双特异性抗体

双特异性抗体（Bispecific antibodies, BsAbs）是一种可以与相同或不同抗原上的不同表位结合的抗体结构。目前双特异性抗体被广泛应用于肿瘤治疗领域，比如将抗CD3抗体与肿瘤靶向抗体进行组合，所构建的双特异性抗体可招募T细胞接近肿瘤细胞，起到介导T细胞杀伤肿瘤细胞的作用，除此之外，双特异性抗体还被应用于治疗骨质疏松、血友病、自身免疫疾病等其他领域。

本文使用新型离子交换色谱柱ProPac Elite WCX 5 μ m 4.0mmX150 mm色谱柱和CX- 1Buffer缓冲液，进行pH梯度高分辨率分析非对称型双特异性抗体和对称型的IgG类抗体,使用MAbPac SCX-10 RS 5um 4.6 mmX50 mm色谱柱和CX-1 Buffer缓冲液，进行pH梯度高分辨率分析片段型双特异性抗体。解决了等电聚焦电泳和其他色谱分离模式不能分离的杂质异构体。给双特异性抗体的QC方法控制提供参考。

TSKgel UP-SW3000粒径2um的SEC色谱柱可以通过SEC/MS方法对双特异性抗体（bsAbs）的精确分子量进行测定。在TSKgel UP-SW3000色谱柱上可以使用非变形条件下的MS兼容流动相，并且色谱柱不存在填料颗粒脱落或样品残留等现象。

双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应，是基因工程抗体的一种，现已成为抗体工程领域的热点，在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。双特异性抗体药物具有浓度低及药效显著的特点，传统紫外-可见分光光度法只能准确检测A280 nm，在0.3~0.7范围的蛋白浓度，无法准确测定低浓度蛋白样品。本应用中作者采用了TSKgel G3000SWXL尺寸排阻色谱柱建立了测定低浓度双特异性抗体药物浓度方法，该方法同时也适合于中、高浓度药物浓度检测。

人抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)检测试剂盒人抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)抗原、生物素化的人抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)检测试剂盒人粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)抗原、生物素化的人粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

肿瘤特异性抗体功能分析包含很多方面： T细胞功能活化及增殖、细胞因子分析、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity ADCC）、抗体介导的补体依赖的细胞毒性（complement dependent cytotoxicity CDC）、巨噬细胞抗体依赖性的细胞吞噬作用（Antibody-Dependent Cellular Phagocytosis ADCP）等。

人肿瘤特异性移植抗原(TSTA)检测试剂盒人肿瘤特异性移植抗原(TSTA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肿瘤特异性移植抗原(TSTA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肿瘤特异性移植抗原(TSTA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肿瘤特异性移植抗原(TSTA)抗原、生物素化的人肿瘤特异性移植抗原(TSTA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤特异性移植抗原(TSTA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人前列腺特异性抗原(PSA)检测试剂盒人前列腺特异性抗原(PSA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人前列腺特异性抗原(PSA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人前列腺特异性抗原(PSA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人前列腺特异性抗原(PSA)抗原、生物素化的人前列腺特异性抗原(PSA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人前列腺特异性抗原(PSA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)检测试剂盒人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)抗原、生物素化的人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人游离前列腺特异性抗原(fPSA)检测试剂盒人游离前列腺特异性抗原(fPSA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人游离前列腺特异性抗原(fPSA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人游离前列腺特异性抗原(fPSA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人游离前列腺特异性抗原(fPSA)抗原、生物素化的人游离前列腺特异性抗原(fPSA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人游离前列腺特异性抗原(fPSA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人复合前列腺特异性抗原(CPSA)检测试剂盒人复合前列腺特异性抗原(CPSA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人复合前列腺特异性抗原(CPSA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人复合前列腺特异性抗原(CPSA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人复合前列腺特异性抗原(CPSA)抗原、生物素化的人复合前列腺特异性抗原(CPSA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人复合前列腺特异性抗原(CPSA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)检测试剂盒人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)抗原、生物素化的人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)ELISA试剂盒中文名称 人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)ELISA试剂盒英文名称 People hypersensitive prostate specific antigen (PSA-U S) ELISA kit 规格 96T/48T 生 产 商 进口原装/分装 产品介绍 实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)抗原、生物素化的人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人神经元特异性烯化醇检测试剂盒人神经元特异性烯化醇检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人神经元特异性烯化醇含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人神经元特异性烯化醇水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人神经元特异性烯化醇抗原、生物素化的人神经元特异性烯化醇抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人神经元特异性烯化醇呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)检测试剂盒人卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)抗原、生物素化的人卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人神经元特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒人神经元特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗原、生物素化的人神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人神经元特异性烯醇化酶(NSE)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)检测试剂盒 人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)抗原、生物素化的人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)检测试剂盒人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)抗原、生物素化的人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

小鼠卵清蛋白特异性IgE（OVA-sIgE）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中卵清蛋白特异性IgE（OVA-sIgE）的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠卵清蛋白特异性IgE（OVA-sIgE）水平。用纯化的卵清蛋白特异性IgE（OVA-sIgE）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入卵清蛋白特异性IgE（OVA-sIgE），再与HRP标记的卵清蛋白特异性IgE（OVA-sIgE）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的卵清蛋白特异性IgE（OVA-sIgE）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠卵清蛋白特异性IgE（OVA-sIgE）的浓度。

组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点： （1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。 （2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。 （3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。 （4）从组织中难于提纯抗原性物质，所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体，以致容易混淆。 （5）抗体分子上标记的荧光素分子太多，这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子，可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。 （6）荧光素不纯，标本固定不当等。

双链DNA病毒引起人类大多数疾病。疱疹病毒和腺病毒家族和乳头瘤病毒在人体中会产生相似的症状。而且，由于病毒抗原基因组的保守，对于特殊病毒的血清学和蛋白诊断确认是非常复杂的。高度的蛋白同源性和血清交叉反应导致双链DNA病毒物种之间区分是非常困难的。本研究的目的是发现识别最优的分泌高度特异性、无交叉反应的单克隆抗体的细胞系，用于生物治疗的开发。ClonePix系统用来高通量从母本的杂交瘤细胞中（历史数据表明母本的细胞系产量少于1mg/L的单抗）筛选数以百计的亚克隆。分泌高IgG的活细胞进一步用客观评价细胞生长的CloneSelect Imager系统来评估。高效自动化克隆选择技术旨在挽回高滴度的杂交瘤细胞系，这些细胞系能生产抗原高特异性的抗体。ClonePix和CloneSelect Imager配套技术为免疫诊断技术发展提供了足够的病毒抗原的特异性抗体。优势：1.相比传统方法，能够筛选更多克隆，增加发现稀有、高产分泌子的可能性2.独特的流程生产高滴度的杂交瘤细胞3.增加发现最优细胞生产器的可能性

使用QCM-D技术研究了在二氧化硅表面吸附合成肽核酸（PNA）和DNA。链霉的使用使得之后磷脂双分子层可以有效的吸附DNA，最大限度的减少非特异性吸附。参考文献：[1] Hook, F, Ray A, Krave U, Norden,B and Kasemo, B，Characterisation of PNA and DNA immobilisation and subsequent hybridisation with DNA using acoustic-shear-wave attenuation measurements. Langmuir 2001, 17, p. 8305-8312

为了以更安全的剂量水平实现更好的疗效，新开发的生物治疗药物变得越来越复杂。为支持这类药物的开发，需要使用灵敏度和选择性更高的分析方法，达到更低的检测限。 而样品接触到样品板、样品瓶或移液枪头等实验室器皿时发生的非特异性结合(NSB)或吸附，是单克隆抗体(mAb)等疏水性生物大分子的分析中经常出现的问题。这种现象与分子的理化性质有关，通常在低浓度下更为明显。样品的非特异性吸附可能导致回收率降低、分析物损失、分析方法重现性差，最终导致分析达不到所需的检测限。因此，尽可能减少非特异性结合非常重要。

特异性结合抗原：抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞，通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤。然而，抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合，直接发挥中和病毒的作用。

制备出效价高，特异性强，稳定性好的抗体是免疫学实验取得成功的基础，抗体质量的好坏直接影响着研究者研究的成败，不同的免疫学实验方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）对抗体的效价，浓度和纯度有不同的要求。我们知道，一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体，血清蛋白以及其他各种杂蛋白等，在制备特异性抗体过程中当抗体的效价达到实验预期之后，我们所制备的抗体的纯度关键取决于所选择的纯化方法。

从原理来看，这类实验主要分为两类，一类是基于靶点特异性结合的抗体结合实验，这类方法主要研究抗体与靶点直接的特异性结合能力，研究方法分别有依赖于固相介质的ELISA,均相溶液中的靶点结合检测，以及细胞水平的流式分析；另一类是基于配体阻断结合的抗体结合实验，这类实验主要研究抗体与配体竞争结合受体的情况，通过比较抗体与配体结合受体的亲和力差异，来评价抗体与靶点的结合位点和结合能力。

中文名：人抗Sc1-70抗体(Sc1-70-Ab)ELISA试剂盒规格：48t/96t保存：2~8℃有效期：6个月样本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

产品名称：人抗生长激素抗体(GHAb)ELISA试剂盒检测方法：双抗夹心法/酶联免疫方法规格：96T/48T反应时间：3.5h反应性：Human样本体积：100μL检测范围：25 pg/ml – 800 pg/ml。特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。有效期：6个月

人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)检测试剂盒人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)抗原、生物素化的人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗钙调素特异抗体(CAM-ab)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度