种氨基酸衍生物

氨基酸是生物学上重要的有机化合物，由胺（-NH2）和羧酸（-COOH）的官能团组成，以及一个侧链连到每一个氨基酸。氨基酸分析是蛋白质，肽和其他氨基酸组成的药物分析中的一个基础工具。氨基酸分析允许对样品的氨基酸组成进行定量及定性分析，并能够实现对可能存在于蛋白质及多肽中的非典型氨基酸进行测定。 采用GC/MS（Agilent 7890A/5975C）和LC/MS/MS（AB Sciex 5500）两大平台联用。从而可实现对超过70种氨基酸及其衍生物进行定量及定性分析，其中涉及到的95%的物质均使用标准品和同位素标准品定量。

本实验为用加压梯度毛细管电色谱来分离18种氨基酸衍生物。用反相C18毛细管柱（粒径3μm，130mm×75μmI.D.），醋酸盐缓冲液（50mmol/L NaAc, pH 6.4），离子对试剂（1% N,N-二甲基甲酰胺）分离一标准溶液中的衍生化氨基酸（2μg/ml），UV-Vis检测器的波长为360nm，毛细管柱的压力保持在大约70Pa, 并在柱的出口端加3kV的正电压。研究电压对于氨基酸的洗脱次序和分离度的影响，发现当电压超过3kV时候C18对氨基酸产生吸附作用。对盐浓度，进样量，和柱长度对于氨基酸分离的影响都进行了测定。氨基酸样品在CEC中分离，每个氨基酸迁移时间的RSD小于2.5%

本文采用Poroshell 120 手性色谱柱分析氨基酸及其衍生物，Poroshell 120 手性色谱柱是首款采用表面多孔颗粒填料与创新性手性固定相结合的品，具有以下优势：（1）提供更高的性能与更快的速度，效果优于全多孔手性固定相；（2）具有出色的耐用性和可靠性，采用成熟的 Agilent InfinityLab Poroshell 120 颗粒填料技术；（3）多种尺寸可选，满足任何应用需求：2.1 和 4.6 mm 内径， 可与 50、100 和 150 mm 的长度搭配组合；（4）分析时间短、峰形优异且分离度更好；（5）采用高效的手性分离，显著提高分析通量和实验室效率。

柱前衍生氨基酸分析是先将氨基酸衍生成具有可见光吸收或荧光发射的衍生物，然后在反相柱上分离，它不需要柱后反应装置，因此可以在配有相应检测器的普通高效液相色谱仪上分析。使用LC-2010高效液相色谱仪，考察了柱前衍生法进行氨基酸分析时的精密度和稳定性。

LC－2010的柱前衍生氨基酸分析 柱前衍生氨基酸分析是先将氨基酸衍生成具有可见光吸收或荧光发射的衍生物，然后在反相柱上分离，它不需要柱后反应装置，因此也可以在配有相应检测器的普通高效液相色谱仪上分析。为了解LC-2010高效液相色谱仪在使用柱前衍生法进行氨基酸分析时的精密度和稳定性，我们作了以下实验。岛津GC-2010气相色谱仪

柱前衍生氨基酸分析是先将氨基酸衍生成具有可见光吸收或荧光发射的衍生物，然后在反相柱上分离，它不需要柱后反应装置，因此也可以在配有相应检测器的普通高效液相色谱仪上分析。为了解LC-2010高效液相色谱仪在使用柱前衍生法进行氨基酸分析时的精密度和稳定性，我们作了以下实验。

鸡肉中富含蛋白质，而蛋白质的质量主要取决于氨基酸的组成和比例，尤其是必需氨基酸的组成和比例。高效液相色谱柱后衍生法分析自动化程度高衍生物的稳定性高，对柱子的损害小前处理简单，尤其在一些中小型实验室，能够实现液相色谱检测方法和液相色谱柱后衍生法之间的及时切换，提高了仪器的使用率。

鸡肉中富含蛋白质，而蛋白质的质量主要取决于氨基酸的组成和比例，尤其是必需氨基酸的组成和比例。高效液相色谱柱后衍生法分析自动化程度高衍生物的稳定性高，对柱子的损害小前处理简单，尤其在一些中小型实验室，能够实现液相色谱检测方法和液相色谱柱后衍生法之间的及时切换，提高了仪器的使用率。

氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质，氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品研发、质量控制和生产管理等具有重要意义，广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药行业的医药、食品、保健品的分析。由于大多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性，为提高分析检测灵敏度和分离选择特性，通常将氨基酸进行衍生，衍生方式有柱前衍生法和柱后衍生法。本文使用Chromaster高效液相色谱仪配柱后衍生反应单元，采用茚三酮（NIN）柱后衍生法测定日本淡酱油中的氨基酸，得到较好的分离度，并且重现性较好。

植物源性食品中9种氨基甲酸酯及其衍生物的测定方法，样品经提取后用固相萃取柱对提取液进行净化处理使用Pribolab ® 全自动标液配制仪进行12种混标5梯度的标准品配制，液相色谱搭配Pribolab ® MDS 多功能光电衍生系统对目标物进行分离衍生，生成异吲哚类强荧光物质，通过荧光检测器进行检测，外标法定量。

本应用简报介绍了发酵培养基中氨基酸 LC/MS 分析的解决方案。氨基酸的极性使其 难以进行反相液相色谱分析，因此通常使用衍生化来改善其保留能力。然而，亲水 相互作用色谱 (HILIC) 无需衍生化也能保留并分离复杂的氨基酸混合物，同时还具有与传统反相液相色谱类似的工作流程。HILIC 与质谱的组合提供了一种极其简单而功 能强大的未衍生化氨基酸分析解决方案。

啤酒中游离氨基酸的形式主要来源于麦芽。毛细管电泳法可以快速定量测定啤酒和麦芽汁中的游离氨基酸：精氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、亮氨酸和异亮氨酸（总）、蛋氨酸、缬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸、胱氨酸、色氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。游离氨基酸通过苯基异硫氰酸酯转化为苯基硫代氨基甲酸衍生物（PTC衍生物），其离子形式在电场作用下在石英毛细管中分离。通过在缓冲溶液中测量PTC衍生物在254 nm波长下的吸光度来确定其含量。

氨基酸是食品中的重要的营养物质，氨基酸的种类和数量是衡量食品营养价值高低的重要指标，目前，关于氨基酸的检测方法有氨基酸分析仪测定，高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法分离度高，选择性好，并分为柱前衍生方法和柱后衍生方法。常用的柱前衍生方法有邻苯二甲醛( OPA) 、丹酰氯、9-芴甲基氯甲酸酯、2,4-二硝基氟苯等。本文采用天津兰博高效液相色谱系统，以2,4-二硝基氟苯作为柱前衍生剂，对18种氨基酸进行测试，结果表明该方法简便，准确，可以满足日常检测。

氨基酸是食品中的重要的营养物质，氨基酸的种类和数量是衡量食品营养价值高低的重要指标，目前，关于氨基酸的检测方法有氨基酸分析仪测定，高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法分离度高，选择性好，并分为柱前衍生方法和柱后衍生方法。常用的柱前衍生方法有邻苯二甲醛( OPA) 、丹酰氯、9-芴甲基氯甲酸酯、2,4-二硝基氟苯等。本文采用天津兰博高效液相色谱系统，以2,4-二硝基氟苯作为柱前衍生剂，对18种氨基酸进行测试，结果表明该方法简便，准确，可以满足日常检测。

氨基酸是食品中的重要的营养物质，氨基酸的种类和数量是衡量食品营养价值高低的重要指标，目前，关于氨基酸的检测方法有氨基酸分析仪测定，高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法分离度高，选择性好，并分为柱前衍生方法和柱后衍生方法。常用的柱前衍生方法有邻苯二甲醛( OPA) 、丹酰氯、9-芴甲基氯甲酸酯、2,4-二硝基氟苯等。

"在食品、制药开发等各种领域都需要分析氨基酸。使用HPLC分析氨基酸，常用的方法是柱后衍生化法。本公司的氨基酸分析系统也采用了柱后衍生化法。但是，基于所使用的色谱柱的特性，柱后衍生化法存在很难实现快速分析的问题。另一方面，分析预衍生氨基酸的柱前衍生化法通过自动化衍生，比柱后衍生化法可以更快速、更简便地完成分析。本文中为您介绍通过使用高效液相色谱仪Nexera XR的自动柱前衍生化法优化氨基酸分析条件的案例。"

目前氨基酸检测方法主要有分光光度法、毛细管电泳法、近红外法、氨基酸分析仪法和液相色谱法等，其中氨基酸分析仪法和液相色谱法灵敏度高且应用范围广泛，但前者仪器成本较高，并不是最佳选择；后者又分为手动衍生和柱后衍生。手动衍生操作复杂，稳定性差。为此，华派科仪特开发出一种简洁高效经济的氨基酸测定方法-柱后衍生法。

更全面，更准确，更快速的分析营养配方中的氨基酸对营养专家是至关重要的。在Biochrom30+氨基酸分析仪上使用新的柠檬酸钠缓冲液，可以将30 个组成蛋白质的氨基酸及其衍生物在1 小时内分析出来，并且能得到较好的分离度。

上海通微分析技术有限公司针对氨基酸分离检测困难的问题，采用通微EasySep?系列液相色谱系统，配合通微UNISIL AA(4.6mm×250mm, 5μm)氨基酸分析柱，采用柱前PITC衍生氨基酸法实现了17种氨基酸的分离检测。

在该应用中，通过使用JASCO自动进样器的自动柱前衍生功能，证明了OPA柱前衍生，其再现性比手动进样好得多。关键词： HPLC、OPA柱前衍生，氨基酸、C18柱、荧光检测器

柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述以下主要对两种类型的七种应用广泛的氨基酸分析方法进行介绍，讨论和研究。

摘要： 本文使用岛津LC-30A液相色谱仪建立了自动柱前衍生法同时测定蜂蜜中的十几种氨基酸。以邻苯二甲醛(OPA)为柱前衍生剂，使用C18柱，乙腈/甲醇和0.05 mol/L的醋酸钠(pH 6.5)为流动相，荧光检测器的激发波长为330 nm，发射波长为440 nm。各氨基酸标准曲线的线性相关系数在0.9974至1.0000之间，保留时间的RSD %在0.02 %-0.06 %之间，峰面积的RSD %在0.73 %-6.44 %之间，结果的重现性良好。0.5 μmol/L的氨基酸标准溶液的信噪比S/N的平均值在2201-126824之间，具有很高的检测灵敏度。此方法省去了繁琐的前处理步骤，每个样品的总分析时间仅需1小时。

本文使用岛津LC-30A液相色谱仪建立了自动柱前衍生法同时测定蜂蜜中的十几种氨基酸。以邻苯二甲醛(OPA)为柱前衍生剂，使用C18柱，乙腈/甲醇和0.05 mol/L的醋酸钠(pH 6.5)为流动相，荧光检测器的激发波长为330 nm，发射波长为440 nm。各氨基酸标准曲线的线性相关系数在0.9974至1.0000之间，保留时间的RSD %在0.02 %-0.06 %之间，峰面积的RSD %在0.73 %-6.44 %之间，结果的重现性良好。0.5 μmol/L的氨基酸标准溶液的信噪比S/N的平均值在2201-126824之间，具有很高的检测灵敏度。此方法省去了繁琐的前处理步骤，每个样品的总分析时间仅需1小时。

赛默飞推出的解决方案在参考文献的基础上采用石墨化碳柱直接分离氨基酸，分离后的组分与邻苯二甲醛进行衍生反应生成具有紫外吸收的化合物，衍生反应物采用紫外光度法进行定量分析来测定氨基酸的含量。通过对方法学的考察，结果表明该方法具有良好的专属性，线性范围，重现性及准确度，可用于氨基酸的分析。

在多种研究项目和常规QC及工艺监控中都需要准确、精密和耐用的氨基酸分析方法来获得重要信息。在生化结构分析中，水解后蛋白质的氨基酸组成被用于确认序列并测定消光系数。与蛋白质结合的氨基酸测量相比，游离氨基酸是代谢状态和遗传起源的重要指示物。在多样化应用，诸如优化生物制药生产的细胞培养条件和工业化规模发酵中的工艺监控中，都需要这样的分析。这些应用的需求导致了氨基酸分析仪的发明以及几十年来技术的持续改进。我们开发了一种完整的全套解决方案。该技术是基于一种设计周密的衍生方案，并结合高分离度的色谱分离。在高比例的含水条件下，用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC)衍生氨基酸，采用超高效液相色谱(UPLC® )分离衍生物。UPLC的强化分离度保证了色谱方法能进行准确而精密的测量以及稳定重现。在过去5年中，该技术已经被广泛地应用。这种解决方案现在已经被扩展到最先进的仪器设置和检测方案。本文将讨论该系统的线性、准确度和精密度试验。我们将在分析蛋白质结构和监控细胞培养营养状态中展示这种应用方案的用途。这种应用方案的不断强化保证了最方便和有效地进行可靠的氨基酸分析。

目前氨基酸的分析检测均需柱前或柱后衍生，而通微建立的一种反相高效液相色谱-蒸发光散射检测发（HPLC-ELSD），可以直接测定未衍生氨基酸。

本文采用安捷伦自动进样器进行自动化柱前在线衍生，结合具有表面多孔层填料的Poroshell HPH-C18 色谱柱，建立了可实现快速和高灵敏度氨基酸定量分析的液相色谱分析方法。此方法成功应用于在 3 种不同的样品基质中对 23 种氨基酸进行液相色谱分离与准确测定。

在食品、制药开发等的各种领域都需要分析氨基酸。因此，分析氨基酸时采用HPLC-荧光检测器、HPLC-UV检测器、LC/MS、GC/MS等各种方法，各具特色。在本文中，介绍了使用HPLC-荧光检测器进行氨基酸自动柱前在线衍生的定量方法。本文介绍将使用该条件的分析方法适用于定量氨基酸的案例。

本文使用岛津LC-20A液相色谱仪建立了柱前衍生法检测饲料中的氨基酸方法。六点外标法绘制工作曲线，各氨基酸标准曲线的线性相关系数均在0.9985以上，各氨基酸检测限均在1.200?μ mol/L以下；定量限均在3.999μ mol/L以下。保留时间的RSD%在0.06%-0.40%之间，峰面积的RSD%在0.33%-1.19%之间，结果的重复性良好。15种氨基酸分离度良好，0.5?μ mol/mL标准溶液的15种氨基酸的分离度在1.0以上。使用此法检测了四种不同基质的饲料实际样品中15种游离氨基酸。试剂与仪器试剂：乙腈，HPLC级；磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、异硫氰酸苯酯、三乙胺、正己烷、HCl为分析纯级；2.5?μ mol/mL氨基酸标准品（Sigma出品）。仪器：Shimadzu?Prominence?LC-20A，包括：二元泵（LC-20AD× 2）、脱气机（DGU-20A3）、自动进样器（SIL-20AC）、柱温箱（CTO-20A）、紫外检测器（SPD-20A）及LC?Solution工作站。

摘要： 采用异硫氰酸苯酯（PITC）为柱前衍生试剂进行氨基酸衍生，二元流动相程序洗脱方法分离17种常见氨基酸，分离效果好，无需柱后反应装置，反应速度快，保留时间重现性好。实验部分：仪器与试剂：Labtech LC600高效液相色谱仪；Labtech 氨基酸色谱柱（5um, 250×4.6mm）；17种氨基酸标样；乙腈（色谱纯）；水（超纯水）；醋酸钠（分析纯）；醋酸（分析纯）；三乙胺；异硫氰酸苯酯。色谱条件：流动相A：乙腈/B＝1/1（V：V），流动相B：50mmolNaAC缓冲溶液（PH=6.5）流速：1ml/min，进样1uL（自动进样方式），检测波长：254nm，柱温为40℃。梯度程序：Time（min）Mobile phase A（V/V）Mobile phase B（V/V）0109051090203070456040509555595555:101090751090柱前衍生步骤：1.17种氨基酸混合标准溶液：分别称取适量天门东氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、胱氨酸于容量瓶中，以0.1N盐酸定容，得到2.5mmol/L混合标准贮备液（其中胱氨酸1.25mmol/L）。2.1mol/L三乙胺乙腈溶液：取三乙胺139ul，加乙腈860ul。3.1mol/L异硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液：取12ulPITC加乙腈988ul。4.对照品溶液的衍生：取氨基酸溶液800ul置离心管中，加1mol/L异硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液400ul，1mol/L三乙胺乙腈溶液400ul，混匀，室温放置1小时，加入正己烷1.6ml，放置10分钟，取下层溶液进样。 结果与讨论： 取衍生好的氨基酸标准溶液样品，连续测定10次，因**次进样系统未完全平衡好，保留时间有漂移，**一次进样由于室内温度较高，考虑到样品放置时间长可能会对峰面积有影响，故舍去**与**一次进样，统计8次进样结果和重叠色谱图如下， 氨基酸重复性结果（n＝8）Amino AcidRetention timeAreaRSD%RSD%Asp0.316.97Glu0.257.19Ser0.157.08Gly0.126.59His0.116.50Arg0.116.97Thr0.116.26Ala0.137.29Pro0.116.70Tyr0.116.81Val0.156.69Met0.156.75Cys-Cys0.1917.04Lle0.196.73Leu0.206.90Phe0.176.62Lys0.158.90 8次重复进样色谱图 从数据可得知保留时间有较好的重现性，**RSD0.31%，由于进样1ul，进样量较小，所以峰面积的RSD稍大，在实际测定工作当中可以加大进样量和添加内标的方式改善。