肿瘤免疫细胞

xCELLigence RTCA 不仅可以评估针对多种血液瘤的免疫疗法的效价，还可以在生理相关效靶比下检测血液瘤细胞的破坏动力学。与传统检测方法相比，此方案的工作量更少。将血液瘤靶细胞接种并粘附在经预包被的 E-Plate 中，然后加入效应细胞，并在几天内非侵入性地检测癌细胞破坏动力学。自动连续采集数据。阻抗数据的定量和实时特征使得能够轻松比较不同免疫疗法和不同剂量之间的效价。使用这种表面粘附方法，多种效应细胞（PBMC、NK、CAR-T，以及双特异性 T 细胞 (BiTEs) 等生物分子）靶向肿瘤细胞表达的 EpCAM 蛋白，并阻断针对免疫检查点抑制剂 PD-1 的抗体（Cerignoli 等，2018）。xCELLigence 平台非常适合血液瘤的效价评估，能够为开发的免疫肿瘤疗法提供高重现性的定量评估以及简单的工作流程。

下载《实时活细胞分析开启免疫细胞杀伤实验新格局》，了解更多免疫细胞杀伤的实时动态分析策略。Incucyte® 位于细胞培养箱内，可以长时程自动采集相差和荧光图片，实时观察并全自动分析肿瘤细胞杀伤和免疫细胞与肿瘤细胞之间的相互作用，配合Cell-By-Cell软件模块可以自动地完成图片的定量分析，直接测定肿瘤细胞的死亡及活力。

在肿瘤免疫学领域，单细胞技术可以帮助科学家们更好地了解肿瘤细胞的生长和扩散机制，以及免疫系统如何识别和攻击肿瘤细胞。然而，组织样本单细胞悬液制备是单细胞测序实验中至关重要的工作，其质量好坏直接影响了后续建库的成败以及测序数据产出质量。因此，单细胞悬液制备除了需要有经验丰富的人员来进行指导/操作，还得依靠靠谱的单细胞悬液制备仪来助力。

基于 T 细胞的疗法正在迅速发展成为许多癌症的有效一线治疗选择。近年来， FDA 已经批准了几种针对免疫检查点的治疗性抗体和小分子用于临床，以补充和提高T 细胞的靶向性和有效性。这些免疫检查点抑制剂的临床前筛选需要强大的体外肿瘤模型来评估 T 细胞杀伤效率。但是，传统的 2D 肿瘤模型通常缺乏生物学相关性和复杂性来预测体内或临床结果。 3D 生物打印平台以及许多其他 3D 培养方法，提供了在生理上更相关的组织模型中自动筛选各种分子和药物的潜力。在此，在此概念验证研究中，我们描述了小鼠肺癌的同系生物打印肿瘤模型，以在细胞细胞毒性测定中评估免疫检查点抑制剂（PD-1）。在生物印记的肿瘤中观察到 T 细胞浓度依赖性杀伤， 并且添加免疫检查点抗体进一步增强了 T 细胞杀伤效力。有人建议，生物打印的 T 细胞细胞毒性测定法可能使研究人员能够在更有效的转化模型中筛选检查点抑制剂。

在肿瘤免疫微环境中，细胞组分极为复杂，除了肿瘤细胞外，还有各类由多能造血干细胞分化而来的淋系和髓系前体细胞；髓系前体细胞可分化为单核细胞、巨噬细胞、粒细胞等；淋系前体细胞可分化为T，B，Nk细胞，T细胞在一定条件下可转化为激活T细胞，记忆T细胞和抑制性T细胞等；B细胞又可分化为浆细胞分泌产生抗体。

应用说明《多球、共培养、3D肿瘤试验的实时活细胞分析》描述了使用Incucyte® 活细胞分析系统和Incucyte® 3D多肿瘤球分析来研究3D肿瘤多球的生长，可与成纤维细胞或免疫细胞共培养，捕捉采用单时间点方法可能错失的数据。增强型景深明场（DF-明场）图像采集能够对生长在细胞外基质（Matrigel™ ）上的多肿瘤球进行长时间成像。

近期，约翰霍普金斯大学医学院的研究人员在Science期刊发表研究成果[1]。他们发现了靶向TP53突变的新抗原，筛选出一种抗体片段（H2-scFv）特异性识别灭活的肿瘤抑制基因的蛋白质产物，通过实时监测T细胞杀伤效应，证实了该抗体片段的有效性，开创了靶向疗法的新领域。此研究中，Incucyte® 被选择并应用于免疫细胞肿瘤杀伤活性的实时动态分析。

摘要自然杀伤(NK)细胞是一种先天免疫细胞，通过发挥细胞毒性作用，在清除转化或癌变细胞方面发挥着重要作用。近年来，一些免疫刺激分子和生物制剂被用来提高NK细胞的溶瘤作用。三维(3D)细胞培养技术已经发展到更好地概括体内结构和生理相关性，以评价这些药物和生物制剂的体外。在这个概念验证研究中， 我们开发了一个三维生物打印的子宫颈癌肿瘤模型，以证明NK细胞的细胞毒活性。用Ⅰ型胶原3D生物打印GFP标记的人宫颈癌细胞SiHa和CaSki，并与人外周血源性NK细胞共培养96h。NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒性作用通过荧光显像进行评估，显示在NK细胞浓度增加的情况下，肿瘤杀伤程度更高。本文描述的方法是可缩放的，与高含量成像兼容，并且容易翻译到其他肿瘤模型。

T 细胞是免疫应答的重要组成部分，能够识别和清除外来病原体和肿瘤细胞。然而，为了防止产生自身免疫和免疫病理学问题，必须严格控制 T 细胞应答。我们开发了一款用于 Agilent NovoCyte Advanteon 流式细胞仪的 16 色免疫表型分析 panel，可同时分析 T 细胞的分化、活化、衰竭和通过脱颗粒及细胞因子的表达分析其功能。理论上，这种方法可以全面分析 T 细胞在免疫应答中的功能。

干细胞移植对于白血病等多种疾病的治疗具有重要意义，而准确的干细胞绝对计数对于干细胞移植的成败又十分重要。流式细胞仪结合荧光单抗计数为干细胞绝对计数提供了一种快速、定量、重复性好的方法。细胞表型是细胞基本生物学性质之一。在细胞生物学的研究中，细胞表型反应出细胞群均质程度、细胞生物学功能、细胞分化程度、细胞衰老程度，是细胞产品的最为重要的质量标准。流式细胞术是检测细胞表型的通用技术。

肿瘤干细胞分选后进行新抗癌药物的研究是当今研究最前沿的领域。筛选获得的肿瘤干细胞数量极其少，对其进行信号通路蛋白翻译后修饰分析是全球该领域内的难点。本篇Nature protocol提供了肿瘤干细胞信号通路蛋白翻译后修饰完整解决方案。

突变K-Ras是癌症中最为常见基因突变之一，它存在于约25%的肿瘤中，是热门的肿瘤靶点。2021年，针对K-Ras（G12C）的小分子药物Sotorasib获得FDA批准上市，用于治疗该基因突变的晚期非小细胞肺癌患者。

众所周知，流式细胞系统可以分析细胞，在出现了流式微球分析（Cytometric Bead Assay，CBA）技术后，可以定量分析细胞分泌物，如众多的细胞因子、外分泌蛋白甚至某些细胞次级代谢产物。但是，二者能否合而测之？答案是肯定的，我们今天的主角就是为了完成使命而生的——More in One（图 1）。

在循环肿瘤细胞等细胞分选进样系统中，需要在一个标准大气压附近很小的正负压范围对压力进行精密控制，这就对控制方法、气体流量调节阀、压力传感器和控制器提出了更高的要求。本文将针对这些技术问题，提出高精度正负压精密控制解决方案，并详细介绍控制方法和其中软硬件的功能和技术指标，由此可实现0.5%的控制精度。

调节性T细胞(Regulatory cells,Tregs )，早期亦称为Suppressor T cells，是一群以表达Foxp3、CD25、CD4为细胞表型特征的T细胞亚群，是维持机体免疫耐受的重要因素之一。胸腺是Treg细胞发育的主要部位。

在存在或不存在免疫球蛋白 G 同种型特异性抗体的情况下，检测肿瘤细胞（作为靶细胞）对自然杀伤 (NK) 细胞活性（作为效应细胞）的反应，以确定能否使用 Agilent xCELLigence 系统研究细胞介导的细胞毒性（依赖于特异性抗体的细胞介导的细胞毒性 (ADCC)）。结果表明，在单层粘附肿瘤细胞上添加 NK 细胞悬液并未导致阻抗或细胞指数 (CI) 产生变化，因为 NK 细胞并不接触底层生物传感器。但是，这些非粘附 NK 细胞分泌的穿孔素和颗粒酶激活了 Caspase，导致肿瘤细胞凋亡。功能异常和垂死的肿瘤细胞脱离生物传感器，从而减少了生物传感器表面上存活和粘附的细胞数量。我们的发现为 Agilent xCELLigence 系统能够用于动态实时检测细胞介导的细胞毒性和特异性抗体的影响提供了令人信服的证据。

白皮书《采用活细胞分析系统最大限度地洞察细胞生长》展示如何利用Incucyte系统的活细胞分析能力更快、更深入、更高通量地提供对生物学事件的新见解，从细胞凋亡、免疫细胞杀伤、神经突生长和吞噬作用，到3D 肿瘤球生长和活性等各种应用场景。

近年来，实时活细胞分析已成为免疫学研究重要的研究方法，突破了传统方法的诸多限制。在这里，我们总结了10 个活细胞分析技术在免疫学中的重要应用，阐述这种方法的广度、深度和价值。

常见的抗肿瘤作用机制包括中和/阻断肿瘤特异性生长因子受体或免疫调节因子，以及发挥抗体结构上的效应功能即利用补体和细胞介导肿瘤细胞溶解。

单细胞技术已经广泛应用于肿瘤，免疫，发育生物学，神经科学，细胞治疗，药物研发及动植物研究中。但并不是所有的组织都适用于单细胞RNA测序，现阶段单细胞RNA测序研究的一个极大的挑战仍是如何获得高质量的单细胞悬浮液。科研者单细胞悬液仪具有起始组织量小，时间短，细胞得率高，细胞活性高的特点。带加热功能，对样品的消化处理过程始终处在恒温状态，细胞得率高达90%，方便了对真核生物进行单细胞核RNA测序。

Eph和ephrin蛋白在协调细胞、细胞导向、细胞与细胞之间的相互作用中发挥着非常重要的作用，与发展的组织模式和器官和血管生成都有关系。Eph家族成员在人类肿瘤的发展过程中有着非常关键功能，在正常的子宫内膜的血管化再生组织和人子宫内膜具有多向分化潜能的间充质干细胞（EMSC）有能检测到Eph家族的蛋白表达，而其他高度血管化的人体器官却没有Eph的表达。澳大利亚的科学家发现，将EphA3+ or EphA3-depleted eSCs和tumour-derived endothelial cells (TECs)共培养时，EphA3+ eSCs不仅有更多的大细胞簇（15个细胞以上组成的）并且有更多的细胞簇。在添加 IIIA4这种Eph活化剂的时候，EphA3+ eSCs的细胞簇的数量有显著的降低。

下载中文白皮书《活细胞分析在免疫学中的十大应用》了解Incucyte® 在免疫学及癌症分析中的应用亮点

下载《CAR-T 细胞进行表型和功能表征》白皮书，了解更多Incucyte? 实时活细胞成像技术与iQue? 高通量流式在肿瘤免疫学中的应用。

细胞迁移是一个活的生物生长和维持生命过程中不可缺少的的关键过程。为了完成相应的功能，体内的细胞经常会以特定的方向迁移到特定的位置。迁移是一个循环的过程，细胞向前端伸出突触，缩回其尾端。动物组织中的细胞发生迁移主要是为了响应特定的外部信号。 细胞迁移对于胚胎发育、伤口愈合、分化以及免疫应答等都是非常重要的过程。细胞迁移是血管疾病，慢性炎症疾病以及肿瘤形成等疾病的致病机理。因此，对那些具有促进（伤口愈合）或者抑制（肿瘤形成）细胞迁移作用的化合物的研究就具有非常重要的治疗意义。我们已经建立了一个使用Molecular Devices公司的SpectraMax paradigm多功能检测平台进行标准化的，自动化的高通量细胞迁移分析新方法。相对于划痕分析或者其他的2D伤口闭合实验，这个分析方法更加简单，更具可重复性。

T细胞受体(TCR)和免疫球蛋白一样，是由多个基因片段的基因重组产生的。这种重组产生了大量的T细胞，每一个都针对一种独特的多肽抗原 (peptide antigen)。T细胞对病毒、细菌、肿瘤细胞以及来自正常组织的多肽（在自身免疫性疾病中）有反应。每个多肽的特异性只在循环T细胞的一小部分中被发现，这使得抗原特异性反应的研究变得困难。MACSQuant® 流式细胞分析仪预富集后分析流程将目的稀有细胞以抗体磁珠标记，再对其他分析标记物进行不同多色荧光标记(Sample treatment)，直接上样流式细胞仪(Load sample)。先使用预富集模块功能，在内建的磁力柱上富集目的稀有细胞 (MACS enrichment)，随后进行细胞分析(Flow analysis)，不因过多操作流程而损失细胞，同时获得更多分析数据。

Elastin?specific MRI of extracellular matrix?remodelling following hepatic radiofrequency?ablation in a VX2 liver tumor modelScientific Reports (2021) 11:6814 (2021影响因子: 4.996)肝肿瘤模型中肝脏射频消融后细胞外基质重塑的弹性蛋白特异性MRI 研究

细胞外囊泡（EVs）或外泌体在传染病和癌症的病理生理学研究中有重要意义。猿类免疫缺陷病毒（SIV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）编码的负调节因子（Nef）在获得性免疫缺陷综合征（AIDS）的致病过程中起非常重要的作用，严重损害胞内运输体系。HIV-1的负调节因子Nef是否会被分泌到细胞外囊泡中，这个问题一直存在争议。人们对SIV负调节因子Nef与细胞外囊泡之间的联系，也一无所知。但是在来源于所培养细胞、经亲和层析纯化所得到的细胞外囊泡和来源于已感染SIV的猕猴的细胞外囊泡中，研究者都发现了SIV和HIV-1负调节因子蛋白。而且，含有Nef的细胞外囊泡是有生物学功能的，也就是说，这类细胞外囊泡能参与膜融合过程，将它们的内含物释放到受体细胞中。所以，这些细胞外囊泡能将负调节因子Nef传递到受体细胞，这意味着负调节因子Nef很容易进入外泌体的生物发生途径，HIV病毒体可以细胞质膜处完成组装。这揭示了慢病毒影响未感染细胞和不可感染细胞（即不含CD4的细胞）的一个新机制。

通过原子力显微镜（AFM）和inVia 3D拉曼成像揭示神经胶质瘤细胞组成方面细化的和补充的信息。神经胶质瘤细胞的AFM和3D拉曼图像

细胞的迁移运动不仅是细胞进行很多重要生理活动的基础，同时也是炎症反应和肿瘤发生等病理过程中的重要步骤和关键环节。细胞迁移 (cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。目前人们对恶性肿瘤的研究是多方面的，从癌症的产生到转移，血管供给以及分裂增殖都一直是医学和生物学研究的热点。恶性肿瘤与良性肿瘤的最大区别就在于是否可以对周遭组织进行浸润，结果是形成边界不分明的癌组织，或是进入血管转移到远端（见远端转移）。根据观察可将癌症浸润分为四步。首先癌细胞表面的粘附分子会减少，与周围的细胞彼此分离，被“解除束缚”。同时癌细胞与基底膜的粘附却会增加，这是癌细胞通过增加自身基底面层粘连蛋白（laminin）受体实现的。然后癌细胞会释放蛋白酶，用以降解细胞外基质成分，如Ⅳ型胶原酶，使基底膜受损，产生缝隙。最后是癌细胞阿米巴运动样的迁移，钻过基底膜的缝隙，到达底下的间质组织。癌细胞此后会继续用蛋白酶为自己在间质组织开路，直到血管，然后它会以同样方式进入血管，经血到转移后，又以同样方式出管。因此，癌症的形成与肿瘤细胞的迁移能力密不可分，这也成为了一个诊断和治疗癌症的一个靶点。研究细胞迁移的方法有很多，比如划痕法、实时细胞追踪、Transwell和细胞芯片等，本文将一一介绍现今比较主流的与细胞迁移相关的实验方法。

细胞迁移在肿瘤形成、免疫作用以及伤口愈合等过程中发挥重要作用。不正常的细胞迁移是心血管、癌症等疾病的一个重要特征。CloneSelectImager系统可以在体外定量客观检测治疗药物的效果、细胞培养基对细胞迁移的影响以及研究细胞和细胞之间的相互作用。系统配备的迁移软件模块可以基于细胞识别客观检测细胞迁移的速率。