纯化工艺

随着生物制药技术的发展，高细胞密度和高产物滴度的细胞培养已经成为一种趋势，这给传统下游澄清工艺带来了越来越大的负担，使得我们传统深层过滤器载量下降，整体纯化效率降低。

抗体是一种结构复杂的生物大分子，由多个氨基酸组成。即便是天然的抗体，其结构也是各不相同。抗体药物中使用到的单克隆抗体(IgG)在生产工艺(细胞培养、分离纯化)与保存过程中易发生不均一性的变化，包括抗体蛋白的二聚体、多聚体、脱酰胺化、末端氨基酸突变以及糖链部分的结构差异。这些不均一性会使药物的药效、安全性方面受到影响。 而随着生产工艺及分析手段的进步，单克隆抗体类药物的质量控制将更加严格。高效液相色谱(HPLC)作为一种分离技术，在蛋白质、抗体等生物大分子的分离分析方面已得到越来越广泛的应用。近年来，东曹生物的科学家们一直致力于在生物药分离领域开发具有革新性的色谱分离介质，基于尺寸排阻、离子交换色谱等多种HPLC分离技术实现了对抗体多聚体、各种抗体异构体的高效分离，在抗体药物的质量控制方面提供了有效地监控手段。

Opentrons 核酸提取纯化工作站基于全自动磁珠提取原理，能够自动化进行核酸分离和纯化工作流程，单次最多可处理24 个样本。核酸提取工作站包括 OT-2 自动化移液平台、高精度移液器、磁珠纯化模块、热振荡仪(选配)、温控模块、 Opentrons 核酸提取应用协议和 Opentrons 专用吸头耗材。

Opentrons OT-2 磁珠蛋白质纯化工作站基于磁珠提取原理，可以自动化完成小规模蛋白质纯化和蛋白质组学样品处理。磁珠蛋白质纯化工作站可以支持多种工作流程。

Opentrons 双流色谱 (DFC) 蛋白质纯化工作站，可以使用 BiotageⓇPhyTip Ⓡ 色谱柱对多达96个样品进行小规模蛋白质纯化。

制备LC广泛应用于制药、食品和化工等领域，用于从混合物中纯化目标化合物、寻找天然产品中的活性成分，以及对杂质或未知化合物进行结构分析等。确立与其他组分或杂质组分分离的条件对高纯度回收目标化合物尤其重要，但在制备LC条件下，所使用的样品数量以及流动相消耗量较多，因此，因此分离条件的优化通常在分析规模上进行，以最大限度地降低这些消耗。在优化过程中，在优化过程中，需要调整各种 HPLC 条件（包括梯度曲线），以找到最佳分离条件，对于创建每个分析方法编辑而言都是一个耗时的过程。另外，在完成分析尺度的条件研究后，需要规模放大和制备目标化合物，而随后的纯度/回收率确认中，需要将制备的馏分从馏分收集器转移到自动进样器，这也是一项费时费力的工作。本文为您介绍使用NexeraPrep系列的分析制备LC-MS系统，完成分析尺度的分离条件研究、扩大分馏规模、纯度/回收率确认等一系列制备纯化工作流程（图1）的案例。

本文介绍了使用超临界流体色谱分析仪，进行药物制备纯化和干燥的案例。使用常规HPLC制备纯化药物化合物具有如下问题：处理时间长，劳力成本高、有机溶剂消耗大等。与此相比，SFC制备纯化法具有多种优点，不仅适用于新化合物的分析，还可应用于常规化合物的纯化，提高其工作效率。

随着寡核苷酸的应用越来越广泛，不少企业相继加入寡核苷酸合成的赛道。想得到优质高纯度的核酸不是一件简单的事，对于不同的寡核苷酸链，应该如何选择合适的纯化方法？

目标化合物的合成、筛选和纯化在药物研发实验室中进行。这些步骤耗时长，因此需要改进整个工作流。本文介绍了一种利用专门设计的软件，实现对LC/MS进行目标物筛选和制备纯化的全新自动化操作流程。

该煤制乙二醇项目年产2*20万吨乙二醇，是国家发改委产业结构调整明确鼓励建设的新型煤化工项目。项目以煤炭为原料生产乙二醇，建设内容主要包括煤气化装置、粗煤气净化装置、乙二醇合成装置三大生产工序以及空分装置、锅炉房、脱盐水站、空压站。冷冻站、污水处理站等配套的公辅设施。项目估算总投资约为65.47亿元，分两期建设。其中一期20万吨/年审定概算未36.24亿元，于2014年9月20日正式开工建设。乙二醇又名“甘醇”，简称EG，是一种非常重要的化工基础有机原料，主要用于生产聚酯、防冻剂等，用途十分广泛。本项目采用华东理工大学/上海浦景公司二步法乙二醇工艺专利技术，工艺流程组织合理、选用技术先进可靠，采用水煤浆水冷壁清华炉煤气化技术、耐硫变换、低温甲醇洗净化、CO冷箱分离、PSA提氢、羰化偶联加氢工艺制取乙二醇。

制备LC广泛应用于制药、食品和化工等领域，用于从混合物中纯化目标化合物、寻找天然产品中的活性成分，以及对杂质或未知化合物进行结构分析等。在应用文章“01-00650-JP”中，介绍了一种分析/制备转换LC-MS系统，其制备纯化工作流程如图1所示。该系统包括：在分析模式下的分离条件研究、规模放大、馏分纯度/回收率确认等。具体来说，使用分析方法开发软件Lab Solutions MD进行分析方法的高效的分离条件优化，确保目标化合物（氢化皮质酮）及其附近共洗脱的峰之间有充分的分离。然后，进行负载量研究，规模放大，使用UV信号作为触发信号进行制备。本文为您介绍通过使用比UV更具定性能力的MS触发收集信号，可最大限度地排除杂质的混入，提高氢化皮质酮纯度的制备案例。

摘要：在目前的各种半导体材料热氧化工艺中，往往需要对正负压力进行准确控制并对温度变化做出快速的响应，为此本文提出了热氧化工艺的正负压力控制解决方案。解决方案的核心是基于动态平衡法分别对进气和排气流量进行快速调节，具体采用了具有分程控制功能和传感器自动切换功能的超高精度真空压力控制器，并结合高速电控针阀和电控球阀，可很好的实现0.1Torr~800Torr绝对压力范围内的正负压快速准确控制。

差示扫描量热（DSC）和调制式扫描量热（MDSC）技术在复合材料固化工艺研究中应用十分广泛，但无法应用于固化过程的在线实时监测。为解决固化过程在线监测难题、提高固化工艺优化效率和实现仿真计算的准确考核，需要在差示扫描量热技术基础上开发低价、简便、高效和实时的新型热分析技术。本文介绍了近些年来在此领域内最具代表性的几篇研究报道，分析这些研究的特点和不足，并提出了后续工作的技术方案。

磁珠是用于生物分子简单有效分离和纯化的必不可少的实验室工具。有多种不同表面涂层和化学成分的磁珠可供选择，它们只需最少量的处理，便能用于DNA、RNA和蛋白质的磁性净化。我们提出的自动化解决方案包括创新的正排量配药技术，结合离心式液体抽空，以增压磁珠净化工作流程。

实验证明，这种手性分离方法可从ACQUITY UPC2系统成功放大至Prep SFC 150 Mgm系统。通过重迭进样完成了对铱(III)络合物对映体的纯化，得到对映体纯的馏分， 并且样品回收率良好。对铱(III)络合物对映体进行SFC纯化，有利于更好地控制受其影响的光物理 性质和相关应用。

在样品纯化过程中你是否遇到过五花八门的难点，这个问题对于做制备纯化的小孙来说有太多值得吐槽的地方，如样品极性太小正相模式不保留、样品极性太大硅胶固定相洗脱不下来、样品溶解度太差纯化过程析出或拖尾严重及洗脱不下来等情况。在分离纯化的过程中，难免会碰到溶解性比较差的物质，这类物质有时会对分离纯化造成一些负面的影响，如由于拖尾而影响分离度，甚至是直接析出导致管路堵塞，或者少量试剂不能完全溶解至澄清，而样品纯化之前一定要有解决溶解度的办法，否则带着问题上样纯化效果一定不会很理想。解决样品溶解度的问题没有固定答案，具体样品需要具体分析，本文主要和大家分享小孙在纯化过程中如何处理溶解度较差的样品。

这是一个用Agilent 1100系列纯化系统AS和PS对红三叶中刺芒柄花素和其它植物性雌激素进行分析型和制备型分离的例子。分析型放大方法可用于在Agilent 1100系列纯化系统AS上分离复杂植物粗提物中的化合物。在这个方法的基础上，进行了按色谱峰收集馏分的制备型分离。• 为了获得更多的植物雌激素物质，使用了Agilent 1100系列纯化系统的馏分合并功能• 通过对馏分的再分析测定了所得化合物的纯度• 根据分析结果将方法放大• 为了在一次运行中得到更大量的目标化合物，在Agilent 1100系列纯化系统PS上用两种不同的色谱柱重复了纯化方法制备规模的结果与在分析型系统上得到的结果相当。

1. Investigator SFC系统可实现简化的手性分离，还可用于纯化和回收薰衣草油等挥发性化合物，无需制备型气相色谱(GC)中必需的复杂样品捕集。2. SFC比GC具有更高的载样量和更短的运行时间。3. 超临界流体色谱(SFC)使用较低的色谱操作温度，这种温度更适合挥发性和不稳定化合物，可提高风味物质和香味物质纯化中固有的低回收率。4. SFC手性纯化方法使用无毒乙醇和CO2作为流动相，这对于供人使用或消费的化合物纯化而言至关重要。5. Investigator SFC系统可通过使用重迭进样提升采集效率，从而提高通量。

分析级制备纯化 行业特点：大多数单次制备纯化量较少，可采用分析级纯化方案 半制备级纯化平台 适合大制备量核苷酸纯化，单次制备量可达200~2000 OD QC质检 HTCS核酸质谱检测系统（基于LTQ系列质谱） DEL-核酸质谱检测系统（基于LTQ质谱） 基因扩增 Realtime PCR----荧光定量PCR仪 核酸药物高端研究 Thermo LTQ-Orbitrap XL高分辨质谱系统

抗体在亲和层析试剂中所占地位日趋重要，所以纯化抗体的方法也倍受关注。抗体通常是从血清、杂交瘤上清或腹水中获得的。尽管直接使用未纯化的抗体溶液可进行一些免疫学实验，但是要获得满意的结果最hao使用纯化的抗体，特别是用于亲和层析的抗体。实际上，纯化的抗体也适用于免疫检测、免疫印迹、酶联试验（ELISA）或细胞染色等。

本文中，合成人员在合成过程中得到了一对顺反异构体，通过减压蒸馏和重结晶的纯化方法无法达到纯度要求，基于这种情况，纯化人员尝试利用快速制备液相色谱仪SepaBean machine配合SepaFlash系列反相纯化柱对样品进行分离纯化。

ACAM529是一种复制缺陷的预防性候选疫苗，在初步的动物实验中已证明其效力，但为满足进一步的动物及临床实验需要，急需一种可规模放大的下游纯化工艺。本实验使用方法结合DS洗提、Benzonase?处理、深层过滤、膜层析及中空纤维超滤/洗滤，有效提高了疫苗总收率。实验中发现，流体动力学剪切压力对于感染性病毒滴度的损耗非常关键，所以将封闭流道板式膜TFF及微珠层析更换成开放流道的中空纤维TFF及膜层析，从而在纯化步骤的每个阶段都可获得更高的感染性病毒收率。动物实验中获得的疫苗免疫源性及保护性效力数据，也确认了工艺的可行性。

蛋白质的产率和纯度是衡量纯化是否成功的重要指标。除有效的色谱分离外，配置良好、可靠的仪器也能影响纯化的成功。制备型反相(RP)液相色谱由于具有高分离能力，经常被用做多肽和小分子亲水蛋白纯化流程的最后一步。虽然大家都知道反相液相色谱所用的溶剂条件会使蛋白结构变性，但也能通过调节适当的条件再使其复性，特别是小分子蛋白。Agilent 1100系列纯化系统是设计良好、合适的反相色谱的系统。

利用具有自学习特点的人工神经网络可实现对酶解过程的模拟仿真，研究从合浦珠母贝肉中制备抗菌肽的最佳工艺条件。采用3 层(5-9-3)人工神经网络法对风味蛋白酶水解合浦珠母贝肉的工艺过程进行模拟和优化，并通过管碟抑菌法对产物的抑菌性质进行分析。结果表明：pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.6%、水解时间4h、料液比7:5，制备得到肽A，抑制鼠伤寒沙门氏菌最强，抑菌圈直径14.20mm，平均肽链长度2.6；pH7.0、水解温度55℃、酶添加量1.7%、水解时间4h、料液比3:2，制备得到肽B，抑制痢疾志贺氏菌最强，抑菌圈直径23.42mm，平均肽链长度2.8；pH6.5、水解温度60℃、酶添加量2.5%、水解时间4h、料液比7:5，制备得到肽C，对单核细胞增生李斯特菌的抑制效果最强，抑菌圈直径16.60mm，平均肽链长度2.5。3 种抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌也具有较强的抑菌效果，抑菌率为74.3%～80.8%。本研究利用人工神经网络优化制备的贝肉抗菌肽克服了纯度低、提取率低等缺点，为合浦珠母贝肉抗菌肽的开发利用提供技术支撑。

制备液相色谱是目前药物开发中纯化化合物所选择的方法。大量粗品用通用方法得到纯化，采用短和快速梯度在约10分钟之内完成。虽然大部分化合物可以通过这些方法得到分离，但分离和纯化立体异构体或非对映异构体需要更长的运行时间，采用等度条件或非常平缓的梯度。在本应用报告中，我们报道了如何在一次运行中多次进样以提高样品产量，节省了宝贵的时间和流动相。

当大家在做分离纯化时遇到水溶性较好的样品首先会采用什么分离纯化方法进行分离呢？这里小编主要讲一些个人小经验，通常小编会优先选择C18 色谱柱进行尝试，因为该色谱柱具有更好的普适性，可解决80%左右的分离纯化任务，并且具有令人满意的分离度，因此成为最广泛应用的分离纯化方法，但它有自己的短板即采用高比例水相作为流动相时会导致疏水塌陷现象，使色谱柱瞬间保留能力下降甚至无保留作用，当遇到这种情况时小编一般会采用C18 AQ柱进行再次尝试。

常见的组成多肽的氨基酸有20种，根据其极性和酸碱性可以分为以下几组：非极性（疏水）、极性（不带电荷）、酸性以及碱性（参见图1）。在一条多肽序列中，如果组成该多肽的氨基酸大多为极性氨基酸（图1中粉红色标出部分），如半胱氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等，那么该多肽可能具有较强的极性，易溶于水。在对该类强极性多肽样品的反相色谱制备纯化过程中，若采用普通的C18分离柱，将会发生疏水坍塌现象（具体请参见三泰科技之前发布的应用案例——《疏水坍塌与AQ反相色谱柱的应用》）。而改良后的C18AQ柱可以很好的适用于强极性或强亲水性样品的分离纯化，在本案例中，利用某强极性多肽作为样品，在C18AQ柱上进行了分离纯化，获得了可用于下一步研究的目标产物。

本文中待纯化的样品来自某制药公司，为氨基多环糖类物质，结构类似于氨基糖苷类抗生素，其极性很大，易溶于水，其分子结构式示意图参见图1，粗品纯度约为88%（HPLC分析结果）。对于此类大极性化合物的分离纯化，根据我们之前的制备纯化经验，样品分子在普通C18分离柱上的保留很弱，因此，考虑采用C18AQ柱对其进行分离纯化。

橡胶受热变软，遇冷变硬、发脆，容易磨损，易溶于汽油等有机溶剂，易起加成反应，容易老化。 为改善橡胶制品的性能，要对生橡胶进行一系列加工，使胶料中的生胶与硫化促进剂发生化学反应，使其交联成为立体网状结构的大分子，从而使胶料具备高强度、高弹性、高耐磨、抗腐蚀等优良性能。2-硫醇基苯并噻唑（即橡胶硫化促进剂M）是一种通用型的硫化促进剂，以硫化钠、邻硝基氯化苯等作为原料，后来逐渐使用环保型促进剂N-环己基-2-苯并噻唑次磺酰胺（CBS），它以促进剂M和环己胺为原料，采用次氯酸钠作为氧化剂。本文使用T960电位滴定仪，对硫化促进剂生产工艺中的硫化钠和次氯酸钠进行检测，试验结果证明其含量符合工艺流程标准。

1. Investigator SFC系统可实现简化的手性分离，还可用于纯化和回收芳樟醇等挥发性化合物，无需制备型气相色谱(GC)中必需的复杂样品捕集。2. SFC比GC具有更高的载样量和更短的运行时间。3. 超临界流体色谱(SFC)使用较低的色谱操作温度，这种温度更适合芳樟醇等挥发性和不稳定化合物，可提高风味物质和香味物质纯化中固有的低回收率。4. SFC手性纯化方法使用无毒乙醇和CO2作为流动相，这对于供人使用或消费的化合物纯化而言至关重要。5. Investigator SFC系统可通过使用重迭进样提升采集效率，从而提高通量。