真菌细胞

真菌是一大类不含叶绿素，无根、茎、叶，由单细胞或多细胞组成的真核细胞型微生物。大部分真菌对人类有益，能引起人类疾病的病原性真菌主要包括浅部真菌和深部真菌。 实验目的： 观察真菌的基本形态及菌落特点，了解浅部及深部真菌的检查方法。 实验内容： 一、常见单细胞真菌的形态观察 1、新型隐球菌墨汁负染色片：可见菌体呈球形，大小不一，有很厚的荚膜，包围在菌体周围，透明发亮，并可见发芽的菌体。 2、白色念珠菌菌体形态：用患者的棉拭子标本常法涂片，革兰氏染色，镜检。显微镜下可见菌体呈卵圆形，较葡萄球菌大2-5倍，细胞出芽伸长而成假菌丝，在假菌丝生长点上有芽生孢子及沿假菌丝顶端生长的大而圆的厚膜孢子。 二、皮肤丝状菌的检查 材料： 病人的甲屑、皮屑或毛发、10%KOH溶液、载玻片、盖玻片、小镊子、普通光学显微镜等。 方法： 1、采标本：用钝刀在手、足、体癣损害部位边缘轻轻刮取皮屑，甲癣可用小刀刮取病损指（趾）甲深层碎屑。 2、制片：用小镊子取少许皮（甲）屑标本置于载玻片中央，滴1-2滴10%KOH溶液，覆加一盖玻片，在火焰上缓慢加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后轻轻加压使成薄片，驱走气泡并吸去周围溢液。 3、镜检：先用低倍镜观察有无真菌菌丝或孢子，再用高倍镜观察菌丝、孢子的特征。镜检时光线应稍弱，使视野稍暗。阳性标本常可查见分支菌丝或孢子。 三、真菌的培养 材料： 菌种、沙保氏培养基、平皿、载玻片、盖玻片。 方法： 1、一般培养：分别将新型隐球菌、白色念珠菌、絮状表皮癣菌接种于沙保氏培养基，于22℃-28℃下培养（深部真菌可培养于37℃环境），一周后观察菌落特征。真菌菌落在形态上可分为三大类： 酵母型菌落：与细菌菌落相似，圆形、白色、边缘整齐、表面光滑湿润。 类酵母型菌落：同酵母型菌落，圆形、较大、白色，但菌落根部有假菌丝长入培养基内。 丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式。有许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状、绒毛状或粉末状，菌落中央有皱折，外围有放射状沟。其正面和背景又可显示各种不同颜色。 2、小培养（玻片法）：在无菌平皿中先倾注10-15ml沙保葡萄糖琼脂，待凝固后，无菌操作将琼脂切成约0.5cm的方块，再将琼脂块移放在灭菌的载玻片上，然后在小块培养基四边接种已分纯的真菌菌种，盖上无菌盖玻片，移入有一定湿度的无菌平皿内，置22℃-28℃孵育。动态观察生长过程，根据菌丝和孢子的特点鉴定真菌类别。

真菌是一类具有典型细胞核和完整细胞器,无根、茎、叶,不含叶绿素的真核细胞型微生物。大多数真菌对人体无害,但少数也可引起感染性、中毒性以及反应型疾病。在临床上以浅部感染真菌的毛癣菌属和深部感染真菌的白假丝酵母菌最为常见。实验室诊断的真菌阳性确诊性报告需要经过采集标本、直接镜检以及分离培养、生化反应,免疫学、分子生物试验鉴定等程序。整个过程复杂,成本高、时间长,从标本采集到报告发出,一般需24~48小时。非常不利于医生在第一时间给病人特别是门诊病人诊断、用药,以致延误病情。因此直接镜检后发出的初步诊断报告就显得尤为重要,对真菌感染性疾病的诊断具有重要意义。而真菌在体积上比细菌大几倍到几十倍,在形态上具有典型的菌丝和孢子,在结构和化学组成上不复杂、易染色,这些都为提高直接显微镜检查后所发出的初步诊断报告的阳性检出率提供了有利条件。近年来,我科室人员经过不断的摸索实验,总结出了不少经验,为临床医生提供了及时可靠的诊断报告,受到了他们的好评。浅部感染真菌的显微镜实验室诊断浅部感染真菌系指主要侵犯人和动物皮肤、毛发、及指(趾)甲,引起癣病的真菌

香菇。研究发现，香菇中含有的真菌多糖是抗癌活性物质，能促进抗体形成，使机体对肿瘤产生免疫力，抑制肿瘤细胞生长。此外，香菇中的真菌多糖不仅能提高免疫力，还可以有效提高人体抗污染能力。

[align=left][b]简介[/b][/align]随着人民生活水平的提高，社会的进步，食品中微生物污染造成的[url=http://www.cnfoodsafety.com/]食品安全[/url]问题也越来越受到广大消费者、食品企业、政府监管部门的关注。食品变质原因90%是由微生物（细菌、真菌等）引起的，在此大环境下，食品加工企业要不断提高企业管理水平，保证所生产出的产品安全合格。[b]真菌[/b]说到真菌，很容易想到细菌，因为它们都能引起食品变质。其实真菌与细菌有本质上的不同，这种差别显示了生物进化历程：显微镜下可见细菌形态单一，呈球状或棒状；真菌形态比细菌复杂，有菌丝、芽胞等结构。所以真菌比细菌更难杀灭。真菌，是一类有细胞壁，不含叶绿素，无根叶茎，以腐生或寄生方式生存，能进行有性或无性繁殖的真核微生物。真菌中最常见的是各类蕈类，另外还有霉菌和酵母。世界上已被描述的真菌约有 1万属12万余种。真菌的危害在食品加工行业中是时时存在的。因为在空气中，水中，原料中都有真菌的孢子存在。遇到适宜的环境，即可繁育。同时，真菌通过产生真菌毒素也给人体健康带来危害。[b]食品生产过程中的真菌[/b]真菌在过去曾称为霉菌，是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10万种以上。它们的个头差别很大，小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米，如茯苓、蘑菇等。以食品行业为例，霉菌会造成食品腐败变质，是造成食品工业巨大经济损失的主要腐败微生物。霉菌污染频繁出现在食品、饮料、海产品、肉制品、熟食和新鲜的蔬菜中，每年都会给生产者和消费者造成极大的经济损失。霉菌除了会引起肉眼可见的腐败变质外，还会产生一些真菌毒素类物质，目前研究已经确定有超过200种霉菌在食品中生长时会产生对人体有害的物质，主要有黄曲霉毒素类、串珠镰刀菌素、赫曲霉毒素、棒曲霉素、单端孢煤烯类和玉米赤霉烯酮六大类。由于这些霉素具有致癌致畸形、同时对神经、肝肾也有毒害作用，因此这些腐败真菌给食品工业造成了巨大经济损失，同时也对公众的健康构成了极大危害。据统计，25%的农产品都含有霉菌毒素，在烘烤行业，霉菌造成的损失随着季节、产品种类、加工方法的不同在3%—10%之间浮动。假设仅有1%的损失，在英国每年由霉菌造成的污染的面包就有23000吨，价值2.42亿英镑。在澳大利亚每年由霉菌造成的经济损失大约在1千万美元。在水果行业，水果采摘后的使用杀菌剂的条件下也会有5%—10%的损失，在某些没有使用杀真菌剂的年份，损失达50%甚至更高。[b]食品厂杀灭真菌的方法[/b]食品加工厂生产车间温度、湿度适宜且营养物质丰富，较容易生长繁殖微生物，稍不加注意洁净车间卫生条件，很容易受真菌污染，导致食品腐烂变质。特别是食品厂霉菌因其特性一般的消毒剂很难对付。然而过氧化氢银离子复合型杀菌消毒剂杀孢子剂具有强烈杀灭食品厂真菌的作用，彻底分解不产生耐药性，并且对人健康无害，无色无味，无毒无残留，安全绿色环保，是新一代进口食品级消毒杀菌剂。[b]奥克泰士[/b]奥克泰士是进口德国，专为食品厂设计，奥克泰士配合空间、环境、物表等可达到食品企业消毒灭菌的要求，近来深受食品企业的青睐。奥克泰士杀菌消毒剂是由食品级过氧化氢和银离子组成的复合型溶剂，食品级无色无味无毒无残留型，IFS国际食品标准认证，欧盟EMAS检测认证等。所采用的氧化剂为过氧化氢，它与稳定剂结合形成复合溶液。作为催化剂添加的痕量银离子可以保持长久的效用。银离子的杀菌作用是基于单价银离子通过共价键和配位键来与细菌蛋白质牢固结合，从而使细菌钝化或沉淀。能在食品厂洁净区消毒中迅速杀灭一定空间内的的微生物（包括芽孢）或者抑制微生物繁殖的进口高效消毒剂。德国BUDICH INTERNATIONAL GMBH研制、生产，是目前国际上一款卓越的杀菌消毒剂。由于其独特的作用原理，能够快速杀灭包括芽孢、细菌孢子、真菌孢子、放射菌、分支杆菌、酵母菌、霉菌、病毒在内的所有类型的微生物。做为新一代生态环保的消毒剂在欧美发达国家早已成熟应用。在欧盟食品企业已经完全禁止甲醛的大环境下，奥克泰士是目前众多欧盟食品企业的首选。也代表着过氧化氢银离子复合型杀菌消毒剂发展的新方向。产品技术引进国内短短几年。目前在食品饮料、制药安全、医疗卫生等国内众多高端灭菌领领域顺速推广。奥克泰士己成分中国食品企业杀菌消毒的首选。可用于洁净室空间和生产设备、各类洁净区物表消毒和空间消毒；操作台表面消毒。适用领域包括食品、食品设备、食品企业动态环境、食品企业生产等。也可用于不锈钢、钢、塑料、玻璃、地板、墙壁等各种表面的消毒、灭菌等。[b]奥克泰士特点[/b]1、它能够有效杀灭细菌、病毒、变形虫、真菌及藻类，其十分广泛的应用领域使得用户便于操作处理。只需采用一种产品，便能够达到目前2种、3种甚至多种产品的使用目的。2、由于产品具有良好的稳定性，因此保证了长久的贮藏时间。产品在高水/气温度下仍能保持稳定；甚至在高温下，其效用还会有所增强。3、由于产品在防止再污染方面具有长久的有效性并且性能卓越，因此，产品非常适合用于饮用水与井水的消毒。4、过氧化氢银离子复合型杀菌消毒剂型产品是生态无害的。对防止水受细菌和病毒的再污染特别有效。其主要成分－过氧化氢－不会污染废水。这是由于它会分解成为水和氧气(H[sub]2[/sub]O和O[sub]2[/sub])，即，其副产物不具毒害性。5、两种基本物质（H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub]和Ag）进一步促进了各自的优势（*协同作用）。两种物质的协同作用比其中任何一种物质单独作用要具有更快、更强的杀菌作用。*协同作用—两种或多种组份用以提高和增强效用6、过氧化氢银离子复合型杀菌消毒剂为在氧化和微动作用相结合的情况下所制成的两相产品——不同于其它消毒剂——具有破坏生物被膜的功效。这是杀菌消毒的一个重要步骤，因为细菌或病毒会产生出这种生物被膜作为自然防护。由过氧化氢所分离出的氧气会破坏生物被膜，使得银离子能够轻易地杀灭细菌或病毒。

原标题：废弃塑料瓶可转变成高效抗真菌药 科技日报讯 （记者华凌）据物理学家组织网12月10日（北京时间）报道，IBM纳米医学研究人员和新加坡生物工程与纳米科技研究院合作，将回收的废弃塑料瓶转变成无毒且生物可相容的高效抗真菌纳米纤维，可治疗耐药真菌感染和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）等细菌感染。该项研究成果刊登在12月9日的《自然·通信》上。 全球每年都有超过10亿人受真菌感染，严重程度从局部皮肤感染（如足癣）到威胁生命的真菌血液感染。患者在接受抗生素治疗时，免疫系统会受到损害。目前迫切需要开发高效和针对具体疾病的抗真菌剂，以减轻日益严重的耐药性问题。传统的抗真菌治疗需要进入细胞内攻击感染，但很难瞄准和穿透真菌膜壁。此外，由于真菌代谢类似于哺乳动物细胞，现有的药物还不能区分健康和受感染细胞。 基于这个认识，IBM的科学家利用一种有机催化过程，促进由聚对苯二甲酸乙二酯（PET）制成的普通塑料材料的转化，在该过程中产生了抗真菌剂的全新分子。这些新的抗真菌剂通过一个氢键粘结法自行组装，像分子尼龙搭扣互相粘连，以类聚合物状的方式形成纳米纤维，从而表现出活跃的抗真菌效果。这种新颖的纳米纤维带正电荷，并且可以选择性地靶向和附加到只基于静电相互作用的带负电的真菌膜。然后，它通过分解和破坏真菌细胞膜壁，阻止其不断攻击。 研究人员还通过计算机模拟研究，预测出修改其结构可产生理想的治疗效果。这种纳米纤维的最小抑菌浓度（MIC）可以达到抑制可见真菌生长的最低浓度，并表现出对多种类型的真菌感染强有力的抗真菌活性。进一步的试验证明，这种抗真菌纳米纤维可根除超过99.9%的白色念珠菌。研究人员说：“这些分子自我组装成纳米纤维后，能瞄准真菌膜及其随后的裂解，从而在低浓度下摧毁真菌。” 研究结果还表明，这种抗真菌纳米纤维在一次性治疗后，可有效分散真菌生物膜，却不伤及周围的健康细胞。 总编辑圈点 塑料瓶子让人们又爱又怕，爱的是它价廉物美，怕的是它难以降解，不为环境所动——“塑料恒久远，一瓶永流传”。谁料到，废弃塑料瓶也有如此高端大气上档次的用途——它竟然变身为“聪明”的纤维，跟真菌互相吸引，让真菌在紧紧的拥抱中窒息而亡。或许很快，新纤维就能轻松根除困扰人类的诸多皮肤疾患，还有一些致命的感染。有了科学家的提携，塑料瓶子改头换面，立了新功。来源：中国科技网-科技日报 作者：华凌 2013年12月11日

现已查明自然界存在的真菌毒素在200种以上，按真菌毒素的重要性及危害依次排列为：黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OA)、单端孢霉烯族毒素(Ｔrichothecenes)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEA)。真菌毒素具有两种毒性，一是致DNA损伤，有者可致癌；二是细胞毒性，有破坏质膜和细胞酶的作用。 1、黄曲霉毒素及对人类健康的影响 黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)是由黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(A．parasiticus)代谢产生—类结构相似含多环不饱和香豆素的化合物，已分离出17种，其中4种(B1,B2,G1,G2)已完全弄清其特性并从毒物学方面进行了广泛研究，以AFB1毒性最大(大于氰化钾)。 黄曲霉毒素可存在于多种热带或亚热带地区出产的食品内。最常发现含有黄曲霉毒素的是花生。其他食品还有玉米、无花果、果仁及多类谷物中感染黄曲霉毒素都较常见。黄曲霉菌肉眼看来往往是绿色的，而黄曲霉毒素却无臭、无味、无色。 化学上而言，食物中的黄曲霉毒素呈稳定状态，能抵受一般的烹调过程，不易分解。黄曲霉毒素一旦出现，便难以消除。在现今社会里，人类因摄取到黄曲霉毒素而引起急性中毒的个案是很罕见。中毒病征可能包括发烧、呕吐及黄疸病，也可能引致急性肝脏受损，情况严重的会致命。长期摄取黄曲霉毒素与罹患肝癌有关。动物研究结果显示老鼠、仓鼠及猴子等动物经长期口服黄曲霉毒素后，可引致肝部长出肿瘤。

[size=18px][b][font=宋体] 真菌毒素是真菌产生的次生代谢产物，是生物毒素的一类，具有较高的生物毒性，如致癌、致畸和肝肾毒性等。早在[/font]11[font=宋体]世纪欧洲圣像画中就有关于真菌毒素引起中毒的描述，[/font]1960[font=宋体]年英国[/font]10[font=宋体]万多火鸡因食用被黄曲霉毒素污染的饲料而死亡的事件，真菌毒素才被大家重新认识。[/font][font=宋体] 因其具有较高的生物毒性，如摄取一定量被真菌毒素污染的食品会对人民群众的身体健康造成极大的危害。同时，真菌毒素超标也是限制我国农产品出口的极大的障碍。近年来，真菌毒素导致的食品安全问题受到了国内和国际相关组织的高度关注，其对食品的污染也被世界卫生组织列为食源性疾病的重要来源，受污染的食品也会随着人畜食物链的演进影响到环境安全。[/font][font=宋体] 植物源性食品，如大米、小麦粉、植物油、蔬菜、水果等，均是人们日常生活必备的食物来源，且是主要来源，同时这些植物源性食品中有很大一部分容易受到真菌毒素的污染，如小麦粉容易受到黄曲霉毒素[/font]B1[font=宋体]、赭曲霉毒素[/font]A[font=宋体]、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇等的污染，且这种污染是我们用肉眼不可区分的，且一种食物可能会受到多种真菌毒素的污染。同时，食品中真菌毒素的限量标准也在不断降低。而目前植物源性食品中真菌毒素的检测方法多为针对某一种或某一类真菌毒素的检测，且多以液相色谱[/font]-[font=宋体]荧光检测器检测为主。[/font][font=宋体][b][font=宋体] 为确保植物源性食品的安全，近年来世界各国聚焦威胁植物源性食品安全的主要风险来源，不断建立相关限量及检验检测技术标准，相继开展风险评估工作，当然，对于真菌毒素的研究也在其中。[/font][font=宋体] 目前研究显示，对于植物源性食品主要涉及的真菌毒素种类为黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素[/font]A[font=宋体]、伏马毒素、[/font]T-2[font=宋体]毒素等。相关限量标准也一直备受各国关注，对于限量标准的制定和修订也一直没有间断。我国在二十世纪八十年代初制定了食品中黄曲霉毒素[/font]B1[font=宋体]的限量要求，后陆续对黄曲霉毒素[/font]M1[font=宋体]、展青霉素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇制定了限量要求，到[/font]2005[font=宋体]年，整合形成[/font]GB 2761-2005[font=宋体]《食品安全国家标准[/font][font=宋体]食品中真菌毒素限量》标准，并于[/font]2011[font=宋体]年和[/font]2017[font=宋体]年分别进行了修订，依据公众健康风险和膳食暴露水平对部分食品类别的部分毒素的限量进行了调整，但伏马毒素和[/font]T-2[font=宋体]毒素尚未规定限量标准，国际上除苏联规定[/font]T-2[font=宋体]毒素在粮食中的限量外，其他国家未查询到相关限量要求。[/font][/b][/font][/b][font=宋体][b][font=宋体] [b]目前，真菌毒素的检测技术主要有免疫分析法、仪器分析法和薄层色谱法。免疫分析法主要有连接酶吸附法、胶体金染色法和同位素放射法，主要是利用生物体中的抗原细胞和抗体细胞，在真菌毒素污染后两者的反应发生变化，导致含量变化，进而通过标记抗原或抗体，通过标记物的变化判断毒素的种类与数量。仪器分析法主要有经典仪器法和新型仪器法，经典仪器法目前主要采用高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱法，不同种类的真菌毒素通过液相色谱柱进行分离，根据不同毒素的性质差异选择不同的检测方式；新型仪器法主要有红外线光谱检测技术、高光谱成像检测技术和电子鼻检测技术。[/b][/font][/b][/font][/size]

耐药性金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌是两种严重影响人类健康的传染性病原微生物。传统抗生素的滥用导致了这些细菌耐药性的增强，从而增加了治疗成本和健康风险。因此，发展新型特效的抗生素药物已迫在眉睫。作为天然免疫效应分子的抗微生物肽为这一挑战带来了新的契机。与传统抗生素相比，抗微生物防御素具有独特的抗菌机理，能够有效延缓细菌耐药性的产生。 中科院动物所研究员朱顺义领导的动物天然免疫研究组以皮肤真菌犬小孢子菌为对象，利用生物信息学和实验生物学方法鉴定了一个新型的真菌来源的防御素（命名为孢子霉素），具有广阔的临床应用前景。 研究发现，合成的孢子霉素具有典型的半胱氨酸稳定的alpha-螺旋和beta-片层空间结构。在微摩尔浓度下能够有效抑制铜绿假单胞菌和多种耐药性金黄色葡萄球菌临床分离株的生长。杀菌动力学试验表明，孢子霉素比万古霉素具有更快的杀菌速率。细胞膜透化测定和电子显微镜观察发现孢子霉素对细菌细胞膜没有影响，但是能够导致菌体内蛋白质样颗粒的沉积。孢子霉素对哺乳动物缺乏毒性且具有极高的血清稳定性。小鼠腹膜炎模型证实该肽能够有效治愈耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床分离株以及铜绿假单孢菌造成的致死性腹腔感染。 研究首次表明皮肤真菌为一种新的抗感染药物资源，为治疗耐药性细菌引起的感染带来了新的希望。这项成果已在PNAS上发表。 文章链接

中国科技网讯 美国德州大学自然科学学院21日表示，通过深入分析酵母菌、青蛙、实验鼠和人类进化的关联性，该院科研人员发现一种廉价的抗真菌药物——涕必灵能够减缓肿瘤生长，有望帮助寻找癌症化疗新途径。 涕必灵作为口服抗真菌药物已在临床医学中使用了40年，但从未被用于癌症治疗。德州大学科学家查海吉（音译）、爱德华·马库特、约翰·沃灵福德和同事发现涕必灵如同血管破裂药剂，能够破坏新生血管。相关的研究发表在《科学公共图书馆·生物》杂志上。 肿瘤通常会诱导生成新血管来为其失控的生长提供营养。抑制血管生长是十分重要的化疗手段，因为它能“饿死”肿瘤。在针对实验鼠的实验中，科学家发现涕必灵能够让纤维肉瘤的血管生长减小一半以上。同时，涕必灵还能减缓肿瘤的生长。 化学教授马库特表示，新的研究结果令人振奋，因为他们首次发现了已获准使用的药物具有人类血管破裂药剂的作用。研究显示，涕必灵有可能与其他化疗方式相结合用于癌症临床治疗。这一新发现是跨学科和跨生物体研究的典范。 在过去完成的研究中，马库特和同事发现了单细胞酵母菌与脊椎动物之间因分享进化史而分享着基因。在没有血管的酵母菌中，分享的基因负责对施与细胞的不同压力作出响应；而在脊椎动物中，分享的基因被重新目的化后来管理动脉和静脉的生长或血管生成。 马库特和同事推断，通过分析这组特别的基因，有可能验证那些能够作用于酵母菌的药物同时也能作为血管生长抑制剂适用于癌症化疗。最终的实验结果证明他们的推断是正确的。 细胞和分子生物专业研究生查海吉的任务是寻找能够抑制酵母菌中基因活动的分子，结果发现涕必灵具有所需的功能。随后，她对发育过程中的青蛙胚胎进行药物实验。她发现，青蛙胚胎在含有涕必灵药物的水中生长时，要么不长血管，要么长出的血管很快被药物溶解。而在去掉药物后，青蛙胚胎的血管生长出来。接着，查海吉在培养皿中对人类血管细胞进行了药物实验，发现药物也能抑制血管细胞的生长。最后，她将药物用于患有纤维肿瘤的实验鼠，获得的结果是药物减缓了血管的生长，同时也减缓了肿瘤的生长。（记者 毛黎） 总编辑圈点 作为一种治疗癌症最普遍使用的方法，化疗除了给患者带来病痛等副作用外，其昂贵的费用，更是让很多患者望而却步。而涕必灵——这种已在临床医学使用了40年的廉价口服抗真菌药物，一旦真能起到减缓肿瘤生长的作用，无疑会给众多不那么富裕的癌症患者带来希望。到了科学高速发展的今天，我们有理由相信癌症并非不治之症，也许以后癌症不再是那么令人可怕的洪水猛兽，而会变成另一种慢性病也不一定。 《科技日报》（2012-08-23 一版）

[align=left][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]真菌毒素简介[/font][/font][font=微软雅黑][/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]真菌毒素是真菌产生的次生代谢产物，是生物毒素的一类，具有较高的生物毒性，如致癌、致畸和肝肾毒性等。早在[/font][font=微软雅黑]11世纪欧洲圣像画中就有关于真菌毒素引起中毒的描述，1960年英国10万多火鸡因食用被黄曲霉毒素污染的饲料而死亡的事件，真菌毒素才被大家重新认识。[/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]因真菌毒素具有较高的生物毒性，如摄取一定量被真菌毒素污染的食品会对人民群众的身体健康造成极大的危害。同时，真菌毒素超标也是限制我国农产品出口的一项极大的障碍。近年来，真菌毒素导致的食品安全问题受到了国内和国际社会相关组织的高度关注，其对食品的污染也被世界卫生组织列为食源性疾病的重要来源，受污染的食品也会随着人畜食物链的演进影响到环境安全。[/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]植物源性食品，如大米、小麦粉、植物油、炒货及坚果制品等，均是人们日常生活必备的食物和营养来源，大米、小麦粉也是我们日常生活的主食之一，同时这些植物源性食品较易受到真菌毒素的污染，如小麦粉容易受到黄曲霉毒素[/font][font=微软雅黑]B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮等的污染，尤其是加工食品的这种真菌毒素污染是我们用肉眼不可区分的，且一种食物可能会受到多种真菌毒素的污染。当食品在储存、运输或者加工、经营过程中，没没有控制好相关条件，就很可能被真菌毒素污染。[/font][/font][font=微软雅黑][/font][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]真菌毒素的[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]研究现状和限量要求[/font][/font][/b][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]为确保食品的安全，近年来世界各国聚焦威胁食品安全的主要风险来源，不断建立相关限量及检验检测技术标准，相继开展风险评估工作，当然，对于真菌毒素的研究也在其中。[/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]目前研究显示，对于植物源性食品主要涉及的真菌毒素种类为黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素A、伏马毒素、T-2毒素等。相关限量标准也一直备受各国关注，对于限量标准的制定和修订也一直没有间断。我国在二十世纪八十年代初制定了食品中黄曲霉毒素B1的限量要求，后陆续对黄曲霉毒素M1、展青霉素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇制定了限量要求，到2005年，整合形成GB 2761-2005《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》标准，并于2011年和2017年分别进行了修订，依据公众健康风险和膳食暴露水平对部分食品类别的部分毒素的限量进行了调整，但伏马毒素和T-2毒素尚未规定限量标准，国际上除苏联规定T-2毒素在粮食中的限量外，其他国家未查询到相关限量要求。[/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]GB 2761-2017《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》规定了食品中6种真菌毒素的限量指标。该标准包括适用范围、术语和定义、应用原则、指标要求、附录A食品类别（名称）说明五部分内容，在使用过程中要注意，当采用本标准作为判定依据时，样品分类要依据本标准的附录A进行。[/font][/font][font=微软雅黑][/font][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]真菌毒素的检测技术[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]情况[/font][/font][font=微软雅黑][/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]目前，真菌毒素的提取方法主要是采用合适的有机溶剂，或者采用一定比例的有机溶剂水溶液进行提取，通过超声、涡旋震荡等方式提高提取效率。[/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]在现行的食品安全国家标准中，对于真菌毒素的净化方式主要采用的是免疫亲和柱进行，文献中对于真菌毒素提取液的净化除采用国标的方式之外，还有采用[/font][font=微软雅黑]QuEChERS净化技术、固相萃取柱技术，以及多合一的免疫亲和柱进行净化。[/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]真菌毒素的检测方法主要有免疫分析法、仪器分析法、薄层色谱法、高效液相色谱法和高效液相色谱[/font][font=微软雅黑]-串联质谱法。免疫分析法主要有连接酶吸附法、胶体金染色法和同位素放射法，主要是利用生物体中的抗原细胞和抗体细胞，在真菌毒素污染后两者的反应发生变化，导致含量变化，进而通过标记抗原或抗体，通过标记物的变化判断毒素的种类与数量。还有一些新型的仪器法检测真菌毒素，主要有红外线光谱检测技术、高光谱成像检测技术和电子鼻检测技术。目前国家标准或者文献中报道的关于真菌毒素的检测方法中，高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱法占比较高，同时因高效液相色谱-串联质谱法具有较好的灵敏度、选择性，以及较强的定性能力，而被分析工作者所青睐。但该仪器的成本较高，且对于仪器的操作者来说能力水平要求较高，因此大家在真菌毒素的检测工作中时，可以根据实验目的、所要达到的检测效果、实验室的具体情况等多方面进行综合考虑。[/font][/font][font=微软雅黑][/font][/align]

细胞培养箱中的水盘里出现霉菌，虽然没有污染到细胞，而且也在水盘里加入新洁尔灭，但还是不放心，并且培养箱中现有很多细胞，请问有没有一种方法可以在不移除细胞的情况下能够消灭培养箱中的霉菌?已经长出霉菌，建议把所有细胞移出到其他培养箱。将这个培养箱全面消毒，喷酒精，紫外灭菌至少1个小时。因为我们组细胞染过菌，一旦培养箱不洁净，会导致所有培养细胞都要染菌的，爆发以后很可怕。培养箱出现霉菌很可能是水槽的水不够洁净，一定要用超净水超纯水来填充水槽，避免霉菌生长。要定期更换水槽中的纯水。一个月左右换一次。一个季度到半年要培养箱彻底灭菌一次。

下列哪类物质是酵母菌细胞壁主要的成分()。 A、甘露聚糖 B、脂质 C、无机盐 D、蛋白质

真菌培养基培养基真菌培养基的成分有碳源、氮源和其他营养物质。葡萄糖提供碳源，硝酸盐、亚硝酸盐、氨、尿素、氨基酸和其他化合物提供氮源。1.普通培养基(1)改良沙氏琼脂、多选择沙氏琼脂(Sabouraud dextrose agar , SDA): 含有放线菌酮和氯霉素，放线菌酮可抑制腐生性真菌(多数可能为条件致病菌)，氯霉素可抑制大多数细菌(并非所有细菌) 。放线菌酮也抑制新型隐球菌、一些念珠菌、烟曲霉等。(2) 马铃薯葡萄糖培养基(potato dextrose agar , PDA) : 天然培养基。(3)脑心浸膏琼脂 临床常用脑心浸膏琼脂(brain-heart infusion agar , BHI) 分离深部真菌、双相真菌如皮炎芽生菌等，也可以在其中加入抗生素和血液制品。(4) 抑制性霉菌琼脂(inhibitory mold agar , IMA ) : 含有氯毒素，可抑制细菌的生长，是用于临床真菌培养标本初次增菌的理想培养基，常用于筛选放线菌酣敏感的真菌，如隐球菌、组织胞浆菌和接合菌等。2. 选择培养基(1)咖啡酸琼脂(CAA) : 用于鉴定新型隐球菌。由于该菌含有靛酚氧化酶，在CAA 培养基中菌落呈黑色。CAA 培养基对光敏感，应避光保存。(2) 鸟食琼脂(BA) : 用于从痰等标本中分离新型隐球菌。新型隐球菌在培养基上产生棕黑色色素，但是其他隐球菌在延长培养时也可产生色素。其他真菌也可在此培养基上生长，但不产生色素。(3) KT 培养基:由吐温、蛋白、烟酸和0.3 %水解酪蛋白氨基酸组成，用于皮炎芽生菌转相(为酵母相)培养时使用。(4) Kelley 琼脂:用于皮炎芽生菌( B. dermatitidis) 转相(为酵母相)时使用。(5) CHROM 琼脂: 念珠菌显色培养基。是一种用于鉴定培养念珠菌的培养基，不同念珠菌在此培养基上生长显不同颜色。

真菌毒素无处不在 真菌毒素的检测方法1 生物鉴定法生物鉴定法利用真菌毒素能够影响微生物、家禽、水生生物等的细胞代谢过程来鉴定真菌毒素的存在，根据对生物体产生的病变、异常或死亡等判定真菌毒素的危害，该方法对样品的纯度要求较低，该方法主要用于定性分析，专一性较差，灵敏度较低，一般只是作为其他分析方法的佐证。2 化学分析方法化学分析方法检测真菌毒素主要包括以下步骤：提取、脱脂、净化、分离和鉴定。早期常用的化学分析方法有薄层层析法（Thin Layer Chromatography, TLC）和柱层层析法（ColumnChromatography,CC）。在20世纪80年代，我国将TLC作为食品及饲料中黄曲霉毒素的标准测定方法（GB/T8381-1987），将样品经提取、净化和浓缩处理后，在薄层层析板上分离后，利用黄曲霉毒素在紫外照射下可发荧光的特性进行检测。张华报道的薄层层析法检测检测霉菌毒素的灵敏度为5μg/kg，方法的结果准确，重现性好，回收率为 85%-100%。用薄层层析方法己分离出黄曲霉毒素、杂色曲霉素、青霉酸和构巢曲霉素等。柱层层析在真菌毒素样品前处理过程中得到了广泛的应用，柱层层折常用的吸附剂有氧化铝、活性炭、硅胶、镁等，将吸附剂填充到管中形成固定相，将样品提取液上柱，用流动相洗脱，利用样品中不同物质在固定相和流动相中分配系数的不同，实现样品中不同物质的分离，进而进行检测。利用亲和力不同的溶剂和不同固定相的组合可以形成不同分离能力的层析柱。基于吸附剂进行前处理的柱层析分离技术对靶标物的选择性不强，近年来，基于免疫亲和层析技术的样品前处理在真菌毒素提取中应用逐渐广泛。免疫亲和柱是将真菌毒素特异性抗体通过一定方式偶联固定在载体基质上，装柱形成微柱，用于样品前处理。其工作原理是样品溶液中的真菌毒素在流经亲和柱时，载体基质上的抗体特异性的捕获样品溶液中的真菌毒素，使真菌毒素得到净化和富集，待上样完成后用高浓度的甲醇、乙腈等溶液洗脱，将真菌毒素释放出来，得到的洗脱液用于检测。3 仪器分析法仪器分析方法是对样品进行一定的提取、净化处理后，借助检测仪器设备对待测靶标物进定性、定量分析的技术。在真菌毒素的检测分析中，常用的方法有高效液相色谱法（HighPerformance Liquid Chromatography, HPLC）、超高效液相色谱法（Ultra HPLC，UHPLC）、高效液相色谱法与质谱联用方法（HPLC-tandem mass Spectrometry， HPLC-MS/MS）、气相色谱与质谱联用法、高效液相毛细管电泳方法等。HPLC 方法是 20 世纪 60 年代末在气相色谱基础上发展起来的一种以液体为流动相的新型谱技术，在真菌毒素的检测中常采用反向色谱法。近年来，在 HPLC 方法的基础上发展起来的UHPLC 和 HPLC-MS/MS 方法比 HPLC 方法具有更高的检测灵敏度和检测通量。基于HPLC 的方法广泛的被国内外实验室和检测机构作为真菌毒素确证性检测方法。我国食品安全国家标准 GB541337-2010 中规定免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱法和免疫亲和层析净化高效液相色谱法分别作为乳和乳制品中 AFM1测定方法。HPLC 方法具有灵敏度高、测定结果准确可靠、特异性好的特点，基于免疫亲和柱前处理的HPLC方法与化学分析方法和生物鉴定法相比，检测时间缩短，对复杂样品的处理能力更强。但是仪器分析方法也有其缺陷，需要使用大量的有机溶剂，依赖大型精密仪器，检测成本高，需要专业的操作人员，不能满足现场快速筛查的需求。4 免疫分析方法免疫分析方法起始于20世纪50 年代，继 60 年代竞争分析原理提出后取得了巨大的进步，成为生物分析的重要手段之一。免疫分析方法从本质上说属于一种特殊形式的试剂分析法，将抗体作为核心分析试剂，基于抗体与抗原的特异性结合反应，对待测靶标物，包括小分子化合物、大分子的酶、蛋白质等，进行定性和定量分析。抗体和抗原反应的典型特点是抗体能特异性识别抗原，并发生结合反应，这种反应是可逆的，抗体与抗原的专一性比一般分析试剂间专一性强。免疫分析技术已广泛的应用于临床分析检测、食品安全检测、环境污染检测领域。免疫分析技术最早出现的是放射免疫分析，由 Berson和 Yallow首次使用，该方法的灵敏度高、特异性好，但是其最大的缺点是分析过程引入放射性核素，对操作人员和环境造成危害和污染。4.1 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA）是在免疫酶技术基础上发展起来的免疫分析方法，于 1972 年由 Engvall 首次用碱性磷酸酯酶标记免疫球蛋白用于 IgG 的测定。现已广泛的应用于分析检测领域，检测对象包括疾病诊断中的大分子检测，食品安全检测中的小分子污染物检测。ELISA 方法的原理是将抗原或抗体与酶标记后形成酶标抗原或酶标抗体，既保持抗原、抗体的免疫活性，又具有酶活性，将待测物与酶标记抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面的抗体或抗原反应，洗涤去除未反应结合的物质，最后根据固相载体上酶的量与待测靶标物的对应比例关系进行定量分析。该方法根据反应模式的不同可分为夹心 ELISA 方法和竞争ELISA 方法，夹心 ELISA 方法主要用于检测大分子化合物，竞争 ELISA 方法主要用于检测小分子化合物。真菌毒素属于小分子物质，由于只有一个抗体结合位点，因此在真菌毒素的ELISA检测中常采用竞争分析模式。Wang等人建立了基于多克隆抗体检测AFM1的ELISA快速分析方法，对AFM1和 AFB1的检测灵敏度（IC50值）为分别为 0.014 和 0.02 ng/mL。Zhang等人研制了针对 OTA 的单克隆抗体，并用该抗体建立了间接竞争ELISA 方法测定谷物中的 OTA，方法的检出限为 0.15 ng/mL，灵敏度为 1.7ng/mL，检测范围为 0.55-6.75 ng/mL。Burmistrova 等人建立的基于单克隆抗体的 ELISA 方法在 ZEA 的检测中，检出限为 0.1 ng/mL，灵敏度为。4.2 免疫亲和方法免疫亲和方法主要用于样品的前处理过程中，主要利用抗体对待测物的专一识别特性，对待测物进行净化和浓缩，能够有效的去除样品基质干扰，提高检测灵敏度和准确性。基于免疫亲和柱的色谱分离方法被我国国家标准和国际标准定为真菌毒素检测的标准方法。免疫亲和柱常与其他检测方法联用，Li 等建立了基于免疫亲和柱的 ELISA 方法检测农产品复杂基质中的 OTA，结果表明在 OTA 添加样品检测中，经过免疫亲和柱处理后的 ELISA 检测回收率明显较未经亲和柱处理的方法回收率高。免疫亲和柱不仅可以用于样品前处理，还可直接在亲和柱上进一步反应进行定性或定量分析。Yu 等人基于免疫竞争反应原理建立了在免疫亲和柱上进行可视化检测 AFM1的方法，在样品上样完成后，再从亲和柱底端加入辣根过氧化酶（HRP）标记的 AFM1，洗脱后加入酶底物，进行显色，显色深浅与样品中 AFM1浓度成反比，根据显色深浅判别 AFM1的含量，该方法对 AFM1的灵敏度为 40 ng/L。Yuan等人基于免疫竞争原理，在凝胶上固定抗体后，制成免疫亲和柱，使其竞争性结合氯霉素和 HRP 标记的氯霉素，加入底物后显色，最终实现了对氯霉素的快速检测，方法的检出限为 1 ng/mL。4.3 [color=#0751

巨细胞病毒感染常见于A皿病人，男性同性恋中CMV感染率高达95％以上。巨细胞病毒感染可能对聊的细胞毒性及Kw复制具有协同作用，被认为是一种协同因子。在临床上可引起中枢神经系统感染以及脉络膜视网膜炎所致失明、慢性肠炎和肺炎。　　．念珠菌日食管盗不少艾滋病或艾滋病相关综合征病例出现口腔真菌感染，其中有少数病例出现弥漫性食官央。临床表现为在咽部、食管、直肠及肛门周围皮肤教膜感染．严重者有吞咽团难，肛周糜烂，病原体为念珠茵，常呈反复发作。一般以活检为主要诊断依据，如口腔白色念珠茵感染肉服难以辨别，有必要用钡剂吞咽并经气管镜采集标本进行培养和活检。　　．非结核分枝杆菌感染在艾滋病患者中常以局部或播散性感染出现。很容易从患者骨髓、淋巴结、肝活检组织及血液分离出分技杆菌。由于艾滋病不形成典型肉芽肿，甚至没有于酪样坏死性肉芽肿，对活检组织仍要做Nid-NMI删染色检查。　　．隐球菌病许多艾滋病患者具有中枢神经系统症状，除了xP本身所致感染外，常与隐球菌感染有关。临床上主要表现为脑膜炎症状。　　弓形虫病典型艾滋病患者身上，鼠弓形虫可侵犯思者肺部、脑、骨酷肌及皮肤，侵犯大脑可引起脑脓肿，有占位性神经病变体征。　　．单纯疤疹病毒感染许多艾滋病患者常常有单纯疤疹病毒感染史，表现为可在口、食管、肛门等部位引起慢性进行性广泛的溃疡性病变。艾滋病患者伴有这种感染，常常可引起广泛的戳膜溃疡．持续一个月以上，同时出现肺部、胃肠道或其他播散性感染。

有没有人听说过蒙塔涅梨孢假壳这种真菌，白色菌丝，能产纤维素酶的。

随着重组DNA技术得到广泛应用以来，生物技术发生了质的飞跃。很多基因工程产物都是胞内物质，必须将细胞破壁，使产物得以释放，才能进一步提取，因此细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤，破碎方法的得当与否，直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。现将近年来常用的几种细胞破碎方法介绍一下。 　　1. 高压匀浆法 　　设备是高压匀浆器，它由高压泵和匀浆间组成，美国Microfluidics公司和ATS公司均有产品出售。其破碎机理：细胞在一系列过程中经历了高速造成的剪刀，碰撞以及由高压到常压的变化从而造成细胞的破碎。 　　存在的问题；较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性首以及有些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合用该法处理。 　　2. 高速珠磨法 　　设备是珠后机，瑞士WBC公司和德国西门子机械公司均制造各种型号的珠磨机，其破碎机下：微生物细胞悬浮液与极细的研磨剂在搅拌浆作用下充分混合，珠子之间以及珠子和细胞之间和互相剪切、碰撞，促使细胞壁破碎，释出内含物，在珠波分离器的协助下，珠子被滞留在破碎室内，浆液流出，从而实现连续操作，破碎中，生的热量由夹套中的冷却液带走。 　　存在的问题：操作参数多，一般赁经验估计并且珠子之间的液体损失30％左右。 　　3. 超声破碎 　　频高于15-20KHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理：可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。 　　存在问题；超声波破碎在实验室规模应用较普遍，处理少量样品时操作简便，液量损失少，但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递，散热均有困难。 　　4. 酶溶法 　　就是用生物酶将细胞壁和细胞腊消化溶解的方法。常用的溶酶有溶菌酶β-1．3-葡聚糖酶、蛋白酶等。 　　存在的问题；易造成产物抑制作用，这可能是导致胞内物质释放率低的一个重要因素。而且溶酶价格高，限制了大规模利用。若回收溶酶，则又增加百分离纯化溶酶的操作。另外酶港法通用性差，不同菌种需选择不同的酶。 　　5. 化学渗透法 　　某些有机溶剂（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。其作用机理；化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。 　　存在的问题；时间长，效率低；化学试剂毒性较强，同时对产物也有毒害作用，进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂；通用性差：某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。 　　本文介绍了几种细胞破碎的方法，可谓各有千秋，在实际应用中，应尽量考虑全面，选择最科学、有效的方法。

单核细胞增生李斯特菌的 生化血清型有哪些？

7.细胞污染之后的拯救！对于贴壁生长的细胞，相对来说比较简单但很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的细胞。在讨论之前，大家首先要有一个概念，即洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！1）.将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。2）.继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。3）.继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。4）.重复步骤3再洗。5）.重复步骤3再洗。6）.加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。7）.加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。8）.再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。9）.加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。10）.24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗.11).24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。以上是对于细菌污染（常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）；若为霉菌或者真菌污染，加入两性霉素B清洗和培养，终浓度一般为2.5μg/ml（在30μg/ml时会有细胞毒性）。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。 其它操作同；若为支原体或者黑胶虫污染，因为这个太难处理，所以我基本上都是重新弄细胞了。处理的代价更大更麻烦。但是也是有专门针对黑胶虫和支原体污染的试剂的，但是我没有试过。比较贵呵呵。有同学说用泰乐处理支原体污染效果比较好。大家可以试试，我下次也会试一试。至于黑胶虫的话，我觉得真的是没有办法了，还是需要你在无菌观念和无菌操作上下大功夫加强了，真的黑胶虫在科研领域还是很未知的啊。所以没有什么好的应对方法。预防为主！！还是要强调无菌操作啊！尤其注意血清的质量！这个是主要来源。一般建议用北美血清，这个黑胶虫污染会概率小。以上方法主要是针对贴壁生长的细胞，在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当，基本上都能救活你的细胞（我还没有听到没救活的反馈）。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候。欢迎大家讨论！分享终于结束了！感谢大家这么有耐心看完我的分享，也希望我分享的东西能够帮助到大家！最近我们要跟ilab智慧实验室合作搞一个关于试剂耗材管理的讲座，可能没时间给分享我工作的一些事情了！等讲座结束，给大家安利更好的干货！

分子生物学（基因工程）的实验中，经常要做细胞质粒DNA的提取和检测工作，以便获得运载基因的载体DNA；或用于实行电泳检测分析，了解样品是否含有质粒DNA（包括重组质粒DNA），判断其分子量大小，区别不同质粒等等。因此质粒DNA的提取是基因工程实验中最常用的手段之一。质粒是一种染色体外的稳定遗传银子，大小从1kb到200kb不等，大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子，并以超螺旋形式存在于宿主的细胞质中。它是细菌内的共生型遗传因子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，质粒具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒的分离是利用质粒DNA和染色体DNA在变性与复性中的差异来达到的目的。当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，由于染色体DNA与质粒DNA拓扑构型不同，染色体DNA双螺旋结构解开，而共价闭合质粒DNA的氢键虽被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕仍会紧密地结合在仪器。当加入中和液后，溶液pH恢复至中性，在高盐浓度的情况下，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构并与蛋白质SDS复合物等形成沉淀；不同的是质粒DNA复性迅速而准确，保持可溶状态而留在上清中。这样，通过离心可沉淀大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质。除去沉淀后上清中的质粒可用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。前面提取质粒DNA的方法就是实验室常用的碱裂解法，该法的操作过程如下：首先讲含有质粒的细菌接种到培养基，经过大约12小时的恒温摇陪后弃去上清液，加入中和液后用漩涡混匀器将溶液充分混匀，然后加入碱液进行沉淀，这就是变性与复性，最后的操作就是实验室常用的沉淀的分离、纯化。分离、纯化DNA首先取上清液，加入分离液后采用漩涡混匀器混匀溶液，离心取上清液，加入无水乙醇后混匀，离心后弃上清液，干燥DNA即可。这个实验中常用到漩涡混匀器进行溶液混匀，意大利VELP公司推出多种型号的漩涡混匀器可满足每一个实验室的需要和安全标准。特别是红外漩涡混匀器，这是VELP公司的专利，该漩涡混匀器一旦检测到试管即自动开始震动混匀，不需要施加任何外力，震动速度可调，时间可设，漩涡混匀器稳定性高，非常适合细胞质粒提取实验。

食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染情况 了解食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染情况，预防李斯特菌病的发生和流行。方法样品的分离和菌株鉴定均按GB4789.30—2010《单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行。 食品受到单核细胞增生李斯特氏菌污染较严重。

德国科学家日前成功获取了显示单细胞酵母菌内部构成的高分辨率三维图片，为研究更高级别的生物提供了新的依据。 据此间媒体３０日报道，位于海德堡的欧洲分子生物实验室的科学家们使用电子束从不同角度照射酵母菌细胞，再通过电脑组合完成了这张细胞内部结构高清图片。图片除了显示细胞核 及其他组成部分外，还可以显示细胞内细微的丝状物。通过类似的方式，科学家也获取了人脑细胞内部结构的图片。 科学家认为，如同人体由骨骼支撑一样，一个细胞内部的组成部分也决定了细胞的结构和形状。单细胞的酵母菌被认为能够为研究包括人类在内的高级生物提供依据。来源:新华网

[b]新上讲座：牛奶中细菌和体细胞检测技术举行时间：2017-12-15 10:00立即免费报名：[/b][url]http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_2925.html[/url][b][/b]主讲人：罗海峰，理学博士 福斯中国应用技术部经理 有10多年近红外应用和开发经验, 主要负责原料奶检测及乳制品加工过程的方案的推广和应用。[b]主要内容：[/b][color=black]1. 为什么检测牛奶中的细菌数和体细胞数？2. 细菌数和体细胞数的指标反映了牛奶中的什么问题？3. 是否可以同时获得牛奶细菌数和体细胞数，并快速获得检测结果？3. 总体细胞数的检测和体细胞分型计数；4. 福斯相应的解决方案。[/color]

最近要做真菌保藏，主要是生孢梭菌和黑曲霉，不知道哪位能提供相应方法或者是文献（中英文均可）。或者谁有这方面经验提点意见啊！ 大家帮帮忙哦~~~[color=#DC143C]dong3626:你好@！你自己可以在中文数据库里搜索一下之后，在这里求助具体的文章！！[/color]

2010年《GB 19301-2010 食品安全国家标准 生乳》发布，该标准出台后即被冠以 “挤奶时相当于苍蝇到处乱飞”、“中国牛奶倒退25年”、“中国生乳标准全球最差”等各种标签。时隔6年，生乳标准被再一次掀起波澜：今年4月份，中国农垦乳业联盟召开《中国农垦生鲜乳生产和质量标准》发布会，会议指出该标准菌落总数与欧盟和美国标准一致，并且按照欧盟标准规定了体细胞数。同期，黑龙江省奶业协会《黑龙江省生乳团体标准》，标准根据蛋白、脂肪、菌落总数、体细胞数对生鲜乳分了特级、一级、二级三个等级，并且提出特级标准已比肩欧美。为什么我国的生乳标准时至今日还被热议，菌落总数和体细胞指标有什么意义，我国和欧美针对这两项的规定到底有什么不同？以下将进行详细分析。[b]1. 指标解读：菌落总数[/b]菌落总数是指在一定微生物培养条件下每克（或每毫升）检样所生长出来的细菌群落总数。生乳中菌落总数的多少是评定质量的重要指标，目前被各国广泛采用。它可用来判定产品被细菌污染的程度及卫生质量，以便做出适当的卫生学评价。造成菌落总数超标的原因很多，挤奶环节控制不严是导致超标的主要原因，如挤奶器具不卫生特别是散户人工挤奶的情况，将会直接导致菌落总数不合格。[b]体细胞数[/b]牛奶体细胞数是指每毫升牛奶中的细胞总数，它是牛奶中的白细胞和脱落上皮细胞的总称。体细胞数是衡量牛乳房健康状况和原料奶质量的重要指标，它的升高可导致乳制品货架期缩短，风味发生改变。体细胞数高说明奶牛乳腺感染了微生物病原菌，通过不同的微生物检测或根据体细胞数升高状况诊断是否患有隐性乳房炎，此外，若奶牛患病也会因为系统免疫反应导致体细胞升高。2。[b] 标准比较：我国标准[/b]我国生乳现行标准GB 19301-2010，标准中对生乳的脂肪、蛋白质等理化指标，及微生物、污染物等指标做了规定，其中菌落总数要求为200万CFU/mL，但是并没有体细胞数的要求。[b]欧盟法规[/b]欧盟拥有完善的乳品质量安全监管体系，在其法规EC 853中对生乳的体细胞和菌落总数做了详细规定。 [table=100%][tr][td=1,1,25%] 类别项目[/td][td=1,1,20%] 生牛乳[/td][td=1,1,21%] 其他动物的生乳[/td][td=1,1,33%] 其他动物的生乳（用于加工乳制品，且加工过程中无加热工序）[/td][/tr][tr][td=1,1,25%] 菌落总数，万CFU/mL[/td][td=1,1,20%] ≤10[/td][td=1,1,21%] ≤15[/td][td=1,1,33%] ≤5[/td][/tr][tr][td=1,1,25%] 体细胞数，万个/mL[/td][td=1,1,20%] ≤40[/td][td=1,1,21%] /[/td][td=1,1,33%] /[/td][/tr][/table]欧盟非常注重标准的科学性，基于牛和其他动物如山羊的养殖条件、养殖规模等不同，分别设定了不同的微生物要求，虽然其他动物的生乳限量表面看来更低一些，但是如果用于生产无加热工艺的产品，则要求非常高。欧盟标准科学性的另一点体现在生产和收奶会设定不同限量。对于到达工厂后经过混合的牛乳，该法规指出其指标限量可以是牧场环节的三倍。因此准备生产乳制品的原料乳菌落总数限量为≤30万CFU/mL（如果该牛乳已经经过一定的加工，那么需要低于10万CFU/mL）。[b]美国法规[/b]美国《联邦法规》（CFR）第7卷对原料乳的指标限量、检测方法、不合格整改措施都做了具体规定，其中包括体细胞数和菌落总数。 [table][tr][td=1,1,155] 类别项目[/td][td=1,1,126] 生牛乳[/td][td=1,1,151] 山羊乳[/td][td=1,1,187] A级原料乳[/td][/tr][tr][td=1,1,155] 菌落总数，万CFU/mL[/td][td=1,1,126] ≤50[/td][td=1,1,151] ≤50[/td][td=1,1,187] ≤10（单个样本）≤30（杀菌前的混合样本）[/td][/tr][tr][td=1,1,155] 体细胞数，万个/mL[/td][td=1,1,126] ≤75[/td][td=1,1,151] ≤150[/td][td=1,1,187] ≤75[/td][/tr][/table]美国是非常提倡实施安全整改措施的国家，联邦法规中就有明显的体现。如对生乳中菌落总数的要求，法规规定每个奶户每月至少要有1次随机抽样，一旦出现不合格就会被警告，如果4次连续抽检中有两次不合格，那么将会在随后的3至21天再抽一个样品，如果仍然不合格，就需要整改直至获得满意的结果才可以继续对外供应牛乳。[b]Grade “A” Pasteurized Milk Ordinance[/b]除了CFR的要求，美国还有一个非常重要的法令《Grade “A” Pasteurized Milk Ordinance》，该标准适用于优级乳制品，标准包含收奶、运输、加工、包装等各环节的规范，可操作性非常强。标准中指出单个奶户的奶中菌落总数不得超过10万CFU/mL，不同奶户的奶经混合后，在杀菌前不得超过30万CFU/mL；体细胞方面，该法令指出单个奶户的奶中不得超过75万个/mL。和CFR一样，该标准也规定了不合格的处理措施。联邦政府以及各州会定期检查工厂，一旦发现问题就会临时吊销生产许可证，此后连续3周每周不少于2次取样检查，直至合格才准予恢复正常生产。[b]总结[/b]1. 我国设定的指标限量低于欧美，这与当时的制定背景息息相关。但实际上，由于最近几年政府和企业对生乳质量意识的提高，我国生鲜乳尤其是自有牧场的生乳的质量远高于国家标准规定。很多牧场逐步开始监控体细胞数量，优质牧场平均体细胞数可达10万个/mL以下。同时部分地区也根据当地生乳的质量优势，制定了一些高于国家要求的标准。2. 我国在指标设定方面的科学性有待提高，如上面提到的欧美在收奶及加工时设定不同指标限量，而我国目前收奶、贮奶都是一个限量，不利用保护奶农利益，更不利于指导企业实际生产。3. 缺乏对奶农的系统监管，如美国政府机构会长期监控每个奶场的生乳，制定整改措施并监控整改效果，这点值得我国学习。

菌落长菌了，想用显微镜看一下它的细胞形态，怎么做，望老师不吝赐教

请问活性污泥里细菌细胞需要用多少倍数生物显微镜，我用1600倍的只能看到放大的污泥，看不到细菌细胞。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em61.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em61.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em61.gif

在奶牛场生产出体细胞　　数及细菌含量低的牛奶　　奶牛场受到污染的牛奶一直会存在于整个生产链之中，虽然其后的生产程序可能会尽量减低牛奶的腐败程序以满足消费者的质量要求，但是品质却永远也比不上刚刚从奶牛乳房产出的牛奶了。因此，为消费者提供卫生乳制品的第一步开始于牛场。　　1. 体细胞数　　1.1体细胞的来源　　动物体抵御一些入侵细菌的措施之一就是将白细胞渗透到受感染区域。白细胞来自动物血液,被称为体细胞。以示与入侵微生物细胞的区别。正常情况下，少数白细胞可经乳腺而进入乳汁，但在病原菌入侵时，机体会向乳腺内释放大量的白细胞。若乳腺受到损害，也会造成乳腺上皮细胞脱落，成为乳汁内的体细胞的一部分，但不超过体细胞总数的百分之几。与细菌不同，体细胞一旦进入乳汁内，其总数是不会发生变化的。白细胞包括巨噬细胞、淋巴细胞和嗜中性细胞。正常乳中含有巨噬细胞，其作用是清除乳腺中的细菌和细胞碎片。淋巴细胞在抵抗感染的机制中起主要作用，此时要占体细胞总数的90%以上。体细胞数是变化的，在完全健康奶牛的乳汁中低于200000/亳升;乳腺感染严重，会高于5000000/毫升。　　1.2 高体细胞含量牛奶的缺点　　体细胞数偏高，表明牛奶产于受损或受感染的乳腺。细菌污染会极大降低牛奶的质量，而体细胞本身也对牛奶质量不利，特别是对这些用于生产发酵乳制品的牛奶。牛奶变质表现为：①牛奶味道变坏 ②牛奶的贮存期缩短 ③乳清量增加，酪蛋白的收缩性降低，导致奶酪产量下降。　　1.3 体细胞数的估测　　体细胞数(SCC，单位为：细胞数/亳升)可经显微镜人工测定，但耗费时间，一位技术员每天仅能测定很少的样品。体细胞数常常是由称为细胞计数器的电子仪器来测定，但该仪器较昂贵，不易搬运，这就得把奶样送到实验室去分析。在牛舍内实际上可采用一项简单的技术，即用化学试剂来测定白细胞的数量，其最初称为加州乳房炎测定(CMT)，但现有众多地方测定方法，如兰州乳房炎测定法(LMT)。CMT法可把牛奶评为0、T、1、2和3级，其大致相对应的细胞数为：　　CMT测试等级 大致体细胞数/毫升　　0 100,000　　T(=微量) 300,000　　1 900,000　　2 2,700,000　　3 8,100,000　　1.4 引起体细胞增高的因素　　1.4.1 乳房受到细菌感染。这大概是导致体细胞数增加的主要因素。　　1.4.2乳房受到损伤。奶牛的乳房并非不会受到损伤，比如经常由于地滑而摔伤乳房。有些奶牛，特别是那些乳房过度下垂的奶牛，站起来时容易踩到自己的乳房。乳房受到伤害，牛奶中体细胞数会暂时升高，随着伤口的愈合，体细胞数又会恢复正常。　　1.4.3 奶牛的年龄和泌乳阶段。老龄奶牛似乎更易患乳房炎，这样，体细胞数常常较高。美国的研究表明，未患乳房炎奶牛乳中的体细胞数并不随年龄的增加而提高。这样，随着年龄的增长，对于那些一生中某一阶段曾患过乳房炎的奶牛，其体细胞数增加的机率会增大。　　1.5 降低体细胞数。体细胞数值高常常是由于乳房受到了细菌所至，因此降低体细胞数值的最好方法就是防止感染。　　2. 乳中的细菌　　牛奶通常是老、幼、病、残者的食品，他们也最需要健康食品。奶牛场是微生物污染牛奶的理想环境，最危险的途径之一就是通过存在于乳房中并引起乳房炎的细菌而污染。这些细菌都是病原菌，对牛和人类都有害。　　一旦受到这样的污染，牛奶就成为劣质产品。加热处理可减缓或停止细菌的作用，但不管如何处理，这种牛奶仍就是含有活的或死的微生物及其所产生的生化物质。这些物质有的会降低乳制品的品质，有的对消费者的健康有害。来自粪便的细菌还会产生酶类和耐毒素。因此，防止乳制品被污染，应从提供优质鲜奶开始。　　细菌进入乳房引起乳房炎的许多途径与其污染牛奶的方式密切相关，有些细菌可引起乳房炎，随后进入牛奶。　　2.1牛奶中细菌的类型　　下表为牛奶中常见的微生物，经分离，也许可见到其它类型的微生物。大概有95%的乳房炎是由表中前三种细菌引起的。　　微生物 来 源 所产毒素 致病性　　奶牛 人类　　金黄色葡萄球菌 乳房炎　　人类污染　　环境　　牛粪 肠毒素 致病 致病　　无乳链球菌 乳房炎 致病 致病　　大肠埃西氏杆菌 乳房炎　　环境　　牛粪 耐热和不耐热肠毒素 致病 有些致病　　空肠弯曲菌 受感染的乳房　　牛粪 肠毒素 致病 致病　　小肠结肠炎耶尔森菌 牛粪　　沙门氏菌群 环境　　牛粪 肠毒素 致病 致病　　产单核细胞李斯特菌 环境　　牛粪　　饲料—特别是劣质青贮　　乳房炎(少数) 致病 致病　　结核分支杆菌 受感染乳房　　人类污染 致病　　牛分支杆菌 受感染乳房 致病 致病　　布鲁氏菌属 受感染乳房　　牛粪　　环境 致病 致病　　伯内特柯克斯体 牛粪　　受感染乳房 致病 致病　　普通变形杆菌 水　　环境　　假单包菌属 水　　环境　　2.2 乳房对乳房炎的抵御　　乳房低御感染的部位有两处, 其中之一就是乳头的通道一乳头管,乳头上有良好的括约肌,可使乳头口封闭,阻止异物进入通道。　　2.3 防止乳房暴露于细菌之中　　防止乳房炎最理想的方法首先是防止细菌接触乳房，这就涉及到奶牛管理的各个方面。　　2.3.1养牛设施。奶牛舍的设计标准与良好的人类住房的设计原则是相近的，其可归纳如下：　　① 尽量减少疾病的传播。　　② 奶牛拥有一个舒适和较干燥的环境。　　③ 应具备有效地消除废物的设施。　　④ 奶牛容易获得饲料以满足产奶的需要。　　⑤ 奶牛的环境条件不得发生急剧变化。　　⑥ 温度、太阳辐谢、湿度应尽量接近奶牛的“舒适区”。　　⑦ 奶牛易于接近饮水。　　⑧ 易于观察成母牛、育成牛的行为变化，特别是发情鉴定，还有牛群健康观测。　　⑨ 便于将奶牛从主要的饲养区域赶至一些特殊的地点，如挤奶台、配种架等。　　⑩ 整体设计应考虑到尽量节省劳动力。　　前三点直接涉及到奶牛所处的环境,但饲料也可成为传播微生物的潜在因素(见2.3.1.3)。　　2.3.1.1 栓系式牛舍。中国的许多奶农都采用了栓系式牛舍饲养奶牛，这种牛舍的设计对奶牛的环境卫生有很大的影响。设计原则之一就是既简便又能及时地将粪、尿与奶牛分开。再勤快的奶农也不可能整天在那儿清粪以避免奶牛卧下时弄脏牛体。奶牛是站立排粪尿的，因此，设计上就必须让粪尿直接排入粪尿沟内。荷斯坦牛舍牛床的尺寸应设计为：从饲槽后沿至粪尿沟前沿的长度为1.55-1.65米，而中国奶牛舍内的尺寸一般都为1.8—1.9米, 这样牛粪常被排泄于奶牛躺卧之处,常常污染牛腿、肋部和乳房。　　如果奶牛可直接将粪便排入粪尿沟内，说明其站立位置正对饲槽，如果奶牛斜向站立，粪尿将会排在牛床上。但可设置分隔栏，分隔出独立的牛床，以使奶牛保持正确的姿势。不一定一牛一隔栏，可两牛一隔。　　牛床应有某种铺垫，以保证栓系式牛舍奶牛肢蹄的健康。铺垫物应清洁、干燥。常采用的有秸秆、沙子、锯末，也可使用专用的橡胶垫。目前中国可生产这种橡胶垫，也买得到。使用时最重要的一点是不要太频繁冲洗橡胶垫。以免潮湿。　　2.3.1.2运动场。 在讨论牛奶质量时不宜过多叙述运动场设计的各个方面，必须强调的一点就是干燥。也就是说，如果是土地面，排水应通畅。在许多奶牛场之中，这与生产卫生牛奶是完全不相适应的。水泥运动场应铺成2-3的坡度，以便尽快排走雨水。若水泥地表地设计成沟槽状以增加牛蹄阻力，其方向应顺坡向而走。　　2.3.1.3饲养。有人奇怪为什么麽将饲养作为病菌传播的因素之一，但在中国它确实是紧密相关的。李斯特菌对动物和人类都是致病菌。在霉菌适宜的类似环境，特别是发酵度不足的青贮饲料，特别适宜李斯物菌增殖　　2.3.2 挤奶　　农业生产的挤奶过程是十分独特的,因为在充满了潜在有害微生物污染的环境中获得人类食品。正常的卫生标准应依据食品业的，而非农业的标准。在挤奶的过程中，存在着微生物对奶牛和牛奶污染的极大危险，其过程可分为三步：乳房准备、挤奶和乳房的后处理。　　2.3.2.1乳房准备。乳房准备基于以下三个原因：　　-刺激奶牛的泌乳反射。　　-保证泌乳过程中不受微生物的侵袭。　　-保证乳房上的污物不会污染牛奶。　　就象野生祖先母牛看到犊牛、闻到犊牛的气味、乳房受到犊牛碰撞而产生的反应一样，品种化的奶牛对擦洗和按摩乳房也产生同样的反应。奶牛对热水冲洗和按摩会习惯性地产生泌乳反应。但擦洗乳房的毛巾和挤乳工的手都会将细菌从一头奶牛传染到另一头奶牛，这是对奶牛健康最大的危险。正确操作的要求是：每头牛分别用洁净水冲洗。现代化的挤奶台采用软管和喷嘴冲洗乳房。用一桶水洗多头牛简直就是在奶牛之间传播病菌，这是不可原谅的错误。即使按照乳品厂的标准加入消毒剂，从一头奶牛到另一头奶牛的挤奶间隔时间也保证不了化学药品的消毒作用。如果增加消毒剂的浓度，乳房细薄的皮肤受到损害的程度就会加大，这也就促进了乳房内部微生物感染的机会。如果不具备软管、喷头这些条件，那麽，用一只手提喷水器也就足够冲洗乳房了。用于擦干乳房的毛巾是微生物的主要载体，再也找不到什麽比这更有效的东西在牛群中传播病原菌了。奶业发达国家主要采用一牛一纸擦试方法，也可采用洁净的报纸替代，虽然效果不如纸巾，但便宜，起码比反复使用毛巾要好的多。　　有些专家建议