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生物分离
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生物分离相关的方案
复杂介质的微生物分离技术
单细胞研究是目前国际科研热点,由于细胞的异质性,传统的基于细胞群体水平的检测只能得到平均值,会掩盖单个细胞的独特性。在单个细胞水平阐述重要生命现象,能够拓展生命科学研究的精度和深度。过去十年来,单细胞技术主要被应用于动物领域,微生物单细胞的研究目前尚处于起步阶段。长光辰英自主研发的PRECI SCS分选仪可实现微生物单细胞鉴定、功能菌快速筛选、可视化单细胞分离。有助于获得有价值的微生物资源,且可以从单细胞水平研究微生物群落到功能的变化。
稀释法平板法分离土壤中的微生物
土壤是微生物栖居的大本营,各种各样的微生物都杂居在一起。当我们需要某种微生物时,即可通过提供适宜的营养条件,或添加只利于所需菌生长而抑制其它菌生长的抑制剂,有选择地将所需菌分离出来,这种技术即称为微生物的分离与纯化。稀释法常用于分离土壤、各种水域及基物表面的微生物。其原理是:先将土壤样品进行一系列倍比稀释,然后将几个适当浓度的稀释液均匀涂布于分离培养基表面。经培养后,土壤中的单个微生物细胞或孢子即可在培养基表面形成肉眼可见的菌落。再将所需菌落转入试管斜面,然后经平板划线再次取得单菌落后,即可得到所需菌种的纯菌株。因此,本方法的最大特点是可以对土壤样品进行活菌计数,同时,如果采用选择性培养基,可以分离到目的菌株。其全过程见图24-1。
上海同田生物技术:制备型高速逆流色谱分离中药中的生物碱
摘要: 高速逆流色谱分离生物碱是目前中药有效成分分离中的热点,本文用制备型高速逆流色谱,从黄连、黄柏、十大功劳和金果榄等四种中药中分离出了几种小檗碱类生物碱.分离的基本方法都是把中药材进行粉碎,然后用工业酒精浸泡,滤液浓缩后用浓盐酸酸化过滤,滤液用氢氧化钠碱化至pH=10后用氯仿萃取,氯仿萃取液浓缩所得浸膏作为分离的样品.分离的溶剂体系主要由四氯化碳、氯仿、甲醇和稀盐酸以不同的体积比组成,分离条件是流速为2mL/min,转速为800r/min,进样量为200mg.分离所得组分用标准品进行对照,确定结构.
北京华阳利民:毛细管电泳在微生物分离与检测中的应用
摘要毛细管电泳在分离与分析无机离子、有机小分子、生物大分子(如蛋白质、核酸)和微生物(细菌、病毒)等方面应用十分广泛。着重论述了毛细管电泳在微生物分离与检测方面的基本原理、早期探索、存在问题和最新进展。
微生物的分离纯化及稀释平板菌落计数
实验方法原理:一、自然条件下,微生物常以群落状态存在,这种群落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物,必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养,这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。二、稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。计数时,(1)首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液,尽量使样品中的微生物细胞分散开,使其成单个细胞存在,否则一个菌落就不只是代表一个细胞;(2)再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中,使其均匀分布于平板中的培养基内;(3)经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可计算出样品中的含菌数。此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数,故又称活菌计数。
超临界流体色谱在生物碱类分离分析中的应用进展
:超临界流体色谱(SFC)是一种高效的色谱技术,是液相色谱和气相色谱的重要补充,在天然产物的分析和分离制备方面均有应用。SFC既能够分离分析不适宜于气相色谱的弱极性物质,如脂肪酸、酰基甘油等,又能够用于生物碱、黄酮等极性天然产物的分析。SFC分离天然产物有分离性能好,效率高,回收率好,有机试剂使用量少等优点。本文主要检索了2009-2016年的PubMed、ScienceDirect、中国知网等数据库,查阅国内外文献46篇,其中国内文献13篇,国外文献33篇,总结了超临界流体色谱在天然产物分析、分离制备中的应用进展。
谷氨酰胺衍生物类样品的分离纯化
在本应用案例中,样品为极性很强的谷氨酰胺类衍生物,不易溶于正己烷、乙酸乙酯等常用正相流动相,而其在普通C18反相柱上几乎没有保留。针对样品的具体性质,三泰科技的应用工程师利用亲水性的SepaFlash® C18AQ柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine,成功对样品进行了纯化制备,获得了满足制备需求的目标产物,为极性很强的谷氨酰胺类样品的分离纯化提供了一种可行的方案。
上海通微多用加压梯度毛细管电色谱分离哒嗪酮衍生物
一种加压、梯度毛细管电色谱(pCEC)仪已经设计生产出来。这种多用仪器能够使用三种分离模式,加压梯度毛细管电色谱(pCEC)、微径高效液相色谱(μHPLC)和毛细管电泳(CE)。在pCEC模式中结合了电动力和压力推动样品经过毛细管填充柱,不需要改变流动相的组成就能进行好的选择性调节。这项技术也易于进行梯度洗脱,更利于对复杂的混合物进行分离。这项研究通过对一有机酸和中性哒嗪酮衍生物混合物的分离同μHPLC相比较及评估。实验用的pCEC使用一根熔融石英毛细管柱并填充3μm粒径的十八烷基键合相硅胶(ODS)。在适宜的条件下十种哒嗪酮衍生物都实现了基线分离。比较用μHPLC方法的分离结果,pCEC对于分离所有的中性物质和带电物质比μHPLC的分离更强。对于压力、泵的流速以及电压对分离的影响也做了研究。
毛细管电泳结合激光诱导荧光检测器分离检测生物胺
生物胺(BAs)是一类含有氮元素,且其分子量不高,并具有重要的生物细胞活性的一类有机化合物的总称。微量的生物胺是生命体内正常的活性成分,在生物细胞中具有重要的生理功能,但生物胺在人体内积蓄到较高的含量时就会产生毒性。因此建立一种检测生物胺的方法,对生物体的身体健康有着很高的实用价值。由于生物胺本身没有或者仅有较弱的荧光,通常采用衍生试剂进行衍生, 使生成具有强荧光信号的衍生物,达到高灵敏检测的目的。因此,我们建立用毛细管电泳仪与激光诱导荧光检测器联用,基于异硫氰酸荧光素(FITC)衍生氨基酸,并对其进行分离与检测的方法。
上海通微加压梯度毛细管电色谱分离18种氨基酸衍生物
本实验为用加压梯度毛细管电色谱来分离18种氨基酸衍生物。用反相C18毛细管柱(粒径3μm,130mm×75μmI.D.),醋酸盐缓冲液(50mmol/L NaAc, pH 6.4),离子对试剂(1% N,N-二甲基甲酰胺)分离一标准溶液中的衍生化氨基酸(2μg/ml),UV-Vis检测器的波长为360nm,毛细管柱的压力保持在大约70Pa, 并在柱的出口端加3kV的正电压。研究电压对于氨基酸的洗脱次序和分离度的影响,发现当电压超过3kV时候C18对氨基酸产生吸附作用。对盐浓度,进样量,和柱长度对于氨基酸分离的影响都进行了测定。氨基酸样品在CEC中分离,每个氨基酸迁移时间的RSD小于2.5%
利妥昔单抗聚集体和片段的高分离度 SEC 分离与定量分析——Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和 AdvanceBio SEC 300Å , 2.7 μm 色谱柱
单克隆抗体聚集可通过产品和环境因素等多种机制产生。体积排阻色谱(SEC) 是单克隆抗体型治疗药物聚集体和片段含量测定和定量分析的标准方法。本应用简报重点展示强制应激研究中获得的利妥昔单抗生物仿制药和创新药物的完整态、聚集体及片段的高分离度分离与定量分析。其中采用Agilent 1260 Infinity 四元生物惰性液相色谱和Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱进行分离与定量分析,并使用分子量标准品校准色谱柱。AdvanceBio SEC 色谱柱的高灵敏度、高分离度分离适用于监测聚集体/降解物,也是亟需高分离度与高灵敏度的应用的理想选择。
使用快速高分离度体积排阻色谱柱分析生物治疗药物中的聚集体
由于聚集体会对药物安全性产生显著影响并且可能引发抗原反应,因此蛋白质聚集是生物治疗药物蛋白质的关键质量属性。聚集体还可能会降低生物治疗药物的药效并大幅降低生产工艺的经济效益。蛋白质通常在暴露于压力条件下时发生聚集,例如pH、温度或浓度的变化,因此不同生产阶段均有可能发生聚集。目前人们已经确定选择体积排阻色谱(SEC) 方法进行聚集体的定量分析。在生物治疗药物开发过程中(例如在克隆选择过程中或在通过严格的“实验设计”法优化发酵条件时)监视聚集体的形成情况,这些过程可能产生大量需要进行体积排阻分析的样品。SEC 常用条件的分析时间往往需要20 min 甚至更长,这极大限制了对大量样品的分析能力。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱具有高度优化的粒径和孔径设计,可实现更快速的分离,从而显著减少分析瓶颈问题。本应用简报介绍的技术可提高样品通量而不影响分析的准确性。
使用快速高分离度体积排阻色谱柱分析生物治疗药物中的聚集体
由于聚集体会对药物安全性产生显著影响并且可能引发抗原反应,因此蛋白质聚集是生物治疗药物蛋白质的关键质量属性 [1]。聚集体还可能会降低生物治疗药物的药效并大幅降低生产工艺的经济效益。蛋白质通常在暴露于压力条件下时发生聚集,例如 pH、温度或浓度的变化,因此不同生产阶段均有可能发生聚集。目前人们已经确定选择体积排阻色谱 (SEC) 方法进行聚集体的定量分析。在生物治疗药物开发过程中(例如在克隆选择过程中或在通过严格的“实验设计”法优化发酵条件时)监视聚集体的形成情况,这些过程可能产生大量需要进行体积排阻分析的样品。SEC 常用条件的分析时间往往需要 20 min 甚至更长,这极大限制了对大量样品的分析能力。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱具有高度优化的粒径和孔径设计,可实现更快速的分离,从而显著减少分析瓶颈问题。本应用简报介绍的技术可提高样品通量而不影响分析的准确性。
Agilent InfinityLab Poroshell 120 创新技术应对氨基酸及其衍生物的手性分离
本文采用Poroshell 120 手性色谱柱分析氨基酸及其衍生物,Poroshell 120 手性色谱柱是首款采用表面多孔颗粒填料与创新性手性固定相结合的品,具有以下优势:(1)提供更高的性能与更快的速度,效果优于全多孔手性固定相;(2)具有出色的耐用性和可靠性,采用成熟的 Agilent InfinityLab Poroshell 120 颗粒填料技术;(3)多种尺寸可选,满足任何应用需求:2.1 和 4.6 mm 内径, 可与 50、100 和 150 mm 的长度搭配组合;(4)分析时间短、峰形优异且分离度更好;(5)采用高效的手性分离,显著提高分析通量和实验室效率。
使用Waters ACQUITY UPLC PLUS系列提高生物药物分离的稳定性
由于能够有效治疗各种疾病,生物治疗药物已经成为一个快速增长的市场,而生物制药分析需要经济有效并能高效提供稳定结果的分析仪器。要解决成本、效率和稳定性挑战,一种有效的方法是在整个产品生命周期中运用创新技术。作为生物药物开发和生产过程不可缺少的组成部分,液相色谱(LC)平台有望通过技术现代化成为制药质控体系的一部分,用于提高整个制药工艺流程的生产效率。为此,超高效液相色谱(UPLC)仪器已被应用于生物药物开发和生产的各个环节,大幅提高了分析性能、生产效率并降低了成本。随着制药公司为了加速产品上市而不断对LC系统提出更高要求,稳定性更高、停机时间更短的仪器将更具优势。ACQUITY UPLC PLUS系列专为改善UPLC技术的易操作性而设计,同时可保持与传统ACQUITY UPLC平台(如H-Class和I-Class系统)相当的分析性能。如图1所示,沃特世在现有ACQUITY UPLC系统系列产品的基础之上,对溶剂管理器和样品管理器进行了多项改进。脱气机硬件和固件的改进可以提高分离的重现性,同时最大程度延长系统正常运行时间,而采用全新设计的溶剂管理器则能够改善热敏样品的完整性。此外,进样针外表面经过专门处理,扩展了针的兼容性,使其不仅能与更多种样品瓶盖和孔板盖配合使用,还显著改善了残留性能。这些系统改进是专门设计的,目的是让ACQUITY UPLC PLUS系列保持与它们将要替代的ACQUITY UPLC系列相同的系统延迟体积和扩散特性,从而确保两个平台具有相同的分离性能。综上所述,ACQUITY UPLC PLUS系列产品极大改善了用户体验,能够最大限度延长系统正常运行时间,让分析人员安心无忧,同时确保运行已有方法时可获得与原系统相当的性能。
浓缩如何高效分离微生物代谢产物中的新型抗生物
次级代谢产物是指微生物生长到一定阶段产生的化学物质,它不是微生物生长和繁殖必需的物质,比如抗生素、毒素、激素或色素等
SepaBean machine T四元溶剂系统 应用于冠醚类衍生物样品的分离纯化
在本应用案例中,样品为合成反应获得的苯并冠醚衍生物,该样品体系复杂,包含多种不同极性的组分,利用常规二元溶剂梯度进行纯化时很难获得良好的分离度。针对样品的具体性质,三泰科技的应用工程师利用四元溶剂系统SepaBean machine T配合SepaFlash 正相硅胶柱,通过不同极性溶剂的在线切换,成功对样品进行了制备纯化,获得了满足制备需求的目标产物,为此类组分极性差异很大的复杂样品体系的分离纯化提供了一种可行的方案。
单克隆抗体的 QA QC:采用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱和 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统进行高分离度肽图分析 (PDF)
本应用简报介绍了采用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统进行单克隆抗体肽图分析的应用解决方案,并证明了其可靠性。该仪器具有生物惰性和耐腐蚀性,再结合简单且重现性好的方法,使得该解决方案尤其适用于生物制药行业中单克隆抗体的QA/QC 分析。为了获得更高的分离度和检测灵敏度,我们将方法转移到 Agilent 1290Infinity 液相色谱系统上,并使用了亚 2 μm 粒径色谱柱。1290 Infinity 液相色谱系统卓越的性能范围(压力与流速)克服了由于使用较小粒径填料和较长色谱柱导致背压上升的挑战,使该系统成为高分离度和高灵敏度分析应用的理想选择。
上海同田生物技术:荷叶提取物的分离和纯化
摘要:用三种方法对荷叶提取物进行分离纯化,结合薄层层析(TLC)和颜色反应,对各自分离组分跟随鉴定。结果表明:高速逆流色谱(HSCCC)分离效果好,Sephadex LH-20柱层析分离效果次之,硅胶柱层析分离效果最差;荷叶提取物经高速逆流色谱分离纯化,可以得到两种黄酮醇类单体。
使用创新生物兼容性UHPLC系统评估单克隆抗体和肽的生物分离方法并进行方法转换
本文将介绍新上市的生物兼容性UHPLC平台如何为改进产品生命周期管理提供支持,展示该系统在这方面的优势。
蛋白的分离纯化--选择分离材料
以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的,如电泳,超速离心,超滤等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性,防止酸、硷、高温,剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分为以下四个阶段:选择材料和预处理,细胞的破碎及细胞器的分离,提取和纯化,浓细、干燥和保存。
上海同田生物技术:高速逆流色谱法分离纯化环抱菌素
摘要:应用高速逆流色谱法对环抱菌素的分离纯化进行研究,选择石油醚-丙酮-水(3:3:2,V/V)为两相体系,计算环抱菌A,B,C,D在两相体系中的分配系数,以上相为固相,下相为流动相进行高速逆流色谱分离纯化,高效液相色谱法测定单组分纯度。实验结果表明一次高速逆流色谱即可将环抱菌素粗品分离纯化,得到纯度98.5%以上的环抱菌素A,B,C,D单组分,收率达85%以上。
从待分离的植物、动物、微生物中提取单体化合物并进行活性筛选,代谢分析
化合物活性筛选是创新药物研究的起点和具有决定意义的步骤。离开筛选,就无从发现具有特定生物活性的新型化学物质,新药的研究开发就将成为无源之水,上海科哲推出的新药筛选相关系列产品将完善我国药物创新体系,对推动全国的新药研究发展具有重要而深远的意义。
上海同田生物技术:高速逆流色谱法分离制备丹酚酸B
摘 要: 采用高速逆流色谱法分离纯化丹参水溶性成分丹酚酸类物质,制备丹酚酸B化学对照品。分离采用的溶剂系统为正己烷2乙酸乙酯2水2甲醇(1.5:5:5:1.5),上相做固定相,下相做流动相,流速为1.7mL/min,仪器转速850rpm,进样量80mg,纯度用HPLC 方法测定。结果表明:一次分离可制备63.4mg丹酚酸B,其纯度为98.6%。该方法操作简单,可作为高纯度丹酚酸B化学对照品的制备分离方法。
生物样本库 整体解决方案
面对日益增长的需求,生物样本库能够及时提供优质生物样本资源,为科技人员进行临床、药物和基础研究提供基础。从而增加我们对复杂疾病的了解。珀金埃尔默结合多项专利技术产品,为生物样本库工作流程提供系统解决方案,进而使生物样本库满足不同需求。珀金埃尔默生物样本库解决方案涵盖了全血样品的自动分离、核酸提取、核酸质控和分析等环节,同时可以将模块化的工作流程进行自动化整合,具有提取的核酸产量高、质量好、样品通量灵活、样品处理过程可追溯、仪器设备可升级整合等优点。珀金埃尔默致力于生物样本库,为研究工作提供全血样品分离、高质量的核酸提取、质量控制和分析方案,模块化及可扩展的自动化,独特的资源整合,通过达到生物样本库的灵活性来满足不同需求。
上海同田生物技术:高速逆流色谱分离纯化木蝴蝶中黄芩素和白杨黄素
摘 要: 建立了高速逆流色谱分离纯化木蝴蝶黄芩素和白杨黄素的方法。两相溶剂系统为石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水,固定相为5∶5∶5∶5(V/V)体系的上相,以5∶5∶5∶5(V/V)和5∶5∶7∶3(V/V)体系的下相为流动相进行梯度洗脱。从300mg木蝴蝶粗提物中一步分离纯化得到2515 mg黄芩素和3616 mg白杨黄素。经高效液相色谱分析,纯度分别为9912%和100%。其化学结构由1H2NMR 和13C2NMR鉴定。
微生物样品检测全流程智能化解决方案
样品中微生物的分离,培养,鉴定和保藏用途:食品、药品、化妆品、农产品中微生物检测、环境中微生物检测、临床样品中微生物检测。
IgG4单抗的电荷异质体分离在BioCoreWCX上的分离
BioCore WCX色谱柱创新性的微球技术保证了色谱柱的高柱效、耐压性、耐热性、化学稳定性以及有机溶剂的兼容性。先进的键合技术有效地阻绝生物大分子与疏水性基球的接触、最大限度地降低了生物大分子与固定相间不利的相互作用、确保单抗电荷异质体分离所需的选择性。对IgG4单抗中的电荷异质体具有优良的分离度,并在该缓冲体系中都显示出很好的选择性。
病原微生物检测方案
宏基因组学(Metagenomics),也称元基因组学,即“绕过对微生物个体进行分离培养,应用基因组学研究策略对自然环境/临床样本中的微生物遗传组成和群落功能进行研究”的学科。
从土壤中分离放线菌及霉菌方法
1掌握放线菌的生长特性,微生物的培养方法。 2掌握微生物实验的基本生物技术,主要包括无菌操作技术,纯种分离技术,纯种培养技术,以及抗生素检测等。 3掌握合成培养基,选择培养基的制备方法。 4学习对微生物实验的中出现问题的分析,解决方法
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