使食品车间的环境保持在相对的“无菌无尘”状态。能达到对人体无害的同时避免空气中细菌二次污染食品、防控食品菌落超标，克服食品生产过程中原有杀菌设备的局限性。由于雾滴细微，扩散强劲，消毒无死角，无残留。无须移动，单台机即可对100㎡在5秒内实现覆盖。如果人工移动，即可以对3000㎡面积在30分钟内有效覆盖。在3000㎡空间内对自然菌杀灭率达到95%，杀菌范围能到达每一处死角。 经实践表明：在无菌无尘环境下生产出的食品可防止食品霉变，微生物二次污染等问题。并且对人体没有任何伤害。使得经高温后基本无菌的食品半成品，流转至冷却、挑选、包装及灌装等环节时，有效降低或避免这些空气中含有的微生物附着在食品表面，再次污染食品。有关专家指出，LS280气溶胶级喷雾器空气净化技术的问世，摒弃了以往紫外线、臭氧、药物喷洒等传统技术杀菌不彻底或对人有危害等杀菌缺陷，其在高湿、高异味及高粉尘的食品生产车间持续开机使用而不损坏的优秀性能，使得LS280气溶胶级喷雾器广泛的应用于食品企业的、冷却及灌装环节，严格防控二次交叉感染问题，提高食品卫生质量。[img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180831/267dba6495ee4ffb96d77c701d6b0ce5.jpg[/img]LS280气溶胶级喷雾器产品特点1、采用电动机作为动力，震动轻、噪音低、无污染。2、根据用途不同可调节雾滴颗粒大小。3、雾滴直径小，5—110微米不等。4、喷雾距离远达10m，可实现无死角熏蒸式消毒。5、连续的风压进入药箱，药箱内化学药剂活性成分处于悬浮状态。6、采用优质、抗腐蚀耐用的工程塑料。7、配备普通照明电源使用方便。8、操作简单，启动迅速，运输方便。9、人性化化设计，可手提可牵拉，维护简单、方便。10、效率高、效果好11、消毒除菌、除尘、除臭、空气加湿多项功能综合作用12、省药、省水、省时、省力13、药液挥发快，不湿透表面，腐蚀性低14、杀菌效果不受湿度影响15、操作简单，使用方便

商业无菌：罐头食品经过适度的杀菌后，不含有致病性微生物，也不含有在通常温度下能在其中繁殖的非致病性微生物。这种状态叫做商业无菌. 商业无菌的检查一般是在根据产品PH范围进行相应的温度保温后，对保温中已经胀袋或胖听的产品可直接判读为不符合商业无菌要求；如果生产需要判断胖听的原因，则必须进行微生物鉴别培养！但对于保温后正常的产品，需在无菌状态下进行留样后，对感官与PH进行检查（PH变化一般以0.5为标准），通常下都要进行镜检，看是否存在细菌增殖现象，如果有细菌增殖，则必须将留样品进行细菌培养了。如果镜检也良好，则可直接判断商业无菌！

（1）无菌室灭菌。每次使用前开启紫外线灯照射30min以上，或在使用前30min，对内外室用5%石炭酸喷雾。（2）用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室换上已灭菌的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液将手浸洗2分钟。（3）将各种需用物品搬进内室清点、就位，用5%石炭酸在工作台面上方和操作员站位空间喷雾，返回外室，5～10min后再进内室工作。（4）接种操作前，用70%酒精棉球擦手；进行无菌操作时，动作要轻缓，尽量减少空气波动和地面扬尘。（5）工作中应注意安全。如遇棉塞着火，用手紧握或用湿布包裹熄灭，切勿用嘴吹，以免扩大燃烧；如遇有菌培养物洒落或打碎有菌容器时，应用浸润5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸润5%石炭酸的抹布擦拭台面或地面，用酒精棉球擦手后再继续操作。（6）工作结束，立即将台面收拾干净，将不应在无菌室存放的物品和废弃物全部拿出无菌室后，对无菌室用5%石炭酸喷雾，或开紫外线灯照射30min。

混悬液的无菌如何采用薄膜过滤法？

1.目的：本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 2.适用范围：生测实验室 3.责任者：QC主管生测员 4.定义：无 5.安全注意事项：严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 6.规程 6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。 6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 6.11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 7.参照：《药品卫生检验方法》、《中国药品检验标准操作规范》中(无菌检查法)章节、中华人民共和国医药行业标准YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》。 8.分发部门：质量管理部

无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。 3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用， 尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol之产生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。

1.目的：本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 2.适用范围：生测实验室 3.责任者：QC主管生测员 4.定义：无 5.安全注意事项：严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 6.规程 6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。 6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 6.11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 7.参照：《药品卫生检验方法》、《中国药品检验标准操作规范》中(无菌检查法)章节、中华人民共和国医药行业标准YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》。 8.分发部门：质量管理部