有关物质色谱条件

我们有个化药，在定其有关物质色谱条件时，做专属性实验时，起始物料和中间体分不开，试了很多流动相 也分不开，但和主峰是分开的，请问这样可否？请高手赐教。

现在有一个问题想请教大家，原先做的有关物质和含量液相条件都一样，所以做含量液相条件方法学时就不存在色谱条件确定这项了，但现在有关物质和含量液相色谱条件不一样？含量的色谱条件也点进行确定，我现在想问，含量的色谱条件也点做耐用性、专属性、检测限、溶液稳定性试验吗？

阿立哌唑是第三代非典型抗精神病药物，为喹啉酮衍生物，用于治疗精神分裂症。欧洲药典（EP）中规定的有关物质和含量测定的色谱条件如下：1、色谱柱：硅胶基质且端基封尾的ODS色谱柱（3um，4.6*100mm）2、流动相A：乙腈-0.05%三氟乙酸溶液（10：90，V/V） 流动相B：0.05%三氟乙酸溶液-乙腈（10：90，V/V）3、梯度洗脱： 时间min流动相A%流动相B%0-280202-1080 →6520 →3510-2065 →1035 →9020-2510904、流速：1.2ml/min5、检测器：UV（254nm）推荐色谱柱：YMC-Pack ODS-A分析色谱柱（P/N：AA12S03-1046WT）

有人做过门冬氨酸鸟氨酸么，有关物质用什么条件比较稳定呢，现在尝试的方法是调整PH，但是重现性很差，不同批次的色谱柱都不能重复，有没有比较稳定的方法呢

高效液相色谱法测定有关物质的方法建立的过程 有关物质系药品中除主成分以外的杂质，有关物质来源的两种途径：1.合成过程中的中间体和副产物；2.储存过程中产生的降解产物。 由于有关物质的含量较少，所以选择专属性强、灵敏度高、重现性好的检测方法至关重要。目前常用的方法有HPLC法和TLC法，后法不讨论。现主要阐述HPLC法的建立过程。 HPLC法检测有关物质的方法有：(1)杂质对照品法(适用于已知杂质)；(2)主成分自身稀释对照法(适用于一般杂质检查，杂质成分少且尚不能取得其对照品，简称“自身对照法”)；(3)归一化法 (现已不多用)。前法为外标法、定量检测；后两法均为限量检测。一、色谱条件的确定 1、查阅文献，看看是否同行已经做过类似的工作，有的话可以参考。 2、没有文献，进行以下工作。 1）分析结构，看看有无紫外吸收，有就比较简单，选用紫外检测器就行了，没有的话那就麻烦，可以选用蒸发光散射检测器等。 2）分析结构，看看选用何种色谱方式进行分离（正相或者反相色谱）。 3）分析结构，看看流动相该如何选择，要不要选用一些离子对试剂。 4）与同类产品进行比较。 3、紫外扫描一下，找到最大吸收波长。将能得到的中间体、副产物、分解产物、样品配成相同浓度，在紫外扫描分光光度计上扫描一下，选择所有物质具有相同的最大吸收处的波长作为测定波长。要是有二极管阵列检测器就不需要这一步了。 4、还是得找一些资料，看看类似的样品的流动相，以它为起始流动相进行选择，如果没有，那就找专业书，看看它是怎么教你选择流动相的。 5、通过专属性验证所选色谱条件能否将各杂质与被测物分离检出 。应按0.5%(w／w)被测物浓度的各杂质量添加至被测物中，模拟被测物中可能存在杂质的状态，即有少量(约0.5%)杂质存在时能否与被测物达到完全分离(分离度大于2.0)，以验证系统适用性。二、最低检测限 得出达到S／N＝2或S／N＝3时的样品药品浓度。三、供试品溶液浓度的确定 根据最低检出浓度，采用“上推法”来确定供试品溶液浓度：如一般设定杂质总量小于1．0％对照液，对照溶液的浓度至少应为最低检出浓度的20---50倍，供试品溶液浓度则应是最低检出浓度的2000～5000倍。同时还应考虑仪器、色谱柱等因素对最低检出浓度和最大进样浓度的影响(即耐用性因素)，所以供试品溶液的浓度应在保证小于最大进样量的情况下，适当设定得高些，以保证该浓度在任何试验条件下，均有足够的检测灵敏度。四、线性及精密度试验 在稳定性考察中，如某杂质含量不断增加，则说明被测物降解的途径稳定、可循，则有必要对该杂质进行针对性地监控，即采用该杂质对照品 (经确证结构后，由人工合成获得)以外标法准确测定。此时，与含量测定相似，应进行线性试验。通常将杂质线性验证范围0．05%～1．5%)。且精密度试验也应符合要求，但RSD可根据实际情况，适当放宽至2.0～3.0。五、加样回收率试验 回收率试验采用在已知杂质含量的被测物中加入定量杂质的方法来评价。将各杂质以0.4%、0.5%、0.6% (w／w)的浓度加至被测物溶液中，以验证所采用的色谱条件是否可分离检测相应的各杂质以及与被测物中已存在的杂质是否累加，并观测累加量的准确性。六、强力破坏试验 强力破坏试验条件有强光、高温、高湿、强酸、强碱、氧化破坏等。破坏时不能过于剧烈，一般以产生20％～3O％杂质的条件为宜(《化学药物杂质研究技术指导原则》，国家食品药品监督管理局药品审评中心)。同时，还可采用二极管阵列检测器(DAD)或质谱(MS)监测器进一步验证主峰纯度，观察主峰中是否包含有被破坏产生的杂质峰。七、其他色谱参数的确定 流速的选择：主峰保留时间应在l0min以后，这样主峰不易出现拖尾、堆积的现象。柱温的选择：不应超过35℃，既可增强被测物与杂质的分离度，也可避免因温度过高使主峰降解，导致测定误差。溶剂的选择：由于有关物质测定的供试品溶液浓度高，应首先考虑被测物在溶剂中的稳定性 和溶解性。一般选流动相作溶剂为宜， 以排除溶剂峰的干扰。但由于有关物质的测定必须扣除溶剂峰，因此只要溶剂峰不干扰被测物质峰，即使不选用流动相作溶剂，也完全可以。在流动相溶解性不佳时，可采用甲醇或乙腈作溶剂以提高溶解性。 色谱图记录时间的设定：应能洗脱出有可能存在的全部杂质和经强力破坏试验产生的杂质，并规定至主成分保留时间的几倍为止。在测定制剂的有关物质时，个别辅料出峰滞后，此时应在质量标准中注明。八、杂质的限量。 必须根据《化学药物杂质研究技术指导原则》来定。

高效液相色谱法测定有关物质的方法建立的过程 有关物质系药品中除主成分以外的杂质，有关物质来源的两种途径：1.起始原料及合成过程中的中间体和副产物；2.储存过程中产生的降解产物。 由于有关物质的含量较少，所以选择专属性强、灵敏度高、重现性好的检测方法至关重要。目前常用的方法是高效液相色谱法。现主要阐述高效液相色谱法的建立过程。 高效液相色谱法检测有关物质的方法有：(1)杂质对照品法(适用于已知杂质)；(2)主成分自身对照法（紫外检测器），采用HPLC主成分自身对照法检查有关物质，其前提之一是需检查的杂质与主成分在确定的检测波长下应有相近的紫外吸收（响应值接近）。一、色谱条件的确定 1、查阅文献，看看是相关的资料，有的话可以参考。 2、没有文献，进行以下工作。 1）分析结构，看看有无紫外吸收，有就选用紫外检测器，没有的话可以选用蒸发光散射检测器等。 2）分析结构，看看选用何种色谱方式进行分离（正相或者反相色谱）。 3）分析结构，看看流动相该如何选择，要不要选用一些离子对试剂。 4）与同类产品进行比较。 3、紫外扫描一下，找到最大吸收波长。将能得到的中间体、副产物、分解产物、样品配成相同浓度，在紫外扫描分光光度计上扫描一下，选择工艺中最容易带入或产生的杂质的最大吸收处的波长作为测定波长。要是有二极管阵列检测器就不需要这一步了。 4、查找资料，看看类似的样品的流动相，以它为起始流动相进行选择，如果没有，那就找专业书，看看它是怎么选择流动相的。 5、通过专属性验证所选色谱条件能否将各杂质与被测物分离检出 。应按0.5%(w/w)被测物浓度的各杂质量添加至被测物中，模拟被测物中可能存在杂质的状态，即有少量(约0.5%)杂质存在时能否与被测物达到完全分离(分离度大于2.0)，以验证系统适用性。二、最低检测限 得出达到S／N＝2或S／N＝3时的样品药品浓度。三、供试品溶液浓度 一般在样品不过载的情况下，适当设定得高些，以保证该浓度在任何试验条件下，均有足够的检测灵敏度；也可以根据峰面积确定（经验），面积七位数时9开头，八位数时1开头。四、线性及精密度试验 按药典规定，即采用该杂质对照品 (外购或合成获得)以外标法准确测定。此时，与含量测定相似，应进行线性试验。通常将杂质线性验证范围0．05%～1．2%)。精密度试验是以杂质百分浓度为0.5%进样，相对标准偏差不大于2.0。五、回收率试验 杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。将各杂质以0.4%、0.5%、0.6% (w/w)的浓度加至被测物溶液中，以验证所采用的色谱条件是否可分离检测相应的各杂质以及与被测物中已存在的杂质是否累加，并观测累加量的准确性。六、强降解试验 强降解试验条件有酸、碱、氧化、强光、高温破坏等。破坏时不能过于剧烈，一般以产生10%～20%杂质的条件为宜(《化学药物杂质研究技术指导原则》，同时采用二极管阵列检测器(DAD)验证主峰峰纯度，验证物料平衡。七、其他色谱参数的确定 流速的选择：主峰保留时间约在l0min左右，这样主峰不易出现拖尾、堆积的现象，运行时间也不会太长。柱温的选择：不应超过35℃，既可增强被测物与杂质的分离度，也可避免因温度过高使主成分降解，导致测定误差。 溶剂的选择：首选流动相作溶剂为宜，以排除溶剂峰的干扰。也可以先用和流动相同比例有机溶剂溶解，再加入同比例水相。难溶物质，可采用甲醇或乙腈作溶剂以提高溶解性。 色谱图记录时间的设定：根据强力破坏试验和样品稳定性试验来规定色谱图记录时间，应能洗脱出有可能存在的全部杂质和经强力破坏试验产生的杂质，并规定运行时间主成分保留时间的几倍。八、杂质限度的确定 杂质限度的制订应考虑如下因素：杂质及含一定限量杂质的药品的毒理学研究结果；给药途径；每日剂量；给药人群；杂质药理学可能的研究结果；原料药的来源；治疗周期；在保证安全有效的前提下，药品生产企业对生产高质量药品所需成本和消费者对药品价格的承受力。严格按照《化学药物杂质研究技术指导原则》来制定。

请问各位前辈,液相色谱做有关物质的色谱条件,是不是要保证各个杂质之间也要基线分离,分离度是否有要求.谢谢！！

色谱条件：0.1%磷酸水，乙腈，30℃，梯度运行，在乙腈达到95%的时候两个物质出峰，且位置相同。合成人员走了联苯甲醚定位和联苯乙酸乙酯定位，发现这两个物质出峰位置相同，因此想分开这两个物质……，联苯乙酸乙酯的沸点较高，300多℃，没办法走[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]……求问可以如何改变条件让他们两个分离？

我这几天正在测定蛋黄中FAME，买了sigma的Supelco37FAME混合标准品，[B][size=4]标品图谱的色谱条件为[/size]：[/B]色谱柱:SP-2560，100m*0.25mmID，0.20um柱箱温度:140摄氏度（5min）以4摄氏度/min升至240摄氏度载气:氦气，20cm/sec检测器:FID260进样口:1ul，260摄氏度，100:1[B]我的实验的色谱条件：[/B]色谱柱:安捷伦DB-23，30m*0.25*0.25um柱箱温度:80度3min，以10度/min的速度升至170度，维持10min，再以5度/min的速度升至220度，维持3min载气:氮气0.5ml/min检测器:FID250进样口:1ul，240，20:1由于条件不同，出峰时间与标准品不同，但峰数量远大于37种，近五十种。不知道如何确定各峰与混标中各物质的对应关系，C4-C16确定还相对比较容易，后面就很难了，无论是峰高还是面积与标准品图谱相差很大，是不是我的色谱条件不合适，需要改进？还是有其他的方法？再有标品中浓度是不是和色谱峰面积对应，浓度大峰面积就大？请各位帮忙！

阿奇霉素有关物质分析方法对色谱填料的要求目前2005版中国药典对阿奇霉素相关物质的测定采用薄层色谱法（TLC），对含量的测定是采用微生物检定法，方法的专属性不好。USP以及欧洲药典现行分析方法是采用液相色谱法。

各位色友：大家好！现在我遇到一个很纠结的事情，就是用液相色谱检测有关物质的进样次数是几次（是单样单针，还是单样双针，还是双样双针，甚至更多），有关物质检测中系统适应性又该进几次？我们有很多客户审计提出的说法都不一样，所以现在我很纠结，到底该如何整改这件事情，也请各位帮帮忙，教教我该如何解决，有法定的标准最好，那样更有说服力。

薄层色谱法检测奥沙普秦中的有关物质

流动相为0.2%甲酸-乙腈 20－80，流速1ml/min，CAD检测器分析一个紫外吸收200nm左右的化合物。因为要进质谱对有关物质进行定性，又避免甲酸，乙酸，乙酸铵等在200nm处的影响，所以选择用CAD检测器。以上述条件分理处三个杂质，但是主成分峰形不好，尝试在0.2%甲酸水中加入了5mM甲酸铵，10mM乙酸铵等，发现峰型改善了，但是杂质都没了，这是怎么回事[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008202147293471_645_4037032_3.png[/img]

我做有关物质的结构鉴定，优化好色谱条件后，质谱上却没有响应，由于刚刚开始做MS，想请教各位提高离子响应的方法有那些啊？

药品中有关物质的检测—高效液相色谱法：药典中是这样写的：[color=#333333]取对照溶液20μl，注入[/color]液相色谱仪[color=#333333]，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%。使用液相色谱时，在仪器上如何调节检测灵敏度？[/color]

依地酸二钠BP2015中有关物质所用色谱柱填充料为：— stationary phase: spherical graphitised carbon for chromatography R1 (5 μm) with a specific surface area of 120 m2/g and a pore size of 25 nm大家用的哪个牌子的柱子？麻烦告知一下，谢谢！

我最近做一个三类药的专属性 试验，它的含量测定、有关物质1是一个色谱条件，有关物质2又是另一个色谱条件，并且两者的波长不一样，我目前开始做有关物质2的专属性试验，平常专属性的破坏程度都是看主峰峰面积还剩多少，但是现在在有关物质2的色谱条件下，主药不是最大吸收，峰面积大概只有20多点，请教各位高手们，这种情况下怎么看破坏程度？？？？？

今天做维生素B6时的有关物质检查时，看到这样一句“照含量测定项下的色谱条件，取对照液10微升注入色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%。”请问这个要怎么调？？我用的是岛津LC-10AT的机子，N2000工作站。新手，多多指教！！！！

要写有关有机脂肪酸类物质的色谱分析方法研究进展的论文，找了好久都没有，请各位指点一下有哪些相关的书和文章，急！拜谢！

能不能请做过丙二醇有关物质的老师帮忙解决一下丙二醇有关物质的图谱分析和计算问题？

朋友给的 大家看看吧[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=18865]难分离物质最佳[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分离条件的选择[/url]

[em61] 各位高手：关于液相中有关物质的制定时，一般是这样表述：供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，其杂质峰（扣除溶剂峰、辅料峰）面积之和不得大于对照溶液的主峰面积。但是这样定制，药检局审评中心要求所报产品带辅料（这样导致大生产出售时也要带辅料出厂，很麻烦也很不合生产规定）；如不这样定制，有关物质就超标了；如果再上报资料的附图（液相图谱）中不积溶剂峰、辅料峰，那末药典局到底怎么检查的。各位同仁高手们，望赐教！！谢谢

[align=right][b]SGLC-LC-338[/b][/align][b]摘要：[/b]本文建立了头孢呋辛钠有关物质分析的HPLC方法。参照2020版《中国药典》中色谱条件，采用色谱柱ShimNex HE C8分析头孢呋辛钠有关物质，结果显示，去氨甲酰头孢呋辛与头孢呋辛分离度大于3.0，且主峰与后相邻杂质峰基线分离，满足《中国药典》要求。此方法可为头孢呋辛钠有关物质分析提供参考。。[b]关键词：[/b]头孢呋辛钠 有关物质 ShimNex HE C8 HPLC[b]1. 实验部分1.1 实验仪器及耗材[/b]Shimadzu LC-40D高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]；色谱柱：ShimNex HE C8 (5 μm，4.6×250 mm；P/N：380-01241-09)；纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）；[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；SHIMSEN Pipet[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。[b]1.2 系统适用性溶液的制备[/b]取头孢呋辛对照品适量，加水溶解并稀释制成每1 mL含0.5 mg的溶液，置60℃水浴放置30分钟，放冷，使头孢呋辛部分转化为去氨甲酰头孢呋辛。[b]1.3 分析条件[/b]色谱柱：ShimNex HE C8 (5 μm，4.6×250 mm；P/N：380-01241-09)柱温：30℃检测波长：273 nm流速：1.0 mL/min进样量：20 μL流动相：A: 醋酸盐缓冲液（取醋酸钠0.68 g，冰醋酸5.8 g，加水稀释成 1000 mL，用冰醋酸调节pH值至3.4） B：乙腈梯度程序如下：[img]https://img.shimadzumall.com/Storage//userfiles/images/Img_articles/SGLC-LC-338-01.png[/img][b]2. 实验结果[/b]按照上述色谱条件（1.3）进行采集，系统适用性溶液色谱图如下：[b]系统适用性溶液[/b][img]https://img.shimadzumall.com/Storage//userfiles/images/Img_articles/SGLC-LC-338-02.png[/img][b]系统适用性放大图[/b][img]https://img.shimadzumall.com/Storage//userfiles/images/Img_articles/SGLC-LC-338-03.png[/img][img]https://img.shimadzumall.com/Storage//userfiles/images/Img_articles/SGLC-LC-338-04.png[/img][img]https://img.shimadzumall.com/Storage//userfiles/images/Img_articles/SGLC-LC-338-05.png[/img][b]重现性[/b]系统适用性溶液重现性[img]https://img.shimadzumall.com/Storage//userfiles/images/Img_articles/SGLC-LC-338-06.png[/img][b]3. 结论[/b] 本文建立了头孢呋辛钠有关物质分析的HPLC方法。参照2020版《中国药典》中色谱条件，采用色谱柱ShimNex HE C8分析头孢呋辛钠有关物质，结果显示，去氨甲酰头孢呋辛与头孢呋辛分离度大于3.0，且主峰与后相邻杂质峰基线分离，满足《中国药典》要求。此方法可为头孢呋辛钠有关物质分析提供参考。