去甲基化

看一篇关于一种除草剂（灭草松）的农残检测方法，其中前处理说到要用重氮甲烷进行甲基化以后才能进GC—ECD检测，想请教大家的是甲基化的作用是什么？为什么一定要甲基化这个步骤？

各位前辈,请问什么是甲基化酒精?怎样才能制备?国内有哪家厂家在生产?甲基化酒精是不是也称为甲乙醚?一下子问这么多问题是因为真的很急,非常感谢大家!!

我最近想做两种带羧基的化合物GC/MS检测，需要进行甲基化衍生。但我不想使用三氟化硼甲醇试剂，我查了一下，使用三氟甲基磺酸甲酯、N,N-二甲基二甲缩醛、硫酸二甲酯等也可以进行甲基化衍生，有没有高人推荐一下，使用哪个比较好啊？

[size=20px]DNA[/size][size=20px]甲基化[/size][size=20px]及其影响[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化是指在[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基转移酶（[/size][size=16px]DNA methyltransferase[/size][size=16px]，[/size][size=16px]DNMT[/size][size=16px]）的催化作用下，[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]双螺旋的胞嘧啶核苷酸嘧啶环的第[/size][size=16px]5[/size][size=16px]位碳原子甲基化，并与其[/size][size=16px]3[/size][font='等线'][size=16px]'[/size][/font][size=16px]端鸟嘌呤形成甲基化的胞嘧啶[/size][size=16px]-[/size][size=16px]鸟嘌呤二核苷酸[/size][size=16px](Cytosine -phosphoric acid-Guanine, CpG)[/size][size=16px]。[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]低甲基[/size][size=16px]化增加[/size][size=16px]染色体不稳定性[/size][size=16px],[/size][size=16px]启动子[/size][size=16px]CpG[/size][size=16px]岛局部高甲基化可使其下游基因[/size][size=16px]([/size][size=16px]包括抑癌基因[/size][size=16px])[/size][size=16px]失活从而发挥致癌作用。与[/size][size=16px]TCGA (The Cancer Genome Atlas)[/size][size=16px]数据库中其他癌种相比，[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]的[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]启动子甲基化水平是最高的[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][1][/size][/sup][/font][size=16px]，它与[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]神经内分泌特性关系密切，影响[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]发生发展。[/size][size=20px]1.1 DNA[/size][size=20px]甲基化定义[/size][size=20px]SCLC[/size][size=20px]不同亚型且影响[/size][size=20px]SCLC[/size][size=20px]神经内分泌特性[/size][size=16px]Poirier[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][1][/size][/sup][/font][size=16px]发现甲基化与基因表达相关并能区分原发性[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]亚型。[/size][size=16px]M1[/size][size=16px]、[/size][size=16px]M2[/size][size=16px]和[/size][size=16px]SQ-P[/size][size=16px]是[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]三个亚型，它们具有不同的甲基化模式和基因表达，[/size][size=16px]SQ-P[/size][size=16px]甲基化频率明显低于[/size][size=16px]M1[/size][size=16px]和[/size][size=16px]M2[/size][size=16px]。但这种分型与[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]临床预后无关。随后，[/size][size=16px]Saito Yuichi [/size][font='times new roman'][sup][size=16px][2][/size][/sup][/font][size=16px]等发现了甲基化模式和预后均不同的两种[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]类型[/size][size=16px]:[/size][size=16px]一类是[/size][size=16px]CpG[/size][size=16px]岛甲基化表型[/size][size=16px](CpG island methylator phenotype, CIMP)[/size][size=16px]整体高而预后差的聚类[/size][size=16px]1 (SCLC CIMP)[/size][size=16px]，另一类是[/size][size=16px]CIMP[/size][size=16px]低而预后较好的聚类[/size][size=16px]2 (non-CIMP)[/size][size=16px]。他们证明了甲基化水平的升高与预后不良有关，[/size][size=16px]SCLC CIMP[/size][size=16px]可能是手术治疗的预后指标。因此，我们可以利用[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化及基因表达分析定义[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]亚型并进一步预测[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]临床预后。[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]起源于肺神经内分泌细胞。[/size][size=16px]Kalari[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][3][/size][/sup][/font][size=16px]发现[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]的[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化图谱提示神经内分泌细胞存在分化缺陷，甲基化基因作为转录因子在神经元分化过程中显著富集。他们推测[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]的起源可能有两种机制：一是启动子甲基化导致细胞分化过程中关键转录因子的缺失；二是[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化导致相应结合位点区域的功能失活使起源细胞向恶性状态发展。二者共同促进神经内分泌细胞分化缺陷，增强肿瘤干细胞向其转化的能力。由此可见，[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基[/size][size=16px]化通过[/size][size=16px]影响[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]神经内分泌特性来影响[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]发生发展。[/size][size=20px]1[/size][size=20px].2 [/size][size=20px]DNA[/size][size=20px]甲基化可筛选早期[/size][size=20px]SCLC[/size][size=16px]肺癌的发展是一个多步骤的过程，其中包括[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]状态的改变。肿瘤相关基因启动子高甲基化是一种常见的改变，常与抑癌基因失活相关，由于其稳定性好，易于在组织和体液中检测，可作为癌症检测和监测的候选生物标志物[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][4][/size][/sup][/font][size=16px]。有研究者利用[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基[/size][size=16px]化板通过[/size][size=16px]血液活检的方式对肺癌男性患者进行早期筛选，发现[/size][size=16px] RAS[/size][size=16px]相关区域家族[/size][size=16px]1A[/size][size=16px]基因[/size][size=16px](Ras association domain family 1A gene, RASSF1A)[/size][size=16px]对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]的敏感性为[/size][size=16px]75%[/size][size=16px]，特异性为[/size][size=16px]88%[/size][size=16px]。基于此，异常的[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]启动子甲基[/size][size=16px]化可能[/size][size=16px]是一个有价值的早期[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]微创检测方法，可以提高患者的依从性、降低医疗成本并有助于癌症分型和预后[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][5][/size][/sup][/font][size=16px]。但这项研究只针对男性，研究成果是否可以应用于所有人群仍需进一步验证[/size][size=20px]1.3 [/size][size=20px]DNA[/size][size=20px]甲基化与[/size][size=20px]SCLC[/size][size=20px]耐药相关[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]赖氨酸[/size][size=16px]27[/size][size=16px]三[/size][size=16px]甲基化[/size][size=16px](H3K27me3) [/size][size=16px]与多药耐药有关，它由[/size][size=16px]ZEST[/size][size=16px]同源增强子[/size][size=16px]2(EZH2)[/size][size=16px]催化，二者在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]组织和多药耐药的[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞中的表达水平明显升高。长链非编码[/size][size=16px]RNA (lncRNA) HOX[/size][size=16px]转录本反义[/size][size=16px]RNA (HOTAIR)[/size][size=16px]可以预测肿瘤进展。[/size][size=16px]HOTAIR[/size][size=16px]通过下调耐药[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]中[/size][size=16px]DNMT1[/size][size=16px]和[/size][size=16px]DNMT3b[/size][size=16px]的表达来调节[/size][size=16px]HOXA1[/size][size=16px]的[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化。研究表明，在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系中，敲除[/size][size=16px]HOTAIR[/size][size=16px]基因可显著降低[/size][size=16px]H3K27me3[/size][size=16px]和[/size][size=16px]EZH2[/size][size=16px]水平，且二者通过[/size][size=16px]HOTAIR[/size][size=16px]来影响[/size][size=16px]HOXA1 DNA[/size][size=16px]甲基化，[/size][size=16px]H3K27me3[/size][size=16px]很可能是[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]化疗耐药的潜在治疗靶点[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][6][/size][/sup][/font][size=16px]。位于人端粒酶逆转录酶[/size][size=16px](HTERT)[/size][size=16px]启动子区的表观遗传学改变是癌症中最常见的非编码基因组修饰之一。[/size][size=16px]HTERT[/size][size=16px]上调可促进[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系的增殖和迁移，其启动子区经辐射诱导后的高度甲基化可上调其下游效应因子[/size][size=16px]EZH2[/size][size=16px]的表达从而使[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]具有放射抗性[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][7][/size][/sup][/font][size=16px]。胞质三核苷酸修复外切酶[/size][size=16px]1(TREX1)[/size][size=16px]是一种高效的[/size][size=16px]3[/size][size=16px]’[/size][size=16px]→[/size][size=16px] 5[/size][size=16px]’[/size][size=16px]胞质外切酶，能迅速降解双链和单链[/size][size=16px]DNA([/size][size=16px]双链和单链[/size][size=16px]DNA)[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][8][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系在[/size][size=16px]CCLE[/size][size=16px]中具有最高的[/size][size=16px]TREX1[/size][size=16px]甲基化和最低的[/size][size=16px]TREX1[/size][size=16px]表达，低[/size][size=16px]TREX1[/size][size=16px]可增加[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]对[/size][size=16px]Aurora[/size][size=16px]激酶抑制剂治疗的敏感性，可作为[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]新的分子标记或靶点[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][9][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]Y[/size][size=16px]样染色体基因（[/size][size=16px]Chromo-domain Y like[/size][size=16px]，[/size][size=16px]CDYL[/size][size=16px]）是一种新型表观遗传因子，调控神经系统的神经元发育。[/size][size=16px]CDYL[/size][size=16px]通过调控[/size][size=16px]CDKN1C[/size][size=16px]启动子[/size][size=16px]H3K27[/size][size=16px]三[/size][size=16px]甲基化来促进[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]化疗耐药，且其表达水平与患者临床分期相关，可用于预测[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]患者的疾病进展和预后，为[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]临床诊治提供了一个新的分子靶点[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][10][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]综上，[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]中水平较高，甲基化分析可以区分[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]亚型，阐明[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]发病及耐药机制，发现癌症的特异性生物标志物，有助于[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]早期诊断及判断预后。[/size]

[size=20px]1 DNA[/size][size=20px]甲基化[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化是指在[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基转移酶（[/size][size=16px]DNA methyltransferase[/size][size=16px]，[/size][size=16px]DNMT[/size][size=16px]）的催化作用下，[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]双螺旋的胞嘧啶核苷酸嘧啶环的第[/size][size=16px]5[/size][size=16px]位碳原子甲基化，并与其[/size][size=16px]3[/size][font='等线'][size=16px]'[/size][/font][size=16px]端鸟嘌呤形成甲基化的胞嘧啶[/size][size=16px]-[/size][size=16px]鸟嘌呤二核苷酸[/size][size=16px](Cytosine -phosphoric acid-Guanine, CpG)[/size][size=16px]。[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]低甲基[/size][size=16px]化增加[/size][size=16px]染色体不稳定性[/size][size=16px],[/size][size=16px]启动子[/size][size=16px]CpG[/size][size=16px]岛局部高甲基化可使其下游基因[/size][size=16px]([/size][size=16px]包括抑癌基因[/size][size=16px])[/size][size=16px]失活从而发挥致癌作用。与[/size][size=16px]TCGA (The Cancer Genome Atlas)[/size][size=16px]数据库中其他癌种相比，[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]的[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]启动子甲基化水平是最高的[/size][font='times new roman'][size=16px][1][/size][/font][size=16px]，它与[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]神经内分泌特性关系密切，影响[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]发生发展。[/size][size=20px]1.1 DNA[/size][size=20px]甲基化定义[/size][size=20px]SCLC[/size][size=20px]不同亚型且影响[/size][size=20px]SCLC[/size][size=20px]神经内分泌特性[/size][size=16px]Poirier[/size][size=16px]等[/size][font='times new 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CIMP[/size][size=16px]可能是手术治疗的预后指标。因此，我们可以利用[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化及基因表达分析定义[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]亚型并进一步预测[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]临床预后。[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]起源于肺神经内分泌细胞。[/size][size=16px]Kalari[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][size=16px][3][/size][/font][size=16px]发现[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]的[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化图谱提示神经内分泌细胞存在分化缺陷，甲基化基因作为转录因子在神经元分化过程中显著富集。他们推测[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]的起源可能有两种机制：一是启动子甲基化导致细胞分化过程中关键转录因子的缺失；二是[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化导致相应结合位点区域的功能失活使起源细胞向恶性状态发展。二者共同促进神经内分泌细胞分化缺陷，增强肿瘤干细胞向其转化的能力。由此可见，[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基[/size][size=16px]化通过[/size][size=16px]影响[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]神经内分泌特性来影响[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]发生发展。[/size][size=20px]1[/size][size=20px].2 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roman'][size=16px][5][/size][/font][size=16px]。但这项研究只针对男性，研究成果是否可以应用于所有人群仍需进一步验证[/size][size=20px]1.3 [/size][size=20px]DNA[/size][size=20px]甲基化与[/size][size=20px]SCLC[/size][size=20px]耐药相关[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]赖氨酸[/size][size=16px]27[/size][size=16px]三[/size][size=16px]甲基化[/size][size=16px](H3K27me3) [/size][size=16px]与多药耐药有关，它由[/size][size=16px]ZEST[/size][size=16px]同源增强子[/size][size=16px]2(EZH2)[/size][size=16px]催化，二者在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]组织和多药耐药的[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞中的表达水平明显升高。长链非编码[/size][size=16px]RNA (lncRNA) HOX[/size][size=16px]转录本反义[/size][size=16px]RNA 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roman'][size=16px][6][/size][/font][size=16px]。位于人端粒酶逆转录酶[/size][size=16px](HTERT)[/size][size=16px]启动子区的表观遗传学改变是癌症中最常见的非编码基因组修饰之一。[/size][size=16px]HTERT[/size][size=16px]上调可促进[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系的增殖和迁移，其启动子区经辐射诱导后的高度甲基化可上调其下游效应因子[/size][size=16px]EZH2[/size][size=16px]的表达从而使[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]具有放射抗性[/size][font='times new roman'][size=16px][7][/size][/font][size=16px]。胞质三核苷酸修复外切酶[/size][size=16px]1(TREX1)[/size][size=16px]是一种高效的[/size][size=16px]3[/size][size=16px]’[/size][size=16px]→[/size][size=16px] 5[/size][size=16px]’[/size][size=16px]胞质外切酶，能迅速降解双链和单链[/size][size=16px]DNA([/size][size=16px]双链和单链[/size][size=16px]DNA)[/size][font='times new roman'][size=16px][8][/size][/font][size=16px]。[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系在[/size][size=16px]CCLE[/size][size=16px]中具有最高的[/size][size=16px]TREX1[/size][size=16px]甲基化和最低的[/size][size=16px]TREX1[/size][size=16px]表达，低[/size][size=16px]TREX1[/size][size=16px]可增加[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]对[/size][size=16px]Aurora[/size][size=16px]激酶抑制剂治疗的敏感性，可作为[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]新的分子标记或靶点[/size][font='times new roman'][size=16px][9][/size][/font][size=16px]。[/size][size=16px]Y[/size][size=16px]样染色体基因（[/size][size=16px]Chromo-domain Y like[/size][size=16px]，[/size][size=16px]CDYL[/size][size=16px]）是一种新型表观遗传因子，调控神经系统的神经元发育。[/size][size=16px]CDYL[/size][size=16px]通过调控[/size][size=16px]CDKN1C[/size][size=16px]启动子[/size][size=16px]H3K27[/size][size=16px]三[/size][size=16px]甲基化来促进[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]化疗耐药，且其表达水平与患者临床分期相关，可用于预测[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]患者的疾病进展和预后，为[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]临床诊治提供了一个新的分子靶点[/size][font='times new roman'][size=16px][10][/size][/font][size=16px]。[/size][size=16px]综上，[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]甲基化在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]中水平较高，甲基化分析可以区分[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]亚型，阐明[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]发病及耐药机制，发现癌症的特异性生物标志物，有助于[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]早期诊断及判断预后。[/size]

请问各位老师葡萄糖甲苷2位甲基化和3位甲基化在弱极性[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱中的出峰顺序，最近在DB-17MS柱分析葡萄糖甲苷的甲基化样品时，有两个峰可以确定是葡萄糖甲苷2位甲基化和3位甲基化，但是由于质谱图很类似，碎片离子相同，只是个别丰度不同；所以无法归属。不知各位老师有没有做过这方面的研究，谢谢赐教。

用什么方法区分甲基化发生在哪个氮上？

请问各位老师葡萄糖甲苷2位甲基化和3位甲基化在弱极性[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱中的出峰顺序，最近在DB-17MS柱分析葡萄糖甲苷的甲基化样品时，有两个峰可以确定是葡萄糖甲苷2位甲基化和3位甲基化，但是由于质谱图很类似，碎片离子相同，只是个别丰度不同；所以无法归属。不知各位老师有没有做过这方面的研究，谢谢赐教。

请问，脂类的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]测定一定要甲基化吗？

大家好，我们在进行蛋白质修饰鉴定过程中，发现有异亮氨酸甲基化的修饰（采用二级CID碎裂模式），分析软件（BioPharmaView)中给定的修饰中也含有异亮氨酸，为了确定甲基化修饰的机理，我们推测，甲基化修饰在了异亮氨酸形成的肽键N上，对此我们使用etHCD碎裂模式进行二级碎裂，结果显示，甲基化并非修饰在肽键N上，我们查询文献并没有相关的报道，想问下各位大神，有知道蛋白中异亮氨酸发生甲基化是发生在哪个位置么？如果有文献支持就更好了。

六甲基二硅胺烷和三甲基氯硅烷作为硅甲基化试剂与醇的反应机理！ 另外，六甲基二硅胺烷可以与醇反应，为什么还要加入三甲基氯硅烷？三甲基氯硅烷不是也可以与醇反应吗？请指教！

要做气相色谱，但是甲基化不清楚具体怎么做，你当时怎么解决的，请赐教，谢谢！

我准备分离小RNA，然后用核酸酶将其切成单个核苷酸，ESI质谱，首先先来检测是否有甲基化修饰的核酸，不知道这样行不行。如果行的话，对样品的纯度浓度有什么要求，希望各位有经验的大侠多多指点。先谢过了

我做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]要甲基化，用重氮甲烷，ECD检测器 ，但是重氮甲烷太不稳定，毒性又大，请大家给点建议吧，谢啦！

我现在想探讨鱼类胚胎发育和总基因组DNA甲基化之间的关系，因此想用高效液相色谱测定总基因组DNA甲基化水平，即总基因组５甲基孢嘧啶含量，急需这方面的文献　请大虾们帮一下[color=red]楼主，在本版面发帖前请您仔细的看看置顶中的规定！！！[/color]

高效液相色谱检测DNA总甲基化水平哪位做过高效液相色谱检测DNA总甲基化水平，想请教一下，做这个要求DNA纯度很高么？有了解的帮帮忙，谢了！

[color=#444444]我自己接手一个新的实验项目，是用高效液相色谱质谱联用技术测人群的全基因组甲基化水平，想问问有没有哪个大神有做过这个类似的实验么，好多问题都不懂。DNA是之前用试剂盒提取了的，用了蛋白酶K把蛋白质消解了，这种情况下进一步水解DNA还需不需要进一步超滤去蛋白呢（哪个超滤好像好贵，成本好高）；测的时候是不是也需要同时30 毫摩尔每升、pH为6.8的乙酸钠，30毫摩尔每升、pH 为7.8的乙酸钠溶液，具体怎么配啊，能用乙酸调么？谢谢[/color]

哪位同仁曾用高效液相色谱测过 基因组总水平甲基化程度 交流交流

请问脂肪酸用BF3-甲醇甲基化之后，加进去的那个甲基C在计算同位素比例时，该如何反算C同位素比例呢?

DNA甲基化是表观遗传学的重要研究内容之一，它可以在转录水平抑制基因的表达。具体的过程是在胞嘧啶－鸟嘧啶（CpG二核苷酸）的5位碳原子上添加了一个额外的甲基团，形成5－甲基胞嘧啶。CpG二核苷酸密度较高的区域在人体基因组中呈非随机分布于，优先分布于基因的启动子区，并被称为CpG岛 。对于癌症，其基因组的甲基化分布发生变化 。正常状态下应甲基化的区域未甲基化，而症状状态下非甲基化区域出现甲基化，例如CpG岛相关启动子呈超甲基化。这可导致受累基因座的染色质结构发生变化，致使基因沉默。启动子超甲基化可导致有关肿瘤演进的重要基因再次沉默，例如那些有关DNA修复、细胞周期调控和凋亡的基因。因此，可以认为DNA甲基化与肿瘤研究密切相关。肿瘤中某些基因的DNA甲基化状态的变化通过其生物学特征反映出来。因此，评估DNA甲基化的快速高通量方法对研究者和临床医生在诊断、治疗和预后都非常有实用价值 。当前对于DNA甲基化研究，普遍使用的方法有甲基化特异性PCR，变性高效液相色谱法（DHPLC），联合亚硫酸氢钠限制性内切酶分析法（COBRA）等，这些方法各有优势，但是均存在诸如实验设计复杂，易产生假阴性或假阳性等问题，提示科学家寻找更加容易且准确的分析手段。甲基化敏感性高分辨熔解分析（MS-HRM）是近年兴起的一种适用于评估特定基因DNA甲基化的新技术。它基于当前实时荧光PCR仪器的前沿应用 – 高分辨率熔解曲线分析（HRM），使用既可扩增甲基化序列也可扩增非甲基化序列的引物对来自经重亚硫酸盐修饰的DNA的相关区进行PCR扩增。重亚硫酸盐修饰DNA，让非甲基化的胞嘧啶转换为尿嘧啶，而5－甲基胞嘧啶保持不变，随后通过PCR扩增检测感兴趣区域的甲基化状态。在MS-HRM中，在饱和的DNA结合染料存在的情况下进行PCR反应，在扩增后进行高分辨熔解曲线分析，HRM分析的特点为可以区分扩增产物中少至1个碱基变化的序列差异，从而通过尿嘧啶/胞嘧啶的差异判断扩增子来源于甲基化还是非甲基化的初始模板变异体。MS-HRM可评估引物之间整条扩增子的甲基化状态。由于它是一种闭管方法，可初步快速评估甲基化。相比于传统的方法，它的成本低廉，分辨率高，通量灵活（最多一次筛查384个样本，最少几个样本），并且准确率大大提升。结合标准品的特征熔解曲线，还可以对样本中存在的甲基化DNA比率进行基本的定量。更多有关特定CpG位点的甲基化的详细信息，可采用重亚硫酸氢盐修饰后测序分析。http://www.biomart.cn/upload/asset/2010/07/30/1280471779.jpgLightCycler主要应用：实时荧光PCR技术进行快速准确的DNA甲基化分析我们使用罗氏诊断公司的LightCycler®480高分辨熔解扩增试剂盒在LightCycler®480实时荧光PCR仪上，通过MS-HRM测定法对两种已知的经过启动子（FANCE和MGMT）甲基化的DNA修复基因的检测性能。材料和方法将多种细胞株的DNA样本作为检测模板。每μg的每种DNA样本都经过重亚硫酸盐修饰。通过在正常DNA（经过重亚硫酸盐修饰）池中按50％、25％、10%、5％和1％稀释100％的甲基化对照DNA（经过重亚硫酸盐修饰）以创建甲基化标准品。MS-HRM引物按Wojdacz和Hansen描述的方法设计。使用LightCycler®480高分辨熔解扩增试剂盒在96孔LightCycler®480仪器中执行扩增和熔解反应。http://www.biomart.cn/upload/asset/2010/07/30/1280471781.jpg图1：（a）含100％甲基化和非甲基化质控品和50％、25％、10％、5％和1％的甲基化标准品的FANCE MS-HRM测定法。使用“Tm Calling”和“HRM基因扫描”软件模块分析的数据。（b）含100％甲基化和非甲基化质控品和50％、25％、10％、5％和1％的甲基化标准品的MGMT MS-HRM测定法。使用“Tm Calling”和“HRM基因扫描”软件模块分析的数据。

【序号】：1【作者】： 敖红伟1冯树波1,2杨配贤【题名】：均相羧甲基化法合成脂肪酸单乙醇胺醚羧酸钠的研究【期刊】：化学研究与应用. 【年、卷、期、起止页码】：2017,29(09)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKibYlV5Vjs7iAEhECQAQ9aTiC5BjCgn0RlhmTWqSjrA_ziVBgNcxfF5qCO4-2-2Ud1F5Mcax12n8&uniplatform=NZKPT

【序号】：1【作者】：敖红伟1冯树波1,2杨配贤2【题名】：均相羧甲基化法合成脂肪酸单乙醇胺醚羧酸钠的研究【期刊】：化学研究与应用 . 【年、卷、期、起止页码】：2017(09)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=xEDmK2-VgJhzSornE3iMA3TbUnHcBybK2x7M_8rpF8g7Ey4OjEizRIFWHgkgmLy_-tfEEs8RMir3EL7oWJEDkaHDDfQrrbd1-ZbODTEtTbo7D-tNXpIndr8Y4e_PY5NIvUHcjStkNDPbTnKc5R8mMpDTJUttr1mRNQd4O9kvZxsxmzGFEALk7c9xxJ6GsgySBO7se-H_98A=&uniplatform=NZKPT&language=CHS

BF3- 甲醇与ROOH反应甲基化，生成的产物应该是ROOCH3，还是ROOBF3呢？我觉得是前者，别人说是后者。

比如，重金属汞。在微生物（如硫酸盐还原菌、铁还原菌）作用下将Hg2+转变为甲基汞(MeHg)。望老师不吝赐教

RT: 用作衬管去活的硅烷化试剂二氯二甲基硅烷的部件号

【中文名称】N-羟甲基蛋氨酸钙；保护性蛋氨酸；Mepron【英文名称】N-hydroxymethylmethionine-Ca【结构或分子式】 【性状】 自由流动的白色粉末。有特异气味。【用途】 用作反刍动物的饲料添加剂。可提高奶牛产量和乳脂率，减少肝代谢负荷，延长产乳期，并缩短生产牛犊间隔期。【制备或来源】 N-羟甲基蛋氨酸钙盐是以DL-蛋氨酸为原料先行羟甲基化，再同氢氧化钙反应，经精制而得。【其他】 建议高产奶牛用量20～30g/天。【生产单位】 德国迪高沙（Degussa）公司

如图 B是可以买到的标品从天然产物中分离得到A请问大家想制备A的标品可以用什么方法可以利用B去甲基吗 还是只能自己再分离纯化呢[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/03/202203311431441756_1050_5477041_3.png[/img]

sample 有羧基，用烷基化（重氮甲烷或者BF3-甲醇），有醇基，又需要酰化。酰化去除醇基，又会产生羧基，因此提出这个顺序的问题。1）我想当然地认为：应该是先酰化，产生的羧基再做烷基化一并衍生化，不知对不对？是否还有这种可能性：先甲基化，生成的是小分子酯类；再酰化，即使生成醇基，也是低沸点小分子，不影响GC或者GC-MS分析？2）酰化，常规法需要用吡啶，我不知道这个方法是不是稳定，能保持几天？再就是，吡啶是否影响稳定同位素分析？

硫酸二甲酯可用于有机磷杀虫剂、其他杀菌剂、其他除草剂等农药合成等。因为硫酸二甲酯作为一种重要的烷基化剂，在有机合成中常用于代替卤代烃作为甲基化试剂，进行O-甲基化反应和N-甲基化反应，可以用于诸如农药甲胺磷、乙酰甲胺磷、抗蚜威、氟蚜螨等杀虫杀螨剂的合成。但是硫酸二甲酯在高度高残留农药方面的应用市场处于相对萎缩的趋势，中国于2007年1月1日全面禁止甲胺磷等5种有机磷农药在国内农业上的使用，氟蚜螨等新型高效农药新品种，需要在技术上降低产品生产成本，而且需要做好登记产品上的推广应用工作。