柱前衍生分析

赛默飞推出的解决方案在参考文献的基础上采用石墨化碳柱直接分离氨基酸，分离后的组分与邻苯二甲醛进行衍生反应生成具有紫外吸收的化合物，衍生反应物采用紫外光度法进行定量分析来测定氨基酸的含量。通过对方法学的考察，结果表明该方法具有良好的专属性，线性范围，重现性及准确度，可用于氨基酸的分析。

"在食品、制药开发等各种领域都需要分析氨基酸。使用HPLC分析氨基酸，常用的方法是柱后衍生化法。本公司的氨基酸分析系统也采用了柱后衍生化法。但是，基于所使用的色谱柱的特性，柱后衍生化法存在很难实现快速分析的问题。另一方面，分析预衍生氨基酸的柱前衍生化法通过自动化衍生，比柱后衍生化法可以更快速、更简便地完成分析。本文中为您介绍通过使用高效液相色谱仪Nexera XR的自动柱前衍生化法优化氨基酸分析条件的案例。"

柱前衍生氨基酸分析是先将氨基酸衍生成具有可见光吸收或荧光发射的衍生物，然后在反相柱上分离，它不需要柱后反应装置，因此可以在配有相应检测器的普通高效液相色谱仪上分析。使用LC-2010高效液相色谱仪，考察了柱前衍生法进行氨基酸分析时的精密度和稳定性。

柱前衍生氨基酸分析是先将氨基酸衍生成具有可见光吸收或荧光发射的衍生物，然后在反相柱上分离，它不需要柱后反应装置，因此也可以在配有相应检测器的普通高效液相色谱仪上分析。为了解LC-2010高效液相色谱仪在使用柱前衍生法进行氨基酸分析时的精密度和稳定性，我们作了以下实验。

对8种脂肪胺进行HPLC分析，经柱前衍生的脂肪胺在激光诱导荧光作为检测器的条件下得到良好分离。检测条件为：激发波长473nm，发射波长520nm，色谱柱为C18柱

柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述以下主要对两种类型的七种应用广泛的氨基酸分析方法进行介绍，讨论和研究。

在该应用中，通过使用JASCO自动进样器的自动柱前衍生功能，证明了OPA柱前衍生，其再现性比手动进样好得多。关键词： HPLC、OPA柱前衍生，氨基酸、C18柱、荧光检测器

伏马毒素（Fumonisin）是霉菌毒素的一种，属镰孢菌科，已知是引起马的白质脑软化和猪的肺浮肿的致病物质。近年也指出为与人的食道癌有关的致癌物质。本化合物的分析用OPA试剂进行柱前荧光衍生处理的荧光检测。

摘要： 本文使用岛津LC-30A液相色谱仪建立了自动柱前衍生法同时测定蜂蜜中的十几种氨基酸。以邻苯二甲醛(OPA)为柱前衍生剂，使用C18柱，乙腈/甲醇和0.05 mol/L的醋酸钠(pH 6.5)为流动相，荧光检测器的激发波长为330 nm，发射波长为440 nm。各氨基酸标准曲线的线性相关系数在0.9974至1.0000之间，保留时间的RSD %在0.02 %-0.06 %之间，峰面积的RSD %在0.73 %-6.44 %之间，结果的重现性良好。0.5 μmol/L的氨基酸标准溶液的信噪比S/N的平均值在2201-126824之间，具有很高的检测灵敏度。此方法省去了繁琐的前处理步骤，每个样品的总分析时间仅需1小时。

本文使用岛津LC-30A液相色谱仪建立了自动柱前衍生法同时测定蜂蜜中的十几种氨基酸。以邻苯二甲醛(OPA)为柱前衍生剂，使用C18柱，乙腈/甲醇和0.05 mol/L的醋酸钠(pH 6.5)为流动相，荧光检测器的激发波长为330 nm，发射波长为440 nm。各氨基酸标准曲线的线性相关系数在0.9974至1.0000之间，保留时间的RSD %在0.02 %-0.06 %之间，峰面积的RSD %在0.73 %-6.44 %之间，结果的重现性良好。0.5 μmol/L的氨基酸标准溶液的信噪比S/N的平均值在2201-126824之间，具有很高的检测灵敏度。此方法省去了繁琐的前处理步骤，每个样品的总分析时间仅需1小时。

伏马毒素（Fumonisin）是霉菌毒素的一种，属镰孢菌科，已知是引起马的白质脑软化和猪的肺浮肿的致病物质。近年也指出为与人的食道癌有关的致癌物质。本化合物的分析用OPA试剂进行柱前荧光衍生处理的荧光检测。

本研究参考《HJ1025-2019固体废物氨基甲酸酯类农药的测定 柱后衍生-高效液相色谱法》，采用氨基甲酸酯分析系统，对固体废物浸出液样品进行分析。以外标法定量，10种氨基甲酸酯农药在考察范围内线性相关系数R均高于0.999，准确度在96.6-105.0%之间；对高中低三个水平的混合标准溶液连续进样6次，重复性结果（RSD%表示）：目标物保留时间和峰面积的RSD分别在0.03-0.14%和0.31-4.71%之间，仪器的重复性良好；加标回收率在63.0~74.2%之间。

碘衍生分析条件流 动 相：乙腈/甲醇/水＝20/25/55 (v/v)流 速：0.8 mL/min色 谱 柱：Intersil ODS-3 4.6× 250 mm, 5um柱 温：40℃进样体积：50uL检测波长：Ex=360 nm，Em＝440 nm光衍生分析条件流 动 相：乙腈/甲醇/水＝25/25/50 (v/v)流 速：0.8 mL/min色 谱 柱：Intersil ODS-3 4.6× 250 mm, 5um柱 温：40℃进样体积：50uL检测波长：Ex=360 nm，Em＝440 nm

氨基酸作为构成人体的蛋白质的基本单元，同时也是生物机体所需要的重要营养素。它们在机体内具有各自独特的营养能，在代谢过程中又密切联系，共同参加、推动和调节生命活动[1]。氨基酸分子中含有氨基和羧基及其他取代基团，因此氨基酸分子为极性水溶性分子，在反相色谱柱上无保留行为，无法直接进行分析，且分子中大部分取代基团无紫外吸收，这些性质对氨基酸的分析带来巨大挑战。

LC－2010的柱前衍生氨基酸分析 柱前衍生氨基酸分析是先将氨基酸衍生成具有可见光吸收或荧光发射的衍生物，然后在反相柱上分离，它不需要柱后反应装置，因此也可以在配有相应检测器的普通高效液相色谱仪上分析。为了解LC-2010高效液相色谱仪在使用柱前衍生法进行氨基酸分析时的精密度和稳定性，我们作了以下实验。岛津GC-2010气相色谱仪

氨基酸是食品中的重要的营养物质，氨基酸的种类和数量是衡量食品营养价值高低的重要指标，目前，关于氨基酸的检测方法有氨基酸分析仪测定，高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法分离度高，选择性好，并分为柱前衍生方法和柱后衍生方法。常用的柱前衍生方法有邻苯二甲醛( OPA) 、丹酰氯、9-芴甲基氯甲酸酯、2,4-二硝基氟苯等。

摘要： 采用异硫氰酸苯酯（PITC）为柱前衍生试剂进行氨基酸衍生，二元流动相程序洗脱方法分离17种常见氨基酸，分离效果好，无需柱后反应装置，反应速度快，保留时间重现性好。实验部分：仪器与试剂：Labtech LC600高效液相色谱仪；Labtech 氨基酸色谱柱（5um, 250×4.6mm）；17种氨基酸标样；乙腈（色谱纯）；水（超纯水）；醋酸钠（分析纯）；醋酸（分析纯）；三乙胺；异硫氰酸苯酯。色谱条件：流动相A：乙腈/B＝1/1（V：V），流动相B：50mmolNaAC缓冲溶液（PH=6.5）流速：1ml/min，进样1uL（自动进样方式），检测波长：254nm，柱温为40℃。梯度程序：Time（min）Mobile phase A（V/V）Mobile phase B（V/V）0109051090203070456040509555595555:101090751090柱前衍生步骤：1.17种氨基酸混合标准溶液：分别称取适量天门东氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、胱氨酸于容量瓶中，以0.1N盐酸定容，得到2.5mmol/L混合标准贮备液（其中胱氨酸1.25mmol/L）。2.1mol/L三乙胺乙腈溶液：取三乙胺139ul，加乙腈860ul。3.1mol/L异硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液：取12ulPITC加乙腈988ul。4.对照品溶液的衍生：取氨基酸溶液800ul置离心管中，加1mol/L异硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液400ul，1mol/L三乙胺乙腈溶液400ul，混匀，室温放置1小时，加入正己烷1.6ml，放置10分钟，取下层溶液进样。 结果与讨论： 取衍生好的氨基酸标准溶液样品，连续测定10次，因**次进样系统未完全平衡好，保留时间有漂移，**一次进样由于室内温度较高，考虑到样品放置时间长可能会对峰面积有影响，故舍去**与**一次进样，统计8次进样结果和重叠色谱图如下， 氨基酸重复性结果（n＝8）Amino AcidRetention timeAreaRSD%RSD%Asp0.316.97Glu0.257.19Ser0.157.08Gly0.126.59His0.116.50Arg0.116.97Thr0.116.26Ala0.137.29Pro0.116.70Tyr0.116.81Val0.156.69Met0.156.75Cys-Cys0.1917.04Lle0.196.73Leu0.206.90Phe0.176.62Lys0.158.90 8次重复进样色谱图 从数据可得知保留时间有较好的重现性，**RSD0.31%，由于进样1ul，进样量较小，所以峰面积的RSD稍大，在实际测定工作当中可以加大进样量和添加内标的方式改善。

氨基酸是食品中的重要的营养物质，氨基酸的种类和数量是衡量食品营养价值高低的重要指标，目前，关于氨基酸的检测方法有氨基酸分析仪测定，高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法分离度高，选择性好，并分为柱前衍生方法和柱后衍生方法。常用的柱前衍生方法有邻苯二甲醛( OPA) 、丹酰氯、9-芴甲基氯甲酸酯、2,4-二硝基氟苯等。本文采用天津兰博高效液相色谱系统，以2,4-二硝基氟苯作为柱前衍生剂，对18种氨基酸进行测试，结果表明该方法简便，准确，可以满足日常检测。

氨基酸是食品中的重要的营养物质，氨基酸的种类和数量是衡量食品营养价值高低的重要指标，目前，关于氨基酸的检测方法有氨基酸分析仪测定，高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法分离度高，选择性好，并分为柱前衍生方法和柱后衍生方法。常用的柱前衍生方法有邻苯二甲醛( OPA) 、丹酰氯、9-芴甲基氯甲酸酯、2,4-二硝基氟苯等。本文采用天津兰博高效液相色谱系统，以2,4-二硝基氟苯作为柱前衍生剂，对18种氨基酸进行测试，结果表明该方法简便，准确，可以满足日常检测。

本文使用岛津LC-20A液相色谱仪建立了柱前衍生法检测饲料中的氨基酸方法。六点外标法绘制工作曲线，各氨基酸标准曲线的线性相关系数均在0.9985以上，各氨基酸检测限均在1.200?μ mol/L以下；定量限均在3.999μ mol/L以下。保留时间的RSD%在0.06%-0.40%之间，峰面积的RSD%在0.33%-1.19%之间，结果的重复性良好。15种氨基酸分离度良好，0.5?μ mol/mL标准溶液的15种氨基酸的分离度在1.0以上。使用此法检测了四种不同基质的饲料实际样品中15种游离氨基酸。试剂与仪器试剂：乙腈，HPLC级；磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、异硫氰酸苯酯、三乙胺、正己烷、HCl为分析纯级；2.5?μ mol/mL氨基酸标准品（Sigma出品）。仪器：Shimadzu?Prominence?LC-20A，包括：二元泵（LC-20AD× 2）、脱气机（DGU-20A3）、自动进样器（SIL-20AC）、柱温箱（CTO-20A）、紫外检测器（SPD-20A）及LC?Solution工作站。

1）采用茚三酮柱后衍生法，符合国际标准和国家标准2）硬件由主机和柱后衍生系统两部分独立组成，主机可以单独做为一套四元梯度液相色谱系统使用，设备利用率高3）自动进样器内置专利的氨排除系统，有效避免氨对基线的影响4）特制的高温型紫外检测器5）经过反复优化的柱后衍生系统，极大的减少了系统的死体积和压力波动6）使用维护成本低：柱子寿命长，试剂耗材价格和其他进口品牌的氨基酸分析仪相当

摘要：皮革水解蛋白是从动物皮毛中水解出的物质,能增加食品中氨基酸的含量,但皮革水解物含有危害人体健康的重金属六价铬,不能用于食品加工。如果被人体吸收的话，可能导致中毒、关节肿大、关节疏松肿大。国家卫生部最新印发了《食品中可能违法添加的非食用物质名单（第二批）》，明令禁止在乳及乳制品中添加皮革水解蛋白。皮革水解蛋白与三聚氰胺不同，是真正的蛋白质，若添加到食品当中，检测起来难度更大。 本文使用岛津氨基酸柱后衍生系统锂型分析柱建立了24种氨基酸的高效液相色谱柱后衍生分析方法。

上海通微分析技术有限公司针对氨基酸分离检测困难的问题，采用通微EasySep?系列液相色谱系统，配合通微UNISIL AA(4.6mm×250mm, 5μm)氨基酸分析柱，采用柱前PITC衍生氨基酸法实现了17种氨基酸的分离检测。

本文依据 2020 年版《中国药典》四部 2351 通则，采用 Agilent 1260 II 液相色谱系统，开发出一种通过柱后光化学衍生分析中药中的黄曲霉毒素的方法，对方法检测限 (LOD)、定量限 (LOQ)、重现性和回收率等进行考察，并对远志及桃仁样品进行了检测。相比于2351 通则中规定的柱后碘化学衍生法，所开发的光化学衍生法成本低廉、操作简单，更适合快速、有效地测定中药材及相关产品中的黄曲霉毒素。

分析柱： Thermo Scientific Acclaim 120 C18, 5μ m 4.6× 250 mm (P/N 059149)淋洗液： A: 水 B: 甲醇流速： 0.8 mL/min进样体积： 10 μ L柱温： 42℃检测器： Ex: 330 nm；Em: 465 nm运行时间： 30 min柱后衍生： 一级衍生：衍生试剂1，柱后衍生反应管750μ L (P/N: 042631)，0.3mL/min，温度：100℃。AXP 泵做一级衍生泵。二级衍生：衍生试剂2，柱后衍生反应管375μ L (P/N: 043700)，0.3mL/min，室温。双三元右泵做衍生泵。

皮革水解蛋白是从动物皮毛中水解出的物质,能增加食品中氨基酸的含量,但皮革水解物含有危害人体健康的重金属六价铬,不能用于食品加工。如果被人体吸收的话，可能导致中毒、关节肿大、关节疏松肿大。国家卫生部最新印发了《食品中可能违法添加的非食用物质名单（第二批）》，明令禁止在乳及乳制品中添加皮革水解蛋白。皮革水解蛋白与三聚氰胺不同，是真正的蛋白质，若添加到食品当中，检测起来难度更大。 本文使用岛津氨基酸柱后衍生系统锂型分析柱建立了24种氨基酸的高效液相色谱柱后衍生分析方法。

在食品、制药开发等的各种领域都需要分析氨基酸。因此，分析氨基酸时采用HPLC-荧光检测器、HPLC-UV检测器、LC/MS、GC/MS等各种方法，各具特色。在本文中，介绍了使用HPLC-荧光检测器进行氨基酸自动柱前在线衍生的定量方法。本文介绍将使用该条件的分析方法适用于定量氨基酸的案例。

本文采用安捷伦自动进样器进行自动化柱前在线衍生，结合具有表面多孔层填料的Poroshell HPH-C18 色谱柱，建立了可实现快速和高灵敏度氨基酸定量分析的液相色谱分析方法。此方法成功应用于在 3 种不同的样品基质中对 23 种氨基酸进行液相色谱分离与准确测定。

?伏马毒素 (FUM) 是一种强毒性的真菌毒素，有致癌性，主要污染粮食及其制品，会导致人类与动物产生癌症与肝脏疾病，现已成为继黄曲霉毒素之后的又一研究热点。伏马毒素的液相检测通常可以使用柱后和柱前两种衍生方法。食品国家标准中柱前衍生法使用的是OPA 衍生剂，由于衍生产物随着时间的延长会降解，衍生反应需要严格控制衍生时间。这对于实验的连续进行产生了阻碍，实验人员需要做完一针实验以后再去处理下一针的样品，以确保每次衍生反应的时间保持一致。本文使用自动进样器的自动编程功能，自动吸取OPA 衍生剂和样品，经过混合、等待的衍生反应步骤，建立了自动柱前衍生超高效液相色谱方法，快速检测伏马毒素 B1、B2。该方法避免了传统柱前手动衍生中手动混合和等待的繁琐操作和误差，使得实验可以连续高效的进行，也确保了结果稳定性。

利用 Thermo Scientific TM TSQ Quantum Access MAX TM LC-MS/MS，本文报道了一种测定上述神经递质与相关代谢物含量的代谢靶标分析方法。采用苯甲酰化柱前衍生，本方法可有效提高强极性目标分析物的疏水性，并显著改善其 ESI 电离效率，从而有效克服复杂基质干扰，提高检测灵敏度，适用于神经生物学、临床样本检测、神经药效学评价等研究。