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培养示范基地

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培养示范基地相关的论坛

  • 【新闻】天津今年将建 国家级废旧电子产品处理示范基地

    据中央人民广播电台报道,天津加快环保产业发展,今年开始建设国家级废旧电子信息产品回收拆解处理示范基地。到2010年,天津废旧电子信息产品年拆解能力将达到1500万台套以上,实现销售收入约30亿元,成为天津发展循环经济新的经济增长点。   目前天津市年均报废电冰箱10万台、电视机16万台、洗衣机11万台、计算机和手机数10万台(部),一些小家电淘汰率更高,其中有1/6被当作垃圾扔掉。预计今后5年,电脑及附属产品每年的废弃量将以25%至30%的速度增长。有关专家介绍,废旧家用电器中主要含有6种有害物质:铅、镉、汞、6价铬、聚氯乙烯塑料、溴化阻燃剂。如果将这些电子垃圾随意丢弃或掩埋,大量有害物质渗入地下,会造成地下水严重污染;如果焚烧,则会释放大量有毒气体,严重污染空气。同时电子垃圾中含有大量可回收利用的聚酯、塑料、玻璃、稀有贵重金属等资源,用循环经济手段,可以改变传统资源消耗模式,消除污染,变废为宝,实现经济利益和环境利益双赢。  今年计划扩建的天津子牙环保产业园自2001年开工兴建,到目前已开发用地3000亩,累计投入9.62亿元资金进行建设,共引进各类企业78家,形成了以废旧电线、电缆拆解为主,年承载能力80至100万吨的拆解加工能力,为废旧电子信息产品拆解奠定了较好基础。扩建后,该园将成为我国北方唯一的国家级第七类废物拆解示范基地、高新技术环保产业基地和有色金属深加工基地,成为国家级管理示范区、科技成果孵化和辐射区及现代有色金属制造专业区,成为天津市发展循环经济新的经济增长点。来源:北京日报

  • 【转帖】上海拟建固废示范基地 日处理达4500吨

    世博前,浦东新区白龙港地区,有望成为本市首个资源综合利用示范基地,城市污泥及各种固体废弃物将在此地“化废为宝”。记者从今天上午召开的市政协“转变经济发展方式,推动上海节能减排工作”重点提案促办会上获悉,一旦利用水泥回转窑处理城市固体废弃物技术试点成功,日处理城市污泥能力将达4500吨。 一组来自本市固体废弃物污染环境防治的信息显示:2007年固体废物产生量3017.4万吨,比2006年增加5.24%,其中工业固体废物2165.4万吨(含工业危险废物45.4万吨)、城市生活垃圾702万吨、建筑垃圾150万吨。 “如果将固体废弃物比喻成环境‘负荷’的话,那么‘减负’刻不容缓。”民革上海市委在今年上海“两会”时的一份提案中指出,除城市生活垃圾和工业固体废物无害化处置基础设施能力不足等历史欠账外,电子废弃物、商品过度包装和一次性消费品等废弃物也正成为日益增长的环境新问题,本市固体废弃物处置因而任重道远。 提案建议利用水泥回转窑技术,处理城市固体废弃物。简单来说,就是把脱硫石膏、污泥等固体废物,及在综合处理时产生的热能等资源,变成制作水泥的替代“原料”和“燃料”,提高能耗综合利用。 民革市委这份提案建议,建一个资源综合利用示范基地,可集发电、炼油、化肥、建材、土壤改良、生化制品、医药、养鱼、污水净化、废物处理、工业和居民供热等诸多生产企业于一体,实现资源相互循环利用和循环经济。 今天的会议透露,市经济和信息化委员会已同意上海市建材集团通过建设两条资源综合利用生产线,打造建材资源综合利用示范基地。浦东水泥厂、上海水泥厂和上海联合水泥厂等实施整体搬迁后,将统一选址浦东白龙港地区。届时,城市污泥及各种固体废弃物将在此“化废为宝”。 根据相关可行性研究报告,拟建的资源综合利用水泥熟料生产线,可日处理城市污泥及废弃物4500吨,年集中处置来自竹园、白龙港污水处理场生活污泥可达70万吨。每年还可处置粉煤灰110万吨、脱硫石膏50万吨,各种工业及城市废弃物总量达249.2万吨/年。

  • 【原创】培养箱高校市场前景分析

    众所周知高校是社会先进生产力才研发基地,同时也是各项重要科技领域课题研究的前沿阵地,对于设备配备放面要求十分严格,不仅因为仪器设备是高校进行实验教学的物质基础,是教学、科研必备的条件之一。同时也是获得精准研究数据、使研究得以顺利进行的的重要保障。近几年来,随着全国各高校专业的不断增设,招生规模的不断扩大培养箱,实验室所承担的课程实验教学任务也日趋增加,几乎一半以上的高等院校,每年都有新增实验室的记录。 当前我国生物技术产业迅速发展,有的已形成相当大的规模。生物学是一门实验学科,在生物学的教学中,创新实践能力的提高具有与理论课同样重要的地位,在实践中培养学生创新性思维能力和解决实际问题的能力,直接关系到学生能力和素质的提高。加强实验教学已成为教育界的共识,实验教学不同于理论教学最大区别是它需要大量的设备和实验仪器来辅助完成。而生物科学对于实验室设备的依赖有远大于其它学科,生物学的科学实验,培养箱的使用最为普遍。 我国制造培养箱的历史也已有几十年的历史了,在世界培养箱市场的中低端我们占有一席之地。在与高校的调研中了解到,2006年之前培养箱在高校市场采购中均处于快速上升阶段,从2007年至今市场教育市场高对培养箱采购近几年一直处于平稳增长的状态,从调查中得出,高等院校采购该项设备在全国的分布呈现相对集中的态势,主要分布在,北京、天津、上海、广州、山东等几个教育集中的省市,部分农牧业经济相对集中地区对给设备也有不同程度的需求。 高校实验室的改扩建都会涉及的设备的更新换代,与西北师范大学生命科学学院为例,学院现有生物科学、生物技术、科学教育和制药工程四个本科专业,有植物学、生态学、细胞生物学、动物学、生物化学与分子生物学、生物教学论六个硕士学位点,现有全日制本科生940人,研究生123人。现有实验室面积3228平方米,设有基础实验室、工程实验室、中心实验室、细胞与分子生物学实验室、制药工程实验室五个实验室,15个分实验室。目前该学院正在筹备建设生命科学开放创新实验基地。规划新增经济植物工厂化生产室、食用菌栽培室、发酵工程室、转基因植物育种室、环境生物学和分子生态学创新实验室、生物安全评估实验室六个实验室。 由此可见该项设备的市场需求将随着热门科研课题的不断推进,不断被扩大,也希望我们国产的培养箱生产企业能够努力创新,打造民族品牌来支持国人科学研究的大发展。

  • 反硝化菌培养基

    DM培养基PP:DM培养基是一种好氧反硝化培养基,该培养基中在为好氧反硝化菌提供丰富的碳源及氮源的同时,也提供了多种微量元素。该培养基还具用良好缓冲效果。具体配方如下:DM(g/L):NaB2BHPOB4B •7HB2BO 7.9;KHB2BPOB4B 1.5;NHB4BCl 0.3;微量元素溶液 1mL;pH值 7.2。微量元素溶液( g/L ) : EDTA 50.0 ; ZnSOB4B 2.2 ; CaClB2B 5.5 ;MnClB2B • 4HB2BO 5.06 ; FeSOB4B • 7HB2BO 5.0 ; (NHB4B)B6BMo7OB2B • 4HB2BO 1.1 ;CuSOB4B•5HB2BO 1.57;CoClB2B•6HB2BO 1.61;pH值 6.0。2.FM培养基PP:FM培养基是好氧反硝化菌的富集培养基,是在牛肉膏及蛋白胨培养基基础上添加硝酸钾配置而成。对好氧反硝化菌具有富集及诱导好氧反硝化酶表达的效果。具体配方如下:FM(g/L):牛肉膏1.0;蛋白胨5.0;KNOB3B 1.0;pH值 7.2。

  • 关于印发《生态文明建设示范区(市)建设指标》《生态文明建设示范区(县)建设指标》《生态文明建设示范区管理规程》《“绿水青山就是金山银山”实践创新基地建设管理规程》的通知

    各省、自治区、直辖市生态环境厅(局),新疆生产建设兵团生态环境局:  为贯彻落实党的二十大关于生态文明建设的新部署新要求,进一步发挥生态文明示范建设的引领带动作用,我部修订了[url=https://www.mee.gov.cn/xxgk2018/xxgk/xxgk05/202402/W020240218557414922635.pdf]《生态文明建设示范区(市)建设指标》[/url][url=https://www.mee.gov.cn/xxgk2018/xxgk/xxgk05/202402/W020240218557415420802.pdf]《生态文明建设示范区(县)建设指标》[/url][url=https://www.mee.gov.cn/xxgk2018/xxgk/xxgk05/202402/W020240218557415865663.pdf]《生态文明建设示范区管理规程》[/url][url=https://www.mee.gov.cn/xxgk2018/xxgk/xxgk05/202402/W020240218557416033156.pdf]《“绿水青山就是金山银山”实践创新基地建设管理规程》[/url]。现印发给你们,请结合实际,按照管理规程和建设指标要求,进一步加强生态文明示范建设和管理工作。[align=right]  生态环境部办公厅[/align][align=right]  2024年2月1日[/align]  (此件社会公开)  生态环境部办公厅2024年2月2日印发

  • 【分享】微生物的分离、培养和菌种保藏

    在自然条件下,微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。为了研究某种微生物的特性,或者大量培养和利用某一种微生物,必须事先从有关的生态环境中分离出所需的菌株,获得纯培养。获得纯培养的方法,称为微生物的纯种分离法,这一过程称为微生物的分离和纯化。欲从含有多种微生物的样品中直接辨认出,并且取得某种所需微生物的个体,进行纯培养,那是困难的。由于微生物可以形成菌落,而每个单一菌落常常很可能是由一种个体繁殖而成。不同微生物的菌落是可以识别和加以鉴定的。因些将样品中不同微生物个体在特定的培养基上培养出不同的单一菌落,再从选定的某一所需菌落中取样,移植到新的培养基中去,就可以达到分离纯种的目的。这也就是常用纯种分离法的原理。在微生物的分离和纯培养过程中,必须使用无菌操作技术。所谓无菌操作,就是在分离、接种、移植等各个操作环节中,必须保证在操作过程中杜绝外界环境中的杂菌进入培养的容器或系统内,从而污染培养物。具体操作方法见本实验有关部分和教师作示范。获得微生物纯培养的常用方法有稀释平板分离法和平板划线分离法等。有条件的单位也可用显微操纵器单细胞分离法。针对不同的分离材料和条件,可以采用不同的分离方法。一、目的要求1. 初步掌握微生物的分离、培养和菌种保藏的基本方法。2. 练习微生物接种、移植和培养的基本技术,掌握无菌操作技术。二、实验材料样品:新鲜土壤。培养基:灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、淀粉琼脂培养基、马铃薯蔗糖培养基(10mL装)。无菌水:带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、装有9 mL无菌水的试管。其它:无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、胶水、水泡锅。试剂:5000U/mL链霉素液0.5%重铅酸钾液。

  • “中国计量大学 浙江省计量科学研究院研究生联合培养基地”正式授牌

    “中国计量大学 浙江省计量科学研究院研究生联合培养基地”正式授牌

    [size=15px] 1月8日下午,“中国计量大学 浙江省计量科学研究院研究生联合培养基地”授牌仪式在中国计量大学举行。[/size][size=15px][img=,690,461]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/01/202001140409391899_8118_1626275_3.png!w690x461.jpg[/img][/size][size=15px] 浙江省市场监管局局长冯水华、副局长陈振华、中国计量大学党委书记张土乔、校长宋明顺、副校长金尚忠、校发展委员会副主任冯时林等出席授牌仪式。[/size][size=15px]省计量院党委书记、院长徐生坚代表院接受授牌。[/size][size=15px]标志着双方在产学研方面进入了更深、更广的融合。[/size][size=15px] 近年来,浙江省计量院不断深化与中国计量大学等高等院校合作,不断探索联合培养长效机制,有力推动计量技术的科技创新,扎实推进我省“两个高水平”建设。[/size]

  • 生化培养箱和恒温培养箱的区别

    [color=#333333]使用生化培养箱是不是要做生化试验的呢?其实不然,关键要看环境温度是多少,如果培养温度高于环境温度,一般培养箱就可以了,如果培养温度低于环境温度,必须要用生化培养箱,因为它有制冷功能,比如一般霉菌酵母的培养温度是27度左右,我们就可以用生化培养箱。[/color][color=#333333]zui简单的区别方法就是:生化培养箱可以代替普通的恒温培养箱!生化培养箱可以制冷,也可以制热!而一般的恒温培养箱只可以制热。[/color][color=#333333]还有控温精度不一样,生化培养箱精度要求很高,大约正负0.1度,恒温培养箱正负1度!恒温也只是一定范围内的恒温,就是在设定的温度范围处波动(如设定为25度,它会在24.5-25.5之间波动,当然其波动范围也是通过调节设定的,可以设为1度、2度或0.5度等)。[/color][color=#333333]常州高德仪器制造的智能型生化培养箱采用LCD大屏幕背光液晶显示屏显示各设定参数和实测参数,可用于植物的发芽、育苗、微生物的培养,以及其他用途的恒温试验,组合式生化培养箱每一工作仓有独立的门可开关,上下工作仓采用蜂巢式保温层,有效的解决了工作仓与工作仓之间串温问题,控温更精准。多个温区可同时运行,也可其中一个或二个工作,便于节约能源;当一个工作区工作有障碍时,可将此工作区关闭而不妨碍其他实验,提高可靠性。[/color]

  • 关于第七批生态文明建设示范区和“绿水青山就是金山银山”实践创新基地拟推荐名单公示

    根据生态环境部办公厅《关于开展第七批国家生态文明建设示范区和“绿水青山就是金山银山”实践创新基地遴选工作的通知》(环办生态函〔2023〕209号),省生态环境厅组织符合条件的地区开展申报工作。按照申报工作要求,根据前期创建工作基础、申报材料情况,提出了拟推荐名单,现予以公示。(一)拟推荐申报国家生态文明建设示范区名单济南市槐荫区、长清区、章丘区,青岛市即墨区、李沧区,枣庄市薛城区、东营市东营区、烟台市莱山区、济宁市兖州区、德州市临邑县、滨州市沾化区(按行政序列排序)。(二)拟推荐申报“绿水青山就是金山银山”实践创新基地名单济南市历下区、潍坊市青州市、日照市五莲县、临沂市临沭县朱村、菏泽市单县浮岗镇(按行政序列排序)。公示期间,省生态环境厅接受来信和来电反映上述地区在创建工作中存在的问题。公示时间:2023年7月14日至7月20日电子邮箱:sthjtstc@shandong.cn2023年7月14日

  • 【分享】纯种微生物的分离、转种和培养

    从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件,如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长,而抑制其他微生物生长的环境,从而淘汰一些不需要的微生物。 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落,通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是,从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此,纯培养的确定除观察其菌落特征外,还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定,有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。 土壤是微生物生活的大本营,它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所,是发掘微生物资源的重要基地,可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作,如操作不慎引起污染,则实验结果就不可靠,影响下一步工作的进行。

  • 【求助】(已应助)求:浅谈物理教学与想象力的培养 的论文 谢谢!

    【英文篇名】 On Physics Teaching and Cultivation of Imagination 【作者中文名】 苏培升 【作者英文名】 Su Peisheng(Dept.of Physics and Information Techology Nanning Teachers College Chongzuo Guangxi 532200) 【作者单位】 南宁师范高等专科学校物理与信息技术系 广西崇左 【文献出处】 南宁师范高等专科学校学报, Journal of Nanning Teachers College, 编辑部邮箱 2007年 03期 期刊荣誉:ASPT来源刊 CJFD收录刊 【关键词】 物理教学 想像力 创新能力 【英文关键词】 physics teaching imaginative power creative power 【摘要】 想象力的培养是素质教育的一个重要方面,培养学生的想象力,造就开拓型、创造型的人才,是现代教育的主要目标之一。而物理学是一门概念性、逻辑性和系统性都很强的基础课程,在培养学生的想象力方面有其独到之处。本文基于上述背景,对想像力的本质特征及其意义进行分析,并结合教学实践,提出了在物理教学中培养学生的想像力的一些尝试和探索。 【英文摘要】 Imaginative cultivation is important in quality-oriented education,a main aim of which is to cultivate students’ imagination and develop creative talents.Physics is a basic course conceptually,logically and systemically strong,it is original in nurturing imagination.Basing on the above background and his teaching practice,the author analyses the essential feature and significance of imagination and offers some ideas on improving students’ imagination. 【DOI】 CNKI:SUN:NLSF.0.2007-03-025

  • 生化培养箱和一般培养箱有什么不同

    问:生化培养箱和一般培养箱有什么不同?答:1.最简单的说法就是:生化培养箱可以代替普通的恒温培养箱!它可以制冷,也可以制热!而一般的恒温培养箱只可以制热。2.一般的食品企业用不上生化的培养箱对不对? 3.一般做生化的时候就要用到的!具体看你们要检测什么了?如果就做细菌和大肠菌群,一般恒温培养箱就可以了!4.关键要看环境温度是多少,如果培养温度高于环境温度,一般培养箱就可以了,如果培养温度低于环境温度,必须要用生化培养箱,因为它有制冷功能,比如一般霉菌酵母的培养温度是27度左右,我们就可以用生化培养箱。5.我们这一般夏天有30多度,如果你处的地方长年低于25度……那么一般食品企业用普通的培养箱比生化培养箱用起来更不容易坏。6.我用的生化培养箱制冷功能坏了,做霉菌酵母的培养温度是27度左右,温度精度要求不是很高,培养温度低于环境温度我用空调来保证温度。 7.做霉菌酵母培养要求用恒温恒湿培养箱。8.生化培养箱的“恒湿”是如何实现的。我们的生化培养箱没有“恒湿”这功能的。有可以“恒湿”的生化培养箱吗?9.恒温也只是一定范围内的恒温,就是在设定的温度范围处波动(如设定为25度,它会在24.5-25.5之间波动,当然其波动范围也是通过调节设定的,可以设为1度、2度或0.5度等)。以前我用的老式恒温培养箱是用夹层中通入自来水或恒温循环水实现的 。10.恒湿是可以有的,不过那就是不是生化箱了,而是人工气候箱。具体的原理就是:1。湿度高时,需要除湿,是通过压缩机来作用的。2。干燥时,需要加湿,是通过外接的家用加湿机,就可以实现了。11.做霉菌培养时,由于压缩机的作用,培养箱内会比较干燥,这样不利于霉菌的培养。可以在培养箱内放置一只装满水的烧杯就可以了!12.正在郁闷这个问题呢。我们做霉菌和酵母菌数检查也是用的普通的霉菌培养箱,没有湿度控制的,不知道是否符合法规的要求?箱体内部湿度只有20%,但是实际用平皿培养的时候,三天内应该说里面都有冷凝水的,是否说明里面的适度依然保持在90%以上,满足检查需要呢? 13.还有控温精度不一样,生化培养箱精度要求很高,大约正负0.1度,恒温培养箱正负1度!14.霉菌培养时,培养皿内冷凝水比较多,应该不会很干燥的吧。15.学习了,一直在用,但是没想到还有这么多学问的,以后要多多观察了。还以为生化培养箱是要做生化试验的呢,呵呵16.霉菌和菌落总数放在一个培养箱培养行的通吗?我们霉菌培养放在霉菌培养箱里的。

  • 培养小孩爱吃饭方法

    采用馨蓓安鸡内金山楂,培养小孩爱吃饭了!采用药食同源原料,山楂、鸡内金、乌梅、桑葚子杏仁等甄选配方,助力宝宝健胃消食,改善孩子挑食、厌食、积食等问题![img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/02/202202280315272075_7586_1642069_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/02/202202280315273979_4565_1642069_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/02/202202280315274350_2763_1642069_3.png[/img]

  • 培养箱的分类及用途介绍

    [color=#111111]培养箱是培养微生物的主要设备,可用于细菌、细胞的培养繁殖。其原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境,如控制一定的温度、湿度、气体等。 [/color][color=#111111]目前使用的培养箱主要分为四种:直接电热式培养箱、隔水电热式培养箱、生化培养箱和二氧化碳培养箱。 [/color][color=#111111](一) 电热式和隔水式培养箱 [/color][color=#111111]电热式和隔水式培养箱的外壳通常用石棉板或铁皮喷漆制成,恒温培养箱内层为紫铜皮制的贮水夹层,电热式培养箱的夹层是用石棉或玻璃棉等绝热材料制成,以增强保温效果,培养箱顶部设有温度计,用温度控制器自动控制,使箱内温度恒定。隔水式培养箱采用电热管加热水的方式加温,电热式培养箱采用的是用电热丝直接加热,利用空气对流,使箱内温度均匀。 [/color][color=#111111](二) 生化培养箱 [/color][color=#111111]生化培养箱具有制冷和加热双向调温系统,温度可控的功能,是生物、遗传工程、医学、卫生防疫、环境保护、农林畜牧等行业的科研机构、大专院校、生产单位或部门实验室的重要试验设备,广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等。生化培养箱控制器电路由温度传感器、电压比较器和控制执行电路组成。这种培养箱同时装有电热丝加热和压缩机制冷。因此可适应范围很大,一年四季均可保持在恒定温度,因而逐渐普及。 该培养箱使用与维修保养类似电热式培养箱。由于安装有压缩机,因此也要遵守冰箱保养的注意事项, 如保持电压稳定, 不要过度倾斜, 及时清扫散热器上的灰尘等。 [/color][color=#111111]应用范围 [/color][color=#111111]生化培养箱广泛适用于环境保护、卫生防疫、药检、农畜、水产等研究、院校、生产部门、是水体分析和BOD测定,细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的专用恒温设备。 [/color][color=#111111](三) 二氧化碳培养箱 [/color][color=#111111]二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境,培养箱要求稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。 [/color][color=#111111]应用范围 [/color][color=#111111]其广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养,常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、各种物理、化学因素的致癌或毒理效应、抗原的研究和生产、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精(IVF)、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。 [/color][color=#111111]二氧化碳培养箱(基于微流控芯片的细胞长期培养装置,可以为微流控芯片提供温度、湿度、二氧化碳、流体控制环境,从而可以满足细胞长期培养的需求,可以应用在药筛和药代等领域。)[/color]

  • 培养基介绍

    培养基是发酵过程或动植物细胞大量培养中供微生物或动、植物细胞的生长、繁殖或积累代谢产物,以合成生物化工产品所必需的营养基质。培养基的选择应根据微生物生长代谢活动的需要,并有利于合成细胞物质和生物化工产品的生成。培养基中主要含有水、碳源(能源)、氮源、矿物质,有的还需要提供维生素等。在酶反应过程中,原料液中被转化的物质亦即酶的作用物,亦可称为底物。 培养基的选择一般尽可能要满足以下要求:①单位质量基质,应能产生最大量的生物物质或生物化工产品,并且要使所产生的生物物质或生物化工产品在发酵液中的浓度最高,产率最高,使不需要的其他代谢产物的生成,限在最低范围内。②培养基成本低、质量均一并随时保证提供使用。③培养基使用时,对通气、搅拌、后处理和三废治理等方面所产生的问题最少。 分类 按其组成成分分成三类:①天然培养基,全由天然产物组成,例如含淀粉、黄豆饼粉等天然物质;②复合培养基,由部分天然产物和部分已知成分的化合物组成,例如其中的氮源既有天然物质黄豆饼粉,又有合成化合物硫酸铵;③合成培养基,全由已知成分的化合物所组成,例如以纯的碳水化合物或碳氢化合物为碳源,以铵盐为氮源。天然培养基和复合培养基常用于工业生产,而合成培养基(偶尔包括复合培养基)则常用于试验。 按用途分类包括:①基础培养基,营养需求相似的一些生物其所需的营养物大体相同,因之可配制一种适合于它们共同需要的含有基本营养成分的基础培养基;②增殖培养基,又称丰富培养基,常用于菌种选育方面。它是由基础培养基,再加入特殊的营养物质,以使某种差异型微生物在其中迅速生长繁殖;③鉴别培养基,即在培养基中加入某种试剂,从而在培养过程中表现出特殊反应,用以鉴别不同类型的微生物,如无菌试验用的酚红肉汤培养基,就是一种鉴别培养基;④选择培养基,根据某些微生物具有特殊营养要求,或对某些化学物质具有抗性而设计的,例如在配方中加入某种化学药物,以限制对敏感菌的生长繁殖,而将对其不敏感的所需的微生物分离出来。如在分离酵母菌时,可加入青霉素、链霉素等以抑制细菌的生长。 培养基还可根据其形态分成液体或固体培养基。例如用于无菌试验的肉汤培养基为液体培养基。用于培养青霉菌孢子的小米或大米为固体培养基,在培养基中加入适量琼脂而形成的凝胶培养基,也称固体培养基。 成分 培养基的成分包括:碳源、氮源、矿物质,以及其他必需物质。这些成分通过生物反应过程,生成生物物质、生物化工产品,并放出CO2、H2O和热量。 培养基的成分还可以由发酵过程中所需的元素出发,如C、H、O、N、S、P、Mg、K等。此外,必要时还有一些需要量很少的微量元素,如Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo、B等。在发酵过程中某些生物本身不能合成的物质,如氨基酸、维生素或核苷酸等,必要时亦作为营养物质加入到培养基中。 碳源 具有双重作用。生物在产生生物物质或生物化工产品过程中,它不仅为其提供碳源,也为其提供能源。碳水化合物是微生物发酵中的主要碳源,包括淀粉、葡萄糖、蔗糖和乳糖等。此外,植物油如豆油、棉籽油、玉米油等亦常被应用作为碳源。这类油常与表面活性剂合用,以消除发酵过程中所产生的泡沫。甲醇可用以生产单细胞蛋白。正烷烃类可用以生产有机酸、氨基酸和维生素等,甚至二氧化碳也可作为光合细菌的碳源。 氮源 包括无机氮源和有机氮源。无机氮源包括氨、铵盐及硝酸盐等,它们在被应用时应注意发酵中pH的变化;有机氮源包括氨基酸、蛋白质及尿素等,有机氮源的加入往往加快了生物的生长。因考虑到成本因素,一些有机氮源,如黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、鱼粉、酵母粉等常被选用。 培养基的组成中除了水分外,碳源和氮源的含量是最大的。碳源含量一般不超过10%,氮源含量较低,一般碳氮比应为3[

  • 培养基的分类

    (一)按培养基用途分 1.营养培养基。含微生物生长繁殖所需基本营养物质的培养基常用以牛肉浸粉、蛋白胨、氯化钠为基础,也可增加所需的其他营养物质,如血液等。琼脂是培养基中常用的凝固剂,以支撑细菌的生长形态形成菌落,它对细菌无营养价值。 2.增菌运送培养基。将可疑标本接种于运送培养基中。增菌培养基为液体,是扩大培养的手段,也是细菌生化反应的主要培养方法。 3.选择鉴别培养基。在培养基中加入指示剂或化学物质,抑制某些细菌生长而有助于需要的细菌生长,或通过指示剂颜色变化分离鉴别细菌。 4.特殊培养基。包括厌氧培养基及其他(抗生素效价测定和药敏试验)培养基。 (二)按培养基物理性状分 1.液体培养基。将营养物质溶解于液体中,调整pH灭菌后即为液体培养基。常用于细菌增菌或观察细菌的生化反应。 2.固体培养基。液体培养基中加入13~15g/L琼脂,溶化后凝固成固体培养基。制成平皿,用于分离培养、活菌计数、选择培养、药敏试验。固体培养基可在试管中制成斜面用于菌种传代和短期保存。 3.半固体培养基。液体培养基中加入2~5g/L琼脂。用于细菌动力观察和菌种保存

  • 微生物培养方式

    1.分批培养(batchculture)将微生物置于一定容积的培养基中,经培养,最后一次收获,谓分批培养。在分批培养中,培养基一次加入,不予补充,不再更换。由于营养消耗,代谢产物积累,对数生长期不能长期维持。2.连续培养(continuous culture)在培养器中不断补充新鲜营养物质,并不断排出部分培养物(包括菌体和代谢产物),以保持长时间生长状态的一种培养方式。主要有恒浊连续培养和恒化连续培养两类。恒浊连续培养通过不断调节流速,使培养液浊度保持恒定,因而可不断提供具有一定生理状态的细胞,并可得到以最高生长速率进行生长的培养物。恒化连续培养通过控制恒定的流速使营养物浓度基本恒定,从而使微生物保持恒定的生长速率。用不同浓度的限制性营养物进行恒化培养,可得到不同生长速率的培养物。3.半连续培养(semi-continuous culture)在发酵罐中的一部分发酵液保留下来作为菌种液,放出其余部分进入提练加工工序,在剩余的培养液中加满新的未接种的培养液,继续培养,如此反复,谓之半连续培养。4.补料分批培养(fed-batch culture)补料分批培养又称半分批培养,是指在分批培养过程中,间歇或连续地补加新鲜培养液,但不取出培养物。待培养到适当时期,将其从反应器中放出,从中提取目的生成物(菌体或代谢产物)。若放出大部分培养物后,继续进行补料培养,如此反复进行,则称为重复补料分批培养(repeated fed-batch culture)。与传统分批发酵相比,补料分批发酵的优点在于使发酵系统中的基质浓度维持在低水平,这有以下优点:①可除去快速利用碳源的阻遏效应,并维持适当的菌体浓度,以减轻供氧矛盾;②避免有毒代谢物的抑菌作用;③大为减少了无菌操作要求十分严格的接种的次数。与连续发酵相比,补料分批培养不会产生菌种老化和变异等问题。故其应用范围十分广泛。5.同步培养 能使培养的微生物处于较一致的,生长发育在同一阶段上的培养方法叫同步培养法。利用同步培养法控制细胞的生长,使它们处于同一生长阶段,所有细胞都能同时分裂,这种生长方式叫同步生长(图3—4)。用同步培养法得到的培养物叫同步培养物(synchronous culture)。这样,群体和个体行为一致,即可用研究群体的方法来研究个体水平上的问题。由于同步群体的个体差异,同步生长往往最多维持2个~3个世代,然后又逐步变为随机生长。

  • 【原创】厌氧培养箱简介

    厌氧培养箱简介该培养箱是一种可在无氧环境下进行细菌培养及操作的专用装置,可培养最难生长的厌氧生物,又能避免往厌氧生物在大气中操作时接触氧而死亡的危险性。  结构特点:  该产品由恒温培养室、厌氧操作室、取样室、气路及电路控制系统、箱架、瓶架、熔蜡消毒器等部分组成。设备具有以下主要  特点:  ※ 使用科学先进手段达到高精度、恒温的厌氧环境,便于操作者在厌氧环境中进行操作和对厌氧菌培养。  ※ 温控采用微电脑智能控温仪,能准确直观地反映箱内实际温度,加上有效的限温保护装置,安全可靠。  ※ 箱内装有紫外线杀菌灯,气体经过滤后进入箱内,可有效地避免细菌污染。  ※ 气路装置,可任意调节流量,能任意输入各种所需气体。  ※ 操作室均由不锈钢板制成,其前窗采用厚透明耐冲击特种玻璃板制成,操作使用专用手套可靠舒适、灵活,使用方便。  ※ 操作室内备有特殊接种棒灭菌器,并附设有试管架、熔蜡消毒装置,还装有除氧催化器。  技术指标  取样室形成厌氧状态时间 12小时  培养室使用温控范围 室温 +3~50℃  培养室温度波动 ±0.3℃  培养室温度均匀性 ±1℃  电源/功率 220,50Hz/600W  净重/毛重(Kg) 240/320  培养室内尺寸(cm) 25×19×29 操作室尺寸(cm) 90×65×65  外形尺寸(cm) 132×75×140  包装箱尺寸(cm) 145×94×158

  • 用固体培养基对微生物进行分离纯培养

    单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体,称为菌落(colony)。当固体培养基表面众多菌落连成一片时,便成为菌苔(lawn)。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征,可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落,采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板,即培养平板(culture plate)的简称,它是指固体培养基倒入无菌平皿,冷却凝固后,盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基,每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落,形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行,100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。   1. 稀释倒平板法(pour plate method)  先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释(如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......),然后分别取不同稀释液少许,与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养。   2. 涂布平板法(spread plate method)  由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡,而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长,因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿,制成无菌平板,冷却凝固后,将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面,再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面,经培养后挑取单个菌落。  3. 平板划线法(streak plate method)  用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来,如果划线适宜的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落。   4. 稀释摇管法(dilution shake culture method)  用固体培养基分离严格厌氧菌有它特殊的地方。如果该微生物暴露于空气中不立即死亡,可以采用通常的方法制备平板,然后置放在封闭的容器中培养,容器中的氧气可采用化学、物理或生物的方法清除。对于那些对氧气更为敏感的厌氧性微生物,纯培养的分离则可采用稀释摇管培养法进行,它是稀释倒平板法的一种变通形式* 。先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右,将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释,试管迅速摇动均匀,冷凝后,在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物,将培养基和空气隔开。培养后,菌落形成在琼脂柱的中间。进行单菌落的挑取和移植,需先用一只灭菌针将液体石蜡--石蜡盖取出,再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间,吹入无菌无氧气体,将琼脂柱吸出,置放在培养皿中,用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。

  • 悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的比较分析

    作者: 陈文庆 王建超 刘华杰 高飞 张韧 (北京清大天一科技有限公司 102200 ) (《中国兽药杂志》 2010.44 ( 10 ): 37-41 )【摘要】 采用反应器全悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒与微载体悬浮培养Vero细胞生产狂犬病毒分别与相应的转瓶培养工艺生产案例对比分析,比较悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的生产效益。分析显示,与转瓶培养工艺相比,反应器悬浮培养工艺获得的细胞密度、病毒效价、产品的产量和质量明显提高,生产时的能耗和劳动力需求明显降低。结果表明悬浮培养工艺的生产效益明显高于转瓶培养工艺,适宜于国内生物制品工业化生产的升级换代。【关键词 】 细胞培养;生物反应器;悬浮培养;微载体细胞悬浮培养技术是指细胞在生物反应器中自由悬浮于培养液内生长增殖的一种培养方法。根据细胞是否贴壁,又分为全悬浮细胞培养和贴壁细胞微载体培养。国际上该项技术发展较快,已趋向成熟,是疫苗、抗体等生物制品生产的普遍生产工艺模式。与转瓶培养技术相比,该工艺具有操作简单、产率高、容易放大等优点,本文结合口蹄疫病毒和狂犬病毒的生产,分别对细胞悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的经济效益等进行了分析和分析。1. 全悬浮培养口蹄疫病毒与转瓶培养案例对比高效、安全的病毒性疫苗是防止口蹄疫情发生的最有效方法。BHK21细胞是繁殖FMDV的理想宿主,早在1962年Capstick PB等就实现FMDV的悬浮培养。1965年Telling, R.C.等实现在不锈钢发酵罐中悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗。目前国外(Intervet公司、Merial公司)普遍已经采用2000~5000L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫苗。本文就本公司自主研发的650L生物反应器和无血清培养基进行悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗与转瓶培养工艺进行比较和分析。1.1主要材料细胞株:BHK21贴壁细胞株(中国兽医药品监察所)毒 株:FMDV-O型(某兽用疫苗企业)培养基:低血清MEM培养基(产品代号MD611)、BHK21细胞无血清培养基(北京清大天一科技有限公司)血 清:特级新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)仪 器:5 L反应器(德国贝朗),120L和650LCLAVORUS ® 生物反应器(北京清大天一科技有限公司)1.2实验方法1.2.1转瓶培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒将复苏的BHK21细胞在T75培养瓶中使用低血清培养基(含5%牛血清)培养,连续传代扩增接种15L转瓶,37 ℃培养48小时,传代比例为1:8-1:10,按常规方法接种病毒及维持液,细胞病变90%左右收获病毒液。1.2.2反应器全悬浮无血清培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒(1)贴壁细胞悬浮驯化培养:用BHK21细胞无血清培养基在恒温摇床或者方瓶中无血清驯化贴壁BHK21细胞,可采用直接驯化或者逐级降低血清驯化等方法,每代观察细胞数量和细胞活率,直至BHK21细胞在无血清培养基中的生长增殖速率正常,细胞活率达95%以上,并可连续稳定传代,说明细胞已适应无血清悬浮培养。(2)反应器用种子细胞扩增:采用反应器罐倒罐逐级放大技术,细胞从摇瓶→5 L反应器→120 L反应器→650 L反应器进行逐级放大培养。细胞培养方式为批培养,控制反应器各参数在正常范围:温度37.0 ℃、pH7.2~7.4、溶氧(DO)20~70%、搅拌转速50~150 r/min。(3)反应器培养口蹄疫病毒:待650 L反应器中细胞达到一定密度,提高培养pH至7.5左右,按一定比例直接接种口蹄疫病毒进行病毒维持培养,控制温度、pH、DO、搅拌转速等参数在合适范围,在线无菌间隔取样判断细胞病变情况并检测病毒毒价(LD50,TCID50),确定收获的最佳时间。1.3 细胞培养结果对比分别对低血清培养基15 L转瓶培养的贴壁BHK21细胞进行观察和细胞计数,反应器全悬浮培养的BHK21细胞取样进行数量和活率检测。培养条件和结果对比见表1。表1 转瓶培养和反应器全悬浮培养BHK21细胞对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442105_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442106_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442107_small.jpg 图1 转瓶BHK21细胞低血清培养48 hr,100X 图2 反应器全悬浮无血清培养48 hr,100X 结果显示,转瓶培养的BHK21细胞,培养48小时显微镜观察成致密单层,见图1,96小时细胞开始出现脱落死亡;反应器无血清全悬浮培养BHK21细胞48小时的细胞显微镜观察状态如图2,生长至96小时细胞密度可达5.4x106 cells/ml,活率维持在94%左右。从细胞数量比较,650L反应器培养一批的细胞数量相当于500~700个15 L转瓶培养的细胞总量。1.4 病毒培养效果对比两种不同培养工艺,细胞在满足活力要求的基础上,以同等条件分别接种FMDV病毒,取样测定病毒毒价,结果见表2。 表2 转瓶和反应器全悬浮培养BHK21细胞病毒毒价对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442112_small.jpg结果表明,无血清悬浮培养的口蹄疫病毒毒价(TCID50和LD50)检测不低于转瓶培养工艺。根据反应器低血清悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫完整病毒粒子(146S)检测较转瓶高10倍左右的情况,应用无血清悬浮培养工艺,杂蛋白含量更少,口蹄疫完整病毒粒子和口蹄疫疫苗质量均提高。1.5 反应器和转瓶经济效益估算对比依据培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒工艺过程要求,从细胞密度、病毒毒价、产品效力、资源环境、劳动力等方面进行简单对比,借以一窥二者的经济效益差别(见表3)。 表3 反应器无血清悬浮培养与转瓶培养BHK21细胞经济效益对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442114_small.jpg*按照反应器无血清悬浮培养一条生产线(5L-120L-650L)、转瓶体积15 L进行对比按照目前培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒质量要求,对悬浮无血清培养工艺的产能进行预估,一条5L-120L-650L的反应器生产线年生产病毒量约为2.1亿毫升,生产疫苗量约为4.2亿毫升。2. 人狂犬病毒微载体培养与转瓶培养的对比我国是受狂犬病危害最为严重的国家之一,近年报告狂犬病死亡人数均在2400人/年以上,一直位居我国各类传染病报告死亡数的前三位,根据有关国家成功控制狂犬病的经验,世界卫生组织提出倡议,到2020年消除人狂犬病。我国距此倡议目标还有大量工作要做,国内也对人用和兽用狂犬病疫苗的生产做了大量研究工作。下面就120L反应器微载体培养Vero细胞生产狂犬病毒效果与转瓶培养工艺和培养效果比较分析。2.1主要材料细胞株:Vero细胞株毒 株:aG株(细胞株和毒株均来自某人用疫苗企业)培养基:低血清199培养基(产品代号MD504)、 Vero细胞反应器培养用培养基(产品代号MD505), 均来自北京清大天一科技有限公司仪 器:5 L反应器(德国贝朗)、120LCLAVORUS ® 生物反应器(北京清大天一科技有限公司)血 清:特级新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)微载体:Cytodex 1 (美国GE

  • 霉菌培养箱|二氧化碳培养箱|电热恒温培养箱

    电热恒温培养箱用途概述:智能型电热恒温培养箱,是在原基础上研制生产,外观美观,性能可靠,维修方便是用于医疗卫生、医疗生物、农业、科研等部门作培养的必要设备。 电热恒温培养箱设计理念:A、人性设计 ※外壳、整体喷塑,正面无形螺钉、易擦洗。 ※内胆角弧形设计,工艺先进,美观大方。 ※工作室搁架随意调节。 ※外门双层玻璃观察窗,观察物品一目了然,并设有装饰嵌条,美观大方。 B、科学化设计 ※先进循环风道,使温度更均匀。 ※具有定时和计时功能。 ※超温报警功能。 C、智能化设计 ※采用微电脑智能化芯片技术,控温精度高,操作简单。 电热恒温培养箱技术参数:型号 温控范围 温度波动 功率 内室尺寸 外形尺寸 使用电压 YK-5039RT+5℃~60℃ ±0.5℃ 300350×350×400 435×465×608 220V 50HzRT+5℃~60℃ ±0.5℃ 400400×400×500 485×515×708 220V 50HzRT+5℃~60℃ ±0.5℃ 500500×500×650 585×615×858 220V 5

  • 细胞培养完整手册(2)

    注意事项: 1.配制溶液时必须用新鲜的蒸馏水。2.安装蔡式滤器时通常使用孔径 0.45 微米 和 0.22 微米滤膜各一张,放置位置为 0.45 的位于 0.22 微米的滤膜上方,并且要特别注意滤膜光面朝上。 3.配制 RPMI1640 培养基时因为还要加入小牛血清,而小牛血清略偏酸性,为了保证培养液 PH 值最终为 7.2 ,可在配制时调 PH 至 7.4 。 细胞培养的一般过程 一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试,具体内容可参阅有关文献。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器血中,这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。R 理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养,实际上幼体组织(尤其是胚胎组织)比成年个体的组织容易培养,分化程度低的组织比分化高的容易培养,肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理,尽快培养,因故不能马上培养时,可将组织块切成黄豆般大的小块,置 4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌,同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌,为减少污染可用抗菌素处理。由组织并分离分散细胞的方法可参阅有关文献。 三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养,则直接将组织块接入培养器皿底部,几个小时后组织块可贴牢在底部,再加入培养基。如系细胞培养,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,按要求以一定的量(以每毫升细胞数表示)接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后,立即放入培养箱中,使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次,观察的内容包括细胞是否生长良好,形态是否正常,有无污染,培养基的 PH是否太酸或太碱(由酚红指示剂指示),此外对培养温度和 CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期(数小时到数十天不等),在潜伏期细胞一般不分裂,但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养,将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代,而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质,也可能仅有不死性(Immortality)而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。四、冻存及复苏为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度?-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基,以一定的冷却速度冻存,最终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管后,立即放入 37℃水中,使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

  • 【资料】CO2培养箱选购与使用

    3.相对湿度控制:培养箱内相对湿度的控制是非常重要的,维持足够的湿度水平才能保证不会由于过度干燥而导致培养失败。大型的二氧化碳培养箱是用蒸汽发生器或喷雾器来控制相对湿度水平的,而大多数中、小型培养箱则是通过湿度控制面板(humidity pans)的蒸发作用产生湿气的(其产生的相对湿度水平可达95-98%)。一些培养箱有一个能在加热的控制面板上保持水份的湿度蓄水池(humidity reservoir),这样可以增强蒸发作用,此蓄水池能增加相对湿度水平达97-98%。但是,这个系统也更复杂,由于复杂结构的增加一些难以预料的问题也会在使用过程中出现。 4.微处理控制系统:每一个使用者都希望所用的仪器能够方便好用,微处理控制系统和其它各种功能附件(如高温自动调节和警报装置、CO2警报装置、密码保护设置、自动校准系统等等)的运用,就使得二氧化碳培养箱的操作和控制都非常的简便。微处理控制系统是维持培养箱内温度、湿度和CO2 浓度稳态的操作系统。例如PIC微处理器控制系统,它能严格控制气体的浓度并将其损耗降至极低水平,以保证培养环境恒定不变,且能保证长期培养过程中箱内温度精确,并有LED 显示,可设置、校正温度和CO2浓度。不同的微处理系统虽然名字不相同,但是其原理与控制效果则无甚区别,选购时不必太在意它们名字上的区别,关键是要自己觉得使用起来方便,容易操作,而且要能够达到所需的控制精度。此外,我想一个报警系统也是不可少的吧,它能让你及时知道培养箱出现的情况,并做出反应,从而最大限度地降低了损失,保证实验的连续性。有些培养箱有声/光报警装置,温度变化达±0.5℃,或CO2 浓度变化达±5%时,即会自动报警;有些具有CO2浓度异常报警显示功能。这些装置都是为了方便使用者,以减少繁琐枯燥的实验过程而设计的。5.污染物的控制:污染是导致细胞培养失败的一个主要因素,因而,二氧化碳培养箱的制造商们设计了多种不同的装置去减少和防止污染的发生,其主要途径都是尽量减少微生物可以生长的区域和表面,并结合自动排除污染装置来有效防止污染的产生。例如,鉴于CO2培养箱在使用过程中有时会伴有霉菌生长,为确保培养箱免受污染且保证仪器箱体内的生物清洁性,有些公司开发设计了带有紫外清洁功能的增强型CO2培养箱;还有公司设计的特有铜外壳HEPA滤器能过滤培养箱内空气,可过滤除去99.97%的0.3um以上的颗粒,并能有效杀死过滤时被挡在滤器内的微生物颗粒;此外,自动杀菌装置能使箱内温度达到90℃从而杀死污染微生物,当它与HEPA系统结合使用就能够极大的减少污染。这些装置对于细胞培养来说是必不可少,但选择何种清洁装置呢?当然功能越多越好的最适用,但是价格也会随之上升。如果经费有限,只能选择一个价格较便宜的,这时就应该配合使用一些消毒剂和除菌剂,经常进行消毒灭菌,也能达到贵仪器的效果,只是比较麻烦一点而已。总之,无论选择何种装置,都要时刻注意保持培养箱的清洁,经常清理箱体,这样才能增加仪器的使用寿命,并使实验顺利进行,保证结果的可靠性。6.其它因素:每一类型的二氧化碳培养箱温度、湿度和CO2 浓度的控制范围和控制精确度、均一度都有所不同。此时,购买仪器之前就要对自己实验室的要求有一定的了解:控制范围是多大呢?控制精度要求非常准确,还是可以有一定的浮动范围呢?因为有时太高的精度也好像没有太大的意义。只有对自己所需的产品有全面的了解才能选到自己的最佳“伙伴”。生物通龙虎榜为您提供了一些公司二氧化碳培养箱的具体参数,从中您可以得到一个具体的比较和分析,说不定里面会有您心仪的仪器呢。培养箱的容积也是一个不可忽略的因素,买小了不够用,大了又浪费又占地方。二氧化碳培养箱的可选容积非常广,包括小型(700升),而且每种类型又有不同的容积可选。此时,就需要您在选购前对所需培养箱容积的范围有一个比较准确的了解,并在此基础上多预留一点空间,以保证不时之需。此外,有些二氧化碳培养箱还具有许多特别的功能,如有Thermogard 风扇管理系统,从而实现了风量的智能化调节;有单通道循环系统,以确保培养箱内部温度的均一性,同时也降低了污染;LCD(液晶)显示系统,硅树脂温度传感器测量温度等等。这些各种各样的附件装置的选择都是为了方便选购者的选择和使用。从技术角度来选择二氧化碳培养箱由于动物细胞培养液一般使用碳酸盐pH缓冲系统,要求培养环境中维持一定浓度的CO2,所以动物细胞的培养一般需要CO2培养箱。   CO2培养箱采用两种不同的CO2维持系统。一种方式是通过使用空气泵,将CO2和空气按一定比例混合后吹入培养箱。另一种方式是通过一个自动的CO2检测控制系统,在检测到CO2浓度低于要求浓度时打开CO2气阀充入CO2。由于前一种方法耗费CO2而且不容易精确控制CO2浓度,先进的CO2培养箱都采用自动监控系统来维持CO2的浓度。  配有自动CO2检测控制系统的培养箱需要根据生产厂家的说明,定期做CO2浓度的测试和矫正。   CO2培养箱的隔热采用水套式和气套式两种类型。水套式需要用户在安装培养箱时培养箱壁的空间内灌入大量蒸馏水。由于水的比热容很高,水套式的优点是有助于均匀散热和避免形成冷区,以及在断电后能够比较好的减缓培养箱内温度的降低。  目前大多数实验室都使用进口的细胞培养箱。虽然进口的产品质量上比较有保障,但价格很贵,而且售后服务不是很方便。  CO2培养箱一般配一个水盘,用以维持很高的湿度。水盘内的水要定期添加,水盘也要定期清洗以避免微生物的生长。   为了减少微生物的污染,有一些CO2培养箱提供灭菌功能。有的可以加热到比较高的温度来灭菌,有的则通过让空气循环通过一个紫外线腔体的办法来灭菌,这样就灭菌时就不需要中断细胞的培养。

  • 培养基pH的问题

    灭菌后的PCA培养基PH,测得值为6.65,培养基配置说明书显示PH范围为7.0±0.2,不在范围里,帮忙分析原因,及对菌落生长影响?

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