生物分离纯化

[color=#231815]生物活性蛋白质分离纯化技术研究进展[/color][color=#231815][color=#333333]生物体是天然活性蛋白质的宝库,近年来,越来越多具有生物活性的蛋白质被发现和研究,在生物制药、营养食品等方面具有广阔的应用前景。然而,分离纯化的技术与策略将影响天然蛋白的活性与功能,以及相关的经济效益。基于目前研究现状,对生物活性蛋白质的分离纯化技术进行了综述。 [/color][/color]

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。 　　1、用固体培养基分离和纯化 　　单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。 　　1.1 稀释倒平板法 　　首先把微生物悬液作一系列的稀释(如1:10、1:100、1:1000、1:10000)，然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 　　1.2 涂布平板法 　　因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的微生物悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。 　　1.3 平板划线法 　　最简单的分离微生物的方法是平板划线法，即用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行连续划线(图2)，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

[I][B][color=#DC143C][size=4][font=新宋体]生物制药设备和分离纯化技术,一本从事制药行业的好书![/font][/size][/color][/B][/I][em0807][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=81109]生物制药设备和分离纯化技术[/url]

分离纯化：有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（Mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化.

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=65325]生物大分子分离纯化的策略[/url]

一、实验原理稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个细胞，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些产品检定，如根瘤菌剂等产品检定，生物制品检验，土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。在自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的，因此土壤是人类开发利用微生物资源的重要基地。土壤中的微生物数量、种类与土壤肥力有关，肥沃的土壤中多，贫瘠土壤中少。其生理类群则与土壤的其它理化性质，如通气、pH有关，例如在通气良好的菜园土中，好气性微生物占有绝对优势。本实验以菜园土为材料分离土壤中的好气性细菌，并进行数量测定。分离微生物时，一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其它菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单个菌落进一步分离纯化。在用稀释平板分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。放线菌与细菌同属原核微生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其是在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。本实验采用高氏一号琼脂培养基分离和计数菜园土中的放线菌。真菌在土壤中的数量次于细菌和放线菌，主要在有机质丰富、透气性好的偏酸性土壤中较多。分离土壤中的真菌并不难，但由于其菌落大，容易扩展，计数准确性较低。本实验采用加有氯霉素或庆大霉素和孟加拉红的马丁氏培养基分离及计数菜园土中的真菌。按一般资料介绍为链霉素，但此种抗生素要先配成一定浓度的溶液，且应于倒平板前才加入培养基中。在此培养基上，放线菌和细菌被氯霉素或庆大霉素和孟加拉红所抑制，但大多数真菌能够生存，且其菌落受孟加拉红的抑制而较小，从而避免了某些真菌的扩散蔓延而带来的数量上的误差。

求助：纺织品霉变微生物的分离纯化与鉴定 __陶娅妃资料来源：https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CJFD&dbname=CJFDLAST2022&filename=SICO202203006&uniplatform=NZKPT&v=Chf6i5E_ygBm9fEbNppc7YXl469BCrY5uuQquJUa4SMG0wfPL2pJOE5-zseqGx3I

蛋白质在分子生物学中的分类，大体上可分为天然蛋白和重组蛋白。提取天然蛋白和构建重组蛋白都需要先确定生物原材料，如植物材料主要以植物的叶，胚，果实和根茎等为主；动物通常是选用实验动物的器官和组织；而微生物则是微生物菌体本身或发酵液。从原则上讲，任何一种自然界中存在或不存在的蛋白质都可以被外源表达出来，像原核蛋白表达就是以大肠杆菌（E.coli）为宿主菌表达克隆基因，在原核表达体系中，重组蛋白的含量比杂蛋白的含量高的多，所以选择和设计合适的分离纯化方案对于重组蛋白表达纯化的下游实验就显得尤为重要。本文介绍了在蛋白表达纯化试验中，对不同来源的材料的预处理。主要从植物，动物和微生物三种源材料的特点和注意事项进行描述，并附有原核蛋白表达的案例。

本人是新手，以前从未做过分离纯化。现在感觉很困难·····我是这样设计的，先用跑板的方法分离，刮下斑点后溶解制成样品液。下一步纯化的话该选用什么方法呢？我的预期目标是纯化成单一组分，主要想除去的是其中的蛋白质和盐分，烦请各位专业人士多提意见啊，谢谢~~

常用分离纯化技术研究开发 1） 高效液相色谱填料和色谱柱2） 手性色谱固定相的制备与应用3） 手性药物及其中间体的拆分与转化4） 生物磁分离技术和产品5） 高通量分离纯化技术与装置6） 蛋白质组分析技术与产品7） 高效毛细管电泳分离分析技术 1） 高效液相色谱填料和色谱柱高效液相色谱法（HPLC）是六十年代末发展起来的化学分离分析方法。在这一方法中，微米级的多孔颗粒被用作固定相，而有机溶剂或水溶液被用作流动相。 样品溶液在高压泵的驱动下，流过装填固定相的色谱柱。 在流动过程中，化合物在流动相与固定相之间多次分配，由于分配系数的差异，化合物在固定相中的滞留时间有所不同，因此可利用HPLC来实现对混合物的分离。色谱柱是HPLC的核心部件，由不锈钢空管和填充其中的固定相组成。为了分离不同类型的化合物，一台HPLC通常需要配备若干不同类型的色谱柱。色谱柱又是实验室消耗品，因为它的使用寿命是一定的。样品污染，流动相侵蚀和柱结构变化等问题可能造成色谱柱的损坏。 因此，需要根据使用情况定期更换色谱柱。HPLC中使用的色谱柱种类繁多。 根据色谱填料表面功能团的特性，色谱柱可分成正相柱，反相柱，手性柱，离子交换柱，亲和柱等。而根据色谱柱的几何尺寸，色谱柱又可分成毛细管柱，微型柱，分析柱，半制备柱，制备柱等。使用反相柱的HPLC是目前所有色谱方法中应用最广泛的一种，在食品分析，药物分析，环境分析，药品质量控制，临床医疗诊断，天然产物活性成分鉴定和环境毒物监测等方面都有着广泛的应用。而制备型HPLC更是当前分离纯化手性药物，抗癌药物如紫杉醇，合成核酸，合成多肽，重组蛋白等生物分子的不可或缺的工具。近年来，制药工业尤其是生物制药工业在我国迅速发展，国家对药品质量管理的要求不断提高，这些因素决定了未来几年我国的高效液相色谱产品市场将进入一个高速扩张期。我国的液相色谱分离纯化产品的市场容量当在亿元人民币以上，而目前这一市场主要为安捷伦等外国公司所垄断。我们开展了以球型多孔硅胶为基质的HPLC色谱填料的合成研究，开发了具有自主知识产权的硅胶生产工艺路线，并对硅胶的硅烷化反应进行了系统研究，建立起制备反相液相色谱固定相的优化条件，由我们开发的技术所生产的球型多孔硅胶具有粒径分布均匀，孔径分布范围窄，比表面积可控，表面官能团浓度高和机械强度高等特点，完全能满足现代液相色谱的要求。在此基础上，我们又研究了高效液相色谱柱制备技术，优化了高压装柱法中匀浆液、顶替液的组成，所生产的色谱柱达到或超过了国外同类产品的性价比。欢迎国内企业来人来电洽谈合作，与名校携手，共同打造色谱产品的中国品牌。file:///C:\Users\我是发~1\AppData\Local\Temp\ksohtml\wps_clip_image-11116.png峰号 样品拖尾因子塔板数/米1 丙酮1.26678722对氯硝基苯1.08698843甲苯1.02717284萘1.0068072 *TOP*2） 手性色谱固定相的制备与应用手性在近十年来成为现代制药工业的主要关注点，这主要归因于人们日益增强的认识：外消旋体药物中的一对手性体可能具有不同的药理活性、药代动力学和药效学效应。一个异构体也许能产生所希望的治疗活性，而另一个则可能是无效的，甚至是有害的。最

[font=宋体]蛋白质的分离纯化是生物科学领域中的一项关键技术，它涉及到从复杂的混合物中分离并纯化出特定的蛋白质。这个过程通常包括多个步骤，每个步骤都需要精确的操作和优化，以确保最终得到的蛋白质具有高纯度和活性。下面我们将详细介绍蛋白质的分离纯化步骤。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分离、精细分离三个步骤。[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]①前处理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]分离纯化某种蛋白质，首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态，不丢失生物活性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为此，动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织，种子材料应先去壳甚至去种皮以免受单宁等物质的污染，油料种子最好先用低沸点的有机溶剂如乙醚等脱脂。然后根据不同的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]动物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆机破碎或用超声波处理破碎。植物组织和细胞一般需要用石英砂或玻璃粉和适当的提取液一起研磨的方法或用纤维素酶处理也能达到目的。细菌细胞的破碎比较麻烦，破碎细菌细胞壁的常用方法有超声波破碎，与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]组织和细胞破碎后，选择适当的缓冲液把所要的蛋白提取出来。细胞碎片等不溶物用离心或过滤的方法除去。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如果所要的蛋白主要集中在某一细胞组分，如细胞核、染色体、核糖体或可溶性细胞质等，则可利用差速离心的方法将它们分开，收集该细胞组分作为下步纯化的材料。如果碰上所要蛋白是与细胞膜或膜质细胞器结合的，则必须利用超声波或去污剂使膜结构解聚，然后用适当介质提取。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②粗分离[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]当蛋白质提取液（有时还杂有核酸、多糖之类）获得后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白与其他杂蛋白分离开来。一般这一步的分离用超滤、盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大，既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白溶液。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]③精细分离[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]样品经粗分级分离以后，一般体积较小，杂蛋白大部分已被除去。进一步纯化，一般使用层析法包括离子交换层析、亲和层析、疏水层析以及分子筛等。必要时还可选择电泳法，包括区带电泳、等电点聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小，但分辨率很高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]结晶是[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification][b]蛋白质分离纯化[/b][/url]的最后步骤。尽管结晶过程并不能保证蛋白一定是均一的，但是只有某种蛋白在溶液中数量上占有优势时才能形成结晶。结晶过程本身也伴随着一定程度的纯化，而重结晶又可除去少量夹杂的蛋白。由于结晶过程中从未发现过变性蛋白，因此蛋白的结晶不仅是纯度的一个标志，也是断定制品处于天然状态的有力指标。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白表达服务[/b][/url][/font][font=宋体]，可以根据客户需求，选用不同表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化标签、表达宿主等，真正为客户实现深度私人定制。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化详情：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification[/font][/font]

具体的方法随各中草药的性质不同而异，以后将通过实例加以叙述，此处只作一般原则性的讨论。 　　（一）溶剂分离法：一般是将上述总提取物，选用三、四种不同极性的溶剂，由低极性到高极性分步进行提取分离。水浸膏或乙醇浸膏常常为胶伏物，难以均匀分散在低极性溶剂中，故不能提取完全，可拌人适量惰性填充剂，如硅藻土或纤维粉等，然后低温或自然干燥，粉碎后，再以选用溶剂依次提取，使总提取物中各组成成分，依其在不同极性溶剂中溶解度的差异而得到分离。例如粉防己乙醇浸膏，碱化后可利用乙醚溶出脂溶性生物碱，再以冷苯处理溶出粉防己碱，与其结构类似的防己诺林碱比前者少一甲基而有一酚羟基，不溶于冷苯而得以分离。利用中草药化学成分，在不同极性溶剂中的溶解度进行分离纯化，是最常用的方法。 　　广而言之，自中草药提取溶液中加入另一种溶剂，析出其中某种或某些成分，或析出其杂质，也是一种溶剂分离的方法。中草药的水提液中常含有树胶、粘液质、蛋白质、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使这些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出，而达到与其它成分分离的目的。例如自中草药提取液中除去这些杂质，或自白及水提取液中获得白及胶，可采用加乙醇沉淀法；自新鲜括楼根汁中制取天花粉素，可滴人丙酮使分次沉淀析出。目前，提取多糖及多肽类化合物，多采用水溶解、浓缩、加乙醇或丙酮析出的办法。 　　此外，也可利用其某些成分能在酸或碱中溶解，又在加碱或加酸变更溶液的pH后，成不溶物而析出以达到分离。例如内酯类化合物不溶于水，但遇碱开环生成羧酸盐溶于水，再加酸酸化，又重新形成内酯环从溶液中析出，从而与其它杂质分离；生物碱一般不溶于水，遇酸生成生物碱盐而溶于水，再加碱碱化，又重新生成游离生物碱。这些化合物可以利用与水不相混溶的有机溶剂进行萃取分离。一般中草药总提取物用酸水、碱水先后处理，可以分为三部分：溶于酸水的为碱性成分（如生物碱），溶于碱水的为酸性成分（如有机酸），酸、碱均不溶的为中性成分（如甾醇）。还可利用不同酸、碱度进一步分离，如酸性化台物可以分为强酸性、弱酸性和酷热酚性三种，它们分别溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠，借此可进行分离。有些总生物碱，如长春花生物碱、石蒜生物碱，可利用不同rH值进行分离。但有些特殊情况，如酚性生物碱紫董定碱（corydine）在氢氧化钠溶液中仍能为乙醚抽出，蝙蝠葛碱（dauricins）在乙醚溶液中能为氢氧化钠溶液抽出，而溶于氯仿溶液中则不能被氢氧化钠溶液抽出；有些生物碱的盐类，如四氢掌叶防己碱盐酸盐在水溶液中仍能为氯仿抽出。这些性质均有助于各化合物的分离纯化。 　　（二）两相溶剂萃取法： 　　1．萃取法：两相溶剂提取又简称萃取法，是利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。萃取时如果各成分在两相溶剂中分配系数相差越大，则分离效率越高、如果在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚进行两相萃取，如果有效成分是偏于亲水性的物质，在亲脂性溶剂中难溶解，就需要改用弱亲脂性的溶剂，例如乙酸乙酯、丁醇等。还可以在氯仿、乙醚中加入适量乙醇或甲醇以增大其亲水性。提取黄酮类成分时，多用乙酸乙脂和水的两相萃取。提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。不过，一般有机溶剂亲水性越大，与水作两相萃取的效果就越不好，因为能使较多的亲水性杂质伴随而出，对有效成分进一步精制影响很大。 　　两相溶剂萃取在操作中还要注意以下几点： 　　1）先用小试管猛烈振摇约1分钟，观察萃取后二液层分层现象。如果容易产生乳化，大量提取时要避免猛烈振摇，可延长萃取时间。如碰到乳化现象，可将乳化层分出，再用新溶剂萃取；或将乳化层抽滤，或将乳化层稍稍加热；或较长时间放置并不时旋转，令其自然分层。乳化现象较严重时，可以采用二相溶剂逆流连续萃取装置。 　　2） 水提取液的浓度最好在比重1．1～1．2之间，过稀则溶剂用量太大，影响操作。 　　3） 溶剂与水溶液应保持一定量的比例，第一次提取时，溶剂要多一些，一般为水提取液的1/3，以后的用量可以少一些，一般1/4-1/6。 　　4）一般萃取3～4次即可。但亲水性较大的成分不易转入有机溶剂层时，须增加萃取次数，或改变萃取溶剂。 　　萃取法所用设备，如为小量萃取，可在分液漏斗中进行；如系中量萃取，可在较大的适当的下口瓶中进行。在工业生产中大量萃取，多在密闭萃取罐内进行，用搅拌机搅拌一定时间，使二液充分混合，再放置令其分层；有时将两相溶液喷雾混含，以增大萃取接触，提高萃取效率，也可采用二相溶剂逆流连续萃取装置。 　　2．逆流连续萃取法：是一种连续的两相溶剂萃取法。其装置可具有一根、数根或更多的萃取管。管内用小瓷圈或小的不锈钢丝圈填充，以增加两相溶剂萃取时的接触面。例如用氯仿从川楝树皮的水浸液中萃取川楝素。将氯仿盛于萃取管内，而比重小于氯仿的水提取浓缩液贮于高位容器内，开启活塞，则水浸液在高位压力下流入萃取管，遇瓷圈撞击而分散成细粒，使与氯仿接触面增大，萃取就比较完全。如果一种中草药的水浸液需要用比水轻的苯、乙酸乙酯等进行萃取，则需将水提浓缩液装在萃取管内，而苯、乙酸乙酯贮于高位容器内。萃取是否完全，可取样品用薄层层析、纸层析及显色反应或沉淀反应进行检查。 　　3．逆流分配法（CounterCurrentDistribution，CCD）：逆流分配法又称逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法与两相溶剂逆流萃取法原理一致，但加样量一定，并不断在一定容量的两相溶剂中，经多次移位萃取分配而达到混合物的分离。本法所采用的逆流分布仪是由若干乃至数百只管子组成。若无此仪器，小量萃取时可用分液漏斗代替。预先选择对混合物分离效果较好，即分配系数差异大的两种不相混溶的溶剂。并参考分配层析的行为分析推断和选用溶剂系统，通过试验测知要经多少次的萃取移位而达到真正的分离。逆流分配法对于分离具有非常相似性质的混合物，往往可以取得良好的效果。但操作时间长，萃取管易因机械振荡而损坏，消耗溶剂亦多，应用上常受到一定限制。 　　4．液滴逆流分配法：液滴逆流分配法又称液滴逆流层析法。为近年来在逆流分配法基础上改进的两相溶剂萃取法。。对溶剂系统的选择基本同逆流分配法，但要求能在短时间内分离成两相，并可生成有效的液滴。由于移动相形成液滴，在细的分配萃取管中与固定相有效地接触、摩擦不断形成新的表面，促进溶质在两相溶剂中的分配，故其分离效果往往比逆流分配法好。且不会产生乳化现象，用氮气压驱动移动相，被分离物质不会因遇大气中氧气而氧化。本法必须选用能生成液滴的溶剂系统，且对高分子化合物的分离效果较差，处理样品量小（1克以下），并要有一定设备。应用液滴逆流分配法曾有效地分离多种微量成分如柴胡皂甙原小檗碱型季铵碱等。液滴逆流分配法的装置，近年来虽不断在改进，但装置和操作较繁。目前，对适用于逆流分配法进行分离的成分，可采用两相溶剂逆流连续萃取装置或分配柱层析法进行。

柱色谱分离纯化酶的一般操作程序

分离纯化酶时，采用硫酸铵分级沉降时，离心机转速高达12000rps/min沉淀也不易沉降，而且耗时较长，请问如何分离好？沉降速度如何提高？

蛋白质分离纯化鉴定包括蛋白质样品的基本处理注意事项，蛋白质分离纯化方法的基本原理和选择，纯化后蛋白质浓度及蛋白质基本性质的研究方法。 [URL=http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081009/1522386/]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081009/1522386/[/URL]

各位好！我做实验要对紫杉醇发酵液进行分离纯化，请问用树脂怎样进行除杂？

请问那个公司，或者实验室能够对手性化合物2—甲基丁酸乙酯进行分离纯化？R/S构型各需要1毫升。拜托拜托????

本人想购买一台做大分子分离纯化的设备，要求是要分离效果好，也不知道什么仪器合适，想请大家给给意见，谢谢

蛋白质分离纯化鉴定包括蛋白质样品的基本处理注意事项，蛋白质分离纯化方法的基本原理和选择，纯化后蛋白质浓度及蛋白质基本性质的研究方法。非常适合刚接触蛋白质研究的版友。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=111671]蛋白质的分离与纯化[/url]

各位好！我做实验要对紫杉醇发酵液进行分离纯化，请问用树脂怎样进行除杂？

所研究的代谢产物中，有大部分是油状化合物。这给分离纯化带来很大的不便。有些样品用hplc也难以纯化。而用一般的gcms得不到理想的结果。请问有没有适用于微生物代谢产物的质谱库？

[color=#231815]双水相萃取技术在分离、纯化中的应用[/color][color=#231815][color=#333333]双水相技术是一种新型的液-液萃取技术,由于其条件温和、易操作等特点,目前已广泛应用于物质的分离、纯化。本文综述了双水相形成原理、工艺流程和特点、体系类别、影响双水相分配的因素及其在分离纯化中的应用,并针对其未来发展趋势进行了展望。[/color][/color]

本文旨在介绍蛋白表达试验中分离纯化的处理策略，注意事项以及纯化方法等，并附有纯化案例介绍。

分离纯化谷物β-葡聚糖一般用什么阴离子交换色谱柱和凝胶过滤色谱柱哇

主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术，综和近年来国内外的一些研究结果，结合实际应用的例子，分析了各种分离纯化方法的优点，同时指出其不足之处。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=120204]浅述蛋白质分离纯化的新技术[/url]

[font=宋体][font=宋体]不同的蛋白具有不同的氨基酸序列和空间结构，从而导致其在物理、化学和生物学特性中存在差异。考虑到细胞提取物中重组蛋白的相对丰度较高，开发生产纯蛋白（[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]显示单一条带）的实验室规模纯化方案应该相对简单。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]下游处理方案中的各个步骤可分离混合物中的蛋白和非蛋白部分，最终将所需的蛋白与所有其他蛋白分离，同时保留多肽的生物活性和化学完整性。分离步骤会利用粗混合物中目标蛋白与其他蛋白之间的化学[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]结构[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]功能特性的差异。这些性质包括大小、形状、电荷、等电点、电荷分布、疏水性、溶解性、密度、配体结合亲和力、金属结合、可逆结合、翻译后修饰以及特定的序列或结构。下面是针对蛋白分离纯化方法做了以下汇总：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]根据蛋白质溶解度的差别分离[/font][/b][/font][font=宋体]蛋白质的溶解度具有显著的特性，可以根据其溶解度的差异进行分离。其中，等电点沉淀法、盐析和盐溶、有机溶剂沉淀以及重金属盐沉淀是常用的方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①等电点沉淀法：蛋白质在等电点附近溶解度最小，易沉淀析出。利用不同蛋白质等电点的不同，将蛋白质从混合溶液中分开[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②盐析和盐溶：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]盐析：大量的中性盐溶液可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质沉淀析出的现象[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]盐溶：低浓度的中性盐溶液促进某些蛋白质的溶解，从而与其他组分分开[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③有机溶剂沉淀：亲水性有机溶剂如乙醇、丙酮等能使蛋白质在水中的溶解度降低，从而沉淀析出[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④重金属盐沉淀：重金属盐带正电荷，可以与蛋白质负离子结合而形成不溶性蛋白质沉淀可利用此性质以大量清蛋白抢救重金属盐中毒的人[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]根据蛋白质分子大小的不同分离[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①透析：利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其他小分子物质如无机盐、单糖等分开，本质是以浓度差为推动力的膜分离过程。主要应用是血液（人工肾）的解毒[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②超滤：通过加压、抽滤、离心等多种方式，使水和其他小分子溶质透过超滤膜，而蛋白质截留在膜上，以达到浓缩和脱盐的目的，本质是以静压力差为推动力的膜分离过程[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③密度梯度离心：蛋白质颗粒的沉降速度取决于它的大小和密度，将蛋白质颗粒在具有密度梯度的介质中离心，质量和密度大的蛋白质比质量和密度小的蛋白质颗粒沉降得快，并且每种蛋白质颗粒沉降到与自身密度相等的介质梯度时，即停止不前，最后各组分在离心管中被分离成各自独立的区带[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④凝胶过滤层析：当不同分子大小的蛋白质流经凝胶层析柱时，比凝胶珠孔径大的分子不能进入凝胶珠内部，只能随溶剂在凝胶珠之间的孔隙向下移动并最先流出体外；比凝胶珠孔径小的分子能不同程度的自由进出凝胶珠的内外。于是不同大小的分子所经的路径长短不同而得到分离，大分子先洗脱出来，小分子后洗脱出来[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤超速离心：蛋白质溶液在强大离心场中会逐渐沉降，各种蛋白质沉降所需离心力场不同，可用超速离心法分离蛋白质并测定其分子量[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]根据电荷不同的纯化方法[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①电泳：在外电场作用下，带电颗粒将向着与其电性相反的电极移动，这种现象称为电泳。利用带点颗粒净电荷的差异分离混合物[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②离子交换层析：在某一特定的[/font][font=Calibri]PH[/font][font=宋体]值，混合蛋白质溶液中各种蛋白质所带电荷数目及性质不同，事先在层析柱中装上离子交换剂，其所带电荷性质与蛋白质电荷性质相反，当蛋白质混合溶液流经层析柱时，即可被吸附于柱上，随后用与蛋白质带相同性质电荷的洗脱剂洗脱，蛋白质可被置换下来，由于各种蛋白质所带电荷不同，离子交换剂结合的紧密程度不同，带电量小的蛋白质先被洗脱下来，增加洗脱液离子强度，带电量多的也被洗脱下来，可将蛋白质分离[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]利用选择性吸附的纯化方法[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]吸附层析：利用待纯化的分子和杂质分子与吸附剂之间的吸附能力和解吸性质不同而达到分离目的[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]利用对配体的特异生物学亲和力的纯化方法[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和层析：把待纯化的某一蛋白质的特异配体通过适当的化学方法共价连接到载体分子上，当蛋白质混合物加到填有亲和介质的层析柱时，待纯化的蛋白质与配体特异性结合，而其他蛋白质则不被结合，通过洗涤除去，被特异结合的蛋白质可以用含游离的相应配体溶液把它从柱上洗脱下来[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url][/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]和快速蛋白质[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]层析[/font][font=Calibri]FPLC[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]：以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]FPLC[/font][font=宋体]：是由经典的液体柱层析引入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]理论，并对相体进行改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]。适用各种层析技术，专门分离和纯化各类生物分子，包括天然蛋白质，重组和融合蛋白质、肽、寡核酸、质粒、病毒、抗生素、生物碱等等，操作肽图等精确分析和小量制备应用，具有快速、高分辨率、柱容量大、回收效率高及不易使生物大分子失活等特性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-techniques][b]蛋白纯化技术方法[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-techniques[/font][/font]

蛋白质纯化　蛋白质分离纯化是用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质的方法。　　是当代生物产业当中的核心技术。该技术难度、成本均高；例如一个生物药品的成本75%都花在下游蛋白质分离纯化当中。常用技术有：　　１、沉淀，　　２、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。　　３、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。　　４、层析：　　a.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定ＰＨ时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。　　　b.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能时入孔内而径直流出。　　５、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质其密度与形态各不相同而分开。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=31409]三七叶苷的提取分离与纯化[/url]

请问2005版药典中纯化水的微生物限度检查中的薄膜过滤法使用的仪器在哪里可以买到以及价钱是多少?谢谢!!!!

我是一位刚刚接触生物化学的研究生，现在老板要我做酶的分离与纯化，我感到很棘手，不知应该从哪里开始。尤其感到费力的是茫茫色谱柱及填料中间叫我难以选择。不知这里有没有对分离纯化比较有经验的老先生或老兄能帮帮我，给点好的建议，教我如何设计实验。不胜感激。