[font=宋体]在免疫学的世界中，抗原的选择是至关重要的。近年来，许多研究者提出了各种不同的抗原类型以供选择，其中最引人注目的两种是蛋白抗原和多肽抗原。这两种抗原各有其独特的优势和特点，那么，如何在这两者之间做出选择呢？本文将为您详细解析两者的差异以及应用场景，帮助您在免疫学研究中做出最佳的选择。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①为什么选择蛋白抗原免疫？[/font][/b][font=宋体]您需要一种适用于多种应用的抗体[/font][font=宋体]您的目标蛋白与其他蛋白的序列相似性低，易于表达和纯化，且无毒[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]适用于以下应用：[/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IP/ChIP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]……[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②为什么选择多肽抗原免疫？[/b][/font][font=宋体][font=宋体]您的预期抗体应用仅包括[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]或翻译后修饰检测。[/font][/font][font=宋体]您的目标蛋白与其他蛋白具有高度的序列相似性，很难或不可能表达和纯化。[/font][font=宋体]适用于以下应用：[/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PTM Detection[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]多肽抗原是基于天然靶蛋白的序列精心选择的短氨基酸序列。[/font] [font=宋体]当目标蛋白的获取受限时，多肽是一种合适的解决方案。[/font] [font=宋体]它们也是检测靶蛋白翻译后修饰（[/font][font=Calibri]PTM[/font][font=宋体]）位点的理想抗原，因为它们限制了潜在表位的数量。 虽然潜在表位少对于大多数抗体项目和应用来说是缺点，但是当产生[/font][font=Calibri]PTM[/font][font=宋体]抗体时，有限数量的表位使得发现仅针对[/font][font=Calibri]PTM[/font][font=宋体]位点的反应性抗体更易。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]多肽抗原的局限性：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]多肽抗原由于其价格低和周期短而具有吸引力，但更重要的是要考虑它的局限性。蛋白质抗原能够诱导针对构象表位的抗体，而针对肽抗原的抗体只能识别线性表位。尽管多肽产生的抗体可以在其他应用中起作用。但多肽抗原的价值主要体现在翻译后修饰检测抗体的制备。例如，抗多肽抗体可以应用于[/font][font=Calibri]Western blots[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]。然而，线性化蛋白必须包括用于免疫的固有线性多肽抗原的表位，以确保阳性结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/antigen-preparation-services][b]蛋白抗原和多肽抗原制备服务[/b][/url]，有需求可以直接咨询，详情请看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antigen-preparation-services[/font][/font]
1.多肽合成的基本原理?多肽固相合成法是多肽合成化學的一個重大的突破。它的最大特點是不必純化中間產物，合成過程可以連續進行，進而為多肽合成的自動化奠定了基礎。目前全自動多肽的合成，基本都是固相合成。其基本過程如下：基於Fmoc化學合成，先將所要合成的目標多肽的C-端氨基酸的羧基以共價鍵形式與一個不溶性的高分子樹脂相連，然後以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點，同其他的氨基酸已經活化的羧基作用形成肽鍵，不斷重複這一過程，即可得到多肽。根據多肽的氨基酸組成不同，多肽後處理方式不同，純化方式也有差異。2.做免疫用的多肽多長為合適?答：一般約10-15個氨基酸，當然長一些免疫效果好一些，不過合成費用也會增加。MAP多肽則希望長度在15aa以上，效果較好。另外，10aa以下的多肽免疫效果比較差。3.免疫用多肽的純度需要很高嗎?答：一般而言， 免疫用Peptide，70-85%即可。4.我們合成的多肽溶解性不好，多肽就有問題對嗎?答：很難準確預測一個多肽的溶解性及合適的溶劑是什麼。如果多肽難以溶解就認為多肽合成有問題這個觀念並不正確。5.多肽狀態是如何?如何保存儲存?答：我們提供的多肽是粉末狀，一般為灰白色，組成不同，多肽粉末的顏色有差異，多肽一般長期保存需要避光保存，並應保存在-20度，短期可以保存在4度。可以短時間的話是以室溫運輸。6.如何溶解多肽?答：溶解多肽是非常複雜的事情，一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點試驗，在沒有確定合適的溶劑前千萬不要合部溶解。下列方法有助於您選擇合適的溶劑：(1)判定多肽的電荷特定，設定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH為-1；鹼性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2為+1,其他氨基酸的電荷為0。計算出將電荷數。(2)如果淨電荷數 0，多肽為鹼性，用水溶解：如果不溶解或溶解性不大，加入醋酸(10%以上)；如果多肽還不能溶解，加入少量TFA(25ul)溶解，然後加入500ul水稀釋。(3)如果淨電荷數0，多肽為酸性，用水溶解；如果不溶解或溶解性不大，加入氨水(25ul)溶解，然後加入500ul水稀釋。(4)如果淨電荷數=0，多肽為中性，一般需要用有機溶劑如乙腈，甲醇或異丙醇，DMSO等溶解。還有人建議需要尿素來溶解疏水性很大的多肽。7.非HPLC純化的多肽中有哪些雜質?答：粗品和脫鹽級別的多肽中多肽和非多肽類雜質：如非全長多肽和多肽後處理的一些原料如DTT、TFA等8.HPLC純化的多肽有哪些雜質?答：經過HPLC純化的多肽，仍會有一些一些雜質存在，其中的雜質主要是短肽和微量TFA。9.多長的多肽為合適?答：多肽合成需要考慮多肽的長度，電荷，親疏水性等因素。長度越長，合成粗品的純度和產率都隨著降低，純化的難度和無法合成的幾率就會大些。當然多肽功能區的序列是無法改變的，但是為了多肽的順利合成，有時不得不在功能取的上下游增加一些輔助氨基酸，以改善多肽的溶解性和親疏水性。如果多肽太短，合成也可能有問題，主要問題是合成的多肽在後處理過程中有一定的難度，5肽以下的多肽，一般要有疏水的氨基酸，否則後處理難度加大。15個氨基酸殘基以下的多肽一般都可以得到滿意的產率和得率。10.如何從多肽序列中判定多肽的溶解性?(1)多肽中如果含有高比例的疏水性很強的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，多肽很難溶解與水性溶液中或根本不可能溶解。這些氨基酸無論是純化或合成，都有可能有問題。(2)一般情況下疏水性氨基酸的比例50%，不能連續5個連續aa為疏水性，帶電荷的氨基酸的(正電荷K,R,H,N-terminus,負電荷D,E,C- terminus)的比例達到20%，在多肽的N或C短如果能增加極性氨基酸，也可以改善溶解性。11.為什麼含有Cys,Met,或Trp的多肽難合成?答：含有Cys, Met,或Trp的多肽難以合成，同時難以獲得高純度的產品。主要因為這些基團不穩定，易氧化。這些多肽的使用和儲存都需要特別注意，避免反復開啟蓋子。12.為什麼有些多肽的合成產率或純度會比較低?答：多肽合成與引子合成有比較大的區別，不能合成的引子很少，但是不能合成的多肽經常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr這些氨基酸比鄰或重複時，多肽鏈在合成過程中不能完全舒展溶解，合成效率下降。以下幾種情形，合成效率和產物的純度都比較低，如：重複Pro,Ser-Ser，重複Asp，4個連續Gly等.13.多肽是如何純化的?答：多肽純化一般使用反相柱(如C8，C18等)，214nm。緩衝體系通常為含TFA的溶劑，pH 2.0 。Buffer A為含0.1%TFA in ddH2O，Buffer B為1%TFA/ACN/ pH 2.0。純化前用Buffer A溶解；如果溶解不好，用Buffer B溶解後，然後用Buffer A稀釋；對疏水性強的多肽，有時還需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析多肽粗產物，如果多肽不長(15aa以下)，一般會有主峰，主峰通常為全長產物；對於20aa以上的長肽，如果沒有主峰，HPLC需搭配Mass來判定分子量，進而確定哪個峰是所要合成的多肽。
建立测定某多肽HPLC法 多肽是人体自身存在而且必需的活性物质，是人体的重要组成物质、营养物质，它广泛分布于人体各部位，特别是在大脑里，几乎对所有的细胞都有调节作用。人体缺失了多肽，免疫系统及各功能系统就可能发生紊乱，就会出现各种慢性病。多肽还具有抗菌、抗肿瘤、增强传统抗生素对耐药菌的活性、促进创伤愈合等多项生物学功能。这也就成为其在医药、食品防腐、保健品及化妆品等领域具有广阔的应用前景。 蛋白质的生理功能主要由肽来完成，有人甚至说肽是生命的统帅，对生命非常重要。所以肽及多肽的生产、合成也是非常重要的。当然测定工作也是很重要的。 某药物研究所通过药物机理成功的合成了某营养成分--某多肽，由于涉及到一些保密成分，暂时定义为“多肽X”。以下测定实验就是一是为了测定多肽，二是为了通过对某药品中多肽的测定，以便对该多肽成分制备提取提供可行性方法及理论数据。1 实验概述1.1 实验目的a.为了测定多肽。b.为了通过对某药品中多肽的测定，以便对该多肽成分制备提取提供可行性方法及理论数据。1.2 实验要求a. 梯度基线漂移不超过20mAu,分离度好。b. 定性定量分析结果准确可靠。c. 通过对某药品中多肽的测定，完善色谱条件(主要是流动相和检测波长的确定)，为该多肽X的制备提取做工作。1.3 实验原理以乙腈和水为流动相，加入阴离子对试剂三氟乙酸，与多肽的质子化氨基结合，以提高多肽样品的保留值。1.4 实验环境1.4.1仪器设备：高效液相色谱仪(梯度洗脱泵，紫外检测器)手动进样器1.4.2环境：温度：24℃湿度：45%2 实验方案2.1色谱条件（参考）：色谱柱：STC C18（250*4.6，5um）波长：210nm流动相A：0.1%三氟乙酸（TFA）的乙腈溶液流动相B：0.1%三氟乙酸（TFA）的水溶液http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308311139_461282_2369266_3.png[font
多肽作为药物，具有生理活性强、免疫原性低、疗效高等诸多优点，随着生物技术的不断发展，其在人类疾病治疗中的地位也日趋重要，目前已成为国际药学界研究的热点之一。 默克密理博在多肽合成领域已有30年的历史，其品牌Novabiochem?除了满足多肽合成客户对常规产品的需求外，还不断进行创新，每年都会发布最新的研发产品及应用，并且还可以提供个性化定制的高效解决方案。为了增进多肽合成领域的技术创新交流，默克密理博在Novabiochem? 创新30年之际，召开学术研讨会。会议邀请了从事多肽制药领域的多位专家和学者，议题包括：天然、非天然氨基酸及其类似物的合成新方法，多肽、蛋白质的合成新方法，多肽物质分离与分析方法推广应用，多肽合成中因素控制对质量的影响以及多肽纯化和分析的新技术等，针对以上议题，各位专家进行了深入的交流，得到了与会者的一致好评和巨大反响，会议取得了圆满的成功。http://blog.milliporechina.com/editor/upload/image/930F7A5B_BF1453AA.png
[font=宋体][size=10.5000pt]常见的多肽类药物种类[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽药物是一种可以用于疾病的预防、治疗和诊断的多肽类生物药物，其制备方法主要有化学多肽合成、分离纯化法和基因工程法等，其中化学多肽合成是多肽药物的主要制备方式。虽然多肽类药物可以通过从生物体内分离纯化获得，但是天然存在的多肽分子含量少，无法完全满足临床应用的需求。化学多肽合成方法是通过氨基酸逐步缩合的化学反应来实现，一般是从羧基端向氨基端，重复逐个添加氨基酸的过程。【[font=宋体]详情请咨询国肽生物[/font]】[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽类药物主要包括多肽疫苗、抗肿瘤多肽、抗病毒多肽、多肽导向药物、细胞因子模拟肽、抗菌性活性肽、诊断用多肽以及其他药用小肽等。多肽药物与一般的有机小分子药物相比，具有生物活性强、用药剂量小、毒副作用低和疗效显著等突出特点，然而其半衰期一般较短、不稳定，在体内容易被快速降解。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]与蛋白类大分子药物相比，除了多肽疫苗外，多肽类药物免疫原性相对较小，用药剂量少，单位活性更高，易于合成、改造和优化，产品纯度高，质量可控，能够迅速确定药用价值。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]1[font=宋体]、多肽疫苗[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽疫苗是按照病原体抗原基因中已知或预测的某段抗原表位的氨基酸序列，通过化学多肽合成技术制备的疫苗。多肽疫苗是目前疫苗研究的重要方向，已经针对了艾滋病病毒和丙肝病毒的多肽疫苗进行了研发。传统疫苗一般由两种方式制备，一种为能诱发免疫力却不致病的减毒疫苗，例如黄热病、脊髓灰质炎和麻疹疫苗或卡介苗；另一种为灭活疫苗，例如百日咳杆菌、狂犬病毒、伤寒杆菌。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽疫苗由于完全是合成的，不存在毒力回升或灭活不全的问题。特别是一些还不能通过体外培养方式获得足够量的抗原的微生物病原体。有些虽能进行体外培养，但这些病原体有潜在致病性和免疫病理作用等涉及安全性与有效性的问题。多肽作为体内引起效应细胞免疫应答形成的免疫原，将成为一种新型的疫苗。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]2[font=宋体]、抗肿瘤多肽[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽类药物凭借其靶向性、安全性、特异性，使其在抗肿瘤药物的研制中受到关注，不同的多肽药物具有多种不同的作用机制。其可抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡达到直接抗肿瘤作用，也可以通过增强和激发机体对肿瘤细胞的免疫应答、抑制肿瘤血管生成等达到间接的抗肿瘤作用。而且其作用机制的多样性和特异性，也可以实现多肽改造和融合，实现多肽的高效、靶向、特异的抗肿瘤作用。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]3[font=宋体]、多肽导向药物[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]将具有结合能力的多肽与细胞毒素或细胞因子等进行融合，将其导向至病变部位，发[/font] [font=宋体]挥治疗作用，同时减少毒副反应。已知很多毒素（如绿脓杆菌外毒素），细胞因子（如白细胞介素系列）等有较强的肿瘤细胞毒性，但在人类长期或大量使用量时也可损伤正常细胞。将能和肿瘤细胞特异结合的多肽与这些活性因子进行融合，则可将这些活性因子特异性地集中在肿瘤部位，可大大降低毒素、细胞因子的使用浓度，降低其副作用。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]4[font=宋体]、细胞因子模拟肽[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]指从肽库中筛选获得能够与细胞因子受体特异性结合，同时具有细胞因子活性的多肽。这些模拟肽的序列一般与细胞因子的氨基酸序列不同。能刺激造血的细胞因子如红细胞生成素[/font](EPO)[font=宋体]和血小板生成素[/font][font=Calibri](TPO)[/font][font=宋体]等通过与其受体的特异性结合来调控造血细胞的自我更新、增殖、分化、成熟及程序性死亡。近年来利用噬菌体展示文库等技术业已筛选出类似于细胞因子活性的模拟肽类和非肽类小分子，经体外和动物试验证实它们具有类似于细胞因子的刺激造血生物学功能。这为进一步探讨细胞因子的作用机制、筛选出理想的模拟其它细胞因子功能的小分子肽[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]非肽类药物奠定了坚实基础。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]5[font=宋体]、抗菌性活性肽[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]从昆虫、动物体内筛选获得的具有抗菌活性的多肽分子，目前已经筛选获得上百种。抗菌肽具有抗菌谱广、热稳定性强、分子量小及免疫原性小等特点，其杀菌机制独特，病原菌不易产生耐药性，有望开发成新一代肽类抗生素。但部分抗菌肽具有空间结构不稳定、溶血活性等特点，限制了临床应用。因此设计或改造天然抗菌肽，提高抗菌活性的基础上消除其溶血活性，促进抗菌肽在医药上的应用，有望开发成新型抗菌药物，为解决病原菌对传统抗生素日益增强的耐药性问题提供新的途径。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]6[font=宋体]、诊断用多肽[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]通过从致病体或肽库中筛选获得的多肽，用作诊断试剂，检测体内是否存在病原微生物、寄生虫等的抗体。包括对肝炎病毒、艾滋病病毒、类风湿疾病等抗体的检测。多肽在诊断试剂中最主要的用途是用作抗原检测病毒、细胞、支原体、螺旋体等微生物和囊虫、锥虫等寄生虫的抗体。多肽抗原比天然微生物或寄生虫蛋白抗原的特异性强，且易于制备，因此装配的检测试剂，其检测抗体的假阴性率和本底反应都很低，易于临床应用。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]常见的多肽类药物种类主要有以上几种，目前来自动物组织提取的多肽药物将逐步被淘汰，化学多肽合成和基因重组方式将在很长一段时间内成为互为补充的多肽药物生产方式。在化学多肽合成类药物快速成长之际，基因重组表达制备多肽药物也引起业内关注。与化学多肽合成相比，基因重组方式更适于长肽的制备；而且随着技术的进步，以基因重组方式生产多肽药物的成本也在不断降低。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][img=,690,177]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007021610504262_3029_3531468_3.jpg!w690x177.jpg[/img][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]国肽生物主要提供：多肽合成、多肽定制、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽（Cy3、Cy5、Fitc、AMC等）、目录肽、偶联蛋白（KLH、BSA、OVA等）、美容肽、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。详情请咨询国肽生物[/size][/font]
[size=5][b]多肽合成仪发展史[/b][/size][font=楷体_GB2312][size=3][color=black][b]多肽合成仪简介[/b][/color][/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] 美国洛克菲勒大学教授Bruce Merrifild 在1963年发明的多肽固相合成技术（SPPS）是多肽合成领域的一个重大突破，对化学，生化，医药，免疫和基因科学等学科和领域都起了巨大的推动作用. 他本人也因此项发明荣获1984化学诺贝尔奖。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] 多肽固相合成技术的发明同时促进了肽合成的自动化。世界上第一台真正意义上的多肽合成仪出现在1980年代初期，它是利用氮气鼓泡来对反应物进行搅拌，用计算机程序控制来实现有限度的自动合成。虽然在搅拌方式和其他各项功能方面有着明显的缺陷，但是它毕竟把人从实验室里解放出来，极大地提高了工作效率，所以受到了多肽科学家的一致赞扬。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] 多肽合成仪的问世大大促进了多肽科学的发展。反过来，随着多肽科学的发展，科学家也对合成仪提出了更高的要求，从而带动了合成仪的发展。目前多肽合成仪品种繁多。从合成量上分，可分为微克级的，毫克级的，克级的和公斤级的；从功能上分，可分为研究型的，小试型的，中试型的，普通生产型的和GMP生产型的；从自动化程度上分，可分为全自动的，半自动的和手动的；从通道上分，可分为单通道的和多通道的；从技术角度上分，可分为第一代的，第二代的，和第三代的；等等。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3][/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3][color=black][b]第一代多肽合成仪[/b][/color][/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3]标志性特点是采用氮气鼓泡的搅拌原理来对反应物进行搅拌，即合成仪上反应器是固定的，氮气从反应器的下方通过反应器到上部排出，在这一过程中产生的汽泡把固相和液相混合起来。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] 它有着消耗成本大，有死角等严重缺陷，已大部分退出了市场。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3][/size][/font][b][font=楷体_GB2312][size=3]第二代多肽合成仪[/size][/font][/b][font=楷体_GB2312][size=3]标志性特点是用不完全性的机械搅拌来取代氮气鼓泡，一般可分为接触式搅拌与非接触式搅拌两种。 接触式搅拌常见的搅拌方式是伸入反应器内部的螺旋桨由上部的电机带动进行快速旋转，使反应器内部的固液两相进行混合。但这种方式会严重降低合成产量，清洗也比较麻烦，还会缩短反应器的寿命，最主要这种方式也会产生反应死角。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3][/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] 目前全世界共17个多肽合成仪生产厂商有16个放弃了接触式搅拌方法。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3][/size][/font][b][font=楷体_GB2312][size=3]第三代多肽合成仪[/size][/font][/b][font=楷体_GB2312][size=3] 是由美国[/size][/font][font=楷体_GB2312][color=#000000][size=3]ABI[/size][/color][/font][font=楷体_GB2312][size=3]公司制造的无死角多肽合成仪为标志诞生的。其反应器转动方式有别于前两代的多肽合成仪，即反应器上方相对固定，而下方作圆周360度快速旋转，带动反应器里的固液两相从底部向上作螺旋运动，一直达到反应器的最上方。换句话说，溶液可以达到反应器内部的任意点，真正做到了无死角。由于搅拌速率可达每分钟1800转的高速，反应得以充分完全。其合成肽的纯度相当高，对于ACP65-74型肽的粗肽纯度可达87.6% （ABI433使用者手册）。由于无死角的搅拌方式保证的肽的合成纯度，ABI433型多肽合成仪（其退出多肽合成仪市场后最后一款仪器）至今在世界上还占有着很大的比例。当然，ABI产品的售价也是最高的。由于部件使用频率高，电磁阀会经常损坏，而ABI将7个电磁阀做成模块化的设计，坏掉一个电磁阀必须要更换整个模块，无形中增加了维修成本。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3]因此，成本过高，也已停止生产。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3][/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] 无死角多肽合成仪的另一款方式是反应器在数控马达的带动下作上下180度的翻转运动。固相和液相在运动过程中不断从反应器的一端到达另一端，再返回来。所以在上下180度的翻转运动中溶液可以达到反应器内部的任意点。数控马达的转速可根据需要任意调节。一般用这种仪器合成出来的肽纯度是最高的。由于反应器越大，溶液作180度的翻转运动所得到的惯性也越大，搅拌也越来越剧烈，产品的纯度也会越来越高，所以只要小试能成功，就可以跳过中试这一步，直接放大生产。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3][/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3]微波法多肽合成仪[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] 另一种革新式的产品，微波多肽合成仪的问世，是区别与之前任何一类合成仪的新产品。其采用微波加热方式，大大提高了反应速度，将多肽合成的速率增加到之前多肽合成仪的几倍甚至十几倍。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] 这种仪器目前在中国市场还比较受欢迎，但在国际上，其实已经不认可这种方式生产多肽了，因为它有个致命缺点。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] 在加热的情况下副反应也相应增多，多肽纯度不能与之前的第三代甚至第二代产品媲美。另外，微波加热方法无法放大，故不适合用作多肽药物的研发。[/size][/font][font=楷体_GB2312][size=3] （部分内容摘自：百度百科-多肽合成仪）[/size][/font]
[font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]国肽生物是一家专业从事多肽产品的研发、生产和销售以及多肽技术转让的高新技术企业。BP公司成立之初，便成功收购了国内几家多肽、抗体公司，是目前国内的专业多肽合成、抗体制备、蛋白表达的规模型生产企业。国肽生物专长于荧光标记肽、同位素标记肽、人工胰岛素、药物肽、化妆品肽、长肽困难肽等产品的合成与研发，致力于学术水平的科研提升，搭建学术交流平台，促进前沿、专业的学术知识推广，推动多肽在生物医学材料等领域的研究与应用[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]多肽是一种与生物体内各种细胞功能都相关的生物活性物质，它的分子结构介于氨基酸和蛋白质之间，是由多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成的化合物。多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质的总称，常常被应用于功能分析、抗体研究、尤其是药物研发等领域。多肽合成技术的出现，让这些多肽的应用领域变得更宽。[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]多肽的固相合成[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]多肽的合成是氨基酸重复添加的过程，通常从C端向N端(氨基端)进行合成。多肽固相合成的原理是将目的肽的第一个氨基酸C端通过共价键与固相载体连接，再以该氨基酸N端为合成起点，经过脱去氨基保护基和过量的已活化的第二个氨基酸进行反应，接长肽链，重复操作，达到理想的合成肽链长度，最后将肽链从树脂上裂解下来，分离纯化，获得目标多肽。[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]1、Boc多肽合成法[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]Boc方法是经典的多肽固相合成法，以Boc作为氨基酸α-氨基的保护基，苄醇类作为侧链保护基，Boc的脱除通常采用三氟乙酸(TFA)进行。多肽合成时将已用Boc保护好的N-α-氨基酸共价交联到树脂上，TFA切除Boc保护基，N端用弱碱中和。[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]肽链的延长通过二环己基碳二亚胺(DCC)活化、偶联进行，最终采用强酸氢氟酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)将合成的目标多肽从树脂上解离。在Boc多肽合成法中，为了便于下一步的多肽合成，反复用酸进行脱保护，一些副反应被带入实验中，例如多肽容易从树脂上切除下来，氨基酸侧链在酸性条件不稳定等。[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]2、Fmoc多肽合成法[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]Carpino和Han以Boc多肽合成法为基础发展起来一种多肽固相合成的新方法——Fmoc多肽合成法。[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]Fmoc多肽合成法以Fmoc作为氨基酸α-氨基的保护基。其优势为在酸性条件下是稳定的，不受TFA等试剂的影响，应用温和的碱处理可脱保护，所以侧链可用易于酸脱除的Boc保护基进行保护。[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]肽段的最后切除可采用TFA/二氯甲烷(DCM)从树脂上定量完成，避免了采用强酸。同时，与Boc法相比，Fmoc法反应条件温和，副反应少，产率高，并且Fmoc基团本身具有特征性紫外吸收，易于监测控制反应的进行。Fmoc法在多肽固相合成领域应用越来越广泛。[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]肽是指由两个或两个以上的氨基酸脱水缩合而成的化合物。最简单的肽由两个氨基酸组成，称二肽。含多个氨基酸的肽称多肽。含50个氨基酸以上的多肽，通常称为蛋白质。肽广泛存在于动物、植物和微生物中，有重要的生理作用，对生物的生长发育、细胞分化、大脑活动、肿瘤病变、免疫防御、生殖控制以及抗衰老等方面都有特殊的功能。如谷胱甘肽是某些酶的辅酶，对体内的氧化还原过程起重要作用。许多激素属于多肽，如催产素、加压素、胰高血糖素以及促肾上腺皮质激素等，能调节机体代谢。由下丘脑分泌的激素调节因子也是多肽，它们控制着其他内分泌腺释放激素的活动。近年来在高等动物脑中发现的脑啡肽(五肽)有镇痛作用。微生物产生的许多抗生素如多粘菌素、短杆菌肽等都是肽类，有很强的抗菌作用。多肽指许多氨基酸单位用肽键互相连接构成的长链。肽和蛋白质没有严格的界限，一般把只含有数十个或更少个氨基酸单位的多肽叫做肽，把氨基酸单位比较多的多肽叫蛋白质。常把多肽中的氨基酸单位叫做氨基酸残基，因为这些单位在互相连接时已失去分子的一部分，而不是完整的氨基酸了。只有肽链两端的氨基酸残基才含有自由的α-氨基或自由的α-羧基。有自由α-氨基的末端残基叫做氨基末端(或N端)残基，有自由α-羧基的末端残基叫做羧基末端(或C端)残基。给多肽命名时按照从N端到C端残基的顺序，书写时也按这个顺序。如SerGlyTryAlaLeu这个五肽含有5个氨基酸残基和4个肽键，叫做丝氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸。肽广泛存在于动植物组织中，其中有许多肽在生物体内有特殊的功能，统称生物活性肽。近年来发现：几乎所有生命科学的重大理论，如免疫防御、生殖控制、肿瘤病变、抗衰防老等都涉及有关的活性肽。这些理论问题无不与临床医学实践密切相关，所以生物活性肽在实际应用上也具有重要意义。生物活性肽的种类很多。如可刺激肾上腺皮质发育的促肾上腺皮质激素是39肽，可使子宫收缩的催产素为九肽，具有吗啡活性的两种重要的脑啡肽均为五肽。许多抗菌素也是肽类物质。又如生长因子受控于基因，在细胞发育过程中起调节和控制作用。这类重要物质为多肽。表皮生长因子含有50个氨基酸残基，神经生长因子由118个氨基酸残基组成。[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333][img=,486,246]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006161554536697_4085_3531468_3.jpg!w486x246.jpg[/img][/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]国肽生物主要提供：多肽合成、多肽定制、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽（Cy3、Cy5、Fitc、AMC等）、目录肽、偶联蛋白（KLH、BSA、OVA等）、美容肽、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。[/color][/size][/font][font=Helvetica][size=10.5pt][color=#333333]详情请咨询国肽生物[/color][/size][/font]
[font=宋体]免疫荧光法和免疫印迹法是生物学领域中两种常用的实验技术，它们在原理、操作过程和应用方面有着显著的区别。本文将详细探讨这两种技术的区别，以便更好地理解它们的特点和应用价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]首先，我们来了解免疫荧光法。免疫荧光法是一种利用荧光物质标记的特异性抗体来检测细胞内或细胞表面抗原的技术。其基本原理是抗原抗体反应，通过荧光显微镜观察荧光标记的抗原，从而实现对抗原的定位和定量分析。免疫荧光法具有高灵敏度、高特异性和定位准确的特点，广泛应用于细胞生物学、微生物学、免疫学等领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]相比之下，免疫印迹法则是通过检测细胞或组织提取物中特定抗原的存在和分布，以了解其在生物学过程中的作用。这种方法通常涉及到蛋白质的提取、分离、转移和检测等步骤。免疫印迹法能够检测蛋白质的分子量、表达水平以及与其他分子的相互作用，为生物学研究提供了重要的信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在操作过程上，免疫荧光法主要涉及细胞的固定、通透、抗体孵育和荧光显微镜观察等步骤。而免疫印迹法则需要进行蛋白质的提取、电泳分离、膜转移、抗体孵育和显色等复杂操作。因此，从操作难度和复杂性来看，免疫印迹法相对更为繁琐。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在结果解读和应用方面，免疫荧光法能够提供直观、定位准确的抗原分布信息，有助于研究细胞的结构和功能。而免疫印迹法则能够揭示蛋白质的表达水平、分子量和相互作用，为疾病诊断、药物研发和生物学机制研究提供有力支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]此外，免疫荧光法和免疫印迹法在应用领域上也有所不同。免疫荧光法广泛应用于细胞生物学、微生物学、免疫学等领域，特别是在病毒检测、细胞信号转导和细胞凋亡等研究中发挥着重要作用。而免疫印迹法则更多地应用于分子生物学、生物化学和病理学等领域，对于研究蛋白质的结构、功能和调控机制具有重要意义。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]免疫荧光法和免疫印迹法优缺点介绍：[/font][/b][font=宋体] [/font][table][tr][td][font=宋体]技术[/font][/td][td][font=宋体]优点[/font][/td][td][font=宋体]缺点[/font][/td][/tr][tr][td=1,4][align=center][font=宋体]免疫荧光法[/font][/align][/td][td][font=宋体]特异性强[/font][/td][td][font=宋体]非特异性染色问题尚未完全解决[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]敏感性高[/font][/td][td][font=宋体]操作程序较复杂[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]速度快[/font][/td][td][font=宋体]需要特殊的昂贵仪器（荧光显微镜）[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]早期诊断价值[/font][/td][td][font=宋体]染色标本不能长期保存[/font][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][font=宋体]免疫印迹法[/font][/align][/td][td][font=宋体]操作简便[/font][/td][td][font=宋体]对于低丰度的抗原可能不够敏感[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]所需实验材料相对简单[/font][/td][td][font=宋体]无法提供抗原在细胞或组织中的定位信息[/font][/td][/tr][tr][td][font=宋体]对某些特定抗原的检测具有较高的灵敏度[/font][/td][td][font=宋体]需要一定的实验技能和经验[/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体]综上所述，免疫荧光法和免疫印迹法是两种具有不同特点和应用领域的实验技术。免疫荧光法注重抗原的定位和定量分析，操作简便直观；而免疫印迹法则关注蛋白质的表达和相互作用，操作相对复杂但能提供深入的信息。在实际应用中，我们需要根据研究目的和需求选择合适的技术手段，以获取准确、可靠的实验结果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]IF[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]）检测服务[/b][/url]，更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]
免疫层析法和免疫荧光法区别
多肽合成技术主要采用多肽合成仪，以固相合成为反应原理，在密闭的防爆玻璃反应器中使氨基酸按照已知顺序（序列，一般从C端-羧基端 向 N端-氨基端）不断添加、反应、合成，操作最终得到多肽载体。固相合成法，大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。固相合成方法有两种，即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多优势，现在大多采用Fmoc法合成，但对于某些短肽，tBoc因其产率高的优势仍然被很多企业所采用。【请移步百度搜“[b]合肥国肽生物[/b]”即可】具体合成由下列几个循环组成：(1)去保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂（piperidine）去 除氨基的保护基团。(2)激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环：这两步反应反复循环直到合成完成。(3)洗脱和脱保护：多肽从柱上洗脱下来，其保护基团被一种脱保护剂（TFA） 洗脱和脱保护。多肽的分类多肽有生物活性多肽和人工合成多肽两种。1、生物活性肽生物活性肽(Bioactive Peptides ，BAP)是对生物机体的生命活动有益或是具有生理作用的肽类化合物，是一类相对分子质量小于6000Da ， 具有多种生物学功能的多肽。生物活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。2、人工合成多肽固相多肽合成方法(SPPS)，由于其合成方便，迅速，成为多肽合成的首选方法，而且带来了多肽有机合成上的一次**，并成为了一支独立的学科——固相有机合成，固相合成的发明同时促进了肽合成的自动化。世界上第一台真正意义上的多肽合成仪出现在1980年代初期。基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上，合成一步步地进行， 通常从合成链的C端氨基酸开始，接着的单个氨基酸的连接通过用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法实现。Carbodiimide方法包括用DCC做连接剂连接N-和C-保护氨基酸。重要的是， 这种连接试剂促接N保护氨基酸自己炭基和C保护氨基酸自由氨基间的缩水，形成肽链， 同时产出N，N?/FONT-dyaylcohercylurea副产物。多肽合成方法1、酸酐法在多肽合成中，最初考虑应用酸酐要追溯到1881年Theodor Curtius对苯甲酰基氨基乙酸合成的早期研究。从氨基乙酸银与苯甲酰氯的反应中，除获得苯甲酰氨基乙酸外，还得到了BZ-Glyn-OH(n=2-6)。早期曾认为，当用苯甲酰氯处理时，N－苯甲酰基氨基酸或N－苯甲酰基肽与苯甲酸形成了活性中间体不对称酸酐。 大约在70年后，Theodor Wieland利用这些发现将混合酸酐法用于现代多肽合成。目前，除该方法外，对称酸酐以及由氨基酸的羧基和氨基甲酸在分子内形成的N－羧基内酸酐（NCA,Leuchs anhydrides）也用肽缩合。最后应该提到，不对称酸酐常常参与生化反应中的酰化反应。2、混合酸酐法有机羧酸和无机酸皆可用于混合酸酐的形成。然而，仅有几个得到了广泛的实际应用，多数情况下，采用氯甲酸烷基酯。过去频繁使用的氯甲酸乙酯，目前主要被氯甲酸异丁酯所替代。由羧基组分和氯甲酸酯起始形成的混合酸酐，其氨解反应的区域选择性依赖依赖于两个互相竞争的羰基的亲电性和（或）空间位阻。在由N保护的氨基酸羧酸盐（羧基组分）和氯甲酸烷基酯（活化组分，例如源于氯甲酸烷基酯）形成混合酸酐时，亲核试剂胺主要进攻氨基酸组分的羧基，形成预期的肽衍生物，并且释放出游离酸形式的活性成分。3、酰基叠氮物法酰基叠氮物法早在1902年就被引入到肽化学中，因此它是最古老的缩合方法之一。在碱性水溶液中，除了与酰基叠氨缩合的游离氨基酸和肽以外，氨基酸酯可用于有机溶剂中。与其他许多缩合方法不同的是，它不需要增加辅助碱或另一等当量的氨基组分来捕获腙酸。 长期以来，一直认为叠氮物法是唯一不发生消旋的缩合方法，随着可选择性裂解的氨基酸保护基引入，该方法经历了一次大规模的复兴。该方法的起始原料分别是晶体状的氨基酸酰肼或肽酰肼64,通过肼解相应的酯很容易得到。4、对称酸酐法Nα－酰基氨基酸的对称酸酐是用于肽键形成的高活性中间体。与混合酸酐法多肽合成相反，它与胺亲核试剂的反应没有模棱两可的区域选择性。但肽缩合产率最高，为50%（以羧基组分计）。虽然由对称酸酐氨解形成的游离Nα－酰基氨基酸可以和目标肽一起，通过饱和碳酸氢钠溶液萃取回收，但在最初，这种方法的实用价值极低。对称酸酐可以用Nα－保护氨基酸与光气，或方便的碳二亚胺反应制得。两当量的Nα－保护氨基酸与－当量的碳二亚胺反应有利于对称酸酐的形成，对称酸酐可以分离出来，也可不经纯化而直接用于后面的缩合反应。基于Nα－烷氧羰基氨基酸的对称酸酐对水解稳定，可采用类似上述纯化混合酸酐的方法进行纯化。[img=,690,300]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/04/201904221451156040_1751_3531468_3.jpg!w690x300.jpg[/img]我们主要提供：多肽合成、定制多肽、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽（Cy3、Cy5、Fitc、AMC等）、目录肽、偶联蛋白（KLH、BSA、OVA等）、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。合肥国肽生物官网：http://www.bankpeptide.com欢迎咨询服务热线：17718122172；17718122684；17730030476；17718122397
[font=Calibri][font=宋体]免疫组化技术，运用免疫学的基本原理[/font][font=Calibri]——[/font][font=宋体]抗原抗体反应，即抗原与抗体之间的特异性结合。通过化学反应，使标记在抗体上的显色剂（如荧光素、酶、金属离子、同位素）显现颜色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质）。该技术不仅对这些抗原进行定位，还能进行定性和相对定量的研究。这种技术被称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]。[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]免疫组化，简而言之，是免疫学、组织学和化学的完美结合。它利用免疫学方法对组织进行标记，再通过化学方法进行染色，从而标记出组织中的特定蛋白或一组蛋白。这项技术目前在临床病理诊断中得到了广泛应用，并衍生出了多种技术变种，如免疫细胞化学、免疫组织荧光等，为生物医学研究提供了强大的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、免疫组化技术的基本原理[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂[/font][font=Calibri]DAB[/font][font=宋体]显示为棕黄色颗粒）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、免疫组织化学染色方法[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）；与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗过氧化物酶（[/font][font=Calibri]PAP[/font][font=宋体]）法和亲和连接，如卵白素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶复合物（[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]）法、链霉菌抗生物素蛋白[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶连结（[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]）法等，其中[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法是最常用的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、几种常用免疫组织化学方法的原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫荧光方法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫酶标方法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫酶标方法是继免疫荧光后，于[/font][font=Calibri]60[/font][font=宋体]年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的当属[/font][font=Calibri]PAP[/font][font=宋体]法、[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]法、[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、免疫胶体金技术[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如葡萄球菌[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]蛋白[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]四、免疫组化技术的优点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、特异性强 免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（[/font][font=Calibri]keratin[/font][font=宋体]）显示上皮成分，[/font][font=Calibri]LCA[/font][font=宋体]显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、敏感性高 在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]法或[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定位准确、形态与功能相结合 该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]石蜡切片免疫组化（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]IHC[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]）检测服务[/b][/url]，更多详情可以关注：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service[/font][/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]
[font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]多肽固相合成法是多肽合成化学的一个重大的突破。它的最大特点是不必纯化中间产物，合成过程可以连续进行，进而为多肽合成的自动化奠定了基础。目前全自动多肽的合成，基本都是固相合成。其基本过程如下：[/font] [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]基于[/font]Fmoc[font=宋体]化学合成，先将所要合成的目标多肽的[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这一氨基酸的氨基作为多肽合成的起点，同其它的氨基酸已经活化的羧基作用形成肽键，不断重复这一过程，即可得到多肽。【详情请咨询国肽生物】根据多肽的氨基酸组成不同，多肽后处理方式不同，纯化方式也有差异。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]1.[font=宋体]做免疫用的多肽多长为合适[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]一般约[/font]10-15[font=宋体]个氨基酸，当然长一些免疫效果好一些，不过合成费用也会增加。[/font][font=Calibri]MAP[/font][font=宋体]多肽则希望长度在[/font][font=Calibri]15aa[/font][font=宋体]以上，效果较好。另外，[/font][font=Calibri]10aa[/font][font=宋体]以下的多肽免疫效果比较差。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]2.[font=宋体]免疫用多肽的纯度需要很高吗[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]一般而言，免疫用[/font]Peptide[font=宋体]，[/font][font=Calibri]70-85%[/font][font=宋体]即可。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]3.[font=宋体]我们合成的多肽溶解性不好，多肽就有问题对吗[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]很难准确预测一个多肽的溶解性及合适的溶剂是什么。如果多肽难以溶解就认为多肽合成有问题这个观念并不正确。[/font] [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]4.[font=宋体]多肽状态是如何[/font][font=Calibri]?[/font][font=宋体]如何保存储存[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]我们提供的多肽是粉末状，一般为灰白色，组成不同，多肽粉末的颜色有差异，多肽一般长期保存需要避光保存，并应保存在[/font]-20[font=宋体]度，短期可以保存在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度。可以短时间的话是以室温运输。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]5.[font=宋体]如何溶解多肽[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]溶解多肽是非常复杂的事情，一般很难一下子确定合适的溶剂。通常是先取一点试验，在没有确定合适的溶剂前千万不要合部溶解。[/font] [font=宋体]下列方法有助于您选择合适的溶剂：[/font] [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt](1)[font=宋体]判定多肽的电荷特定，设定酸性氨基酸[/font][font=Calibri]Asp(D),Glu(E)[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端[/font][font=Calibri]COOH[/font][font=宋体]为[/font][font=Calibri]-1[/font][font=宋体]；碱性氨基酸[/font][font=Calibri]Lys(K),Arg(R),His(H)[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端[/font][font=Calibri]NH2[/font][font=宋体]为[/font][font=Calibri]+1,[/font][font=宋体]其它氨基酸的电荷为[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]。计算出将电荷数。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt](2)[font=宋体]如果净电荷数[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]，多肽为碱性，用水溶解：如果不溶解或溶解性不大，加入醋酸[/font][font=Calibri](10%[/font][font=宋体]以上[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]；如果多肽还不能溶解，加入少量[/font][font=Calibri]TFA(25ul)[/font][font=宋体]溶解，然后加入[/font][font=Calibri]500ul[/font][font=宋体]水稀释。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt](3)[font=宋体]如果净电荷数[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]，多肽为酸性，用水溶解；如果不溶解或溶解性不大，加入氨水[/font][font=Calibri](25ul)[/font][font=宋体]溶解，然后加入[/font][font=Calibri]500ul[/font][font=宋体]水稀释。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt](4)[font=宋体]如果净电荷数[/font][font=Calibri]=0[/font][font=宋体]，多肽为中性，一般需要用有机溶剂如乙腈，甲醇或异丙醇，[/font][font=Calibri]DMSO[/font][font=宋体]等溶解。还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的多肽。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]6.[font=宋体]非[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]纯化的多肽中有哪些杂质[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]粗品和脱盐级别的多肽中多肽和非多肽类杂质：如非全长多肽和多肽后处理的一些原料如[/font]DTT[font=宋体]、[/font][font=Calibri]TFA[/font][font=宋体]等。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]7.HPLC[font=宋体]纯化的多肽有哪些杂质[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]经过[/font]HPLC[font=宋体]纯化的多肽，仍会有一些一些杂质存在，其中的杂质主要是短肽和微量[/font][font=Calibri]TFA[/font][font=宋体]。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]8.[font=宋体]多长的多肽为合适[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]多肽合成需要考虑多肽的长度，电荷，亲疏水性等因素。长度越长，合成粗品的纯度和产率都随着降低，纯化的难度和无法合成的几率就会大些。当然多肽功能区的序列是无法改变的，但是为了多肽的顺利合成，有时不得不在功能取的上下游增加一些辅助氨基酸，以改善多肽的溶解性和亲疏水性。如果多肽太短，合成也可能有问题，主要问题是合成的多肽在后处理过程中有一定的难度，[/font]5[font=宋体]肽以下的多肽，一般要有疏水的氨基酸，否则后处理难度加大。[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸残基以下的多肽一般都可以得到满意的产率和得率。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]9.[font=宋体]如何从多肽序列中判定多肽的溶解性[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt](1)[font=宋体]多肽中如果含有高比例的疏水性很强的氨基酸如和[/font][font=Calibri]Leu,Val,IIe,Met,Phe[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Trp[/font][font=宋体]，多肽很难溶解与水性溶液中或根本不可能溶解。这些氨基酸无论是纯化或合成，都有可能有问题。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt](2)[font=宋体]一般情况下疏水性氨基酸的比例[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]，不能连续[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]个连续[/font][font=Calibri]aa[/font][font=宋体]为疏水性，带电荷的氨基酸的[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]正电荷[/font][font=Calibri]K,R,H,N-terminus,[/font][font=宋体]负电荷[/font][font=Calibri]D,E,C- terminus)[/font][font=宋体]的比例达到[/font][font=Calibri]20%[/font][font=宋体]，在多肽的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]短如果能增加极性氨基酸，也可以改善溶解性。 [/font][font=Calibri]11.[/font][font=宋体]为什么含有[/font][font=Calibri]Cys,Met,[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]Trp[/font][font=宋体]的多肽难合成[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]含有[/font]Cys,Met[font=宋体]，或[/font][font=Calibri]Trp[/font][font=宋体]的多肽难以合成，同时难以获得高纯度的产品。主要因为这些基团不稳定，易氧化。这些多肽的使用和储存都需要特别注意，避免反复开启盖子。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]10.[font=宋体]为什么有些多肽的合成产率或纯度会比较低[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]多肽合成与引子合成有比较大的区别，不能合成的引子很少，但是不能合成的多肽经常有。如[/font]Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,[font=宋体]和[/font][font=Calibri]Thr[/font][font=宋体]这些氨基酸比邻或重复时，多肽链在合成过程中不能完全舒展溶解，合成效率下降。以下几种情形，合成效率和产物的纯度都比较低，如：重复[/font][font=Calibri]Pro,Ser-Ser[/font][font=宋体]，重复[/font][font=Calibri]Asp[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]个连续[/font][font=Calibri]Gly[/font][font=宋体]等。 [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]11.[font=宋体]多肽是如何纯化的[/font][font=Calibri]? [/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]多肽纯化一般使用反相柱[/font]([font=宋体]如[/font][font=Calibri]C8[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]C18[/font][font=宋体]等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]214nm[/font][font=宋体]。缓冲体系通常为含[/font][font=Calibri]TFA[/font][font=宋体]的溶剂，[/font][font=Calibri]pH2.0[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]Buffer A[/font][font=宋体]为含[/font][font=Calibri]0.1%TFA in ddH2O[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]Buffer B[/font][font=宋体]为[/font][font=Calibri]1%TFA/ACN/pH2.0[/font][font=宋体]。纯化前用[/font][font=Calibri]Buffer A[/font][font=宋体]溶解；如果溶解不好，用[/font][font=Calibri]Buffer B[/font][font=宋体]溶解后，然后用[/font][font=Calibri]Buffer A[/font][font=宋体]稀释；对疏水性强的多肽，有时还需要加入少量的[/font][font=Calibri]Formic Acid[/font][font=宋体]或醋酸。[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]分析多肽粗产物，如果多肽不长[/font][font=Calibri](15aa[/font][font=宋体]以下[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，一般会有主峰，主峰通常为全长产物；对于[/font][font=Calibri]20aa[/font][font=宋体]以上的长肽，如果没有主峰，[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]需搭配[/font][font=Calibri]Mass[/font][font=宋体]来判定分子量，进而确定哪个峰是所要合成的多肽。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体][img=,690,143]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007091611507608_3379_3531468_3.jpg!w690x143.jpg[/img][/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]国肽生物主要提供：多肽合成、多肽定制、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽（Cy3、Cy5、Fitc、AMC等）、目录肽、偶联蛋白（KLH、BSA、OVA等）、美容肽、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。详情请咨询国肽生物[/font][/size][/font]
[font=宋体][font=宋体]多肽抗原是基于天然靶蛋白的序列精心选择的短氨基酸序列。当目标蛋白的获取受限时，多肽是一种合适的解决方案。它们也是检测靶蛋白翻译后修饰（[/font][font=Calibri]PTM[/font][font=宋体]）位点的理想抗原，因为它们限制了潜在表位的数量。[/font][/font][font=宋体][b]为什么选择蛋白抗原免疫？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]您需要一种适用于多种应用的抗体[/font][font=宋体]您的目标蛋白与其他蛋白的序列相似性低，易于表达和纯化，且无毒[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]适用于：[/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IP/ChIP[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Sandwich ELISA[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IF/Flow cytomety[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Functional Assay[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IHC[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Direct Bind ELISA[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白抗原成功率高，此外多克隆抗体服务保证免疫原蛋白检测[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]阳性，且快至[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]周交付。更重要的是，我们可以从您的目标序列开始，服务包含蛋白抗原生产。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]为什么选择多肽抗原免疫？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]您的预期抗体应用仅包括[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]或翻译后修饰检测。[/font][/font][font=宋体]您的目标蛋白与其他蛋白具有高度的序列相似性，很难或不可能表达和纯化。[/font][font=宋体]适用于以下应用：[/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]PTM Detection[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]多肽抗原是基于天然靶蛋白的序列精心选择的短氨基酸序列。[/font] [font=宋体]当目标蛋白的获取受限时，多肽是一种合适的解决方案。[/font] [font=宋体]它们也是检测靶蛋白翻译后修饰（[/font][font=Calibri]PTM[/font][font=宋体]）位点的理想抗原，因为它们限制了潜在表位的数量。 虽然潜在表位少对于大多数抗体项目和应用来说是缺点，但是当产生[/font][font=Calibri]PTM[/font][font=宋体]抗体时，有限数量的表位使得发现仅针对[/font][font=Calibri]PTM[/font][font=宋体]位点的反应性抗体更易。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]多肽抗原的局限性：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]多肽抗原由于其价格低和周期短而具有吸引力，但更重要的是要考虑它的局限性。蛋白质抗原能够诱导针对构象表位的抗体，而针对肽抗原的抗体只能识别线性表位。尽管多肽产生的抗体可以在其他应用中起作用。但多肽抗原的价值主要体现在翻译后修饰检测抗体的制备。例如，抗多肽抗体可以应用于[/font][font=Calibri]Western blots[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]。然而，线性化蛋白必须包括用于免疫的固有线性多肽抗原的表位，以确保阳性结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/antigen-preparation-services][b]蛋白抗原和多肽抗原制备服务[/b][/url]，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antigen-preparation-services[/font][/font]
[size=12px] [b]降血压[/b] 火麻仁蛋白的降血压活性主要来源于其蛋白水解产物和衍生肽。火麻仁蛋白水解物的降压能力取决于所用蛋白酶的类型、水解条件、蛋白质底物的特性及其氨基酸组成。火麻仁蛋白水解物的降压能力还取决于其氨基酸组成，因为氨基酸的疏水性、支链和芳香残基的存在有助于增强对ACE和血管紧张素原酶的抑制作用。特别是，疏水性氨基酸可以增加肽在脂基介质中的溶解度，从而促使更大的降压效果。据报道，在已鉴定的23种火麻仁血管紧张素转换酶抑制肽中，两条序列分别为Trp-Tyr-Thr（WYT）和Ser-Val-Tyr-Thr（SVYT）的肽具有最高的 ACE和血管紧张素转换酶抑制作用。此外，SVYT、Ile-Pro-Ala-Gly-Val（IPAGV）和 Pro-Ser-Leu-Pro-Ala（PSLPA）在口服给自发性高血压小鼠后也表现出显著的降压能力。 [b]降血糖[/b] 一类天然的具有降血糖活性的物质就是从食用蛋白质中获得的生物活性肽，其中也包括从火麻仁蛋白水解物中纯化出来的生物活性肽。据报道，用碱性蛋白酶催化方法制备的火麻仁蛋白水解物显示出较高的α-葡萄糖苷酶抑制作用，进一步纯化和鉴定后，鉴定出两个多肽序列：Leu-Arg（LA）和Pro-Leu-Met-Leu-Pro（PLMLP）。同时发现多肽中的疏水性氨基酸，尤其是脯氨酸Pro和亮氨酸 Leu，对火麻仁蛋白水解物的α-葡萄糖苷酶抑制作用有很大的贡献。其他研究人员发现来源于火麻仁蛋白水解物的肽在体外具有DPP-IV抑制作用。 [b]神经保护[/b] 近年来也有研究验证了火麻仁蛋白水解物在预防或治疗神经衰退性疾病方面的潜在作用。在目前用于阿尔茨海默病治疗的药物中， 乙酰胆碱酯酶（AChE）抑制剂是处方最多的类别。使用1%胃蛋白酶水解的火麻蛋白对乙酰胆碱酯酶（AChE）有较强的抑制作用，IC50为6μg/mL，比其他蛋白酶的抑制作用都强。此外，火麻仁蛋白水解物还通过上调炎症相关基因的表达和下调氧化应激相关基因的表达，对BV-2小胶质细胞发挥神经保护作用。这些发现证明了火麻仁蛋白水解物在改善神经炎症状态方面的巨大潜力。 [b]抗氧化、抗癌[/b] 研究发现，纯化后的火麻仁蛋白多肽比相应的蛋白水解产物具有更强的自由基清除能力。有研究通过对发酵火麻仁粉进行研究，发现火麻仁蛋白可以激活Nrf2通路，修复HepG2细胞遭受到的氧化损伤。火麻仁蛋白还可以提高小鼠的抗疲劳能力和免疫调节功能，提高小鼠的运动耐力。此外，火麻仁蛋白水解物对癌细胞也显示出剂量依赖性的抗增殖作用。总的来说，这些发现有力地支持了火麻仁多肽具有作为功能性食品促进人类健康的潜在价值。 [b]02 法规动态[/b] 2002年，我国卫生部在关于进一步规范保健食品原料管理的通知中，将火麻仁列入[b]既是食品又是药品的物品名单[/b]。2020年版的中国药典详细规定了火麻仁的性状、鉴别、检查、含量测定、炮制方法、性味与归经、功能与主治、用法与用量以及贮藏条件。 目前，国内外尚未有关于火麻仁多肽相关的的法规发布。 [b]03 市场应用与产品动态[/b] 火麻仁具有抗氧化、抗衰老、改善记忆和心血管健康等多重药理活性，在食品应用领域，由于火麻仁含油量高，可以提炼成火麻油，这种油富含不饱和脂肪酸，有助于降低胆固醇和抗氧化。在保健品应用领域，火麻仁可用于治疗肠燥便秘，现代保健品开发中也常以此为主要功效，开发出润肠通便的保健品，如麻仁软胶囊和麻仁润肠丸等。火麻仁含有丰富的抗氧化成分，保健品行业利用这一点开发了具有抗衰老功效的产品，例如含有火麻仁提取物的营养补充胶囊。火麻仁的抗炎活性也被用于保健品的开发，可能有助于缓解慢性炎症相关的症状。 火麻仁多肽具有降血压、降血糖、提高免疫和保护心血管等多重药理活性，使其在食品、保健品和药品等领域开发前景广阔。火麻仁多肽含有人体所需的所有必需氨基酸，比例均衡，营养价值高。在80年代末到90年代初，我们国家就己经开始使用酶解制备的多肽来作为食物的营养基料，一些公司会加入一定数量的火麻仁多肽在儿童食品生产中来提高儿童免疫力，増强体质。多肽产品还可以用作婴幼儿以及老年人食品、调节肠道功能食品和免疫食品等基料，在临床上还可以用作辅助治疗食品，如脑病、消化不良、创伤、烧伤等患者。 [b]04 生产技术现状[/b] 制备生物活性肽的方法主要为酶解法，微生物发酵法，无需以食物蛋白作为原料、直接化学合成目标多肽的固相合成法以及基因重组法等。但是这些方法存在不足之处，例如，以固相合成法为代表的化学合成法，通常作为验证新肽的标准方法，但是，保护碱基和脱保护步骤繁琐，而且多周期和复杂的纯化过程也阻碍了其大规模的工业应用。蛋白酶水解法是从蛋白质中制备功能性多肽应用最广泛的方法，但缺点是水解过程不可控、目标肽含量低、纯化成本高、蛋白提取率低等。随着科学技术的不断发展，利用计算机技术筛选设计生物活性肽的研究逐渐增加，它较好地克服了传统方法的不足，可实现高通量筛选生物活性肽的目标。然而迄今为止，尚未开展利用计算机虚拟筛选火麻仁来源黄嘌呤氧化酶抑制肽的相关研究以及对火麻仁来源的黄嘌呤氧化酶抑制肽进行表征。 [b]05 科学家技术成果介绍 此技术中利用计算机技术对火麻仁蛋白进行虚拟酶解[/b]，评价多肽的生物活性，得到火麻仁多肽库；分子对接评价多肽与黄嘌呤氧化酶的结合方式，得到候选火麻仁多肽序列；化学合成所述黄嘌呤氧化酶抑制肽并测定其抑制活性；利用对应的蛋白酶酶解火麻仁蛋白并鉴定得到黄嘌呤氧化酶抑制肽。该抑制肽具有安全无毒副作用，水溶性较好的特点，能够持续稳定地抑制黄嘌呤氧化酶活性。该抑制肽DDNPRRFY的半抑制浓度IC50为2.10±0.06mg/mL，Ki值0.48±0.02mg/mL，表现为一种混合型抑制剂，能够持续稳定地抑制黄嘌呤氧化酶的活性。在预防和治疗痛风及高尿酸血症的药物、功能性食品添加剂，以及患者的长期治疗保健领域具有广泛的应用前景。 [b]06 结 论[/b] 此技术首次开展火麻仁蛋白来源抗痛风肽的研究，利用计算机虚拟酶解蛋白和分子对接技术筛选火麻仁黄嘌呤氧化酶抑制肽，比传统蛋白酶随机切割结合抑制活性筛选的方法更为高效、快速筛选得到新型的黄嘌呤氧化酶抑制肽。 [/size]
[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光技术[/b][/url]（[/font][font=Calibri]Immunofluorescence technique [/font][font=宋体]）是在免疫学、生物化学和荧光成像系统基础上建立起来的检测技术。技术原理是根据抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异结合，以荧光标记抗体示踪组织或细胞内相应抗原。免疫荧光技术因特异性强、灵敏度高和操作简便的优势广泛应用于免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等生物学和医学。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化，是应用免疫学基本原理[/font][font=宋体]——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术[/font][font=Calibri](immunohistochemistry)[/font][font=宋体]或免疫细胞化学技术[/font][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化和免疫荧光都经过免疫原，原理相似，只是显色剂不同，免疫荧光是免疫组化技术之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫组化是应用免疫学的基本原理，即抗原和抗体特异性结合的原理，通过化学反应确定组织细胞中的抗原，使标记有抗体的显色试剂显色，并对其进行定位、定性和相对定量研究。在免疫组化过程中，常用的显示剂包括荧光素、酶、金属离子或同位素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫荧光是一种不会影响抗原和抗体活性的荧光色素，被标记在抗体或抗原上，然后与其对应的抗原或抗体结合，在荧光显微镜下呈现特异性的荧光反应。免疫荧光是免疫组化技术之一，具有特异性强、灵敏度高、速度快的特点。但相对结果判断的客观性不足，技术程序复杂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化与免疫荧光的真正目的均为明确病理诊断，以便患者获得精准治疗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有专业的技术人员和共聚焦显微镜等仪器平台，为客户提供高质量的免疫荧光检测服务，包括对细胞爬片、石蜡切片、冷冻切片和组织芯片等进行免疫荧光单染、双染、及多重染色等。可以为客户提供免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）检测服务和石蜡切片免疫组化（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）检测服务，有需求的朋友可以来义翘官网进行查询，详情参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font]
请问：酶联免疫法检测的结果可以用31650来判定么？
生物体内大多数的化学反应、生物反应和生命进程都是有特定的氨基酸序列调控的。能够转录这些相互作用的多肽序列和具有诱导产生小片段并且活性稳定的能够人工合成的的多肽的生物学活性已经开创了多肽在皮肤学和皮肤护理领域的分子应用。比如应用在如感染、色素沉积、细胞增殖和分化、血管形成、遗传免疫和蛋白合成及调控等。如今，生物肽在皮肤护理的相关进程中起着重要的作用，化妆品肽的市场需求也越来越高，国肽生物也开始供应多种化妆品肽。多肽化妆品产品分类:相关文献：http://www.bankpeptide.com/product.do?id=55ca35af-917c-4ae9-b21c-4f9d25d8d14f九胜肽-1/美立肽乙酰基四肽-9/得美素铜肽/三肽-1铜/蓝铜胜肽乙酰基八肽/抗皱寡肽/乙酰谷氨酰七胜肽-3乙酰基六肽-8/阿基瑞林乙酰基四肽-5/眼丝氨肽棕榈酰四肽-7/棕榈酰四肽-3六肽-9/可丽肽/可丽素六肽-10/丝丽素五肽-18/亮啡丝肽六肽-2[img=,690,300]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/04/201904301004153702_7446_3531468_3.jpg!w690x300.jpg[/img]我们主要提供：多肽合成、定制多肽、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽（Cy3、Cy5、Fitc、AMC等）、目录肽、偶联蛋白（KLH、BSA、OVA等）、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。合肥国肽生物官网：http://www.bankpeptide.com欢迎咨询服务热线：17718122172；17718122684；17730030476；17718122397
[size=4]化学发光免疫分析 [/size][url=http://baike.baidu.com/view/1401709.htm][size=4]化学发光免疫分析[/size][/url][size=4](chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。[/size]
[font=宋体]免疫层析法和胶体金法是两种常用的生物检测技术，它们在原理、应用和优缺点等方面存在显著差异。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]①原理区别：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]免疫层析法是一种基于抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应的生物检测技术，利用标记有荧光物质、酶、胶体金等物质的抗体或抗原，检测样品中是否存在相应的抗原或抗体。当样品中的抗原与标记的抗体结合后，可以通过层析作用将结合物分离并检测。[/font][/font][font=宋体]而胶体金法则是利用胶体金作为标记物，通过免疫学方法检测样品中的生物分子。胶体金是一种由氯金酸水溶液在还原剂作用下形成的金颗粒，这些金颗粒分散在溶液中形成胶体溶液。当生物分子与胶体金结合后，可以通过显色反应判断是否存在该生物分子。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]②应用区别：[/font][/b][font=宋体]免疫层析法主要应用于医学诊断、食品安全、环境监测等领域。例如，用于检测尿液、血液、组织液等生物样品中的病毒、细菌、蛋白质等物质。[/font][font=宋体]胶体金法则主要应用于免疫分析、生物传感器等领域。由于胶体金法操作简便、灵敏度高、[/font][font=宋体]特异性好等特点，被广泛应用于临床诊断、生物制品质量控制等方面。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]③优缺点区别：[/font][/b][font=宋体]免疫层析法和胶体金法在优缺点方面也存在差异。[/font][font=宋体]免疫层析法的优点在于其高特异性、高灵敏度、高重复性等特点，能够快速准确地检测出样品中的目标物质。但是免疫层析法的操作较为繁琐，需要经过多个步骤才能完成检测，而且成本较高。[/font][font=宋体]胶体金法的优点在于其操作简便、快速、无需特殊设备等特点，能够在短时间内完成大量样品的检测。但是胶体金法的缺点在于其灵敏度相对较低，对于低浓度目标物质的检测可能会出现假阳性或假阴性的情况。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总的来说，免疫层析法和胶体金法各有其优缺点，具体应用应根据实际情况选择。在某些情况下，可以将两种方法结合使用，以获得更好的检测效果。例如，在检测病毒抗原时，可以先使用免疫层析法进行初筛，然后再用胶体金法进行确认，以提高检测的准确性和特异性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，免疫层析法和胶体金法是两种常用的生物检测技术，它们在原理、应用和优缺点等方面存在显著差异。在实际应用中，应根据具体情况选择合适的方法，以达到最佳的检测效果。同时，随着技术的不断发展，相信这两种方法将会在未来的生物检测领域发挥更加重要的作用。[/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification][b]蛋白层析纯化[/b][/url]详情：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification[/font][/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]
一、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。二、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。三、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。四、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1）免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。2）免疫酶标方法 免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。 本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。 免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。3）免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。五、被检测的物质 组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激 素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。六、特点 1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。七、从蛋白水平检测角度，免疫组化技术与Western blotting、ELISA的异同 1）Western blotting：蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然Western blotting也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于免疫组化技术。2）ELISA：酶联免疫吸附试验，也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。
免疫分析法进展[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=26033]免疫分析法进展[/url]
化学发光免疫分析放射免疫分析法有很高的灵敏度，但存在着放射性防护和同位素污染等问题。近年来，许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现。其中，在化学发光反应及抗原-抗体特异性识别基础上建立起来的一种新的非放射免疫分析技术--化学发光免疫分析法，由于这种方法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，线性范围宽，仪器设备简单，试剂价格低廉，方法稳定、快速等优点，已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测。 化学发光免疫分析包括三大类型：即标记化学发光物质的化学发光免疫分析；标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。下面以偶合放大化学发光酶联免疫分析法检测人血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为例。 (一) 原理 尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H２O２反应体系产生化学发光，但由于该体系的检测灵敏度不够高，不能满足酶联免疫测定的要求。因此，为了提高体系的检测灵敏度，可将HRP催化H２O２氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H２O２的化学发光反应相偶合，建立偶合放大化学发光酶联免疫分析法。这里，酶的活性是基于下列发光反应进行检测的: HRP luminol＋H２O２───→产物＋hν 产 物 ↑ Eosin＋H２O２ ──────┘ HRP 二) 操作步骤 1. 包被抗体 在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚，再加入300μl用0.05M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体，同时设空白对照，置4℃过夜。 2. 洗涤 用抽滤针头吸干管内液体，加入Tris-HCl-Tween20洗涤3次，每次加2ml，放置3～5min，用抽滤针头吸干管内液体。 3. 加待检血清和阳性标准品 用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300μl。同时设阴性对照;空白对照管只加抗体稀释液。置37℃孵育2h。 4. 洗涤 同2。 5. 加酶标抗体 用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体，每管加入300μl，空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37℃孵育2h。 6. 洗涤 同2。 7. 化学发光测定 给每管加入300μl底物溶液，置37℃保温20min。犎;后将小试放入LKB-1250 lumimeter中，并置于测量位置，加入300μl 5.0×10－４M luminol。记录仪记录化学发光强度。 8. 同时用ELISA方法进行对照，结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。 结果判定(1) 定性 按下列公式判别阴、阳性: L样品－L空白 ┌≥2.1 为阳性 S／N ＝ ──────── ＝ 商│ L阴性对照－L空白 └＜2.1 为阴性 (2) 定量 以不同稀释度的HBsAg阳性标准品的化学发光强度为纵坐标，不同稀释倍数为横坐标，作出剂量反应曲线(标准曲线)，犜r待测样品中HBsAg的含量就可由测量的化学发光强度换算得到。
多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。随着现代科技的飞速发展，从天然产物中获得肽类物质的手段也不断得到提高。一些新方法、新思路的应用。不断有新的肽类物质被发现应用于防病治病之中。本文介绍了近几年肽类物质分离、分析的主要方法研究进展。 1 分离方法 采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。 1.1 高效液相色谱（HPLC） HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。 1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC） 结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响，并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件。 肽图分析（Peptide Mapping）：肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶[一般未肽链内切酶（endopeptidase）]作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，肽图分析对多肽结构研究合特性鉴别具有重要意义。利用胰蛋白酶能特意性作用于Arg和Lys羧基端的肽链的性质，通过RP-HPLC法采用C18柱检测了重组人生长激素特征性胰肽图谱。同时胰岛素的肽图经V8酶专一裂解也制得，并可鉴别仅相差一个氨基酸残疾的不同种属来源的胰岛素。人类肿瘤坏死因子的单克隆抗体结构也应用酶解法及在线分析技术确定了肽图，便于鉴定分析。此项技术已经在新药开发中得到广泛应用。 1.1.2 疏水作用色谱（Hydrophobic interaction chromatogrphy，HIC） HIC是利用多肽中含有疏水基因，可与固定相之间产生疏水作用而达到分离分析的目的，其比RP-GPLC具有较少使多肽变性的特点。利用GIC分离生产激素（GH）产品的结构与活性比EP-GPLC分离的要稳定，活性较稳定。Geng等利用HIC柱的低变性特点，将大肠杆菌表达出的经盐酸胍乙啶变性得到人重组干扰素-γ。通过HIC柱纯化、折叠出高生物活性的产品。不同人尿表皮生长因子（EGF）也利用HIC纯化到了，均具有良好的生物活性。HIC可将未经离子交换柱的样品纯化。而RP-HPLC则不能达到这一要求。
癌症免疫疗法为治愈癌症提供了曙光免疫疗法是近年来日益受到青睐的癌症疗法，简单来说，就是让免疫系统识别癌细胞并主动发起攻击。机体免疫系统通常是选择忽视癌细胞的，过去数十年里对于免疫疗法的研究就是为了攻克这一难题。一些疗法会制造一种标记癌细胞的蛋白成分，以便免疫系统识别。其他疗法包括从患者体内提取出最能有效抗肿瘤的白细胞，通过基因修饰让这些白细胞专门攻击癌细胞。几年前当免疫疗法的临床试验开始逐渐显现成效时，这一治疗方法才开始成为大众关注的焦点。2013年制药公司Bristol-Myers Squibb在临床试验中发现，免疫疗法让1800名黑色素瘤晚期患者中的22%寿命延长3年。其中开发的两种药物Yervoy和Opdivo取得了令人鼓舞的成果。当年癌症免疫疗法还被国际顶级杂志《科学》评为年度十大科学突破之首。
化学发光反应参与的免疫测定分为二种类型。第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的敏感性；第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记物，直接通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量。 一、化学发光酶免疫测定 从标记免疫测定来看，化学发光酶免疫测定（chemiluminescentenzymeimmunoasssay，CLEIA）应属酶免疫测定。测定中2次抗原抗体反应步骤均与酶免疫测定相同，仅最后一步酶反应所用底物为发光剂，通过化学发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。两种常用的标记酶，辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）均有其发光底物，由此建立的CLEIA均在临床检验中应用。 （一）HRP标记的CLEIA 常用的底物为鲁米诺或其衍生物。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，通常以0.1mol/LpH8.6Tris缓冲液作底物液，鲁米诺和H2O2在无HRP催化时也能缓慢自发发光，而在最后光强度测定中造成空白干扰，因而宜分别配制成2瓶试剂溶液，只在用前即刻混合。 HRP催化鲁米诺氧化的反应可被某些酚试剂（如邻－碘酚）或萤火虫荧光素酶等加强。加强剂的作用是增强发光和延长发光时间，由此可提高敏感度。 （二）AP标记的CLEIA 在以AP为标记酶的CLEIA中，应用的底物为adamantyldioxetasephosphate，有不少衍生物的商品试剂如PPD可供应用。发光反应的反应式如下：[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290913_24989_1636364_3.jpg[/img]二、化学发光标记免疫测定 化学发光标记免疫测定亦称化学发光免疫测定（chemiluminescentimmunoassay，CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件：①能参与化学发光反应；②与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂；③偶联后仍保留高的量子效应和反应动力；④应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。 鲁米诺类的发光反应须有催化剂（例如过氧化物酶）催化，且与蛋白质或肽结合后其发光作用减弱，因此鲁米诺类在CLEIA中是很好的底物，但已较少用于CLIA的标记。吖啶酯类对CLIA更为适用，其显著的优点是：①氧化反应不需催化剂，只要碱性环境中就可以进行。反应物在加入H2O2后再加氢化钠溶液，发光反应迅速，本底低。②在氧化反应过程中，结合物被分解，因此游离的吖啶酯的发光不受抑制。试剂稳定性好。 三、电化学发光免疫测定 在电化学发光免疫测定（electrochemluminescenceimmunoassay，ECLI）中应用的标记物为电化学发光反应的底物三联吡啶钌，其衍生物N-羟基琥珀酰胺（NHS）酯可通过化学反应与抗体或不同化学结构的抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。ECLI的测定模式与ELISA相似，分二个步骤进行。以双抗体夹心法测定抗原为例，第一步在试管中进行，反应物为Ru(bpy)32+标记的抗体、吸附在磁性微球上的固相抗体以及受检的标本，反应式如图[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290914_24990_1636364_3.jpg[/img]反应后除由标记抗体、固相抗体与标本中的抗原形成的夹心复合物外，尚有多余的标记抗体和固相抗体。第二步是将反应液输入特殊的检测仪器的反应室中（图18-3），随即用含三丙胺（TPA）的缓冲液冲洗。反应室电极下有磁铁。含磁性微球的夹心复合物及游离的固相抗体被吸附在电极表面，游离的标记抗体随冲洗液流出。此时在反应室中即发生如图18-1的电化学发光反应。发出的光由光电倍增管转为信号，通过电信号的测定反映标本中抗原的含量。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290915_24991_1636364_3.jpg[/img]ECLI具有以下优点：①标记物在再循环利用，使发光时间更长、强度更高、易于测定；②敏感度高，可达pg/ml或pmol水平；③线性范围宽，＞104；④反应时间短，20min以内可完成测定；⑤试剂稳定性好，2～5℃可保持一年以上。 四、在医学检验中的应用 放射免疫分析因标记物的放射性在应用中存在不少问题。为替代这一广被采用的测定方法，近年来创立了多种新的标记免疫技术。化学发光免疫测定具有明显的优越性：①敏感度高，甚至超过RIA；②精密度和准确性均可与RIA相比；③试剂稳定，无毒害；④测定耗时短；⑤测定项目多；⑥已发展成自动化测定系统。因此化学发光免疫测定在医学检验中不仅能取代RIA，而且可得到更为广泛的应用。
[em04] 摘 要 综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法，主要包括高效液相色法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。 多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。随着现代科技的飞速发展，从天然产物中获得肽类物质的手段也不断得到提高。一些新方法、新思路的应用。不断有新的肽类物质被发现应用于防病治病之中。本文介绍了近几年肽类物质分离、分析的主要方法研究进展。 1 分离方法 采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。 1.1 高效液相色谱（HPLC） 1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC） 1.1.2 疏水作用色谱（Hydrophobic interaction chromatogrphy，HIC） 1.1.3 分子排阻色谱（Sizs-Exclusion chromatogrphy，SEC） SEC是利用多肽分子大小、形状差异来分离纯化多肽物质，特别对一些较大的聚集态的分子更为方便，如人重组生长激素（hgH）的分离，不同结构、构型的GH在SEC柱上分离行为完全不同，从而可分离不同构型或在氨基酸序列上有微小差异的变异体，利用SEC研究修饰化的PEG的分离方法，此PEC具有半衰期长、作用强的特点。一些分子量较大的肽或蛋白均可利用此法分离分析。 1．1．4离子交换色谱（Iron-Exchange chromatography,IEXC） IEXC可在中性条件下，利用多肽的带电性不同分离纯化具有生物活性的多肽。其可分为阳离子柱与阴离子柱两大类，还有一些新型树脂，如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶树脂等。在多肽类物质的分离分析研究中，对多肽的性质、洗脱剂、洗脱条件的研究较多，不同的多肽分离条件有所不同，特别是洗脱剂的离子强度、盐浓度等对纯化影响较大。Wu等报道利用离子交换柱层析法，探讨分离牛碳酸酐异构体和牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白酶的提取条件，获得了有价值的数据供今后此类物质分离研究。 1．1．5膜蛋白色谱（Chromatography of Membrane Protein,CMP） CMP+分离强蔬水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如SDS）溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（P-端），又具有阳离子钙（C-端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS结合量有关。利用原子散射法研究cAMP的分离机制发现，样品与SDS结合后在离子交换柱上存在SDS分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。 1．1．6高效置换色谱（High-Performance Displacement Chromatography,HPDC） HPDC是利用小分子高效置换剂来交换色谱柱上的样品，从而达到分离的目的。它具有分离组分含量较少成分的特性。利用HPDC鉴定分离了低于总量1%组分的活性人重组生长激素（rHG ）。在研究非毒性交换剂时Jayarama发现硫酸化葡萄糖（Detran Sulfate，DS）是对β乳球蛋白A和B的良好置换剂，一般DS的相对分子质量为1×104和4×104最宜。研究表明置换剂的相对分子质量越低，越易于与固定相结合，因此在分离相对分子质量小的多肽时，需要更小的置换剂才能将其置换纯化出来。 1.1.7 灌注层析（Perfusion Chromatography，PC） PC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法，固定相孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。试验证明其在生产、制备过程中具有低投入、高产出的特性。目前市场上可供应的PC固定相种类较多，适合于不同分子量的多肽分离使用。 1.2 亲和层析（Affinity Chromatography，AC） AC是利用连接在固定相基质上的配基与可以和其特异性产生作用的配体之间的特异亲和性而分离物质的层析方法。自1968年Cuatrecasas提出亲和层析概念以来，在寻找特异亲和作用物质上发现了许多组合，如抗原-抗体、酶-催化底物、凝集素-多糖、寡核苷酸与其互补链等等。对多肽类物质分离目前主要应用其单抗或生物模拟配基与其亲和，这些配基由天然的，也有根据其结构人工合成的。Patel等人利用一系列亲和柱分离纯化到了组织血浆纤维蛋白酶原激活剂蛋白多肽。 1.3 毛细管电泳（Capillary electrophoresis，CE）--分离分析方法 CE是在传统的电泳技术基础上于本世纪60年代末由Hjerten发明的，其利用小的毛细管代替传统的大电泳槽，使电泳效率提高了几十倍。此技术从80年代以来发展迅速，是生物化学分析工作者与生化学家分离、定性多肽与蛋白类物质的有利工具。CE根据应用原理不同可分为以下几种；毛细管区带电泳Capillary Zone electrophoresis，CZE）、毛细管等电聚焦电泳（Capillary Isoeletric Focusing，CIEF）毛细管凝胶电泳（CapillaryGelElectrophoresis，CGE）和胶束电动毛细管层析（Micellar Electokinetic Electrophoresis Chromatorgraphy,MECC）等。 1.3.1 毛细管区带电泳（Capillary Zone Electrophoresis，CZE） CZE分离多肽类物质主要是依据不同组分中的化合物所带电性决定，比传统凝胶电泳更准确。目前存在于CZE分离分析多肽物质的主要问题是天然蛋白或肽易与毛细管硅胶柱上的硅醇发生反应，影响峰形与电泳时间，针对这些问题不少学者做了大量实验进行改进，如调节电池泳液的PH值，使与硅醇反应的极性基团减少；改进毛细管柱材料的组成，针对多肽性质的不同采取不同的CZE方法研究分离5个含9个氨基酸残基的小肽，确定了小肽分析的基本条件，即在低PH条件下，缓冲液中含有一定浓度的金属离子如Zn2+等，此时分离速度快而且准确。 1．3．2细管等电聚电泳（Capillary Isleletric Focusing,CIEF） 由于不同的蛋白、多肽的等电点（PI）不同，因此在具有不同pH梯度的电泳槽中，其可在等电点pH条件下聚集沉淀下来，而与其他肽类分离开来。CIEF在分离、分析混合多肽物质中应用不多，主要应用与不同来源的多肽异构体之间的分离，如对rHG不同异构体分离。由于在CIEF柱表面覆盖物的不稳定性限制了此法的广泛应用。 1．3. 3毛细管凝胶电泳 (Capillary Gel Electrophoresis,CGE) CGE是基于分子筛原理，经十二烷基磺酸钠（SDS）处理的蛋白或多肽在电泳过程中主要靠分子形状、分子量不同而分离。目前，又有一种非交联欢、线性、疏水多聚凝胶柱被用于多肽物质的分离分析，此电泳法适于含疏水侧链较多的肽分离，这种凝胶易于灌注，使用寿命长，性质较为稳定。 1．3．4胶束电动毛细管层析（Micellar Electrokinetic Electorphoresis Chromatography, MECC） MECC的原理是在电泳液中加入表面活性剂，如SDS，使一些中性分子带相同电荷分子得以分离。特别对一些小分子肽，阴离子、阳离子表面活性剂的应用都可使之形成带有一定电荷的胶束，从而得到很好的分离效果。有文献报道在电解液中加入环糊精等物质，可使用权含疏水结构组分的多肽选择性与环糊精的环孔作用，从而利用疏水作用使多肽得到分离。 1．4多肽蛋白质分离工程的系统应用 以上提到的分离多肽的技术在实际应用过程中多相互结合，根据分离多肽性质的不同，采用不同的分离手段。特别是后基因组时代，对于蛋白质组深入的研究，人们对于分离多肽及蛋白质的手段不断改进，综合利用了蛋白质和多肽的各种性质，采用包括前面提到的常规蛋白多肽提取方法，同时利用了高效液相色谱，毛细管电泳，2-D电泳等手段分离得到细胞或组织中尽可能多的蛋白多肽。在蛋白质组学研究中系统应用蛋白和多肽分离鉴定的技术在此研究中即是分离手段也是分析方法之一。特别是以下提到的质谱技术的发展，大大的提高了蛋白多肽类物质的分析鉴定的效率。
多肽合成是一个固相合成顺序顺序一般从C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来，经过不断的改进和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法无法比拟的优点，从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。多肽合成总的来说分成两种：固相合成和液相多肽合成。【详情请咨询合肥国肽生物】多肽合成技术 Merrifield首次提出了固相多肽合成方法(SPPS)以来，此技术的优势受大众青睐，所以目前大众比较长使用的多肽合成技术手段就是固相合成技术。固相合成肽技术是液相合成肽技术的升华。液相合成技术，也可进行多肽的合成，通常此方法会导致消旋的副反应，或在强碱存在时形成5(4H)-oxaylones和N-acylurea而受到影响。庆幸地是，这些副反应能最小化，但是还不能完全消除。固相多肽合成原理 1963年，Merrifield提出了固相多肽合成方法，由于其合成方便，迅速，成为多肽合成的首选方法，而且带来了多肽有机合成上的一次**，并成为了一支独立的学科——固相有机合成，固相合成的发明同时促进了肽合成的自动化。 例如，国肽生物多肽合成主要是采用Fmoc合成法。Fmoc合成法采用Fmoc为α-氨基的保护基，侧链保护采用苄醇类。合成时将一个Fmoc－氨基酸衍生物共价交联到树脂上，用碱脱除Fmoc，用三乙胺中和游离的氨基末端，然后通过DCC活化、偶联下一个氨基酸，脱保护多采用HF法或TFMSA（三氟甲磺酸）法。多肽合成服务种类 多肽合成服务通常有线性肽合成服务、多种难肽合成服务、修饰肽合成服务、以及部分多肽合成公司还会提供多肽定制服务，定制出有针对性的合成肽。 目前有多肽合成公司提供的线性肽合成可达100个氨基酸，在修饰肽合成上，能提供常见修饰，磷酸化（Ser/Thr/Tyr），环化（酰胺环/二硫键环），荧光标记（5(6)-FAM，FITC，CY5，RhodamineB，PNA，EDNAS/dabcyl等），生物素标记（Biotin，Lys(Biotin)）/复合抗原（MAP）/含D型氨基酸,及各种氨基酸衍生物均可合成。多肽产物纯度选择 常见的质谱级多肽纯度，一般要求95% 用于抗体筛选纯度，一般85%即可 NMR和结晶试验中，纯度一般98% 粗品肽，一般50%即可用于多肽筛选[img=,690,120]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907051044484496_5504_3531468_3.jpg!w690x120.jpg[/img]国肽生物主要提供：多肽合成、定制多肽、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽（Cy3、Cy5、Fitc、AMC等）、目录肽、偶联蛋白（KLH、BSA、OVA等）、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。合肥国肽生物官网：http://www.bankpeptide.com
多肽合成又叫肽链合成，是一个固相合成顺序一般从C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。多肽的合成主要分为两条途径:化学合成多肽和生物合成多肽。请移步百度搜“合肥国肽生物”即可多肽合成的原理多肽合成就是如何把各种氨基酸单位按照天然物的氨基酸排列顺序和连接方式连接起来。由于氨基酸在中性条件下是以分子内的两性离子形式(H3+NCH(R)COO-)存在，因此，氨基酸之间直接缩合形成酰胺键的反应在一般条件下是难于进行的。氨基酸酯的反应活性较高。在100℃下加热或者室温下长时间放置都能聚合生成肽酯，但反应并没有定向性，两种氨基酸a1和a2的酯在聚合时将生成a1a2…、a1a1…、a2a1…等各种任意顺序的混合物。为了得到具有特定顺序的合成多肽，采用任意聚合的方法是行不通的，而只能采用逐步缩合的定向多肽合成方法。一般是如下式所示，即先将不需要反应的氨基或羧基用适当的基团暂时保护起来，然后再进行连接反应，以保证多肽合成的定向进行。式中的X和Q分别为氨基和羧基的保护基，它不仅可以防止乱接副反应的发生，还具有能消除氨基酸的两性离子形式，并使之易溶于有机溶剂的作用。Q在有的情况下也可以不是共价连接的基团，而是由有机强碱(如三乙胺)同氨基酸的羧基氢离子组成的有机阳离子。Y为一强的吸电子基团，它能使羧基活化，而有利于另一氨基酸的自由氨基，对其活化羧基的羧基碳原子进行亲核进攻生成酰胺键。由此所得的连接产物是N端和C端都带有保护基的保护肽，要脱去保护基后才能得到自由的肽。如果肽链不是到此为止，而是还需要从N端或C端延长肽链的话，则可以先选择性地脱去X或Q，然后再同新的N保护氨基酸(或肽)或C保护的氨基酸(或肽)进行第二次连接，并依次不断重复下去，直到所需要的肽链长度为止。对于长肽的多肽合成来说，一般有逐步增长和片段缩合两种伸长肽链的方式，前者是由起始的氨基酸(或肽)开始。每连接一次，接长一个氨基酸，后者则是用N保护肽同C保护肽缩合来得到两者长度相加的新的长肽链。对于多肽合成中含有谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸等等带侧链功能团的氨基酸的肽来说，为了避免由于侧链功能团所带来的副反应，一般也需要用适当的保护基将侧链基团暂时保护起来。多肽合成方法分类多肽的合成主要分为两条途径:化学合成多肽和生物合成多肽。化学合成主要是以氨基酸与氨基酸之间缩合的形式来进行。在合成含有特定顺序的多肽时，由于多肽合成原料中含有官能度大于2的氨基酸单体，多肽合成时应将不需要反应的基团暂时保护起来，方可进行成肽反应，这样保证了多肽合成目标产物的定向性。多肽的化学合成又分为液相合成和固相合成。多肽液相合成主要分为逐步合成和片段组合两种策略。逐步合成简洁迅速，可用于各种生物活性多肽片段的合成。片段组合法主要包括天然化学连接和施陶丁格连接。近年，多肽液相片段合成法发展迅速，在多肽和蛋白质合成领域已取得了重大突破。在多肽片段合成法中，根据多肽片段的化学特定性或化学选择性，多肽片段能够自发进行连接，得到目标多肽。因为多肽片段含有的氨基酸残基相对较少，所以纯度较高，且易于纯化。多肽的生物合成方法主要包括发酵法、酶解法，随着生物工程技术的发展，以DNA重组技术为主导的基因工程法也被应用于多肽的合成。多肽的固相合成多肽的合成是氨基酸重复添加的过程，通常从C端向N端(氨基端)进行合成。多肽固相合成的原理是将目的肽的第一个氨基酸C端通过共价键与固相载体连接，再以该氨基酸N端为合成起点，经过脱去氨基保护基和过量的已活化的第二个氨基酸进行反应，接长肽链，重复操作，达到理想的合成肽链长度，最后将肽链从树脂上裂解下来，分离纯化，获得目标多肽。1、Boc多肽合成法Boc方法是经典的多肽固相合成法，以Boc作为氨基酸α-氨基的保护基，苄醇类作为侧链保护基，Boc的脱除通常采用三氟乙酸(TFA)进行。多肽合成时将已用Boc保护好的N-α-氨基酸共价交联到树脂上，TFA切除Boc保护基，N端用弱碱中和。肽链的延长通过二环己基碳二亚胺(DCC)活化、偶联进行，最终采用强酸氢氟酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)将合成的目标多肽从树脂上解离。在Boc多肽合成法中，为了便于下一步的多肽合成，反复用酸进行脱保护，一些副反应被带入实验中，例如多肽容易从树脂上切除下来，氨基酸侧链在酸性条件不稳定等。2、Fmoc多肽合成法Carpino和Han以Boc多肽合成法为基础发展起来一种多肽固相合成的新方法——Fmoc多肽合成法。Fmoc多肽合成法以Fmoc作为氨基酸α-氨基的保护基。其优势为在酸性条件下是稳定的，不受TFA等试剂的影响，应用温和的碱处理可脱保护，所以侧链可用易于酸脱除的Boc保护基进行保护。肽段的最后切除可采用TFA/二氯甲烷(DCM)从树脂上定量完成，避免了采用强酸。同时，与Boc法相比，Fmoc法反应条件温和，副反应少，产率高，并且Fmoc基团本身具有特征性紫外吸收，易于监测控制反应的进行。Fmoc法在多肽固相合成领域应用越来越广泛。多肽液相分段合成随着多肽合成的发展，多肽液相分段合成(即多肽片段在溶液中依据其化学专一性或化学选择性，自发连接成长肽的合成方法)在多肽合成领域中的作用越来越突出。其特点在于可以用于长肽的合成，并且纯度高，易于纯化。多肽液相分段合成主要分为天然化学连接和施陶丁格连接。天然化学连接是多肽分段合成的基础方法，局限在于所合成的多肽必须含半光氨酸(Cys)残基，因而限定了天然化学连接方法的应用范围。天然化学连接方法的延伸包括化学区域选择连接、可除去辅助基连接、光敏感辅助基连接。施陶丁格连接方法是另一种基础的片段连接方法，其为多肽片段连接途径开拓了更广阔的思路。正交化学连接方法是施陶丁格连接方法的延伸，通过简化膦硫酯辅助基来提高片段间的缩合率。其他多肽合成方法1、氨基酸的羧内酸酐法(NCA)氨基酸的羧内酸酐的氨基保护基也可活化羧基。NCA的原理:在碱性条件下，氨基酸阴离子与NCA形成一个更稳定的氨基甲酸酯类离子，在酸化时该离子失去二氧化碳，生成二肽。生成的二肽又与其他的NCA结合，反复进行。NCA适用于短链肽片段的多肽合成，其周期短、操作简单、成本低、得到产物分子量高，在目前多肽合成中所占比例较大，技术也较为通用。2、组合化学法20世纪80年代，以固相多肽合成为基础提出了组合化学法，即氨基酸的构建单元通过组合的方式进行连接，合成出含有大量化合物的化学库，并从中筛选出具有某种理化性质或药理活性化合物的一套多肽合成策略和筛选方案。组合化学法的多肽合成策略主要包括:混合-均分法、迭代法、光控定位组合库法、茶叶袋法等。组合化学法的最大优点在于可同时合成多种化合物，并且能最大限度地筛选各种新化合物及其异构体。3、酶解法酶解法是用生物酶降解植物蛋白质和动物蛋白质，获得小分子多肽。酶解法因其多肽产量低、投资大、周期长、污染严重，未能实现工业化生产。酶解法获得的多肽能够保留蛋白质原有的营养价值，并且可以获得比原蛋白质更多的功能，更加绿色，更加健康。4、基因工程法基因工程法主要以DNA重组技术为基础，通过合适的DNA模板来控制多肽的序列合成。有研究者通过基因工程法获得了准弹性蛋白-聚缬氨酸-脯氨酸-甘氨酸-缬氨酸-甘氨酸肽(VPGVG)。利用基因工程技术生产的活性多肽还有肽类抗生素、干扰素类、白介素类、生长因子类、肿瘤坏死因子、人生长激素，血液中凝血因子、促红细胞生成素，组织非蛋白纤溶酶原等。基因工程法合成多肽具有表达定向性强，安全卫生，原料来源广泛和成本低等优点，但因存在高效表达，不易分离，产率低的问题，难以实现规模化生产。5、发酵法发酵法是从微生物代谢产物中获得多肽的方法。虽然发酵法的成本低，但其应用范围较窄，因为现在微生物能够独立合成的聚氨基酸只有ε-聚赖氨酸(ε-PL)、γ-聚谷氨酸(γ-PGA)和蓝细菌肽。[align=center][img=,770,348]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903151633244062_8177_3531468_3.jpg!w770x348.jpg[/img][/align]请移步百度搜“合肥国肽生物”即可我们主要提供：多肽合成、定制多肽、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽（Cy3、Cy5、Fitc、AMC等）、目录肽、偶联蛋白（KLH、BSA、OVA等）、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。
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