共聚焦成像

激光共聚焦显微镜可以观察到细胞内已经标记好的蛋白质和分子，为生物学研究提供了更直观的观测方法。如今，激光共聚焦成像已经是一个非常常规的实验操作，应用于生物学各个研究领域中。 在细胞实验中，如果要进行一次激光共聚焦成像，除了要知道相关的显微镜参数设置和操作以外，样品的准备也是非常重要的一环。

今天分享下如何处理玻璃底培养皿、如何选择玻璃底培养皿，让细胞妥妥地贴壁，大家做共聚焦时候能够更得心应手。

共聚焦型激光扫描显微镜广泛应用于生物化学，细胞生物学以及其它生命科学研究领域。时间分辨技术进一步加强了显微镜的功能，如：荧光共振能量转移（FRET）效率的荧光寿命量化测量利用时间分辨成像测量环境参数（pH，离子浓度）基于荧光团浓度的寿命测量基于寿命辨别分子间距的研究提高对荧光信号的甄别能力减少探测器的数量利用寿命衰减时间提高实验分析的精确度

共聚焦显微镜使用技术开发的光学轮廓仪，其共聚焦部分的主要优点是有着极高发光效率的照明硬件和高对比度算法。这些特点使系统成为测量有着陡峭斜面、粗糙的、反光表面和含有异种材料样品的理想设备。高品质干涉光学系统和集成压电扫描器是干涉轮廓仪部分的关键。这项技术对于测量非常光滑至适度粗糙的表面比较理想。这些技术的组合为轮廓仪提供了无限宽广的应用领域。

荧光寿命成像显微术 (FLIM) 是一种利用荧光染料固有特性的成像技术。 除了具有特有的发射光谱外，每个荧光分子还有特有的寿命，它反映了荧光基团在发射光子之前处于激发态的时间。 除了标准的荧光强度测量外，寿命分析还可以提供其他信息。过去，寿命成像一直是一种缓慢、复杂的专业化技术。 只有经验丰富的显微镜专家或物理学家才会使用这种技术。 徕卡显微系统公司处于当今荧光寿命成像技术的前沿。 我们的系统使寿命成像比以往更快、更易于使用，将这项技术的各种优势引入日常的共聚焦成像实验中。

利用共聚焦显微镜的微分干涉法，实时观察方解石解理面在柠檬酸溶液中的溶解过程

对于覆有防反射膜的镜头，我们介绍三个评价案例：彩色共聚焦图像颜色评价、基于反射分光法测定的分光特性评价，以及利用相差干涉法进行表面粗糙度评价。

通过Lasertec的hybrid共聚焦显微镜对OLED行业遇到的缺陷问题进行有效的测量，如ITO平整度、发光层均匀性等缺陷。

白光干涉法在用于不同材料表面的高度测量时，可能出现系统误差。本文通过1）共聚焦、2）白光干涉、3）反射分光、4）AFM 4种方法进行对比测量；对上述误差进行确认。由实验结果，对于几十nm的金属膜，反射分光法最为合适。

共聚焦显微镜和干涉仪是常用的表面形状测量仪器，具有无损，高精度等特点。然而对于基板上的透明薄膜的凹凸形状，对于较薄的膜（1um上下），测量是受到基板反射光的影响，会导致测量失败。如，在测量Si晶圆上的光刻胶的形状时。为解决上述问题，我们推荐反射分光法，测量光刻胶的膜厚，从而得到表面形状信息。

EVIDENT共聚焦助力揭示光感知调控血糖代谢的神经机制

作为Evident生命科学领域旗舰产品，FLUOVIEW FV4000激光扫描共聚焦显微镜自发布以来便备受赞誉。其突破性的SilVIR探测器在多色成像领域表现出色，并有望成为新一代激光扫描显微镜的标杆。本期我们邀请到该款产品的研发团队，分享他们厚积薄发、精益求精的故事。

铜转运蛋白1（CTR1）是一种参与铜和顺铂摄取的转运蛋白。细胞CTR1迁移及其再分配的可视化在铜/顺铂暴露/转运中非常重要。然而，据我们所知，这是一项极具挑战性的任务。在此，通过将共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）和激光剥蚀电感耦合等离子体质谱（LA-ICPMS）与抗CTR1抗体缀合的荧光/元素双功能标签相结合，开发了CTR1的双模式成像策略。标签由罗丹明B和锆金属有机框架（Zr-MOF）组成，用于CLSM荧光成像和LA-ICPMS元件成像。这种双模式成像策略促进了CTR1迁移的可视化，同时提供了通过摄取二价铜或顺铂在HepG2细胞中的CTR1重新分布的信息。目前的双模式成像策略为阐明涉及CTR1的生物学过程提供了深入的信息。

利用共聚焦显微镜，进行半导体激光器的晶圆缺陷检测，以及波导结构的尺寸测量

利用共聚焦显微镜，对SAW滤波器的生产工艺进行品质管理，包括键合晶圆缺陷、各种膜厚、IDT形状等

l 内容分类：技术/应用说明l 应用领域： 生命科学l 主题： 生物荧光l 产品：激光共聚焦显微镜

摘要 利用激光扫描共聚焦显微镜并结合三维重建软件可以精确获取有机包裹体的气液比。有机包裹体气泡部分采用透射光通道进行系列深度扫描，选取气泡直径最大处的扫描图象进行直径测量，并利用球体体积计算公式得到气泡体积，避免了由于油包裹体液相石油所发出的强烈荧光的遮挡造成的气泡体积偏小；将共聚焦扫描图象进行三维重建获取精确的有机包裹体总体积，与计算所得的气泡体积共同确定出有机包裹体的气液比。利用该方法对渤海湾盆地渤中凹陷BZ25-1-3井的一块流体包裹体样品的气液比进行了研究，测试的气液比为6.85％。精确获取有机包裹体的气液比不仅能为包裹体PVT性质的研究提供精确参数，还对流体包裹体微观性质的对比研究提供了借鉴，具有重要意义。

利用激光扫描共聚焦显微镜并结合三维重建软件可以精确获取有机包裹体的气液比。有机包裹体气泡部分采用透射光通道进行系列深度扫描，选取气泡直径最大处的扫描图象进行直径测量，并利用球体体积计算公式得到气泡体积，避免了由于油包裹体液相石油所发出的强烈荧光的遮挡造成的气泡体积偏小；将共聚焦扫描图象进行三维重建获取精确的有机包裹体总体积，与计算所得的气泡体积共同确定出有机包裹体的气液比。利用该方法对渤海湾盆地渤中凹陷BZ25-1-3井的一块流体包裹体样品的气液比进行了研究，测试的气液比为6.85％。精确获取有机包裹体的气液比不仅能为包裹体PVT性质的研究提供精确参数，还对流体包裹体微观性质的对比研究提供了借鉴，具有重要意义。

刑侦勘察通常可能需要通过多种技术对极小样本进行分析。共聚焦显微拉曼和光致发光（PL）是处理这类样品的非常合适的技术。这种技术只需要微量的样品，并且是非破坏性和非接触式的，这意味着还可以使用互补的技术进一步分析样品。这种技术无需样品制备，获得的结果可以提供样品成分的化学和空间信息。本应用说明详细介绍了如何将显微拉曼和PL用作刑侦勘察领域的分析工具。

EVIDENT共聚焦助力Cell封面发文揭示无膜细胞器异常导致周围神经病的关键机制

徐老师团队主要利用共聚焦拉曼对半导体的两个重要参数进行了分析： 1. EPI 层厚度 ，因为不同的半导体器件对于外延EPI 层厚度的要求并不相同，因此，获知 EPI 厚度并对其 进行准确控制 是制备半导体器件的重要一步。 2. 载流子浓度 ，作为一个重要的电学性能参数，研究这一浓度分布情况，也可以帮助优化半导体的加工参数，比如指导离子注入剂量、退火温度和时间等关键加工参数的调控。

拉曼光谱成像首次被开发作为用来分析线虫的非入侵/无标记的工具通过雷尼绍（Renishaw）inVia拉曼光谱仪可以对拉曼成像，结果得到的图像提供了用以评价线虫亚微米尺度的表型改变的方法，这种方法十分有力，并且可视。本资料详细介绍了利用雷尼绍（Renishaw）inVia拉曼光谱仪进行拉曼成像的方法以及对线虫拉曼成像的分析，可以得到生物体内的化学结构信息。

EVIDENT共聚焦/超分辨助力Nature Communications发文揭示应激颗粒亚型鉴定范式

在ACCQ HP150 系统使用自动聚焦梯度发生器，人们无需再花时间开发或优化闪式色谱聚焦梯度方法。从单次运行分析侦察的结果，由内置工具自动计算生成聚焦梯度， 以确定是否能够在CombiFlash NextGen 系统上有效运行特定的纯化，以及制备型 HPLC 的聚焦梯度的计算或闪式色谱的纯化。当使用 RediSep制备型HPLC色谱柱与 RediSep Gold相匹配的色谱柱，以确定样品纯化和计算闪式色谱聚焦梯度，在运行时间为7 - 12min内完成（取决于HPLC系统和所使用的色谱柱）。也可以使用分析型 HPLC 系统通过ACCQPrep 聚焦梯度生成器以计算快速色谱梯度（参见Teledyne ISCO 网站上的技术报告TN52）。

为了在短时间内进行极快的测量，JASCO开发了表面扫描成像（SSI）。SSI用于在测量之前评估样品的表面形状作为载物台的高度信息，并在根据该表面形状信息扫描载物台时执行拉曼测量。使用SSI，即使是具有非常不均匀表面的样品现在也可以被测量，以在所有数据点上给出具有高S/N的良好拉曼光谱。关键词：拉曼，表面扫描成像，SSI，共聚焦拉曼成像

聚丙烯酰胺等电聚焦电泳操作简单，电泳时间短，分辨率高。其应用范围广，可用于分离蛋白质及测定PI，也可用于临床鉴别诊断、农业、食品研究及动物分类等各种领域。随着其他技术的不断改进，等电聚焦电泳也不断充实完善，从柱电泳发展到垂直板，又继而发展到超薄型水平板电泳等，还可与其他技术或SDS-PAGE结合，进一步提高灵敏度与分辨率。

采用RMS1000共聚焦显微拉曼光谱仪的多光子显微成像技术，可以对小鼠肠道切片样本进行成像。RMS1000配备一个外部飞秒激光器和TCSPC，用于先进的光谱和时间分辨的多光子成像技术，如2PEF和SHG，增强了拉曼成像的核心能力。

荧光标记及成像已经成为生命科学领域最重要的表征技术之一。细胞、组织切片，活体组织、模式生物、活体动、植物中的蛋白质分子，亚细胞结构以及单个细胞都可以使用相应的荧光染料进行特异性的标记，大多数的科研工作者使用共聚焦显微镜对荧光标记样品的拍照成像。

红外光束聚焦附件，可以将光斑缩小，测试微小样品及较大样品上的微小区域，可配合使用不同的夹具，测试不同类型的样品。本文使用XYZ样品台及1.5 mm光阑样品架测试了晶圆片中1.8 mm直径的微处理单元的红外光谱，比较微处理不同区域的红外光谱透射率的差异，为晶圆片的质量管控和工艺优化提供指导。

基于在线变相聚焦SFE-SFC系统与LCMS-8050联用,建立了化妆品中禁用物质分析方法。该方法集提取纯化、分离和检测于一体，可在 33 min 内对化妆品中 114种禁用物质进行检测。开发的变相聚焦技术通过将CO,从超临界态转变为气态，使萃取物堆积在色谱柱头，防止分析物扩散并提高灵敏度。并且在分析含水样品时通过向萃取罐中加入吸附剂，以减少基质干扰。与常规在线SFE-SFC相比，该方法分别改善了保湿水和面膜基质中 93 和 87 种目标物的基质效应，同时减少了样品损失，灵敏度高，检出限为 0.00104ug/L~3.09 μg/L。此外,与已报道的其他绿色方法相比，在线方法在自动化程度、效率、样品量和废物产生量等方面具有显著优势