核酸量值

主体内容（操作步骤）：开机：打开计数器后面的开关，显示Instrument Initialising 启动需数秒Instrument Ready选择“Set up”键，这部可在快速吸光度读数时省略设对照“Set reference”将石英杯插入孔中，按箭头指示方向使光线方向在前到后轴线上。测样品：Instrument up 设置如果键入错误数字，set按“C”重新开始set up and enter按set up选择并输入与你样品相关的参数，要退出“set up”按任一计数键，要重新开始，按“set up”石英杯杯内径（mm）按“select”从0.5、1、5、10中选择^Prrneter(打印)按“select”选择ON或OFF 按｀Enter＇^Sample number(样品数)键入需要数目按 “enter”样品数，每次测量样品时都会自动累加。^Date（日期）键入日期，按“enter”（每日调节）^Moth（月）选择正确月，按“enter”^year (年)键入年，按“enter”backarouad compersation 320nm（背景补偿）320nm按“select”选择Yes or No^Dilute(稀释)键入稀释度，计算浓度，范围1.00-9999.9Factor（因子）按“select”选RNA dsDNA ssDNA对合成寡核苷酸选择ssDNABases碱基，键入A C G T V数通过核酸碱基对组成，计算分子量，以每毫升分子数显示结果按“enter”循环碱基，范围0-1000Oligo length （寡核苷酸长度）以碱基单位键入样本寡核苷酸长度以pmol/ul显示结果，按“enter”范围0-100Molecular weightMW（分子量）按“select”在计算值从A 、C 、G 、T、 V或使用者输入分子量值间选者，按“enter”Ratio 键入A260/A280吸光度比值（你希望样本达到的）按“enter”Concentration（浓度）键入希望浓度（pmol/ul）按“enter”Protein（蛋白）键入系数^Molarity（名称克分子浓度）键入盐浓度测对照:按 Set ref，听到“嘟”一声后将含对照石英杯插入样品槽中，听到“嘟”一声后，取出参照，屏幕上显示吸光度测样品步骤同对照，按“Sample”后同对照。

核酸提取(核酸的分离与纯化)主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开,但在分离核酸时,应保证核酸分子一级结构的完整性,并排除其他分子污染。核酸提取方法一般包括细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤,而每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。操作过程中首先通过物理、化学或酶解作用裂解细胞,使核酸释放出来,并去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂肪类等生物大分子的过程。在此基础上,沉淀核酸、去除盐类和有机试剂等杂质,从而得到纯化的核酸。核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器。在传统的手工核酸提取过程中通常采用离心澄清的方法，操作时费时费力。近年来,出现了磁珠分离技术，利用磁珠在一定条件下对核酸具有很强亲和力的特点，吸附核酸。当条件改变时，磁珠又可以与其吸附的核酸分离,从而得到纯化的核酸。这种方法简便、高效、易于操作，是目前核酸提取仪采用的主要方法。具体来说，磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂，操作简单，符合核酸自动化提取要求，是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。

UV分光光度计是一款常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。那么在试验中UV分光光度计又是如何定量的呢?下面我们就以核酸的定量为例来讲述UV分光光度计是如何定量的。核酸的定量 核酸的定量是UV分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非是一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。其实试验过程中就是这样的，常常会出现一些不确定的因素，导致试验结果的偏差，有些因素是可以避免的，然而有些因素又是不可避免的。

上级安排ld要求全民核酸必须核酸

一、测量的基本概念 量值：一般由一个数乘以测量单位所表示的特定量的大小。 测量：以确定量值为目的的一组操作。 国际计量基(标) 准：经国际协议承认的测量标准,在国际上作为对有关量的其他测量标准定值的依据。 国家计量基(标) 准：经国家决定承认的测量标准,在国家内部作为对有关量的其他测量标准定值的依据。 有证标准物质：有证书的标准物质,其中一种或多种特性值是用建立溯源性的程序确定,使之可溯源到准确复现地表示该特性值的测量单位,每一种出证的特性值都有给定置信水平的不确定度。 溯源性：通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链,使测量结果或计量标准的值能够与规定的参考标准,通常是国家计量基(标) 准或国际计量基(标)准联系起来的特性。这种特性使所有的同种量值,都可以按这条比较链通过校准向测量的源头追溯,即溯源到同一个测量基准(国家基准或国际基准) ,这样才能确保计量单位统一,量值准确可靠,才具有可比性、可重复性和可复现性,而其途径就是按比较链,向计量基准的追溯。 计量标准：为了定义、实现、保存或复现量的单位或一个、多个量值,用作参考的实物量具、测量仪器、参考物质或测量系统。它是按国家规定的准确度等级,作为检定依据用的计量器具或标准物质；它处于中间环节,起着承上启下的作用,即将计量基准所复现的单位量值,通过检定逐级传递到工作计量器具,从而确保工作计量器具量值的准确可靠,确保全国测量活动达到统一。为使各项计量标准能在正常技术状态下进行工作,保证量值的溯源性,《计量法》规定建立计量标准,并要依法考核合格,这样才有资格进行量值传递。 计量标准考核：对用于开展计量检定、进行量值传递资格的计量认证。它包括对计量标准器及配套设备、环境条件、人员和管理等四个方面的技术状态考核。计量标准考核是计量监督的一项基本内容,也是实施《计量法》的技术基础和依据。 计量器具：能用以直接或间接测出被测对象量值的装置、仪器仪表、量具和用于统一量值的标准物质,包括计理基准器具、计量标准器具和工作计量器具。 　　计量基准器具：即国家计量基准器具,简称计量基准,是指用以复现和保存计量单位量值,经国务院计理行政部门批准作为统一全国量值最高依据的计量器具。 　　计量标准器具：简称计量标准,是指准确度低于计量基准的,用于检定其他计量标准或工作计量器具的计量器具。 计量检定：为评定计量器具的计量性能,确定其是否合格所进行的全部工作。

这次疫情严重，我们几乎是24小时做一次核酸，检测压力一定非常大，作为分析人深知核酸检测以为什么，如果有需要自己也想加入到检测人员中，做好筛查工作，愿疫情早日结束。

参考量值和参与量值是不是一样的？下面这句话是否正确测量正确度是无穷多次重复测量所得量值的平均值与一个参与量值间的一致程度。

高质量核酸

核酸纯化柱（微/小提）http://www.biocomma.cn/images/2mlxiaoti.jpg核酸纯化小提柱产品组成外管医疗级PP，2ml，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，收集离心试剂。内管医疗级PP，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，底部鲁尔接口设计，方便试剂流出。筛板特殊纤维材料，在高速离心过程中，支撑硅胶膜，保证硅胶膜的完整性，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，厚度仅为0.3mm，孔径50um，致孔，孔隙率只有不到百分之二十，相比市场上同类产品，比面积小，静电小，DNA吸附极大降低。硅胶膜孔径1um，高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA，低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP，固定筛板与硅胶膜。核酸纯化微提柱http://www.biocomma.cn/images/2mlweiti.jpg产品组成外管医疗级PP，2ml，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，用来收集离心液。内管医疗级PP，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，底部鲁尔接口设计，方便离心液收集。装配位(这里指装配硅胶膜、筛板和压圈处)1直径为7.4mm，与市场上核酸小量提取同等规格。装配位2，直径为5.4mm，此处为微量核酸提取装配位，面积为小量提取装配位的一半。筛板特殊纤维材料，在高速离心过程中，支撑硅胶膜，保证硅胶膜的完整性，耐受酸碱和大部分的有机溶剂，厚度仅为0.3-0.5mm，孔径50um，孔隙率只有不到百分之二十，相比市场上同类产品，比面积小，静电小，DNA吸附极低。硅胶膜孔径1um，高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA，低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP，固定筛板与硅胶膜。CommaPrep™核酸微提/小提柱可用在核酸提取过程（见图1）中过柱结合、洗涤、洗脱步骤中http://www.biocomma.cn/images/nucleic-2.jpg 图1 核酸提取过程核酸吸附量：核酸纯化小提柱：0-20ug核酸纯化微提柱：0-10ug规格：2ml离心管+吸附柱 适用范围：核酸提取原理是在特定溶液环境下（高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质（硅胶膜）上，洗涤去除杂质后，再改 变溶液环境使DN A溶解到纯水或TE中。DNA提取：核酸提取柱用于基因组DNA抽提，不需要使用平衡液。抽提缓冲液，或者结合液中需要胍盐（如硫氰酸胍等） 辅助DNA吸附到膜上。RNA提取：裂解液建议使用含有硫氰酸胍（异硫氰酸胍）可以抑制RNA酶活性，保证RNA酶完整性；可以配合Trizol使用，样品经Trizo裂解后，氯仿分相去除蛋白等杂质，取上层过柱，然后70%乙醇洗涤，即可得到纯净的RNA。【注意事项】 1.上柱前溶液的PH值应小于7；2.洗涤液中的乙醇浓度不得低于50%，一般55%--80%之间。3.最后洗脱，可以用去离子水或者TE（10 mmol/LTris-Cl，1 mmol/L EDTA (pH8.0)）。如果长期保存DNA，建议使用TE。定购信息Cat#品名离心柱规格提取量包装DNAK1001CommaPrep™质粒小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1004CommaPrep™琼脂糖凝胶回收纯化柱2ml0-10μg100套/包DNAK1007CommaPrep™ 核酸纯化柱（微小提）2ml0-10μg100套/包DNAK1008CommaPrep™基因组小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1009CommaPrep™RNA小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1002CommaPrep™质粒中提纯化柱15ml0-100μg20套/包DNAK1003CommaPrep™质粒大提纯化柱50ml0-500μg10套/包定制

任何一级质量检验机构，无论是在正常的检测活动中，还是在接受各种形式的认可、认证中，计量器具的量值溯源或比对以及其它形式的证明其准确性的验证，都是一个实验室必不可缺的工作内容。在现行的《产品质量检验机构计量认证技术考核规范》和《国家产品质量监督检验中心审查认可细则》中，贯穿于其中的是“人、机、料、法、环”5个主要素，而在这5 个主要素中：机（仪器设备）、料（标准物质、消耗性材料）和环（环境条件）都涉及到量值检定问题。ISO/IEC导则25 : 1990 所涉及的13个要素中的第7条“设施和环境”、第8 条“设备和标准物质”、第9条“测量的可溯源性和校准”都与量值溯源有直接关系，第5条“质量体系、审核和评审”也与量值溯源有间接关系。因此，搞好量值溯源或比对是一个实验室开展质量活动的基础和充分必要条件。 量值溯源和量值传递的区别 量值溯源性是通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准联系起来的一种特性。它要求实验室针对自己检测标准的相关量值，主动地与上一级检定机构取得联系，追溯高于自己准确度（一般遵循1/10或1/3法则）的量值与之比较，确定自己的准确性。而量值传递是上一级量值检定部门将自身的量值传递给低于其准确度等级的部门，主要是指国家强制性检定的内容。溯源和传递的主要区别在于溯源是自下而上的活动，带有主动性；量值传递是自上而下的活动，带有强制性。 实现量值溯源的形式及无法溯源时的措施 检定／校验：主要是对通用仪器和专用仪器中通用部门的检定／校验，依据的方法是国家或行业（包括烟草行业）的检定规程，或者是部门编制的校验规程。检定／校验人员应由国家计量授权部门或授权人员进行。 自校：主要是对专用仪器的行业检定规程或实验室自编的专用仪器校验规程中政府授权检定机构无法检定／校验的部分进行自校。 能力验证：属于同类实验室进行的相关项目、相关参数的共同测试，其结果可以间接验证量值的准确性。 比对：属于无法直接实现量值溯源时的一种计量方式，是对不同计量器具进行的同参数、同量程的相互比对。 从设备管理的角度实现量值溯源和验证比对 购置检定／校验：新仪器设备到货后应按照检定／校验规程进行检定／校验或自校，即使有检定证书，也应考察检定单位的资质证明是否能在溯源图上找到合适的位置，否则必须进行检定。周期检定：按各实验室独立编制的《检定／校验周期表》进行定期的检定／校验或自校。临时检定：当仪器出现故障经维修正常后，应当对故障相关部分的量值进行检定／校验或自校。 实现量值溯源和比对 对人员要求 检定／校验人员要具有相应量值检定的政府授权。 在“关于计量认证中对检测仪器设备进行检定、校验和检验的规定”中要求自校人员应是从事该项目5 年以上的技术人员；而ISO导则25中未作年限上的要求。笔者认为自校人员首先应该是熟悉仪器操作、了解仪器原理和具有一定的分析判断能力的检验人员和设备管理员，不同的实验室可根据自身的情况按以上要求确定本部门的自校人员。 比对的种类很多，当比对用于间接证明仪器的计量性能时，应由熟悉该仪器原理、具有一定经验和熟悉检测的人员进行。 对于检定结果的判定，随着专用仪器的发展，计量部门已不可能对所有专用仪器出具检定报告，而多是测试报告，其结果要由我们依据行业检定规程或部门的校验规程的技术要求进行判定。行业标准的不断推出，对相应标准器具的要求可能出现与国家通用检定规程在技术要求方面不一致的地方，主要原因是对受检产品合格判定的准确度及分辨率要求的级别不同。这就要求我们依据受检产品检测标准的技术要求，按照1/10或1/3法则判定受检仪器是否合格。 参考标准的建立 实验室有一些常用的、数量大且品种多的同类计量器具，这些器具如全部由政府授权的检定部门检定，一会造成工作的繁琐，二会造成经费的浪费。这时实验室应考虑设立计量员（应经当地计量所授权）和建立参考标准。由计量员以参考标准标定本实验室的工作器具。如各实验室检定的玻璃仪器，数量和种类特别多，各实验室应派人去当地计量所考取玻璃仪器检定员证书，同时购买高于工作器具准确度、分辨率的参考标准，并每年将此溯源。然后定期检定本实验室在用的工作玻璃仪器。 标准物质的控制 标准物质从种类上可分为有证标准物质和无证标准物质2 种。从保证计量特性来讲，讲究溯源性、实效性和可比性。 对于有证标准物质来讲，如烟气分析用的CO标准气体，既要求购置时厂方提供标准物质检测中心或被授权部门的被授权号，同时还要有检定值和有效期。有效期超过后，要么拿回原单位进行重新标定，要么作废停止使用。重新标定体现了溯源性，过期作废体现了实效性。多数标准物质尤其是成本低的标准物质一般遵循其实效性。 无证标准物质，主要是没有授权号，而必须作为标准物质使用的物质。此时必须在自己实验室的程序文件中作出量值比对的规定，一般要定期与同级别的实验室进行直接或间接的比对，也可采用相应方法进行实验室内部的验证。 运行检查的要求 在ISO导则25中多次提到，发现质量问题时应对前期工作质量进行追溯。在仪器设备的周期检定时，若发现计量不合格，如检定周期1 年，则应该追溯1年来的工作质量和检测数据的准确性。如果在检定周期中经常地对仪器设备进行检查，及时发现问题，追溯的难度也会大大减少。 在检测实验室，计量器具、标准物质的溯源或比对是一个实验室开展正常工作的基础，为确保检测结果在全国以至国际范围内的可比性，必须进行科学的溯源、量值传递以及验证比对。

1、核酸抽提原理 简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。 经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和盐 (如Tris、EDTA、NaCl 等)。盐的作用，除了提供一个合适的裂解环境 (如 Tris)，还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏(如 EDTA)、维持核酸结构的稳定 (如 NaCl)等。去污剂则是通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中还可能加入蛋白酶；利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂 (如GIT、GuHCl 等) 裂解的，该方法已经成为了 RNA 抽提的主流，却不是基因组 DNA 抽提的主流。 最常用的纯化方法，一是PC 抽提 + 醇沉淀，二是介质纯化。第一种方法是利用 PC对裂解体系进行反复抽提以去除蛋白质，实现核酸与蛋白质的分离；再用醇将核酸沉淀下来，实现核酸与盐的分离。第二种方法则是利用某些固项介质，在某些特定的条件下，选择性地吸附核酸，而不吸附蛋白质及盐的特点，实现核酸与蛋白质及盐的分离。高盐沉淀去除蛋白质是第一种纯化方法的一个变体，省略了 PC操作的麻烦。当然，也有不纯化的抽提方法，但是用途多局限于简单的 PCR。其它杂质 – 如多糖、多酚等 -的去除，基本上都是在这两种方法的基础上，通过增加一些特别的试剂，或者增加一些额外的步骤来实现的。2、了解你的实验样品 如果你研究某个实验样品，并且要抽提它的核酸，以下的信息一定要先行收集：该样品的核酸含量、酶含量、特殊杂质含量。如果你对样品的特点一无所知，当样品稍微有一点复杂时，抽提核酸的实验就会碰到许多问题。以血液为例，如果你不知道鸟的血液中有核细胞的含量是人血的千倍左右，而使用人血一样的起始量去抽提鸟血的基因组 DNA，怎么可能成功？失败了又怎么知道原因所在？同时，只有对实验样品有所了解，才能正确选择裂解方法。 绝大部分情况下，使用新鲜样品可以获得最好的结果。对一些杂质含量高的样品，如果使用新鲜样品抽提基因组 DNA 是碰到杂质残留过大的问题，可以试一下 -20C保存一天后再抽提的对策，可能会有意想不到的效果。样品如果因为某些原因必须先行保存，也要先简化一下样品：血液最好只保存有核细胞；将样品分割后保存，避免反复冻融。如果实验室不具备合适的保存条件，将样品先裂解后再保存，是一个不错的选择。3、裂解方法的评价 含蛋白酶的裂解方法，可以认为是抽提基因组 DNA 的首选。裂解包括膜蛋白的游离和与基因组 DNA相连接的蛋白质的游离。蛋白酶的作用是使蛋白质变小，故而对蛋白质的游离有巨大的促进作用；同时，巨大的基因组 DNA是很容易“缠”住大分子的东西的，蛋白质被蛋白酶消化变小后，则不容易被基因组 DNA“缠”住，有利于蛋白质在纯化操作中的去除，使最终获得的基因组 DNA 的纯度更高。另外一个思路是，如果基因组 DNA 与蛋白质“缠”在一起，在纯化的过程中有两种可能：如果基因组 DNA 的特性占优势，则纯化时以 DNA的形式被保留下来，导致蛋白质的残留；如果蛋白质的特性占优势，则纯化时以蛋白质的形式被去除，导致 DNA 的损失。有些样品，如肌肉，即使是RNA 抽提，也强烈建议使用含蛋白酶的裂解液 (或者在操作中的某个时候使用蛋白酶消化蛋白质)，原因在于这些样品中的蛋白质，是非常难以去除的。该方法是获得最大得率和最高纯度的基础。 不使用蛋白酶的去污剂裂解方法，仍然在细胞基因组 DNA抽提方面有优势，尤其是当得率和纯度要求不是最高，而经济性及操作简单很重要时。控制好裂解液/样品的比例是该方法成功的关键。该方法结合高盐沉淀，可以实现最简单的操作，但纯度及得率的稳定性可能会比用 PC 抽提的差一些。 高浓度蛋白质变性剂 (如 GIT、GuHCl 等)的裂解方法，是抽提 RNA 的首选。总 RNA 的抽提，最重要的是快速裂解细胞膜，至于与基因组 DNA 相连接的蛋白质的裂解以及基因组与蛋白质“缠”住的问题，因为都不会对以后的纯化产生大的影响，可以不考虑。高浓度蛋白质变性剂能快速破坏细胞膜，进而迅速抑制住细胞内的 RNA酶，从而确保了 RNA 的完整性。除了极少量不适用该方法的样品 – 主要是植物，其它绝大部分样品的 RNA的抽提，都可以以高浓度的蛋白质变性剂为基础的。该方法也可用于基因组 DNA 抽提，非常快速简单，但纯度不是很高。 含 CTAB的裂解液，几乎成为富含多糖的样品，如细菌、植物的基因组 DNA 抽提的首选裂解方法。该方法成功与否与两个因素有关：一是 CTAB的质量，二是洗涤的彻底程度。CTAB 的质量对裂解效率有很大的影响，而且，似乎还说不清楚原因，因为即使是同一公司生产的纯度一样的CTAB，批号不同，效果就可能差别很大。洗涤去除 CTAB 要比其它的盐难一些，同时， CTAB的少量残留也会对酶活性有巨大影响，所以洗涤是否彻底也是该方法成功与否的关键。裂解时的温度，多使用65C；但如果发现降解严重或者得率太低，可以试一下 37C – 45C 这个相对低温的区域。 SDS碱裂解法是质粒抽提的首选裂解方法，具有快速、得率高、几乎无基因组 DNA污染的特点。控制好裂解液/菌体的比例和操作的温和是该方法成功的关键。蛋白质的沉淀效率在 4C 会更好一些，所以，加入溶液 III 后在 4C静置一段时间以及采用 4C 离心去蛋白质，都可以提高质量。该方法不一定要使用 PC 纯化，但结合 PC 纯化，可以获得纯度很高的质粒。RNA的去除可以靠在溶液 I 中加入 RNase A (100ug/ml) 或者在最后的溶解液中加入 RNase A (25 ug/ml)来实现。总的感觉是，在溶液 I 中使用 RNase A，RNA 的残留少一些。不过，经典沉淀几乎没有办法彻底去除 RNA 残留。另外，对大质粒(50 kb 以上)，该方法可能会有问题。 PCR模板的简易裂解方法，也是使用面很广的一类方法。该方法的特点是无须纯化，样品被裂解后即可直接取裂解液用于PCR，非常快速。也正因为不纯化，所以，假阴性 (即没有扩增出来的阳性)比例也比较高。该方法最简单的裂解液就是水，复杂一点的就会含有一些不会抑制后续的 PCR 反应，而且能提高裂解效率，甚至还可能部分消除样品内抑制PCR 反应杂质的东西，如 Triton X-100、甲酰胺等。再复杂一点的就会含有诸如 Chelex 100之类的能吸附部分杂质的介质。操作也非常简单，多使用温度的变化来实现样品的裂解，如煮沸、或者高温-低温的多次循环等。该方法最适合从一大堆样品中找出阳性样品，但却不适合用于判断某一个样品是阳性还是阴性。降低样品使用量可以提高阳性率，因为样品量的降低，同时意味着 PCR 的抑制物量的降低。 选择了合适的裂解液，下一步就是要控制好样品与裂解液的比例。这个问题非常重要，但却没有获得足够的重视。严肃的参考资料，都应该会提供一个简单的比例，如1ml 裂解液可以用于 T mg 组织或者 C个细胞；我的建议是，你的样品量绝对要小于资料所提供的。起始样品用多大，并没有具体的说法。如果不是样品量有限，则以能抽提出满足数次成功实验所需的核酸量，作为决定样品起始量的基础，会比较合理的。不要因为 1ml 裂解液可以抽提 100mg 样品，就一定使用 100mg样品。裂解液的用量，表面上与抽提的结果 (纯度及得率)没有关系，然而，在实际操作中，对结果是有比较大的影响的。裂解液的用量原则是：确保能彻底裂解样品，同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低，将导致沉淀效率低，影响得率；浓度过高，去除杂质的过程复杂且不彻底，导致纯度下降。另外，裂解液的用量是以样品中蛋白质的含量为基准的，而不是以核酸含量为基准，这一点务必牢记。4、纯化方法 评价 PC 抽提/醇沉淀方法，是一个永不过时的方法。稳定、可靠、经济、方便。PC抽提可以彻底去除蛋白质，醇沉淀可以去除盐，对于一般的干净的样品 (杂质为蛋白质)，该方法完全可以获得高质量的核酸。虽然每次 PC抽提都会损失一部分核酸(因为不可能将水相全部移取)，以及低浓度核酸的醇沉淀效率低，但这些问题都可以靠操作的调整而得以解决或者减少影响。该方法的最大的问题是不适合大规模抽提。 PC抽提是去除蛋白质的一个非常有效的手段。苯酚能使蛋白质变性，变性后的蛋白质从水相中被析出，处于苯酚中或者苯酚/水相之间。PC抽提的关键是，一要混匀彻底，二要用量足够。彻底混匀，才能确保苯酚与蛋白质的充分接触，使蛋白质完全变性。许多人总是担心混匀的剧烈程度是否会对核酸，尤其是基因组 DNA 造成破坏，实际上大可不必如此小心。剧烈的混匀操作，是会部分打断大分子的基因组 DNA，但该破坏作用不会强烈到 DNA变成 10kb 以内的小片段。手剧烈晃动混匀后，基因组 DNA 的片段，大部分会大于 20kb，这个大小，除了一些特别的要求外，对 PCR和酶切，都是完全适用的。如果要求的片段非常大，如构建文库用，则不能使用剧烈的混匀方法，而只能来回温和颠倒混匀 –此时的关键是：裂解液的比例要足够大，使体系不要太粘稠。用量要足够，是因为苯酚去除蛋白质是有一定的饱和度的。超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可

以后核酸常态化，到哪里都要48小时核酸，时间还是从采样开始，大家对此怎么看？

想做核酸检测，但因为是新手，所以N多问题都不是很懂，还望各位大神不吝赐教！1、用质谱对核酸进行定性分析，这样的方法可行吗？2、如果可行，那是不是就是将我做出的质谱图拿来与质谱数据库中的该核酸标准质谱图进行对比，以确定我所得出的就是我想检测的核酸呢？这个不知道思路是不是这样的，如果不是，还望帮我指条明路http://assets.dxycdn.com/gitrepo/bbs/emotions/default/078.gif 如果是这样思路的话，那标准质谱图/质谱数据库我该去哪儿找呢？

核酸提取仪有两种分类分类方式，一种是按用途进行分类，另一种是按照应用试剂的不同进行分类。（1）按照用途分类：一类是自动液体工作站，自动液体工作站是功能非常强大的设备，液体分液、吸液等自动完成，甚至可以整合扩展、检测等仪器设备，实现标本提取、扩增、检测全自动化。提取核酸只是其功能的一个应用，不太适合常规实验室提取核酸，一般都应用在单一类标本并且一次提取标本量非常大（至少96个，一般几百个）的实验需求上。自动工作站的平台建立及平台的运作，需要比较大的资金。另一类是小型的自动化仪器，小型的自动化仪器是通过运行结构的特殊设计来达到自动提取核酸的目的，可以在任何实验室得到应用，最近几年有很多机型陆续投放市场。（2）根据应用的试剂不同分类：一类是应用磁珠法试剂的仪器，另一类是应用离心柱法试剂的仪器。应用磁珠法的自动核酸提取仪操作简便，容易自动化，是目前市场上的主流，如QAGEN、Lab-Aid 820等仪器。与传统的手工操作相比核酸提取仪的优势：核酸提取仪一般具有以下的特点：(1) 无交叉污染：仪器部件未接触到生物学样本；(2) 自动化系统：每次提取工作，操作者只需要做好安装工作，布置好孔板（提供提取所需要的试剂）.提取整个过程都不需要人为的帮助，仪器自动完成；(3)提取控制：在提取过程中，如果操作者需要，该系统允许您对提取过程进行控制。

顶雨排队做核酸

求购核酸蛋白仪,

所在社区需要做核酸检测了

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]5月1日到6月30日，上海常态化核酸检测点实行免费核酸检测。[/size][/font]

会不会以后每天见面第一句话是“您今天做核酸了吗”？

注意到最近我们用的iS10红外的能量值有点下降，在实验设置里看到的能量值从装机时的6点多下降到5点多。重置光学台，自动准直后无改善。今天把分子筛干燥剂更换了，下午看的时候能量值又上升到6点多了。是因为湿度的缘故吗？

标准物质的量值溯源 标准物质是进行量值传递，实现测量准确一致的手段之一。通过不同等级的标准物质，依序将国际单位制基本测量单位的量值传递到实际测量中去，这个准确度由高至低的过程，称为量值的“传递过程”。而在实际测量中，需要检验现场测量中的量值是否准确。使用标准物质，按准确度由低至高地逐级进行量值的追溯，直至基本测量单位，这一过程常称为量值的“溯源过程”。通过标准物质进行量值的传递和溯源，构成了一个完整的量值传递体系。 在量值传递溯源体系中，不同等级的标准物质构成了体系的层级。SI基本测量单位是统一标准物质量值的“标度”，它体现了测量的最高准确度，是确定标准物质量值并进行传递溯源的基础。

1 前言90年代以来，我国的环境保护工作已逐步形成了一系列强化管理制度，要求环境监测必须为环境管理服务，为环境管理提供技术支持、技术监督和技术服务。环境监测不仅要做好浓度控制的监测，而且要进一步开拓污染物总量控制的监测；在完成城市环境监测的同时，要逐步开拓生态环境的监测。因此，环境监测数据的重要性正日益引起各方面的共同关注。环境监测的对象具有成分复杂，随机多变，时间、空间、量级上分布广泛，不易准确测量等特点。因此，环境监测的质量要求包含了保证环境监测数据正确可靠的全部活动和措施，主要内容有：监测分析的方法、采样方式、样品的处理与保存、质量控制程序、仪器设备的选择和校准、试剂及基准物质的选用、人员的技术培训、实验室的环境、数据的记录与处理等。环境监测中要求监测数据具有代表性、完整性、准确性、精密性和可比性，在监测数据的使用中，要求具有权威性和法律性。2 量值传递和量值溯源计量法中的量值传递，就是通过计量器具的检定和校准，将国家基准所复现的计量单位量值，通过各等级计量标准传递到工作计量器具，以保证被溯源对象量值的准确和一致。计量法中的量值溯源，是通过连续的比较链，使测量结果能够与国家计量基准或国际计量基准联系起来，同样保证了被测对象量值的准确和一致。用国家计量基准校准1级标准物质，再用1级标准物质校准2级标准物质，以达到校准工作计量器具的准确性。反过来，通过工作计量器具的准确校验，来比较2级标准物质，比较1级标准物质，与国家计量基准物质相一致，使工作计量器具达到准确。3 环境监测工作的量值传递和量值溯源环境监测工作的量值传递和量值溯源见图2所示。在环境监测过程中，用2级环境标准物质，通过计量器具的检定和校准，将国家基准所复现的计量单位量值，传递到工作计量器具，以保证被溯对象量值的准确和一致。再通过连续的比较链，用质量控制样品来检验计量器具的准确性，得出检验数据；通过环境监测中的质量评审，不合格的纠正，合格的被接受，保证了被测对象量值的准确和一致。4 结语4.1在环境监测中使用环境标准物质和计量器具作量值传递及使用质量控制样品和计量器具作为量值溯源，提高了环境监测数据的准确性、精密性和可比性。4.2 标准物质是一种传递准确度的工具，是量值传递的物质基础，只有当它和标准的测量方法及通过鉴定的计量仪器结合在一起，即测量系统经过标准化并达到稳定后方可使用标准物质，也才能发挥其应有的作用。4.3 在环境监测中要选择与待测样品的基本组成和待测成分的浓度相似的标准物质，严禁使用过期失效的标准物质。

大家好! 我们正在画量值溯源图,其中实验室有一个设备的精度等级很高,校准机构找了一圈只找到一个和我们量值范围一样的,精度等级一样的机构,他们通过比对的方法作了校准,还发了校准报告,这个仪器设备所涉及的测试又是我们的主要检测项目,如果我们的溯源图要画, 我有2个问题: 1, 溯源的途径有校准, 检定还有测试,那么通过比对的方法实现的溯源是校准,检定还是测试还是比对呢?2, CNAS认可这个通过比对实现的溯源吗? 3, 是否只要画出实验室主要检测项目的量值溯源图就可以了? 谢谢大家的帮忙.

现在还需要做核酸吗？

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