基因诊断

日前，卫生部发出通知，决定将原本需经过国家卫生部审批的基因芯片诊断技术“下放”由省级卫生行政部门负责其临床应用管理。业内人士分析，此举使高高在上的尖端科技“跌落云端”，基因诊断将更快走入寻常百姓家，只需一滴血，你就可以预知自己是否会患上乳腺癌、高血压。检测：诊断更快更准更贵武汉大学中南医院基因诊断中心主任郑芳昨日介绍，疾病的发生发展经历了从基因到蛋白质，再到细胞、组织的变化，最后表现在脏器层面等一系列复杂的过程。传统的表形诊断技术最早能捕捉到蛋白质的异常，基因诊断则能提前到最早期的量变。此外，基因诊断速度更快。比如耐药性结核病，传统检测手段至少需要1个月，有些病人还没等确诊就恶化了，而基因诊断最快可在1天内得出结果。但是，基因诊断要做到更快更准，其尖端的设备和从业人员使得收费自然不菲，动辄数千上万元的价格往往令人望而却步。预知：并非一定发生“基因诊断能预知疾病，但其结果并非一定就会发生。”郑芳说，基因改变作为最早期的量变，与疾病的关系并不能一一对应，所有基因检测的结果，仅具有参考价值。比如癌症，基因检测可明确找出一个人是否携带相关的癌症基因，但是癌症发病受环境、遗传等诸多因素影响，有突变基因不代表一定会发病。规范：不同医生解读答案应相同首先，基因芯片诊断主要适用于那些依靠目前的临床诊断手段仍无法确诊，而病人已有症状或者主观感觉不适者。通俗地说，基因芯片并不能完全取代目前临床实验室诊断，而只能视其为补充或扩展。其次，从业人员也应接受完整、规范的培训，以对基因检测的结果做到统一解读，也就是说，一种基因检测不同医生给出的答案应当只有一个。对患者，医师应全面告知基因芯片诊断的目的、技术可靠性、参考价值、结果的客观评估和注意事项，以及可能发生的经济和心理负担，并签署知情同意书。

1.脊髓小脑性共济失调的临床及基因诊断进展 江泓 唐北沙 《国外医学：神经病学．神经外科学分册》 2002年第29卷第4期

诊断试剂从一般用途来分，可分为体内诊断试剂和体外诊断试剂两大类。多为通过抗原、抗体间反应进行检测的一种试剂。A：体外诊断试剂的分类： 一、按药品进行管理的体外生物诊断试剂包括： 　　１．血型、组织配型类试剂； 　　２．微生物抗原、抗体及核酸检测类试剂； 　　３．肿瘤标志物类试剂； 　　４．免疫组化与人体组织细胞类试剂； 　　５．人类基因检测类试剂； 　　６．生物芯片类； 　　７．变态反应诊断类试剂。 　　二、按医疗器械管理的体外试剂包括： 　　１．临床基础检验类试剂； 　　２．临床化学类试剂； 　　３．血气、电解质测定类试剂； 　　４．维生素测定类试剂； 　　５．细胞组织化学染色剂类； 　　６．自身免疫诊断类试剂； 　　７．微生物学检验类试剂。B：按照医学检验项目，临床诊断试剂大致可分为临床化学检验试剂、免疫学和血清学检测试剂、血液学及细胞遗传学检测试剂、微生物学检测试剂、体液排泄物及脱落细胞的检测试剂、基因诊断试剂等种类。其中以临床化学所占市场份额最大，接近34%；其次为免疫学市场，约占29%。新型免疫诊断试剂和基因诊断试剂是20世纪80年代后期发展起来的，无论技术还是市场，都是目前所有诊断试剂产品中发展最快的。

分子诊断分子诊断是采用分子生物学的理论和技术,通过直接探查核酸的存在状态或缺陷,从核酸结构、复制、转录或翻译水平分析核酸的功能,从而对人体状态与疾病做出诊断的方法。分子诊断是预测诊断的主要方法，既可以进行个体遗传病的诊断，也可以进行产前诊断。它检测的基因有内源性(即机体自身的基因)和外源性(如病毒、细菌等)两种,前者用于诊断基因有无病变,后者用于诊断有无病原体感染。生物芯片应用前景广阔生物芯片技术是近年发展起来的分子生物学与微电子技术相结合的核酸分析检测技术,是运用分子生物学、基因信息、分析化学等原理进行设计,以硅晶圆、玻璃或高分子为基材,配合微机电自动化或其他精密加工技术,所制作的高科技元件,具有快速、精确、低成本之生物分析检验能力。生物芯片样品处理能力强、用途广泛、自动化程度高等特点,具有广阔的应用前景和商业价值,是分子诊断领域的一大热点。微流控芯片微流控芯片整合了核酸提取、扩增及检测过程,反应过程处于封闭的环境中,减少了操作人员的负担及污染的可能性,实现了随时随地快速检测的需求,为医疗检验和疾病防控带来巨大的帮助。微流控芯片技术在分子诊断中已经有非常好的应用,微流控芯片技术将会是分子诊断POCT化的重要发展方向。风险提示风险在于微流控芯片技术是结合微机电加工、生命科学、化学合成、分析仪器及环境科学等许多领域学科的新产品,技术要求高,开发周期较长;另外测序技术的不断发展,实现高通量的检测,可能会对现有基于PCR扩增的微流控技术带来冲击。

一家挪威生物医学公司说，找到一种检测方法，能够通过简单的血液检测诊断帕金森病，美国一家医院将于明年率先试验这种检测方法。 帕金森病是一种常见的神经功能障碍疾病，主要影响中老年人，多在６０岁以后发病。其症状表现为静止时手、头或嘴不自主地震颤，肌肉僵直、运动缓慢以及姿势平衡障碍等，导致患者生活不能自理。迄今为止，原发帕金森病的病因仍不完全清楚，帕金森病尚无根治方法。 英国《每日电讯报》２２日报道，这项研究由演员迈克尔福克斯出资完成，他于１９９１年３０岁时被诊断患上了帕金森病。他提出，也许可以通过检测血液中的化学变化发现受病情影响而出现的基因改变，从而早期确诊帕金森病。 挪威ＤｉａＧｅｎｉｃ公司通过研究发现，帕金森病引发血液中化学变化，并会使５００种基因受到影响。他们找到的检测方法能够通过血液检测确认这些化学变化。 美国马萨诸塞州波士顿一家医院已收集了３００个病人的血液样本试验新的检测方法。ＤｉａＧｅｎｉｃ公司说，希望能尽快为新检测方法注册专利，这样医生们明年年底前就可以应用这一方法。 去年，ＤｉａＧｅｎｉｃ公司宣布，他们发现新的血液检测方法，可早期诊断老年痴呆症。 据统计，目前全球帕金森病患者的人数已超过４００万。医学专家普遍认为，对抗帕金森病，只有早发现、早治疗，才能早获益。（新华社电）

2014中国（上海）诊断试剂和设备展览会 同期同地举办2014 中国国际生物技术和仪器设备博览会！ 2014年4月24-26日 上海世博展览馆 〓组织机构〓上海市食品监督管理局上海市生物医药行业协会上海医学会检验医学分会上海现代国际展览有限公司（以上排名不分先后）〓新兴市场不容小觑〓作为生物技术发展的产物，医学体外诊断试剂也在不断随着生物技术的快速发展不断拓宽其种类。随着全球经济的发展，人们保健意识的提高，大部分国家医疗保障政策的完善，全球卫生医疗得到了快速发展，从而带动体外诊断行业快速发展。体外诊断试剂产业已成为当今世界上最活跃、发展最快的行业之一。国外诊断试剂市场年增约为5%左右，而受益于新医改和国家的扶持政策，未来我国的诊断试剂市场年增长速度可以达到20%左右，随着人们生活水平的提高和新医改的持续推进，我国诊断试剂的市场规模必然会进一步扩大。中国（上海）诊断试剂和设备展览会（DIAGNOSTIC CHINA）历经5年的运作与发展，现已成为诊断领域有着重要影响的品牌展会之一。历届部分国内外知名参展企业有比利时展团、罗氏、复星、科华、国药化试、西格玛奥德里奇、益思美诠、金标、奥普等等。展会希望能为业界同仁提供这样一个舞台，在这里可以您可以把握最全的行业咨讯和发展信息，并以全新的战略视角直击政策、学术和产业前沿，以此推动国家和企业在该领域的不断创新和高速发展，打造一站式采购平台。〓展品范围〓体外诊断试剂（盒）一、临床血液学和体液学检验试剂血液学检验试剂（盒），组织配型类试剂（盒），尿液检验试剂（盒）、试纸，粪便检验试剂（盒）、试纸，其他体液及排泄物检验试剂（盒）二、临床化学检验试剂无机离子检验试剂（盒），蛋白质检验试剂（盒），糖类检验试剂（盒）、试纸，酶类检验试剂（盒），非蛋白含氮类化合物检测试剂（盒），脂类检验试剂（盒），血气与电解质分析试剂（盒），内分泌检验试剂（盒）三、临床免疫学检验试剂传染病免疫学诊断检验试剂（盒），肿瘤标志物类试剂（盒），细胞免疫检验测定试剂（盒）四、微生物学检验试剂培养基，微生物学检验类试剂（盒），微生物抗原、抗体及核酸检测类试剂（盒），药敏试剂五、组织细胞学检验试剂细胞、组织化学染色剂类试剂，免疫组化与人体组织细胞类试剂（盒）六、变态反应、自身免疫诊断检验试剂（盒）七、遗传性疾病检验试剂八、分子生物学检验试剂分子诊断试剂（盒）。人类基因检测类试剂（盒）。生物芯片类试剂（盒）临床检验设备一、血液分析系统二、生化分析系统三、免疫分析系统四、细菌分析系统五、尿液分析系统六、血气分析系统七、微生物分析系统 〓四大展会亮点〓设立分子诊断专区根据最新的研究报告，全球体外诊断市场预计在2012-2014年有9％左右的增长。目前，体外诊断市场的特点是各种新技术的层出不穷，例如分子诊断。它将是推动的全球市场在未来一段时间内快速增长的一个非常重要的领域。DIAGNOSTICCHINA为分子诊断企业设立专区，迎合市场需求，帮助企业寻找合作商机。封闭式高峰论坛+专业性展览展会同期举办检验医学高峰论坛。往届的会议上，复旦大学附属中山医院检验科主任潘柏申教授、上海市临床检验中心常务副主任王华梁教授等顶级专家引发头脑风暴，促进中国体外诊断产业技术创新的实践与思考。通过此形式，您将有机会一对一深度了解体外诊断试剂 / 设备 / 软件及其他方案提供商的最新技术。两展呼应，展会联动本次展览会将与BI

作者：丁香园网友Docofsoul《每日科学》2011年9月1日报道——由瑞士联邦理工学院（ETH）Yaakov Benenson教授与麻省理工Ron Weiss教授率领的研究小组成功地将生物“计算机”诊断网络导入人类细胞。该网络有识别某些肿瘤细胞的能力，利用五种肿瘤特异性分子因子的逻辑组合，进而触发肿瘤细胞毁灭过程。http://img1.jiansuo.net/cms/upload/userfiles/image/2011/09/04/1315042501_small.jpg细胞微机布线图：所有五种因子必须处于相应的正确状态，由此触发细胞死亡（图片来源：y Benenson Y. 教授 R. Weis教授）开发活体细胞内运作的生物电脑，是ETH苏黎世分院合成生物学教授Yaakov (Kobi) Benenson孜孜以求的目标，其职业生涯的大部分时间都倾注于此。他想建立既能侦测细胞生存状况、又能在细胞异常时对相应信息进行处理以提供合适的治疗响应的生物微机。目前，通过与麻省理工教授Ron Weiss以及团队成员（包括博士后学者Zhen Xie 与 Liliana Wroblewska、博士生Laura Prochazka）合作，他向这一目标迈出了重大一步。这一研究成果已发表于《Science》（见本文所附参考文献），论文介绍了一种多基因合成“电路”；此电路负责鉴别正常细胞与肿瘤细胞、继而进一步摧毁肿瘤细胞。其工作方式是：对细胞内五种肿瘤特异性分子因子及其出现频率进行抽样与综合；只有当所有这些因子在细胞内同时出现时，该电路才会作出正识别响应。这种方式使得侦测肿瘤的准确率非常高。研究者希望这一成果能够为高特异性抗癌治疗奠定基础。对肿瘤细胞的选择性破坏本研究对实验室培养的两种类型人类细胞进行了基因网络测试：海拉细胞（子宫颈癌细胞）与正常细胞。当基因生物微机被导入这两种不同的细胞类型时，只有海拉细胞被摧毁，而正常细胞则安然无恙。当然，取得这一结果需要做大量的基础工作。首先必须找出海拉细胞特有的分子组合。Benenson及其他小组成员在属于小RNA分子（MicroRNA或miRNA）这一类化合物的分子中找，终于确认其中一个miRNA组合（或者说“可识别属性”）只有海拉细胞才有，其它健康细胞类型内则不存在。发现这种可识别属性是一项颇具挑战性的任务。人体内既存在250种不同的健康细胞类型，此外也存在为数众多的肿瘤细胞的变异型（其中数百种可作实验室培养）。但miRNA多样性则更是不让须眉花样繁多，人类细胞中已得以描述的即达500到1000不同种类。Benenson指出：“每种健康或病损细胞类型都有其不同的miRNA分子处于开放或关闭状态。”可识别肿瘤属性中的五种因子确立一种miRNA“可识别属性”与发现一组症状以可靠诊断一种疾病有所不同。教授说：“一种症状，比如说发热吧，不可能由此概括出一种疾病。医生获得的信息越多，其诊断才越可靠。”　一年半前他从哈佛大学到ETH后，研究小组找到了几种因子，可由此可靠地将海拉细胞从所有其它健康细胞中鉴别出；结果表明，仅仅五种特定miRNA的组合（其中某些以高水平出现，某些则以极低水平出现）就足以将海拉细胞从其混迹的健康细胞中揪出来。与微机运作相似的网络Benenson介绍说：“这些miRNA因子在细胞内进行逻辑代数运算；该生物微机运用诸如‘与’与‘非’等逻辑操作将这些因子进行组合，并且，当全部因子的整体运算结果为逻辑‘真’值时，只产生所需要的结果——那就是细胞死亡。”　确实，研究者已经能够显示该网络在活体细胞内可以非常稳定地运作，可正确组合所有细胞内因子并给出正确的诊断。Benenson认为，这一成果代表该领域的一项重大成就。动物模型与基因疗法该研究小组想在下一步在合适的动物模型上测试该细胞计算方法，以期在未来创建诊断与治疗工具。这听起来可能象科幻小说，但Benenson相信其可行性；不过，仍有不少棘手的问题需要解决。比如，如何有效、安全地将外源基因导入细胞？这种DNA递送在目前情况下颇具挑战性。尤其是，该方法需要将外源基因暂时而不是永久导入细胞。现有的病毒导入法或化学导入法均未充分开发，需要进一步完善。Benenson说：“为人类提供一种功能完善的治疗方法还非常遥远。不过这一工作是重要的第一步，显示了单一细胞水平上这样一种选择性诊断方法具有可行性。”参考文献：1. Z. Xie, L. Wroblewska, L. Prochazka, R. Weiss, Y. Benenson. Multi-Input RNAi-Based Logic Circuit for Identification of Specific Cancer Cells. Science, 2011; 333 (6047): 1307 DOI: 10.1126/science.1205527

课题研究的开始阶段，必须获得非典病毒基因。香港大学微生物系袁国勇教授是国际上较早分离出非典病毒并完成其基因分析的专家，车小燕曾与他进行过多年的合作，第一军医大学也早与香港大学建立了合作关系。于是，车小燕与袁国勇教授联系并达成合作研究协议，港大无偿提供非典病毒基因，使科研一开始就处于高起点的领先地位，为快速诊断试剂盒早日上市赢得了时间。　　六、七月的广州正值盛夏，天气异常炎热，大家穿着厚厚的防护服，戴着面具和口罩，在实验室一呆就是十多个小时，出来时人都快虚脱了。课题组成员郝卫回忆，为最快拿出成果，他们与时间赛跑，一进实验室就像高速运转的机器，许多仪器因超负荷运转频发故障，但大家咬牙坚持，每天工作多达十八九个小时。饿了就吃碗方便面，实在顶不住了就趴在桌子上打个盹。　　车小燕工作起来像上足发条的时钟，不知疲倦。她的丈夫工作也很忙，孩子面临中考，无人照顾，只好常吃方便面，以致现在“一见方便面就想吐”。负责制备针对非典病毒抗体的丘立文，在实验室连续工作一个半月，甚至有三四天没合过眼。技师廖志勇的父亲病危，家里多次来电报，但他没向任何人提起，仍全身心地投入工作，直到父亲病故的消息传来，他才请几天假回去料理后事。未能见上父亲最后一面成了他一辈子的遗憾。　　去年9月，终于拿出了“SARS冠状病毒抗原诊断试剂盒”、“SARS冠状病毒酶促增敏化学发光免疫分析试剂盒”。但拿到中国生物制品检定所检定时，竟然对一些非典病毒敏感性较低。“难道我们选择的实验材料有问题？”　　课题组决定对每一株非典病毒抗体都重新检测一遍。这意味着检测方法要推倒重来，又需一个半月时间。大家毫无怨言，毫不气馁，夜以继日，把制备的病毒抗体重新配对组合，用几十种配对方式对非典病毒广东株、香港株、北京株、美国毒株等10多种毒株进行敏感性检测。不到10天，一套新的试剂盒构建方案形成了。经复核对世界各地分离出的不同非典病毒毒株均能实现敏感检测，新的快速诊断方法符合国家质量标准。　　兄弟单位无私提供非典样本，让试剂盒通过了对1000多份样本的临床考核，从而获准上市　　试剂盒研制出来了，但更大的难题还在后面，必须通过非典样本的临床考核。这看上去简单，操作起来很难，因为非典样本少。比如，广东总共才有1000多例病人，不是每个病人都留下血清样本，再扣除污染因素，满打满算样本也就1000来份。而关于非典科研项目又多，有限的样本根本不能满足需要。另外，为防止非典样本发生泄露，国家又进行严格控制，所以要获得大量样本来考核试剂盒是否合格，非常难。　　这时，省卫生厅伸出援手，由省疾病预防控制中心提供试验样本。总后卫生部部长作出批示，军事医学科学院也提供了200多份样本。这样，费了九牛二虎之力，终于弄到600多份样本。　　今年4月1日，试剂盒拿到国家药审中心审评。尽管严谨的药审专家对检测结果感到欢欣，但还是认为临床考核病例数不够，需要补充临床资料。　　还要弄样本？大家几乎被“逼”上绝境。就在这一关键时刻，学校和医院领导将情况向省科技厅作了专题汇报。省委常委、常务副省长钟阳胜，副省长雷于蓝高度重视，亲自协调，广州市疾病预防控制中心及时提供了300多份标本。　　“借”样本虽然难，但也成为大家苦中有乐的回忆。在北京做实验时，大家吃住都在学校驻京办事处的小院里。为保证大家有充沛的体力，带队的黄震副院长亲自到超市采购、下厨，煲鸡汤、卤牛肉，给大家改善伙食。在科研碰到难题、压力时，院长、政委靠前指挥，解决问题。　　兄弟单位无私提供的1000多份样本，让课题组如获至宝，加班加点进行检测，获得了1000余例临床考核资料，证明从病人发病的第一天到第10天均可在其血液中检出非典病毒，检出率达到了90％以上，准确率高达99%.今年4月，北京新发现几例非典疑似病例，国家疾病预防控制中心紧急调用珠江医院刚研制出来的试剂盒进行检测，检测结果与确诊意见完全一致。　　中国工程院院士钟南山等专家建议将该诊断方法纳入国家非典诊断方案，便于早期发现和排查非典病人，及时阻断非典的传播。　　为加快试剂盒的审批，使研究成果尽快推向市场，应用于临床，省和国家药监局开通“绿色通道”，第一时间审核申报资料。全国防治非典攻关领导小组亲临现场对项目进行考察论证，为试剂盒早日批准上市创造了条件。

近日安捷伦参加了美国癌症研究协会年会（ American Association for Cancer Research Annual Meeting ，简称 AACR ） ，并重点展示在细胞分析、基因组学、数字病理学和伴随诊断解决方案方面的最新进展。该年会于当地时间4月5日至10日在美国加利福尼亚州圣地亚哥举行。本届年会，安捷伦展示了公司推进癌症研究和诊断方面发挥关键作用的几款特色产品与解决方案，包括：? Agilent NovoCyte Opteon光谱流式细胞仪——Agilent NovoCyte Opteon光谱流式细胞仪代表了光谱流式细胞技术领域的先进解决方案。这一用户友好的系统支持同时分析多个标记物，并在设计多标记组合方面展现了出色的灵活性。NovoCyte Opteon的配置范围为 3 激光到 5 激光，可支持多达70个高性能检测器，为科学家和研究人员带来了更广阔的研究潜能。? Agilent Avida——Agilent Avida是新一代靶向序列捕获解决方案，能够从单个样品中同步分析DNA与甲基化图谱。 Avida专有的技术流程能够在不损耗样品质量与数量的前提下，支持液体活检和靶向二代测序（NGS）的多组学应用。研究人员能够从有限的样本中快速获得遗传和表观遗传数据，进一步推动癌症生物学和临床领域的研究进展。高性能与精简的工作流程确保了测序的高度准确性、快速的周转时间和便捷的操作体验。? Agilent SureSelect 癌症定制基因组合——Agilent SureSelect癌症定制基因组合允许客户增加新的标志物和新兴生物标志物，包括肿瘤突变负荷（TMB）和微卫星不稳定性（MSI），为肿瘤基因组分析检测提供定制化解决方案。Agilent SureDesign 8.0软件利用机器学习驱动的探针设计方式，可以快速简便地设计出这些定制NGS癌症基因组合。这些定制的癌症基因组合进一步扩展了SureSelect癌症产品系列，彰显了安捷伦致力于推动精准肿瘤学发展的坚定承诺。? Agilent SureSelect CD CiberMed Tissue与SureSelect CD CiberMed Heme基因组合——安捷伦宣布与CiberMed建立全新合作伙伴关系。这家公司致力于借助其数字细胞分析软件iSort简化细胞分析和生物标志物的发现。新推出的安捷伦SureSelect CD CiberMed Tissue与SureSelect CD CiberMed Heme基因组合能够结合SureSelect与iSort工作流程，提供了一种基于批量RNA测序数据的细胞图谱分析解决方案，具有更高的灵敏度、准确性和稳定性。安捷伦诊断和基因组学集团总裁（暂任）Bob McMahon表示：“安捷伦持续将战略焦点对准抗癌事业。我们全面的产品组合涵盖了从细胞分析到基因组学、数字病理学和伴随诊断等领域的突破性技术。这些创新技术将助力全球的科学家、临床医生和研究人员推动新发现，并改善患者的治疗效果。”年会期间，安捷伦与主要合作伙伴联合举办两场研讨会。首场研讨会是与SomaLogic 联合举办（ 如今该公司已归属于 StandardBioTools ? ） ，并于当地时间 4 月 7 日（星期日）下午1:30开始。此次研讨会的主题为癌症的理解与护理，主讲人是来自伦敦帝国理工学院的Marc Gunter与来自牛津大学的Karl Smith-Byrne。他们将探讨对SomaLogic的SomaScan平台的实际应用。他们将深入揭示在大规模前瞻性研究群体中发现癌症的新病因及其生物标志物的方法。第二场研讨会于当地时间4月7日（星期日）下午3:30举行，会上将着重讨论精准医疗的创新技术。Transcenta Therapeutics 公司CMO Caroline Germa将介绍如何利用Claudin 18.2 IHC分析为Transcenta Therapeutics的奥塞米单抗项目提供信息支持，而来自安捷伦的Bellal Moghis则将探讨安捷伦的全新Avida靶向测序技术。除研讨会以外，安捷伦还将在其展位（#1531）展示与BostonGene 与CiberMed 的合作伙伴关系。AACR与会者还有机会浏览多张安捷伦研究海报和逾50张展现安捷伦仪器和解决方案亮点的客户海报。[来源：仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]在人感染猪流感诊断中的作用彭年才12 张镇西1 兰邹然3 黄兵3 李红东2 李明2 苗保刚2 1西安交通大学生物医学分析技术与仪器研究所 2西安天隆科技有限公司 3山东省动物疾病预防与控制中心2009年4月30日摘要：病原检测方法及仪器是人感染猪流感防控的关键环节，针对实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]分子诊断核酸检测技术的先进性以及国产试剂和仪器的成熟性，本文分析了该技术在以往禽流感检测被采用的国家标准以及使用的广泛性，最后介绍了最新发布的美国CDC《针对人感染猪流感病毒治疗和预防的临时指南》和我国卫生部《人感染猪流感预防控制技术指南（试行）》，两部法规都将实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]确定为人感染猪流感实验室检测的确诊方法。从以上情况可以获知：实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术在人感染猪流感诊断中具有先进、快速、成熟、合法的特点，是一种法定的主流技术，将来实施中，国产化仪器和试剂都有保障。关键词：人感染猪流感 猪流感诊断 快速检测 实时定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] Real-time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]全球性的人感染猪流感公共卫生事件发展势头迅猛，发生国家众多，世界卫生组织29日晚已将全球流感大流行警告级别从4级提高到5级，我国也于28日召开了国务院常务会议对防控进行了部署。现在已进入关键的防控措施落实阶段，其中检测与诊断技术至关重要。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术在以往禽流感诊断中的应用众所周知，虽虽然本次人感染猪流感事件的病毒基因序列还在进一步确立当中，但本次疫情病原学基础明确，属于RNA病毒感染性疾病。回顾近年来感染RNA病毒的烈性传染病，如SARS、禽流感，世界卫生组织及我国卫生行政和技术部门相继制定了较为成熟的实验室检测和诊断标准，其中我国颁布的应用实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法进行实验室检测和快速诊断的标准如《GB/T 19438.1—2004禽流感病毒通用荧光RT—[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》、《GB/T 19438.2—2004 H5亚型禽流感病毒荧光RT—[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》、《GB/T 19438.3—2004 H7亚型禽流感病毒荧光RT—[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》等，同时我们也注意到近年来国家针对食品安全尤其是乳品检测和食物致病菌检测的实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测标准，如《SN/T 1632.3-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法：荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法》和《SN/T 1870-2007 食品中致病菌检测方法：实时[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法》。以上实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术在禽流感及其它方面检测的国家标准是该技术在当前的人感染猪流感诊断中应用的基础和前提。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术及在我国卫生应急中的应用要求 实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术（Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction简称Real Time [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]，如果用于RNA检测，这被称为逆转录实时[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]即Real-time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]）是实时[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法，它是指对DNA或经过反转入（RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]）的RNA通过聚合酶链式反应并实时监测DNA的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异DNA（RNA）起始量存在相关性，从而实现定量检测。Real Time [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]的基本目标是精确测量和鉴别非常微量的特异性核酸，从而可通过监测CT值而实现对原始目标基因的含量定量。目前被普遍使用的多种常规[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法如各种凝胶电泳[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法，终点荧光定量法或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]-ELISA法叫做终点[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法最大的优点是克服了终点[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法进入平台期或叫饱和期后定量的较大误差，实现DNA/RNA的精确定量。普通[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术发明于1983年，而实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术发明于上世纪九十年代并于1996年生产出了世界上第一台实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪，实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术得以实现的技术要素主要有荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]试剂盒和实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪，我国荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]试剂盒研发实力强大，生产厂家较多，临床诊断的品种如HBV/HCV及禽流感诊断试剂盒性能优良、供应充足，基本实现国产化。在猪流感病毒RNA核酸序列明确的情况下，利用现有的试剂研发平台，人感染猪流感实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]诊断试剂盒很快就会面世。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪由于技术含量高，只有少数几家中国企业有能力生产如西安天隆科技有限公司生产的TL-988系列仪器不但取得了发明专利、国家科学技术奖、国家重点新产品证书、医疗器械注册证，而且被国家发改委确立为国家高技术产业化示范工程2008年生物医学工程专项，产品性能达到国际先进水平，在乳品检测行业市场占有率比进口仪器还高[1-3]。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪应用广泛，1999年开始，西方发达国家尝试将[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]应用于临床传染病诊断、食品安全检测以及血液筛查，目前已相当普及。2008年12月13日中国卫生部下发《卫生应急队伍装备参考目录》（卫办应急发[2008]207号），其中要求县级以上卫生应急队伍建设中必须配备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪和实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪作为传染病控制类装备。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术在猪流感诊断中的作用已有法规确立在人感染猪流感病毒出现以前，针对猪与猪传染的传统猪流感疫情，近年来我国科技人员经过不懈努力，探索快速检测与诊断方法，发表了一系列应用实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测的研究论文[4-5]。人感染猪流感疫情发生后，美国疾病预防控制中心（CDC）于2009年4月28日发布了针对人感染猪流感病毒治疗和预防临时指南，西安天隆科技有限公司在第一时间将其翻译成中文版本[6]。其中规定了确诊病例的诊断方法：具有急性发烧呼吸道疾病的临床症状并且经实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] (real-time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url])或病毒分离培养 (viral culture)实验室检测方法检验证实感染A（H1N1）型猪流感病毒。卫生部办公厅于4月30日印发了《人感染猪流感预防控制技术指南（试行）》的通知》[7]，其中在实验室检测和病例诊断报告章节，内容如下：检测程序呼吸道标本应首先应用real time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法检测A型流感病毒的M基因、Swine（ H1N1）的HA基因和NP基因，以及质控对照RNP基因。同时，接种MDCK细胞或SPF鸡胚进行病毒分离，并测定病毒的全基因组序列。 推荐检测方法用Real-time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法检测猪流行性感冒（ H1N1病毒）病毒。 其他检测方法 快速流感抗原检测 病毒培养免疫荧光法（或装配的IFA ） 显然，上述卫生部法规中，与“其他检测方法”不同，实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法被法定为人感染猪流感诊断的推荐检测方法。参考文献：1. Nian-cai Peng（彭年才）, Chun-lin Wang ,Li-li Zhang ,Miao-lin Lu ,Zhen-xi Zhang: Asymmetric [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] method in generation of HBV ssDNA for pyrosequencing, Academic Journal of Xi’an Jiaotong University,VOL.21 No.1,Feb 2009，54-562. 彭年才，张镇西，李明：乳制品中阪崎肠杆菌的快速检测，食品安全导刊，08.7：96-1003. 彭年才，苏明权，张镇西：乳品检测中实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪的研制，中国乳品工业，200705：62-644. 段廷云，陈红英，崔保安等：实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测H1N1亚型猪流感病毒，畜牧兽医学报，2008。39（6）：752-7565. 张春明，乔传玲，陈艳等，猪流感病毒M基因实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]诊断方法的建立，中国预防兽医学报，2008。20（10）：805-8096. 美国CDC针对人感染猪流感病毒治疗和预防的临时指南（中英文全文）http://www.medtl.com/ckxw.asp?id=757.中国卫生部：人感染猪流感预防控制技术指南（试行）http://www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohwsyjbgs/s3577/200904/40319.htm

彭年才12 张镇西1 兰邹然3 黄兵3 李红东2 李明2 苗保刚2 1西安交通大学生物医学分析技术与仪器研究所 2西安天隆科技有限公司 3山东省动物疾病预防与控制中心2009年4月30日摘要：病原检测方法及仪器是人感染猪流感防控的关键环节，针对实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]分子诊断核酸检测技术的先进性以及国产试剂和仪器的成熟性，本文分析了该技术在以往禽流感检测被采用的国家标准以及使用的广泛性，最后介绍了最新发布的美国CDC《针对人感染猪流感病毒治疗和预防的临时指南》和我国卫生部《人感染猪流感预防控制技术指南（试行）》，两部法规都将实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]确定为人感染猪流感实验室检测的确诊方法。从以上情况可以获知：实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术在人感染猪流感诊断中具有先进、快速、成熟、合法的特点，是一种法定的主流技术，将来实施中，国产化仪器和试剂都有保障。关键词：人感染猪流感 猪流感诊断 快速检测 实时定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] Real-time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]全球性的人感染猪流感公共卫生事件发展势头迅猛，发生国家众多，世界卫生组织29日晚已将全球流感大流行警告级别从4级提高到5级，我国也于28日召开了国务院常务会议对防控进行了部署。现在已进入关键的防控措施落实阶段，其中检测与诊断技术至关重要。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术在以往禽流感诊断中的应用众所周知，虽虽然本次人感染猪流感事件的病毒基因序列还在进一步确立当中，但本次疫情病原学基础明确，属于RNA病毒感染性疾病。回顾近年来感染RNA病毒的烈性传染病，如SARS、禽流感，世界卫生组织及我国卫生行政和技术部门相继制定了较为成熟的实验室检测和诊断标准，其中我国颁布的应用实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法进行实验室检测和快速诊断的标准如《GB/T 19438.1—2004禽流感病毒通用荧光RT—[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》、《GB/T 19438.2—2004 H5亚型禽流感病毒荧光RT—[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》、《GB/T 19438.3—2004 H7亚型禽流感病毒荧光RT—[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》等，同时我们也注意到近年来国家针对食品安全尤其是乳品检测和食物致病菌检测的实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测标准，如《SN/T 1632.3-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法：荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法》和《SN/T 1870-2007 食品中致病菌检测方法：实时[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法》。以上实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术在禽流感及其它方面检测的国家标准是该技术在当前的人感染猪流感诊断中应用的基础和前提。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术及在我国卫生应急中的应用要求 实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术（Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction简称Real Time [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]，如果用于RNA检测，这被称为逆转录实时[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]即Real-time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]）是实时[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法，它是指对DNA或经过反转入（RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]）的RNA通过聚合酶链式反应并实时监测DNA的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异DNA（RNA）起始量存在相关性，从而实现定量检测。Real Time [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]的基本目标是精确测量和鉴别非常微量的特异性核酸，从而可通过监测CT值而实现对原始目标基因的含量定量。目前被普遍使用的多种常规[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法如各种凝胶电泳[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法，终点荧光定量法或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]-ELISA法叫做终点[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法最大的优点是克服了终点[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法进入平台期或叫饱和期后定量的较大误差，实现DNA/RNA的精确定量。普通[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术发明于1983年，而实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术发明于上世纪九十年代并于1996年生产出了世界上第一台实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪，实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术得以实现的技术要素主要有荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]试剂盒和实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪，我国荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]试剂盒研发实力强大，生产厂家较多，临床诊断的品种如HBV/HCV及禽流感诊断试剂盒性能优良、供应充足，基本实现国产化。在猪流感病毒RNA核酸序列明确的情况下，利用现有的试剂研发平台，人感染猪流感实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]诊断试剂盒很快就会面世。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪由于技术含量高，只有少数几家中国企业有能力生产如西安天隆科技有限公司生产的TL-988系列仪器不但取得了发明专利、国家科学技术奖、国家重点新产品证书、医疗器械注册证，而且被国家发改委确立为国家高技术产业化示范工程2008年生物医学工程专项，产品性能达到国际先进水平，在乳品检测行业市场占有率比进口仪器还高[1-3]。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪应用广泛，1999年开始，西方发达国家尝试将[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]应用于临床传染病诊断、食品安全检测以及血液筛查，目前已相当普及。2008年12月13日中国卫生部下发《卫生应急队伍装备参考目录》（卫办应急发[2008]207号），其中要求县级以上卫生应急队伍建设中必须配备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪和实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪作为传染病控制类装备。实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术在猪流感诊断中的作用已有法规确立在人感染猪流感病毒出现以前，针对猪与猪传染的传统猪流感疫情，近年来我国科技人员经过不懈努力，探索快速检测与诊断方法，发表了一系列应用实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测的研究论文[4-5]。人感染猪流感疫情发生后，美国疾病预防控制中心（CDC）于2009年4月28日发布了针对人感染猪流感病毒治疗和预防临时指南，西安天隆科技有限公司在第一时间将其翻译成中文版本[6]。其中规定了确诊病例的诊断方法：具有急性发烧呼吸道疾病的临床症状并且经实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] (real-time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url])或病毒分离培养 (viral culture)实验室检测方法检验证实感染A（H1N1）型猪流感病毒。卫生部办公厅于4月30日印发了《人感染猪流感预防控制技术指南（试行）》的通知》[7]，其中在实验室检测和病例诊断报告章节，内容如下：检测程序呼吸道标本应首先应用real time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法检测A型流感病毒的M基因、Swine（ H1N1）的HA基因和NP基因，以及质控对照RNP基因。同时，接种MDCK细胞或SPF鸡胚进行病毒分离，并测定病毒的全基因组序列。 推荐检测方法用Real-time RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法检测猪流行性感冒（ H1N1病毒）病毒。 其他检测方法 快速流感抗原检测 病毒培养免疫荧光法（或装配的IFA ） 显然，上述卫生部法规中，与“其他检测方法”不同，实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法被法定为人感染猪流感诊断的推荐检测方法。参考文献：1. Nian-cai Peng（彭年才）, Chun-lin Wang ,Li-li Zhang ,Miao-lin Lu ,Zhen-xi Zhang: Asymmetric [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] method in generation of HBV ssDNA for pyrosequencing, Academic Journal of Xi’an Jiaotong University,VOL.21 No.1,Feb 2009，54-562. 彭年才，张镇西，李明：乳制品中阪崎肠杆菌的快速检测，食品安全导刊，08.7：96-1003. 彭年才，苏明权，张镇西：乳品检测中实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪的研制，中国乳品工业，200705：62-644. 段廷云，陈红英，崔保安等：实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测H1N1亚型猪流感病毒，畜牧兽医学报，2008。39（6）：752-7565. 张春明，乔传玲，陈艳等，猪流感病毒M基因实时荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]诊断方法的建立，中国预防兽医学报，2008。20（10）：805-8096. 美国CDC针对人感染猪流感病毒治疗和预防的临时指南（中英文全文）http://www.medtl.com/ckxw.asp?id=757.中国卫生部：人感染猪流感预防控制技术指南（试行）http://www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohwsyjbgs/s3577/200904/40319.htm

近年来，生物技术已成为当今世界高技术发展最快的领域之一，基因组学、蛋白质组学、干细胞、生物制药等前沿生物技术被广泛应用于医药、环境、食品、能源等重要领域，对提高人类健康水平、改善环境、提高农业与工业的产量与质量等问题上发挥着重要作用。与此同时，生物技术的快速发展也带动了体外诊断试剂的应用与开发，并不断促进其拓宽种类。随着国家医疗保障政策的完善，以及人们保健意识的提高，体外诊断试剂产业已成为当今世界上最活跃、发展最快的行业之一。 慕尼黑上海分析生化展（analytica China）是中国乃至亚洲最大的分析、实验室技术、诊断和生化技术领域的专业博览会，自2002年首次登陆中国，每两年在上海举办一次，至今已成功举办六届。2014年9月24-26日，第七届慕尼黑上海分析生化展（analytica China 2014）将在上海新国际博览中心N1、N2和N3馆隆重召开。本届展会将紧密把握现代生物技术与生命科学领域的发展热点，特设生物技术、生命科学与诊断展区，旨在为行业企业与用户提供一个更广泛、更深入交流与合作的良好平台。 analytica China 2014预计将吸引来自超过20个国家及地区约700家中外展商，展示面积将达30,000平方米。其中“生物技术、生命科学与诊断馆”展示面积约10,000平方米，目前已参展企业包括：Life technologies、Thermo Fisher Scientific、Eppendorf、BRAND、GE Healthcare、Hamilton、Tecan、Roche罗氏、Abcam、梅里埃、3M、蔡司、Pall、Merk Millipore、博奥、Tedia、Corning等等。众多国内外知名企业将集中展示生命科学领域最先进的仪器设备、生化试剂，诊断仪器和试剂、耗材配件和技术服务等产品，是最新生物技术方法和系统解决方案的交流盛会。同时该展区内将专门设置“技术服务专区”，也将是展会的一大亮点和特色之一。 随着展会规模的不断壮大，展会质量与专业化程度也越来越高。安捷伦科技（中国）有限公司全球副总裁，大中华区总经理霍丰先生对展会[size=10.0pt

近年来，生物技术已成为当今世界高技术发展最快的领域之一，基因组学、蛋白质组学、干细胞、生物制药等前沿生物技术被广泛应用于医药、环境、食品、能源等重要领域，对提高人类健康水平、改善环境、提高农业与工业的产量与质量等问题上发挥着重要作用。与此同时，生物技术的快速发展也带动了体外诊断试剂的应用与开发，并不断促进其拓宽种类。随着国家医疗保障政策的完善，以及人们保健意识的提高，体外诊断试剂产业已成为当今世界上最活跃、发展最快的行业之一。 慕尼黑上海分析生化展（analytica China）是中国乃至亚洲最大的分析、实验室技术、诊断和生化技术领域的专业博览会，自2002年首次登陆中国，每两年在上海举办一次，至今已成功举办六届。2014年9月24-26日，第七届慕尼黑上海分析生化展（analytica China 2014）将在上海新国际博览中心N1、N2和N3馆隆重召开。本届展会将紧密把握现代生物技术与生命科学领域的发展热点，特设生物技术、生命科学与诊断展区，旨在为行业企业与用户提供一个更广泛、更深入交流与合作的良好平台。 analytica China 2014预计将吸引来自超过20个国家及地区约700家中外展商，展示面积将达30,000平方米。其中“生物技术、生命科学与诊断馆”展示面积约10,000平方米，目前已参展企业包括：Life technologies、Thermo Fisher Scientific、Eppendorf、BRAND、GE Healthcare、Hamilton、Tecan、Roche罗氏、Abcam、梅里埃、3M、蔡司、Pall、Merk Millipore、博奥、Tedia、Corning等等。众多国内外知名企业将集中展示生命科学领域最先进的仪器设备、生化试剂，诊断仪器和试剂、耗材配件和技术服务等产品，是最新生物技术方法和系统解决方案的交流盛会。同时该展区内将专门设置“技术服务专区”，也将是展会的一大亮点和特色之一。 随着展会规模的不断壮大，展会质量与专业化程度也越来越高。安捷伦科技（中国）有限公司全球副总裁，大中华区总经理霍丰先生对展会[size=10.0pt

在美剧《House M.D.》中，一个古怪的天才大叔为我们展示了一幕幕精彩的人间悲喜剧。作为诊断部门王牌的House医生既敏锐深刻又任性刻薄，乖戾的伪装下藏着一颗柔软脆弱的内心。虽然该剧在医学问题上常常走得太远，但在诊断逻辑上相当真实。无所不能的House团队总能在最后时刻从最不起眼的地方找出病因，做出正确的诊断——尽管这个诊断有时并不能给患者带来康复。经过《House M.D.》的演绎，“诊断”这个医学常用词汇突然间变得神奇而富有魅力，做出正确的诊断更是一件很酷的事。然而在现实中，尤其在中国，诊断过程给患者们的印象就没有这么富有传奇色彩了。当人们身体不舒服到医院看病时，“诊断”给人们的印象就是寥寥数语的对话和无休止的抽血、拍片，心电图，B超，CT以至核磁检查……难怪当下不少人形容医生的工作就是“开单子”。运气好经过检查能找出原因的，治疗就是吃药、打点滴甚至做手术；运气不好检查一通之后一无所获的，治疗还是吃药、打点滴解除症状，有时甚至试图进行“探查”手术找病因。很多人对后者意见更大，“西医就是头痛医头，脚痛医脚”的说法流传甚广。那么，“诊断”到底是一种怎样的过程，正确的医学诊断从哪里来呢？

诊断芯片制备过程的SOP1. 靶基因DNA的制备 在分别装有HBV、HCV及植物基因片段的质粒的0.5 ml eppendorf 管中加入100 µ l双蒸水，将质粒稀释至4~6 ng/µ l，作为PCR扩增模板。在50 µ l PCR扩增体系中掺入上述模板1~2 µ l，每种模板做10管，共9种模板，分别包括HBV、HCV及植物基因的片段各3个，每管为50µ l体系。 在0.5 ml eppendorf 管中依次加入下列试剂，组成50µ l PCR扩增体系：ddH2O 41 µ l10  buffer 5 µ l10mmol/L dNTP 1 µ l10mmol/L primer 1 µ ltemplate（HBV、HCV及植物基因） 1 µ lTaq 酶 0.5 µ l 混合后，将eppendorf管置于MJ Research PTC-225 PCR仪中按下列程序进行PCR反应： ①95℃ 90 sec ②95℃ 30 sec ③58℃ 30 sec ④72℃ 30 sec ⑤goto② for 35 cycles ⑥72℃ 300 sec ⑦4℃ forever（待机） ⑧END 将PCR产物（10管）合并，经电泳确定条带的专一性，达到专一条带方可用于点样，同时测OD值，OD260/OD280≥1.8。 PCR产物中加入1/10体积的醋酸钠溶液（浓度为3 mol/L，pH 5.2）及等体积的异丙醇，于-20℃沉淀2 hr后室温干燥。2. 点样 用双蒸水将上述各靶基因的终浓度调至500 ng/µ l，使每个点的点样量达到500 ng，并将384孔板放入Cartesian点样仪内，按设计要求编写点样程序(如下图)，再放入表面特殊处理的玻片，启动点样程序（nxl-1），将靶基因的PCR产物点于玻片上，经过0.5 hr水合，再自然干燥，放在4℃保存。 。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。821阳HBV1HBV5HBV61 SPOTHCV1HCV4HCV5821阴413阳3. 芯片的质量标准 随机抽检上述诊断芯片，必须满足下例条件才是合格产品。3.1 对检测监控系统(由4个对照元素构成)：1)821阳为阳性对照1，该植物基因的 RNA在抽提血清RNA时按一定的比例加入到待检的血清样品中，并随着实验流程进行逆转录。若杂交后该样品有杂交信号为正常。 2)1 SPOT阴性对照1，若杂交后检测无信号，表明点样液无污染。3)821阴为阴性对照2，若杂交后检测无信号，表明正常。4)413为阳性对照2，该植物基因DNA在PCR扩增掺入荧光底物时按一定的比例加入到逆转录的产物中，以检测荧光底物的掺入效率。若杂交后该样品有杂交信号为正常。3.2 对疾病诊断系统：1)正常血清不产生任何杂交信号。2)HBV阳性血清在HBV区应为阳性(即有杂交信号) ，在HCV区应为阴性(即无杂交信号)。3)HCV阳性血清在HCV区应为阳性(即有杂交信号) ，在HBV区应为阴性(即无杂交信号)。4)HCV和HBV阳性血清在HCV和HBV区均为阳性(即有杂交信号)。 诊断芯片检测过程的SOP1.血清DNA和RNA模板的抽提1)取血清50 µ l,加入抽提液100 µ l,与100 µ l的氯仿-异戊醇振荡混匀2)2000 rpm离心10分钟3)小心吸取上清( 切不可将酚吸上)4)加入等体积的异丙醇及2 µ l的tRNA,混匀5)-20℃沉淀1小时6)13000 rpm,离心15分钟7)弃上清,加400 µ l的75%的乙醇,13000 rpm 离心5分钟后晾干其中抽提液成分如下:异硫氰酸胍 92.6 g 柠檬酸钠(B46) 13 ml 超纯水 26 ml 十二烷基肌氨酸钠(B17) 13 ml β-巯基乙醇(B10) 1.3 ml 饱和酚 130 ml tRNA (库存半成品) 8.5 ml2.RT-PCR:1)向含RNA沉淀的eppendorf管内，依次加入反转录试剂,成分如下： 超纯水 6µ l 821引物 0.5ul 10 µ mol/L HCV反转录引物 0.5 µ l 0.1 mol/L DTT 1µ l 5 first strand buffer 2 µ l 10 mmol/L dATP-dGTP-dCTP-dTTP mixture 0.25 µ l用手指弹eppendorf管底部充分溶解沉淀，混匀样品，5000 rpm离心5 sec，置于70℃水浴锅内保温5min。2)取出该eppendorf管，置于冰上1 min，5000 rpm离心5 sec。3)向该eppendorf管内加入0.2 µ l SuperScriptⅡ反转录酶，用手指弹eppendorf管底部10次，混匀样品，5000 rpm离心5 sec，置于42℃水浴锅内保温20 min。4)从水浴锅内取出eppendorf管，备用。吸取10ul的RT产物入0.2ul的薄壁管再加入PCR-mixtureⅠ如下: ddH2O 31.5 µ l10×Buffer 5 ul10mmol/L dNTP 1ul 10mmol/L HCV primer 1ul10mmol/L 821引物 1ul Taq酶 0.5ul将薄壁管置于MJ Research PTC-225 PCR仪中按下列程序进行PCR反应： ①95℃ 1.5 min ②95℃ 30 sec ③55℃ 30 sec ④72℃ 1min ⑤Goto② for 35 cycles ⑥72℃ 5 min 4. PCR标记探针吸取5 µ l步骤3中制备的PCR产物于0.2 ml 薄壁管管中，并加入PCR-mixtureⅡ试剂,成分如下： ddH2O 30µ l10 Buffer 5 µ l10 mmol/L dATP-dGTP-dCTP mixture 1 µ l1 mmol/L dUTP 1 µ l10 µ mol/L HCV primer mixtureHBV primer mixture812 primer mixture413 primer mixture 各 1 µ l413PCR产物 1 ul 尿嘧啶糖基化酶 0.5U再加入标记试剂:0.1 mmol/L Cy5-dUTP 1µ l Taq酶 0.5 µ l用手指弹eppendorf管底部10下，混匀样品。1) 将薄壁管置于MJ Research PTC-225 PCR仪中按下列程序进行PCR反应：①95℃ 1.5 min②95℃ 30 sec ③58℃ 30 sec ④72℃ 30sec ⑤Goto② for 35 cycles ⑥72℃ 5 min ⑦4℃ forever（待机） ⑧END2) 取出薄壁管，-20℃蔽光保存。4. 杂交1) 将3中制备的探针于真空抽干机中抽干，加入6.6µ l预热的杂交试剂Ⅰ溶液，在避光条件下充分振荡溶解探针，再加入6.6ul杂交试剂Ⅱ,混匀后于5000 rpm离心10 sec。2) 将溶解的探针和待杂交的玻片置于95℃的水浴锅内变性2min。 3) 将变性好的探针避光冰浴, 将变性好的玻片插入到盛有无水乙醇的染色缸内室温放置30 sec，取出, 置于95℃水浴锅外罩上烤干。4) 取13 µ l的上述探针，滴于玻片上，用镊子上端将18 18mm 盖玻片盖于其上，玻片置于专用玻片盒中，封上PARAFILM。5) 将玻片盒置于6层纱布的湿润的饭盒内，将饭盒置于Robbins Model 1000杂交炉内，42℃杂交，3 hr。6) 立即放入盛有2 SSC+0.2% SDS溶液的烧杯中，使盖玻片自然脱落。7) 准备两个染色缸和一个500ml烧杯(内置玻片架)，分别装有1 SSC+0.2%SDS，1 SSC+0.2%Tween-20，0.1 SSC,两个染色缸放入60℃水浴锅中。烧杯置于磁力搅拌器上.8) 将玻片依次浸入以上三个染色缸中洗涤10 min,在烧杯中搅拌洗涤10分钟.9) 避光晾干后扫描。注：Cy5对光敏感，因此操作时尽量避光。 5. 结果分析将诊断芯片插入ScanArray 3000扫描仪中进行扫描，并使用Imagene软件分析杂交结果。扫描结果显示检测监控系统中阳性对照有荧光信号 阴性对照没有荧光信号，再在疾病诊断系统中根据信号的有无来判断待测样品是阴性还是阳性。诊断芯片试剂配制的SOP一、主要试剂的配置1. 诊断芯片核酸抽提液配方异硫氰酸胍 92.6 g柠檬酸钠(B46) 13 ml超纯水 26 ml十二烷基肌氨酸钠(B17) 13 mlβ-巯基乙醇(B10) 1.3 ml饱和酚 130 ml tRNA (库存半成品) 8.5 ml注：4℃保存；单管分装 500 µ l RNA提取液＋500 µ l氯仿:异戊醇(49:1)；DNA病毒抽提液中饱和酚换为平衡酚。1) tRNA配制：tRNA 1 mg +超纯水 2 ml

1. 临床常见细菌的鉴定：2009年Seng等用1660株细菌对MALDI-TOF MS常规鉴定细菌进行前瞻性研究，结果显示MALDI-TOF MS是一种经济、快速、准确的常规细菌鉴定方法，未来有可能取代传统的革兰染色和生化方法。此后，MALDI-TOF MS在临床应用迅速增加。在Medline数据库用“MALDI tof bacteria identification”作为MeSH检索词，从2009至2013年1月发表相关文章467篇，其中2011至2013年发表323篇。由此可见MALDI-TOF MS近几年在临床微生物检验中备受关注。　　另外，MALDI-TOF MS对弯曲菌、螺杆菌、军团菌等苛氧菌、少见菌等的鉴定，解决了微生物实验室对这类病原菌的鉴定、临床对其感染的诊断和治疗、流行病学资料缺失等的瓶颈问题。　　2. 样本直接检测：应用MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血培养标本中的细菌和真菌可以极大地提高检测速度。大量的研究尝试用不同的方法来处理血标本，由于血培养基各异、数据库和分析软件等差异都对样本前处理的方法标准化造成了一定的困难。布鲁克公司研发了血培养标本的前处理试剂盒，用于阳性血培养标本直接质谱鉴定的前处理。研究显示革兰阴性菌的准确率优于革兰阳性菌，而对厌氧菌、α-溶血性链球菌和多个细菌混合样本的鉴定存在困难。新的富集技术的应用（比如附加特异性抗体亲和特定蛋白）以及相应分析软件的改进，将使MALDI-TOF MS直接用于血液病原菌的检验成为可能，即MALDI-TOF MS作为一种快速、使用简便，低成本消耗的检测技术，有望取代传统血培养检测技术，为血培养中病原菌的快速诊断提供有力支持。此外，临床的尿液和脑脊液标本也可以经一定处理后，用质谱技术进行蛋白谱的分析用于疾病的辅助诊断。　　3. 真菌鉴定：有学者应用MALDI-TOF MS对327株菌（其中19株为酵母菌）在种的水平上鉴定正确率为61株为酵母菌）的鉴定正确率为92%。　　4. 非结核分枝杆菌鉴定：国外学者对107株分枝杆菌临床分离株（包括结核分枝杆菌复合体），利用声波降解的热失活方法和利用玻璃珠进行细胞裂解的方法进行失活和提取，再利用MALDI-TOF MS方法进行鉴定，发现两种方法在种/属水平上成功鉴定率分别为82.2%和88.8%。周昭彦等采用MALDI-TOF MS对83株非结核分枝杆菌（临床分离非结核分枝杆菌15株和医院供水系统环境分离非结核分枝杆菌68株）进行快速鉴定方法及其可行性、准确性和重复性进行研究，并得出结论认为MALDI-TOF MS可快速准确地鉴定临床和环境分离的非结核分枝杆菌，在临床实验室常规鉴定方面有着较好的应用前景。　　5. 质谱技术检测病原菌耐药性：除快速鉴定外，质谱技术也被尝试用于检测一些临床常见的耐药基因，例如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、万古霉素耐药的肠球菌等的识别，鲍曼不动杆菌相关的耐药机制与产生条件等，为控制耐药菌株播散流行及治疗提供新的策略。　　质谱技术为临床微生物实验室提供了快速而准确鉴定细菌、分枝杆菌、真菌等的方法，其中临床标本的直接鉴定成为未来研究的方向。将MALDI-TOF MS与全自动药敏检测仪相连，整合到实验室自动化流水线后，可以提高检测速度，缩短患者住院时间，提高疗效，降低医院和患者的经济负担。另外MALDI-TOF MS与其他分子生物学检测技术联合，可以对临床产酶菌株的检测方法、基因分型及测序、蛋白质组学方面开展更加深入的研究。MALDI-TOF MS有望成为临床实验室微生物鉴定分型等领域发展的重要方向。

目前全球医疗决策中约有2/3是基于诊断信息作出的，但在诊断方面的支出却只占医疗总支出的约1%。业内专家指出，进一步提升诊断技术和手段，增加诊断支出，可以为人类疾病预防、诊断、治疗提供更科学的决策依据，也是未来发展的重要方向。　　体外诊断产业正是伴随现代检验医学的发展而产生的，同时其产业化发展又极大推动了新科学技术在医学检验学、基础医学和药物学等学科的发展应用。　　优势：价格低，技术差别小　　所谓的体外诊断试剂是指在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，对人体样本进行体外检测的试剂。　　“目前我国诊断试剂市场正处于高速成长期。”北京五洲东方科技发展有限公司市场部业务经理张力在接受《中国科学报》采访时表示。　　数据显示，我国体外诊断行业在过去几年的复合增长率为16.47%，同期全球市场的复合增长率为6.07%。尽管国内市场增速快于全球，但目前只占全球市场比重的3.86%。由此可见，国内体外诊断市场存在巨大的增长空间。　　其实，体外诊断产业一直是国内重点支持的产业之一，国务院、发展改革委等多个国家部门出台了多项政策，对于促进体外诊断试剂、诊断仪器、诊断相关酶制剂等体外诊断产业的发展具有积极的意义，增强了国内诊断试剂企业的竞争力。　　“体外诊断试剂单独管理，对经营公司实行双门槛。”张力说道，“随着医改进入深水区，药品招标降价与取消药品加成政策，都将促使医院选择性价比高的国产诊断试剂。”　　目前，我国有1.8万余家医院、300多个血站，同时，数以千计的体检中心以及数以百计的独立实验室正如雨后春笋般异军突起，一些独立的医学检验实验室也方兴未艾，这些为体外诊断试剂的发展提供了广阔的市场空间。　　“相对于大型仪器的高门槛而言，国内外诊断试剂技术差别较小，国内产品具有价格优势，取代进口产品的可能性比较大。”张力认为。　　生物谷首席咨询师杨春在接受媒体采访时表示，全球体外诊断市场规模将从2009年的380亿美元发展到2017年的640亿美元，而中国市场发展迅猛：2009年100亿元，2013年市场规模达210亿元，已经翻番。未来仍将保持年均20%以上的增速。　　诊断试剂产品方面已经实现进口替代。

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常见水体异色现象的诊断

[size=16px]动物疫病诊断仪是一种先进的仪器，用于快速、准确地诊断动物疫病。它采用免疫学、分子生物学、微生物学等技术，通过对动物样本（如血液、尿液、粪便等）的检测，可以迅速确定动物是否感染了某种疫病，以及疫病的种类和严重程度。这种诊断仪不仅有助于兽医及时采取治疗措施，保障动物的健康和公共卫生安全，同时也为动物疫病的防控提供了有力的技术支持。动物疫病诊断仪的工作原理主要是利用先进的生物技术和分子生物学技术，通过检测样本中的病原体DNA或RNA，来确定动物是否感染了疾病。这种技术具有高灵敏度、高特异性、高准确性等优点，可以在短时间内完成检测，大大提高了诊断效率。此外，动物疫病诊断仪的操作也相对简便，经过短期培训的操作人员就能熟练使用。这使得兽医和其他相关人员能够在短时间内快速识别动物的疾病状态，从而及时采取必要的治疗措施。总的来说，动物疫病诊断仪是现代化兽医诊断的重要工具，它的出现极大地提高了动物疾病的诊断水平，为保障动物健康和公共卫生安全发挥了重要作用。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403131059129737_5814_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]

如何选择细菌的诊断试验？有什么依据没？

水处理生物诊断------指示生物，共三部份．[~115863~][~115864~][~115865~]

监测水质在线仪器状态的[url=https://www.hach.com.cn/product/prognosys]预诊断系统[/url]是只能用于探头和电极式的在线仪器还是也可以用于别的仪器啊，不是很懂这个系统的原理，我们项目采购，经销商给推荐的仪器里面也有这个，请问实用不。

请教下嗜肺军团和志贺氏菌的诊断血清验收记录怎么写呀

目前，越来越多的仪器公司推出了远程诊断软件，一些软件或者使用上的问题，工程师可以远程操作用户电脑帮助解决。这一服务在一定程度上既能提升厂商服务效率、降低售后成本，又能降低用户售后支出。然而，你是否担心厂商远程接入用户电脑时造成用户实验数据的外泄呢？[color=#ff0000][b]都来说说你是如何看待远程诊断的？[/b][/color]关注更多仪器后市场动态，对话安捷伦、岛津等各大主流厂商售后负责人，请戳以下链接报名！[b][b][url=https://www.instrument.com.cn/news/20190318/481905.shtml][color=#3366ff]聚焦仪器后市场，助力行业发展——ACCSI2019仪器后市场发展分论坛[/color][/url][/b][/b]

1100诊断软件安装后连接机器时柱温箱和检测器连接不上，客服说要刷新固件，想问下怎么刷新？