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植物组织消解产物

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植物组织消解产物相关的论坛

  • 【求助】请教微波消解植物样品最终产物

    请教大家一个问题,我使用硝酸和过氧化氢的混合物消解植物样品,最后得到澄清的溶液,我想问下这个溶液里面还有有机物吗?纤维素消解的最终产物是什么,大家知道反应的机理吗?十分感谢

  • 【讨论】微波消解植物的产物有什么

    用硝酸和双氧水微波消解植物的时候主要有什么产物啊,为什么有时有的罐子里面都是黄黄的,还直冒黄烟,这些都是什么啊(估计盖子不密封,漏气时会有黄烟产生,因为最后一次,刚消解一分钟打开微波看见罐子往外渗液体)

  • 【求助】植物组织消解问题

    用干法消化植物组织,根据国标方法,高温消化多个小时后,加入稀硝酸溶解,但是很多不溶物,为什么呢?茎叶是已经灰白色了,植物茎还是有明显褐色物质……请有经验者帮分析一下,谢谢!

  • 【资料】 植物和动物组织消解处理过程---样品消解资料之一

    我找到一套资料,是关于样品前处理的,原版英文的,希望能对大家分析应用有所帮助。资料比较多,我先试着翻译翻译,不妥之处望大家指正,先发一篇,以后逐步发表,待集成册后上载供大家查阅。DESTRUCTION OF ORGANIC MATTER IN PLANT AND ANIMAL TISSUE WITH PERCHLORIC ACID-NITRIC ACID MIXTURESPublication: Handbook of INDUCTIVELY COUPLED PLASMA SPECTROMETRYAuthors: M. Thompson and J N WalshField: Biology, Animal, Agriculture, plantReagents(i)Nitric acid, ~ 70 % m/m(ii)Perchloric acid ~ 60 % m/m.(iii)Hydrochloric acid ( 6 M). Dilute hydrochloric acid ( 36 % m/m, 534 ml) to 1l.(iv)Calibration blank – hydrochloric acid ( 1 M).Procedure(i)Weigh each sample (2.00 g, dried at 105 °C and ground *) into a clean, dry, numbered conical flask.(ii)Add nitric acid (40 ml) to each flask, cover with a watch glass, and set aside in the fume cupboardOvernight.(iii) Place the flask on the hotplate and warm gently until frothing ceases and the solutions are almost clear. The nitric acid should be boiling gently ( but without major loss of volume) at the end of this stage.(iv)Allow the flasks to cool, and check that there are no fat globules floating in the liquid.(v)Add perchloric acid ( 3 ml), replace the flasks on the hotplace without cover glasses, and very gently heat until the contents have just reached dryness. Do not overheat.(vi)Allow the flasks to cool, and add water (2-3 ml) and hydrochloric acid (2.0 ml, 6 M) to each. Warm to dissolve the residues.(vii)Transfer the cooled solutions either to graduated test-tubes or to graduated flasks, and dilute to volume with water. * Samples which are difficult to dry by heating (e.g soft fruits) can be freeze-dried, or homogenized and weighed wet. Moisture content can be determined separately.植物和动物组织使用高氯酸和硝酸混合物消解发表: ICP 手册作者: M. Thompson and J N Walsh应用领域: 生物学,动物学,农业,植物研究试剂:1.70 % m/m 硝酸2.60 % m/m 高氯酸3.稀释盐酸36% m/m 534ml 至 1 L4.标准空白 盐酸(1M) 过程:1.每个样品称重(2.00g ,在105 °C 下干燥并研碎 *)置于干净、干燥、带刻度的几个锥形烧瓶中2.在每个瓶中添加硝酸 (40 ml), 用玻璃覆盖, 放置在通风橱内,过夜.3.将烧瓶放置在电炉加热盘上,缓慢加热至起泡并溶液几乎是清亮的. 在本步骤最后硝酸应该缓慢沸腾(但主要体积没有损耗)4.让烧瓶冷却并检查溶液中没有漂浮的脂肪球.5.添加高氯酸 ( 3 ml), 再次将烧瓶放置在电炉加热盘上不用盖盖,然后非常缓慢的加热至内部刚好干燥,不要过热 .6.让烧瓶冷却并且添加水 (2-3 ml) 和盐酸 (2.0 ml, 6 M) 到每个烧瓶. 加热并溶解瓶中的剩余物质7.将冷却后的溶液移到最后的试管或测试的容量瓶中,然后用水稀释定容. * 难于加热干燥的样品(如软的水果)可以冷冻干燥,或者结构均匀可以称量湿重,水份可以分开测量.

  • 植物消解问题

    测定水生植物体内重金属含量。植物前处理:植物为某湖泊沉水植物,采集来之后55度过夜烘干,磨碎。消解称取0.2g样品,消解试剂为5mL硝酸+3mL双氧水+1mL盐酸,过夜预消解;之后用CEM公司的MARS5 微波消解,程序:25min阶梯升至180度、180度保持5min。之后发现消解罐侧壁通红(浓硝酸挥发),消解液溶液大约剩有3-5mL。消解液呈淡黄色,但是溶液里有大量絮状白色沉淀物。遂即又加了1mL HF电热板消解,始终未见沉淀消失。请问这是不是消解不完全,如果是的话,消解时间大约是多少?我怀疑是不是植物体内盐度太高,溶液过饱和析出的缘故?我加了水发现溶液开始变的澄清,但是盐度仪没有读数(超出检测限)。当稀释了近50倍的时候发现此时含盐量为48.6g/L.请问这种分析有没有道理?应该怎么判断呢?按说植物是很好消解的呀,为什么我试了次都不行呢?

  • 植物组织培养及其在中草药研究中的运用

    植物组织培养(Plant Tissue Culture)是应用无菌培养的方法培养植物的一个离体部分,也即是一种将自然环境中分离出来的植物细胞或组织放入含有合成培养基的瓶中,在无菌条件下使之生长或发育的方法。这项工作自动控制50年代后期至今巳取得了很大的进展,如诱导培养胡萝卜的体细胞分化成完整植株,由曼陀罗的花药培养形成了单倍体的植株。  从而证明了植物每个体细胞都有形成整体植物的潜在能力,如植物细胞具有“全能性”,在离体培养的一定条件下能诱导其分化器官和再生成植株。70年代以后有关植物原生质体培养和体细胞杂交的研究得到了很诀发展,如烟草、曼陀罗、颠茄、胡萝卜、油菜等能从其原生质体经培养再生分化长成胚或完整的植物,利用原生质体融合已经能使烟草属和矮牵牛属的杂种细胞增殖分化成杂种植株。  因此,运用组织培养方法可以在比较简单易观察的条件下研究细胞、组织或器官的繁殖、生长和分化,以及各种外界因素对它们的影响,从而为解决农业生产和药物生产中的某些问题开辟了广阔的前景,目前已有若干重要成果应用于生产实践中,一为营养繁殖系的快速繁殖,如以甘蔗为例,原来每亩要用蔗种0.5~1吨,用组织培养快速繁殖的幼苗进行栽培可节省大量蔗种。又如贝母繁殖率非常低,而用组织培养分化出的三个月左右的鳞茎,其大小就相当于用种子繁殖二年生的鳞茎,另一为药物和生物制品的工业生产,药用植物的有效成分一般都从植物体提得,其产量和质量难免要受到植物的遗传性、生长条件、收获时间及贮藏和运输等因素所影响,如果能采用类似培养微生物产生抗菌素的方法生产有效成分,就可克服这些缺点,这对生长条件要求严格、生长缓慢、产量低、价值贵重的植物药更有意义。如近年来已大量培养人参组织,并提取有效成分,因此利用组织培养生产药用成分,探索天然药物生产工业化的途径是当前药物生产的一个新方向,随着大规模人工培养技术的成功,就有可能用组织培养法来代替全植物提取有效成分,这项工作将是未来研究植物药的中心课题之一。一、培养基的组成和配制法  近年来用的化学合成培养基大致由6种成分组成:(1)糖类,②多种无机盐类,(3)微量元素,(4)氨基酸、酰胺、嘌呤:(5)维生素;③生长素。此外,有些培养基还可添加天然的汁液,如椰子汁、酵母提取液、水解酪蛋白、麦芽浸出液等,培养基中如加入0.5~1%的琼脂即为静止培养的固体培养基,否则为悬浮培养的液体培养基。不同植物材料常需要改变配方,如维持生长和诱导细胞分裂和分化的培养基配方就不同,因此配方的种类很多,目前以Ms (Murashige and Skoog)培养基配方为最常用的一种基本培养基,它利于一般植物组织和细胞的快速生长。  总之,在进行组织培养研究时应根据研究目的和培养植物的种类来确定培养基的组成,除营养、诱导作用外还应当注意离子平衡和毒性问题,如水一般都采用重蒸馏水,无机盐类一般都需用化学纯的药品, pH值可用1N KoH(或NaOH)溶液和2N HCI调整。有时可以用普通药品代替,但须注意这些药品不仅应有营养价值,还须无毒。如果在工业上使用大缸深层培养细胞或组织生产有效成分和生物制品、应用培养基的量将要以吨位计量时,则采用什么代用品较为经济实用更应慎重考虑。   二、培养条件   (一)温度: 对大多数植物组织20~28℃即可满足生长所需,其中26~27℃最适合。   (二)光: 组织培养通常在散射光线下进行。光的影响可导致不同的结果。有些植物组织在暗处生长较好,而另一些植物组织在光亮处生长较好,但由愈伤组织分化成器官时,则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。有些次生物质的形成,光是决定三因素。   (三)渗透压: 渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。通常1~2个大气压可促进植物组织生长,2个大气压以上时,出现生长障碍,6个大气压时植物组织即无法生存。   (四)酸碱度: 一般植物组织生长的最适宜pH为5~6.5。在培养过程中pH可发生变化,加进磷酸氢盐或二氢盐,可起稳定作用。   (五)通气: 悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。小量悬浮培养时巨常转动或振荡,可起通气和搅拌作用。大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。  三、材料和方法  从低等的藻类到苔藓、蕨类、种子植物等高等植物的各类、各部分都可采用作为组织培养的材料,一般裸子植物多采用幼苗、芽、韧皮部细胞,被子植物采用胚、胚乳、子叶、幼苗、茎尖、根、茎、叶、花药、花粉、子房和胚珠等各个部分。  由于植物在自然条件下,表面常被霉菌和细菌污染,故材料必须进行灭菌处理。一般用漂白粉溶液(1~10%)、次氯酸钠溶液(0.5~10%)、升汞溶液(0.01%)、乙醇(70%)或过氧化氢(3~10%)等处理后,再用无菌水反复冲洗至净,然后在无菌室内,将所取的组织迅速培养在固体培养基上。在适宜的条件下,受伤组织切口表面不久即能长出一种脱分化的组织堆块,称为愈伤组织(Callus),此种愈伤组织在适当的培养基上经一定时间即能诱导生长成整株植物,因此愈伤组织既可是某种植物代谢产物的来源,又是诱导成株的主要途径之一。  在适宜的培养条件下,还可使愈伤组织长期传代生存下去,这种培养称为继代培养。但在继代培养中,不少植物培养的组织或细胞随着再培养代数的增加,分化能力就逐渐降低甚至丧失,其原因可能是由于在培养过程中原有母体中存在的、与器官形成有关的特殊物质被逐渐消耗所致,因此可以用激素或改善营养条件使之恢复,也有认为是组织和细胞在长期培养中遗传往的改变,主要是染色体的变化,出现大量多倍性或非整倍性细胞,这种改变恢复的可能住较小。不同的培养基可以使愈伤组织具有不同的生长速度,结构也可松可紧,利用这些特性可使之分散成为单细胞或很小的细胞团。要形成单细胞培养宜在较高盐分、高生长素及高水解酪蛋白的培养基中进行,然后移入液体并经搅拌而分散成单细胞。也有用加入一些果胶酶的办法,但一般来说要得到纯一的单细胞是很少的。  在培养药用植物选材时,还应考虑到所需要的次生物质在植物体中的合成部位,如果选材和培养方法适当,可使原植物内所产主的代谢物通过细胞或组织培养发生生化转变而获得。  通过组织培养可获得有效成分,但实际上只有大量培养成功才有经济价值。因此在生产上常采用悬浮培养法来代替含有琼脂的固体培养基。愈伤组织悬浮培养的生长通常比静止培养快,这是由于悬浮培养时营养成分可较快地渗入细胞,抑制生长的代谢废物可较快地除去,同时供氧情况也较好,在进行这种培养时要注意通气与定期更新营养液,这是保证生长稳定,次生物质产量高的关键之一。  四、有效成分的形成  列举用组织培养方法合成的一些有效成分。  利用组织培养方法产生药用成分,已渐渐成为药物生产的新方向之一。六十年代以来,有些国家已经开展了薯蓣及其他有关科属植物的组织培养,研究薯蓣皂甙元的形成,探讨其生物合成机制;已知有7种薯蓣属植物经组织培养后,可获得薯蓣皂甙元或其它甾体化合物,其中三角叶薯蓣Dioscorea deltoides Wal1。经组织培养得到薯蓣皂甙元的含量为0.3~2.5%,此外尚有鱼藤酮、甘草甜素,菸碱等,例如从烟草根尖细胞悬浮培养可产生2.9%(干重)菸碱。  在通常应用的基本培养基中适当添加生长激素、维生素或其他化学药品有时能使代谢物增加,如白花曼陀罗组织培养时,在培养基中加进0.1%酪氨酸可使阿托品的产量增加7倍多,芸香组织培养时在培养基中添加4一羟基-2喹啉酚,可促进白藓碱的合成和积累,在这两例中的添加物被认为是生物合成的前体。又如培养三分三愈伤组织时,在生长后期供给1my/1激动素,可使东莨菪碱的含量达到0.495%,比原植物中的含量提高很多。  除了培养基的组成外,环境因素也影响次生物质的产生。例如石芹的组织培养在黑暗中虽也增殖,但不形成黄酮类,而当暴露于光线中时,就能测出芹菜甙。组织培养应用在药学方面的工作虽然历史不长,但发展很迅速,它具有如下一些优点:  1.利用组织培养代替原植物的栽培以获得所需的有效成分,达到产量高,成本低的目的,还可节约土地。  2.除了应用于产生次生物质外,还可应用于生物转化。例如烟草组织培养中蒂巴因去甲基后可能生成吗啡。  3.从组织培养的定性分析中发现新化合物。例如在芸香组织培养中,合成和积累了芸香素(Rutacultin),它是一个至今尚未能从原植物或其他植物的呋喃香豆精中检测到的化合物。因而,组织培养将是获得新的生物活性化合物的一个来源。  4.一般情况下,组织培养是异养的,但也有自养的细胞系株,它们具有光合作用的能力而不依赖外界的糖类供应。这种特性将使细胞培养技术优越于全植物,并更为经济。  目前中国有关单位已成功地将麦角菌、灵芝、猴头菇等真菌进行工业化生产,高等植物组织培养在工业化中的应用也正在研究。  总之,植物组织培养这一新技术在中草药方面应用的前途是无限广阔的,它不仅有利于探讨和阐明药用植物生理、遗传和成分生物合成等一系列理论问题,而且一旦工业化生产问题得到解决,将可以为防病治病做出很大的贡献。

  • 植物样品 预消解

    急问:植物样品(茶叶标准物质),0.2/0.5g样品,加7ml HNO3,1ml H2O2,预消解时即剧烈反应,溢出了消解罐,这种情况正常吗?怎么避免啊?ps:做实际样品时,反应没有这么剧烈啊。

  • 【求助】微波消解植物该如何设置条件

    接到个样品,居然是一颗植物,大抵是用这颗植物来富集土壤中的重金属的。现在要测定其中重金属的含量,指明要整棵粉碎后的混匀结果。该如果做?(能不能在烘箱烘干后搅碎混匀了取样消解。我的微波炉是新仪的,该如何设置消解条件才能基本将其消解完全?)

  • 样品前处理 两个不同居群(同种植物)的次生代谢产物

    我是要测 两个不同居群(同种植物)的次生代谢产物,仪器是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url],但是我从来没有接触过这类实验,请问是否可以跟我说说大致的实验步骤呢,另外我也不知道如何实现样品前处理。主要看酚类,类黄酮 在 不同居群间的差异谢谢~~

  • 植物样消解不能加氢氟酸吗?

    植物样消解到底能不能加氢氟酸呢?不加时溶液有沉淀、部分元素偏低,定量滤纸过滤效果不明显,甚至有些如钙会增大(与同一样液未过滤时相比);加2ml氢氟酸后,溶液澄清、标物样品所有元素都在正常范围内。可是我所知道的是氢氟酸主要是消解土壤及矿质样品中的硅酸盐,用在植物样中,合适吗?忐忑中……

  • 植物样湿法消解时,粘壁现象

    植物样测定微量元素,0.5g样品,湿法消解,加入硝酸-高氯酸的混合酸,先冷浸,在消化的时候总会有一些样品粘在了四氟的烧杯壁上,随着加热时间增长、温度的升高,就干在上边了,这个时候不合适加酸或者什么的冲洗吧,而且植物样轻,总有些飘在液面上,各位大侠,有没有什么好的解决办法啊?再一个就是有说加盖消解或是表面皿的,不会有液体顺着盖子流到加热板上吗?这个有什么好的方法避免啊?

  • 湿法消解植物样出现碳化

    最近在做植物样品,拿标准物质柑橘叶和灌木枝叶摸条件,0.5g加混酸(硝酸:高氯酸 4:1)10ml过夜冷浸,次日100度低温消解,柑橘叶出现严重的碳化现象,灌木枝叶正常。1、怀疑是温度高和样品取样量大,然后0.2g--80度,结果还是会出现碳化。2、怀疑粒度太小,然后自己粉碎同是革质的杠柳叶,分别过筛40、60、100、200目筛,同称取0.5g--10ml-100度消解,无碳化现象。不知大家有无做植物样消解,特别是做过柑橘叶的没有,出现过这样的情况吗?

  • 植物样品 微波消解 挂壁

    做植物样品消解时,向消解罐内加粉碎样品时,很多都会挂在内壁上(加酸时冲不干净),大家有这种情况吗?一般都怎么办?有什么影响吗?

  • 【求助】做植物样品消解时,样品与酸的比例应该是多少啊

    我在做植物样品消解时,发现很多人都是0.5克样品+5ML酸,然后加热。 为什么我加的酸的量都10ML了,还老是炭化?难道是因为我用的是加热套加热,比较难以控温? 但我把样品量改为0.2克+10ML酸的时候,就可以正常消解了,谁知道这是怎么回事?

  • 微波消解植物油后效果对比?

    微波消解植物油后效果对比?

    我们单位的A、B 两个不同品牌微波消解消解植物油后,出现两种不同的效果,差异很大?请诸位专家给点建议,哪个效果更靠谱呀?[img=,690,591]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/02/201802011954063450_935_1796754_3.jpg!w690x591.jpg[/img]

  • 如何高通量高效破碎动植物组织和微生物

    如何高通量高效破碎动植物组织和微生物

    破碎大量样品、低温破碎大量样品、破碎坚硬或韧性较强的样品时,人工手动研磨就成了实验猿的噩梦。当然,也有很多实验猿已经尝试过市面一些研磨机/超声波粉碎机,发现自己那顽固的样品依然无法被完全破碎/破碎过程损坏了目标成分而十分心塞。 分享个高通量高效破碎动植物组织和微生物的方法,别逗,当然不是靠徒手研磨能做到的,必须入手个神器——tissuelyser系列和JXFSTPRP系列多样品组织研磨机。对于动植物组织和微生物,包括一些难以破碎的组织样品,都可以使用这个研磨机对其进行完全粉碎。 特别地,一些尤其坚硬/韧性比较强的样品,或要求维持低温条件进行破碎提取的样品,需要结合液氮进行研磨,如:皮肤、硬骨骼、软骨、血管、结缔组织、种子等;使用普通机械研磨方法,很难既保证研磨破碎效果又保证样品一直处于低温状态,尤其是提取RNA、酶等对温度敏感的物质时,低温状态的控制显得尤为关键。入手一台上海净信的多样品组织研磨机,这些都不再是问题了。看招:注:由于样品的具体差异及实验要求的不同,下文数据部分请咨询厂家。第一部分 破碎动物组织1)样品:猪肌肉组织2)仪器:Tissuelyser多样品组织研磨机(品牌:上海净信);耗材:***毫升离心管和直径***毫米的研磨钢珠3)步骤:a.取***克左右肌肉组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干***毫升的研磨离心管中。b.每个试管中放入***颗直径***毫米的研磨钢珠和800μLPBS裂解液,分别盖紧管盖后,置入24孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。c.将Tissuelyser多样品组织研磨机的参数设置为***赫兹,研磨***秒,启动研磨器。d.研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的肌肉组织样品。4)结果:研磨后的效果如图1,猪肌肉组织成很细腻的泥浆状,说明Tissuelyser多样品组织研磨机对猪肉组织的研磨效果良好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150947_546190_3397_3.jpg图1 猪肌肉研磨对比第二部分 破碎植物组织1)样品:水稻叶片2)仪器: Tissuelyser多样品组织研磨机(品牌:上海净信);耗材:***毫升离心管和直径***毫米的研磨钢珠3)步骤:a.取***克左右叶片组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干***毫升的研磨离心管中。b.每个试管中放入***颗直径***毫米的研磨钢珠,分别盖紧管盖后,置入24孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。c.将Tissuelyser多样品组织研磨机的参数设置为***赫兹,研磨***秒,启动研磨器。d.研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的叶片组织样品。4)结果:研磨后的效果如图2,叶片组织成很细腻的泥浆状,说明Tissuelyser多样品组织研磨机对叶片组织的研磨效果良好。顺带附上研磨黄豆(坚硬的植物种子)的研磨对比图。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150948_546191_3397_3.jpg图2 水稻叶片研磨对比http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150948_546192_3397_3.jpg图3 黄豆研磨对比第三部分 结合液氮使用tissuelyser研磨机 当样品死活无法破碎完全/样品傲娇要低温环境时,Tissuelyser多样品组织研磨机+液氮=问题轻松解决。以血管和植物叶片为例,具体操作方法如下: 血管: 取0.1克新鲜血管,用剪刀剪成若干小块,然后放入2毫升离心管中,加入1颗6mm研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管放入液氮中冷冻1分钟左右或直到液氮不沸腾,然后放入机器处理30秒钟。取出样品管可见样品被破碎成乳白色粉末,然后加入提取缓冲液,可以进行接下来的后续提取,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃以下。 叶片: 取0.2克植物叶片,清洁叶片表面后放入离心管中,加入1颗直径5mm不锈钢研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管和适配器放入液氮中冷冻1分钟左右或直到液氮不沸腾,然后取出放入研磨机器中机器处理30秒钟。取出样品管可见叶片被破碎成绿色粉末,然后加入提取缓冲液,进行接下来的后续提取即可,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃以下。后记 想入手这个神器,但又对研磨效果有所犹疑的小伙伴,现在上海净信部分研磨机产品可申请试用,是时候下手了。激动人心的还有,近期研磨机好价,试用爽了直接入手一台也是毫不含糊的。

  • 湿法消解植物样柑橘叶出现碳化

    最近在做植物样品,拿标准物质柑橘叶和灌木枝叶摸条件,0.5g加混酸(硝酸:高氯酸 4:1)10ml过夜冷浸,次日100度低温消解,柑橘叶出现严重的碳化现象,灌木枝叶正常。1、怀疑是温度高和样品取样量大,然后0.2g--80度,结果还是会出现碳化。2、怀疑粒度太小,然后自己粉碎同是革质的杠柳叶,分别过筛40、60、100、200目筛,同称取0.5g--10ml-100度消解,无碳化现象。不知大家有无做植物样消解,特别是做过柑橘叶的没有,出现过这样的情况吗?再次提出这个问题,只因一直未解决

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