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  • 融合蛋白是什么?融合蛋白和单抗的区别及优势?

    [font='calibri'][size=13px]融合蛋白[/size][/font][font='calibri'][size=13px]是什么?[/size][/font][font='calibri'][size=13px]融合蛋白和单抗的区别[/size][/font][font='calibri'][size=13px]及优势?[/size][/font]融合蛋白是指将目标蛋白与免疫球蛋白融合而产生的新型重组蛋白,其中,目标蛋白可以是细胞因子、受体、抗原肽或者其他具有生物学活性等功能蛋白质。融合蛋白具有较强的生物活性,还具有一些抗体性质,可以用于疾病治疗,可以通过延长血浆半衰期,加强其治疗能力,同时,降低肾小球清除率,可以提高药物在体内的药物浓度。单抗即单克隆抗体,是由单一的B细胞克隆产生的抗单一表位的抗体,具有多个优点,包括高度的特异性:能够特定的针对单一的抗原表位,选择性的杀伤靶细胞,具有更强的疗效;安全性:由于单抗只针对靶细胞,对机体的其他细胞影响不大,相比其他药物不良反应少;多样性:不同的单抗结合,不同的抗原表位作用机制各不相同,可以针对不同的疾病选择相应的单抗。融合蛋白和单抗具有各自的优点和作用特点,近年来,对这两种相关药物的研究越来越多,对于一些恶性肿瘤等相关性疾病的治疗得到了较大的提高。因此,融合蛋白和单抗具有上述区别,但用于疾病的治疗各自有优势。单克隆抗体定制服务推荐:义翘神州是一家抗体试剂和定制抗体的领先供应商,目前已成功交付了数以万计的抗体项目,客户涵盖科研院校、生物制药公司、诊断公司和其他生物技术公司等。针对定制单克隆抗体,义翘神州提供了一套全面的解决方案。我们将与您通力合作,完成从抗原设计、纯化和抗体验证的完整过程。义翘神州拥有包括杂交瘤、噬菌体抗体库和单B细胞在内的抗体发现平台, 我们可根据您感兴趣的靶点、抗体应用和时间表等,来选择最合适的技术平台。 此外,义翘神州还提供ELISA、WB、流式细胞术、IHC、基于细胞的筛选、亲和力检测等多种表征和筛选技术,确保最终鉴定到最佳的抗体,以满足研究、诊断和治疗领域等应用。单克隆抗体定制服务:https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services

  • 抗体融合蛋白:双特异性抗体与蛋白融合的原理与应用

    [font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白是一种将抗体片段与功能蛋白融合表达的重组蛋白,具有抗体的特性和功能蛋白的活性。它可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化、抗体和抗原的定量分析以及免疫导向药物的制备等领域。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同,可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]与[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体([/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]scFv[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b])[/b][/url]融合蛋白。制备抗体融合蛋白的方法主要有化学交联法和基因工程技术,其中基因工程技术是目前主要的方法。在制备过程中,需要注意两蛋白间的接头序列的长度,以确保蛋白质的折叠和稳定性。抗体融合蛋白在免疫学、生物制药和医学等领域具有广泛的应用前景,为疾病的诊断、治疗和药物研发提供了新的工具和方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体如何与蛋白融合[/font][font=Calibri]?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]双特异性抗体是一种特殊的抗体,具有两个不同的抗原结合位点。通过技术手段,可以将双特异性抗体与另一种蛋白质融合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①使用基因工程技术,将双特异性抗体的基因与目标蛋白质的基因进行融合,然后通过表达载体在细胞内表达融合蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②使用化学手段,将双特异性抗体与目标蛋白质进行化学偶联。这需要使用特定的化学偶联剂,将双特异性抗体的特定基团与目标蛋白质的特定基团连接起来。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要注意的是,融合蛋白质的功能和性质取决于其组成成分的特性和比例,因此在融合过程中需要谨慎选择和设计组成成分,以确保融合蛋白质具有所需的功能和性质。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体融合蛋白具有广泛的应用,包括但不限于以下方面:[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①免疫诊断:抗体融合蛋白可以用于检测抗原,如病毒、细菌、肿瘤标志物等。通过将抗体片段与荧光蛋白、酶等标记物结合,可以实现对抗原的高灵敏度检测。[/font][font=宋体]②免疫治疗:抗体融合蛋白可以用于治疗肿瘤、感染性疾病等。通过将抗体片段与细胞毒素、免疫调节因子等效应分子结合,可以实现对肿瘤细胞的靶向杀伤或调节免疫反应。[/font][font=宋体]③抗体纯化:抗体融合蛋白可以用于分离和纯化抗体。通过将抗体片段与亲和标签结合,可以利用亲和层析等技术实现对抗体的纯化和富集。[/font][font=宋体]抗体和抗原的定量分析:抗体融合蛋白可以用于定量分析抗体和抗原的浓度。通过将抗体片段与荧光染料等标记物结合,可以利用流式细胞术等技术实现对抗体和抗原的定量分析。[/font][font=宋体]④免疫导向药物的制备:抗体融合蛋白可以用于制备免疫导向药物,即将药物与抗体片段结合,利用抗体的特异性结合能力,将药物定向引导至病变部位,提高药物的疗效并降低副作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 抗体融合蛋白结构:融合蛋白与单抗区别有哪些?

    [font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白([/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]融合蛋白)是指在基因水平上将目的基因同免疫球蛋白部分片段基因相连,并在真核或原核表达系统中表达的重组蛋白。抗体融合蛋白具有抗体的特性及融合功能蛋白的活性,可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化及抗体和抗原的定量分析等,特别可用于免疫导向药物的制备。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同,可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白与单链抗体([/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体])融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白结构:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、单链抗体融合蛋白研究表明,抗体可变区的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端空间结构上与互补决定区([/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体])形成的抗原结合部位十分接近,有的抗体可变区[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端残基甚至直接参与抗原结合部位的形成,如果将效应蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端结合,可能对抗体可变区的空间构型造成较大影响,从而降低抗体与抗原的结合能力。因此,通常将蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端进行结合,形成抗体融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在结构上是将抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区与功能蛋白进行融合,可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端与目的基因进行融合。根据结合蛋白的不同,可以有多种构型。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白作用原理:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]含有抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白与[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]融合蛋白含有抗体的可变区,可以进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应,其作用原理为利用抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异性结合的特性,通过这种特性的引导,将具有生物活性的蛋白靶向引导至细胞的特定部位,进而发挥一定的生物效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不含抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该类融合蛋白含有的抗体功能区为[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区,不能进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的作用为延长药物在血浆内的半衰期、增加融合蛋白的稳定性等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白药理作用的发挥依赖于功能蛋白部分,利用受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体之间的相互作用产生一系列的生物学效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白制备:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]最初抗体融合蛋白制备的方法为化学交联法,但这种方法制备的抗体融合蛋白组成不均一、性能不稳定、免疫源性大,随着基因工程技术的发展,该技术已被淘汰。目前主要利用基因工程技术来进行抗体融合蛋白的制备。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其制备原理为:将抗体基因与目的蛋白基因通过一段接头序列([/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体])进行链接,然后将链接产物亚克隆至载体中,并用原核或者真核表达系统进行表达。制备抗体融合蛋白过程中,一个关键的问题是两蛋白间的接头序列[/font][font=Calibri](Linker)[/font][font=宋体]的长度,[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]的长短对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短,可能影响两蛋白高级[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]结构的折叠,从而相互干扰;如果接头序列太长,又涉及免疫原性的问题。抗体融合蛋白与双特异性抗体抗体融合蛋白是将抗体的部分片段与目的蛋白进行融合表达得到的重组蛋白,若将两个具有不同抗原特异性的抗体片段连接至同一蛋白,即可得到双特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单克隆抗体与抗体融合蛋白区别:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]单克隆抗体抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]结构:[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]型[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制备方法:杂交瘤技术[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]基因重组[/font][/font][font=宋体][font=宋体]表达系统:真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理:特异性识别抗原,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段引起[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ADCP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]等作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]结构:具有多种结构[/font][font=宋体]制备方法:基因重组[/font][font=宋体][font=宋体]表达系统:真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理:功能蛋白与靶分子间的受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体的相互作用[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以参考:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 美开发可快速诊断肺结核的便携纳米设备

    用时不到3小时,同时确定是否存在耐抗生素菌株2013年05月07日 来源: 中国科技网 作者: 冯卫东 中国科技网讯 美国马萨诸塞州总医院(MGH)研究人员曾首个开发出癌症诊断便携设备,现在他们又在结核病和其他重要传染病的快速诊断技术上取得了新的进展。研究人员在《自然·通讯》和《自然·纳米技术》分别发表研究成果,该设备融合了微流体技术和核磁共振(NMR)技术,不仅能诊断出这些重要的传染病,还能确定是否存在耐抗生素菌株。 两篇论文的共同高级作者、MGH主任医师拉尔夫·惠斯勒博士表示,快速查明与传染病有关的病原体并对耐药性进行测试,对于诊断疾病和决定是否要对患者使用抗生素非常重要。新方法仅需2至3个小时即可完成上述过程,这比动辄需要两周时间才能提供诊断结果的标准培养法有了很大的进步。 MGH研究人员过去曾开发出能检测血液(或非常小的组织样本)中癌症生物标志的便携设备。靶细胞或分子首先由磁性纳米粒子进行标记,然后样本通过一个微型NMR系统,其能检测和量化靶标的量值。但是,要将该系统用于细菌诊断时存在难以找到抗体的问题,在早期研究中,抗体常被用以准确检出特定细菌。于是,研究团队转向将特定核酸序列作为靶标。 在4月23日《自然·通讯》中描述的新设备,可在少量痰标本中检出结核病菌的DNA(脱氧核糖核酸)。DNA从样品中提取后,使用标准程序对靶标序列进行扩增,然后由含有互补核酸序列的聚合物小珠捕获,并由磁性纳米粒子(其序列可与靶标DNA的其他部分进行绑定)进行标记。将微型NMR线圈纳入设备,即可检出样本中存在的任何结核病菌DNA。 对结核病患者和健康人群的对照样本进行的测试表明,该设备在不到3小时的时间内检出了所有的阳性样本,误报率为零。而现有的诊断程序则需数周时间,且漏报率高达40%。 研究人员在5月5日《自然·纳米技术》上描述了一种类似的新技术。该系统将核糖体RNA(rRNA)作为纳米粒子标记的目标。研究人员开发的普通核酸探针能检测许多细菌种群共有的rRNA区域,开发的另一组探针则将13种临床上常见的重要病原体的特定序列作为靶标,这些病原体包括肺炎链球菌、大肠埃希氏菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)等。 该设备的灵敏度非常高,能检出10毫升血液试样中仅存的一两个细菌,从而准确地判断出细菌载荷。对感染患者血液样本的测试表明,系统在不到两小时内准确地识别了特定的细菌种类,还发现了标准培养技术无法检出的两个细菌种类。 惠斯勒表示,基于磁相互作用检测病原体是一种非常可靠的方法,其不用管样品的质量,这意味着在有限资源环境下的大范围净化措施将不再必要。而且,在几个小时内就能检测出细菌,这对控制结核病的扩散具有至关重要的意义。(冯卫东) 《科技日报》(2013-5-7 二版)

  • 融合标签蛋白纯化常见问题解析

    [font=宋体][font=宋体]融合标签是已知的蛋白或多肽[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]可融合到目标蛋白上。在重组蛋白中,常常将目的蛋白末端与一些标签进行融合表达,这是为什么呢?常见的融合标签有哪些呢?它们都有什么区别呢?下面是[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]融合标签蛋白纯化[/b][/url]常见问题解析分享:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]:什么是融合标签?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]:融合标签是指利用 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]体外重组技术,在目的蛋白 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端或 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端进行融合表达的特定蛋白、多肽或寡肽标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]:融合标签有什么作用?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]:重组蛋白通过融合标签与包被在固相基质上的特异配基结合,使重组蛋白定向固定并得以纯化,大大简化了重组蛋白的检测,同时既能保留天然蛋白的大部分结构,又能实现增加溶解度,防降解,促进分泌,便于纯化等功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]:融合标签的分子量和功能有关吗?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]:蛋白融合标签的分子量越大,对蛋白质本身的功能影响越大,所以大分子融合标签一般只用于检测或蛋白纯化等。常见的小分子量的融合标签,因其具有很多商品化的标签抗体,可以节省使用者制备目的蛋白的单克隆抗体的时间与成本。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]:是否所有的融合标签都需要切除?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]:融合标签较小,免疫原性也很弱,一般不需要切除,对蛋白质的后续应用和研究不会产生影响。但是有些大标签是需要切除的,例如:[/font][font=Calibri]Dsb [/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]FkpA [/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]SUMO [/font][font=宋体]标签等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了便于将重组蛋白的融合标签去除,在设计构建载体时需要在标签蛋白和目的蛋白之间加上蛋白酶识别位点,常用的蛋白酶位点有:[/font][font=Calibri]HRV 3C [/font][font=宋体]蛋白酶切位点、[/font][font=Calibri]TEV [/font][font=宋体]蛋白酶切位点、肠激酶切位点、[/font][font=Calibri]SUMO [/font][font=宋体]蛋白酶切位点等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]:融合标签加在 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端或 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端,有什么区别?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]:蛋白融合标签对于 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端或 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端的选择性对重组蛋白的结构与特性会造成一定的影响。例如,对于较难表达或较容易降解的蛋白,可将融合标签选择在 [/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’ 端,可以提高重组蛋白的稳定性,也可减小对重组蛋白的免疫原性。但是重组蛋白为分泌蛋白,在其分泌到高尔基体的过程中,处于 [/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’ 端的融合标签会随着 [/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’ 端信号肽的切除而切除,从而失去作用。在目的蛋白结构未知的情况下,可以分别于两端构建标记的表达克隆,以确定哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看义翘神州蛋白标签:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

  • 抗体融合蛋白与单抗差异详解

    [font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白,亦被称为[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]融合蛋白,是通过在基因层面上巧妙地将目标基因与免疫球蛋白的部分基因片段相互连接,随后在真核或原核表达系统中实现表达而得到的一种重组蛋白。这种独特的蛋白不仅继承了抗体的卓越特性,更融合了功能蛋白的活性,使其在多个领域展现出广泛的应用前景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在免疫诊断领域,抗体融合蛋白能够精准识别并绑定抗原,为疾病的早期发现和诊断提供了有力工具。在免疫治疗领域,它则能够引导药物直达病灶,提高治疗效果并减少副作用。此外,抗体融合蛋白在抗体纯化、抗体和抗原的定量分析等方面也发挥着重要作用,特别是在免疫导向药物的制备中,其重要性更是不言而喻。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据与[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段结合方式的不同,抗体融合蛋白可分为多个类型,包括[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]以及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体([/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]scFv[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b])[/b][/url]融合蛋白。这些不同类型的抗体融合蛋白各具特色,为科学研究和临床应用提供了丰富的选择。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]结构[/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、单链抗体融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]研究表明,抗体可变区的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端空间结构上与互补决定区([/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体])形成的抗原结合部位十分接近,有的抗体可变区[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端残基甚至直接参与抗原结合部位的形成,如果将效应蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端结合,可能对抗体可变区的空间构型造成较大影响,从而降低抗体与抗原的结合能力。因此,通常将蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端进行结合,形成抗体融合蛋白。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在结构上是将抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区与功能蛋白进行融合,可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端与目的基因进行融合。根据结合蛋白的不同,可以有多种构型。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]作用原理[/font][/b][font=宋体]含有抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白与[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]融合蛋白含有抗体的可变区,可以进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应,其作用原理为利用抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异性结合的特性,通过这种特性的引导,将具有生物活性的蛋白靶向引导至细胞的特定部位,进而发挥一定的生物效应,也就是所谓的“生物导弹”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不含抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]该类融合蛋白含有的抗体功能区为[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区,不能进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的作用为延长药物在血浆内的半衰期、增加融合蛋白的稳定性等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白药理作用的发挥依赖于功能蛋白部分,利用受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体之间的相互作用产生一系列的生物学效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体融合蛋白制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]最初抗体融合蛋白制备的方法为化学交联法,但这种方法制备的抗体融合蛋白组成不均一、性能不稳定、免疫源性大,随着基因工程技术的发展,该技术已被淘汰。目前主要利用基因工程技术来进行抗体融合蛋白的制备。其制备原理为:将抗体基因与目的蛋白基因通过一段接头序列([/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体])进行链接,然后将链接产物亚克隆至载体中,并用原核或者真核表达系统进行表达。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制备抗体[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]过程中,一个关键的问题是两蛋白间的接头序列[/font][font=Calibri]( Linker )[/font][font=宋体]的长度,[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]的长短对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短,可能影响两蛋白高级[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]结构的折叠,从而相互干扰;如果接头序列太长,又涉及免疫原性的问题。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白与双特异性抗体[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白是将抗体的部分片段与目的蛋白进行融合表达得到的重组蛋白,若将两个具有不同抗原特异性的抗体片段连接至同一蛋白,即可得到[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]单克隆抗体与抗体融合蛋白区别[/font][/b][font=宋体] [/font][img=单克隆抗体与抗体融合蛋白区别,690,155]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403081113369902_7816_5907840_3.png!w690x155.jpg[/img][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 【求助】气质联用诊断“离子化和透镜”不通过

    【求助】气质联用诊断“离子化和透镜”不通过

    我们用的是Thermo fisher的DSQII,使用了不到半年,期间出现过几次在做诊断时第五项“离子化和透镜”不通过,但是有时候到第二天或过段时间就又好了,后来联系维修工程师,换了一块“模拟线路板”后两个月没有出现诊断不通过的情况(3月底更换的),但是这两天有出现类似情况,而且这次灯丝也坏了,电话咨询维修工程师我们自己换了一个灯丝后诊断通过了,但是再到第二天准备测试时做诊断又没有通过,第一个透镜的曲线都成水平了(正常时是对角斜线),我们跟售后电话咨询了几次说可能还要换板子,这才不到半年就要换两个板子,大家有没有碰到这种情况啊?有高手帮助指导一下,非常感谢。补充诊断不通过抓图。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/06/200906161323_155656_1602134_3.jpg[/img]

  • 融合蛋白纯化小攻略-融合蛋白常见问题解析

    月旭科技秉持分享传承生物制药相关技术,汇集生物制药相关细分技术,以生物技术分享传承和助力发展为初衷,月旭材料是集生物分离纯化介质研发、生产、销售于一体的高新技术企业。公司专注生物分离填料的研制和生物工艺下游技术工艺开发。有琼脂糖微球填料,葡聚糖微球填料,琼脂糖交联葡聚糖微球填料,琼脂糖交联纤维素微球填料,琼脂糖交联纤维素交联葡聚糖微球填料,涵盖离子交换,亲和,排阻和疏水等多款高品质填料。[b]融合蛋白不挂金属螯合亲和层析柱01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]超声的功率不对( 太大,蛋白炭化,太小,蛋白没有释放)[/b][color=#fcb441]解决方法:[/color]改变超声功率或超声前尝试添加溶菌酶增加细胞破碎率。[b]02 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]组氨酸标签暴露不完全[/b][color=#fcb441][b]解决方法:[/b][/color]在变性条件下( 用4-8 M 脲,或4-6 M 盐酸胍) 进行纯化,常规Ni-6FF(IDA) ,在变性条件下镍离子容易脱落,此时可选择[b]耐受变性剂的螯合填料(推荐月旭材料的亲和填料Ni Tanrose FF(NTA)。03 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]His标签丢失[/b][color=#fcb441][b]解决方法1:[/b][/color]WB 检查His 是否表达,上游构建,改变His-tag 的位置(C- 端或N- 端),必要时增加His 个数。[color=#fcb441][b]解决方法2:[/b][/color]孵育的时间不够,降低流速和增加孵育的时间。[color=#fcb441][b]解决方法3:[/b][/color]改变螯合的金属离子,寻找到最佳的结合金属离子。[color=#fcb441][b]解决方法4:[/b][/color][b]选择高载量高特异性的螯合填料(月旭材料的亲和填料 Ni Tanrose FF(IDA) )。融合蛋白结合在螯合填料上洗脱不下来01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]洗脱条件太温和(融合蛋白质仍然结合在柱上,结合力较强)[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]增加咪唑的梯度洗脱或降低pH 来找出最佳的洗脱条件。[b]02 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]降低pH 的方法洗脱,若pH 低于3.5,会导致镍离子脱落[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]改变洗脱办法,咪唑竞争性洗脱。[b]03 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]蛋白已沉淀在柱上[color=#fcb441]解决方法1:[/color][/b]减少上样量,或使用咪唑的线性梯度而不是分步洗脱以降低蛋白的浓度。试用去污剂或改变NaCl 的浓度,或在变性条件( 去折叠) 下洗脱( 用4-8 M 脲,或4-6 M 盐酸胍)。[b][color=#fcb441]解决方法2:[/color][/b]蛋白在柱上变性固化,用0.5M氢氧化钠洗柱。[b]04 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]非特异性疏水或其他相互作用[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]加非离子去污剂到洗脱缓冲液(如:2% Triton X-100)或增加NaCl 的浓度。[b]05 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]在填料表面形成高密度融合蛋白的聚集[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]选择合适载量的填料,切勿一味追求高载量。[b]镍柱使用中出现棕色是怎么回事01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]缓冲液中DTT的影响, DTT会对镍柱的颜色和纯化效率有很大的影响,在碱性的缓冲液条件下,镍离子会被DTT还原生成棕色的沉淀,所以要尽量避免DTT的参与。[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]若样品中含有DTT,在上样之前, 我们推荐采用不含还原性试剂的空白运行来除去任何较弱结合的镍离子;空白运行方法(使用不含还原剂的平衡液和洗脱液)1)5倍柱体积的双蒸水洗柱 ;2)5倍柱体积的平衡液洗柱;3)5倍柱体积的洗脱液洗柱;4)10倍柱体积的平衡液平衡。当不使用时,勿将Ni Tanrose 6FF(IDA)保存于含还原性试剂的缓冲液中。

  • 败血症可在两小时内快速诊断 准确率高达86%

    来源:中国科技网-科技日报 作者:刘海英 2013年10月18日 原标题:英研究人员找到新的生物标记 败血症可在两小时内快速诊断 科技日报伦敦10月17日电(记者刘海英)英国研究人员在最新一期《科学公共图书馆期刊》(PLOS ONE)上发表文章称,他们的最新研究确认了一组败血症生物标记,利用该标记可在两个小时内对病患病情做出诊断。 败血症是一种致病细菌侵入血液循环系统,在血液中生长繁殖后产生毒素而发生的急性全身性感染,非常致命。快速的诊断和治疗对于挽救败血症患者的生命来说十分重要,但由于该病症绝大多数继发于各种感染,又缺乏特异的临床表现,因而目前还没有快速的临床诊断方法,而在实验室对病体样本进行分析需要两天的时间,很容易造成漏诊或误诊。 为寻找可快速诊断败血症的方法,伦敦国王学院的研究人员对三组分属于败血症患者、其他全身炎症反应综合征患者和健康人群的血液样本进行了分析,来观察一种特定的小分子核糖核酸增加的情况。研究人员发现,败血症患者体内的一种小分子核糖核酸明显比其他两组人活跃。而通过进一步对照研究,该种生物标记的有效性得到了验证。实验结果表明,利用该种生物标记对病患血液进行分析筛查的效果很好,可在两个小时内得出败血症诊断结果,准确率高达86%。 研究人员指出,败血症是一个隐形杀手,在英国医院中,有近三分之一的死亡病例都与败血症有关。快速的抗生素治疗对于对抗该种疾病十分重要,但目前的诊断方法却需要长达两天的时间。新研究使得医生可在病房内对病患进行筛查检测,并在两个小时内得出诊断结果,这一进展有望挽救成千上万的生命。此外,败血症的症状与其他类型的全身炎症反应综合征十分相似,但仅有败血症会对抗生素产生反应,新研究成果使得临床医生能够将二者区分开来,从而可以防止对那些非败血症患者滥用抗生素,进而减少抗生素耐药性现象的发生,这对于其他类型病患来说也十分重要。

  • 关于征集标准化军民融合效益案例的通知

    [align=center]关于征集标准化军民融合效益案例的通知[/align]各有关单位:  为加快推进标准化军民融合,受中央军民融合办委托,由我所开展标准化军民融合效益案例征集工作,入选案例拟纳入“标准化军民融合效益案例集”,优秀案例拟形成专刊上报。有关事项通知如下:一、征集范围  (一)“民标军用”方面,包括已经被军队采用的民标,及具有潜在采用价值的民标和预期发挥效益;  (二)“军标民用”方面,包括已经转化为民标的军标,及具有潜在转化价值的军标和预期发挥效益;  (三)军民通用标准方面,包括已经制定的军民通用标准,及拟制定的军民通用标准和预期发挥效益;  (四)军民标准资源共享、标准化技术组织军民共建、标准化人才军地联合培养等方面效益案例;  (五)军地联合创新研制前沿技术国际标准,民企主导制定国家标准、国家军用标准、团体标准等方面发挥重要效益案例。二、反馈要求  (一)反馈时间  请各单位于10月30日前将案例纸质版(加盖公章)和电子版一并发至我所。  (二)案例模板  参见附件。  (三)联系方式  联系人:刘新建,联系电话:010-84380226、13911107380,联系地址:北京市朝阳区京密路7号,邮编:100028,电子邮箱:[email=mdy531~126.com]mdy531@126.com[/email]。[align=right][img=,385,347]http://www.chinajl.com.cn/upload/img_path7/gg.jpg[/img][/align][color=#333333][/color][color=#333333][/color][color=#333333]附件:[/color][align=center][color=#333333]标准化军民融合效益案例信息表[/color][/align][align=center][color=#333333](参考模板)[/color][/align][table][tr][td=4,1,591][align=left]一、单位信息[/align][/td][/tr][tr][td=1,1,95][align=center]单位名称[/align][/td][td=1,1,186] [/td][td=1,1,91][align=center]联系人[/align][/td][td=1,1,220] [/td][/tr][tr][td=1,1,95][align=center]单位地址[/align][/td][td=1,1,186] [/td][td=1,1,91][align=center]联系电话[/align][/td][td=1,1,220] [/td][/tr][tr][td=4,1,591][align=left]二、标准化军民融合工作情况和典型案例[/align][/td][/tr][tr][td=4,1,591][align=left]标准化军民融合案例情况[/align][align=left]1.本单位开展的有关标准化工作;[/align][align=left]2.标准化军民融合案例以及效益(尽可能量化)情况。[/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][align=left] [/align][/td][/tr][tr][td=4,1,591][align=left]三、标准化军民融合建议[/align][align=center] [/align][align=center] [/align][align=center] [/align][align=center] [/align][align=center] [/align][/td][/tr][/table]

  • 【转帖】经济转型、两化融合力助仪器仪表行业发展

    2011年,仪器仪表行业正式进入“十二五”开局之年。在经过过去五年的发展,中国的仪器仪表行业取得了长足进展。而“十二五”期间,仪器仪表行业将会迎来新的发展机遇。    一、经济转型有利于仪器仪表业发展    1)工业化中后期机电制造业地位的相对上升    2)装备制造业结构调整向与仪控紧密结合的中高端发展    3)重视和突出高端设备制造使仪控技术发展再上议事日程    4)“节能减排”、绿色经济、自主创新、新型产业有力推动仪控装备的需求上升和技术发展    二、“两化融合”是中国经济由大变强的重要方针和必经之路,“两化融合”将长期提升对测控装备的需求    1)“两化融合”是时代特色的工业化,是中国特色的信息化    2)工业企业“两化融合”的基础和重要是生产过程信息化,包括:研发设计、生产过程控制、企业管理、市场营销、人力资源开发、新业态培育、企业技术改造;PCS、MES、ERP、PIS、(单机及生产线)MES和ERP;PCS的提升和PIS产业的建立,PIS包括传感器、控制器、伺服系统、离散工业用测试设备,专用仪器测试设备。    三、经济全球化进入新阶段    1)制造业全球化由于受管理复杂度综合成本、市场变化及地域情况的影响,正由集中向分散,再向适度集中演变,而仪控长野的全球化又趋活跃,其中:    A、地域变化:东南亚、墨西哥、中国、中东欧    B、产品变化:由低档向有规模需求的中高档发展    C、模式变化:由组装为主的合资、独资向委托生产的外方为主,再向中方为主经营管理的模式发生变化。

  • 【网络讲堂】PCR技术在临床诊断中的应用,精彩回放中!

    【网络讲堂】PCR技术在临床诊断中的应用,精彩回放中!

    [color=#ff0000][b] 体外诊断(In-Vitro Diagnosis,IVD)[/b][/color]是指在人体外,通过对人体血液、体液、组织等样品进行检测获取人体生物学信息。体外诊断产品及技术广泛应用于临床各阶段,贯穿于初步诊断、治疗方案选择、有效性评价、确诊治愈等疾病诊疗全过程,提供了超过70%的临床诊断信息,因此被比喻为是“医生的眼睛”。近年来,各种新技术、新方法、新应用的兴起和融合,进一步促进了体外诊断仪器、试剂开发应用的更新换代。 为促进检验医师、临床医生、医学及转化医学领域专家和临床检验仪器研发专家间学术与技术交流,仪器信息网网络讲堂将于[color=#ff0000][b]2021年8月2日-5日[/b][/color]举办[color=#ff0000][b]第四届先进体外诊断技术网络会议(iConference on In-Vitro Diagnosis,iCIVD 2021)[/b][/color]。会议依托成熟的网络会议平台,将为广大医学检验工作者、体外诊断行业从业者提供一个突破时间地域限制的免费交流、学习平台,让大家足不出户便能聆听到精彩报告。[img=,690,156]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107291459054645_3917_2507958_3.png!w690x156.jpg[/img][size=24px][color=#ff0000]点击链接或扫描二维码查看回放!!![url]https://insevent.instrument.com.cn/t/ek[/url][/color][/size][img=,160,160]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107291457495480_6169_2507958_3.png!w160x160.jpg[/img]

  • 医学诊断试剂!

    诊断试剂从一般用途来分,可分为体内诊断试剂和体外诊断试剂两大类。多为通过抗原、抗体间反应进行检测的一种试剂。A:体外诊断试剂的分类: 一、按药品进行管理的体外生物诊断试剂包括:   1.血型、组织配型类试剂;   2.微生物抗原、抗体及核酸检测类试剂;   3.肿瘤标志物类试剂;   4.免疫组化与人体组织细胞类试剂;   5.人类基因检测类试剂;   6.生物芯片类;   7.变态反应诊断类试剂。   二、按医疗器械管理的体外试剂包括:   1.临床基础检验类试剂;   2.临床化学类试剂;   3.血气、电解质测定类试剂;   4.维生素测定类试剂;   5.细胞组织化学染色剂类;   6.自身免疫诊断类试剂;   7.微生物学检验类试剂。B:按照医学检验项目,临床诊断试剂大致可分为临床化学检验试剂、免疫学和血清学检测试剂、血液学及细胞遗传学检测试剂、微生物学检测试剂、体液排泄物及脱落细胞的检测试剂、基因诊断试剂等种类。其中以临床化学所占市场份额最大,接近34%;其次为免疫学市场,约占29%。新型免疫诊断试剂和基因诊断试剂是20世纪80年代后期发展起来的,无论技术还是市场,都是目前所有诊断试剂产品中发展最快的。

  • Fc融合蛋白:定义、种类及其在生物医药中的应用

    [font=宋体][b][font=宋体]什么是[/font][font=Calibri]fc[/font][font=宋体]融合蛋白?[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由免疫球蛋白(如[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等)的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段与目标蛋白序列融合而成的新型重组蛋白。通过将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域与其他蛋白质或肽段融合,可以赋予这些蛋白质或肽段新的特性和功能,同时利用[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域的稳定性和免疫系统的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体相互作用,增强融合蛋白的稳定性和半衰期。例如,普通重组[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]的体内半衰期较短,只有[/font][font=Calibri]6.9[/font][font=宋体]分钟,这限制了其在体内的持续作用时间。然而,通过与免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合,重组[/font][font=Calibri]IL-2/Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在体内半衰期延长了近[/font][font=Calibri]700[/font][font=宋体]倍,从而使其能够在体内更长时间地发挥作用。此外,延长半衰期还可以降低药物的剂量和频率,减少潜在的副作用和毒性。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白有哪些?[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由至少两个结构域组成的蛋白,这些结构域由被连接起来的独立基因编码,因此能够作为一个单元被转录和翻译,产生单克隆多肽。现在几乎所有的重组蛋白都是利用融合结构域制备,也被称为[/font][font=宋体]“标签”(参阅重组蛋白标签的完整列表)。因此,融合蛋白又称融合标签蛋白或嵌合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大体上有两种类型的融合蛋白:第一种是由两个蛋白或蛋白亚单位端对端融合,通常由一个[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]连接,第二种是来自两个供体的氨基酸穿插在融合蛋白产物中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白应用:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白最重要的三个用途是:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]作为克隆基因纯化的辅助手段[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]作为报告的表达水平[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]作为组织化学标签,使蛋白质在细胞、组织或生物体中的位置可视化[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白在纯化中可以通过亲和层析简单方便地纯化,如葡萄球菌蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、谷胱甘肽[/font][font=Calibri]-S-[/font][font=宋体]转移酶[/font][font=Calibri](gst)[/font][font=宋体]、麦芽糖结合蛋白[/font][font=Calibri](mbp)[/font][font=宋体]和纤维素结合蛋白。 重组融合蛋白最常用作报告构建体的融合伙伴,包括 β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]半乳糖苷酶、荧光素酶和绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合蛋白中,最多的一类称为荧光蛋白,如绿色荧光蛋白([/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体])、橙色荧光蛋白([/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体])和黄色荧光蛋白([/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体])。 绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP) [/font][font=宋体]等荧光蛋白能够直接观察动态细胞内过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]绿色荧光蛋白([/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体])是一种荧光蛋白,最初是从水母维多利亚发光管中分离出来的。 与荧光素酶不同,[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]具有不需要任何底物、荧光素以及 [/font][font=Calibri]ATP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]O2 [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]Mg2+ [/font][font=宋体]的优势。 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]在被蓝光或紫外线激发时会发出绿光,在许多情况下可用于活的、完整的细胞和生物体,从而确保 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]作为自发荧光蛋白的功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白标签[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合标签中,既有短序列(如[/font] [font=Calibri]PolyHis[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PolyArg[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Streptag [/font][font=宋体]等),也有大蛋白([/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP [/font][font=宋体]等)。 在许多情况下,短序列不会影响分子的三级结构及其生物学特性,而大融合分子更常用于增强所需蛋白质的溶解度。 与短序列标签不同,需要从重组构建体中去除大的融合标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]有许多融合标签,既包含经过充分验证的标签,也包含最近开发的具有各种特性和不同优缺点的标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font]

  • 【欢迎讨论】His融合蛋白纯化中常见问题?

    【欢迎讨论】His融合蛋白纯化中常见问题?

    His-tag是专门设计用于重组蛋白质的纯化,与其他标签相比有很多明显优势,是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。Tag虽然简单,但是做过的人都知道,融合蛋白的纯化并非简单。1、纯化介质有10多种,应该如何选择?2、洗脱的标签蛋白杂带较多是什么原因?如何优化?3、甚至洗脱产物中没有目标蛋白原因为何?策略如何?欢迎大家互相交流讨论啊!His-tag 选择[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/10/200810061637_111174_1613111_3.jpg[/img]

  • 生物诊断试剂与免疫阻化抗体试剂

    生物诊断试剂与免疫阻化抗体试剂

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/03/201303061749_428839_2692016_3.jpgwww.wolsen.net生化试剂,DPPH,生物阻化抗体试剂【导语】生物诊断试剂的发展虽然还有很长的路要走,但在现今生物试剂市场中,除了我们熟悉的酶联诊试剂类,其他类它成倍数的需求,证明了它涵盖面越来越多,涵盖了很多曾经未涉及的领域。生物诊断试剂,现今分为四大类:酶联诊断试剂,抗体诊断试剂,生物传感器以及DNA探针。当然,它还有其他的小类,这里就不详细一一累赘。在生物诊断试剂里,大众最陌生的恐怕就是DNA探针。DNA探针是如今检测疾病的最快捷的方式。这种大众看似很新锐的东西,用处却是十分令人称赞的。用传统模式检测出病毒,得需要几天几周,甚至上月,而它却能短短一小时内检测出病毒。它生活的延展性:它的出现,让我们引用水中的病毒检测变更加快捷起来。当然,饮用水中病毒检测只是它的一个部分,其他的行业领域,也有它重要的作用,例如中种鉴定之类。

  • 蛋白标签类型有哪些?融合标签的优缺点介绍

    [font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]是指与靶蛋白相连的融合蛋白(参阅什么是融合蛋白)的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具,可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化,并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]根据不同的应用,融合标签主要分为三类:表位标签、亲和标签和荧光标签。[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①表位标签往往是短肽序列,可用于免疫学应用,如[/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②亲和标签一般较长,可用于蛋白纯化或增加蛋白溶解度。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③荧光标签可用于活细胞和死细胞,并广泛用于影像学研究,如细胞定位和共表达实验。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]标签揭秘选择[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选择将标签融合到目标蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端,很大程度上取决于蛋白本身:蛋白的折叠方式,以及您选择的末端是否有功能要求。例如,如果[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端在蛋白内部折叠,那么您收到融合蛋白信号的可能性非常小;或者,如果蛋白在标签融合末端进行翻译后剪切,那么标签将从目标蛋白中移除。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果有资源或准备开展新型实验,最好同时克隆[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端标签的构造,从而确定最佳选择。一研究小组发现,与[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的标签融合蛋白相比,更多的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端融合蛋白定位于目标亚细胞腔隙。但是,需要强调的是,虽然[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端标签蛋白的定位和表现往往符合预期,但并不是始终可以预测。融合蛋白定位是否正确,可通过免疫荧光进行检测;免疫印迹有助于确认融合蛋白的大小是否正确并以预期的水平表达,免疫共沉淀有助于评估融合蛋白与已知底物的相互作用方式。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合标签优缺点:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点:无需特异性蛋白即可分离目标蛋白;有时可在纯化后裂解标签;可将多个标签连接到同一蛋白上,增加其功能;避免免疫沉淀中出现抗体干扰;荧光标签可用于显示活细胞中的蛋白;多种标签供选择,适合不同的应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点:某些标签可能会影响蛋白功能;可能需要多次尝试才能找到最佳标签位置,导致实验成本增加。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州蛋白标签页:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

  • 【分享】GBZ 17-2002 职业性镉中毒诊断标准

    GBZ 17-2002 职业性镉中毒诊断标准前言 本标准的第6.1条为推荐性的,其余为强制性的。 根据《中华人民共和国职业病防治法》制定本标准。自本标准实施之日起,原标准GB7803-1987与本标准不一致的,以本标准为准。 在接触镉及其化合物的职业活动中可发生急性和慢性中毒。为保护接触者的身体健康,有效地防治镉中毒,曾发布GB7803-1987。 修订后的标准将急性镉中毒分为轻、中、重三级,以指导临床急救工作;将慢性镉中毒尿镉和尿β2-微球蛋白诊断值改为以肌酐校正的一种单位表示,删去目前不常用的尿蛋白电泳检查指标,增加了尿视黄醇结合蛋白测定指标,使慢性轻度镉中毒的诊断更加合理和容易掌握。当长期接触镉化合物的工人尿β2微球蛋白和(或)视黄醇结合蛋白异常增高时,摒除其他病因后,可诊断为轻度镉中毒;当出现慢性肾功能不全,可伴有骨质疏松症、骨质软化症时,则诊断为慢性重度中毒。 本标准的附录A是资料性附录。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准由中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所负责起草,参加起草单位有北京大学第三医院、新乡市职业病防治研究所和株洲冶炼厂职工医院。 本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。职业性镉中毒诊断标准Diagnostic Criteria of Occupational Cadmium PoisoningGBZ17-2002 职业性镉中毒主要是吸入镉化合物烟、尘所致的疾病。急性中毒以呼吸系统损害为主要表现;慢性中毒引起以肾小管病变为主的肾脏损害,亦可引起其他器官的改变。1 范围 本标准规定了职业性镉中毒的诊断及处理原则。 本标准适用于因职业接触镉化合物烟、尘而发生的急性和慢性中毒,本标准慢性中毒部分在非职业中毒的诊断与治疗中亦可参照执行。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GBT16180 职工工伤与职业病致残程度鉴定 GBZ73 职业性急性化学物中毒性呼吸系统疾病诊断标准 GBZ48 金属烟热诊断标准 WS/T31 尿中镉的火焰原子吸收光谱法 WS/T32 尿中镉的石墨炉原子吸收光谱测定方法 WS/T33 尿中镉的微分电位溶出测定方法 WS/T34 血中镉的石墨炉原子吸收光谱测定方法 WS/T97 尿中肌酐分光光度测定方法3 诊断原则 根据短时间高浓度或长期密切的职业接触史,分别以呼吸系统或肾脏损害为主的临床表现和尿镉测定,参考现场卫生学调查资料,经鉴别诊断排除其他类似疾病后,可作出急性或慢性镉中毒的诊断。4 观察对象 尿镉测定连续两次在5μmol/mol肌酐(5μg/g肌酐)以上,尚无慢性镉中毒的临床表现。5 诊断及分级标准5.1 慢性镉中毒5.1.1 慢性轻度中毒 除尿镉增高外,可有头晕、乏力、嗅觉障碍、腰背及肢体痛等症状,实验室检查发现有以下任何一项改变时,可诊断为慢性轻度镉中毒。 a)尿β2-微球蛋白含量在9.6μmol/mol肌酐(10OOμg/g肌酐)以上; b)尿视黄醇结合蛋白含量在5.1μmol/mol肌酐(1000μg/g肌酐)以上。5.1.2 慢性重度中毒 除慢性轻度中毒的表现外,出现慢性肾功能不全,可伴有骨质疏松症、骨质软化症。5.2 急性镉中毒 5.2.1 急性轻度中毒 短时间内吸入高浓度氧化镉烟尘,在数小时或1天后出现咳嗽、咳痰、胸闷等,两肺呼吸音粗糙,或可有散在的干、湿啰音,胸部X射线表现为肺纹理增多、增粗、延伸,符合急性气管-支气管炎或急性支气管周围炎。5.2.2 急性中度中毒 具有下列表现之一者: a)急性肺炎; b)急性间质性肺水肿。5.2.3 急性重度中毒 具有下列表现之一者: a)急性肺泡性肺水肿; b)急性呼吸窘迫综合征。6 处理原则6.1 治疗原则6.1.1 慢性中毒 以对症支持治疗为主。6.1.2 急性中毒 应迅速脱离现场,保持安静及卧床休息。急救原则与内科相同,视病情需要早期给予短程大剂量糖皮质激素。6.2 其他处理6.2.1 观察对象 应予密切观察,每年复查一次。6.2.2 慢性镉中毒 应调离接触镉及其他有害作业。轻度中毒患者可从事其他工作;重度中毒患者应根据病情适当安排休息或全休。需要进行劳动能力鉴定者,按GB/Tl6180处理。6.2.3 急性镉中毒 轻度中毒患者病情恢复后,一般休息1-2周即可工作。重度中毒患者休息时间可适当延长。7 正确使用本标准的说明见附录A(资料性附录)。附录A(资料性附录)正确使用本标准的说明A.1 本标准适用于各种职业接触镉及其化合物的作业,如金属镉及含镉合金冶炼、焊接、镍-镉电池制造、颜料制造、金属表层镀镉等。经胃肠道摄入所致慢性镉中毒亦主要引起肾脏损害,故本标准的慢性中毒部分在非职业中毒的诊断和治疗中亦可参考使用。A.2 接触氧化镉烟雾引起金属烟热的诊断和处理可参考GBZ48其应与急性镉中毒引起的化学性气管-支气管炎或支气管周围炎相鉴别,并要警惕发生化学性肺炎和肺水肿参见GBZ73。A.3 急性中度和重度镉中毒患者可出现肝、肾损害,但在肝、肾损害前一般已有明显的肺损害表现,故肝、肾损害未列为急性中毒诊断及分级的依据。A.4 尿镉主要与体内镉负荷量及肾镉浓度有关,可用作职业性镉接触和镉吸收的生物标志物。据调查,当尿镉达5-1Oμmol/mo1肌酐时,肾小管功能异常的患病率可达5%-20%,故以5μmol/mol肌酐的尿镉作为现职工人慢性镉中毒的诊断下限值。慢性镉中毒时,尿镉通常超过此值,脱离接触较久者可有所降低,但应高于当地正常参考值上限。A.5 尿镉测定有火焰原子吸收光谱法(WS/T31)、石墨炉原子吸收光谱测定方法(WS/T32)、微分电位溶出测定方法(WS/T33)等,本标准未作强行规定,各地可根据条件,任选一种。A.6 血镉主要反映近期接触量。由于尚不能建立镉的近期吸收量与血镉浓度之间的定量关系,血镉与肾功能异常的剂量一反应关系资料远较尿镉少,因此,未将血镉列为本标准慢性镉中毒的诊断指标。但在急性镉中毒时,血镉增高可作为过量接触镉的佐证。血镉测定的石墨炉原子吸收光谱方法可参考WS/T34。A.·7 慢性镉中毒除表现为肾脏损害外,亦可累及其他器官,但较少见,且缺乏特异性,故诊断依据以肾脏损害为主。A.8 在慢性镉中毒的肾脏损害中,公认的早期改变主要是近端小管重吸收功能减退,故本标准以肾小管性蛋白尿为诊断起点。目前诊断的主要依据是尿β2-微球蛋白、视黄醇结合蛋白筹低分子量蛋白排出增多。测定尿β2-微球蛋白和视黄醇结合蛋白主要有放射免疫分析法和酶联免疫分析法两种,各地可根据自身条件,任选一种。A.9 尿镉、尿β2-微球蛋白和视黄醇结合蛋白测定多用点采样标本,易受尿液稀释度的影响,故上述尿中被测物的浓度均需用尿肌酐(测定方法可参见WS/T97)校正。对肌酐浓度小于0.3g/L或大于3.0g/L的尿样应重新留尿检测。A.l0 病情发展到慢性肾功能不全,可伴有骨质疏松、骨质软化时,已属重度中毒,其诊断依据与其他有关临床学科相同。A.11 慢性镉中毒应注意与其他各种原因引起的肾脏疾病、药物及其他工业毒物中毒、溢出性蛋白尿、Wilson病、特发性Fanconi综合征、营养不良所致的骨质疏松和软化等疾病相鉴别。A.l2 急性和慢性镉中毒均以对症支持治疗为主。由于依地酸钙钠驱镉效果不显著,在慢性中毒时尚可引起镉在体内重新分布后,使肾镉蓄积量增加、肾脏病变加重,因而目前多不主张用依地酸钙钠等驱排药物。

  • IVD行业报告之分子诊断微流控

    分子诊断分子诊断是采用分子生物学的理论和技术,通过直接探查核酸的存在状态或缺陷,从核酸结构、复制、转录或翻译水平分析核酸的功能,从而对人体状态与疾病做出诊断的方法。分子诊断是预测诊断的主要方法,既可以进行个体遗传病的诊断,也可以进行产前诊断。它检测的基因有内源性(即机体自身的基因)和外源性(如病毒、细菌等)两种,前者用于诊断基因有无病变,后者用于诊断有无病原体感染。生物芯片应用前景广阔生物芯片技术是近年发展起来的分子生物学与微电子技术相结合的核酸分析检测技术,是运用分子生物学、基因信息、分析化学等原理进行设计,以硅晶圆、玻璃或高分子为基材,配合微机电自动化或其他精密加工技术,所制作的高科技元件,具有快速、精确、低成本之生物分析检验能力。生物芯片样品处理能力强、用途广泛、自动化程度高等特点,具有广阔的应用前景和商业价值,是分子诊断领域的一大热点。微流控芯片微流控芯片整合了核酸提取、扩增及检测过程,反应过程处于封闭的环境中,减少了操作人员的负担及污染的可能性,实现了随时随地快速检测的需求,为医疗检验和疾病防控带来巨大的帮助。微流控芯片技术在分子诊断中已经有非常好的应用,微流控芯片技术将会是分子诊断POCT化的重要发展方向。风险提示风险在于微流控芯片技术是结合微机电加工、生命科学、化学合成、分析仪器及环境科学等许多领域学科的新产品,技术要求高,开发周期较长;另外测序技术的不断发展,实现高通量的检测,可能会对现有基于PCR扩增的微流控技术带来冲击。

  • Fc融合蛋白结构、功能、与优势

    [font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白是一种由免疫球蛋白(如[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等)的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段与目标蛋白序列融合而成的新型重组蛋白。通过将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域与其他蛋白质或肽段融合,可以赋予这些蛋白质或肽段新的特性和功能,同时利用[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域的稳定性和免疫系统的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体相互作用,增强融合蛋白的稳定性和半衰期。例如,普通重组[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]的体内半衰期较短,只有[/font][font=Calibri]6.9[/font][font=宋体]分钟,这限制了其在体内的持续作用时间。然而,通过与免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合,重组[/font][font=Calibri]IL-2/Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在体内半衰期延长了近[/font][font=Calibri]700[/font][font=宋体]倍,从而使其能够在体内更长时间地发挥作用。此外,延长半衰期还可以降低药物的剂量和频率,减少潜在的副作用和毒性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]结构域[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白的主要特点是含有[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段,这也是影响其理化性质和生物学活性的关键因素。类似于单克隆抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段,融合蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段可以延长功能蛋白在血浆中的半衰期,增加分子的稳定性,并且能够特异性地结合体内的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体,发挥相应的生物学功能。此外,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段还可以特异性地结合[/font][font=Calibri]protein A[/font][font=宋体],有利于简化[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白的纯化过程,对相关生物制品的研发制备具有重要意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白功能[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]功能蛋白能特异性地识别某个靶点分子,并决定了融合蛋白的药理活性。功能蛋白的种类很多,可以是能结合内源性受体(或配体)的可溶性配体(或受体),或其他需要延长半衰期的活性物质,如细胞因子、毒素、酶等。功能蛋白的作用各不相同,主要包括抗炎性感染、抗病毒感染、抗瘤免疫、抗移植排斥、治疗痛觉过敏以及自身免疫性疾病的治疗等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri][url=http://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins]Fc[/url][/font][font=宋体][url=http://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins]融合蛋白[/url]的优势[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①延长半衰期:[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在血浆内有较长的半衰期。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与新生[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体([/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体])的结合并呈[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]依赖性:在[/font][font=Calibri]pH 7.4[/font][font=宋体]的生理条件下,[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]不结合;在细胞内涵体[/font][font=Calibri]pH 6.0~6.5[/font][font=宋体]的酸性条件下,两者结合,从而避免了融合蛋白在细胞内被溶酶体等快速降解。另外,[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段能够增大分子体积,不易被肾小球滤过,也从一定程度上延长了半衰期。这就是[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白长效原理。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②增强稳定性:[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白通过[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]铰链区的二硫键连接形成稳定的二聚体。如果对二硫键进行基因工程改造,还可以使[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白形成更稳定的六聚体复合物。另外,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域可以独立折叠,确保分子的稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③发挥生物学效应:[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白可以结合不同的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体,包括[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ [/font][font=Calibri](CD64)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ [/font][font=Calibri](CD32)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅲ [/font][font=Calibri](CD16)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ和[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体],从而介导不同的生物学功能,如炎症反应、抗体依赖性细胞毒性([/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体])和补体依赖性细胞毒性([/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体])、调节细胞因子分泌等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可参看:[/font][font=Calibri]http://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font]

  • 2014中国(上海)诊断试剂和设备展览会

    2014中国(上海)诊断试剂和设备展览会 同期同地举办2014 中国国际生物技术和仪器设备博览会! 2014年4月24-26日 上海世博展览馆 〓组织机构〓上海市食品监督管理局上海市生物医药行业协会上海医学会检验医学分会上海现代国际展览有限公司(以上排名不分先后)〓新兴市场不容小觑〓作为生物技术发展的产物,医学体外诊断试剂也在不断随着生物技术的快速发展不断拓宽其种类。随着全球经济的发展,人们保健意识的提高,大部分国家医疗保障政策的完善,全球卫生医疗得到了快速发展,从而带动体外诊断行业快速发展。体外诊断试剂产业已成为当今世界上最活跃、发展最快的行业之一。国外诊断试剂市场年增约为5%左右,而受益于新医改和国家的扶持政策,未来我国的诊断试剂市场年增长速度可以达到20%左右,随着人们生活水平的提高和新医改的持续推进,我国诊断试剂的市场规模必然会进一步扩大。中国(上海)诊断试剂和设备展览会(DIAGNOSTIC CHINA)历经5年的运作与发展,现已成为诊断领域有着重要影响的品牌展会之一。历届部分国内外知名参展企业有比利时展团、罗氏、复星、科华、国药化试、西格玛奥德里奇、益思美诠、金标、奥普等等。展会希望能为业界同仁提供这样一个舞台,在这里可以您可以把握最全的行业咨讯和发展信息,并以全新的战略视角直击政策、学术和产业前沿,以此推动国家和企业在该领域的不断创新和高速发展,打造一站式采购平台。〓展品范围〓体外诊断试剂(盒)一、临床血液学和体液学检验试剂血液学检验试剂(盒),组织配型类试剂(盒),尿液检验试剂(盒)、试纸,粪便检验试剂(盒)、试纸,其他体液及排泄物检验试剂(盒)二、临床化学检验试剂无机离子检验试剂(盒),蛋白质检验试剂(盒),糖类检验试剂(盒)、试纸,酶类检验试剂(盒),非蛋白含氮类化合物检测试剂(盒),脂类检验试剂(盒),血气与电解质分析试剂(盒),内分泌检验试剂(盒)三、临床免疫学检验试剂传染病免疫学诊断检验试剂(盒),肿瘤标志物类试剂(盒),细胞免疫检验测定试剂(盒)四、微生物学检验试剂培养基,微生物学检验类试剂(盒),微生物抗原、抗体及核酸检测类试剂(盒),药敏试剂五、组织细胞学检验试剂细胞、组织化学染色剂类试剂,免疫组化与人体组织细胞类试剂(盒)六、变态反应、自身免疫诊断检验试剂(盒)七、遗传性疾病检验试剂八、分子生物学检验试剂分子诊断试剂(盒)。人类基因检测类试剂(盒)。生物芯片类试剂(盒)临床检验设备一、血液分析系统二、生化分析系统三、免疫分析系统四、细菌分析系统五、尿液分析系统六、血气分析系统七、微生物分析系统 〓四大展会亮点〓设立分子诊断专区根据最新的研究报告,全球体外诊断市场预计在2012-2014年有9%左右的增长。目前,体外诊断市场的特点是各种新技术的层出不穷,例如分子诊断。它将是推动的全球市场在未来一段时间内快速增长的一个非常重要的领域。DIAGNOSTICCHINA为分子诊断企业设立专区,迎合市场需求,帮助企业寻找合作商机。封闭式高峰论坛+专业性展览展会同期举办检验医学高峰论坛。往届的会议上,复旦大学附属中山医院检验科主任潘柏申教授、上海市临床检验中心常务副主任王华梁教授等顶级专家引发头脑风暴,促进中国体外诊断产业技术创新的实践与思考。通过此形式,您将有机会一对一深度了解体外诊断试剂 / 设备 / 软件及其他方案提供商的最新技术。两展呼应,展会联动本次展览会将与BI

  • 植物病害诊断仪是什么仪器

    [size=16px]  植物病害诊断仪是什么仪器  植物病害诊断仪是一种农业检测仪器,主要用于检测各类植物病害。以下是关于植物病害诊断仪的详细介绍:  定义与功能:  植物病害诊断仪又称植物病害快速诊断仪或植物病毒检测仪,它依据真菌特性检测技术标准而研发制造,能够准确诊断植物染病类型,包括细菌、真菌和病毒等。  它不仅可以帮助农业生产者快速确定所用农药的品种,还能提早发现病害,为农业生产提供科学依据。  应用领域:  植物病害诊断仪适用于各种农作物、植物、蔬菜水果、茶叶等领域,具有广泛的适用性。  作用:  提早发现病害:通过快速检测,农业生产者可以及时掌握病害情况,采取相应防治措施,有效避免病害扩散和损失扩大。  提高作物品质:通过及时有效的病害防治,农业生产者可以减少农药使用量和使用频率,降低农药残留,提高农作物的品质和安全性。  实现科学种植:植物病害诊断仪可以帮助农业生产者更好地了解农作物的生长状况和健康状况,为科学种植提供数据支持,提高农业生产的管理水平。  工作原理:  植物病害诊断仪采用了生物物理学方法,通过电导和光衍射等方法来分辨出病害的种类及类型。  使用方法:  使用时,需要按照说明书的步骤进行仪器安装、打印纸安装、启动仪器等操作。  在测试过程中,需要截取植物的根、茎、叶剪碎并研碎,然后与指示液混合后涂抹在指示条上,放入测试槽中进行检测。  注意事项:  在使用过程中,需要保持仪器的清洁,避免弄脏、划伤或用化学溶剂清洗平台上圆形白色部分。  仪器在搬运过程中需要防止强力冲击、雨淋和暴晒,存放时应选择相对湿度不超过80%、无腐蚀性气体和通风良好的室内。  综上所述,植物病害诊断仪是一种功能强大、使用方便的农业检测仪器,对于提高农业生产效益和保障食品安全具有重要意义。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/06/202406061031179232_7566_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]

  • 【分享】GBZ 5-2002 工业性氟病诊断标准

    GBZ 5-2002 工业性氟病诊断标准前 言 本标准的第5.1条为推荐性的,其余为强制性的。 根据《中华人民共和国职业病防治法》制定本标准。自本标准实施之日起,原标准GB3234—1982与本标准不一致的,以本标准为准。 在职业活动中长期接触过量的无机氟化合物可损害接触工人的健康,引起以骨骼系统损害为主的全身性疾病,为保护劳动者的身体健康,制定本标准。 本标准的制定以骨骼改变的程度和累及的范围作为诊断分级的依据。 本标准的附录A是资料性附录,附录B、附录C是规范性附录。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准由湖南省劳动卫生研究所、湖南省冶金防护所、四川大学华西医学中心职业病医院负责起草。 本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。工业性氟病诊断标准 Diagnostic Criteria of Industrial Fluorosis GBZ5-2002 工业性氟病是由于工作中长期接触过量无机氟化物所致、以骨骼改变为主的全身性疾病。 骨骼改变可由X射线检查发现。最先出现于躯干骨尤其是骨盆和腰椎,继而桡、尺骨和胫、腓骨亦可受累。骨密度增高,骨小梁增粗、增浓,交叉成网织状,呈“纱布样”或“麻袋纹样”,严重者如“大理石样”。桡骨、尺骨、胫骨、腓骨、骨盆和腰椎等处的骨膜、骨间膜、肌腱和韧带出现大小不等、形态不一(萌芽状、玫瑰刺状或烛泪状等)的钙化或骨化等骨周改变。在临床上,眼、上呼吸道和皮肤刺激症状和慢性炎症出现较早,尿氟含量往往超过当地正常值。腰背和四肢疼痛、神经衰弱综合征以及消化道症状(食欲不振、恶心、呕吐和上腹痛等)比较常见。严重者可有关节运动受限、骨骼畸形和神经受压症状。1 范围 本标准规定了工业性氟病诊断标准及处理原则。本标准适用于工业性氟病诊断及处理。2 诊断原则 应根据密切的职业接触史和骨骼X射线改变,参考临床症状及化验检查等,进行综合分析,排除其它疾病,方可诊断。3 观察对象 骨质密度在正常范围内,骨小梁稍有增粗,骨周有轻微改变。4 骨骼X射线改变的分期 4.1 I期骨质密度增高,骨小梁增粗、增浓,交叉呈“纱布样”表现;桡、尺骨或胫、腓骨骨膜、骨间膜有明确的钙化或骨化。在骨质或骨周改变中,如有一项显著而其它改变轻微者,亦可诊断。4.2 Ⅱ期除躯干骨外其它部位亦可受累,骨质密度明显增高,骨小梁明显增粗,呈“麻袋纹样”表现;骨周改变较为明显和广泛。4.3 Ⅲ期全身大部分骨骼受累。骨质密度显著增高,骨小梁模糊不清如“大理石样”;长骨皮质增厚,胸腔变窄。骨周改变更为明显和广泛,椎体间可有骨桥形成。5 处理原则 5.1 治疗原则可适当加强营养,补充维生素类,并给予对症治疗。5.2 其他处理5.2.1 观察对象定期复查,不需要特殊处理。5.2.2 I期患者一般不必调离氟作业。5.2.3 Ⅱ期及Ⅲ期患者调离氟作业,根据机体功能状态安排适当工作或休息。6 正确使用本标准的说明 见附录A(资料性附录),附录B、C(规范性附录) 附录A (资料性附录) 正确使用本标准的说明 A.1 本标准的适用范围本标准只适用于氟及其无机化合物所引起的疾病,不适用于有机氟化物所引起的疾病。A.2 本病是由于长期接触过量无机氟化物所致,故必须有在高浓度环境下工作多年的历史,发病年限一般在10年以上,劳动条件特别恶劣的特殊情况,接触3年者也有发病。A.3 骨骼X射线改变是本病诊断分期的主要依据。由于骨骼X射线改变仅具有相对的特异性,故必须排除具有类似骨骼X射线改变的其它疾病,如地方性氟病、类风湿性关节炎、石骨症、骨转移瘤和肾性骨病等。A.4 本病的临床表现较为复杂,几乎累及每一个器官。这些症状虽非特异,但却可先于骨骼改变或与骨骼改变同时存在,是发现疾病的重要线索,在综合分析中能提供有力佐证。诊断时应参考临床症状,但因其与骨骼X射线改变多不平行,且难以明确分期,故诊断与分期主要以骨骼X线改变为依据。A.5 尿氟检查结果不规律,波动性大,除受饮水和食物影响外,主要原因是留尿时间不一致。氟作业工人尿氟上班后随接触情况而升降,休息24小时后,基本上恢复到原来水平,故留脱离接触24小时后的班前尿较能反映工人体内的实际水平。考虑到尿氟的自然波动,应每周留一次,连续三次以上,取其平均值作为衡量尿氟高低的依据。附录B (规范性附录) 尿中氟化物的选择性电极测定法 B.1 原理 氟电极法是应用电位法测定溶液中的氟离子活度。氟化镧单晶膜是电极的敏感元件,它对氟离子具有选择性。由于膜内外氟离子浓度不同而在膜两边产生电位差,称之为膜电位(Em)。膜电位的大小与膜内外氟离子活度有关,其关系可用能斯特(Nernst)方程式来表示。当膜内溶液的氟离子活度不变时,则电位与膜外被测溶液的氟离子活度的关系,可用下式表示: Em=2.303×(RT/nF)×1ogaF- 式中:R—气体常数,等于8.3148焦耳/度.克分子; T—绝对温度,等于273十溶液温度℃; N—离子电荷数,就F-而言,n=-1; F—法拉第常数,等于96488库伦/克当量; aF-—氟离子活度,等于氟离子浓度(cF-)与活度系数( g )的乘积,即aF-=g.cF-。测试时,氟电极与饱和甘汞电极组成化学电池,电池的电动势E=Eg-Em,式中Eg为饱和甘汞电极 (参考电极)的电位。它是一个常数。所以电动势E与1ogaF-成线性关系。上式中2.303RT/nF即为直线的斜率(又称级差或能斯特系数)。在25℃时,对负1价氟离子来说,它等于-59.16毫伏。因此,测定电动势E值,就可以得到相应的氟离子浓度。B.2 仪器 a)氟离子选择性电极:建议用长沙半导体材料厂生产的CSB—F—1型产品。 b)离子活度计或精密酸度计,或酸度计与高电势电位差计联用。 c)磁力搅拌器。[

  • 植物细胞原生质体制制备与融合

    植物细胞原生质体制制备与融合2006-11-20 17:14植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示,逐渐将眼光转向细胞融合,试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。1937年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。196O年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶,成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体,开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备(1)取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强,再生与分生比例较高。常用的外植体包括:种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗2~3次,然后浸人 70%酒精消毒后,再放进 3%次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次,并用无菌滤纸吸干。(2)酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液:反应液应是一种PH值在5·5~5·8的缓冲液,内合纤维素酶0.3%~3.0%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等,②酶解:除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃~30℃,2~4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标,说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应,避免脆弱的原生质体受到更多的损害。(3) 分离 在反应液中除了大量的原生质体外,尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取200~400目的不锈钢网或尼龙布j叭i过滤除渣,也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。(4) 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂,应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤2~4次。 (5) 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁,此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中,则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察,残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测,基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外,尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合(1)化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器,试剂易于得到,因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇(PEG)纳合成钙高pH诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法(在无菌条件下进行):按比例混合双亲原生质体-----滴加 PEG溶液,摇匀,静置----滴加高钙高pH值溶液,摇匀,静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。(2)物理法诱导融合 1979年Senda等发明了微电极法诱导细胞融合。1981年Zi。。mann等提出了改进的平行电极法,现简介如下:将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后,插入微电极,接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲,则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂,作用条件比较温和,而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当,亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因,要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近,有人提出以X射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤,融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移;致死量处理后合u可能产生没再仅体万染色体w划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法,大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型.2) 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体,发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3) 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成,可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种,某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4) 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或DNA片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞,一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养(液体或固体),再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞:若一方细胞大,另一方细胞小,则大。小细胞融合的就是杂合细胞;若~方细胞基本无色,另一方为绿色,则自绿色结合的细胞是杂合细胞;如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征,则可作为识别杂合的标志;发现h述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出,移置再牛培养基培养。(2)以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信,但实验者有时会受到仪器的限制,工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补:不同基山叨的白化突变株出aBxAh,可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补:甲细胞株缺外源激素A不能生长,乙细胞株需要提供外源激素B才能生长,则甲株与乙株融合,杂合细胞在不含激素A、B的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选:假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性(如抗卡那霉素),则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选:根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点,用它处理受体原生质体,只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复,等等。 (3)采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株,可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性(RFLP,见8.2.2.2)和随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。(4)根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。

  • 生物技术、生命科学与诊断馆全新亮相analytica China 2014

    近年来,生物技术已成为当今世界高技术发展最快的领域之一,基因组学、蛋白质组学、干细胞、生物制药等前沿生物技术被广泛应用于医药、环境、食品、能源等重要领域,对提高人类健康水平、改善环境、提高农业与工业的产量与质量等问题上发挥着重要作用。与此同时,生物技术的快速发展也带动了体外诊断试剂的应用与开发,并不断促进其拓宽种类。随着国家医疗保障政策的完善,以及人们保健意识的提高,体外诊断试剂产业已成为当今世界上最活跃、发展最快的行业之一。 慕尼黑上海分析生化展(analytica China)是中国乃至亚洲最大的分析、实验室技术、诊断和生化技术领域的专业博览会,自2002年首次登陆中国,每两年在上海举办一次,至今已成功举办六届。2014年9月24-26日,第七届慕尼黑上海分析生化展(analytica China 2014)将在上海新国际博览中心N1、N2和N3馆隆重召开。本届展会将紧密把握现代生物技术与生命科学领域的发展热点,特设生物技术、生命科学与诊断展区,旨在为行业企业与用户提供一个更广泛、更深入交流与合作的良好平台。 analytica China 2014预计将吸引来自超过20个国家及地区约700家中外展商,展示面积将达30,000平方米。其中“生物技术、生命科学与诊断馆”展示面积约10,000平方米,目前已参展企业包括:Life technologies、Thermo Fisher Scientific、Eppendorf、BRAND、GE Healthcare、Hamilton、Tecan、Roche罗氏、Abcam、梅里埃、3M、蔡司、Pall、Merk Millipore、博奥、Tedia、Corning等等。众多国内外知名企业将集中展示生命科学领域最先进的仪器设备、生化试剂,诊断仪器和试剂、耗材配件和技术服务等产品,是最新生物技术方法和系统解决方案的交流盛会。同时该展区内将专门设置“技术服务专区”,也将是展会的一大亮点和特色之一。 随着展会规模的不断壮大,展会质量与专业化程度也越来越高。安捷伦科技(中国)有限公司全球副总裁,大中华区总经理霍丰先生对展会[size=10.0pt

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    近年来,生物技术已成为当今世界高技术发展最快的领域之一,基因组学、蛋白质组学、干细胞、生物制药等前沿生物技术被广泛应用于医药、环境、食品、能源等重要领域,对提高人类健康水平、改善环境、提高农业与工业的产量与质量等问题上发挥着重要作用。与此同时,生物技术的快速发展也带动了体外诊断试剂的应用与开发,并不断促进其拓宽种类。随着国家医疗保障政策的完善,以及人们保健意识的提高,体外诊断试剂产业已成为当今世界上最活跃、发展最快的行业之一。 慕尼黑上海分析生化展(analytica China)是中国乃至亚洲最大的分析、实验室技术、诊断和生化技术领域的专业博览会,自2002年首次登陆中国,每两年在上海举办一次,至今已成功举办六届。2014年9月24-26日,第七届慕尼黑上海分析生化展(analytica China 2014)将在上海新国际博览中心N1、N2和N3馆隆重召开。本届展会将紧密把握现代生物技术与生命科学领域的发展热点,特设生物技术、生命科学与诊断展区,旨在为行业企业与用户提供一个更广泛、更深入交流与合作的良好平台。 analytica China 2014预计将吸引来自超过20个国家及地区约700家中外展商,展示面积将达30,000平方米。其中“生物技术、生命科学与诊断馆”展示面积约10,000平方米,目前已参展企业包括:Life technologies、Thermo Fisher Scientific、Eppendorf、BRAND、GE Healthcare、Hamilton、Tecan、Roche罗氏、Abcam、梅里埃、3M、蔡司、Pall、Merk Millipore、博奥、Tedia、Corning等等。众多国内外知名企业将集中展示生命科学领域最先进的仪器设备、生化试剂,诊断仪器和试剂、耗材配件和技术服务等产品,是最新生物技术方法和系统解决方案的交流盛会。同时该展区内将专门设置“技术服务专区”,也将是展会的一大亮点和特色之一。 随着展会规模的不断壮大,展会质量与专业化程度也越来越高。安捷伦科技(中国)有限公司全球副总裁,大中华区总经理霍丰先生对展会[size=10.0pt

  • 植物细胞原生质体制制备与融合

    植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示,逐渐将眼光转向细胞融合,试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。1937年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。196O年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶,成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体,开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备(1)取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强,再生与分生比例较高。常用的外植体包括:种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗2~3次,然后浸人 70%酒精消毒后,再放进 3%次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次,并用无菌滤纸吸干。(2)酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液:反应液应是一种PH值在5·5~5·8的缓冲液,内合纤维素酶0.3%~3.0%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等,②酶解:除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃~30℃,2~4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标,说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应,避免脆弱的原生质体受到更多的损害。(3) 分离 在反应液中除了大量的原生质体外,尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取200~400目的不锈钢网或尼龙布j叭i过滤除渣,也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。(4) 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂,应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤2~4次。 (5) 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁,此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中,则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察,残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测,基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外,尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合(1)化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器,试剂易于得到,因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇(PEG)纳合成钙高pH诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法(在无菌条件下进行):按比例混合双亲原生质体-----滴加 PEG溶液,摇匀,静置----滴加高钙高pH值溶液,摇匀,静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。(2)物理法诱导融合 1979年Senda等发明了微电极法诱导细胞融合。1981年Zi。。mann等提出了改进的平行电极法,现简介如下:将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后,插入微电极,接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲,则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂,作用条件比较温和,而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当,亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因,要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近,有人提出以X射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤,融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移;致死量处理后合u可能产生没再仅体万染色体w划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法,大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型.2) 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体,发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3) 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成,可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种,某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4) 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或DNA片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞,一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养(液体或固体),再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞:若一方细胞大,另一方细胞小,则大。小细胞融合的就是杂合细胞;若~方细胞基本无色,另一方为绿色,则自绿色结合的细胞是杂合细胞;如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征,则可作为识别杂合的标志;发现h述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出,移置再牛培养基培养。(2)以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信,但实验者有时会受到仪器的限制,工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补:不同基山叨的白化突变株出aBxAh,可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补:甲细胞株缺外源激素A不能生长,乙细胞株需要提供外源激素B才能生长,则甲株与乙株融合,杂合细胞在不含激素A、B的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选:假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性(如抗卡那霉素),则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选:根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点,用它处理受体原生质体,只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复,等等。 (3)采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株,可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性(RFLP,见8.2.2.2)和随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。(4)根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。

  • 您使用过安捷伦的远程监控与诊断软件吗?

    在安捷伦附送的光盘中有远程监控与诊断软件,您使用过安捷伦的远程监控与诊断软件吗?有人使用过吗?谈谈经验。安捷伦远程诊断工具将如何减少仪器重新鉴定的次数?很简单, 利用远程诊断资产报告 所提供的信息,您可将仪器故障率降至最低。通过远程诊断与控制在线门户网站,您可以轻松地查看仪器使用率及其使用状况报告,了解预测性维修次数,根据这些信息,您可以及时更换高度磨损的仪器部件,从而避免系统故障的发生。通过采取适当措施,可降低仪器故障发生率并减轻破坏程度,同时可减少仪器重新鉴定次数,使您的系统保持在最佳性能状态。此外,通过对您的库存记录和维修历史进行不断更新,远程监控与诊断还可以帮您简化监管或质量审核的准备过程。远程监控与诊断针对所有与其连接的仪器,将在资产报告中提供仪器位置、仪器配置、序列号和固化软件版本等信息。同时远程监控与诊断还将为您提供这些系统的维修报告。最重要的是,远程监控与诊断不仅能够自动、准确地收集数据,而且还能直接从系统中输出报告。这意味着您不必费心地从各个仪器中采集信息,或是借助极少使用的工作日志对每个系统生成报告。资产报告只是远程监控与诊断所提供三大功能中的一个,这些功能旨在帮您专注于做到最好。当 系统发生故障时,利用帮助和实时协作功能可使实验人员减少花费在解决故障问题和维修上的时间,从而有利于规范化实验室的正常运作。有了这些功能,您只需使用鼠标点击发送一个服务请求,即可接收来自安捷伦专家的精确故障诊断报告,使您的系统立即重新投入到正常工作之中。

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