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抗体药物研发
仪器信息网抗体药物研发专题为您整合抗体药物研发相关的最新文章,在抗体药物研发专题,您不仅可以免费浏览抗体药物研发的资讯, 同时您还可以浏览抗体药物研发的相关资料、解决方案,参与社区抗体药物研发话题讨论。
抗体药物研发相关的方案
抗体偶联药物前沿研发方案
抗体偶联药物(Antibody-drug conjugates, ADC)是当下重要和主要的大分子抗癌药物类型之一。预计到2028 年,获批和处于III 期临床试验阶段的ADCs 的收入将达到260 亿美元。目前,ADC 药物依然面临着靶点特异性、有效/ 安全的Payload 释放和肿瘤穿透性差等挑战。对此,靶点/ Payload 创新(First-in-class)和递送/ 偶联机制创新(Best-in-class)成为了该领域的关注点和发展趋势。针对ADC 临床前筛选、评价和生产等重要研发环节,瑞孚迪聚焦机制创新、生理相关性和规模化三个维度,提供完善的前沿解决方案。
抗体偶联药物 (ADC) 功能分析
抗体偶联药物(ADC)功能分析作为抗体研发极为关键的环节,涉及如药理药效评估的内化作用检测,细胞毒增强(ADCP效应激活吞噬作用)检测,3D细胞模型评估等多方位检测及评价,赛默飞抗体药研发功能检测全流程解决方案平台可以提供从细胞活性,增殖,毒理,表达等包括成像及流式检测评估到蛋白高通量检测的一系列完整研究平台。
抗体药研发整体方案
抗体药背景和趋势续写百年传奇的 Magic Bullets在诺贝尔奖得主Paul Ehrlich 的贡献下,利用抗体来特异靶向肿瘤的概念的提出距今已有百年的历史。随着1975 年杂交瘤技术的出现和1986 年首个单克隆抗体(单抗)药物Muromonab OKT3 问世,单抗药物为由特定突变或异常蛋白表达导致的多种疾病提供了新的靶向治疗策略。在乳腺癌治疗领域,靶向HER2 的赫赛汀(Herceptin,trastuzumab)的成功为肿瘤治疗提供的新的曙光,开启了靶向治疗和免疫治疗新纪元。当下,无论从营业额还是获批上市的数目来看,抗体药物均是生物大分子制药产业的主导者。2019 年全球畅销药物TOP10 中,抗体类药物占据了6 款
抗体药物偶联物 (ADC) 的药物/抗体比率 (DAR) 计算
抗体药物偶联物 (ADC) 是制药公司药物开发途径中快速发展的一类新型生物治疗药物。ADC的制备方法是通过化学方法将具有生物活性的小分子药物与单克隆抗体相连。ADC 通过结合高效细胞毒性药物与靶标特异性抗体将细胞毒性药物直接送达病变组织,同时限制药物在非目标组织中的毒性。药物/抗体比率 (DAR) 是抗体所连接药物数量的平均值,它是 ADC 的重要属性。由于低载药量会降低效力,而高载药量则会对药代动力学 (PK) 和毒性产生负面影响,因此 DAR 值能够对药效产生影响。目前的偶联化学方法有赖氨酸侧链酰胺化或半胱氨酸链间二硫键还原,载药量通常为 0 ~ 8 个药物分子 (D0 ~ D8)/抗体。
采用天然质谱法对半胱氨酸连接的抗体药物偶联物及其药物/抗体比率进行测定
本文以半胱氨酸连接的抗体药物偶联物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 为研究对象,使用天然质谱法通过 Agilent6530 Q-TOF LC/MS 检测 ADC 的完整分子量,并使用安捷伦DAR计算器软件(Agilent DAR Calculator)计算ADC的加权平均药物/抗体比率(Drug to Antibody Ratio, DAR)。
采用天然质谱法对半胱氨酸连接的抗体药物偶联物及其药物/抗体比率进行测定
本文以半胱氨酸连接的抗体药物偶联物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 为研究对象,使用天然质谱法,通过 Agilent 6530 Q-TOF LC/MS 检测 ADC 的完整分子量,并使用安捷伦 DAR 计算器软件 (Agilent DAR Calculator) 计算 ADC 的加权平均药物/抗体比率(Drug to Antibody Ratio, DAR)。
疏水色谱法对抗体偶联药物的DAR分析
随着近年抗体药物市场的持续扩大,2012年全球销售额前10名的药物中有7个为抗体药物。而抗体-药物偶联物(Antibody-Drug Conjugate;ADC)是最有望成为仅次于抗体药物的下一代生物制药。ADC是将小分子化药通过化学结合到抗体(IgG)上形成的复合物。由于抗体中存在多个结合位点(Cys,Lys残基等),结合部位以及结合数量的不同会导致不均一性。这些不均一性会对ADC药物的药效、甚至是安全性产生影响。由于小分子化药的疏水性比抗体要高,结合的数量的不同也会导致ADC药物的疏水性发生变化。所以,利用这个原理通过疏水色谱模式可以对结合在抗体上的小分子化药的结合量(Drug to Antibody Ratio;DAR)进行分析.本报告中,使用了TSKgel Butyl-NPR色谱柱对ADC进行分离分析。
抗体药物偶联物 (ADC) 的药物/抗体比率 (DAR) 计算——利用自动化样品前处理和新型 DAR 计算器软件
抗体药物偶联物 (ADC) 是制药公司药物开发途径中快速发展的一类新型生物治疗药物。ADC的制备方法是通过化学方法将具有生物活性的小分子药物与单克隆抗体相连。ADC 通过结合高效细胞毒性药物与靶标特异性抗体将细胞毒性药物直接送达病变组织,同时限制药物在非目标组织中的毒性。药物/抗体比率 (DAR) 是抗体所连接药物数量的平均值,它是 ADC 的重要属性。由于低载药量会降低效力,而高载药量则会对药代动力学 (PK) 和毒性产生负面影响,因此 DAR 值能够对药效产生影响。目前的偶联化学方法有赖氨酸侧链酰胺化或半胱氨酸链间二硫键还原,载药量通常为 0 ~ 8 个药物分子 (D0 ~ D8)/抗体。LC/MS 是测定 ADC 的 DAR 和载药量分布的常用分析方法, 也是鉴定不同种类载药 ADC 的关键方法。多数情况下可直接使用 LC/MS 分析完整 ADC 从而确定 DAR 值。而在需要有关轻链和重链的具体 DAR 信息时,则可能要在 LC/MS 分析前对 ADC 进行还原。此外,还可能需要在 LC/MS 分析前对 ADC 进行去糖基化以进一步降低谱图复杂性。LC/MS 分析前的 ADC 样品前处理通常由手动完成,因此可能引入变异性并对通量产生限制。Agilent AssayMAP Bravo 是一款简单易用的自动化样品前处理系统,能够提高可重现性、通过减少手动操作时间节省人力、具有可扩展性(可同时运行 8 – 96 个样品)、简化人员间和站点间的方法转移,并能最大限度减少人为误差。AssayMAP Bravo 是一款适用于上述反应的强大自动化样品前处理平台。AssayMAP Bravo 自动化样品前处理平台与安捷伦 LC/MS 和 MassHunter/BioConfirm/ DAR 计算器软件相结合,能够针对 ADC DAR 计算提供可重现的便捷解决方案。本应用简报中采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台对经/未经去糖基化的完整和还原态 ADC 进行了平行处理,并采用安捷伦 LC/MS 对其进行分析,随后通过安捷伦 DAR 计算器确定 DAR。
流式动态图像法粒度仪激光粒度仪助力蛋白质抗体类药物颗粒检测
人源化单克隆抗体已成为治疗癌症、过敏和自身免疫性疾病等诸多疾病的主要药品。随着此类产品的不断开发,如何提高药物制剂的稳定性,特别是在制造、运输、储存和交付过程中防止蛋白质聚集是关键的挑战。如何检测蛋白质的聚集状态,胤煌科技(YinHuang Technology)研发的YH-FIPS流式动态图像法粒度仪独有的专利算法助力蛋白质抗体类药物颗粒检测。
疏水作用色谱法(HIC)在抗体药物偶联物(ADC)药物抗体比值(DAR)和药物分布测定中的应用
本文使用岛津生物兼容液相系统(Nexera Bio)建立了一种疏水作用色谱(HIC)方法用于抗体药物偶联物(ADC)中药物抗体比值(DAR)和药物分布的测定。Nexera Bio系统通过对关键部位的惰性化升级,在耐受高压的前提下,升级的惰性表面降低了生物大分子在不锈钢管路中的吸附,并且可耐受高盐洗脱体系,更适合于生物大分子样品的分析。
使用 UHPLC/Q-TOF 联用系统测定抗体药物偶联物 (ADC) 的药物/抗体比率(DAR)
本文以半胱氨酸连接的抗体药物偶联物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 为研究对象,使用连接 PLRP-S 反相液相色谱柱的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统分离还原的轻链、重链和相对应连接药物的轻重链,并通过 Agilent 6530 高分辨率四极杆飞行时间 (Q-TOF) 液质联用系统对各个色谱峰进行鉴定。通过积分处理紫外吸收图谱中各轻重链的峰面积百分比,结合各个峰的偶联药物数目,计算ADC的加权平均药物/抗体比率 (Drug to Antibody Ratio, DAR)。同时使用了安捷伦DAR 计算器 (Agilent DARCalculator)对质谱解卷积结果进行 DAR 值计算,所得结果与紫外吸收图谱计算所得结果相同。
使用 UHPLC/Q-TOF 联用系统测定抗体药物偶联物 (ADC) 的药物/抗体比率 (DAR)
本文以半胱氨酸连接的抗体药物偶联物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 为研究对象,使用连接 PLRP-S 反相液相色谱柱的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统分离还原的轻链、重链和相对应连接药物的轻重链,并通过 Agilent 6530 高分辨率四极杆飞行时间 (Q-TOF) 液质联用系统对各个色谱峰进行鉴定。通过积分处理紫外吸收图谱中各轻重链的峰面积百分比,结合各个峰的偶联药物数目,计算 ADC 的加权平均药物/抗体比率 (Drug to Antibody Ratio, DAR)。同时使用了安捷伦 DAR 计算器 (Agilent DARCalculator) 对质谱解卷积结果进行 DAR 值计算,所得结果与紫外吸收图谱计算所得结果相同。
测定血清纯化所得的抗体药物偶联物的药物/抗体比率——应用自动亲和纯化、LC/MS 分析和新型 DAR 计算软件
抗体药物偶联物 (ADC) 是一类新兴生物治疗药物,旨在通过将药物与单克隆抗体相连实现靶向给药。与小分子药物不同,ADC 不是单分子实体,而是一类异质性的抗体,每种抗体所携带的药物数量以及经历的翻译后修饰都各不相同。药物/抗体比率 (DAR) 是指 ADC 偶联的药物的平均数量。DAR 是 ADC 开发过程中需要优化和密切监测的关键质量属性,因为它将影响疗效和毒性。由于药物的释放,在血液循环中 ADC 的 DAR 将随时间发生变化。因此,制定一套测定药代动力学 (PK) 研究样品中 ADC DAR 的稳定解决方案非常关键。要确定 ADC DAR,首先必须纯化血清中的 ADC,然后使用 LC/MS 对其进行分析。通常该工作流程中的样品前处理和数据分析环节需耗费大量人力,因此易受变异性和人为误差影响。本应用简报介绍了一种用于测定血清样品中 ADC DAR 的解决方案,该方案采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台对 ADC 进行自动亲和纯化;将 Agilent 1290 Infinity UHPLC 与Agilent 6550 Q-TOF 质谱仪联用,用于采集准确的完整蛋白分子量数据;并利用 Agilent MassHunter BioConfirm 和 DAR 计算器软件确定 ADC 质量和 DAR。该工作流程可节省人力、降低变异性以及减少产生与 ADC DAR 测定相关的人为误差的可能性,而且仅需很少的工作量即可扩展样品处理量。
抗体药物的层析纯化工艺及HPLC质量控制方法
抗体是一种结构复杂的生物大分子,由多个氨基酸组成。即便是天然的抗体,其结构也是各不相同。抗体药物中使用到的单克隆抗体(IgG)在生产工艺(细胞培养、分离纯化)与保存过程中易发生不均一性的变化,包括抗体蛋白的二聚体、多聚体、脱酰胺化、末端氨基酸突变以及糖链部分的结构差异。这些不均一性会使药物的药效、安全性方面受到影响。 而随着生产工艺及分析手段的进步,单克隆抗体类药物的质量控制将更加严格。高效液相色谱(HPLC)作为一种分离技术,在蛋白质、抗体等生物大分子的分离分析方面已得到越来越广泛的应用。近年来,东曹生物的科学家们一直致力于在生物药分离领域开发具有革新性的色谱分离介质,基于尺寸排阻、离子交换色谱等多种HPLC分离技术实现了对抗体多聚体、各种抗体异构体的高效分离,在抗体药物的质量控制方面提供了有效地监控手段。
通过表征药物/抗体比率分析抗体药物偶联物——Agilent 1290 Infinity 二元液相色谱系统与 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF 联用
抗体药物偶联物 (ADC) 是通过赖氨酸或半胱氨酸残基共价结合细胞毒性药物的单克隆抗体。抗体通过结合疾病状态(如癌症)相关细胞表面的表位,可使给药具有特异性。ADC 到达其靶标后即释放出结合的药物,以在局部创造一个高浓度的细胞毒性药物环境。ADC 具备提高药效并降低副作用的潜力,因此其市场份额逐渐增加。偶联化学的特性决定了 ADC 本质上是载药量不同的抗体混合物。由于药物/抗体比率 (DAR) 能够显著影响 ADC 效果,因此 DAR 是衡量 ADC 质量的重要属性;低载药量会降低效力,而高载药量则会对药代动力学产生负面影响。本研究描述了使用先进液相色谱/质谱联用技术与简单易用的数据分析软件测定完整/还原态赖氨酸偶联 ADC 的 DAR。
使用生物惰性超高效液相色谱仪分析抗体药物
生物技术药物正在利用基因组编辑和细胞融合等生物技术进行开发。近年来,由于有望有效治疗各种疾病,包括难治性疾病,其中一些药物已在世界范围内推广使用。众所周知,抗体药物,如单克隆抗体(mAb)和抗体偶联药物(ADC),由于其对靶向物质的特异性和亲和力,已知具有良好的治疗效果并可减少不良反应。然而,由于这些生物技术药物是使用动物细胞制造而成,确保药物结构的均一性,是要面临的挑战,这是化学合成小分子药物不曾遇到的。因此,生物技术药物在每个生产工艺中都需要合理的质量控制。例如,ICH-Q6B1),2)提出了生物制品的规范和测试规程,规定在生产过程中产品有关物质应进行分离和/或确定其百分含量。多数情况下,这些检测均使用液相色谱法进行分析。
使用高分辨色谱-质谱联用系统和最新反相色谱柱改善单克隆抗体和抗体偶联药物表征
本研究使用新型反相色谱柱来解决这些问题,以期改善抗体偶联药物的表征分析。在此之前,已有研究表明,抗体偶联药物因含有疏水性极强的Fd' 亚基(负载数为3)而更加难以进行有效分析。
TSK色谱柱在抗体药HPLC分析中的应用
抗体是一种结构复杂的糖蛋白。即使是天然抗体,其结构也是各不相同。抗体类药物在其生产工艺(培养、分离纯化)或存储过程中容易导致产品的不均一性,所以在药物研发以及纯化和生产过程中,对抗体药物的定量和定性的分析是非常重要的。 高效液相色谱法(HPLC)可以对抗体药物以及重组蛋白药物中的不均一性进行有效的分析。比如,尺寸排阻色谱法利用分子空间结构的不同,可对多聚体、抗体片段、PEG化蛋白等样品进行有效分离。离子交换、疏水、反相以及正相色谱法可对抗体中的带电异构体、结构异构体,或由于糖基化、托酰胺化和氧化等作用引起的杂质进行高分辨率的分析。 本目录汇总了SEC/IEC/HIC/RPC/HILIC法分析抗体药物的应用实例,同时也涵盖了最新最全的TSK色谱柱产品的选择指南。
利用Fab选择性蛋白质酶解法nSMOL进行的抗体药物LCMS™ 生物分析-7-托珠单抗分析事例
本公司的nSMOL法是一种可进行单克隆抗体的Fab区域选择性酶解,崭新的跨时代LCMS预处理法。方法开发可不依存于抗体药物的种类,带来抗体药物分析中的典范转移。此外,本方法还针对多个抗体药物,满足厚生劳动省发布的“关于医药品开发时活体试样中药物浓度分析法的验证指导原则”标准。
采用TSKgel G3000SWXL尺寸排阻色谱柱测定双特异性抗体药物浓度
双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体,能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁,激发具有导向性的免疫反应,是基因工程抗体的一种,现已成为抗体工程领域的热点,在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。双特异性抗体药物具有浓度低及药效显著的特点,传统紫外-可见分光光度法只能准确检测A280 nm,在0.3~0.7范围的蛋白浓度,无法准确测定低浓度蛋白样品。本应用中作者采用了TSKgel G3000SWXL尺寸排阻色谱柱建立了测定低浓度双特异性抗体药物浓度方法,该方法同时也适合于中、高浓度药物浓度检测。
分析抗体-药物偶联物的药物结合位点——利用自动化样品前处理与 LC/MS 分析
结合了单克隆抗体 (mAb) 特异性与细胞毒性分子效能的抗体药物偶联物 (ADC) 已获得了越来越多的关注,它作为一种极具前景的方法可用于实现选择性更强的癌症治疗。由于潜在药物结合位点众多且在这些位点中的占位形式多样,因此 ADC 与未修饰的生物治疗抗体相比具有更高复杂性与异质性。为获得 ADC 分子的完全表征,本研究进行肽谱分析实验以获得关于 ADC 结合位点的详细位点特异性信息。本应用简报介绍了结合采用 Agilent AssayMAP Bravo 样品前处理平台的自动化蛋白质酶解、采用高分辨率精确质量数 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF 系统的 LC/MS 分析以及 Agilent BioConfirm 软件的 ADC 肽谱分析工作流程。T-DM1 获得的序列覆盖率为 98.7%。采用药物偶联物可鉴定出 29 个以上的赖氨酸位点。
基于抗体的药物强制降解研究中聚集物和降解产物的SEC监测
关键词:生物制药,抗体药物,FDS,聚集物,蛋白质降解产物,MabThera®,Tskgel G3000SWXL,SEC,紫外检测器,蛋白质聚集
基于亲和质谱法的通用方法测定临床样本中的总体单克隆抗体药物
生物分析对于生物大分子药物的早期研发,临床前研究乃至临床研究阶段都具有非常重要的意义。为了提供药代动力学(pharmacokinetics,PK),药效动力学(pharmacodynamics, PD)和毒动学(toxicokinetics, TK)所需的时间序列数据,我们对在生物基质中测定生物大分子药物浓度的准确性,灵敏度,选择性和通量均提出了非常高的要求。
不溶性微粒检测-高浓度抗体蛋白药物检测面临的难点探究
不溶性微粒检测是注射剂中的必检项,近些年来,高浓度抗体蛋白药物制剂由于药效强、注射时间短、给药方便等优势,逐渐在市面上被广泛应用。与常规的低浓度抗体药物相比,此类注射剂具备一些特性,比如蛋白浓度高、高粘度、有颜色、有浊度、罐装体积小等。这些使得这类注射剂的在使用传统光阻法不溶性微粒检测方法存在一些局限性,显微计数法不溶性微粒分析仪在高浓度抗体蛋白药物检测上更具优势,由胤煌科技推出的YH-MIP系列显微计数法不溶性微粒分析仪已解决传统显微镜法测试数据准确性不足、操作繁琐、对人眼伤害较大、检测结果不可追溯等问题,大大提升了检测精度跟效率
使用疏水填料TOYOPEARL PPG-600M分离抗体药物偶联物的DAR
抗体药物偶联物(ADCs)的纯化工艺十分复杂,其主要挑战在于分离未结合的抗体和游离药物,以及确定与抗体结合的药物的平均数量分布,即药物/抗体比率(DAR)。DAR值的增加会使ADCs的疏水性变强,利用该特点可分离不同DAR值的ADCs。东曹的疏水层析填料TOYOPEARL PPG-600M采用了相对亲水的配体,具有高回收率、结合能力强、工作pH范围宽等优点。本应用是采用了该款填料对ADCs模拟物的纯化进行了研究。
利用BioAccord系统通过非变性质谱法分析抗体偶联药物(ADC)
展示BioAccord?系统在非变性条件下分析抗体偶联药物(ADC)的性能。药物/抗体比率(DAR)是ADC的一种关键质量属性(CQA),因为它直接影响ADC的治疗效果和药代动力学。在ADC开发过程和商业化生产运营中,DAR的测定(和监测)至关重要。 非变性电喷雾质谱(非变性质谱)已成为分析共价复合蛋白质治疗药物和非共价蛋白质复合体的有力工具。在非变性质谱条件下,使用兼容MS的非变性缓冲体系对蛋白质进行电喷雾电离。这些LC-MS分析条件使许多蛋白质能够保持折叠状态,这些状态表现出特征性低电荷态,与分析变性蛋白相比,需要在更宽和更高的质荷比(m/z)范围内具有出色的灵敏度。非变性质谱面临多种独有的难题,包括在尝试使用注入式MS时,需要在分析前进行大量样品净化,并要求操作人员拥 有更高的技术水平以获得并解析实验结果。 之前,我们致力于通过将在线SEC与现有MS 技术联用来简化非变性质谱数据的采集,促进样品脱盐和缓冲液交换,以研究半胱氨酸偶联ADC药物。
基于沉淀酶解法的IgG-1类型单克隆抗体药物临床前生物分析的通用方法
我们借助于TSQ Altis的高灵敏度建立了一种基于沉淀酶解法的IgG-1类型单抗药物临床前生物分析的通用方法。该方法操作简单,价格低廉且具有高度通用性,可使用于临床前动物模型的所有生物基质。此外该方法还可以在测量体内药物浓度的同时监控单抗大分子药物的结构完整性。该方法广泛适用于药物开发的早期筛选以及药物的临床前研究阶段,提供注册必需的药代和药效动力学以及吸收/分布/代谢/排泄数据。该方法可为广大药企和CRO公司节约大量的方法开发时间, 并提供更多维的信息帮助制药工作者在早期判断候选抗体的成药可能性。
单克隆抗体和抗体药物偶联物的体积 排阻色谱分析——采用 Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 μm 色谱柱
体积排阻色谱 (SEC) 是表征生物治疗蛋白质体积异构体的一种常用技术。本应用简报比较了不同供应商的 2 μm 和亚 2 μm SEC 色谱柱对单克隆抗体 (mAb) 和抗体药物偶联物 (ADC) 的 SEC 分析。Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 μm 色谱柱对实现mAb 和 ADC 的高分离度分离具有独特的优势。
基于沉淀酶解法的IgG-1类型单克隆抗体药物临床前生物分析的通用方法
我们借助于TSQ Altis的高灵敏度建立了一种基于沉淀酶解法的IgG-1类型单抗药物临床前生物分析的通用方法。该方法操作简单,价格低廉且具有高度通用性,可使用于临床前动物模型的所有生物基质。此外该方法还可以在测量体内药物浓度的同时监控单抗大分子药物的结构完整性。该方法广泛适用于药物开发的早期筛选以及药物的临床前研究阶段,提供注册必需的药代和药效动力学以及吸收/分布/代谢/排泄数据。该方法可为广大药企和CRO公司节约大量的方法开发时间, 并提供更多维的信息帮助制药工作者在早期判断候选抗体的成药可能性。
抗体药物偶联物综合分析的一体化工作流程——采用微流控 HPLC-Chip/MS 技术
本研究使用安捷伦 HPLC-Chip 解决方案和飞行时间 (TOF) 质谱仪开发出一套测定抗体药物偶联物完整质量数、去糖基化完整质量数、药物/抗体比率以及多糖组成的高度自动化的集成分析方法。
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