[align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小细胞肺癌简介[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]癌症是目前全世界的社会公共卫生问题，是美国第二大死因。其中肺癌的发生率和死亡率均居第一位，并呈逐年上升的趋势[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][1][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。肺癌包括小细胞肺癌与非小细胞肺癌，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小细胞肺癌是一种[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]高度恶性的神经内分泌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]肿瘤，约占肺癌的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]15%[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][2][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在病理、分子生物学和临床[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]治疗等方面[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]与其他[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]类型[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]肺癌有很大的不同[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。小细胞肺癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的发生与烟草暴露密切相关，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]几乎所有的小细胞肺癌患者都是目前或以前的重度吸烟者[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][3][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小细胞肺癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的特点是肿瘤生长迅速，早期扩散转移，血管丰富，基因组高度不稳定性，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TP53[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RB1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的普遍失活，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]确诊后存活两年以上的患者患第二原发肿瘤的风险明显增加[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][4][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。小细胞肺癌被诊断时常常就已经发生广泛转移，最初对细胞毒性治疗敏感，但总是随着对进一步治疗的耐药性而迅速复发，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]年生存率[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]7%[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][5][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，每年大约[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]25[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]万人因此丧命。在过去三十年间，小细胞肺癌治疗没有明显进展，迫切需要新的治疗方法及药物。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]肿瘤的发生是一个多因素、多步骤、环境与基因共同作用的结果，是多细胞机体内基因突变或基因表达异常导致大量蛋白和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RNA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达失调所引起的。小细胞肺癌因为生长速度快，易发生转移、复发及耐药，并且近三十年间没有明显的治疗进展，被称为“顽固性癌症”。小细胞肺癌的诊断缺乏特异性的指标，被发现时往往已发生广泛转移；目前，针对小细胞肺癌的主要治疗手段仍是以铂类为主的化疗；小细胞肺癌早期对化疗敏感，随后很快发生复发及耐药；且手术患者数量较少，病理标本收集困难，这些均使小细胞肺癌治疗进展缓慢。随着近些年靶向药物及免疫治疗的发展，联合用药及寻找新的靶点成为治疗小细胞肺癌的新的方向。有研究显示，相对于非小细胞肺癌，小细胞肺癌中肿瘤干细胞的数量较多，肿瘤干细胞标志物表达量明显较高，针对于肿瘤干细胞标志物的研究对小细胞肺癌的诊断及治疗具有重要意义。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在非小细胞肺癌中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]促进细胞增殖及糖代谢，并调节肿瘤耐药[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][18][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]可[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验及软琼脂克隆形成实验验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对于人小细胞肺癌细胞生长增殖的作用。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验可检测活细胞的数量，可验证细胞的生长及增殖情况，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。软琼脂克隆形成实验是验证悬浮细胞单细胞克隆能力的常用手段，通过观察克隆形成数量及大小来判断[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]单细胞克隆形成的能力[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，已有报道证明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞的生长增殖起到明显促进作用。[/color][/size][/font]
如何用普通生物显微镜拍清楚非小细胞肺癌细胞的细胞膜呢
[align=center][size=18px]敲低[/size][size=18px] MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响[/size][/align][size=16px]检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞生长增殖的影响[/size][size=16px]收集[/size][size=16px] H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组[/size][size=16px]细胞细胞[/size][size=16px]离心，并用完全培养基调整细胞浓度，H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、[/size][size=16px] [/size][size=16px]H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 以每孔 1×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞平铺于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2，以每孔 1.3×[/size][size=16px]104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞平铺于 96 孔板中，37℃ 恒温培养箱中培养。铺板后，分别于 24 h、48 h、72 h、96 h、120h 在每孔加入 10 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px] CCK-8 溶液，37℃ 恒温培养箱中孵育 4h。并用酶标仪测定波长 450 nm 处 OD 值，利用 [/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 计算增殖情况。[/size][size=16px]检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响[/size][size=16px]收集[/size][size=16px] H69 、H82 、H526 、SW1271 的对照组和实验组细胞， 其中 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、[/size][size=16px]H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 细胞系以 1×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞/孔的细胞密度接种于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 以 1.3×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞/孔的细[/size][size=16px]胞[/size][size=16px]密度接种于[/size][size=16px] 96 孔板中。待细胞融合率约 80%，加入不同浓度顺[/size][size=16px]铂[/size][size=16px]。每组均设置对照组及空白组（仅有同体积培养基）。H69、H82、H526 的对照组和实验组[/size][size=16px]加药浓度梯度为 0、1、2、4、8、16、32、64 nmol/mL，SW1271 对照组和实验组细胞加药浓度梯度为 0、2、4、8、16、32、64、128、256 nmol/mL，（加药浓度梯度根据细胞类型、前期预实验结果及细胞对药物的敏感程度而定）。每种浓度设 6 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]复孔，每孔总体积为 100 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px]，培养 24、48、72、96、120 h 后[/size][size=16px]分别检测细胞活力。每孔加入[/size][size=16px] 10 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px] 的 CCK-8[/size][size=16px]（避光），培养箱中孵育[/size][size=16px] 4 h 后取出，使用酶标仪测定波长为 450 nm 的吸光度（OD 值）。利用公式：抑制率=（加药组－空白组）/（对照组－空白组）计算增殖抑制率。实验重复 3 次，取平均值。以药物浓度为横坐标，细胞增殖抑制率为纵坐标，利用[/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 绘图。[/size] [size=16px]敲低[/size][size=16px] MSI1 对人小细胞肺癌细胞增殖能力的影响[/size][size=16px]CCK-8 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲[/size][size=16px]瓒[/size][size=16px]，生成的甲[/size][size=16px]瓒[/size][size=16px]物的数量与活细胞的数量呈正比，因此可以直接进行细胞增殖和毒性分析。[/size][size=16px]CCK-8 法 测 生 长 曲 线 实 验 结 果 如 图[/size] [size=16px]3-1 显 示 ， 实 验 组 H69-shMSI1-1 、[/size][size=16px]H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、[/size][size=16px]SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 OD [/size][size=16px]值明显[/size][size=16px]低于对照组。[/size][size=16px]表明敲低[/size][size=16px] MSI1[/size][size=16px]抑制了[/size][size=16px] SCLC 细胞的生长增殖。[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302321138249_2126_5887180_3.png[/img][size=16px] [/size][size=16px]图[/size][size=16px] [/size] [size=16px]MSI1 低表达对 H69、H82、H526、SW1271 对照组和实验组细胞增殖的抑制情况。应用 [/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 作图所示（*P0.05,**P0.01,***P0.001,表示与对照组相比，[/size][size=16px]敲低组[/size][size=16px] OD 值减小[/size][size=16px]具有统计学意义）。[/size] [size=16px]测敲低[/size][size=16px] MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响[/size][size=16px]药敏实验结果如图[/size][size=16px] 3-2 所示，与对照组相比，实验组 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、[/size][size=16px]SW1271-shMSI1-2 经不同浓度[/size][size=16px]顺铂处理[/size][size=16px] 24、48、72、96、120 h 后细胞的药物敏感性无明显变化。[/size][size=16px] [/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302321124223_9282_5887180_3.png[/img]
[font='times new roman'][color=#000007]MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000007] [/color][/font][color=#000007]在人小细胞肺癌细胞系中的表达及[/color][color=#000007] [/color][font='times new roman'][color=#000007]MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000007] [/color][/font][color=#000007]低表达[/color][color=#000000]细胞模型的构建[/color]MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中高表达提取人正常肺上皮细胞 BEAS-2B，SCLC-A 型 H69、H209、DMS153 细胞，SCLC-N 型 H446、H82、H2066 细胞，SCLC-P 型 H526、H211 细胞，SCLC-Y 型 H841、DMS114、SW1271 细胞的 RNA，利用 q-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 检测 MSI1 在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况，结果如图 2-1 显示，MSI1 在小细胞肺癌细胞系中的表达远远高于正常肺上皮细胞，综合分析，选取了 H69、H82、H526 及 SW1271 细胞用于后续实验。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326443512_4838_5389809_3.png[/img]图 小细胞肺癌细胞系中 MSI1 mRNA 的表达（***P0.001）MSI1 低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系 H69、H82、H526、SW1271 细胞，使用慢病毒感染技术敲低 MSI1 的表达，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选， 然后在荧光显微镜下观察如图 ， 可见 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2细胞均产生绿色荧光，表明人小细胞肺癌细胞慢病毒感染成功。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326451025_2121_5389809_3.png[/img]图 慢病毒感染后 4X 荧光显微镜下图片（H69、H82、H526、SW1271 明场及荧光照片） 敲低 MSI1 后转录和蛋白水平验证分别提取对数生长期的 H69-NC 、H69-shMSI1-1 、H69-shMSI1-2 、H82-NC 、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 RNA 和蛋白，利用 q-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 技术分别检测各细胞 MSI1 mRNA 相对表达量，结果如图 所示，与对照组相比，H69-shMSI1-1、 H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 组 MSI1 mRNA 表达量明显降低（P0.01）， 抑制率约为 75%。利用 Western blot 技术检测各细胞内 MSI1 蛋白的表达情况。结果如图 2-3 所示，与对照组相比，MSI1 蛋白表达在 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞中明显降低。表明 MSI1 低表达细胞模型构建成功。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232326454704_2148_5389809_3.png[/img]图 敲低 MSI1 在转录水平和蛋白水平的验证（***P0.001）
MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达细胞模型的构建实验方法与步骤 细胞的复苏 1.复苏前的准备：打开水浴锅，设置温度37℃；紫外线将超净台消毒30 min；配置完全培养基。 2.将要复苏的H69、H446细胞从液氮取出，用一次性PE手套包裹冻存管，迅速放入水浴锅中震荡，使其快速融化。 3.在15 mL离心管中加入5 mL完全培养基及融化的细胞悬液，900 r/min离心8分钟，弃去上清，得到细胞沉淀。 4.在25 cm2的培养瓶中加入5 mL完全培养基，并用1 mL培养基将沉淀的细胞重悬并加入准备好的培养瓶中，放入CO2恒温培养箱中继续培养。 细胞的传代 1.选取在悬浮培养瓶中生长至90%的H69细胞，用移液枪将细胞悬液移入15 mL离心管中，选取在贴壁培养瓶中生长至90%的H446细胞，用PBS溶液将细胞吹至漂浮，并移入15 mL离心管中，两种细胞均900 r/min离心8分钟，弃掉上清。 2.分别在3个25 cm2培养瓶中加入5 mL完全培养基，在细胞沉淀中加入3 mL培养基并充分吹打混匀，将3 mL细胞悬液平均放入3个培养瓶中并混匀，放入培养箱中继续培养。 MSI1低表达细胞模型的构建1.从-80℃冰箱取出慢病毒载体冰上融化，将慢病毒用空白培养基稀释为滴度2×108，充分混匀，准备好病毒感染增强液。2.将25 cm2悬浮培养瓶中H69细胞移入15 mL离心管中并用移液枪充分吹打混匀，取其中500 μL放入细胞计数仪中计数，取出1.2×106个细胞置入新的离心管中，加入空白培养基至6 mL。3.在12孔板中以MOI=10的病毒滴度进行感染，培养16 h。4.16 h后将细胞悬液离心，换成不加双抗的完全培养基继续培养，72 h后观察荧光。5.待细胞生长至状态良好，加入1 μg/mL嘌呤霉素筛选至90%以上细胞均产生荧光。荧光实时定量PCR（Q-PCR）检测MSI1在mRNA水平的表达 总RNA的提取分别将细胞离心，PBS缓冲液清洗2次，900 r/min离心8 min，得到细胞沉淀。分别加入1 mL Trizol，用移液枪吸打至细胞完全破裂，加入200 μL氯仿，震荡30 s，室温静置10 min，以有效分离无机相和有机相，随后4℃，12,000 g/min离心15 min。将上清移至高压过的1.5 mL离心管中，加入与上清等体积的异丙醇，轻柔颠倒震荡数次，室温静置10 min，随后4℃，12,000 g/min离心10 min。弃去上清，加入75%无水乙醇，4℃，12,000 g/min离心5 min。弃去上清，沉淀置于冰上自然干燥，但不可完全干燥。用30 μL DEPC水溶解总RNA。用NanoDrop One超微量分光光度计进行定量和纯度检测，用1%琼脂糖凝胶电泳进行完整性检测。 cDNA的合成逆转录体系试剂名称使用量模板RNAMonScriptTM 5*RT111 All-in-One MixMonScriptTM dsDNaseNuclease-Free Water1 μg4 μL1 μLup to 20 μL将混合液轻柔吹打混匀，瞬时离心，37℃ 2 min，55℃ 15 min，85℃ 5 min，得到cDNA。 Q-PCR检测MSI1 mRNA的表达GAPDH引物序列：Forward primer:Reverse primer:5’-GGTCGGAGTCAACGGATTTG-3’5’-ATGAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3’MSI1引物序列：Forward primer:Reverse primer:5’-GAACCATCCCGTCCTGTATCA-3’5’-GAAACCATGAAGCCCCAACC-3’Q- PCR反应体系：Q-PCR反应体系试剂名称使用量cDNAForward primerReverse primerMonAmpTM Chemhs qPCR MixLow ROXNuclease-Free Water50 ng0.2 μL0.2 μL5 μL0.1μLup to 10 μLQ-PCR反应程序： Q-PCR反应程序反应步骤反应温度反应时间循环次数预变性95℃10 min1变性95℃10 s40退火55-65℃10 s延伸72℃30 s溶解曲线溶解曲线按仪器默认溶解曲线 结果采用t检验，用Graphpad prism5计算MSI1在mRNA水平的表达量。 Western blot检测MSI1在蛋白水平的表达总蛋白的提取将对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞移入15 mL离心管中，900 r/min离心8 min，并用PBS溶液洗涤2次，以去除培养基中血清影响。分别加入含PMSF的蛋白裂解液100 μL，与细胞充分混匀。4℃裂解1小时后，4℃，12000 g/min离心15 min，将上清移至新的离心管中，得到细胞总蛋白。 BCA法测定蛋白浓度 将Solution A和Solution B以50:1的体积比配置BCA工作液，充分混匀。将2 mg/mL蛋白标准品等比稀释，最小浓度为125 μg/mL，并分别与配置好的200 μL BCA工作液混匀，铺入96孔板中。37℃孵育30 min，测定波长562 nm处OD（光密度值）值，并绘制蛋白标准曲线。取适量H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白，20：1稀释后，与200 μL BCA工作液混合均匀。37℃孵育30 min，用酶标仪测定波长562 nm处OD值，根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。Western blot检测MSI1蛋白的表达 分别收集对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白，加入相应体积4×SDS Loading Buffer，沸水浴煮5 min，分别取40 μg细胞总蛋白，在提前配制的10% SDS-PAGE分离胶电泳。电泳结束后，将蛋白转至PVDF膜上。用含5%脱脂牛奶的封闭液 37℃封闭1.5 h。弃去封闭液，用TBST缓冲液洗3次，每次10 min，加入MSI1兔单克隆抗体（1:1000），并以GAPDH为内参，加入GAPDH鼠单克隆抗体（1:5000）；4℃孵育过夜，次日用TBST缓冲液洗膜3次，每次10 min。在敷有MSI1抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗兔IgG（1:5000），在敷有GAPDH抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗鼠IgG（1:5000），37℃敷育1 h，TBST 缓冲液洗膜3次，每次10 min。用增敏化学发光底物试剂检测，暗室曝光显影。在GAPDH表达量相同的情况下比较MSI1的表达情况。多次重复，应用ImageJ计算出各个蛋白条带的灰度对比，结果采用t检验，并应用Graphpad prism5作出柱状图。 MSI1在人小细胞肺癌细胞系中高表达 提取人正常肺上皮细胞BEAS-2B、小细胞肺癌细胞H446、H69的RNA，利用Q-PCR检测MSI1在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况，结果如图2-1显示，MSI1在小细胞肺癌细胞系H446、H69中的表达远远高于正常肺上皮细胞。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428158_6718_5389809_3.png1 MSI1 mRNA在小细胞肺癌细胞系中的表达（**代表与正常肺上皮细胞相比，小细胞肺癌细胞MSI1表达量增高具有统计学意义，P0.01）。 MSI1低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系H69细胞，使用慢病毒感染技术敲低MSI1的表达，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选，然后在荧光显微镜下观察如图2-2，可见H69-NC、H69-shMSI1细胞均产生绿色荧光，表明人小细胞肺癌H69细胞慢病毒感染成功。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428036_9359_5389809_3.png MSI1低表达细胞模型的构建。应用shMSI1慢病毒载体感染H69细胞，利用嘌呤霉素筛选，并在荧光显微镜下观察。 荧光实时定量PCR（Q-PCR）检测MSI1的mRNA表达水平提取对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞的RNA，并测量RNA浓度及完整性，用1%琼脂糖凝胶电泳检测完整性可见，RNA有三条带，从上到下依次为28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA，且28S rRNA的亮度是18S rRNA的两倍。用NanoDrop One超微量分光光度计测定人总RNA的A260/A280的值为2.00左右，A260/A230的值为2.30左右，说明提取的RNA质量和完整性很好，可以用于后续试验。利用Q-PCR技术检测各细胞内MSI1 mRNA相对表达量，结果如图2-3所示，与对照组相比，H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量明显降低（P0.01），抑制率约为75%。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434330_8277_5389809_3.png MSI1在RNA水平的表达（***代表与对照组相比，H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量下降具有统计学意义，P0.001）。 Western blot检测MSI1蛋白表达水平将BSA标准品（2 mg/mL）进行等比稀释，最低浓度为125 ug/mL，并应用BCA蛋白质浓度测定试剂盒测定在波长562 nm下的OD值，以OD值为纵坐标，对应蛋白质浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准蛋白曲线如图2-4所示。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201435248_4142_5389809_3.png图2-4 标准蛋白曲线分别提取H69-NC、H69-shMSI1细胞的总蛋白质，利用Western blot技术检测各细胞内MSI1蛋白的表达情况。结果如图2-5所示，与对照组相比，MSI1蛋白表达在H69-shMSI1细胞中明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功。ahttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201437240_855_5389809_3.pngbhttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434999_3303_5389809_3.png图2-5 MSI1蛋白水平表达：（a）MSI1蛋白表达条带；（b）MSI1蛋白的相对表达量。（*表示与对照组相比，H69-shMSI1组MSI1蛋白表达下降具有统计学意义，P0.05）。首先验证MSI1在小细胞肺癌细胞系中的表达情况，利用Q-PCR技术检测在RNA水平，MSI1在肺正常上皮细胞及小细胞肺癌细胞系中的表达，结果显示，MSI1在小细胞肺癌细胞中的表达明显高于正常肺上皮细胞。随后以人经典型小细胞肺癌细胞系H69细胞为研究对象，构建MSI1低表达细胞模型，应用shMSI1慢病毒载体感染H69亲本细胞，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，利用Q-PCR及Western blot验证MSI1在RNA及蛋白水平的表达，结果显示，H69-shMSI1组MSI1的mRNA及蛋白的表达明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功，可以用于后续实验。
[align=left][font='黑体'][size=18px]肺癌[/size][/font][font='黑体'][size=18px]概述及早期诊断[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]由国际癌症研究机构发布的全球癌症统计数据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GLOBO-CAN2020[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]说明，我国肺癌发病率和死亡率分别占全球的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]37%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]40%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，肺癌防治已成为癌症防控的一大挑战。依据病理学类型不同，肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌。提升小细胞肺癌与非小细胞肺癌早期诊断的准确性有利于提高肺癌患者的预后生存率。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]肺癌是一种肺组织内细胞发生癌变的疾病。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肺癌的病因比较复杂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，如长期吸烟、大气污染等。肺癌的临床表现有咳嗽、胸痛、咳血、发热和气急等。咳嗽常表现为阵发性刺激咳嗽，咳血则是持续性或反复性产生少量血痰。肿块会阻塞、压迫大支气管，造成患者胸闷气急。对于晚期肺癌患者，容易发生脑转移或肝转移和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]骨转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，根据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2020[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]年美国最新统计数据显示，早期肺癌的总生存率不超过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]31%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，肺癌转移后的生存率更是不到[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3%[/size][/font][font='宋体'][size=16px]。[/size][/font] [font='黑体'][size=17px]非小细胞肺癌和小细胞肺癌[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]非小细胞肺癌，又称“非小细胞癌”，是肺癌的一种。非小细胞肺癌包括鳞状细胞癌、大细胞癌和腺癌。吸烟者或有吸烟史人群易患肺癌。非小细胞肺癌约占所有肺癌的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]80-85%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。非小细胞肺癌细胞的生长分裂速度比小细胞肺癌细胞慢，在患者体内扩散和转移较晚。非小细胞肺癌的生存率取决于分期和类型，早期肺癌的五年生存率超过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。目前临床主要采用化疗手段治疗。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]小细胞肺癌是一种侵袭性很强的神经内分泌瘤，进展迅速，吸烟者或有吸烟史人群易患癌。小细胞肺癌约占肺癌病例的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]15-20%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。大多数小细胞肺癌在发现时已发生局部转移。小细胞肺癌的生存率相对较低，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]年生存率约为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font] [font='黑体'][size=17px]肺癌的诊断方法[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]目前，小细胞肺癌与非小细胞肺癌的诊断主要依赖于影像及病理切片结果。高危人群如肺部结节患者可以通过低剂量螺旋[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]筛查发现早期肺癌患者，结合穿刺或手术局部切除进行冰冻切片确诊。病理诊断还包括对免疫组化的评估，有助于确定肺癌的类型、分期和治疗方案。以非小细胞肺癌为例，病理组织大切片技术能够分析组织异质性，以确定癌症的组织类型和分化程度。除影像学与病理组织切片方法以外，诊断时还可以检查血液中的癌症标志物，如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CEA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CA125[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CYFRA21-1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等。另外，诊断有时使用基因检测来检测肺癌相关基因突变，以辅助诊断和指导治疗。[/size][/font] [align=left][font='黑体'][size=18px]肺癌早期诊断[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]已知小细胞肺癌与非小细胞肺癌患者的临床治疗手段大有不同，因此开发出用于小细胞肺癌与非小细胞肺癌的准确的早期诊断方法迫在眉睫。目前，常用的方法一是[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]检查，但[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]准确率高，且有辐射暴露风险；二是常规血液癌症标志物筛查，如癌胚抗原、细胞角蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]19[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]片段等，但假阳性率高、特异性有限；三是组织活检，组织活检的准确度较前两种方法高，但取材困难、患者依从性差[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][13][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可作为无创检测手段，与上述方法相比具有突出优势。研究证明，肺癌患者的某些[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]浓度高于健康人组[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][14][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]，这说明外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可应用于肺癌的诊断。另外，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可用于肺癌的分型诊断，如肺腺癌的特异性诊断标志物是[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir-30e-3p, mir-30a-3p, mir-181-5p[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir-361-5p[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][15][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]，而肺鳞癌的特异性诊断标志物是[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir-15b-5p, mir-10b-5p[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir320b[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][16][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。然而，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]诊断方法真正实现大规模临床使用前还需要克服提取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]难度较大、没有统一的标准等困难。[/size][/font] [align=left][font='黑体'][size=18px]外[/size][/font][font='黑体'][size=18px]泌体用于[/size][/font][font='黑体'][size=18px]癌症治疗[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]除用于分型诊断外，由于外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体对癌症细胞的增殖、转移等也有影响，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可开发[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]成靶向[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]药，用于癌症的治疗。有[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]研究称外泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导肺癌细胞上皮间充质转化，实验人员发现来自[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]A549[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H460[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体显著[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]促进了肺癌症细胞上皮间充质转化，并促进皮下异种移植瘤的生长[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][17][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]；另有研究报道，癌症相关成纤维细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CAFs[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以将外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]到肺癌细胞中，通过上调[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PD-L1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]抑制外周血单核细胞的杀伤作用，并通过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]OIP5-AS1/miR-142-5p/PD-L1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]轴促进[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肺癌进展[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][18][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。不仅如此，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CAFs[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]衍生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体也会被肺癌细胞内化、吸收，其外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体携带的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MiR-210[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]通过靶向[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UPF1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]激活[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PTEN/PI3K/AKT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]通路诱导癌症细胞上皮间充质转化，进而促进肺癌的迁移和侵袭[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][19][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font]
最新发现与创新 中国科技网讯 经3年多临床攻关，复旦大学附属肿瘤医院陈海泉教授领衔的课题组，发明了一种能快速准确检测携带“ALK融合基因”的肺癌分子诊断技术，可为患者节省巨额检测费用，并为晚期肺癌患者选择“有特效的”分子靶向药物进行个性化治疗赢得宝贵时间。相关论文已发表在最近出版的国际著名肿瘤学期刊《临床癌症研究》上。 “ALK融合基因”是癌基因，存在于3%—7%的非小细胞肺癌中，以该癌基因为靶点的分子靶向药物Crizotinib可显著提高肺癌患者的生存率。但如何快速而准确地诊断出携带“ALK融合基因”的肺癌，一直是世界性难题。目前，国际上“ALK融合基因”检测技术复杂，至少需2天时间完成，每例价格高达1500美元。 陈海泉在一次研究中意外发现，当“ALK融合基因”发生断裂后，人体内的“激酶域”表达会显著增高，而“非激酶域”则不表达或低表达。根据这一特点，陈海泉课题组创造性地发明了一种“实时定量的ALK融合基因检测”新技术，通过检测“ALK融合基因”断裂点前后ALK基因的表达水平差异，快速而准确地诊断出ALK融合基因。经验证，应用该新技术对950例非小细胞肺癌标本的检测结果发现了40例携带“ALK融合基因”的阳性标本，敏感性、特异性均达100%。此外，该技术还具有高通量、低成本等优势，可在90分钟内完成48例样本的检测，每例检测成本不超过30元。 据悉，为表彰陈海泉的杰出贡献，美国胸科医师学院已决定，在即将举行的2012年年会上授予其“阿尔弗雷德·索弗研究奖”。（通讯员 孙国根 记者 王春） 《科技日报》（2012-09-24 一版）
加拿大研究人员11月9日报告说，吸烟者罹患的肺癌与非吸烟者罹患的肺癌有着不同的基因突变，看起来不是同一种癌症。研究人员指出，这一发现有着重要意义，因为这意味着应该针对不同肺癌的不同基因变异进行相应的研究、治疗和诊断，而不是对所有患者采用同一套方法。据《温哥华太阳报》报道，加拿大不列颠哥伦比亚省癌症中心的研究人员利用基因分析技术，比较了两组肺癌患者的组织样本，一组是30名从未吸烟的患者，另一组是53名当时吸烟或曾经吸烟的患者。分析发现，从未吸烟者肺部肿瘤里的DNA突变数量是吸烟者或曾经吸烟者的近两倍，两类患者的肺癌可能有着不同的分子机制。研究人员8日在美国费城举行的美国癌症研究协会的一个会议上提交了相关报告。研究人员说，香烟中的致癌物引发基因突变，导致癌细胞生长，而新研究显示，导致非吸烟者罹患肺癌的可能是其他致癌物，并非来自香烟。由于人们常常以为从未吸烟者不会得肺癌，因此非吸烟的肺癌患者被确诊时通常已经到了无法治愈的晚期，如何早期发现非吸烟者的肺癌是一个重要课题。据报道，加拿大正在开展如何有效进行肺癌早期诊断的研究。过去30年里，加拿大采用现行的管理方法，仅使肺癌死亡率下降了3%。研究人员希望找到一套有效的肺癌筛查方法，能让肺癌死亡率下降20%。
[font='times new roman'][size=14px]MSI1 调节小细胞肺癌增殖凋亡[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]简介[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，也是全球癌症死亡的主要原因[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。小细胞肺癌[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]small cell lung cancer, SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]发生率占肺癌的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]10%-15%[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]5 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]年生存率仅为[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]7%[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]具[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]有生长迅速、容易耐药、早期转移等特点，恶性程度在所有肺癌类型中最高，总体预后[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]差，未经治疗的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]患者生存期仅[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]2-4[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]个[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]月[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。大多数[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]患者在诊断时已处于广泛期，其预后极差，因此[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]对于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]SCLC [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]转移侵袭相关的分子机制的研究，有助于识别[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]SCLC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000007]新的生物标记物和治疗靶点。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]是一种高度恶性的肺神经内分泌肿瘤。有学者通过对[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表观遗传学和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]基因表达的研究发现，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]ASCL1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]NEUROD1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]揭示了[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的异质性[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][5][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，而最新研究基[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]于[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]中四个关键转录因子[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]ASCL1[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]NEUROD1[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]POU2F3[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]YAP1[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的差异表达，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]将其定义为[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC-A[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC-N[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC-P [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC-Y [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]四种亚型[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。尽管在早期发现和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]治疗方面取得了进展，但[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的死亡率仍在上升。因此，了解肿瘤发生发展的分子机制对于更好的诊断和预后是必需的。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Musashi1(MSI1) [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]是一种保守的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]RNA [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px], [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]最初在果蝇中被发现，位于染色体[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]12q24 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]上，编码一个[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]362-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]氨基酸多肽；[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]与真核转录起始因子[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]4G[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]eIF4G[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]竞争[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]多聚[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]A [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]PABP[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，以[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合其靶[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]mRNA [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]′[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]非翻译区[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]UTR[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]中的特定序列，从而抑制靶基因的翻译[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。作为一种[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]RNA [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合蛋白，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]已被证明参与许多与癌症有关的信号通路，其表达与肿瘤的发生发展密切相关[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][9-11][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Akt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路在肿瘤[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的发生发展中发挥重要作用，参与调节肿瘤细胞增殖、周期、凋亡以及肿瘤细胞与细胞外基质之间的相互作用[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]；研究发现[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]通过调节[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Akt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路的活性来[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]调节非[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]小细胞肺癌的恶性和化疗耐药性[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][14][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]也可以通过激活[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路促进宫颈癌细胞的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、侵袭和转移[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。另有研究发现[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表达增强会导致肿瘤的扩散和复发，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]高表达[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]被认为是生存率低和预后差的指标。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Moreira[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]等人发现[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]在[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]组织中普遍表达，因此本研究对[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]MSI1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]在[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]中的生物学功能和分子机制研[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]究进行了初步探索，旨在为[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]诊治提供新思路，为[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的治疗以及改善患者预后提供有力的临床前研究依据。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]上皮间充质转化（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]epithelial-mesenchymal transition[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）是肿瘤转移侵袭的主要[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]机制之一，具有促进肿瘤细胞恶性增殖、减少细胞凋亡和衰老、促进免疫抑制等作用[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][19][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]E-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]粘连蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]E-cadherin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表达下调或缺失、细胞极性的缺失都是[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的重要标志[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][20][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]N-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]钙粘蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]N-cadherin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]、波形蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Vimentin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]属于间质细胞表型标记物，在[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]过程中，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]E-cadherin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的下调会伴随着[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]N-cadherin[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]及[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Vimentin [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表达的上调，从而导致肿[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]瘤细胞骨架重排，促进肿瘤的转移[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][21[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]22][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。大量研究表明，在乳腺癌、结直肠癌、肺癌等[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]多种恶性肿瘤中，具有[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]表型的肿瘤细胞可表现出高度的侵袭和转移能力，导致患者的预后极差[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。大量研究证明，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]EMT [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]过程受到多种通路的调控，进而促进[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]SCLC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]发生发展以及化疗的耐药性。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路调节生物体发育、体内平衡、愈合再生和维持干细胞等各种生物过程[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]通路传导缺失会导致发育缺陷、骨骼疾病，甚至参与调控乳腺癌、结直肠等恶性肿瘤的发生发展[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。尽管其主要通路成分已被确定，但[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号在肿瘤中的功能十分复杂，目前也只是部分了解。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号激活的转录反应是由细胞核内[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]β-catenin [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]结合因子的复杂网络所[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]导的[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。大肠腺瘤性息肉病[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]adenomatous polyposis coli [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]APC[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]基因的缺失是大肠癌中[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号传导的主要驱动因素，另外[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]R-spondin/Lgr5/RNF43 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]模块的突变也被认为是依赖[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]通路的肿瘤生长的驱动因素[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][35[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]36][/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。另有研究发现，在[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]自体非小细胞肺癌模型中，[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]配体抑制剂和[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]aPD1 [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]联合治疗能减弱双重免疫检查点阻断反应[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]W[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]n[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]t[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]/β-[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]cate[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]n[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]i[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]n[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路也是结肠癌的一个公认的驱动因素[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]，因此对[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]Wnt[/size][/font][font='times new roman'][size=14px]信号通路的研究，可以为肿瘤的诊断治疗提供了新的方法和思路。[/size][/font]
[font='times new roman'][size=21px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=21px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响及相关机制研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=20px][color=#000000]实验方法[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞的生长增殖的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测小细胞肺癌细胞系生长增殖情况[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分别将对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞离心，并用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]完全培养基调整细胞浓度，以每孔[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个细胞平铺于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃恒温培养箱中培养。铺板后，分别于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]24 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]48 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]72 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在每孔加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]溶液，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5%CO[/color][/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养箱中孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。并用酶标仪测定波长[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]450 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，结果应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]t[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检验，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]计算增殖情况。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]用琼脂糖及[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ddH[/color][/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]O[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分别配置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.3%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.7%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的软琼脂凝胶，高压灭菌后维持[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]40[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃不会凝固，按[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1:1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]比例将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.7%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的软琼脂与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1640[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养基混合，将混合液置入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]6[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中冷却凝固半小时，作为底层琼脂置于培养箱中备用。分别将对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞计数，按[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1:1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]比例将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.3%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂凝胶与细胞悬液混合铺入上层，每孔细胞数为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1000[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个，注意不要产生气泡。每[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]天滴加少量培养基，防止干燥。待上层凝固后放入恒温培养箱中培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]周后拍照计数克隆形成数及单个细胞团细胞数目，比较两种细胞克隆形成能力的差异，结果应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]t[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检验，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]作图计算两种细胞克隆形成能力的差异。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]影响小细胞肺癌细胞的相关机制研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检测相关蛋白的表达[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]提取适量[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]：[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]稀释后，与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]200[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L BCA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]工作液混合均匀。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]30 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，用酶标仪测定波长[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]562 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。在蛋白原液中加入相应体积[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SDS Loading Buffer[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，沸水浴煮[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，分别取[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]g[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10% SDS-PAGE[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分离胶电泳。电泳结束后，将蛋白转至[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PVDF[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]膜上。用含[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]脱脂奶粉的封闭液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃封闭[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.5 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。弃去封闭液，用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，加入相应抗体，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃孵育过夜，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗膜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。加入相应二抗（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1:5000[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]），[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃敷育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗膜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。用增敏化学发光底物试剂检测，暗室曝光显影。重复多次实验，应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ImageJ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]计算出各个蛋白条带的灰度对比，并应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]作出柱状图。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000] MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞生长增殖能力的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞增殖能力的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]试剂可用于检测细胞生长增殖能力，过程简便精确。其基本原理为：试剂中含有的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]WST-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2-(2-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]甲氧基[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-4-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]硝基苯基[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])-3-(4-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]硝基苯基[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])-5-(2,4-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]二磺酸苯[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])-2H-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]四唑单钠盐），在电子载体的作用下被细胞中的脱氢酶还原为黄色甲瓒产物。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]酶标仪测定[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]450 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]可间接反映活细胞数量。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞增殖能力，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值明显低于对照组，并且增长变化不明显。表明，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达抑制小细胞肺癌细胞的生长增殖。[/color][/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203024978_3594_5389809_3.png[/img][/align][font='times new roman'][color=#000000] H69-NC[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-MSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]细胞生长曲线。应用[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]Graphpad prism5[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]作图所示（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05,**[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.01,***[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.001,[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]OD[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]值减小具有统计学意义）。[/color][/font][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂克隆形成实验检测[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞单细胞克隆能力的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]软琼脂克隆形成实验能够检测悬浮细胞单个细胞克隆形成的能力，培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]周后肉眼可见克隆形成，拍照并分别计数两种细胞克隆形成数量及单个克隆细胞团的细胞数目。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]所示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]形成的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]克隆数目[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]明显[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]减少[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]P[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]＜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.01[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，克隆细胞团体积明显较小，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]并且通过计数单个克隆的细胞数发现，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组单个克隆的细胞数明显低于对照组（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]P[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]＜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.01[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）。该实验同样表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达对小细胞肺癌细胞的增殖具有抑制作用。[/color][/size][/font][font='times new roman'][color=#000000] [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] [/color][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203030673_3184_5389809_3.png[/img][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203032295_6922_5389809_3.png[/img][/align][/td][/tr][/table][font='times new roman'][color=#000000]琼脂克隆形成实验。（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）软琼脂克隆形成实验镜下观察；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）克隆形成率；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]c[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）单个克隆形成的细胞数（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]***[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组克隆形成率及单个克隆的细胞数减小具有统计学意义，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.001[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）。[/color][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]影响人小细胞肺癌细胞的相关机制研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后肿瘤干细胞标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]为目前已知研究较为广泛的的肿瘤干细胞标志物，为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在人小细胞肺癌细胞系中与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的相关性，分别提取对数生长期[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，应用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在蛋白质水平的表达量。结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]所示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达量明显降低。表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的敲低降低了小细胞肺癌细胞的干性，并且[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]具有相关性。[/color][/size][/font][table][tr][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203030163_8814_5389809_3.png[/img][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203031179_6656_5389809_3.png[/img][/td][/tr][/table][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白的表达[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]:[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白条带；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相对表达量[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD133[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]、[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]CD44[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]蛋白表达下降具有统计学意义，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）。[/color][/font][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]是否对小细胞肺癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程产生影响，分别提取对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]N-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vimentin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达量，结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]N-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vimentin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量明显下降，而[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量增加，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后，小细胞肺癌细胞的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程受到明显抑制。[/color][/size][/font][table][tr][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203035586_9939_5389809_3.png[/img][/td][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102203034079_6990_5389809_3.png[/img][/td][/tr][/table][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白表达：（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白表达条带；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相对表达量（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]EMT[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]相关蛋白表达下降具有统计学意义，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）。[/color][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对人小细胞肺癌细胞凋亡过程的影响[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞凋亡是多基因调控的细胞程序性的死亡，为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在人小细胞肺癌细胞中对细胞凋亡的影响，提取对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-NC[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞总蛋白后，通过[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]验证细胞凋亡相关蛋白的表达，结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-sh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组凋亡相关蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved caspase9[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] c[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]aspase[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量明显上调，抗凋亡蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Bcl-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达下降，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达促进了小细胞肺癌细胞系凋亡过程。[/color][/size][/font][align=center][/align][align=center][/align][font='times new roman'][color=#000000]图[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]3-5 [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]凋亡相关蛋白[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表达：（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]a[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）凋亡相关蛋白表达条带；（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]b[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]）凋亡相关蛋白相对表达量（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.05,**[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]代表[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.01,[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]组凋亡相关蛋白表达下降具有统计学意义）。[/color][/font][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]主要研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响及相关机制，首先利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验及软琼脂克隆形成实验验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后小细胞肺癌细胞的生长增殖能力。结果显示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H69-shMSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]组细胞生长速度明显减慢，单个细胞克隆能力明显降低，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后抑制了小细胞肺癌细胞系的生长增殖。通过[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]western blot[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验检测肿瘤干细胞标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达。结果显示，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达后肿瘤干细胞标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的敲低降低了小细胞肺癌细胞的干性，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD133[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CD44[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达量可能与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]具有相关性，但具体机制尚不清楚，需进一步研究。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程是肿瘤转移[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程的关键步骤，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]敲低后间充质标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]N-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vimentin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降，而上皮标志物[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-cadherin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量增加，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]敲低抑制了[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]EMT[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过程。通过验证凋亡相关蛋白发现，凋亡相关蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved caspase9[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] c[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]aspase[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量明显上调，抗凋亡蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Bcl-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达下降，表明敲低[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后促进了凋亡的产生。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Wnt/[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]β[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-Catenin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]通路在细胞生长发育过程中具有重要作用，在多种肿瘤中表达失调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]β[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-Catenin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]是[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Wnt[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]信号通路关键下游靶点，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低表达使[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]β[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-Catenin[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达量下降，表明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在人小细胞肺癌细胞中也通过激活[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Wnt[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]通路发挥作用。[/color][/size][/font]
疟疾可通过激活天然免疫和特异性免疫反应，并抑制肿瘤血管生成，进而抑制肿瘤生长和转移；疟疾能让荷瘤的机体长期保存肿瘤特异性免疫记忆。广州科学家在肺癌的治疗研究上跨出可喜一步。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011092712042663.jpg广州科学家的研究表明，疟原虫感染（即疟疾）可抑制小鼠肺癌生长和转移。记者日前从中科院广州生物医药与健康研究院获悉，该院研究员陈小平领衔的团队与广州医学院呼吸疾病研究所所长钟南山院士合作开展的肺癌免疫治疗实验研究取得了系列进展，研究团队正在利用疟原虫作为载体研制治疗性肺癌疫苗。相关论文已于近日在线发表在美国《公共科学图书馆-综合》（PLoS ONE）。该论文以上述两个合作单位共建的呼吸疾病国家重点实验室为作者单位发表。灵感来源：疟疾发生越严重地区，肺癌发病率和死亡率越低陈小平说，他和他的团队最早关注到的是疟疾发病率跟肺癌发病率和死亡率成反比的关系。他说，通过对世界卫生组织数据库20多年来的数据进行分析，他们发现，疟疾发生越严重的地区，肺癌发病率和死亡率越低，反之亦然。即使在同一国家，“这种消长趋势也很明显。”于是，他们决定在小鼠身上做实验，以证明疟疾发生对肺癌是否有抑制作用。他们将小鼠分成两组，一组小鼠只打入肺癌细胞，另外一组同时打入疟原虫和肺癌细胞，然后进行观察。可喜发现：疟疾感染明显抑制小鼠肺癌的生长和转移经过5年的反复多批实验和观察，研究人员发现：没有经过疟原虫感染的小鼠肿瘤生长迅速，很快发生转移和死亡；经过疟原虫感染的小鼠肿瘤生长缓慢，很少发生转移，寿命显著延长，其中约有10%的小鼠肿瘤全部消退。研究人员进一步发现，当小鼠肿瘤生长到一定程度时，用手术摘除肿瘤病灶，然后将手术后的小鼠分为两组，一组接种疟原虫，另一组不接种疟原虫，结果显示，接种疟原虫小鼠的寿命显著比没有接种疟原虫的小鼠的寿命长。这提示，已经发生转移的肿瘤细胞也受到疟原虫感染的抑制。显然，疟原虫感染（疟疾）能够显著抑制小鼠肺癌的生长和转移，显著延长荷瘤小鼠的生存时间；同时，研究人员还发现，疟原虫感染能明显抑制肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤血管的生成。陈小平解释：“肿瘤血管的生成受到抑制，使肿瘤的供血不足，就可以抑制肿瘤的增大。”研究结果：疟疾可增强机体对肺癌免疫力陈小平介绍，研究人员进一步进行了免疫学机理研究。他们发现，疟原虫感染激活了小鼠机体的天然免疫系统，诱导产生了大量的IFN-γ和TNF-α等细胞因子，而IFN-γ和TNF-α对肿瘤就有很明显的抑制作用。同时，疟原虫感染还使小鼠机体内一种叫自然杀伤（NK）细胞的免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性明显增强。“机体内拥有的IFN-γ和TNF-α细胞因子和NK细胞属于一种天然免疫。”陈小平说，“感染疟疾会增强小鼠对肺癌的天然免疫力。”“疟疾还可以诱导产生一种针对肿瘤的获得性免疫反应。”陈小平解释，疟疾可以激活一种树突状细胞，增强其吞噬抗原的能力，并把抗原提交给一种可以抑制肿瘤细胞的T细胞。陈小平说，疟疾可诱导机体产生肿瘤局部及全身系统性的肿瘤特异性免疫反应，能使大约10%荷瘤小鼠的肿瘤完全消退，并能长期保存有效的肿瘤特异性免疫记忆。总之，疟疾可通过激活天然免疫和特异性免疫反应，并抑制肿瘤血管生成，进而抑制肿瘤生长和转移。前景：有望研发新型有效的治疗性肺癌疫苗“当然，我们现在的研究还只是在实验室阶段，还不能马上应用到临床肺癌病人的治疗。”陈小平说，不过，肿瘤的实验研究不像艾滋病研究那样需要猴模型等大动物模型，只要在小鼠模型实验成功，就可能申请临床试验。“也就是说，根据我们现有的研究结果，有可能考虑申请临床试验了。”陈小平说，这项研究有着积极的应用前景。“良性疟疾可能用于肺癌的免疫治疗，也可能作为携带肿瘤抗原的新载体用于开发新型有效的治疗性肺癌疫苗。”他说，研究还发现，疟原虫感染与肺癌DNA疫苗联合应用有明显的协同作用。“目前，我们已经在研发治疗性肺癌疫苗。”他说，“主要是把肿瘤抗原的基因克隆到疟原虫的基因组里，同时利用基因敲除法，敲除疟原虫的毒性基因，希望能够制成安全有效的治疗性肺癌疫苗。”关于疫苗制成的时间表，他说，尚不能确定。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011092712033212.jpgdoi:10.1371/journal.pone.0024407PMC:PMID:Antitumor Effect of Malaria Parasite Infection in a Murine Lewis Lung Cancer Model through Induction of Innate and Adaptive ImmunityLili Chen, Zhengxiang He, Li Qin, Qinyan Li, Xibao Shi, Siting Zhao, Ling Chen, Nanshan Zhong, Xiaoping ChenBackground：Lung cancer is the most common malignancy in humans and its high fatality means that no effective treatment is available. Developing new therapeutic strategies for lung cancer is urgently needed. Malaria has been reported to stimulate host immune responses, which are believed to be efficacious for combating some clinical cancers. This study is aimed to provide evidence that malaria parasite infection is therapeutic for lung cancer.Methodology/Principal Findings：Antitumor effect of malaria infection was examined in both subcutaneously and intravenously implanted murine Lewis lung cancer (LLC) model. The results showed that malaria infection inhibited LLC growth and metastasis and prolonged the survival of tumor-bearing mice. Histological analysis of tumors from mice infected with malaria revealed that angiogenesis was inhibited, which correlated with increased terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated (TUNEL) st
http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201112/2011121209251602.jpg肺腺癌是常见于非吸烟者的一种非小细胞肺癌形式，间皮瘤是能被石棉触发的一种罕见癌症。纽约大学癌症研究所研究人员正在从事于一种血液测试，这种血液测试的目的是测定与这些癌症形式相关的抗体，早期诊断疾病，甚至点出高风险的人。肺腺癌和间皮瘤癌细胞在它们的表面有聚糖生物标志物，病人甚至是早期的也有这些聚糖的抗体，研究人员已创造了用286个不同聚糖点提前制备的印刷聚糖芯片。作为高能量平台的一部分，这能被用于筛查血清样本来鉴定生物标志物。课题组正在比较来自患恶性间皮瘤病人的与接触石棉但无疾病症状的高疾病风险人的血清。虽然这个测试是在非常早的阶段，但它能帮助医生提醒有发生这些癌症风险的人。这可能尤其对可能没有被正式地筛查的非吸烟者有用，对那些可能对治疗反应不好需要更侵略性治疗方法牟疾病晚期病人也一样有用。这将允许为病人特定治疗和更好结果的治疗（与在医疗系统上更低负担一样），也能帮助鉴定药物发展的新路线。
中科院深圳先进技术研究院医工所医学成像研究中心张丽娟副研究员近期在非实性肺癌肿瘤负荷的定量研究方面取得进展，相关成果发表在Radiology杂志上。 倍增时间在判断肿瘤的性质及预后方面具有重要临床意义。不同于实性肿瘤，非实性肺癌在体积增加之前常存在一段不确定的“内生长”期，即肿瘤组织向肺泡内空间填充，组织学上表现为癌细胞沿肺泡表面的增殖，而肿瘤的径线并无改变。这种生长方式使得经典倍增时间计算方法不再适用，长期以来该疾病的临床诊疗也因此颇受困扰。 医学影像技术的发展使得使用计算机辅助断层成像在体估算肿瘤负荷成为可能。该研究联合应用医学病理及影像的方法，全面分析了非实型肺癌的内生长模式，并对其肿瘤负荷作了定量分析，首次发现肿瘤的影像密度值每增加100单位，肿瘤负荷约增加10%。 该研究为有非实性肺肿瘤的生长提供了有效的评估方法，对肺癌的诊疗有重要临床应用价值。同时，也为丰富肺癌的WHO分期提供了新的思路。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201207/W020120711526142827307.jpg
[align=center][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]小细胞肺癌精准治疗[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]策略简述[/back][/color][/size][/align][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]小细胞肺癌（[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]Small[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff] cell [/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]l[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]ung cancer, SCLC [/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]）约占所有肺癌的[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]13%-15%[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]，是所有胸部恶性肿瘤中最具侵袭性的一种，且以其临床恶性程度高，高度异质性，复发转移快，预后极差而闻名。在大多数情况下，[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]S[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]CLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]患者被确诊时已处于广泛期，并且由于其高度异质性目前还没有发现经临床验证的[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]个性化治疗的生物标记物，这是[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]治疗的一个局限性。在过去的几十年里，[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]被视为同质性疾病，标准的治疗方法实际上是一刀切的方法，即[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]针对临床病理类型选择规范的化疗和适当剂量的放疗相结合的方式[/back][/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]，包括[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]4[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]到[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]6[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]个周期[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]的顺铂和[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]依托泊[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]苷[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]化疗，附加胸部放疗（[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]TRT[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]）和预防性颅脑照射（[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]PCI[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]）[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]。[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]然而最近，世界范围内对[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]的研究重新兴起，包括对患者来源的异种移植（[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]PDXs[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]）和基因工程小鼠模型（[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]GEMMs[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]）的开发、全面的基因组图谱、以及生物学上不同分子亚型的鉴定[/back][/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]。依据最新研究结果，人们根据[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]ASCL1[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]、[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]NEUROD1[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]、[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]POU2F3[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]和[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]YAP1[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]转录调节因子转录水平的相对表达将[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]界定为[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]S[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]CLC-A[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]、[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]S[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]CLC-N[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]、[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]S[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]CLC-P[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]和[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]S[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]CLC-Y[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]四个不同的亚型[/back][/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]。其中[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]S[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]CLC-Y[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]亚[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]型[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]可能[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]具有高[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]YAP1[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]表达和独特的[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]T[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]细胞炎症表型[/back][/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]，而随后[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]Carl M. Gay[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]等人又将这一分型归为免疫型即[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]S[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]CLC-I[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]型，它[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]是一种神经内分泌[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]标志物[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]低[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]表达的[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]亚型，组织学上被确定为炎症免疫表型，免疫浸润和抗原呈递增强[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]，可能对[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]免疫治疗的反应更灵敏[/back][/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]。有研究发现[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]以高[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]ASCL1[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]、[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]DLL3[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]和[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]SLFN11[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]为特征的[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]SCLC-A[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]亚型对[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]DLL3[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]抑制剂、[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]PARP[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]抑制剂以及[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]BCL-2[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]抑制剂敏感；[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]SCLC-N[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]亚型由于表面蛋白生长抑素受体[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]2[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]增加，对生长抑素类似物敏感，并且已发现对极光激酶抑制有反应；[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]-[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]P[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]亚型对[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]PARP[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]抑制剂和抗代谢物有反应[/back][/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]4-7[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]。随着我们[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]对[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]亚型的分子特征探索的进一步加深促进了我们对[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]肿瘤内异质性和特定基因改变的理解，更重要的是，这些生物学上不同亚型治疗方法的探索可能会成为[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]S[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]CLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]精准治疗的一个突[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]破口。因此，寻找可识别的可以将患者分层的生物标记物并在治疗的更早阶段有针对性的进行靶点干预，[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]这是迈向精准肿瘤学或生物标记物驱动方法的下一步，[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]并且有[/back][/color][/size][size=16px][color=#333333][back=#ffffff]可能最终改善这种顽固性癌症患者的临床结果。[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]尽管最初对化疗和放射敏感，但往往在治疗后很快复发并发展为获得性耐药，预后很差，这归因于[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]的肿瘤异质性。造成[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]SCLC[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]异质性的原因除了[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]TP53[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]、[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]RB1[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]、[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]MYC[/back][/color][/size][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]等关键原癌基因的反复突变激活外，抑癌基因的表观遗传抑制也参与其中[/back][/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]8-10[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#000000][back=#ffffff]。[/back][/color][/size]
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512262201_579607_3004888_3.png 自2000年开始，肿瘤就已经超过了心脑血管疾病，成为世界头号“死神”——每年有超过500万人死于肿瘤。为了激发全球共同攻克癌症的决心与期盼，UICC于2000年发起了“世界癌症日”活动，就在今年，又发布了两个惊人的统计数据，又一次给我们敲响了防癌控癌的警钟。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512262202_579608_3004888_3.png 消息一：据北京市肿瘤防治办公室专家透露，10年间，北京市肺癌的发病率约增长了43%，肺癌的发病年龄趋于年轻化； 消息二：中国首个评估PM2.5长期暴露对公众健康所产生影响的研究报告出炉，报告指出，大气PM2.5污染导致全国31座省会城市或直辖市中25.7万人超额死亡，超额死亡率平均接近1‰。而在超额死亡的病例中，有相当一部分是肺癌。 肺癌，我国发病率、死亡率均位于第一的癌症，现在死亡率还在以每年4.45%的速度在上升。2006年我国第三次居民死亡原因抽样调查结果显示，肺癌占全部癌症死亡的22.7%。中国抗癌协会科普宣传部部长、北京宣武医院胸外科主任支修益形象地比喻肺癌为被烟气、大气、油气、生气等“气”出来的病。 吸烟、环境污染、职业接触、肺部慢性病以及遗传基因易感性等是导致肺癌的主要原因。虽然吸烟一直被认为是导致肺癌的第一诱因，可近年来的多项研究表明，伴随着控烟措施的推行，吸烟导致的肺癌发病率上升势头得到明显控制，但与环境影响呈正向相关的肺癌发病率却出现飞速上涨势头。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512262202_579609_3004888_3.png 在北京、天津等雾霾高发地区，肺癌的发生率明显高于全国平均水平。北京市肿瘤防治办公室副主任王宁说，北京市肺癌发病率由2002年的39.56/10万上升至2011年的63.09/10万，已远远高出全国平均水平。天津市的肺癌发病率约为60/10万，新发癌症患者中有1/5为肺癌患者，且呈现明显年轻化趋势。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512262203_579610_3004888_3.png 去年国际癌症研究机构（IARC）已把大气污染认定为致癌物，严格地讲，大气颗粒物，也就是所谓的PM2.5，是一种确认的人类致癌物。北京的生活节奏、工作强度之大，估计也只有身在北京的人才能深刻体会到！生活在北京真的太不容易了，关注健康已经刻不容缓！
[align=center]分子检测指导下的肺癌精准治疗策略[/align][size=16px]肺癌是最常见的恶性肿瘤，也是恶性肿瘤死亡的主要原因。随着肿瘤分子生物学研究的不断深入发展以及检测技术的提高，肺癌治疗开始进入分子检测指导下的精准治疗时代，更多免疫调控分子和新的免疫检查点的不断被发现，使免疫治疗成为未来肺癌等肿瘤治疗的重要发展方向。[/size][size=16px]目前，在肺癌中获批（[/size][size=16px]FDA[/size][size=16px]）或已写入[/size][size=16px]NCCN[/size][size=16px]指南的抗[/size][size=16px]PD-1[/size][size=16px]以及抗[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]药物主要包括以下几种：抗[/size][size=16px] PD-1[/size][size=16px]抗体包括：[/size][size=16px]Nivolumab[1][/size][size=16px]，[/size][size=16px]Pembrolizumab[2,3][/size][size=16px]；抗[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]抗体包括：[/size][size=16px] Atezolizumab [4,5][/size][size=16px]，[/size][size=16px]Durvalumab[6][/size][size=16px]。整体来看，免疫治疗相对于传统的细胞毒性治疗，在治疗有效的人群中，能有效的减低副作用，并能长期获益。此外，相比于免疫单药治疗，联合治疗可提高疗效，延长患者的生存时间。目前免疫治疗单药在实体瘤中的[/size][size=16px]ORR[/size][size=16px]大都在[/size][size=16px]20%[/size][size=16px]左右，而采用联合治疗的策略比如联合化疗，抗肿瘤血管生成药物治疗等，其[/size][size=16px]ORR[/size][size=16px]则可提高至[/size][size=16px]50%[/size][size=16px]以上。[/size][size=16px]目前，关于免疫治疗疗效预测标志物，[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]表达、[/size][size=16px]MSI[/size][size=16px]状态以及[/size][size=16px]TMB[/size][size=16px]已被写入[/size][size=16px]NCCN[/size][size=16px]指南，作为一些免疫药物用药的伴随指标。然而，这几项指标亦不是免疫治疗的理想预测因子，比如并不是所有的[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]阳性患者均能从免疫治疗中获益，同时，部分[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]阴性的患者仍能从中获益。因此，免疫治疗的疗效预测标志物，特别是免疫联合治疗的生物标志物，仍需要进一步探索。[/size][size=16px]肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤[/size][size=16px],[/size][size=16px] [/size][size=16px]免疫治疗引领了多个肿瘤治疗领域的变革，给肺癌患者带来了极大的生存获益。然而，不管是免疫单药还是联合治疗，仅有部分患者可以从治疗中获得持久疗效和长期生存。目前，针对如何实现精准免疫治疗，研究者开始了诸多尝试，探寻生物标志物。除去已被写入指南的免疫治疗生物标志物（[/size][size=16px]PD-1[/size][size=16px]表达、[/size][size=16px]TMB[/size][size=16px]以及[/size][size=16px]MSI/[/size][size=16px]dMMR[/size][size=16px]）外，肿瘤新抗原（[/size][size=16px]TNB[/size][size=16px]）、免疫微环境相关的肿瘤免疫浸润淋巴细胞（[/size][size=16px]Tumor infiltrating lymphocyte, TILs[/size][size=16px]）和[/size][size=16px]T[/size][size=16px]细胞炎性基因表达谱（[/size][size=16px]GEP[/size][size=16px]）等，以及其它一系列与免疫治疗疗效相关的正、负驱动基因突变、[/size][size=16px]免疫超进展[/size][size=16px]的相关的因子等都分别已有相关研究报道。[/size]
[align=center][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在肺癌诊断中的应用[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]引言[/size][/font][font='宋体']外泌体作为重要的信息载体，参与肿瘤的发生、进展、转移和化疗耐药等过程，外泌体携带大量的遗传物质，已成为液体活检最理想的分析目标。外泌体也是目前最有前途的非侵入性诊断和预后的生物标志物之一。目前，超速离心法是外泌体分离的金标准。为了实现外泌体的临床价值，本研究以超速离心法富集了人血浆中的外泌体，并对健康人及肺腺癌患者的血浆样品做了区分，用于下游的肺癌诊断[/font][font='宋体']。[/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体用于肺癌诊断的策略[/size][/font][/align]肺癌仍然是世界范围内癌症相关死亡的主要诱因，因为大多数患者被诊断时均为晚期。因此，我们初步评估了超速离心法富集外泌体用于肺癌诊断的潜在适用性。我们收集了6名健康捐赠者和6名肺癌患者的血浆样本。利用超速离心法富集1 mL血浆样本中的外泌体，对比健康捐赠者和肺癌患者的血浆外泌体，结合数据分析，评估血浆外泌体在监测肺癌诊断方面潜在的适用性。[align=left][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]血浆中外泌体表征[/size][/font][/align]测试了超速离心法对复杂血浆样品的适用性。首先，利用纳米颗粒示踪分析对超速离心法得到的血浆外泌体进行了表征。如图（a）所示， 纳米颗粒示踪分析显示分离的外泌体粒径分布同样较窄，平均粒径为128.8 nm。与细胞上清样品类似，Western blot方法验证了分离外泌体的有效性。如图（b）所示，经富集后，典型的低丰度外泌体标记物同样得到了有效检测。以上结果证明，超速离心法能[img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img]够成功的用于血浆中外泌体的富集。[align=center][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px] （a）重悬液中血浆外泌体的[/size][/font][font='黑体'][size=14px]纳米颗粒示踪分析技术[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征，（b）[/size][/font][font='黑体'][size=14px]Western blot方法[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征血浆[/size][/font][font='黑体'][size=14px]外泌体标记物HSC70、TSG101、CD63和CD9[/size][/font][font='黑体'][size=14px]蛋白条带[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体用于肺癌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]诊断[/size][/font][/align][font='宋体']我[/font]们收集了6名健康捐赠者和6名肺癌患者的血浆样本。利用超速离心法富集血浆样本中的外泌体。采用纳米颗粒示踪分析技术对血浆外泌体标进行表征。如图所示，与健康对照组相比，肺癌患者的血浆外泌体显著上调。对比健康捐赠者和肺癌患者的血浆外泌体，结合数据分析，证明血浆外泌体在监测肺癌诊断方面具有潜在的适用性。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310171534194891_9083_6197575_3.png[/img][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px] [/size][/font][font='黑体'][size=14px]健康人与肺癌患者血浆中外泌体的[/size][/font][font='黑体'][size=14px]纳米颗粒示踪分析[/size][/font][font='黑体'][size=14px]技术[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征[/size][/font][/align][align=left][font='黑体'][size=18px]小结[/size][/font][/align]超速离心法可以高效、特异性地从人血浆中富集、纯化外泌体，在此我们评估了超速离心法在复杂血浆样品中的适用性。肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因，因为在原发癌症扩散之前进行早期诊断具有挑战性。以6例肺癌患者(6例健康供者为对照)的人血浆为样本，进一步研究超速离心法富集外泌体在肺癌筛查和诊断中的应用。这些结果证实了血浆外泌体在肺癌筛查和监测中的应用潜力。
首个治疗肺癌新药益肺清化颗粒出口马来西亚 在日前于北京召开召开的世界卫生组织传统医药大会上近上，马来西亚有关人员表示，该国卫生部已正式批准批量进口由中国中医科学院研制的肺癌治疗新药——益肺清化颗粒。 益肺清化颗粒是中国中医科学院首席研究员、全国中医肿瘤医疗中心主任朴炳奎教授在主持国家“七五”、“八五”攻关课题“益气养阴清热解毒制剂治疗中晚期原发性肺癌的临床与实验研究”基础之上，研制出的治疗肺癌的新成果，该成果曾获中国中医科学院及国家中医药管理局科技进步奖，并受到美国国立卫生研究院癌症中心的高度关注并开展了相关研究合作。经由中国中医科学院广安门医院为临床负责单位，联合12家省级肿瘤医院协作验证，通过对几百例肺癌患者临床观察验证，新药“益肺清化”在临床患者有效率、肿瘤病灶稳定率，生存质量提高率及提高免疫功能、一二三年生存率及生存时间方面均明显高于对照组。 信息来源:经济参考报
铂类药物是一类重要的肿瘤化疗药物，在临床中得到广泛的应用，成为治疗包括肺癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、睾丸癌等常见恶性肿瘤的一线药物。然而，目前临床使用的铂类抗癌药物对肿瘤细胞缺乏选择性，在杀死肿瘤细胞的同时，对正常细胞也有较大伤害，导致明显的临床毒副作用。同时，肿瘤病人容易对铂类药物产生耐药性，导致化疗失败。 针对铂类药物存在的以上两大问题，中国科学院昆明植物研究所李艳研究组与昆明贵金属研究所刘伟平研究组合作，发现mixed-NH3/cyclopentamine和不对称的3-X-1,1-cyclobutanedicarboxylato与Pt(II)配合物对肿瘤细胞显示出明显的选择性，能选择性诱导肿瘤细胞的凋亡，而对正常细胞影响很小，同时对顺铂耐受的非小细胞肺癌和卵巢癌细胞株有较高的杀伤活性，显示出重要的研究开发前景。 近日，这类化合物的结构和用途已经获得国家发明专利授权（ZL20101027465.2）。
[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/11/200811300112_121038_1600687_3.jpg[/img]今年11月是第八个“国际肺癌关注月”。11月4日，在卫生部疾病预防控制局、中国抗癌协会主办的“对话希望—关注中国肺癌治疗”新闻发布会上，中国医师协会胸外科医师分会常务副会长兼总干事、中国癌症基金会控烟与肺癌防治部主任支修益教授指出，我国每年约有60万人死于肺癌，肺癌已经成为累计危险性最高的癌症。如何防控恶性肿瘤，已成为全社会迫在眉睫的难题。要解决这个难题，支修益的答案是“戒烟”，“吸烟是肺癌发病的第一元凶，超过八成的肺癌病人死亡与吸烟相关。如果真能实现全面禁烟，降低肺癌的发病率会容易得多。”
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104160845_289146_2185349_3.jpg吃辣椒导致肺癌？最近，某著名的“养生大师”在某电视台的某节目上宣称，自己看到国外有专家小组“终于发现抽烟不是得肺癌的原因，而是吃辣椒导致的”。“大师”对这个“新发现”颇为不屑，因为“咱们的中医老祖宗几千年前就说了，吃辣椒伤肺，不能过辣……”
[b][size=15px][color=#595959]麦门冬合千金苇茎汤(金方)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是中国治疗肺痈的经典方剂，麦门冬汤源于中医经典《金匮要略》，千金苇茎汤来源于《千金要方》。金方在长期临床实践中被证明对[/color][/size][size=15px][color=#595959]肺癌[/color][/size][size=15px][color=#595959]治疗有效。研究表明，金方可以增强[b]肺癌[/b]化疗患者的治疗效果，改善[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]生活质量[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]，减少不良反应。此外，[b]金方联合顺铂(DDP)[/b]对A549?细胞移植[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]肿瘤[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]的生长有显著抑制作用。然而，金方治疗肺癌的确切机制尚不清楚。 [/color][/size] [size=15px][color=#595959]评价金方联合顺铂(Jin + DDP)的[b]体内外抗肿瘤作用[/b]，探讨[b]长链非编码RNA[/b] (lncRNA)在其抗肺癌作用中的作用机制。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]采用C57 BL/6小鼠建立Lewis肺癌模型，研究金方联合顺铂的体内抗肿瘤作用。采用TUNEL染色和western blot方法观察金方联合顺铂[b]对细胞凋亡[/b]的影响。通过细胞活力测定、流式细胞术、创面愈合试验和transwell试验，探讨晋方联合顺铂的[b]体外抗癌[/b]作用。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]通过[b]lncRNA芯片检测lncRNA表达谱的变化[/b]，并通过定量反转录聚合酶链反应(qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url])分析验证[b]lncRNA-p21[/b]的差异表达。采用[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]生物信息学[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]方法分析lncRNA-p21在肿瘤和正常组织中的表达差异，采用qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]方法检测lncRNA-p21在[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]肿瘤细胞[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]和正常细胞中的表达差异。通过敲低或过表达lncRNA-p21及一系列细胞实验研究lncRNA-p21在金方联合顺铂抗癌中的作用。western blot检测[b]MAPK通路[/b]相关蛋白的表达。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]金方联合顺铂(Jin + DDP)可抑制Lewis肺癌小鼠模型肿瘤生长，促进细胞凋亡。LncRNA-p21在JIN和JIN + DDP组中显著上调，且LncRNA-p21在肺癌组织和细胞中的表达低于正常组织和细胞。[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]JIN + DDP在体外显著诱导H460和H1650肺[/color][/size][size=15px][color=#595959]癌细胞[/color][/size][size=15px][color=#595959]凋亡，抑制其增殖、迁移和侵袭[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。[b]过表达lncRNA-p21可增强上述作用[/b]，敲低lncRNA-p21可消除上述作用。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]进一步的研究发现，[b]JIN + DDP抑制了丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白的表达[/b]，而lncRNA-p21的敲除则消除了对MAPK信号通路的抑制。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [align=center] [/align] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]该研究表明[b]金方联合顺铂可通过靶向lncRNA-p21部分有效抑制肺癌的进展[/b]。这些结果为金方联合DDP在临床治疗肺癌提供了新的依据。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]
24日，期刊JAMA Oncology刊载范德比尔特大学的研究，在汇总140万人的饮食和肺癌发病率数据后，研究人员之后8年的随访中发现，喝酸奶多的人(平均每天约90-120毫升)患肺癌的可能性比不喝酸奶的人低19％。肺癌主要由肺部炎症引起，肠道微生物组在对减轻炎症中起着重要的作用。
21日，礼来制药和信达生物宣布，双方联合开发的国产PD-1治疗肺癌药适应证上市，或惠及超半数肺癌患者；
[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903251131_140444_1621459_3.jpg[/img]昨天（23日），广州又是一个灰霾天气。昨日（23日）的气象日论坛上，中国气象局广州热带海洋气象研究所首席研究员吴兑介绍，珠三角的灰霾程度在国内发达地区最轻，但过去10年华南地区空气污染物浓度有增无减，灰霾将取代吸烟，成为肺癌的头号杀手。 国内空气污染未算灰霾 据介绍，长三角、珠三角和京津渤地区是政治、经济发展前沿地区，空气污染程度也位居前列。 广东近几年花大力气治理灰霾，“老是说空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]量优、良，但天总是灰的。”不少人都有这样的感觉，吴兑解释，目前环保部门的空气污染指数评定对象中，没有把灰霾的特征污染物细粒子纳入进去，所以空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]量并没与灰霾直接挂钩。 另外，空气中的污染物浓度从20微克/立方米减少到40微克/立方米，能见度就会从40公里减少到10公里，但污染物浓度从40微克/立方米减少到120微克/立方米，能见度只是从10公里减少到7、8公里。“政府的治污力度非常不容易，但市民不容易看到成效。” 灰霾评定标准年内出台 吴兑表示，国家气象部门已经委托广东省气象局编制全国灰霾评定标准，拟把灰霾的标准界线定为“污染物浓度为65微克/立方米”，即高于此标准属于灰霾，低于就属于良好。这个《霾天气的观测与预报》本月将向全国各相关部门及60位专家征询意见，下月上旬把初步标准上报国家审查，预计年内正式出台。 卫星观察显示，在过去10年，华中和华南的气溶胶和气体污染物浓度变得非常高。吴兑分析了广州52年的地面灰霾历史测量数据，表明1954年－2006年间肺癌发生率伴随空气污染事件的显著增长而大幅增加。统计数据表明，空气污染在相当大的程度上提高了呼吸道发病率和心肺疾病死亡率，空气中悬浮粒子引起肺癌的潜在周期是7年，也就是说灰霾将取代吸烟，成为肺癌的头号杀手。
文章来源：新华网 时间：2012.06.03 新华网专电 美国医疗研究团队说，两种增强免疫能力的抗癌新药在试验初期阶段显现良好效用，有必要扩大研究在更多患者中试验疗效。 这两种药物由美国百时美施贵宝公司研发。药物的基本药理是，一边打破肿瘤细胞的防护层，一边促进人体免疫系统，而后靠人体免疫系统“主动反攻”癌细胞。 大约５００名癌症患者参与两种药物的初期试验，这些患者患有非小细胞肺癌、黑素瘤皮肤癌或肾癌，一般临床疗法对他们已验证无效。法新社２日报道，这些患者在使用两种新药后，肿瘤明显收缩。 两种新药均为蛋白质阻断药。编号为ＢＭＳ－９３６５５８的药物可阻断ＰＤ－１型蛋白，编号为ＢＭＳ－９３６５５９的药物可阻断ＰＤ－Ｌ１型蛋白。先前研究表明，阻断这两种蛋白可能激活免疫系统中的Ｔ细胞，使受感染Ｔ细胞重新恢复“抗敌”效用。 在使用ＢＭＳ－９３６５５８药物的群体中，非小细胞肺癌患者、黑素瘤皮肤癌患者、肾癌患者均出现肿瘤收缩的积极信号，有明显疗效的比例分别是１８％、２８％和２７％；而在使用ＢＭＳ－９３６５５9药物的群体中，三个比例分别是１０％、１７％和１２％。 对两种药物不应答的患者比例分别是５％和９％。 研究参与者、美国霍普金斯大学外科与肿瘤学教授苏珊·托帕利安说：“由于药物持续表现出积极作用，我们相信有必要推进临床新研究。”
http://www.stdaily.com/stdaily/pic/attachement/jpg/site2/20120113/00241d8fef0e1079d1f91e.jpg美国陆军开发出超级抗癌药物腾讯科技讯（亮亮/编译） 据国外媒体报道，来自美国陆军部队的专家近日在位于德克萨斯州的圣安东尼奥市军事医疗中心成功研制出一种名为“E-75”的超级抗癌药物，对多种肿瘤的治疗都具有很好的效果。据了解，研究人员研制这种化学药物最开始的初衷是为了降低乳腺癌的再发率，但在研究的过程中，研究人员却意外的发现这种药物同时还具有其他的功效。因为，那些吞服了这种药物的人们与服用普通控制药物的人们相比，前者患上结肠癌、前列腺癌、肺癌的概率有了明显的降低。研究人员在实验中选择了一些经基因测试或医疗审定后，被断定为有患上乳腺癌危险的女性，并将其分为两组，一组吞服控制性药物，另一组吞服了“E-75”药物。研究结果显示，吞服“E-75”药物的研究对象的乳腺癌再发率仅有10%，而吞服控制药物的一组竟高达20%。这就意味着超级抗癌药物“E-75”具有着正面积极的保护作用。研究人员之所以会选择这样的研究方法，是因为避免出现类似人们在感染流感后再注射流感疫苗的现象。研究人员解释说，抗癌药物“E-75”的“工作方式”相对来说较为简单，它能够成功的在人们体内建立一个特有的免疫系统，这种系统能够搜寻、识别以及确认呈现在多种类型癌细胞表面的蛋白质，从而对应的进行免疫。但是并不是所有肿瘤都是由分泌这种蛋白质分子的细胞组成的，这也是为何抗癌药物“E-75”不能治疗目前所有癌症类型的主要原因。而且，抗癌药物“E-75”在人体内所建立的特有免疫系统不能击败所有癌症细胞的主要原因之一，还因为有一些癌细胞具有“欺骗”免疫系统的功能，以至于当免疫系统进行识别时，会把这些癌细胞误认为是人体的一部分。但是一旦免疫系统“揭穿”这些癌细胞的“伪装面具”，它们就会毫不留情的对这些癌细胞进行消灭，不留任何一个“活口”。但是即便这样，研究人员仍然坚信，只要在该药物的基础上继续进行研究，未来一定会出现治疗癌症的新型药物和治疗方法，它们定会拥有帮助全世界数百万人改善生活质量的巨大潜力。研究人员表示，它们在过去几十年的主要研究任务就是激活该独特的免疫系统，这也是与癌症“战斗”的主要方法之一。该军队的陆军上校补充解释道，现在出现的关键问题是大多数癌症疫苗在被发现时，癌症患者往往已经处于癌症末期或晚期，因此通过直观的方式去检查是没有意义的。(中国科技网)
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302171510_425634_1608710_3.jpg今天早上，北京又迎来雾霾天气，刚巧今天在网上看到一个研究，给大家共享。PM2.5竟然与肺癌致死率相关，已经是不可忽视的民生问题，你又是如何看待PM2.5与霾的关系呢
针对西南合成制药股份有限公司４名制药工患肺癌死亡的事件，昨天，卫生部经过调查后通报，已对该公司予以罚款１５万元的行政处罚；同时关闭该公司酮基布洛芬（ＫＰ）车间。 ２００６年１１月１４日，媒体报道了西南合成制药股份有限公司二分厂酮基布洛芬（ＫＰ）车间发生４名职工患肺癌死亡的情况。 卫生部立即要求重庆市卫生局及时组织有关人员调查核实。 经核查，该公司存在四大主要问题：一是未认真落实职业病防治法律法规规定的职业健康监护等有关法律制度，职业病防治工作不到位；二是轻视职业病危害对劳动者健康造成的后果。事件发生后没有采取积极有效的措施控制危害、改善劳动条件。对监督检查提出的整改意见应付拖延；三是对接触有毒害作业劳动者的健康监护不到位，缺乏动态的劳动者健康资料。未开展作业场所危害检测评价工作；四是职业病防护设施不能有效运行，劳动者个人防护用品没有发放记录。
国际学术期刊Cell Research于4月24日在线发表了中科院上海生命科学研究院生化与细胞所刘默芳组关于Onconase抑制恶性间皮瘤细胞microRNA（miRNA）表达的最新研究成果。该工作与上海南方模式生物研究中心王庆诚教授合作完成。 Onconase是从北方豹蛙卵或胚胎中提取的一种核糖核酸酶，是RNase A超家族中最小的成员，目前已被欧盟、澳大利亚和美国FDA批准作为罕见病药物（Orphan drug）用于恶性间皮瘤临床治疗使用。因接触石棉是其主要诱因，恶性间皮瘤也俗称为石棉癌，该恶性肿瘤预后极差，至今尚无有效的治疗措施。Onconase特异性地诱导癌细胞凋亡，而对正常细胞的毒性较低，对非小细胞肺癌、乳腺癌等的临床试验目前也正在进行中。然而，作为一种很有前景的抗肿瘤药物，Onconase的细胞毒性机理尚不完全清楚。 miRNA在肿瘤发生发展中有重要作用。刘默芳研究组研究生乔萌和祖立东等发现，Onconase对恶性间皮瘤细胞的miRNA表达具有普遍下调作用，而对细胞中一些oncomiR（如miR-155和miR-21）的下游靶基因，如socs1、pten、pdcd4等肿瘤抑制基因有明显上调作用。有趣的是，该工作发现Onconase降解miRNA前体，而对miRNA成熟链无明显作用；与之一致的是，Onconase抑制Dicer对miRNA前体的加工、降低Dicer生产成熟miRNA。进一步的研究发现，Onconase对miRNA前体的切割位点偏好于U-G和U-U。 该工作揭示了Onconase抗癌活性的一种新机制，完善了Onconase的抗癌作用机理，为与Onconase有关的更加合理、有效、安全的用药提供了科学依据。 该项研究工作得到了科技部、国家自然科学基金委、中国科学院及上海市科委的资助。
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