排阻色谱

本文参考2015年版《中国药典》注射用重组人白介素-11品种的质量标准，采用岛津生物液相系统Nexera Bio以体积排阻色谱法对注射用重组人白介素-11样品进行了纯度分析。采用岛津Shim-Sen SEC-H 300体积排阻色谱柱，重组人白介素-11主峰与相邻杂质峰分离效果良好且能有效检出样品中所含的杂质。

建立用分子排阻色谱分析肝素钠的平均分子量及分子量分布范围的方法,本方法参考中国药典对肝素钠分子量进行了分析，结果表明系统适用性、线性范围和准确度均符合药典要求，该方法可适用于肝素钠的分子量测定。

仪器： 沃特世Alliance® 氨基甲酸酯分析系统洗脱液： 0.05%磷酸色谱柱： 离子排阻色谱柱，7.8 x 150 mm, 55 ?C保护柱： Guard-Pak™ 组件和附件进样量： 200 μ L标准品混合物流速： 1.5 mL/min检测： 荧光检测，激发波长-340 nm，吸收波长-455 nm，增益-10

本文介绍了使用岛津尺寸排阻色谱柱“Shim-pack™ Bio Diol”，分析mAb和ADC聚集体的案例。使用“Nexera XS inert”系统，该系统对高浓度盐的流动相具有耐腐蚀性，可抑制管道内样品的吸附。

静态光散射与尺寸排阻色谱的联用，在单克隆抗体（mAbs）的纯度检验或下游纯化的快速检测方面来说是一项重要手段。光散射也是在荧光检测之外蛋白多聚体的最敏感检测方法之一。

本应用文献描述了采用Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 µ m色谱柱对NIST 单抗进行尺寸排阻色谱方法的开发。采用Agilent 生物惰性四元泵系统和Buffer Advisor 软件可轻松筛选大量的流动相组合，快速开发出合适的分离条件。

采用尺寸排阻色谱柱TSKgel G2000SWXL（7.8 mmI.D.× 30cm,5μ m）,流动相乙腈-水-三氟乙酸（体积比40：60：0.07），在紫外检测波长214nm条件下检测双黄连注射液中的高分子杂质。

塑料，聚合物，树脂等高分子材料，在我们的日常生活中随处可见，并且被广泛应用于各个领域。随着生产高分子材料的石油化工产业的不断发展，相继开发和生产出具有新的结构和特殊功能的高分子材料。作为评价和表征这些高分子分子量的方法，尺寸排阻色谱法（SEC）现在已经被广泛使用。由于分离机理简单,SEC法能够很容易得到分子量和分子量分布的结果,但是在实际测试中想获得正确的测定结果也是需要很多经验和技巧.尤其是采用SEC进行高分子的品质管理时,必须要精确考察每个参数,从而确定正确的洗脱条件。 本手册将系统介绍SEC的基本原理，测定方法，到如何优化洗脱条件，并配合实际的实验数据来进行介绍和说明。如果本手册能够给您的研究和工作带来帮助，我们将荣幸之至。-目录-1.前言2.高分子的物性和分子量,分子量分布3.平均分子量,分子量分布的测定方法4.SEC测定分子量5.色谱柱的选择方法6.洗脱溶剂7.样品浓度和进样量8.超高分子的SEC测定9.高温SEC-附录-附录1.有机相SEC典型样品和溶剂的对应关系附录2.水相SEC典型样品和溶剂的对应关系附录3.SEC使用的主要溶剂的物性表附录4.各类聚合物的色谱图

由于聚集体会对药物安全性产生显著影响并且可能引发抗原反应，因此蛋白质聚集是生物治疗药物蛋白质的关键质量属性。聚集体还可能会降低生物治疗药物的药效并大幅降低生产工艺的经济效益。蛋白质通常在暴露于压力条件下时发生聚集，例如pH、温度或浓度的变化，因此不同生产阶段均有可能发生聚集。目前人们已经确定选择体积排阻色谱(SEC) 方法进行聚集体的定量分析。在生物治疗药物开发过程中（例如在克隆选择过程中或在通过严格的“实验设计”法优化发酵条件时）监视聚集体的形成情况，这些过程可能产生大量需要进行体积排阻分析的样品。SEC 常用条件的分析时间往往需要20 min 甚至更长，这极大限制了对大量样品的分析能力。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱具有高度优化的粒径和孔径设计，可实现更快速的分离，从而显著减少分析瓶颈问题。本应用简报介绍的技术可提高样品通量而不影响分析的准确性。

涉及聚集的蛋白质变性过程是阻碍稳定蛋白质药物制剂开发的因素之一。使用体积排阻色谱 (SEC) HPLC 测定这些蛋白质的纯度和聚集体是一种相对简单的技术。定期校准 SEC 方法可确保更好的重现性，从而提高准确性，还可及早发现样品及批次中的潜在问题。本简报将 Agilent AdvanceBio SEC 120 Å 1.9 μ m 色谱柱与其他供应商的亚 2 μ m 填料色谱柱进行了比较。对重组人生长激素 (hGH)、人粒细胞集落刺激因子 (hG-CSF) 以及干扰素 α -2b (INF α -2b) 蛋白的分析结果表明，AdvanceBio 色谱柱在小分子蛋白质治疗药物应用方面具有卓越性能。

由于聚集体会对药物安全性产生显著影响并且可能引发抗原反应，因此蛋白质聚集是生物治疗药物蛋白质的关键质量属性 [1]。聚集体还可能会降低生物治疗药物的药效并大幅降低生产工艺的经济效益。蛋白质通常在暴露于压力条件下时发生聚集，例如 pH、温度或浓度的变化，因此不同生产阶段均有可能发生聚集。目前人们已经确定选择体积排阻色谱 (SEC) 方法进行聚集体的定量分析。在生物治疗药物开发过程中（例如在克隆选择过程中或在通过严格的“实验设计”法优化发酵条件时）监视聚集体的形成情况，这些过程可能产生大量需要进行体积排阻分析的样品。SEC 常用条件的分析时间往往需要 20 min 甚至更长，这极大限制了对大量样品的分析能力。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱具有高度优化的粒径和孔径设计，可实现更快速的分离，从而显著减少分析瓶颈问题。本应用简报介绍的技术可提高样品通量而不影响分析的准确性。

2011年6月颁布了中华人民共和国国家标准GB/T 26636-2011/ISO 16931:2001—动植物油脂聚合甘油三酯的测定高效空间排阻色谱法（HPSEC），该标准已于2011年11月正式施行。本应用是参考该标准方法，采用东曹TSKgel G2500HXL尺寸排阻色谱柱对食用植物油中聚合甘油三酯进行了测定。

聚乙烯醇（PVA）是一种水溶性高分子聚聚合物，医药级PVA，不同于化工级别PVA，它是一种极安全的高分子有机物，对人体无毒，无副作用，具有良好的生物相容性，具有亲水性和成膜性，可做眼科用药，在适宜浓度下，能发挥类似人工泪液的作用。本应用采用了HLC-8420GPC凝胶渗透色谱仪，配合适用TSKgel GMPWXL尺寸排阻色谱柱，建立了测定医用聚乙烯醇的分子量的方法。

2010年，沃特世首次推出了基于UPLC® 技术的200Å 孔径的体积排阻色 谱(SEC)1。这些体积排阻UPLC (SE-UPLC)色谱柱由亚2 µ m直径的亚乙基 桥杂化(BEH)颗粒组成，与纯硅胶基质颗粒相比，这种颗粒的结构和 化学性质更为稳定。正是有了这些结构更加稳定的颗粒，SE-UPLC才 得以问世。然而，小颗粒和窄内径4.6 mm SE-UPLC色谱柱并不适用于 HPLC系统。因此，沃特世基于稳定耐用的BEH填料推出了兼容HPLC、 颗粒直径为3.5 m、内径为7.8 mm的体积排阻HPLC色谱柱(SE-HPLC)。 从而让拥有HPLC仪器的实验室能够充分利用这一独特颗粒技术的优势， 这些优势还包括与硅胶基质SEC颗粒相比BEH颗粒能耐受更高反压的能 力。本应用纪要将重点介绍专为分离大分子蛋白质而设计的200Å 和 450Å 孔径色谱柱的性能特征，内容涉及分离度、柱间重现性和色谱 柱稳定性。此外，还将介绍在分离较大蛋白质时，这些亚4 m色谱 填料与更大粒径(5和8 m)的标准HPLC颗粒相比在分离度和样品通量 方面的显著优势。

体积排阻色谱法（SEC，Size Exclusion Chromatography）是将样品分子按照尺寸大小来分开的分析方法。流动相以填充有多孔珠状材料的色谱柱来承载样品分子，样品分子可以在孔和空隙（即填充物周围的空间）之间自由移动1。小分子在孔空间中停留的时间较长，大分子在孔空间中停留的时间较短，因此能够按照分子的大小将其分开1。SEC系统可以方便地同其它监测方法（如TOC、吸光度、荧光检测等）搭配使用2-4，结果数据显示分子量（MW，Molecular Weight）与强度（即TOC浓度、吸光度、荧光特征）的详细比较色谱图，可以用来表征有机物（OM，Organic Matter），并帮助我们深度了解水处理工艺2-4。

体积排阻色谱法（SEC，Size Exclusion Chromatography）是将样品分子按照尺寸大小来分开的分析方法。流动相以填充有多孔珠状材料的色谱柱来承载样品分子，样品分子可以在孔和空隙（即填充物周围的空间）之间自由移动1。小分子在孔空间中停留的时间较长，大分子在孔空间中停留的时间较短，因此能够按照分子的大小将其分开。SEC系统可以方便地同其它监测方法（如TOC、吸光度、荧光检测等）搭配使用，结果数据显示分子量（MW，Molecular Weight）与强度（即TOC浓度、吸光度、荧光特征）的详细比较色谱图。结果数据可以用来表征有机物（OM，Organic Matter），并帮助我们深度了解水处理工艺。

本篇应用介绍了采用超高效尺寸排阻色谱法在分辨长度相差一个碱基的不同寡核苷酸样品的能力。采用了粒径2微米、12.5 nm孔径的硅基SEC色谱柱TSKgel UP-SW2000，此款色谱柱适用于分离小蛋白、肽和寡核苷酸。该色谱柱也可在UHPLC系统上用来分析寡核苷酸。配合使用东曹的多角度光散射检测器还能获取更多有关寡核苷酸和样品杂质的分子量信息。

BioCore SEC是纳谱分析推出的全新高性能体积排阻色谱柱系列：采用自主创新技术开发的高性能体积排阻分离介质，基于孔道结构特殊设计的单分散多孔硅胶微球，表面键合中性亲水层，将分析物与固定相之间相互作用力降到最低，广泛应用于生物制药、医疗、科研等领域。

BioCore SEC是纳谱分析推出的全新高性能体积排阻色谱柱系列：采用自主创新技术开发的高性能体积排阻分离介质，基于孔道结构特殊设计的单分散多孔硅胶微球，表面键合中性亲水层，将分析物与固定相之间相互作用力降到最低，广泛应用于生物制药、医疗、科研等领域。

本文采用岛津生物兼容性液相系统结合尺寸排阻色谱法，开发了一种检测司美格鲁肽注射液制剂中聚集体的方法。优选的流动相条件和SEC色谱柱可以实现司美格鲁肽主成分、聚集体和制剂中抑菌剂的有效分离，分离度均大于2.5 。连续六次进样，司美格鲁肽保留时间和峰面积的相对标准偏差（RSD）在0.044% 以内，重复性良好。

BioCore SEC是纳谱分析推出的全新高性能体积排阻色谱柱系列：采用自主创新技术开发的高性能体积排阻分离介质，基于孔道结构特殊设计的单分散多孔硅胶微球，表面键合中性亲水层，将分析物与固定相之间相互作用力降到最低，广泛应用于生物制药、医疗、科研等领域。

单克隆抗体 (mAb) 可能会因细胞培养、收获、纯化、存储和填充期间的多种机制发生聚集。体积排阻色谱 (SEC) 是对 mAb 进行体积分离的标准方法。该方法被认为是用于定性和定量评估聚集体的强大参考技术。多种中间样品的SEC 分析不仅需要数小时才能完成，而且在样品处于不利环境中时，还会极大地影响聚集状态。本研究证明了使用短柱长小孔径的 Agilent AdvanceBioSEC 色谱柱对 mAb 和抗体药物偶联物 (ADC) 实现快速、高分离度、灵敏且可重现的分离和定量分析。分离和定量分析可在 4 min 内完成，更重要的是，该方法能够对应激条件下形成的聚集体进行监控与检测。

单克隆抗体 (mAb) 可能会因细胞培养、收获、纯化、存储和填充期间的多种机制发生聚集。体积排阻色谱 (SEC) 是对 mAb 进行体积分离的标准方法。该方法被认为是用于定性和定量评估聚集体的强大参考技术。多种中间样品的 SEC 分析不仅需要数小时才能完成，而且在样品处于不利环境中时，还会极大地影响聚集状态。本研究证明了使用短柱长小孔径的 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱对 mAb 和抗体药物偶联物 (ADC) 实现快速、高分离度、灵敏且可重现的分离和定量分析。分离和定量分析可在 4 min 内完成，更重要的是，该方法能够对应激条件下形成的聚集体进行监控与检测。

体积排阻色谱 (SEC) 是表征生物治疗蛋白质体积异构体的一种常用技术。本应用简报比较了不同供应商的 2 μm 和亚 2 μm SEC 色谱柱对单克隆抗体 (mAb) 和抗体药物偶联物 (ADC) 的 SEC 分析。Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 μm 色谱柱对实现mAb 和 ADC 的高分离度分离具有独特的优势。

采用TSKgel UP-SW2000超高效液相尺寸排阻色谱柱，使用乙腈-水-三氟乙酸：（体积比：40：60：0.07）流动相，在紫外检测波长214 nm条件下，对注射用胸腺肽中胸腺肽α 1进行分离和测定。供试品的分析结果显示，分子量大于10000道尔顿的组分所占比例为2.38%，满足标准不得超过5%的要求。对应胸腺肽α 1对应峰面积百分比为1.84%，满足标准规定不低于1%的要求。

本应用简报介绍了一套完整的聚集体分析工作流程，它能够：• 优化单克隆抗体高性能体积排阻色谱 (SEC) 的流动相条件• 表征包括单体、二聚体和高阶聚集体等物质的聚集特征我们使用安捷伦缓冲液顾问软件自动进行复杂的 SEC 优化实验，实验中充分利用 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱系统的功能，在一系列快速液相色谱运行中对各种缓冲液组分进行自动实时混合。Agilent 1260 Infinity Bio-MDS 多检测器套装提供了动态光散射检测功能，能够检测高阶蛋白质聚集体、测定绝对分子量并扩大紫外检测系统的测量范围。

BioCore SEC是纳谱分析推出的全新高性能体积排阻色谱柱系列：采用自主创新技术开发的高性能体积排阻分离介质，基于孔道结构特殊设计的单分散多孔硅胶微球，表面键合中性亲水层，将分析物与固定相之间相互作用力降到最低，广泛应用于生物制药、医疗、科研等领域。

mRNA聚集体检测是指使用特定的分析技术来识别、量化并表征mRNA分子在生产或存储过程中可能形成的聚集体。mRNA（信使核糖核酸）是一种单链RNA分子，它携带遗传信息，指导细胞合成特定的蛋白质。在mRNA疫苗或药物的生产过程中，mRNA分子可能会因为多种因素（如温度变化、pH值波动、物理或化学应力等）而形成聚集体。聚集体的存在可能会影响mRNA的稳定性、活性以及最终的疫苗或药物效果。因此，检测mRNA聚集体对于确保产品质量、安全性和有效性至关重要。本应用采用全新推出的Biozen dSEC-7建立了一种分析mRNA聚集体的方法，并评估加热处理对聚集体的影响。通过分子排阻色谱法（SEC-HPLC）研究人员可以更好地理解和控制mRNA聚集体的形成，从而优化mRNA疫苗和药物的生产工艺，提高产品质量。

本文采用岛津生物惰性液相系统结合尺寸排阻色谱法，开发了一种检测多肽药物中共价结合二聚体和非共价结合二聚体杂质的新方法。优选的洗脱液和SEC色谱柱可以实现多肽主成分、共价结合二聚体和非共价结合二聚体的有效分离，分离度大于1.5。连续六次进样，三个目标峰保留时间和峰面积的相对标准偏差（RSD）分别在0.024~0.025%和0.048~0.130%之间，重复性良好。多肽药物强制性降解实验样品中检出非共价结合二聚体，峰面积百分比为6.934%。

斯派克接地电阻安装具体细节，斯派克直读光谱仪在直读行业享誉盛名。如何安装、维护斯派克直读光谱仪是很多用户都关心的，此文只说地线的安装