乙拌磷砜残留

气相色谱法检测食品中甲拌磷的残留摘要：农药残留是引起食物中毒的主要原因之一。甲拌磷是一种高效内吸性杀虫剂，广泛应用于防治植物虫害，其过度残留会污染食物，严重者导致误食者中毒。中国（GB2763-2014）规定粮食中甲拌磷农药的允许标准最高值是0.1mg/kg（食品）。目前，气相色谱-火焰光度法（Flame Photometric Detector，FPD）是检测农药残留最重要的手段。本文针对特定模拟情况，分析中食品中毒物来源，利用GC-FPD对放置在被甲拌磷污染的木架上包装完好的薯片进行检测，以确定薯片是否被甲拌磷污染。1. 实验部分1.1 试剂丙酮为色谱纯（美国Fisher公司）。1.2 样品前处理1.2.1木板中甲拌磷的提取将木板样品浸泡在盛放有10 mL丙酮的试管中，36 KHz超声，振荡提取10 min。离心，取上清液，GC-FPD检测。1.2.2薯片中甲拌磷的提取对薯片进行了研磨粉碎，称取薯片粉末1.000g加入盛放有10 mL丙酮的试管中，36 KHz超声，振荡提取10 min。离心，取上清液，GC-FPD检测。1.2.3情况模拟将甲拌磷农药2 mL滴加在木架表面，室温放置到表面干燥。将包装完整薯片码放在木架上面，室内阴凉处放置7天，取样。1.3 仪器条件气相色谱条件：7890A型气相色谱仪配有FPD检测器（美国，Agilent）、DB-1701型毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）。2. 结果与讨论按照1.2.2中方法对薯片样品中甲拌磷含量进行检测。取出一包薯片进行隔离防止甲拌磷造成污染，对其他薯片进行模拟实验。取甲拌磷农药2mL滴加在木板表面，图1、2为甲拌磷在木板表面的滴加情况。将薯片放置在滴加了甲拌磷的木板表面，室温静置7天，图6为薯片在污染木板上的放置情况。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507311858_558390_2648817_3.jpg图1. 未滴加3911（甲拌磷）的木板照片http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507311858_558391_2648817_3.jpg图2. 滴加3911（甲拌磷）后的木板照片 分别对放置7天的薯片样品（以下简称为放置7天薯片样品）和隔离薯片样品（以下简称为隔离污染薯片样品）进行粉碎。向隔离薯片粉末中添加已知量的甲拌磷，静置1小时。按照1.2.2中的方法对放置7天薯片样品和隔离样品进行甲拌磷提取。经过气相色谱仪检测，有明显污染痕迹区域的木板样品中甲拌磷含量为130.968μg/g。检测结果如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507311859_558393_2648817_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507311859_558394_2648817_3.jpg样品谱图信息 名称 保留时间 min 峰面积 浓度 μg/mL 浓度平均值 μg/mL 放置7天的薯片样品 10.415 207778 50.161 49.855 10.414 205591 49.549 隔离污染薯片样品 10.419 641557.0 171.552 171.205 10.424 639082.5 170.859 3. 结论与展望甲拌磷在20-1000μg/mL浓度范围内呈现较好线性，回归方程为Y=2989.6X+48312，R2=0.9976，平均回收率为87.5%（n=3）。经过分析得到包装完整的薯片中甲拌磷含量为130.97mg/kg，明显超过GB2763-2014中0.1mg/kg的限量值，说明木板中的甲拌磷已经污染到包装完整的薯片。通过模拟事发过程，利用GC-FPD对放置在被甲拌磷污染的木架上包装完好的薯片进行再次检测，也确认了木板上的甲拌磷通过接触进入了包装完整的薯片中。利用该法对包装完好的薯片进行甲拌磷检测，符合农药残留测定的技术要求，可以准确的对甲拌磷进行定量分析。参考文献 1、 GB/T 5009.20-2003食品中有机磷农药残留量的测定 2、 余萍中，戴荣彩，贺敏，陈莉，贾春虹.气相色谱法测定土壤中甲拌磷及其代谢物甲拌磷砜.湖南农业大学学报(自然科学版).2008(06)：732-734. 3、 张以春，雍宗峰.固相萃取-毛细管柱色谱柱气相色谱法测定韭菜中甲拌磷及其代谢产物甲拌磷砜.中国食品卫生杂志.2012(01)：34-37. 4、 张杰，许家胜，刘连生.气相色谱法快速测定蔬菜水果中甲拌磷、甲基对硫磷残留量.科学技术与工程.2011(13)：3049-3051.

我们都知道有机磷类农药在农业生产种植中被广泛应用，下面是对果蔬中有机磷类农药的残留检测的一些经验分享，希望能和大家讨论讨论[b]一、什么是有机磷类农药[/b]有机磷类农药是一类具有神经毒性的含磷的有机物，被广泛应用于农作物的杀虫、杀菌、除草等，是我国目前使用量最大的一类农药。影响蔬菜质量的农药主要为杀虫剂类农药，在此类农药中又以有机磷类杀虫剂为主，即三个70%：使用农药中70%的为杀虫剂；杀虫剂中70%的为有机磷类杀虫剂；有机磷类杀虫剂中70%的为高毒、剧毒、高残留农药[1]。所以，果蔬中有机磷类农药的检测对保障人们的食品安全具有重要意义。检测人员需要了解农药的一些基本结构以及物理化学性质，这有利于我们开展检测工作，出现问题也利于我们分析原因。有机磷类农药的结构通式如图1：[img=,300,300]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008191053340374_1132_5004547_3.jpg!w300x300.jpg[/img]图1 有机磷结构通式R1和R2通常为甲氧基（CH3O-）或者乙氧基（C2H5O-），R3通常是烷氧基、芳氧基或其他基团。例如，甲胺磷（结构式如图2）在水中溶解度也较大，用乙腈提取时很难提取充分，所以甲胺磷的回收一般都会偏低，经常会低于70%；而敌敌畏沸点140℃（2.67kPa），具有较强的挥发性，常常作为熏蒸剂使用，所以氮吹的时间不能太长，否则会导致回收偏低。[img=,300,300]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008191055223127_3501_5004547_3.jpg!w300x300.jpg[/img]图2 甲胺磷结构式[b]二、检测方法的选择[/b]由于理化性质的原因，大部分有机磷类农药都可以用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]或者[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]来检测。蔬菜水果中有机磷类农残检测常用的方法有：NY/T 761-2008，GB23200.8-2016，以及新方法GB23200.113-2018，GB23200.116-2019（NY/T 761-2008有机磷方法的升级版）等。实验室可根据GB 2763-2019的规定结合实验室实际情况选择合适的检测方法，可参考《2019版食品中农药残留限量标准配套检测方法的变化分析》一文[7]。下面主要介绍NY/T 761-2008以及GB23200.113-2018两种检测方法。[b]三、NY/T761-2008检测方法的前处理流程与注意事项[/b]FPD（Flame Photometric Detector），也就是火焰光度检测器，其原理是含硫或含磷的化合物在富氢火焰中燃烧（H2与O2比例大于2，通常在3.5左右，这一点与FID不一样），生成激发态的S2*，HPO*，当它们回到基态时会发出特征光谱，通过相应的滤光片到达光电倍增管产生相应的信号。所以，FPD是一种对含磷，含硫化合物有高选择性和高灵敏度的检测器。也正是因为FPD的高选择性，NY/T 761-2008做有机磷前处理相对简单：乙腈提取，溶剂转换，过滤膜就可以上机检测了。[b]需要注意的地方：[/b]1.根据样品含水量加入合适量的NaCl，使得盐析充分，如果出现乳化可以适当加入少量纯水 2.加盐后要剧烈振摇1min，静置时间要足够，使有机相和水相充分分层，否则有水残留在有机相中时，氮吹时不易吹干，容易造成农药分解 3.氮吹很关键，切不可吹得过干。氮吹完后应立即用丙酮复溶，否则一些农药会有损失导致回收偏低 4.由于该方法几乎没有净化，所以仪器会脏的比较快，所以需要及时进行维护，如更换衬管，割柱头等 5.由于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]本身的局限，即使双塔双柱进样，其定性能力也还是有限，遇到复杂基质（如葱、姜、蒜、甘蓝等）无法定性的时候，需要用质谱进一步确证。[b]四、GB23200.113-2018检测方法的前处理流程与注意事项[/b]国标GB 23200.113-2018于2018年12月21日正式实施，该方法首次将QuEChERS前处理以及GC-MS/MS检测方法纳入多农药残留的国标当中。该方法做果蔬样品有QuEChERS和SPE两种前处理方法。下面我们简单的介绍一下QuEChERS方法。QuEChERS有很多优点：一、快，二、试剂用量小，三、所需样品量小，四、耗时短。以前主要是作为非标方法使用进行筛查，不能出报告。GB 23200.113-2018实施以后，正式将QuEChERS前处理纳入国标标准方法，越来越受到大家的关注。GB23200.113-2018中QuEChERS前处理流程如下：[img=,690,374]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008191111484186_5985_5004547_3.png!w690x374.jpg[/img]需要注意的地方：1.由于QuEChERS是基于分散固相萃取的原理，前处理没有匀浆步骤，一般制样时需要用破壁料理机，使得样品颗粒更细，也更均匀，这样提取会更加充分；2.由于提取包中的盐遇水会放出大量热，而且容易结块。放热会导致一些热敏感的农药分解而使回收率不好，一般可以在样品加入乙腈后放到冰箱冷藏半小时，再拿出来做后面的前处理；结块容易导致提取不充分，所以批量做样时，在加入提取包后应先预摇一下，后续再剧烈振摇，充分提取；3.QuEChERS净化管中的填料一般为：无水硫酸镁（除水），PSA（去除有机酸、少量色素和糖类杂质等），C18（除脂类非极性杂质），GCB（去除色素），根据样品基质的类型选择合适配比的净化管，既要能达到良好的净化效果，同时也要保证农药不被吸附；4.不同基质对同一种农药的几个离子对的干扰可能都不一样，可根据实际情况尽量选择干扰小的离子做定量离子；5.利用定性离子和定量离子的相对丰度比定性的时候，要保证样品中目标化合物的质量浓度与基质标准溶液浓度相当，且偏差要满足标准中的规定；6.GB 23200.113-2018标准中每个化合物只提供了2个离子对信息：一个定量离子对，一个定性离子对，实际检测过程中根据需要可多选择1-2个离子对来辅助定性。[b]五、基质效应敏感的农药，如何减少基质效应[/b]在20世纪90年代，用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析有机磷类农药时，研究人员就发现无论是采用填充柱还是毛细管柱，检测信号的强度与试样基质的特性都非常相关。Energy首先解释了这一现象，Energy和他的同事将基质效应归因于：农药由热进样口向色谱柱的传输过程中有基质的参与。通过在汽化过程中减少热不稳定农药的分解，以及屏蔽进样口中的活性位点，而减少极性农药在活性位点的吸附和解吸的速度，样品基质增加了待分析农药从进样向色谱柱的传输量。所以，不易受基质影响的农药一般都是热稳定，或者在进样口不易被吸附的。反之，则会产生较强的基质效应。基质效应敏感的典型的农药有：乙酰甲胺磷、氧乐果、久效磷等。减少基质效应的方法一般有：基质净化、PTV进样、加入分析保护剂以及基质匹配标液校正等。实际工作中，最简单有效的方法就是基质匹配标准溶液。（后附参考文献[8-9]，有兴趣的可以深入阅读）。所以，新国标GB23200.113-2018里面已经规定了需要用空白基质配工作曲线，NY/T761-2008虽然没有明确需要用基质标，实际检测中还是用的基质标以便获得更好的回收率。实际工作中每种类型的样品都严格匹配相应的基质不太现实，有学者建议如不能实现严格的基质匹配，则通用基质选择的标准应尽量使其标准曲线的斜率和基质匹配校准法的斜率相近。他们还建议，将黄瓜作为蔬菜的通用基质，西瓜作为水果的通用基质。涉及到需要非常准确定量的样品，如超限量值的样品，则还是需要用同类型基质标校正。[b]六、确保检测结果准确的一些注意事项[/b]1.工欲善其事必先利其器，让分析仪器保持良好的状态是保证检测工作质量的基本要求。除了按照要求做好仪器的周期性的检定校准和期间核查外，还应做好日常维护。2.为了保证检测结果的准确性，批量做样时一般要求10-15针样品需要穿插进一针标样，每批样品需要做质控添加回收，一般要求回收率在70-130%。超限量值样品需要用备样复检并且需要做平行，精密度也应满足检测标准的规定。3.一些有核的样品（如桃、李等）制样时需要去核，果肉和果核都需要称重，计算果肉所占比率，最后结果需要根据这个比率折算回去，否则用GB 2763判定时容易误判。4.部分农药会产生具有毒理学意义的农药衍生物，如甲拌磷代谢会产生甲拌磷砜和甲拌磷亚砜，其毒性更大。实际检测工作中，若检测到甲拌磷砜和亚砜，应将其根据相对分子质量折算成甲拌磷，上报结果用甲拌磷表示。参考资料：[1]谭康.加强食品安全意识 正确认识农药残留[J].知识经济,2011(08):113.[2]食品安全国家标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联用法(发布稿):GB 23200.113-2018[s],2018.[3]食品安全国家标准 肉及肉制品中乙烯利残留量的检测方法（发布稿）:GB 23200.82-2016[s],2016.[4]蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定:NY/T 761-2008[s],2008.[5]食品安全国家标准 植物源性食品中90种有机磷类农药及其代谢物残留量的测定?[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法:GB 23200.116-2019[s],2019.[6]中华人民共和国国家卫生健康委员会、中华人民共和国农业农村部、国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量:GB 2763-2019[s],2019.[7]廖先骏1, 李富根1, 朴秀英1, 贺泽英2, 刘潇威2, 罗媛媛1. 2019版食品中农药残留限量标准配套检测方法的变化分析. 现代农药, 2019, 18(6): 1-4[8]Colin F. Poole,Matrix-induced response enhancement in pesticide residue analysis by gas chromatography,Journal of Chromatography A,Volume 1158, Issues 1–2,2007,Pages 241-250.[9]贺利民,刘祥国,曾振灵.[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析农药残留的基质效应及其解决方法[J].色谱,2008(01):98-104.[/s][/s][/s][/s][/s]

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=17px] [/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][font=等线]残留，[/font][font=等线]就是进空白样品的时候，和目标物质保留时间相同的时间有峰出现。这种现象会对我们的检测工作带来很大的影响，因此残留问题一旦出现，消灭它也就是迫在眉睫的事情。[/font][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][font=等线]一、通过No Injection来判断残留来源[/font][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][font=等线][/font][/size][/font]1[font=等线]、残留的类别[/font] [font=等线][size=15px] 可能有的实验员会说残留的本质来源肯定是样品进样，所以只需要把注意力集中在自动进样器就可以了。实际上由纯粹进样引入的残留往往趋势是越打越低，但也有一些残留非常顽固，怎么进样都有，响应还忽高忽低，这个时候往往要考虑的是某些地方被污染了，这种情况通常存在以下特点：两通做没有，色谱柱做有；等度没有，梯度有；高比例水相时间越长，残留峰越高；这种残留峰也可以叫做污染峰，若保留时间飘忽不定，和你的目标峰的保留时间不一致的话就是传说中的鬼峰了，它的排查过程也和下面介绍的思路一致。首先要先做一个No Injection来去判断。注意，残留和污染问题可能需要进样3-5针来去确认结果。[/size][/font]2[font=等线]、去除进样器[/font]No Injection[font=等线]之残留依旧[/font] [font=等线][size=15px] 何谓No Injection？顾名思义即单纯的运行一个梯度方法，没有任何进样和切阀动作。[/size][/font][font=等线][size=15px] 我们一般建议先将进样器去除，即将进样器的进样阀的1号和6号毛细管线拧下来，并用两通进行连接，运行No Injection进样。由于去除进样器的原因，保留时间会有所提前，[/size][/font][font=等线][size=15px]因此[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]用户一旦使用Dynamic-MRM方法的话请直接保持仪器的正常连接进行No Injection，否则会导致误判。[/size][/font][font=等线][size=15px]不同的软件No Injection的执行略有区别：Masshunter是进样位置项目下拉直接选择No Injection，其他版本的工作站可以直接将样品位置留空。[/size][/font][img=,690,630]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081642086572_1053_3005249_3.jpg!w690x630.jpg[/img][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=12px]六通阀[/size][/font][size=15px][font=等线][font=等线]如果这个时候你的残留峰依然存在，一般考虑流动相、溶剂瓶、脱气机、泵、管线、色谱柱的原因。往往我们会重点怀疑水相，因为若水相一路中含有污染物，水相比例高的情况下在色谱柱是无法被洗脱下来只能被富集的，后期有机相比例升高就会导致峰被冲出来，若污染物和你的目标峰性质非常接近，就可能会非常巧合的出现在你目标峰的保留时间那里，造成残留的现象，这种情况在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]用户中较为常见。值得一提的是流动相中的添加剂的质量也很关键，若它们有问题，也就是意味着流动相被污染。[/font][/font][/size][font=等线][size=15px]1、更换不同批次的水，或者购买一瓶纯净水或蒸馏水，可以直接将管路插入新的瓶中，以此来排除溶剂瓶污染的可能性，此时添加剂可先不加，若残留消失的话可再添加进去进行测试；更换有机溶剂。[/size][/font][font=等线][size=15px]2、换一根色谱柱试一试，虽然概率相对偏小。[/size][/font][font=等线][size=15px]3、还有就是延长梯度洗脱时间，让污染物尽可能的从色谱柱和管路当中被洗脱干净，防止吸附，也可以有效避免迟滞峰的出现。[/size][/font][font=等线][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=12px]4、泵与自动进样器之间添加捕集柱 这种污染往往很难解决，尤其对于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]用户，高灵敏度的同时也会比单纯的紫外检测器更容易受到影响。所以可以尝试在泵和自动进样器之间加一根捕集柱。这根柱子起到的作用是让来自流动相或泵的污染物先在这根捕集柱上富集，随后被洗脱出来的时候就会和通过进样过去的目标物的保留时间错开，达到消除残留干扰的目的。[/size][/font][/font][font=等线]1) 尽可能选取短柱并和分析柱类型类似，需要对你的目标物有所保留；[/font][font=等线]2) 需要你的泵的耐压足够（如大A家的1290系列泵），不能超压，对延迟体积要求高的用户不宜使用这个方法；[/font][font=等线]3) 若空白残留峰提前后干扰到了其他的目标峰则不适用此方法。[/font]2[font=等线]、去除进样器[/font]No Injection[font=等线]之残留消失[/font] [font=等线][size=15px]若泵后直连色谱柱No Injection后残留峰消失了，就可以将仪器恢复原样（进样器接回），再做一次No Injection，若残留峰再次出现了，就要怀疑进样器mainpass流路中的某一部分受到污染了，如计量泵等。此时可先行查看金属毛细管线的接头是否满足要求，如下图所示，接头有问题也有可能会造成残留。[/size][/font][img=,573,111]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081643540326_368_3005249_3.png!w573x111.jpg[/img][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][font=等线][size=15px]二、去隔垫空气进样—残留消失[/size][/font][/font][font=等线][font=等线][size=15px]若恢复原样No Injection的结果是残留消失，那么问题肯定出在进样系统，那么我们首先排除进样小瓶有没有问题。我们将瓶子的隔垫去除，并进样空气。若残留消失了，那么说明隔垫或者空白溶剂有问题，此时再加入空白溶剂去瓶垫进样，残留依然消失的话说明瓶垫有问题，残留出现的话说明空白溶剂有问题。[/size][/font][/font][font=等线][size=15px][font=等线]三、进样程序切阀进样—残留依旧[/font][/size][/font][font=等线][font=等线][size=15px] 若去隔垫进样空气的结果是残留依然存在，那么就要重点考虑我们的进样器三兄弟了-针、针座、转子。如果我们想要进一步细分的话，可以如下图设置进样程序进行实验。我们只让进样阀进行了切换，针和针座并没有什么动作，这种情况下的结果若是残留依旧，那么怀疑对象就是转子。我们此时就需要拆出进行超声清洗。[/size][/font][/font][font=等线][size=15px][font=等线][img=,690,74]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081645265142_372_3005249_3.png!w690x74.jpg[/img][/font][/size][/font][font=等线][size=15px][font=等线]四、进样器的维护[/font][/size][/font][font=等线][font=等线][font=等线][/font][/font][/font][font=等线][size=15px]若进样程序只切阀后残留就消失了，那么针和针座就是我们的重点怀疑对象了[/size][/font][font=等线][size=15px] 1、延长洗针时间或更改洗针溶剂[/size][/font][font=等线][size=15px]洗针溶液一般由水和甲醇的混合溶液组成，为使洗针效果更好，可使用针对残留物质溶解性更好的洗针溶液，或者改变水和甲醇的比例；可针对酸性化合物添加适量的甲酸（0.1-0.2%）。[/size][/font][font=等线][size=15px] 2、反冲针座和针，也可尝试超声清洗[/size][/font][font=等线][size=15px]如果您不熟悉针座的拆除流程，可以直接将进样阀的1号位、6号位的毛细管线交换位置，来进行针座、针的反冲。若您可以将针座拆下来，可以接到柱温箱的后面，根据污染物的性质选择溶解度好的流动相，且可以升高温度进行高温冲洗。最后也可将针座和针进行超声清洗或者直接进行更换。[/size][/font][b][size=15px][b][font=等线][color=#c45911][/color][/font][/b][/size][color=#888888][font=等线][size=15px][/size][/font][/color][color=#888888][font=等线][size=15px][/size][/font][/color][/b][size=15px][color=#333333][font=等线][b][/b][/font][/color][/size]