杂环生物胺

本次大曹实验室按照GB/T21970-2008《水质 组胺等五种生物胺的测定》中项下方法，对组胺等五种生物胺混合标准品及水质样品进行分析。

亚硝胺杂质是药品生产过程中产生的痕量副产物。这些杂质被归类为潜在遗传毒性杂质，长期摄入可能致癌。因此，以高灵敏度和可靠性测定它们在成品药中的含量水平非常重要。本应用简报评估了 Agilent 6475 三重四极杆 LC/MS (LC/TQ) 系统、Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱系统和大气压化学电离 (APCI) 离子源组合对8 种亚硝胺杂质的定量性能。

建立了离子色谱( IC)同时测定水源水中5种生物胺(BA) (腐胺、尸胺、组胺、亚精胺和精胺)的方法。样品经0.45 􀀁 m水膜过滤后, 用TSK􀀁 GEL SuperIC阳离子交换柱( 150 mm 􀀁 4.6 mm)分离, 以甲磺酸水溶液为流动相梯度淋洗, 流速为1.0mL /min, 非抑制电导检测, 进样量为100 􀀁 L。实验结果表明, 5种生物胺可以实现基线分离 在1.0~ 30.0 mg/L范围内, 其峰面积与质量浓度之间的线性关系良好 保留时间的相对标准偏差( RSD )均不高于0.02%, 峰面积的RSD 小于2􀀁 08% 加标回收率为96.0% ~ 107.0%。该法简便、快捷、准确, 可以用于水源水中腐胺、尸胺、组胺、亚精胺和精胺5种生物胺的同时测定。

动物从动物源性饲料中摄取的生物胺若超量易在动物体内残留，进而引发人体超量摄入生物胺导致的不良反应。为避免此类状况，动物源性饲料中生物胺含量需严格控制。参考GB/T 23884-2021福立仪器对动物源性食品鱼粉，对9种生物胺进行相关检测，从饮食源头控制生物胺。

生物胺是一类含氮脂肪族或芳香族有机化合物，广泛存在于食品中，尤其在富含蛋白质食品中，这些天然生物来源食品中的生物胺主要由微生物代谢产生。

本文建立的离子色谱法直接测定蜂王浆中生物胺的方法。前处理方法简单无需衍生化，避免了衍生化带来的干扰和衍生物不稳定问题，提高方法稳定性，灵敏度高。将本方法应用于蜂王浆中生物胺含量的检测具有较高的实用价值。

伴随着可续能源的全球性需求的增长，生物能源的应用不断增加。目前最主要的生物能源是生物柴油和生物乙醇。生物乙醇发酵产物是包含乙醇和其他副产品的复杂混合物，需经过蒸馏将乙醇分离出来。乙醇的燃烧性能取决于其纯度。因此ASTM® D4806和EN 15376等国际标准对燃料乙醇中杂质的含量作出限制，并且规定了检测方法。目前规定使用的检测方法色谱和滴定方法，试验非常耗时， FT-IR等光谱技术所能提供的快速检测方法将是很有吸引力的替代方法。本报告的研究结果表明，Spectrum Two™ FT-IR光谱仪可以用于建立定量分析方法，其灵敏度完全可以满足甲醇、水、C3-C5醇和汽油变性剂的检测限要求。所有杂质的检测限都远低于ASTM® D4806和EN 15376标准所规定的含量限制。而且可以在两分钟时间的测试内同时检测所有的杂质。"

鱼类中的生物胺是海产品变质的指标物。虽然高效液相色谱法已经发展起来，但由于缺乏合适的生色团，分析生物胺一般要用衍生技术。一种改进的分析方法——配有积分脉冲安培检测器的离子色谱，可直接检测μg/L级的生物胺而无需衍生技术

三聚氰胺（melamine）是一种商品掺杂物。如果使用凯氏定氮法或燃烧法通过总氮含量间接测定蛋白质的含量，加入三聚氰胺可以提高样品中表观蛋白质含量。在奶粉和谷朊粉（面筋粉）中掺杂三聚氰胺的恶性事件已经发生了很多。选择掺杂三聚氰胺这种廉价物质是因为其中氮元素含量达到66%，大约是相同质量蛋白质中氮含量的4倍。实际上，混合物中三聚氰胺的加入量达到百分之几时（远高于ppm含量水平）才能够显著降低生产成本。2007期间发生于美国的谷朊粉掺假事件中，掺假谷朊粉中三聚氰胺的含量达到了8%，而最终的宠物食品中三聚氰胺的含量低于0.2%。目前食品和药物中三聚氰胺的含量上限一般在1~2 ppm。近红外光谱并不适合于检测成品中如此低含量的三聚氰胺，但是非常适合于筛查原材料。相比于在成品中检测出三聚氰胺，如果在原材料中检测出三聚氰胺则更容易追查其来源。

由于测试过程的快速和无损，近红外（NIR）光谱是一种很有吸引力的粉末物质中掺杂物的筛查工具。当然，对于ppm或ppb量级的痕量杂质，近红外光谱的灵敏度无法与像GC/MS这样的技术竞争。如果没有样品预处理过程，近红外光谱的检测限在0.1%的水平，这对于含量一般在百分之几的商品掺杂物的筛查已经足够了。三聚氰胺（melamine）是一种商品掺杂物。如果使用凯氏定氮法或燃烧法通过总氮含量间接测定蛋白质的含量，加入三聚氰胺可以提高样品中表观蛋白质含量。在奶粉和谷朊粉（面筋粉）中掺杂三聚氰胺的恶性事件已经发生了很多。目前食品和药物中三聚氰胺的含量上限一般在1~2 ppm。近红外光谱并不适合于检测成品中如此低含量的三聚氰胺，但是非常适合于筛查原材料。相比于在成品中检测出三聚氰胺，如果在原材料中检测出三聚氰胺则更容易追查其来源。

生物技术药物质量研究主要包括分析方法的开发建立、理化特性分析、生物学活性测定、生产工艺的优化及稳定性评价、残留杂质检测、制剂相关的安全性研究、产品的配方及保存运输条件的确定等几个方面，其中任何环节的疏忽都可能对终产品的安全性和有效性产生影响。例如,在细胞培养过程中为消除泡法而加入的消泡剂，不仅对细胞的牛理产生不利影响，也会影响人体健康:蛋白质药物生产、贮藏、运输等过程中产生的聚集体则会导致药物失活，甚至引起严重不良反应 表面活性剂等药用辅料的品种与用量，直接与生物药临床用药安全性与毒副作用息息相关。因此，质量研究应贯穿生物技术产品的整个研发过程。通过质量研究可以对产品的性质有更全面的了解，确定产品的关键质量属性，并根据产品本身的变异及检测方法的精密度和稳定性确定相应的质控标准。因此，质量研究是质量控制的前提和基础。可在一定程度上促进质控水平的提高并不断完善质量标准。

干酪是由牛奶经发酵制成的一种营养价值很高的食品，内含丰富的蛋白质、乳脂肪、无机盐和维生素及其他微量成分等，对人体健康大有好处。但由于干酪始终处于发酵过程中，所以时间太长了也会变质。干酪中生物胺含量的评价对消费者而言是关注其健康危害所必须的，更进一步，生物胺含量的高低也可以作为评价干酪生产原乳和加工环境卫生状况的有用标准之一。图-0分别为新鲜的和腐败的瑞士硬干酪样品中生物胺的分离谱图，可见腐败的奶酪中酪胺含量会明显增加，而摄入过量酪胺则极易引起中毒

采用赛默飞ISQ™ 7000气相色谱-质谱联用仪测定生物检材中甲基苯丙胺和氯胺酮具有灵敏度高，峰型良好以及重复性佳的特点。结合变色龙软件独特的Timed-SIM扫描功能，方便的报告模板设计，一键式启动的EworkFlow方法包功能，均能帮助用户快速建立整个分析流程，提高分析效率

腐胺、尸胺、组胺、亚精胺和精胺是最常见的五种生物胺，具有一定的生理活性，但摄入过量将促使肾上腺素和去甲肾上腺素的释放加剧，诱发恶心、心悸、呼吸紊乱等强烈过敏反应，甚至危害生命安全。动植物尸体在微生物作用下，体内的氨基酸等含氮化合物可转变产生大量生物胺，我国水产品卫生标准GB2733-2005[1]就曾明确限定了市售、非活水产品中组胺的含量。地质灾害以及某些特定事故常致使大量动物体尸体不能被及时有效地处理，尸体腐败变质后释放出的大量生物胺将浸入地下水系统，引发水体污染，如浸入供水系统，将严重危害公共饮用水安全。因此，必须建立一种快速响应的生物胺分析测定方法，以保障在特定事件发生后迅捷地完成地下水中生物胺含量的实时监测，保障周边居民饮用水安全。目前，生物胺的准确定量测定方法主要有气质联用、液相色谱法[2]和离子色谱法[3]等。其中仅离子色谱法无需将生物胺经过繁琐的柱前衍生或预衍生处理，以离子交换分离为基础，简单而迅捷地实现了腐胺、尸胺等五种生物胺的分离测定。毛细管离子色谱的诞生，是离子色谱发展的重要里程碑，标志着离子色谱进入了低消耗、低成本、高效率时代。其微升级的流量，极大地降低了淋洗液的消耗，配合淋洗液自动发生装置使用，可实现长达18个月的连续开机运转，有效地保证了各种突发事件发生时，离子色谱总能在第一时间内完成对应的应急样品测定。本文以毛细管离子色谱为依托，选用高效阳离子交换分离柱IonPac CS19，以甲基磺酸淋洗液发生器在线产生甲基磺酸溶液，梯度淋洗，完成了地表水、自来水样品中痕量腐胺、尸胺等五种常见生物胺的分离分析。方法重复性较好，准确性较高。

生物胺(BAs)是一类含有氮元素，且其分子量不高，并具有重要的生物细胞活性的一类有机化合物的总称。微量的生物胺是生命体内正常的活性成分，在生物细胞中具有重要的生理功能，但生物胺在人体内积蓄到较高的含量时就会产生毒性。因此建立一种检测生物胺的方法，对生物体的身体健康有着很高的实用价值。由于生物胺本身没有或者仅有较弱的荧光，通常采用衍生试剂进行衍生， 使生成具有强荧光信号的衍生物，达到高灵敏检测的目的。因此，我们建立用毛细管电泳仪与激光诱导荧光检测器联用，基于异硫氰酸荧光素（FITC）衍生氨基酸，并对其进行分离与检测的方法。

开发一个超高效液相色谱（UHPLC）方法来解决主要的生物胺，并在他们的酸性代谢产物微透析样本收集从大鼠脑使用改进吞吐量Thermo Scientific的戴安?的UltiMate??3000平台的高效液相色谱法。从前额皮质细胞外液的样品中收集的20分钟持续使用2毫米微透析探针。随后的分析通过进行样品生物胺和酸性代谢产物的含量采用了一块2.4?m的，2.1×100毫米C18柱3000的UltiMate HPLC系统。一个UHPLC方法在微透析神经化学物质的测量样品被开发。主要的生物胺和酸性代谢物使用的电化学组合的细胞外液样品中检测氧化和还原技术。

在本应用案例中，样品为极性很强的谷氨酰胺类衍生物，不易溶于正己烷、乙酸乙酯等常用正相流动相，而其在普通C18反相柱上几乎没有保留。针对样品的具体性质，三泰科技的应用工程师利用亲水性的SepaFlash® C18AQ柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine，成功对样品进行了纯化制备，获得了满足制备需求的目标产物，为极性很强的谷氨酰胺类样品的分离纯化提供了一种可行的方案。

单细胞研究是目前国际科研热点，由于细胞的异质性，传统的基于细胞群体水平的检测只能得到平均值，会掩盖单个细胞的独特性。在单个细胞水平阐述重要生命现象，能够拓展生命科学研究的精度和深度。过去十年来，单细胞技术主要被应用于动物领域，微生物单细胞的研究目前尚处于起步阶段。长光辰英自主研发的PRECI SCS分选仪可实现微生物单细胞鉴定、功能菌快速筛选、可视化单细胞分离。有助于获得有价值的微生物资源，且可以从单细胞水平研究微生物群落到功能的变化。

本文以毛细管离子色谱为依托，选用高效阳离子交换分离柱IonPac CS19，以甲基磺酸淋洗液发生器在线产生甲基磺酸溶液，梯度淋洗，完成了地表水、自来水样品中痕量腐胺、尸胺等五种常见生物胺的分离分析。方法重复性较好，准确性较高。

本文采用采用离子色谱方法抑制电导检测，简单灵敏地测定出考来维仑中有机胺杂质的含量。方法操作简单便捷，且重现性好，回收率高，适用于此类样品分析。

Agilent Ultivo 三重四极杆 LC/MS 系统可以在监管要求的低浓度水平下分析亚硝胺杂质。本应用简报表明 Ultivo LC/TQ 在检测某些低浓度亚硝胺杂质方面的灵敏度。该方法可用于不同 ARB 药品中杂质的定量，并可根据药品的洗脱模式改变色谱条件。

本文建立使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用技术测定鲮鱼罐头中9种生物胺的方法。通过深度的方法优化，使用该方法分析9种生物胺，8种生物胺线性相关系数均大于0.9950, 仅精胺因碱性过大，其线性相关系数为0.9920。该方法测试的灵敏度高，各化合物仪器定量限在1.01 μg/L~7.52 μg/L之间，大大高于常规液相色谱法的灵敏度。各化合物的峰形良好，精密度高，不同浓度水平的标准溶液连续进样7次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.18%和5.76%以下。本测试方法灵敏度高、分析简单、快速，可满足食品类样品中生物胺的检测需求。

血管紧张素 II 受体阻滞剂 (ARB) 药物通常用于治疗高血压和心脏衰竭。最近的研究表明，一些 ARB 药物产品含有致癌性亚硝胺杂质，导致许多这类药物被召回。因此，行业迫切需要一种常规分析方法，来检测这些致癌性亚硝胺杂质。本应用简报介绍了一种灵敏的高分辨率 LC/MS/MS 方法，其中使用 Agilent 6546 LC/Q-TOF 来检测和定量 USFDA 列出的 6 种亚硝胺，并展示了同时检测 11 种亚硝胺杂质。

本文建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪测定普萘洛尔中亚硝胺药物成分相关杂质N-亚硝胺普萘洛尔。该方法在13 min内完成测试。方法学结果表明，N-亚硝胺普萘洛尔物质在0.5~20 ng/mL浓度范围内线性关系良好，仪器检出限为0.08 ng/mL。1 ng/mL标准溶液重复进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别为0.12 %和2.10%之间。1 ng/mL浓度的加标回收率测试，平均回收率为108.52%，相对标准偏差为1.07%。该方法满足检测要求，能快速、有效的分析普萘洛尔中N-亚硝胺普萘洛尔杂质的含量。

用气相色谱/质谱联用技术对海洋生物样品（贻贝，蚌类）中的有机氯农药残留进行检测是极具挑战性的。虽然可以用快速溶剂萃取技术，同时使用尺寸排阻色谱以及氧化铝萃取技术处理样品，但提取样品中仍然含有大量基质。采用单四极杆气相色谱/质谱联用系统时，在选择离子检测模式下，这些基质不仅干扰定量分析，而且会造成衬管以及气相 色谱柱问题。导致气相色谱保留时间漂移和信号强度衰减。同时，质谱离子源会很快被 污染。 采用气相色谱/三重串联四极杆多反应监测分析模式时，因为复杂多重残留分析需要对多 反应监测的分段时间进行认真设置，所以采集数据时避免保留时间漂移尤其重要。本篇应用简要将介绍如何用安捷伦 7000A 三重串联四极杆气相色谱/质谱联用系统多反应监测模式，结合安捷伦微板流路控制技术对高沸点组分的反吹技术来对海洋生物样品进行分析。

亚磷酰胺单体是寡核苷酸药物化学合成的关键物料，对亚磷酰胺单体进行分子量及杂质分析是寡核苷酸药物生产质量控制的重要内容。本文应用台式MALDI-8030分析了16种常见的亚磷酰胺单体，包括8种用于合成DNA的亚磷酰胺单体及8种用于合成RNA的亚磷酰胺单体，可以快速获得样品的精确分子量及杂质组成情况，为寡核苷酸药物化学合成物料的质量控制提供直接依据。

亚硝胺类化合物是一类具有R1R2N-N＝O基本结构的化合物，具有强致癌性，遗 传毒性研究发现，亚硝胺可通过机体代谢或直接作用，诱发基因突变、染色体 异常和DNA修复障碍。目前FDA官网已公布了包括缬沙坦胶囊在内几种沙坦类 抗高血压药物中三种必检基因毒性杂质的限量标准，即NDMA、NDEA、NMBA 相对含量的限量标准分别为0.3、0.083、0.3 ppm。 本文使用沃特世串联四极杆系统标配的ESCi多功能源建立一种检测NDMA、 NMBA、NDEA 及NEIPA、NDIPA5种亚硝胺类潜在基因毒性杂质的快速分析方 法，并对缬沙坦胶囊、吲达帕胺原料药该5种化合物进行了含量测定，总分析时 间6 min。

Agilent 6546 LC/Q-TOF 高分辨率LC/MS/MS 可以在低浓度水平下分析亚硝胺杂质，高分辨率质谱能够可靠地检测药品中存在的亚硝胺化合物。本应用简报证明了 6546 LC/Q-TOF 仪器在检测这些低浓度亚硝胺杂质方面的灵敏度。此方法可用于定量分析不同 ARB 药品中的这些杂质，并能根据药品的洗脱模式改变色谱条件，确保可以将药物峰转移到废液中，以避免质谱仪污染。

亚硝胺的化学式是NR2NO（R代表H或烃基）。大量的动物实验已确认，亚硝胺是强致癌物，并能通过胎盘和乳汁引发后代肿瘤。同时，亚硝胺还有致畸和致突变作用。人群中流行病学调查表明，人类某些癌症，如胃癌、食道癌、肝癌、结肠癌和膀胱癌等可能与亚硝胺有关。自2018年7月在缬沙坦原料药中检出N-亚硝基二甲胺（NDMA）起，陆续在其它沙坦类原料药中也检出了各类亚硝胺杂质，如N-亚硝基二甲胺（NDMA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）等。进一步的调查发现，在个别供应商的非沙坦类的药物中（如雷尼替丁、二甲双胍），亦有亚硝胺类杂质的检出。因此为了保证药品的安全和质量可控，有必要对化学药品中亚硝胺类杂质进行全面的检测和控制。

本实验需将样品丙胺卡因与4种杂质乙酸、溴乙酸、2-溴丙酸、杂质I（丙氨酸类似物）完全分离，通过分析5种化合物酸性及极性特点，我们决定尝试同时具有反相和阳离子交换两种保留机理的CAPCELL PAK CR柱和对极性化合物具有良好保留的CAPCELL PAK ADME两款色谱柱进行分析。 实验结果表明，使用CAPCELL PAK CR 1：4和CAPCELL PAK ADME色谱柱均能得到主成分与4个杂质峰的良好分离，但使用ADME色谱柱流动相条件更为简单，客户可依据自身需求自行选择合适的色谱柱。