血清维生素检测

本文使用岛津临床质谱LCMS-8050CL，建立了血清中4种维生素D代谢产物的联合检测方法并进行了部分方法学验证；使用该方法检测了120例临床高值样本，发现其中16例样本可能存在CYP24A1缺陷并伴有高钙血症风险。实验结果表明，该方法线性关系良好、灵敏度高、检测稳定性好，适用于血清中1,25-二羟基维生素D 3、24,25-二羟维生素D3、25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3的定量分析，能够为临床上非 PTH 介导的高钙血症的风险评估和诊断提供参考方法。

使用岛津临床质谱建立了血清中9种水溶性维生素的检测方法。该方法线性良好，校准曲线相关系数均大于0.99；质控测定的准确度均在89.90%~105.40%之间；质控测定的精密度RSD均在1.02%~4.69%之间。该方法检测效率高、准确性好、可靠性出色，可用于人体内水溶性维生素的精准检测，为临床医学提供参考依据。

本文使用岛津On-line HPLC生物样品分析系统Co-Sense for BA，建立了快速检测人血清中维生素A含量的测定方法。该方法在5 min内即可完成血清样品处理及检测，维生素A的检出限可达1 ng/mL，在10 - 1000 ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数r大于0.9999。低、中、高三浓度加标样品精密度实验结果显示保留时间RSD小于0.15%，峰面积及测定浓度的RSD小于1.2%，三浓度样品加标回收率均在95% - 105%之间。实验结果表明，该方法能快速稳定准确地测定人血清中维生素A的含量。

本文使用岛津超高效液相色谱三重四极杆质谱联用仪，建立了血清中维生素K2测定方法，对方法的线性范围、准确度及精密度进行了考察。结果显示该方法线性良好，质控品测定准确度结果与理论值接近，该方法前处理简便、分析速度快、灵敏度高，可用于血清中维生素K2含量测定。

分析血清中的维生素 A 和维生素 E 时，临床研究实验室需要可靠的分析方法和准确的检测。对分析性能和通量的需求呈稳步上升趋势，这对传统分析技术提出了更高要求。我们已开发出一种使用 SPE/MS/MS 系统分析血清中维 生素 A 和维生素 E 的分析方法，与传统检测方法相比，这种方法具有更短的样品分析周期，可得到相似的分析结果。经过简单的蛋白质解离、稀释，然 后使用 Agilent RapidFire 高通量质谱系统进行分析，可以精准地测定人血清中的维生素 A 和维生素 E 分析物，线性范围分别为 0.1-5 µ g/mL 和 0.4-20 µ g/mL。 RapidFire/MS/MS 系统每 15 秒分析一个样品，与传统方法相比，这种方法能够提供更高的通量。

本文建立更简便、快速、准确、灵敏的测定血清维生素 C 含量的方法, 并对血清维生素 C 稳定性进行研究。方法血清样品经 10% (vö v) 偏磷酸溶液提取, 旋涡混匀 30 s, 离心 10 m in (4 000 rö m in, 4 ℃) 后, 用带二极管阵列检测(DAD )的高效液相色谱(H PL C) 仪对维生素 C 进行定性定量分析, 流动相为 100 mmo lö L KH2PO 4, pH 值为 310, 检测波长为 243nm , 流速为 1 m lö m in。用此方法测定不同处理和储存条件下的血清维生素 C 含量, 比较其稳定性。结果 在上述色谱条件下, 血清中维生素 C 能得到良好分离, 该方法的日内变异系数和日间变异系数分别为 0142% 和 2111% 回收率范围为82%～ 8815% 维生素C 的最低检测限为 0105 Λgö m l。在对血清维生素C 稳定性的研究中, 发现血清维生素C 在放置过程中很容易被氧化降解, 其偏磷酸提取液相对稳定, 但在 5 d 后含量也开始明显下降, 到第 44 d 后血清和提取液中维生素 C含量均几乎完全消失。结论 建立了高速、高效、高灵敏度的测定血清维生素 C 含量的H PL C 法 血清维生素 C 在保存过程中极不稳定, 获得样品后应立即测定, 当无条件立即分析样品时, 也应将样品用偏磷酸提取, 并将提取液冷冻保存在- 70℃, 5 d 以内分析完毕。

本文使用岛津On-line HPLC生物样品分析系统Co-Sense for BA，建立了快速检测人血清中维生素A含量的测定方法。该方法在5 min内即可完成血清预处理样品在线净化、富集及检测，维生素A采用内标法定量，检出限可达1 ng/mL；在10 - 1000 ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数r大于0.9998；精密度实验结果显示保留时间RSD小于0.1%，峰面积及测定浓度的RSD小于0.9%，仪器精密度优异；低、中、高浓度加标样品回收率均在95% - 105%之间。实验结果表明，该方法能快速稳定准确地测定人血清中维生素A的含量。

建立了人血清中维生素A的分散液相微萃取（dispersive liquid phase microextraction，DLPME）- 高效液相色谱分析方法。[方法] 取血清20μl，加入50μl甲醇，漩涡震荡10s后加50μl三氯甲烷超声萃取，高速离心后吸取下层三氯甲烷层供高效液相色谱分析，标准曲线法定量。色谱分析条件为：色谱柱为Eclipse XDB - C8 （150 mm × 4.6 mm，5μm ）；流动相为甲醇-水（96+4）；流速为0.80 ml/min ；柱温为25℃；紫外检测波长：维生素A为325nm。[结果]维生素A标准曲线的相关系数均大于0.999；相对标准偏差均小于5%。对于20μl血清，本法的检出限维生素A为0.035μg∕ml。维生素A和的加标回收率分别为90.4%～103.2%和81.0%～92.1%。[结论] 本法灵敏、准确、快速、简便，节约有机溶剂，适合于血清中维生素A的快速测定，是环境友好型的绿色分析方法。

建立了人血清中维生素E的分散液相微萃取（dispersive liquid phase microextraction，DLPME）- 高效液相色谱分析方法。[方法] 取血清20μl，加入50μl甲醇，漩涡震荡10s后加50μl三氯甲烷超声萃取，高速离心后吸取下层三氯甲烷层供高效液相色谱分析，标准曲线法定量。色谱分析条件为：色谱柱为Eclipse XDB - C8 （150 mm × 4.6 mm，5μm ）；流动相为甲醇-水（96+4）；流速为0.80 ml/min ；柱温为25℃；紫外检测波长：维生素E为292nm。[结果]维生素E标准曲线的相关系数均大于0.999；相对标准偏差均小于5%。对于20μl血清，本法的检出限维生素E为0.09μg∕ml。维生素E 的加标回收率分别为90.4%～103.2%和81.0%～92.1%。[结论] 本法灵敏、准确、快速、简便，节约有机溶剂，适合于血清中维生素E的快速测定，是环境友好型的绿色分析方法。

本文使用岛津临床用液相色谱三重四极杆质谱仪LCMS-8050 CL及广州达瑞品牌脂溶性维生素检测试剂盒（串联质谱法），建立了人体血清中维生素A、25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3和维生素E四种脂溶性维生素同时测定的方法。该方法专属性良好，标准曲线相关系数均大于0.994，准确度及精密度均满足试剂盒要求。该方法对维生素A/D/E 缺乏的临床判断、治疗管理和生理评估具有辅助诊断的意义。

人维生素B9检测试剂盒人维生素B9检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人维生素B9含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人维生素B9水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人维生素B9抗原、生物素化的人维生素B9抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人维生素B9呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A CL和三重四极杆质谱仪LCMS-8050 CL联用检测血清中VK1的检测方法。此方法经过验证，该方法无携带效应，VK1在0.1~12.5 ng/mL内线性良好，线性相关系数大于0.995；低，中，高三个浓度水平的加标回收率在85% ~ 113%之间，保留时间和含量相对标准偏差分别在0.07 ~ 0.67%和5.54 ~ 7.87%之间，仪器和方法的精密度良好。同时经过基质效应的验证，可使用纯溶剂替代生物基质进行校准曲线的配制和使用，该方法验证均能满足临床检测的需求，可为临床检测维生素K1提供参考。LC-30A CL和三重四极杆质谱仪LCMS-8050 CL联用系统可满足临床检测维生素K1的需求。

人维生素B6检测试剂盒 人维生素B6检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人维生素B6含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人维生素B6水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人维生素B6抗原、生物素化的人维生素B6抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人维生素B6呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

本文使用岛津Nexra MX System平行液相系统和三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用技术，建立了2分钟内超快速定量检测人血清中25-羟基维生素D2/D3的方法，该检测方法不仅分析速度快、稳定性和准确度好，而且提高了约3倍分析效率，大大节省了临床实验室仪器采购与检测成本，十分适用于相关医学检验实验室大批量人血清样品中25-羟基维生素D2/D3的定量分析，该技术有望成为一种在医学检验领域备受青睐且广泛应用的液相色谱质谱联用技术，创造更多的社会价值。

维生素D缺乏症在世界许多地区的成人和儿童中非常普遍。除了众所周知的影响(例如与钙吸收障碍相关的佝偻病、骨质疏松症和骨软化症)外，现在越来越多的证据表明维生素D缺乏症还会增加罹患某些癌症的风险，并对许多其它疾病有一定的影响，例如：糖尿病，心血管疾病，多发性硬化，精神类疾病等。维生素D具有两种存在形式，一种是皮肤暴露于日光下所产生的维生素D3，另一种则是存在于多种补品中的植物衍生物维生素D2。维生素D在肝脏中代谢形成25-羟基维生素D(25OHD)，后者在肾脏中进一步代谢形成活性代谢物1,25-二羟基维生素D。25OHD的水平被认为是评价体内维生素D水平的最佳临床指标。维生素D水平的评估对于维生素D缺乏症的诊断和补充治疗的监测非常重要。传统免疫检测的主要问题是无法区分25OHD2和25OHD3，还需依靠抗体与25OHD2的交叉反应才能测定25OHD的总浓度。如果该交叉反应低于100%，那么D2治疗可能无法得到准确监测。因此，利用LC-MS/MS方法定量分析25OHD2和25OHD3在提高检测质量和降低成本方面，更加受到人们的青睐，已经成为25OHD检测的金标准。

人维生素D结合蛋白(DBP)检测试剂盒人维生素D结合蛋白(DBP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人维生素D结合蛋白(DBP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人维生素D结合蛋白(DBP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人维生素D结合蛋白(DBP)抗原、生物素化的人维生素D结合蛋白(DBP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人维生素D结合蛋白(DBP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

维生素是维持生物体正常机能的必不可少的一大类有机物质，虽然机体对这类物质的需求量很小，但却十分重要。维生素是个庞大的家族，目前所知的维生素就有几十种，大致可分为脂溶性和水溶性两大类。维生素常被作为营养强化食品的添加因子，广泛存在于谷类、果蔬、肉禽和蛋类等加工食品中，因此，维生素的检测对食品、饲料和医药领域都有非常重要的意义。

本文建立了 化妆品中维生素 D2和维生素 D3的 HPLC测定 方法。 参照 化妆品安全技术规范（ 2015版） 中 维生素 D2和维生素 D3的 色谱条件， 采用色谱柱 ShimNex CS C18分析 维生素 D2和维生素 D32个化合物 峰形 良好 ，分离度 大于 1.5，满足日常检测需求。此方法可为 化妆品中维生素 D2和维生素 D3的 HPLC分析 提供参考 。

本应用纪要使用固相萃取的前处理方法净化富集血清中VA、25OH-VD2、25OH-VD3、VE和VK1，色谱分离用BEH Phenyl色谱柱(2.1× 50 mm，1.7 µ m)，采用Waters UPLC I-Class Xevo TQ-S IVD超高灵敏度的三重四极杆质谱，ESI(+)的离子化方式，建立了血清样品中同时检测五种脂溶性维生素的快速、简便、高灵敏度的定量分析方法。

维生素是机体必须的营养素，分为水溶性维生素和脂溶性维生素。此次，使用反相柱对维生素B6等9种维生素成分进行了同时分析，以DAD检测器进行了分析，通过使用DAD检测器，检测出的成分可以通过吸收光谱来进行鉴定，因此，用于像食品这样杂质成分较多的样品分析时尤为有效。

维生素是机体必须的营养素，分为水溶性维生素和脂溶性维生素｡ 此次，使用反相柱对维生素C9种水溶性维生素成分进行了同时分析，以DAD检测器进行了分析｡ 通过使用DAD检测器，检测出的成分可以通过吸收光谱来进行鉴定，因此，用于像食品这样杂质成分较多的样品分析时尤为有效。

维生素A、K同为脂溶性维生素，在液相分析时，流动相中有机相的比例都比较高，大曹实验室使用CAPCELL PAK C18 UG120 色谱柱分别按照国标标准GB/T 17817-2010和GB/T 18872-2017 中的方法，对饲料中的维生素A、K3进行检测，并得到了良好的结果。

本文使用岛津超高效液相色谱三重四极杆质谱联用仪，建立了血清中维生素K2（MK-4）测定方法，对方法的线性范围、准确度及精密度进行了考察。结果显示该方法线性良好，质控品测定准确度结果与理论值接近，该方法前处理简便、分析速度快、灵敏度高，可用于血清中MK-4含量测定。

维生素是人和动物维持正常的生理功能而必需从食物中获得的一类微量有机物质。维生素是个庞大的家族，目前所知的维生素就有几十种，大致可分为脂溶性和水溶性两大类。脂溶性维生素主要包括VA、VD、VE和VK。目前，脂溶性维生素的检测方法有胶束电动色谱法、高效液相色谱法、薄层色谱法、荧光法、电色谱法等。其中，高效液相色谱法是应用最多、最广的方法，但同时测定脂溶性维生素（VA、VD、VE、VK）的文献报道较少，且常规液相色谱法的分离时间长，试剂样品耗费多。因此，建立一种更为简便、快速、经济的多组分脂溶性维生素分离检测的方法则成为必然趋势。高效微流电动液相色谱（eHPLC）是近年发展起来的一种新兴微分离技术，同时具备高效液相色谱的高选择性和毛细管电泳的高柱效。其特征是电渗流和压力流同时驱动流动相，由于在流动相和固定相中分配系数的不同以及电泳淌度的差异，样品被快速、高效地分离。eHPLC系统结构简单，特点突出，通用性和稳定性好，并可与多种检测技术进行联用，目前已广泛应用于环境分析、药物分析、食品安全检测、生命科学等研究领域。

根据国标规定方法对饲料添加剂维生素D3颗粒进行了高效液相色谱分析，重复性高，分离效果好，满足国标中饲料中维生素D3的检测。

有关维生素 A、D、E 的新国家标准方法从 2017 年 6 月 23 日起实施，覆盖了婴幼儿食品、乳品、肉与肉制品、食用植物油、坚果、豆类和辣椒粉等多种食品基质，用于检测其中所含的维生素 A (VA)、维生素 D (VD) 和四种维生素 E (VE) 异构体的含量。其中，VD 由于本身含量低、基质干扰严重，该国家标准方法采用液质联用或半制备正相净化的方式对其进行分离检测。但液质联用方法复杂，维护成本相对较高；而正相净化方法易受流动相等条件影响，从而造成结果不准确。本方法参照现有的文献方法，基于二维液相色谱技术，成功建立了食品中 VA、四种 VE 异构体及微量 VD 的中心切割快速分析方法。此方法第一维对 VA 和四种 VE 进行分析，并对 VD 进行初步净化；第二维对 VD 进行进一步分离，整个分析过程只需一次进样即可完成样品中 VA、四种 VE 及微量 VD 的测定。该方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可避免正相体系不稳定而导致的 VD 含量检测不准确现象的发生。并且所得结果准确、重现性好，可以用于多种食品基质中脂溶性维生素的常规快速检测。

维生素A、维生素D(D2和D3)和维生素E是机体维持正常代谢和机能必需的脂溶性维生素。维生素A具有促进机体生长、维持表皮完整、生殖、骨骼及视觉等功能；维生素D（主要包括D2和D3)，它们对哺乳动物有促进钙磷代谢及成骨作用；维生素E又称为生育酚，具有促进生育、抗衰老的作用。由于这3种维生素在外界环境中不稳定，很容易受光、氧等影响而被氧化破坏，因此科研工作者一直在努力寻找合适的测定方法来得到准确、重现性好的结果。 迪马科技用户采用超高效液相色谱法，DAD检测器成功实现维生素A、D、E的分离、测定，具有分析时间短，分析结果准确，重现性好的特点。

水果、蔬菜等低脂性植物样品,用异丙醇和正己烷提取其中的维生素 K1,经维生素K1前处理小柱净化,去除叶绿素等干扰物质。用 C18 液相色谱柱将维生素K1 与其他杂质分离,锌柱柱后还原,荧光检测器检测,外标法定量。（本实验选用菠菜和苹果）参考标准：《GB 5009.158-2016 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定》

维生素B7检测试剂盒是一种实验室检测工具，用于测定样本中维生素B7（又称生物素）的含量。

在本应用报告中描述了一种定性和定量分析水溶性维生素的应用解决方案。开发了一种单一、耐用的反相高效液相色谱(RP-HPLC) 方法，与其他的许多传统方法只能对各组分单独定量分析不同，本方法可以同时测定10 种不同维生素。使用Agilent Poroshell EC-C18 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统可以实现分离和定量。在波长 200-640 nm 的范围内可以使用二极管阵列监测器(DAD) 进行检测。因为不同维生素的最大吸收波长不同，故需要在８ 种不同的波长下进行数据采集。这种方法部分有效，适用于复合维生素片的常规营养标注分析。建立了每种维生素的检测限(LOD)，定量限(LOQ) 和线性范围。使用安捷伦方法转换软件还可以将该方法有效的转换成较快的使用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统的超高压液相色谱(UHPLC) 方法。