液体样品全血

众所周知，原子力显微镜（AFM）对液体中的样品表征十分重要。然而，传统的基于激光反射探测原理的AFM对液体中样品表征存在着诸多不尽如人意的方面。 先，制备传统AFM所用液体样品的时间较长，对扫描样品的尺寸限制多。为了避免液体对传统AFM的激光反射光路产生影响，人们通常会把测试样品通过多个步骤制备在AFM专用的液体腔中。整个制备流程复杂费时。同时，传统的AFM通常不能对较大尺寸的样品进行扫描，例如厘米骨骼样品。这大地限制了医学等学科对各类器官组织的研究。 二，传统的AFM在对液体中样品的表征模式方面存在一定的限制。由于传统AFM在扫描液体中的样品时可能会涉及到AFM探针在大气和液体两个相中的转换。为了避免探针在液气两相转换过程中所出现的问题，基于激光反射原理的AFM在测量液体中的样品时通常使用接触模式（Contact Model），不使用轻敲模式（Tapping Model）。然而对于表面敏感的样品而言，接触模式在扫描过程中接触样品表面时间长，对样品扫描时施加的力大，容易损坏样品表面形貌。 三，传统基于激光反射原理的AFM不能对不透明液体中的样品进行扫描表征。由于传统AFM的成像机理，这类的AFM不可能把探针伸入不透明液体，然后对液体中的样品进行扫描。然而，在生物学等领域，把探针伸入不透明液体对样品进行扫描又是非常必要的研究。因为，细胞在不透明液体（例如血液）和透明缓释液中的状态是不一样的。 四，传统的AFM由于体积原因很难和其他表征设备联用，例如与荧光显微镜进行协同原位表征。 为了解决传统基于激光反射原理AFM在液体中测量样品过程中所遇到的问题。Quantum Design公司推出了基于全电系统的生物学AFM-AFSEM。使用AFSEM对液体中样品表征时，无需繁琐的制样过程，扫描探针进入液体中直接扫描即可[1]。在扫描模式上，AFSEM可在对液体中样品扫描时提供接触和轻敲两种模式，扫描过程中尽可能减少对样品的损伤。由于AFSEM是一款基于全电系统的AFM，可以在不透明液体中对样品进行扫描。突破性地解决了以往AFM不能在不透明液体中扫描样品这一难题。后，由于AFSEM的体积仅有手掌大小，如图1所示，AFSEM可以与各种光学显微，电子显微镜，FIB等多平台结合。图1. AFSEM原子力显微镜实物图。A) AFSEM的两种型号。左侧为AFSEM 1.0，右侧为AFSEM Nano。B）AFSEM 1.0尺寸大小示意图。图2. AFSEM在1：8（血液：水）稀释的血液中扫描样品的结果。A) AFSEM在液体中扫描样品的特写。B）在液体中获得的血红细胞血影的形貌图。图中比例尺为10 μm。 图3. 在不同透明度液体中扫描TGZ2 AFM标样的结果。A）表样浸在牛奶液体中。B）牛奶液体中获得的TGZ2 AFM扫描结果。图中比例尺为为10 μm。C）在去离子水液体中扫描标样的结果。D）血清中扫描标样的结果。E）未稀释血液中扫描标样结果。 图4. AFSEM在不同液体中扫描HS-500MG AFM XYZ标准样的结果。图中上半部分为去离子水中的扫描结果，下半部分为在未稀释的人体血液中获得的结果。扫描速度从左至右从30 μm/s增加到750 μm/s。 图5. 装在SEM中的AFSEM对大尺寸骨骼样本进行多维度原位表征。A）AFSEM对大尺寸骨骼样品表征示意图。B）把AFSEM放在SEM样品腔体中。C）在SEM中获得骨骼样品原位形貌信息示意图。D）C图中白色虚线部分的放大图。E）D图中彩色部分的三维立体结果。 Quantum Design公司拥有一只强大专业的定制化团队，可以根据用户的要求将AFSEM与光学显微镜，电子扫描显微镜，聚焦离子束加工设备，荧光显微镜等设备进行整合。下图为2021年9月Quantum Design公司为斯坦福大学定制的AFSEM系统[2]。图6. 2021年9月Quantum Design公司为斯坦福大学安装定制的AFSEM系统。A)斯坦福大学Fritz Prince教授和Quantum Design工程师在定制AFSEM系统前合影。B）为教授定制的AFSEM系统。定制系统方案为在FEI Teneo电子显微镜的样品腔中将AFSEM与Kleidiek八探针电学测量平台进行整合。 参考文献：[1]. Michael Leitner, Hannah Seferovic, Sarah Stainer, et al.Atomic Force Microscopy Imaging in Turbid Liquids: A Promising Tool in Nanomedicine. Sensors, 2020,20,3715.[2]. https://www.qd-microscopy.com/2021-august-microscopy-virtual-conference-2021/

编者注：傅若农教授生于1930年，1953年毕业于北京大学化学系，而后一直在北京理工大学(原北京工业学院)从事教学与科研工作。1958年，傅若农教授开始带领学生初步进入吸附柱色谱和气相色谱的探索 1966到1976年文化大革命的后期，傅若农教授在干校劳动的间隙，系统地阅读并翻译了两本气相色谱启蒙书，从此进入其后半生一直从事的事业&mdash &mdash 色谱研究。傅若农教授是我国老一辈色谱研究专家，见证了我国气相色谱研究的发展，为我国培养了众多色谱研究人才。 第一讲：傅若农讲述气相色谱技术发展历史及趋势 第二讲：傅若农：从三家公司GC产品更迭看气相技术发展 第三讲：傅若农：从国产气相产品看国内气相发展脉络及现状 第四讲：傅若农：气相色谱固定液的前世今生 第五讲：傅若农：气-固色谱的魅力 第六讲：傅若农：PLOT气相色谱柱的诱惑力 第七讲：傅若农：酒驾判官&mdash &mdash 顶空气相色谱的前世今生 第八讲：傅若农：一扫而光&mdash &mdash 吹扫捕集-气相色谱的发展 第九讲：傅若农：凌空一瞥洞察一切&mdash &mdash 神通广大的固相微萃取（SPME） 第十讲：傅若农：悬&ldquo 珠&rdquo 济世&mdash &mdash 单液滴微萃取(SDME)的妙用 第十一讲：傅若农：扭转乾坤&mdash &mdash 神奇的反应顶空气相色谱分析 第十二讲：擒魔序曲&mdash &mdash 脂质组学研究中的样品处理 前言 　　作为代谢组学的重要分支之一，脂质组学(Lipidomics)的研究对象是生物体的所有脂质分子，并以此为依据推测其它与脂质作用的生物分子的变化，进而揭示脂质在各种生命活动中的重要作用机制。脂质组学是总体研究和这些疾病有关的脂质化合物，找到昭示这些疾病的生物标记物。 　　前一篇讲述了脂质组学研究中的样品处理技术，一般情况下样品处理后可以直接用鸟枪法进行质谱分析，但是如果是一个成分复杂的系统，就要进行分离，可以用气相色谱、液相色谱、薄层色谱或毛细管电泳，本文介绍代谢组学研究中使用离子液体色谱柱分离脂肪酸的气相色谱方法。 1、基本情况 　　由于脂质分子是不挥发性的化合物，同时有些脂质分子受热易于降解，所以在脂质组学研究中使用气相色谱有些困难，逊色于薄层色谱和液相色谱。如果使用气相色谱进行衍生化是必须的步骤，但是很多情况下衍生化会丧失脂质分子种类特点的结构信息。但是由于气相色谱以其对异构体的高分离能力、高灵敏度、便于进行定量分析的能力，它仍然是脂质组学分析中的有力工具。通常气相色谱用于分析某些类别的脂质，可以获得很高的分离度和灵敏度，所以经过很特殊的萃取、用TLC 或 HPLC与分离、再经衍生化是用气相色谱进行脂质组学研究的基本方法。用气相色谱可以很灵敏地检测许多类别的脂质，如脂肪酸、磷脂、鞘脂类、甘油酯、胆固醇和类固醇。分析高分子量的化合物，必须使用高柱温，甚至需要400 C，近年Sutton等配置了高温气相色谱-飞行时间质谱，这一系统可以进行高分子量化合物(m/z达1850)，进行在线质谱分析温度达430℃，这样的系统适合于长链脂质的分析。 　　近年把离子液体用作气相色谱固定相，用以分离脂质混合物，特别是脂质的异构体。Delmonte等讨论了脂肪酸顺反异构体的分离问题，一些单不饱和脂肪酸的几何和位置异构体可以得到很好的分离。使用这一方法对18:1 FFA的各种异构体可以分离出10个单独的峰，此后使用这一方法分析了人头发、指甲等实际样品，因此建议使用离子液体毛细管色谱柱分析全脂肪酸或脂肪酸甲酯，这种固定相适合于脂质组学，得到更多脂质分子的种类信息。(刘虎威研究组，Anal Chem, 2014, 86, 161&minus 175) 2、室温离子液体作气相色谱固定相 　　室温离子液体，是指室温或接近室温时呈液态的离子化合物，一般由体积相对较大的有机阳离子(如烷基咪唑盐、烷基吡啶盐、烷基季铵盐、烷基季膦盐)和相对较小的无机或有机阴离子如六氟磷酸根([PF6]-)、四氟硼酸根([BF4]-)、硝酸根(NO3-)、三氟甲基磺酰亚胺([{CF3SO2}2N]-)等构成。离子液体，早期称作熔盐，在一战时期(1914)发现的第一个室温离子液体为乙基季胺硝酸盐。第一个使用熔盐作气相色谱固定相的是Barber(1959年)，他利用硬脂酸和二价金属离子的盐(锰、钴、镍、铜和锌盐)作气相色谱固定相，测定了烃类、酮类、醇类和胺类在156℃下的保留行为，具有特点的是用锰的硬脂酸熔盐作固定相可以很好地分离&alpha -甲基吡啶和&beta -甲基吡啶，而使用相阿皮松一类固定相则完全不能分离。1982年 Poole等研究了乙基季胺硝酸盐作气相色谱固定相的保留行为，发现这一固定相可在40-120℃范围内使用，是一种极性强于PEG20M 的具有静电力和氢键力的极性固定相，适于分离醇类和苯的单功能团取代衍生物，而胺类与固定相有强烈的作用，不能从色谱柱洗脱出来。就在这一年 Wilker 等报道了首例基于1-烷基-3-甲基咪唑为阳离子的室温离子液体,研究了它们的合成方法和在电化学中的应用。此后Armstrong等在1999年首先将六氟磷酸 1-丁基-3-甲基咪唑 ([BuMIm][PF6] ) 及相应的氯化物([BuMIm][Cl] )用作气相色谱固定相 ,通过分离烃类、芳香族化合物、醛、酰胺、醚、酮、醇、酚、胺及羧酸类化合物 ,发现离子液体固定相具有双重性质:当分离非极性物质或弱极性物质时表现为非极性或弱极性固定相 当分离含有酸性或碱性官能团的分子时 ,表现为强极性固定相,并测定了[BuMIm][PF6]和[BuMIm][Cl]色谱固定相的麦氏(McRynolds)常数。之后的几年里Armstrong等进行了一系列有关室温离子液体作气相色谱固定相的研究，奠定了室温离子液体固定相在实际中应用的基础。此后人们竞相研究室温离子液体用作气相色谱固定相的问题，最近两年由于Supelco公司承袭了Armstrong研究团队的研究成果，把室温离子液体固定相商品化，出现了几种性能优越的室温离子液体毛细管色谱柱,就促使许多研究者使用商品室温离子液体柱，分离一些复杂的难分离的混合物，因而也大大促进了离子液体气相色谱固定相的广泛使用。(傅若农，化学试剂，2013，35( 6)： 481 ～ 490) (1).室温离子液体气相色谱固定相的特点 　　室温离子液在许多领域得到了广泛的应用，如有机合成溶剂、催化剂用溶剂、基质辅助激光解析/电离质谱的液体基质、萃取溶剂、液相微萃取溶剂、毛细管电泳缓冲溶液添加剂等，此外它们在分析化学领域得样品制备、分离介质中也得到充分的应用，气相色谱固定相是应用最多的一个领域。所以能得到如此广泛的应用是因为它具有许多特殊的性能，联系到气相色谱固定相，它们非常适应毛细管色谱柱的多方面要求： (a) 蒸汽压低 　　气相色谱固定相在使用温度下具有很低的蒸汽压是必要条件，室温离子液体具有很低的蒸汽压，它们能很好地满足气相色谱固定相的这一要求，例如现在使用较多的1-丁基-3-甲基咪唑二(三氟甲基磺酰)亚胺([C4mim][NTf2])的蒸汽压见下表1,从表中数据看出在在不到180℃下蒸汽压不到1 mm Hg柱，这完全符合气相色谱固定相的要求。 表1 [C4mim][NTf2]在不同温度下的蒸汽压 温度/℃ 蒸汽压/P× 102 (Pa) 184.5 1.22（0.92 mmHg柱） 194.42.29（1.72 mmHg柱） 205.5 5.07 (3.8 mmHg柱） 214.4 8.74 (6.6 mmHg柱） 224.4 15.2 (11.4 mmHg柱） 234.4 27.4 (20.5 mmHg柱） 244.3 46.6 (35.0 mmHg柱） (b) 粘度高 　　室温离子液体的粘度高，适合于气相色谱固定相的要求，而且在较宽的温度范围内变化不大，因为粘度低会影响色谱柱的分离效率和寿命，因为气相色谱固定相在温度升高时趋向于降低粘度使液膜流动，造成膜厚改变，降低柱效，甚至液膜破裂降低柱寿命，室温离子液体的黏度比一般溶剂高很多，例如二乙基咪唑二(三氟甲基磺酰)亚胺在20℃的粘度为34cP,n-己基-3-甲基咪唑氯化物在25℃的粘度为18000 cP，所以离子液体的粘度一般比传统溶剂高1到3个数量级 。 (c) 湿润性好 　　要使毛细管色谱柱的柱效提高，就要把固定相涂渍成一层均匀、牢固的薄膜，这样固定相对毛细管壁要有很好的湿润性，室温离子液体正好具备这样的特性，它们的表面张力在 30 到 50 dyne/cm 之间，例如1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐，1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐，和1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐分别为44.81, 39.02, 和 35.16 dyne/cm，这样的表面张力正好可以让固定相溶液湿润并铺展在未经处理的石英毛细管内壁上 。 (d)热稳定性好 　　大家都知道色谱柱的保留性能稳定性和柱寿命都与固定相的热稳定性有关，室温离子液体气相色谱固定相的热稳定性自然是十分重要的关键性能，离子液体的热稳定性随其阴阳离子的不同有很大的差异，离子液体的阴离子具有低亲和性及共轭键时(如三氟磺酸基，三氟甲基磺酰亚胺阴离子)就有很高的热稳定性，反之具有亲和性强的阴离子(如卤素基)其热稳定性就不好，一般像二烷基咪唑类离子液体固定相在220&ndash 250℃之间稳定，具有长烷基链的季鏻基离子液体可以在335&ndash 405℃之间稳定，Anderson等研究了双阴离子咪唑和双吡咯烷鎓基离子液体的热稳定性。极性强的室温离子液体气相色谱固定相(比如商品名为SLB-IL 111)的热稳定性虽然比不上二甲基硅氧烷的好，但是要比强极性固定相(氰丙基聚硅氧烷)的热稳定性要好，可是它的极性要比后者高，因而在分离脂肪酸甲酯的能力要大大优于后者。从图1可以看出商品离子液体柱SLB-IL82的热稳定性大大优于一些常用的极性固定相。 图1 几种离子液体色谱柱和常规固定相色谱柱热稳定性的比较 (e) 极性高 　　固定相的极性是极为重要的关键指标，目前表示固定相极性的有Mcrynolds常数，和Abrham溶剂化参数，离子液体的极性也仍然使用这两种方法表示，McReynolds常数是于120℃下以10种典型化合物测定所研究固定相的保留指数差(△I) ，用五种典型化合物(苯、正丁醇、2-戊酮、硝基丙烷和吡啶)的保留指数差(△I)之和来表示固定液的极性。Abraham表征固定相的方法是使用多种具有特殊作用力的标样来表征固定相和溶质 n-电子对及&pi -电子对作用能力、与溶质的静电和诱导作用能力、与溶质的氢键碱性作用能力、与溶质的氢键酸性作用能力、与溶质的色散作用能力。表 2 是几种商品离子液体固定相的极性，从表中数据看出，室温离子液体的极性要比极性最强的TCEP(1,2,3-三(2-氰乙氧基)丙烷)还要高，这样在分离脂肪酸甲酯和石油样品分析中就有特殊的用途。 表 2 几种商品离子液体固定相的极性 商品色谱柱 组成 McRynolds 极性(P) 相对极性数(p.N.)* SLB-IL 111 1,5-二（2,3-二甲基咪唑）戊烷二（三氟甲基磺酰基）亚胺 5150 116 SLB-IL 100 1,9-二(3-乙烯基咪唑)壬烷二（三氟甲磺酰基）亚胺4437 100 TCEP 1,2,3-三（2-氰乙氧基）丙烷 4294 94 SLB-IL 82 1,12-二（2,3-二甲基咪唑）十二烷二（三氟甲基磺酰基）亚胺 3638 82 SLB-IL 76 三（三丙基鏻六氨基）三甲氨（三氟甲基磺酰基）亚胺 3379 76 SLB-IL 69 未知 3126 70 SLB-IL 65 未知 2834 64 SLB-IL 61 1,12-二（三丙基鏻）十二烷-（三氟甲基磺酰基）亚胺-三氟甲基磺酸盐 2705 61 SLB-IL 60 1,12-二（三丙基鏻）十二烷二（三氟甲基磺酰基）亚胺（柱表面去活） 2666 60 SLB-IL 59 1,12-二（三丙基鏻）十二烷二（三氟甲基磺酰基）亚胺 2624 59 SupelcoWax 100%聚乙二醇 2324 52 SPB-5MS 5%二苯基/95%二甲基）硅氧烷 251 6 Equity-1 100%聚二甲基硅氧烷 130 3 *相对极性数=(Px x 100)/ PSLB-IL 100= McRynolds 极性乘以100再除以SLB-IL 100的 McRynolds 极性 (McRynolds 极性指标是上世纪60年代中期研究建立的一种气相色谱固定相极性量度指标，近半个世纪一直在使用，W O McReynolds.J Chromatogr Sci,1970,8:685-691) 几种离子液体色谱柱的结构和性能见表3 表3：几种离子液体色谱柱的结构和性能 3、几种商品离子液体色谱柱在脂肪酸甲酯分离中应用举例，见表4 表4 离子液体色谱柱在脂肪酸甲酯分离中应用 1 SLB-IL111 奶油中的脂肪酸 使用200m 长的SLB-IL111色谱柱可以很好地分离奶油中的脂肪酸，包括顺反和位置异构体 1 2 SLB-IL 82 和 SLB-IL 100 水藻中的脂肪酸 这两种商品离子液体柱用于分离水藻中的脂肪酸，具有很好的选择性和低流失，可以得到详细的脂肪酸分布，这是一种分析各种脂肪酸的色谱柱。 一维：聚二甲基硅氧烷 二维：SLB-IL 82 和 SLB-IL 100 2 3 SLB-IL100 鱼的类脂中反式20碳烯酸顺反异构体的分析 用60m长色谱柱可把C20:13和C20:11异构体得到基线分离，分离因子1.02，分离度1,57 3 4 SLB-IL111 分离16碳烯酸顺反异构体和其他不饱和脂肪酸 如果不使用SLB-IL111柱就不可能发现岩芹酸（顺式-6-十八碳烯酸），可以把cis-8 18:1和cis-6 18:1基线分离。证明岩芹酸在人的头发、指甲和皮肤中是内源性脂肪酸。 4 5 SLB-IL111 分离脂肪酸顺反异构体 SLB-IL111 可以很好地分离cis-,trans-18:1和 cis/trans 共轭异构体脂肪酸 5 6 SLB-IL100 牛奶和牛油中的脂肪酸顺反异构体 使用全二维GC，把离子液体柱用作第一维色谱柱 一维：SLB-IL100 二维：SGE BPX50 (50% 苯基聚亚芳基硅氧烷 6 7 SLB-IL 100（快速柱） 生物柴油中的脂肪酸甲酯(C1-C28) SLB-IL100是极性很高的固定相，可以排除样品中的饱和烴的干扰，减少了样品处理难度，免去使用全二维GC。 7 8 SLB-IL100 分离C18:1, C18:2, 和 C18:3顺反异构体 SLB-IL100是极性很高的固定相，可以很好地分离不饱和脂肪酸顺反异构体，优于二丙氰聚硅氧烷色谱柱 8 9 SLB-IL111 SLB-IL100 SLB-IL82 SLB-IL76 SLB-IL61 SLB-IL60 SLB-IL59 评价7种商品离子液体固定相分离37种脂肪酸甲酯的分离性能 IL59, IL60, 和 IL61三种色谱柱性能近似，不能分离C18:1脂肪酸的顺/反异构体，所有的色谱柱度可以基线分离C18:2 顺/反, C18:3 n6/n3, 和 C20:3 n6/n3异构体，IL82柱以5℃/min程序升温，可以把实验的37种脂肪酸甲酯分离开 9 10 SLB-IL59 SLB-IL60 SLB-IL61 SLB-IL76 SLB-IL82 SLB-IL100 SLB-IL111 用7种商品离子液体固定相分离脂肪酸甲酯的及和异构体 除去IL60柱以外所有色谱柱上对饱和脂肪酸的洗脱温度，随它们的极性降低而增加，当固定相极性增加是它们的等价链长急剧增加。还研究了脂肪酸甲酯在这些色谱柱上Abraham 的保留能量线性关系 10 11 SLB-IL111 使用强极性离子液体色谱柱快速分离食用油中的反式脂肪酸 使用强极性薄液膜细内径离子液体毛细管柱（75 m × 0.18 mm i d , 0.18 &mu m）快速分离食用油(例如奶油)中的反式脂肪酸 11 12 SLB-IL111 使用强极性离子液体色谱柱分析食用油中顺反式硬脂酸 在120℃柱温下可以分离所有cis-C18:1位置异构体，把柱温提高到160℃可以分离反-6-C18:1 和 反-7-C18:1异构体 12 表中文献 1 Delmonte P， Fardin-Kia A R, Kramer J K G，et al, Evaluation of highly polar ionic liquid gas chromatographic column for the determination of the fatty acids in milk fat [J].J. Chromatogr.A,2012, 1233:137-146 2 Gua, Q , David F., Lynen F. et al., Evaluation of ionic liquid stationary phases for one dimensional gas chromatography&ndash mass spectrometry and comprehensive two dimensional gas chromatographic analyses of fatty acids in marine biota[J]. J. Chromatogr.A, 2011, 1218:3056-3063 3 Ando Y.Sasaki, GC separation of cis-eicosenoic acid positional isomers on an ionic liquid SLB-IL100 stationary phase[J]. J. Am. Chem. Oil Soc.,2011,88:743-748 4 Destaillats F.,Guitard M. Cruz-Hernandez C, Identification of _6-monounsaturated fatty acids in human hair and nail samples by gas-chromatography&ndash mass-spectrometry using ionic-liquid coated capillary column[J]. J.Chromatogr.A 2011,1218: 9384&ndash 9389 5 Delmonte P, Fardin Kia A-R, Kramerb J.K.G.et al, Separation characteristicsof fatty acid methyl esters using SLB-IL111, a new ionic liquid coated capillary gas chromatographic column[J]. J.Chromatogr.A, 2011,1218: 545&ndash 554 6 Villegas C.Zhao, Y.Curtis J M, Two methods for the separation of monounsaturated octadecenoic acid isomers [J].J. Chromatogr. A, 1217 (2010) 775&ndash 784 7Ragonesea C,Tranchidaa P. Q.,Sciarronea D.et al, Conventional and fast gas chromatography analysis of biodiesel blends using an ionic liquid stationary phase[J]. J. Chromatogr.A, 2009，1216：8992&ndash 8997 8 Ragonese C, Tranchida P Q, Dugo P，et al,Evaluation of use of a dicationic liquid stationary phase in the fast and Cconventional gas chromatographic analysis of health-Hazardous C18 Cis/Trans fatty acids[J]. Anal. Chem., 2009, 81:5561&ndash 5568 9 Dettmer K， Assessment of ionic liquid stationary phases for the GC analysis of fatty acid methyl esters，Anal Bioanal Chem ，2014， 406:4931&ndash 4939 10 Characterisation of capillary ionic liquid columns for gaschromatography&ndash mass spectrometry analysis of fatty acid methylestersAnnie Zeng X, Chin S , Nolvachai Y，et al, Anal Chim Acta , 2013 803:166&ndash 173 11 Inagaki S，Numata M， Fast GC Analysis of Fatty Acid Methyl Esters Using a Highly Polar Ionic Liquid Column and its Application for the Determination of Trans Fatty Acid Contents in Edible Oils，Chromatographia ， 2015，78:291&ndash 295 12 Yoshinaga K,Asanuma M,Mizobe H et al,Characterization of cis- and trans-octadecenoic acid positional isomers in edible fat and oil using gas chromatography&ndash flame ionisation detector equipped with highly polar ionic liquid capillary column, Food Chemistry , 2014 160:39&ndash 45 有关离子液体固定相在分离脂肪酸时的一些选择性和分离特点在下一讲叙述。

我们在使用液体闪烁计数系统的核计数中采用统计学方法，因为放射性核素衰变的本质是其可在任一时间释放β粒子（随机衰变）。虽然我们不能确定核衰变会在什么时候发生，但我们可使用统计学方法描述一个样品中所有核衰变的平均行为。为了应对放射性核素的随机衰变行为，我们采用了计数统计方法。统计可用来表示在某一限定的置信区间内得到给定计数的概率，一般使用 %2σ（%2s标准偏差）来表示。下面我们可通过对单一放射性样品计数十次来简单明了的说明液体闪烁计数中的统计学方法。该实验的数据列于表 1 中。我们可明显看到，任何一次计数的 CPM 结果都不相同（随机衰变）。我们怎样才能获得这 10 次计数的统计数据呢？如果我们进行基本统计，则这些数值的分布可表示为正态分布或高斯分布。表 1. 10次样品计数的统计分析这些数据可通过计算两个参数来描述：平均值和标准偏差。平均值 () 被定义为 CPM 的总和除以被计数样品的计数次数(i)，表示为。因此从表 1 来看，466148 CPM/10 = 46615，这就是平均值 CPM。接下来必须获得这 10 个样品计数的标准偏差。标准偏差可通过下面的公式获得：因此，该样品计数十次的计数结果表示为（平均值）46615±S.D. 或 46615±102 CPM。现在我们可以计算标准偏差，但 S.D. (±102 CPM) 对于核计数的真正意义是什么？我们可通过图 1 来清楚说明，图中显示了重叠在实际计数数据上的正态分布（高斯分布）（表 1）。计数数据以柱状图表示。图 1. 放射性样品计数十次的正态分布和计数数据正态分布曲线通过下面的公式计算得到：因此，发生在平均值的 +s 范围内的真实计数的概率是68%。68% 称为针对 s（标准偏差）的置信水平。由于核计数需要高于 68% 的置信水平，因此我们采用 2s 值，该值定义为 95.5% 的置信界限。那么，这些值可如何用于核计数中呢？根据基本统计方法，我们知道预期的标准偏差等于总计数数量的平方根。这是计数统计计算的主要公式。计数统计计算如上所述，标准偏差可按样品检测的总计数数量的平方根来计算。该结果的置信界限为 68%。但核计数使用 2s 值（95.5% 置信界限）。典型的计算如实例 2 所示。实例 2：如果在 1.0 分钟内进行了 9500 次计数，那么 2s 值等于多少？因此，在 95.5% 的置信界限内，计数的统计结果（实例 2）可表示为 9500±195 次计数。这一表达结果的方法相当笨拙（因为可能获得非常多的数字）。为更方便起见，我们计算了 %2s值。%2s 值可根据公式1或者公式 2（公式 1 的数学简化）计算得到。实例 2中数据的%2s 值显示在实例 3中。实例 3：样品计数的 %2s 计算因此，最终结果可表示为 9500 次计数 ± 2.05%，置信水平为 95.5%。计数率的统计分析因为大多数核计数方法是分析 CPM 值而不是样品的总计数，所以确定计数率的统计值很重要。以计数率为参考将如何影响计数的统计数据？如果现在对同一样品计数三分钟，则总计数数量增加了三倍。样品总体计数从 9500 次增加到 28500 次，这增加了测量的准确性。28500 次总计数的 2s 值 (338) 的百分比更小，由此可指示出准确度得到了提升。实例 4：计算计数率的 2s 值因此，最终结果可表示为 9500 ± 113 CPM。现在，我们已经计算了计数率的 2s 值，那么该如何计算 %2s（使用核计数仪分析样品时通常打印输出的值）？%2s可使用公式 3计算。实例 5：计数率为 9500 CPM、计数时间为 3 分钟的样品的 %2s 计算。因此，对样品计数三分钟与计数一分钟相比较，%2s 从2.05%（实例 3）降低至 1.18%（实例 5）。这一数值 (%2s) 与总计数和计数时间成反比。那么这些参数是如何在液体闪烁计数中使用的呢？在珀金埃尔默的 Tri-Carb & Quantulus 和 MicroBeta 仪器中，终止样品计数的方法通常有两种。第一种方法称为预设时间。在该方法中，系统在到达用户设定的计数时间后停止样品计数。第二种方法是基于特定 %2s 值终止计数，所有的样品计数都具有相同的统计精确度。我们可以通过公式 3和对样品的统计精确度来反向推导对样品计数所需要的时间。

近日，中国科学院重庆绿色智能技术研究院太赫兹技术研究中心汤明杰等发明的“用于太赫兹光谱连续检测的液体样品池装置”获得国家发明专利授权(专利号ZL201310697401.2)。　　该发明提供一种适用于太赫兹光谱连续检测的低吸收液体样品池装置。目前，国内外市场还没有成熟的、廉价的太赫兹液体样品池出售，唯一见诸报道的bruker公司生产的主要用于红外光谱检测的液体样品池A145价格不菲，且由于是石英窗口吸收性相对偏高，并需要逐个更换样品，无法满足多个样品的连续测量。　　该发明以物理注塑法成型的COP塑料为原料，构建液体样品池具有低太赫兹吸收、低折射率、高透光率和可旋转换样、连续测量的优良性质，其吸收系数低于1cm?1，折射率1.5左右，透光率达到90%以上，优于现有的石英、聚乙烯等材料制备的用于太赫兹光谱检测的液体样品池。用于太赫兹光谱连续检测的液体样品池装置立体图

“同信天博液体样品处理平台”走近用户之——山西省农业科学院山西省农业科学院是山西省公益型科研事业单位的重点单位，其中山西省农业科学院农业环境与资源研究所成立于1959年，其前身为山西省农业科学院土壤肥料研究所（下文简称“山西省土肥所”）是农业科学院的重点研究所，对推动山西省现代农业发展起到了重要作用，为全省特色现代农业转型跨越发展提供了强有力的科技支撑。 山西省土肥所于2017年采购了一台我公司北京同信天博科技发展有限公司生产的ALSP-02无机型“全自动液体样品处理平台”，2018年5月17日我公司再次来到实验室进行回访与交流。 仪器实际使用者续老师说：“作为自动化的液体前处理设备，首先从配液精度上为准确的实验结果提供了有力的保证，其次在操作方面，计算机软件操作代替了人工计算的过程和移液的过程，可以更省心、省力。”根据《ICP-MS法测定土壤中有效钼不确定度的研究》文献要求，需将钼（Mo)国家标准溶液GBW(E）080218（浓度为100μg/ml）用水逐级稀释成钼校准标准系列溶液，使钼的浓度分别为0、1.00、5.00、10.00、50.00、100.00μg/L，续老师直接在液体样品处理平台上选择单标配制功能，输入原浓度和需要的6个点的目标浓度和定容体积，仪器即可自行运作无需人工再参与。将仪器配制好的标准溶液进样到PE的ICP-MS，得出的结果如下图，标准曲线的相关系数为0.999150，完全满足实验需求。 续老师又根据国标“NY/T 890-2004 《土壤有效态锌、锰、铁、铜含量的测定二乙三胺五乙酸（DTPA）浸提法》7.3，利用ALSP-02液体样品处理平台制作出锌、锰、铁、铜的混标标准曲线，进样到安捷伦的原子吸收分光光度计中，得数据结果如下图，Zn、Mn、Fe、Cu的标准曲线系数分别为1.0000、1.0000、1.0000、0.9997,准确性和重复性都相当高，完全满足实验需求。北京同信天博科技发展有限公司创建于2009年，是从事技术研发、企业生产、销售及售后服务一条龙的高科技企业。公司于2012年底正式推出了自主研发的ALSP系列全自动液体样品处理平台，并获得了国家专利，是一种操作简便、处理液体精准、易学易用的自动化前处理仪器，能够完成常规样品预处理工作，如智能梯度稀释、定容、试剂添加、液体转移分配、辅助滴定等等。公司始终坚持“科技创新品牌，品牌服务用户”的宗旨，提高自主创新能力，更好的为客户提供全面且又稳定可靠的实验室自动化解决方案。

睿科全新推出AP 300全自动液体样品处理工作站，可将实验人员从繁琐的样液配制过程中解放出来，保护实验人员身心健康。同时仪器可覆盖样液登记录入、样液配制和实验数据记录等功能，为客户提供液体样品处理全方位体验。全新亮点更严谨多级清洗 新增吹干功能更高效双Z轴取样针 适配多种应用更精准三量程注射器协同配合更便捷增加快速振荡摇匀功能产品特点1►高精度高精度注射器实现微量样液转移，配制稀释范围高达10000倍2►双模式枪头+加液针模式及穿刺针模组两种模式可供选择3►多功能可实现标准曲线配制、混标配制、固标配制等复杂流程4► 样品架样品架具有帕尔贴制冷与加热功能，集成振荡混匀功能，兼容性强性能可靠丨 智能便捷丨 安全健康应用范围：可应用于各种检测项目的标准曲线配制

p 　由“国产科学仪器腾飞行动”项目组联合 a title=" " href=" http://www.yph.cn" target=" _blank" 仪品汇电商平台 /a 举办的大规模“好仪器”免费试用活动自2016年11月启动以来受到了众多国产厂商和仪器用户的关注，至活动截止共收到400余份用户的免费试用申请，最终成功进行“好仪器”免费试用的用户共40位。 /p p 　　在本次活动中，参与免费试用的仪器均为“第二届国产好仪器”入选产品，由12家国产科学仪器厂商倾情提供，总价值高达276万元。 /p p 　　值此活动结束之际，项目组特地整理了“好仪器”免费试用用户所提交的试用报告，将最真实的仪器用户反馈一一展现出来，为广大用户选购真正“好用、耐用”的国产好仪器提供参考。 /p p strong 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 试用仪器： a href=" http://www.instrument.com.cn/netshow/C223671.htm" target=" _blank" title=" " 北京同信天博ALSP-01全自动液体样品处理平台 /a /span /strong /p p style=" text-align: center " a href=" http://www.instrument.com.cn/netshow/C223671.htm" target=" _blank" title=" " strong img title=" ae992dbe-b942-4775-b8f7-05ab7d983eeb.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201703/noimg/ca96bb68-f602-4866-8ca1-5117ed0fd4a7.jpg" / /strong /a /p p strong 　　用户单位：山东嘉源检测技术有限公司 /strong /p p strong 　　仪器用途：镁标准贮备液的配制、铅标准贮备液的配制 /strong /p p strong 　　试用反馈： /strong 通过该仪器使用，绘制出金属镁、铅的标准曲线R值均达到0.999以上。这款仪器外观精简，操作简单，功能齐全；自动化程度高，在配制出的标准曲线和溶液的稀释方面比较精准；所配套软件使用起来也比较简单明确，且远程操作仪器可以使仪器管理轻松简便。同时，平台工作区域采用一体式透明设计，防止化学物质的飞溅或挥发对操作人员带来伤害。然而，该液体样品处理平台每次配制的溶液体积较小，由于使用溶液比较频繁，需要多次配制，较消耗时间。希望仪器公司能够在原有优点上继续改进，让该液体样品处理平台应用更为广泛。 /p p style=" text-align: center " a title=" " href=" http://www.instrument.com.cn/activity/goodcn/gchyq/Experpoint?id=782" target=" _blank" img title=" 600_300_20160411_goodcn.gif" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201703/insimg/6483c646-e426-4e64-8154-f066bf38e15f.jpg" / /a /p

报告摘要　　液体活检临床意义大，市场空间广阔　　检测血液中的CTC和ctDNA对患者肿瘤进行诊断与监测的方法称为液体活检。该技术能够解决临床取样的难点，满足对患者高频监测的需求，并具有相比于穿刺活检成本低的优点。因此研发进展迅速。未来有望应用在肿瘤早期筛查、肿瘤患者动态监测、以及个性化用药指导等领域，市场前景广阔。　　液体活检海外进展迅速　　液体活检CTC技术相对成熟。一代CTC技术在2004年获得FDA批准用于临床，是行业的金标准。为了解决一代CTC技术灵敏度不高且无法对肿瘤细胞进行基因测序分析等缺点，二代CTC及ctDNA技术在海外蓬勃发展。目前二代液体活检技术还有有待成熟且没有统一的标准，我们认为获得CLIA Lab认证的公司有望凭借先发优势快速成长。　　液体活检市场潜力大　　JP摩根和高盛预测液体活检在全球及美国的市场潜力将分别达到230亿美元和140亿美元，该市场需要5-15年才能完全成熟。我们认为液体活检针对存量肿瘤患者检测将早于肿瘤早筛落地。为此，在同时考虑我国肿瘤发病率、液体活检适应症、未来市场渗透率、未来检测单价、以及患者年平均检测次数等因素后，我们预测液体活检5-10年内在我国市场潜力约为200亿元。　　具有技术及先发优势的企业值得关注，推荐丽珠集团与益善生物　　液体活检符合临床技术发展趋势，市场潜力大，是一片有待开发的蓝海。技术相对成熟的公司有望凭借先发优势与国内大型二三级医院和肿瘤医院建立合作关系并获取患者数据，从而走向强者恒强。在此，我们看好参股CYNVENIO获得海外最新液体活检技术的丽珠集团(000513)以及国内拥有液态活检自主知识产权的领先企业益善生物(430620)。　　催化剂及风险提示　　催化剂为液体活检技术逐渐成熟，被海内外监管机构认可或者医保覆盖 风险在于研发进展不达预期。　　液体活检介绍及临床意义　　肿瘤患者血液中存在少量循环肿瘤细胞以及由坏死癌细胞释放的少量循环肿瘤DNA。通过检测血液中的CTC和ctDNA对患者肿瘤进行诊断与监测的方法被称为液体活检。在临床实践中，获得肿瘤患者组织样本只有手术活检和穿刺活检两种。相比于传统的活检方法，液体活检具有副作用小、操作简单、能重复取样等有点。美国著名的肿瘤中心纪念斯隆-凯特林癌症中心(Memorial Sloan Kettering Cancer Center)主任医师兼首席医疗官约瑟?巴塞戈(Jose Baselga)称：“这(液体活检)可能永久改变活检方式，包括对治疗方案的响应、抗药性的出现，将来甚至还能用于早期诊断。”MIT Technology Review杂志将”液体活检“列为2015年度十大突破技术。美国《临床癌症进展(Clinical Cancer Advance)》报告中也认为液体活检技术在今后十年有望得到广泛应用。我们提示投资者关注该领域的进展，未来市场空间广阔。　　循环肿瘤细胞与循环肿瘤DNA　　循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTCs)是指自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞, 是恶性肿瘤患者出现术后复发和远处转移的重要原因，也是导至肿瘤患者死亡的重要因素。通过监测CTC类型和数量变化可以实时评估肿瘤动态与治疗效果，有望实现个体化精准用药。　　循环肿瘤DNA(ctDNA，Circulating Tumor DNA)是人体血液系统中带有的来自肿瘤基因组的DNA片段。主要来源为坏死的肿瘤细胞、凋亡的肿瘤细胞、循环肿瘤细胞、肿瘤细胞分泌的外排体。这些肿瘤DNA往往含有肿瘤基因组所特有的基因突变，因此也可以被用对患者肿瘤动态及治疗效果的评估，有助于医生制订精准医疗方案。　　液体活检技术迅速崛起　　基础科研领域，CTC及ctDNA技术日益受到重视。临床研究领域，CTC与ctDNA也是一大热点。目前全球与CTC和ctDNA相关的临床实验已经分别达到747和例。综合以上数据，液体活检技术正在迅速崛起。　　液体活检的临床意义　　液体活检可以解决临床取样的难点　　对肿瘤组织取样并进行基因分析是精准治疗的基础。临床上获取患者肿瘤组织样本只有手术活检及穿刺活检两种方法。转移期肿瘤患者体内可能有多个肿瘤病灶，具体到从哪个病灶获取肿瘤组织样本是一大问题。　　临床研究表明，患者体内肿瘤细胞呈现很强的异质性，即肿瘤患者体内存在多种肿瘤细胞，不同肿瘤细胞的基因型不同，往往需要采用不同的治疗方案。在临床诊断上，获取患者体内肿瘤细胞的综合信息是精准医疗的基础。以上图为例，假设肾癌患者体内有3个肿瘤病灶(1为原发位点，2、3为肺转移位点)，不同位点之间的肿瘤细胞基因型是不同的。无论穿刺活检获得哪个病灶的肿瘤组织，所得到的信息都是片面的。但是每个病灶的肿瘤细胞或者肿瘤DNA都可能进入血液循环，通过液体活检收集CTC或者ctDNA能够获得患者体内肿瘤基因或者蛋白表达的全面信息，能够更加精准的指导个性化用药。　　液体活检可以实现对患者的早期诊断及高频监测　　肿瘤细胞在药物作用下会自我进化从而产生抗药性。肿瘤细胞的基因变化是导至抗药性的根本原因，临床上需要对患者体内肿瘤基因变化进行高频监测才能做到及时准确用药。手术和穿刺活检一年内最多只能做2-3次，尤其是重症患者往往还不能进行手术或者穿刺。因此现有的临床采样技术不能满足高频检测的需求。但CTC和ctDNA通过简单的静脉抽血即可获得患者体内肿瘤细胞及DNA的信息，可以有效的满足高频监测的需求。　　上图表示的是非小细胞肺癌(NSCLC)的诊疗流程。在标准诊疗流程中，医生会在手术及药物治疗前通过穿刺活检对患者肿瘤诊断与分型，在药物治疗之间依靠CT、MRI等影像学检测来判断患者是否应答。但是穿刺活检在检测频次上有较大的局限性，影像学检测判断药物有效性有较强的滞后性。液体活检有望改变未来的诊疗流程，通过不断的高频监测随时发现患者体内肿瘤的变化，提高医生用药的精准度。　　液体活检可以减低医疗成本　　根据美国Medicare对肺癌穿刺活检开支分析，普通穿刺的开支为$8,869。约20%的穿刺活检会导至并发症，穿刺活检与并发症治疗的开支将达到$37,745。对医疗保险来说，平均每次穿刺活检的成本为$14,634。但一代CTC技术Medicare报销额度为$369。，二代CTC与ctDNA技术开支约在$800-1000。由于是抽血检测，一般不会产生并发症。从成本的角度，医疗保险有较大的动力推动液体活检的CTC与ctDNA技术对穿刺活检技术的替代。　　液态活检海外的发展现状　　液态活检包含了CTC与ctDNA技术，其中CTC相对于ctDNA研究更深入，临床产品更成熟。　　CTC技术的发展历程及现状　　在1896年，澳大利亚学者Ashworth在一例转移性肿瘤患者血液中首次观察到从实体肿瘤中脱离并进入血液循环的肿瘤细胞，并率先提出了CTCs的概念。不过长时间以来CTCs的检测并未在肿瘤病人的防治中发挥应有的作用,主要原因就是检测技术未取得突破性进展。从上世纪末以来CTCs检测技术得到了不断的改进，随之带来的是CTCs检测在临床的应用。　　第一代CTC技术：CellSearch的发展历程　　第一代CTC技术采用的是磁珠捕获法。能够捕获CTC的磁珠早在1983被Immunicon公司发明。其后Immunicon不断完善该技术并发展出了特定CTC染色技术。公司在1993-2003年完成一系列的临床实验后，其CTC检测系统Cellsearch于2004年获得美国FDA批准用于转移性结直肠癌、乳腺癌和前列腺癌临床检测。强生(Johnson&Johnson)下属子公司Veridex在2008年收购了Immunicon的CTC业务，并将其发展至今。CellSearch系统是美国FDA批准的唯一临床用的CTC检测系统。该系统于2012年获得我国CFDA进口器械注册，从而成为国内唯一用于临床的CTC检测系统。由于其在临床使用的唯一性，Cellsearch系统是目前CTC检测的金标准。　　CellSearch系统简介及基本性能　　Cellsearch系统是由特制具有细胞保存功能的真空采血管(Proprietary CellSave Preservative Tubes)、CTC检测试剂盒(CELLSEARCH Circulating Tumor Cell Kit)、自动样品处理系统(Automated CELLTRACKS AUTOPREP System)、数据读取分析系统(CELLTRACKS ANALYZER II System)组成。其中样品处理系统与CTC检测试剂盒必须联用，属于封闭系统。　　在临床检测中，标准操作是抽取患者7.5mL血液，通过Cellsearch系统检测其中含有的CTC数量。临床数据表明，正常人和良性疾病患者CTC含量极少，而转移期患者根据其病情严重程度不同在血液中分布含有不同数量的CTC。通过检测CTC的数量能够帮助医院判断患者的病情严重程度，并为此制订合适的治疗方案。　　CTC临床应用　　CTC是一个良好的肿瘤预后标志物。肿瘤预后标志物是指能够帮助医生揭示患者未来复发风险或者死亡风险的检测指标。以FDA批准的CellSearch检测转移性乳腺癌患者为例，临床实验数据表明7.5mL血中CTC数量大于等于5(阳性)的患者其5年生存率大幅低于CTC数量小于5(阴性)的患者。医生一般对阳性患者采用更加激进的治疗方案。　　此外，CTC还是一个良好的药物敏感性标志物。若CTC阳性患者经过药物治疗后转为阴性，则证明该药物对患者有效，不然医生则考虑采用其他的治疗方案。反之，若CTC阴性患者在治疗过程转为阳性，则证明患者肿瘤已经产生了抗药性，医生需要及时的更换药物，以达到精准医疗的目的。　　虽然CellSearch系统在临床上有广泛的应用，并且被美国国家医保Medicare所认可。但该系统只是属于第一代的CTC技术，其缺点在于：1. 检测的灵敏度不够高。部分癌症转移期患者，由于其血液中CTC含量过低，或者其CTC本身发生变化而不能被CellSearch系统所捕获，因此该检测存在假阴性率较高的问题。2. 无法对CTC深入分析。CellSearch系统只能对捕获并标志CTC的数量，而不能对CTC进行包括基因测序、蛋白表达、药物敏感性检测等更细致的分析。针对以上缺点，新一代的液体活检技术在美国不断的发展。　　第二代CTC检测技术前沿　　为了提高CTC检测的灵敏度和发展对捕获CTC细胞进行后续分析的能力，在研的二代CTC检测采用了多种技术路线。由于这个领域尚处于新兴阶段，新的技术和新的公司层出不穷，下表进行了简要的概括。　　与一代技术不同的是，二代CTC无论从技术还是市场方面均处于早期阶段。技术方面尚没有统一的标准，许多公司采用不同的技术路线实现对CTC的捕获。目前还很难判断哪一种技术路线将成为行业标准。我们认为获得CLIA Laboratory认证的公司技术相对成熟。CLIA认证使得公司能够更早切入临床诊断市场对教育医生并积累患者数据，这类公司有望凭借先发优势快速成长。　　ctDNA技术的发展历程及现状　　1948年首次在人体血液中发现存在ctDNA。癌症患者的ctDNA则发现于1977年。1994年发现肿瘤患者的ctDNA与其体内肿瘤细胞基因突变类似。直到2000年以后，分子生物学与基因测序技术的发展使得ctDNA的突变检测技术不断成熟，相关研究也越来越多。　　ctDNA相比于CTC是一项更加早期的技术，暂时还没有FDA认证的成熟产品。大部分研究还处于科研领域。　　从当前研究角度将，ctDNA在临床应用潜力非常广泛，主要涉及到肿瘤早期筛查、肿瘤动态监测、耐药基因突变检测、评估肿瘤异质性及复发风险等作用。从已有的临床实验来看，ctDNA的检测平台一般为二代基因测序与数字化PCR，适应症集中在非小细胞肺癌、乳腺癌、结直肠癌、皮肤癌等常见肿瘤。　　若比较CTC与ctDNA技术，我们认为他们都属于“液体活检”的范畴，其共同点为灵敏度高、可高频次监测肿瘤发生发展及耐药突变、成本低、适用于大多数肿瘤等。不同点为CTC检测的是肿瘤细胞，而ctDNA检测是肿瘤DNA的片段。细胞能提供比DNA片段更多的信息，例如肿瘤相关蛋白的表达量、染色体变异水平，肿瘤基因突变等，而ctDNA只能提供肿瘤基因变异的信息。CTC与ctDNA的发生机理可能不同，CTC为转移的肿瘤细胞，其基因型可能与肿瘤转移组织更类似。ctDNA同时来自于原发肿瘤细胞与转移肿瘤细胞的衰亡，其基因型可能介于两者之间。从临床角度，同时检测CTC和ctDNA所得到的信息可能是互补的。从技术角度，CTC从患者血样的Buffycoat中提取，ctDNA从血浆中提取，同时检测CTC与ctDNA技术上不存在难度。两种液态活检技术共存可能是未来的发展方向。　　液体活检市场容量分析　　海外市场规模预测　　海外对液体活检的市场前景较为看好。J.P摩根将液体活检分为早期筛查、诊断分型、药物伴随检测、患者病情检测4个细分领域，全球市场潜力预计为230亿美元。高盛也将液体活检应用分为4个领域，预计其在美国的市场潜力达到140亿美元。从时点上，我们与海外机构一致，认为该技术还处于早期阶段。技术成熟到最终实现其市场潜力还需要5-15年时间。其中针对存量患者的肿瘤诊断分型、药物伴随检测以及病情监测相对成熟，技术有望在5-10年内大规模推广 针对健康人群的肿瘤早期筛查技术还有待完善，该市场可能在10-15年后成熟。　　国内市场规模预测　　我们综合考虑以下几个因素来估算液体活检在国内的市场容量：　　1.由于针对存量患者的液体活检技术相对成熟，我们暂时只考虑该技术对存量肿瘤患者的应用。根据国家癌症中心发布的数据，我国5年内诊断为癌症且仍存活的病例数约为749万。　　2.液体活检临床实验的适应症广泛，如前所述乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胃癌、食管癌等常见肿瘤均可用液体活检技术进行诊断与监测。在我国存量肿瘤患者中，适合使用液体活检技术的肿瘤病人至少为542万人，占比达到72%。我们保守预计液体活检的目标患者人数为500万人。　　3.由于我国地域广阔，区域间的医疗水平差异很大。而且医保经费紧张，短期内是不太可能覆盖这种新的检测技术。因此，我们保守预计该技术在未来5-10年的市场渗透率为50%。　　4.目前一代CTC系统CellSearch在医院终端每个CTC检测价格为4000-5000元。随着未来越来越多二代CTC与ctDNA技术的介入，检测的终端价格有望降为2000元。　　5.CTC与ctDNA不仅仅是诊断与预后检测，同时也能对肿瘤变化及耐药突变进行动态监测。我们假设每个患者一年平均进行4次检测。　　综上，我们预计我国液态活检的市场容量为500万(目标患者)*50%(渗透率)*2000(终端价格)*4(年检测次数)= 200 亿元。　　液体活检市场的催化剂及潜在风险　　监管机构与医保的认可是股价的催化剂　　液体活检技术在海外迅速发展。一方面，直接参与的新兴小公司众多。显示出创业者及背后的风险资本对该领域的看好。其中技术领先的公司如Cynvenio、Biocept、Adaptive Biotechnologies等已经获得了美国FDA第三方诊断实验室的认可，显示出监管机构对液体活检技术临床价值的认可。另一方面，基因测序龙头公司如Illumina、Life Tech、Foundation Medicine等纷纷通过战略合作或者自主研发等方式进入液态活检技术领域。海外公司的市场行为显示液态活检将是较为明确的技术发展趋势。掌握了高效CTC及ctDNA技术的公司将在市场竞争中占据优势。　　众多VC资本与产业资本进入液体活检将促使技术与市场的成熟。过程中重要的里程碑是监管机构的认可和医保的覆盖。这将快速提升液体活检的市场渗透率及投资者的关注程度，从而成为股价上行的催化剂。　　风险来自于研发进度不达预期　　从风险角度，液态活检短期内还是一个技术推动的领域。技术进展或者研发不达预期是主要的市场风险。但考虑液态活检是未来肿瘤样本捕获的技术发展方向，该领域的长期风险是可控的。　　相关标的介绍　　丽珠集团(000513)：参股CYNVENIO获得海外先进技术　　公司参与美国CYNVENIO B轮融资，获得其18.03%股权，并将在国内推广CYNVENIO的CTC技术。CYNVENIO公司成立于2008年，专门从事肿瘤液体活检技术的研发和市场推广。其技术能够同时检测CTC和ctDNA，并且诊断实验室已经获得CLIA认证，在美国开发液态活检技术的公司里面处于领先地位。目前国内二代CTC技术还属于市场空白领域，公司凭借海外技术在我国推广精准检测具有很强的先发优势。在药品销售领域，公司NGF、亮丙瑞林、艾普拉唑三个新产品随着全国招标结束将进入放量周期。高管股权激励已经对未来三年业绩作出明确要求，业绩目标落地的确定性较高。我们认为公司在单抗药物以及精准医疗领域都具有良好的布局，值得投资者关注。　　益善生物(430620)：国内拥有液态活检自主知识产权领先企业　　公司致力于灵敏特异、操作简便的个体化医疗靶标检测试剂的研发及产业化。历时六年独立研发了拥有完全核心自主知识产权的CanPatrol CTC检测技术，能够实时监测CTC 型别和数量的变化指导肿瘤个性化用药。公司目前在广州和北京拥有具备医疗机构执业许可证资质的检验所，同时上海与成都医学检验所分别处于资质验收及筹建阶段。近期公司拟定向增发募集1.7亿元用于CTC产品的研发及市场推广。我们认为益善在国内液态活检领域具有很强的先发优势，有望快速与众多知名医院和肿瘤专科医院建立合作关系推广肿瘤液体活检技术，市场前景看好。

操作简便、测量准确手持液体密度计的原理非常简单，利用U型管振荡原理，通过测量样品的共振频率来测定各种液体样品的密度。其操作简便、测量准确等特点，为用户提供了全新的测量体验。耐腐蚀性能升级，方便清洗液体样品接触区域采用石英玻璃和PTFE（聚四氟乙烯）材质，大幅增加了设备的耐腐蚀性能。手持液体密度计设计了快速拆卸泵体的结构，使设备清洗和泵体更换变得更加方便，延长了设备的使用寿命。人性化设计，单手操作仪器采用2.4寸彩色高清显示器，结合人体工程学握持结构，使单手操作变得更加轻松。无论何时何地，您都能方便地进行测量操作，提高了使用的便捷性。数据存储与导出，智能管理手持液体密度计内置大容量存储器，能够轻松存储千条以上历史数据。通过USB接口，您可以将数据导入到U盘或电脑中，实现数据的智能管理。同时，连接蓝牙打印机，即可实现对测量结果的无线打印，方便实验室工作。扫码和NFC功能，信息录入更便捷仪器配备了扫码和NFC功能，可以快速准确录入样品ID信息。通过扫码或NFC，避免了手工录入可能带来的错误，提高了样品信息的准确性和录入效率。手持液体密度计，让测量更轻松、更智能。为不同行业提供了一体化的密度测量解决方案，助力产品质量控制和工艺优化。

2月14日，在2016美国科学促进会年会上(AAAS) ，易活生物CEO廖玮、易活生物首席科学家David Wong宣布，借助公司开发的基因测序技术，只需少量体液就能迅速检测出是否患有癌症。　　这一方法的原理是，通过一种高灵敏的手段捕获游离于血液或其他体液(如唾液)中的肿瘤碎片，进而检测其是否发生肿瘤突变，以提早发现癌症。　　廖玮向21世纪经济报道记者介绍，与传统的肿瘤检测方式相比，这种被称为液态活检方法，只需体外无创抽血即可检测全身肿瘤，从而规避了传统方式需要手术、穿刺取样的局限性。与此同时，液态活检还可缩短检测时间并降低检测成本。　　诸多国际医药巨头和风险投资者早已瞄准了这一炙手可热的领域，如强生下属子公司Veridex收购Immunicon的CTC(循环肿瘤细胞)业务、罗氏收购德国肿瘤转化和基因组学公司Signature Diagnostics。　　中国液体活检市场亦悄然成型，据21世纪经济报道记者不完全统计，中国目前有47家公司在从事肿瘤液体活检，其中，26家公司选择ctDNA(循环肿瘤DNA)路线，9家公司选择CTC，代表性企业包括华大基因、药明康德、燃石生物、普世华康等。　　JP摩根和高盛预测，液体活检在全球及美国的市场潜力将分别达到230亿美元和140亿美元，但这一市场需要5-15年才能完全成熟。国信证券认为，液体活检将早于肿瘤早筛落地，为此，在同时考虑我国肿瘤发病率、液体活检适应症、未来市场渗透率、未来检测单价以及患者年平均检测次数等因素后，预测中国液体活检市场在5-10年内的市场潜力约为200亿元。　　但由于液体活检的准确性、价格、消费者接受程度以及国家审批等因素，新兴技术代替传统方法仍需时日。　　液体活检迅速崛起　　少量体液、迅速检测、价格低廉，易活生物希望借此可以颠覆癌症检测方式。　　廖玮告诉21世纪经济报道记者：“目前，检测试剂盒已经开发完成，并通过台湾成功医院60例、四川华西医院50例和北京肿瘤医院150例临床样品的试验，与组织样本的符合率超过95%。”不过，临床实验目前仅针对非小细胞肺癌患者。　　价格低廉也是该技术的一项重要突破，廖玮介绍，实现自主生产后，每次检测成本价在100-200元。远低于目前的市场价格。　　美国著名的肿瘤中心纪念斯隆-凯特林癌症中心主任医师兼首席医疗官约瑟巴塞戈称：“液体活检可能永久改变活检方式，包括对治疗方案的响应、抗药性的出现，将来甚至还能用于早期诊断。”　　随着基因等新技术的成熟，以及检测成本的迅速下降，以癌症检测、治疗为突破口的精准医疗日渐火热。　　2015年1月20日，美国总统奥巴马在国情咨文演讲中宣布了精准医疗计划，并从2016年财政预算中为精准医疗项目划拨2.15亿美元经费，其中，肿瘤治疗被选择成为精准医疗计划的短期目标。而在2015年2月8日白宫官网发布的相关细节中，肿瘤治疗计划的四大举措之一就是：美国将使用“液态活检”血浆开发新方法来评估治疗反应以及抵抗可能的耐药性。　　不久前，中国科学院也启动“中国人群精准医学研究计划”，研究包括全基因组序列分析、建立基因组健康档案及针对重要慢性病的遗传信号开展预警研究等。业内人士认为，在基因组学及生物大分子技术日渐成熟的助推下，“精准医学”模式将使肿瘤治疗进入一个新时代。　　一位多年从事基因研究的业内人士向21世纪经济报道记者指出，液体活检通过检测血液或其他体液中的肿瘤碎片(如CTC和ctDNA)，对患者肿瘤进行诊断与监测，其优势在于非介入性、可重复性地抽取肿瘤样本，从而可以建立基因表达谱，靶向突变用药，快速判断治疗效果，并可随肿瘤的发展进而调整治疗方案。　　据了解，液体活检CTC技术相对成熟。一代CTC技术在2004年获得FDA批准用于临床，是行业的金标准。为了解决一代CTC技术灵敏度不高且无法对肿瘤细胞进行基因测序分析等缺点，二代CTC及ctDNA技术在海外蓬勃发展，目前二代液体活检技术还有待成熟且没有统一的标准。　　廖玮指出，相比于传统的活检方法，液体活检具有副作用小、操作简单、成本更低的优势。　　以成本为例，根据美国Medicare对肺癌穿刺活检开支的分析，普通穿刺开支为8869美元，约20%的穿刺活检会导致并发症，穿刺活检与并发症治疗的开支将达到37745美元。对医疗保险来说，平均每次穿刺活检的成本为14634美元。但一代CTC技术Medicare报销额度为369美元。二代CTC与ctDNA技术开支约在800-1000美元。由于是抽血检测，一般不会产生并发症。从成本的角度，医疗保险有较大的动力推动液体活检的CTC与ctDNA技术对穿刺活检技术的替代。　　200亿市场潜力　　JP摩根将液体活检分为早期筛查、诊断分型、药物伴随检测、患者病情检测4个细分领域，预计全球市场潜力为230亿美元 高盛也将液体活检应用分为4个领域，预计其在美国的市场潜力可达到140亿美元，并预测该市场需要5-15年才能完全成熟。　　国信证券测算，中国液体活检的市场潜力约为200亿元。其测算依据考量目标患者、渗透率、终端价格和年检测次数。　　“由于我国地域广阔，区域间的医疗水平差异很大，而且医保经费紧张，短期内是不太可能覆盖这种新的检测技术，保守预计该技术在未来5-10年的市场渗透率为50%。”　　据了解，目前一代CTC系统CellSearch在医院终端每个CTC检测价格为4000-5000元。随着未来越来越多二代CTC与ctDNA技术的介入，检测的终端价格有望降为2000元。　　根据国家癌症中心发布的数据，我国5年内诊断为癌症且仍存活的病例数约为749万。液体活检临床实验的适应症广泛，如乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胃癌、食管癌等常见肿瘤均可用液体活检技术进行诊断与监测。在我国存量肿瘤患者中，适合使用液体活检技术的肿瘤病人至少为542万人，占比达到72%。国信证券预计液体活检的目标患者人数为500万人。　　“假设每个患者一年平均进行4次检测。因此，预计我国液态活检的市场容量为500万(目标患者)×50%(渗透率)×2000(终端价格)×4(年检测次数)=200亿元。”国信证券研报指出。　　中国液体活检市场也在近两三年内悄然成型。　　据21世纪经济报道记者不完全统计(部分企业保密无法统计)，中国目前约有47家公司从事肿瘤液体活检，其中，26家公司选择ctDNA(循环肿瘤DNA)路线，9家公司选择CTC，代表性企业包括华大基因、药明康德、燃石生物、普世华康等。　　以普世华康为例，其称为premid的技术，通过检测基因突变点位和游离于血液中的肿瘤DNA碎片(ctDNA)实现诊断。普世华康总裁王弢告诉21世纪经济报道记者：“检测可以帮助消费者提前3-5年发现癌症的踪迹。”　　除了超早期预警癌症外，Premid也可评估治疗效果及复发监控，据悉，普世华康监控癌症复发的产品共有三个，分别为突变复查及定量分析、肿瘤复发监控(首次、复查)。普世华康提供给记者的产品目录显示，目前总计可检测18种常见肿瘤、49个肿瘤基因和298个突变点位，以及肿瘤的复后监控。　　仍需市场考验　　由于液体活检的准确性、价格、消费者接受程度以及国家审批等因素，新兴技术代替传统方法仍需时日。　　从技术角度看与传统的检测方法相比，液体活检的难度更高。如肿瘤碎片在患者的血液中的含量极低，大约每100万个血细胞(约1ml血液)中才混杂着1个肿瘤细胞。因此从血液中捕获CTCs的技术难度极高。　　此外，出于中国人群数据的缺乏，检测的准确性一直难尽人意。以某公司检测为例，21世纪经济报道记者了解，其中一例检测的结果显示，某消费者被提示患膀胱癌的概率为3%，这一概率的指导意义并不明显。　　价格也是消费者暂时顾虑的因素之一，21世纪经济报道记者统计，目前液体活检的价格普遍在数千元至数万元之间。　　而政府对此类新兴技术的审批趋于严格，至今没有癌症早筛产品获得国家食药监局审批通过，所有市场上的检测产品在本质上仅有辅助、参考价值。基于上述原因，癌症基因检测市场尚未进入“正轨”。　　不过，尽管处于市场初期阶段，易活生物仍然计划开展大规模生产销售。　　廖玮介绍， 肺癌基因突变检测试剂盒由试剂和耗材组成。现在已经可以小批量生产试剂盒，在GMP厂房建设好之后，即可进行大规模量产，年产量最高可到五百万份。　　“目前计划股权融资五千万元人民币，2016年该产品将进入临床申报阶段，并可望获批上市，同时产品可售于科研机构用于研究。预计到2016年夏天，工厂就能大批量生产出颠覆性的肿瘤基因检测设备和肺癌检测试剂。2016年6月，我们计划在美国芝加哥ASCO会议上发布第一代官方产品并正式进军市场，并计划于2017年将产品推广到全球其他地区。”廖玮向21世纪经济报道记者表示。

英国剑桥 —— SPT Labtech是生命科学应用自动化仪器及耗材设计与开发的国际领导者。近日SPT Labtech发布新品firefly®，这是一种用于二代测序(NGS)文库构建的创新型液体处理平台。 firefly®开启了基因组学实验室自动化的新时代，采用创新的一体化液体处理技术，整合了整板/整列移液和非接触式分液于一身，以实现更高效的NGS建库流程。除了硬件功能外，该平台还在直观且功能强大的液体处理软件方面树立了新标准，该软件可设定用户的分级管理、智能可视化进行protocol编写，同时具备完全开放透明的审核追溯功能。firefly®提供了一个互补性的云共享社区，能允许不同用户共享他们自定义的protocol，并受益于SPT Labtech经过验证的方法学，以支持科学合作和创新。firefly®的推出极大扩展了SPT Labtech在基因组学应用上的整体解决方案。 SPT Labtech的基因组产品经理Paul Lomax说："虽然下一代测序的进步已经彻底改变了基因组学领域，但文库制备方法仍然是许多实验室的一个重要瓶颈。液体处理自动化提供了巨大的通量优势，解决了对多台设备的需求、宝贵的实验室空间和高额投资等问题。凭借其一体化的功能，紧凑的设计和创新的软件，firefly®提供了高性价比的基因组学解决方案，从而支持更为灵文库构建应用。" 目前firefly®已成功适用于各类常规的文库构建试剂盒如NEBNext Ultra II DNA、NEBNext Ultra II FS DNA、NEBNext Ultra II RNA和Illumina DNA Prep等，更多试剂盒的验证正在积极开发中。 SPT Labtech首席执行官David Newble补充到："我们的团队运用独创性思维来克服客户工作流程中的挑战，并加速科学研究。我们对firefly®这种易于使用和高性价比潜力感到兴奋，它将进一步普及NGS应用中液体处理自动化的广泛使用。合作是创新的基石，通过基于云社区的共享，我们的目标是实现更大的基因组学突破，促进健康。" 关于SPT Labtech SPT Labtech的产品改变了科学家的工作方式。近二十年来，我们的产品科学家和研发工程师为液体处理、样本品制备及自动化存储和管理提供了创新的解决方案，帮助加速研究，并对人类健康产生真正的影响。我们与客户合作并建立可信赖的关系，为实验室中各种挑战提供卓越的个性化体验。

p 　　第十四届全国大肠癌学术会议期间，北京大学首钢医院院长顾晋表示：“目前，ctDNA(循环肿瘤基因)这种检测技术在临床已经开始应用，常常用在检测肿瘤治疗药物反应、监测肿瘤耐药突变、评估手术效果等方面。” /p p 　　无独有偶，中国医学科学院肿瘤医院内科主任王洁在第一届海峡肺癌国际高峰论坛暨第六届肺癌精准诊疗研讨会上也表明：“液体活检ctDNA方面的研究， 已进入临床实践，写入了美国国立综合癌症网络和中国肺癌的指南。组织如果拿不到，液体活检可以作为补充，已经有很多研究展示出ctDNA为基础的液体活检在个性化治疗中的作用。” /p p 　　另外，中山大学肿瘤防治中心主任徐瑞华与美国加州大学圣地亚哥分校教授张康共同带领的中美科学家团队经历了多年研究，占领了液体活检技术新高峰，通过检测少量血液中循环肿瘤ctDNA特定位点的甲基化水平，将肝癌患者的漏诊率降低至一半以内，相关肝癌甲基化的试剂盒已投入产业化的生产，这一应用的文章也在国际学术顶尖杂志《自然—材料》发表。 /p p 　　临床实践的推行，给大家带来了希望的曙光，众望所归的液体活检技术是否能够兴起，迎来全新的时代? /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 　　需求决定了液体活检市场 /strong /span /p p 　　液体活检，是通过对血液样品等非固体生物组织的采集，比对血液循环过程中遗传物质的生物学特征来对全身进行肿瘤分析的一门新兴技术。究竟是什么样的技术能够获得商业界、科研界的一致注目，使各家企业或自主研发，或从海外引入技术，在被《麻省理工大学科技评论》评选为“2015年十大突破技术”之后，又荣登世界经济论坛评出的“2017年度全球十大新兴技术榜单”? /p p 　　需求决定市场，之所以受到人们密切的关注，原因还在于较为传统的组织穿刺检验方法，液体活检无创、精确、便捷，很大程度上消除了肿瘤细胞异质性带来的检测不一致性，而且可以降低医疗成本。目前液体活检主要集中在循环肿瘤细胞(CTCs)、ctDNA、循环肿瘤microRNA、外泌体四个方面，其中临床应用广泛集中在对ctDNA的研究上，其定量测算、追根溯源的特质，对于我们正确认识肿瘤疾病的发展和制定相关的医学方案有很大的帮助。 /p p 　　ctDNA主要来源于循环游离DNA(cfDNA)，携带肿瘤细胞突变或重组的基因。虽然只有整个DNA的不到1%，但由于其小于2小时的半衰期，更能反映肿瘤循环细胞中的准确信息。英国商会(BCC)预测，到2020年，基于ctDNA的液体活检市场预计将达到220亿美元。 /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　值得关注的五大分析技术 /span /strong /p p 　　近年来ctDNA的相关分析技术主要有5个方面。 /p p 　　定量聚合酶链式反应(qPCR)被认为是DNA定量的标准方法。意大利生物科学研究室的研究人员通过对比100名健康个体和100名非小细胞肺癌患者的qPCR结果发现，患者体内的ctDNA含量远远高于健康人。但qPCR在放大倍数的同时，也把观察和测量的人为误差放大，无法从结果中准确地把握ctDNA的数值。 /p p 　　数字聚合酶链式反应(dPCR)是目前最成熟，但尚未获得美国食品和药物管理局(FDA)批准的检测ctDNA的一项专利技术。 /p p 　　BEAMing技术是在dPCR方法的基础上，混合进流式磁珠，将不同类别的磁珠分布在对应的DNA细胞中，然后用流式细胞仪检测标记以达到计算ctDNA的目的。尽管BEAMing是评估患者血液肿瘤特性的有效方法，但当肿瘤极性过小时，会有测量误差。 /p p 　　表面增强拉曼光谱(SERS)是一种通过激光照射金属纳米颗粒产生表面增强，导致被检测对象的拉曼信号明显增强，最终计算ctDNA数值大小的方法。信号变化来源于光波的强弱，具有很高的灵敏性。 /p p 　　下一代测序(NGS)即高通量测序(HTS)，对于肿瘤的发现和理解有突破性的进展。在NGS的基础上萌生了很多用以检测ctDNA的方法。例如，癌症个体化深度测序分析方法(CAPP-Seq)，通过深度测序来研究ctDNA特性的Capp-Seq是第一个基于NGS技术的ctDNA检测技术，虽然检测价格较高，但其高灵敏度和准确性还是引起了广泛关注和临床应用。 /p p 　　除了ctDNA，循环肿瘤细胞(CTC)在肿瘤领域的应用也得到认可，最新NCCN乳腺癌指南(2017.v3)，已将循环肿瘤细胞(CTC)纳入TNM分期系统。 /p p 　　2018年1月1日在全球启用的AJCC第八版癌症分期系统，将乳腺癌外周血中的CTC列为预后提示因子。 /p p 　　循环肿瘤细胞(CTC)是痕量存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。它通过血液循环散播到身体各处，并在合适的环境中增殖，导致肿瘤的复发转移。 /p p 　　CTC对肿瘤远端转移和预后的评估作用，目前已得到国际权威肿瘤诊疗指南的肯定。下面就来盘点一下，CTC逐渐走入临床实践指南的历程。 /p p strong 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 2010 /span /strong /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　美国AJCC指南(第七版) /span /strong /p p 　　美国癌症联合委员会AJCC在2010年制定的《肿瘤分期指南》(《Cancer Staging Manuel》)中，首次把CTC列入TNM分期系统，作为一个新的M分期(远端转移)标准，列为cM0(i+)分期，出现在M0和M1之间。 /p p 　　cM0(i+)分期定义为：无任何转移性临床症状或体征，无远处转移的临床或影像学证据，但通过分子检测或显微镜检，在循环血液、骨髓或其他非区域淋巴结组织中发现肿瘤细胞或≤0.2mm的微小转移灶。 /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　2017 /span /strong /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　NCCN乳腺癌临床实践指南 /span /strong /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　最新版乳腺癌NCCN指南2017.v3版，正式引入cM0(i+)分期。 /span /strong /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　2018 /span /strong /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　美国AJCC指南(第八版) /span /strong /p p 　　2018年1月1日在全球启用的AJCC第八版癌症分期系统中，除保留cM0(i+)分期外，更进一步明确了CTC检测的临床价值。最新指南将CTC列为继ER/PR、HER2、Ki67和肿瘤组织学分级四项生物学指标之后的又一项乳腺癌预后评估工具，认为乳腺癌外周血中存在CTC提示预后不良。 /p p 　　此外，第8版分期系统详细阐述了M分期的使用规则：pM0不是一个有意义的分期，病理阴性不应作为pM0 所有患者均应划分为cM0或cM1 如果cM1随后经病理确诊，则为pM1。 /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　小贴士 /span /strong /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　AJCC指南： /span /strong /p p 　　美国肿瘤联合会(American Joint Committee on Cancer，AJCC)于1977年制定第1版癌症分期系统至今已历时40年。坚持以解剖学原发肿瘤(T)，淋巴结(N)及转移灶(M)信息为基础对肿瘤分期进行评价是其一贯的基本原则。2016-10-06，AJCC第8版癌症分期系统更新出版，并确定将于2018-01-01在全球启动执行。其中，乳腺癌分期系统大篇幅增加非解剖学信息是更新的最大亮点。从不断细化宏观解剖学分期，到结合基因检测分析肿瘤生物学信息，AJCC癌症分期系统推动了临床肿瘤学综合预后评价体系从量变到质变的升华。 /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　　NCCN肿瘤临床实践指南： /span /strong /p p 　　《NCCN肿瘤临床实践指南》由美国国家综合癌症网络(NCCN?)制订。NCCN指南不仅是美国肿瘤领域临床决策的标准，也已成为全球肿瘤临床实践中应用最为广泛的指南，在中国也得到了广大肿瘤医生的认可与青睐，是提供给医疗保健系统决策者的极具价值的重要资讯。 /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 　　产业仍处于探索阶段 /strong /span /p p 　　虽然液体活检的开发前景很大，整个产业仍然处于科研探索与验证的阶段，在临床实践中还需要注意一些问题。首先缺乏统一技术方案，不同的检测技术会导致不同的结果。其次，数据的处理在数量级跨度大的情况下须谨慎，人为误差可能会被放大许多成为统计错误。最后，医学伦理层面也值得我们注意和思考，尚不成熟的医学技术应用于临床也势必会遭到抵触。 /p p 　　目前市场中液体活检涉及的癌症种类甚多，细分领域的龙头企业也已经崭露头角，但成熟的市场格局暂未形成。作为新兴技术，国内外获批的液体活检产品寥寥可数，包括杨森诊断公司的CellSearch、Epigenomics公司的EpiproColon技术、罗氏的cobas EGFR突变检测试剂盒v2、格诺思博公司的叶酸受体阳性CTC检测试剂盒和友芝友公司的循环肿瘤细胞快速染色液。 /p p 　　液体活检在不同方向上的成熟度不同，靶向用药指导较为成熟，也是基因检测公司争夺的热点。在资本的大力推动下，众多公司迅速推广检测产品抢占市场，竞争十分激烈，企业获得临床监管许可证之后，竞争优势会更加明显。 /p p 　　广阔的市场想象空间让大家纷至沓来，投资额也屡屡再创新高。证券公司Piper Jaffray测算，预计2026年液体活检市场容量将达到326亿美元，其中癌症领域286亿美元，未来10年的复合增长率将保持在21.7%左右。 /p p 　　精准医疗是永不落幕的医疗投资机会，我们要做的就是给液体活检一个相对宽松的技术研发环境，一步步攻克液体活检的相关技术，让其更好地为广大人民谋福祉。 /p

2022年12月29日，生命科学智能自动化创新者镁伽科技正式发布Auflo液体处理工作站系列产品，这意味着镁伽补上了实验室自动化领域的关键拼图，持续帮助科研人员有效重构实验流程，革新成本与效率。未来，镁伽将持续拓宽在生命科学领域的业务和产品布局，以更创新的中国智造，助力实现生命科学全流程质效升级，加速推动国内生物制药、生命科学和临床诊断等行业的智能自动化变革潮流。 以产品矩阵“组合拳”全场景覆盖实验室多元化需求 随着生物制药、分子诊断等领域的快速发展，各大医学和检验检测实验中心对效率的要求迅速提高，生命科学领域对自动化和智能化的需求日益迫切。尤其当面对突发的公共卫生事件时，超高的检验通量使得传统人工操作耗时、易出错以及交叉感染的风险等缺点更加突出。液体处理是生命科学实验场景中必不可少的基础环节之一，也是典型的劳动密集型操作过程。面对复杂度和通量指数级增长的移液、分液需求，自动化液体处理工作站具有精准高效和超高通量等手工操作不可比拟的优势，可以帮助实验人员解放劳动力，同时有效减少人为误差，提高实验的精度和可重复性，并对过程进行控制和追溯，满足多元化的实验操作需求。 自成立以来，镁伽以实验室自动化为切入点，直击生命科学领域效率提升等痛点，持续开发稳定高效、具有创新性的产品和解决方案。此次针对实验室液体处理这一细分场景的自动化需求，镁伽一次性发布了Auflo P/M/T/S/D等五个系列的液体工作站产品，涵盖从移液到分液，从紧凑精巧的基础版到高通量高兼容性的专业版，再到支持柔性定制的特别版，全方位满足实验室液体处理对不同通量、不同自动化程度的需求，可应用于基因组学、蛋白组学、细胞生物学、药物研发、合成生物学、生物样本库、分析化学等领域，并可赋能给法医、农检、食品检测等多种检验检测在内的各种精密液体定量处理场景。 （Auflo液体处理工作站系列产品） Auflo-P系列专业级液体工作站：搭载4或8个独立的1000μL移液通道，移液间距、移液体积均独立可控。能够兼容各类样本、试剂耗材和功能模块，可根据不同应用场景整机自由配置、按需整合，拥有独特且强大的机械臂扩展能力，支持抓板、抓管、移液并行处理，同时可链接整合多种设备，确保满足各种复杂的实验室自动化场景需求。（左：Auflo-P1200专业级液体工作站；右：Auflo-P1600专业级液体工作站） Auflo-M系列开放型液体工作站：配备1或8通道移液核心及抓手，可根据需求选配1、8、1+1、1+8四种核心组合模式。工作站通过自动化方式完成1000μL以内的精准移液，能够兼容各类样本、试剂耗材和功能模块，轻松完成储液槽、离心管、96或384孔板之间的移液、分液等操作。同样支持根据不同的应用场景整机自由配置，按需整合。（Auflo-M700开放型液体工作站） Auflo-T系列基础版液体工作站：搭载96通道全自动移液系统，具有移液、分液、混合等6种液体处理模式。一吸一喷和一吸多喷等模式可轻松实现板与板之间的高效精准复制，帮助简化微量应用工作流程。（Auflo-T9600基础版液体工作站） Auflo-S系列专用型样品前处理系统：主要应用于移液工作中样品分杯和PCR体系构建过程，整合添加了条码扫码、样品振荡混匀、开关盖、样品转移等多种功能，还可支持添加蛋白酶K、内参、阴阳性质控样品等。可高效完成样本模板添加和PCR mix添加，取出深孔板即可进入下一环节。同时支持混料上样，仅需四分钟即可完成一个96孔板的PCR反应体系配置工作。（Auflo-S1200专用型样品前处理系统） Auflo-D系列多通道分液仪：多功能的高速试剂分装系统，可对各类型试剂进行超高通量自动化分装。该系列配置高速蠕动泵，每通道可实现不同试剂的精确分液，助力实现复杂分析和诊断实验的全程自动化。可用于细胞、培养基、各类IVD试剂的⾼ 精度分装、核酸提取试剂预装板制备、质控液分装以及保存液分装。以硬件+软件+计算一体化打通实验室智能协同生态 在解决局部实验流程自动化的基础上，Auflo系列液体工作站还可支持自动化整合，能够无缝接入镁伽自主研发的实验室自动化软件系统MegaFluent® ️ ，实现强大的功能跃升及友好的用户体验。MegaFluent® ️ 不仅可以打通多达上百种的第三方仪器设备，并且可以针对客户个性化的应用需求，开发并整合定制化的设备模块。通过硬件+软件+计算的一体化协同，MegaFluent® ️ 生态将极大加速生命科学实验室的自动化与智能化进程。 Auflo系列液体工作站采用了与MegaFluent® ️ 统一的扁平化用户交互界面风格，使用操作简单便捷，最大程度的简化实验人员培训和使用流程，极大提高操作效率。借助MegaFluent® ️ ，Auflo系列液体工作站不仅可以实现极端复杂的液体处理全工作流程智能化调度，完成与众多其他品牌仪器设备的无缝整合连接，而且通过强大的实验室信息化功能，确保实验结果与实验过程全部数据的全程可追溯，实现实验室的远程数字化管理。 镁伽科技创始人兼首席执行官黄瑜清先生表示：“液体工作站是实验室自动化的核心设备，此次Auflo系列产品的发布，让镁伽在实验室自动化领域的产品布局进一步升级和完善，是具有重要里程碑意义的事件，也为镁伽下一阶段的跨越式发展注入了一针强心剂。展望未来，生命科学将加速进入自动化和智能化的时代，镁伽将围绕生命科学自动化这一时代命题，持续拓宽过程自动化、检测与量测、计算与分析的强大产品矩阵，通过不断研发先进的科学生产力工具和创新产品，以最新的科技助力科学家释放更多潜能，共同建设更绿色、更健康、更美好的世界。”

p span style=" font-family: 楷体,楷体_GB2312, SimKai " & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp 日前，第八届慕尼黑上海分析生化展暨中国国际分析、生化技术、诊断和实验室技术博览会(analytica China 2016)在上海新国际博览中心正式落下帷幕。展会期间，来自全球25个国家和地区的848家国内外知名企业向24582名专业游客展示了各自的主打产品和解决方案。 /span /p p span style=" font-family: 楷体,楷体_GB2312, SimKai " 　　近年来，随着“精准医疗”、“体外诊断”等概念的崛起，生命科学行业蓬勃发展，生命科学相关仪器设备市场也迎来了前所未有的繁荣。与此同时，各大实验室、检测中心对相关仪器设备的效率要求也越来越高，尤其是前处理设备。许多大型、高通量的实验室，如血液筛查实验室、临床诊断实验室、疾病控制实验室、出入境检验检疫实验室和二代测序中心等纷纷用高效率、自动化和智能化的前处理设备替代了原有的手工设备，迎来了实验室自动化的时代。其中，液体处理工作站就是近些年来颇受各大生命科学实验室青睐的高效、自动化前处理设备。 /span /p p span style=" font-family: 楷体,楷体_GB2312, SimKai " 　　自动化液体处理工作站因其节省成本、提高通量、提供自动样品追溯功能、避免人为误差等优点被广泛应用于基因组学、蛋白组学、细胞组学、药物筛选、医疗诊断、血型分析、血样处理、法医学鉴定等领域，可实现多种自动化的实验方案，如自动化核酸提取和纯化， PCR反应体系制备，自动化基因克隆系统，基因、蛋白质测序样品处理，生物芯片样品制备及点样，全自动酶免系统，凝胶消化处理，MALDI-TOF样品处理，蛋白质纯化，混和物处理等。据了解，我国自动化液体处理工作站每年的市场容量约为两千多台，单价从5万到100万元以上都有，而且，随着二代测序、液体活检等技术的普及与发展，市场容量还将继续扩大。 /span /p p span style=" font-family: 楷体,楷体_GB2312, SimKai " 　　在本届展会上，其中的一大亮点是各大厂商展示的各类自动化液体处理工作站。当前，自动化液体处理设备的进口生产商主要有帝肯、哈美顿、艾本德、普兰德、耶拿、贝克曼库尔特、伯腾、梅特勒-托利多、赛默飞、安捷伦、珀金埃尔默等，国内生产商有奥美泰克、博奥生物、永创、桑翌、同信天博等。据不完全统计，本届展会上展出液体处理工作站的厂商约15家，其中大多数为进口厂商，20余款液体处理工作站在展位上与到场用户见面。 /span /p p 　　下面请跟随仪器信息网小编的镜头一起来回顾本届展会上令人印象深刻的液体处理工作站吧。 /p p style=" text-align: center " img width=" 500" height=" 331" title=" pulande.jpg" style=" width: 500px height: 331px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201610/insimg/b6b10c30-c2b8-4a06-8420-22fc556bf19b.jpg" border=" 0" vspace=" 0" hspace=" 0" / /p p style=" text-align: center " 普兰德(Brand)　LHS-移液工作站 /p p 　　拥有45年手动移液领域经验的普兰德在本届展会上推出了新产品移液工作站(LHS)，完善了普兰德液体处理的生产线。 /p p 　　这款移液系统(LHS)与实验室广泛使用的活塞式移液器一样运用空气活塞原理，适用于中等样品通量。从功能上看，它不但可以完成反应体系的构建，如PCR、Real-TimePCR、ELISA等实验，还可以进行连续稀释、复制微孔板等应用。相对于市面上已有的移液工作站，这款产品体积小巧，可以放在通风橱或安全柜里，但通量很大，含有7个活动的工作位，可以根据实验需要进行设置。此外，快速与灵活的移动轴可以确保在迅速、准确移液的同时减少移动中由于液体滴漏造成的污染风险，使用支架使板子/管子处于同一高度，减少无谓的垂直移动，节省了移液的时间，保证系统快速、安静并且可靠地执行日常移液任务。 /p p style=" text-align: center " img title=" RUINING.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201610/insimg/df363953-1c41-474f-be01-f9113e9f15e5.jpg" / /p p style=" text-align: center " 梅特勒-托利多　BenchSmart 96半自动移液工作站 /p p 　　梅特勒-托利多在展会上新发布了这款BenchSmart 96半自动移液工作站，完善了旗下品牌瑞宁的移液产品线。 /p p 　　BenchSmart 96是一款带有三个可互换移液端的半自动96/384孔移液器，集自动移液的精准可靠与手动移液的灵活便捷于一体，量程在0.5μL与1000μL之间。所有移液端均采用LTS专利密封技术，确保96通道间的一致性。配套的LTS吸头，每个批次都附带检测报告，确保移液过程中无RNA酶、DNA酶、ATP和热源等生物性污染。此外，Bench Smart 96超大的平板式触摸操作屏和配合直观的图形互动界面，使实验室的任何人都可以控制操作。人性化的4位操作平台设计，降低或消除了频繁更换样品板和储液槽的必要，同时降低由频繁操作带来的出错风险。 /p p style=" text-align: center " img title=" eppendorf .jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201610/insimg/fe5e13c4-1727-4577-8fc0-18607d74f809.jpg" / /p p style=" text-align: center " 艾本德(Eppendorf)epMotion5075m全自动核酸纯化工作站 /p p 　　艾本德epMotion5075m工作站灵活性较高，拥有15个工作板位，可通过组合不同的工具与配件实现多种功能，实现实验室各种更高通量应用的需要，如二代测序样品处理、定量PCR/PCR体系构建、磁珠法核酸纯化实验、细胞实验或其他常规移液任务等。Eppendorf　3D-MagSep技术，使其在同一位置上可以完成磁力分离、混匀和温控功能 专用的Eppendorf MagSep 系列磁珠式核酸纯化试剂盒，用于每轮1 – 24 个样本的核酸提取。整个过程全部由软件进行控制，在运行过程中设备在不同规格的分液工具及机械手间自动切换，无需人工干预。 /p p 　　此外，该系统具备专利红外共聚焦探测器，可以自动检测工作板位上吸头数量、耗材类型及试剂体积，自动确认实验工作是否完毕。系统还可选配CleanCap 洁净装置，通过紫外灯灭菌及HEPA过滤装置用于消除污染和洁净空气，适用于危险样品或易污染样品。 /p p style=" text-align: center " img title=" 微浪生物.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201610/insimg/7f86e1c2-eadc-4b92-893c-c1e1d65eb2b1.jpg" / /p p style=" text-align: center " 微浪生物ReadyGo全自动移液工作站 /p p 　　广州微浪生物在本次展会上展出了一款与众不同的新产品ReadyGo全自动移液工作站。不同于经典的三轴移液工作站，这台产品通过六维机械臂实现了真正的立体 蜂巢的外形设计既有利于实现与其他仪器的功能整合，也使可用空间大幅增加，实现高通量。该系统软件的用户界面较为友好，实时智能的视觉反馈设计保障了自动化流程的准确顺畅，3D模拟运行为新实验的开发也提供了巨大的便利，允许在不使用任何试剂和耗材的情况下测试新的实验流程。 /p p style=" text-align: center " img title=" gilson.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201610/insimg/9a23986c-36f0-498a-9579-6eac0eb8d892.jpg" / /p p style=" text-align: center " 吉尔森(Gilson)Pipetmax全自动移液工作站 /p p 　　吉尔森Pipetmax全自动移液工作站操作简单、体积小巧，尺寸和价格都可以为一般实验室所接受，核心部件Pipetman移液器保证了实验结果的精确性和准确性。该工作站拥有9个标准微孔板位(SBS) 8通道移液头可根据运行需求自动装配1-8个吸嘴，无需在运行中更换移液头 图形化软件助手可快速建立qPCR及样品归一的方法，无需编程及可完成方法优化。 /p p style=" text-align: center " img title=" TACAN.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201610/insimg/2dad8351-2b61-4359-8e7c-8f66abfa74c2.jpg" / /p p style=" text-align: center " 帝肯(TECAN)FreedomEvo75全自动液体处理工作站 /p p 　　帝肯Freedom EVO 75是一款针对高等院校、生物技术研究和分析机构的小型生命科学实验室而设计的紧凑型全自动化液体处理工作站，可根据需要自由配置，并可应用于DNA提取、PCR反应体系的构建、样本稀释、浓度均一化处理，以及应用开发等用途。该工作站可在平台内部整合3个独立可旋转式机械臂的自动化产品，提供台面内试管、微孔板、试剂全自动条码扫描功能，拥有加样针低位脱排技术，避免气溶胶污染，并可通过取针错误自恢复、双重液面探测、实时移液监测PMP等来全方位地保证移液质量。 /p p style=" text-align: center " img title=" HAMILTON.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201610/insimg/9d0339b5-34bc-46c8-b765-a5fa26b63d9b.jpg" / /p p style=" text-align: center " 哈美顿(HAMILTON)Microlab自动化液体处理工作站 /p p 　　哈美顿Microlab是一款灵活、快速和紧凑型的自动化工作站，可以根据用户的实际需要进行仪器的置，并可以与实验流程中的下游分析和检测设备进行整合，以实现不同的实验方案。该系统多通道的独立动态定位技术，使每个移液通道都可以在Y轴和Z轴方向上独立移动，并利用自身的高精度马达来到达操作台的任意位置 可监控的空气置换技术，在实现吸放液体的同时对错误进行报警和纠正，监控系统还可以通过跟踪验证样品吸放液过程中压强的变化曲线，确保样品液体吸放的准确无误。此外，该系统独创的移液技术，如通道独立非对称定位技术、精确的吸头嵌合技术、电容感应和压力感应的双重液面探测技术多重保证运行过程中的定位精度、移液精确性和灵活性，确保自动化过程安全、移液准确可靠。 br/ /p

美国和德国科研团队在实验中首次拍摄了液态水中电子实时运动的“定格帧”。该研究提供了一个窗口，使科学家能在以前用X射线无法企及的时间尺度上了解液体中分子的电子结构，标志着实验物理学的重大进步。相关研究发表在《科学》上。这项研究是通过美国直线加速器相干光源（LCLS）的同步阿秒X射线脉冲对而实现的。此前，辐射化学家只能在皮秒（等于一百万阿秒）的时间尺度上解析电子运动。现在，在阿秒尺度上研究X射线击中目标的电子反应的能力使科研人员能够深入研究辐射引发的化学反应，比以前的方法快100万倍。研究中开发的技术，即液体中的全X射线阿秒瞬时吸收光谱，使他们能在原子核移动之前，在电子进入激发状态时“观察”由X射线激发的电子。这项研究建立在阿秒物理学这一新学科的基础上，揭示了物质受到X射线照射时的瞬时电子变化，不仅加深了科学家对辐射诱导化学的理解，还标志着阿秒科学新纪元的开始。

BP 100 自动快速分液仪 快速、批量、自动完成液体分装在微生物检测中，各种缓冲液、无菌生理盐水、液体培养基等溶液的分装工作重复而且繁琐，占用了实验人员的大量时间。睿科BP 100自动快速分液仪，采用三轴机械臂配合高精度蠕动泵，能高效的完成以上各种溶液的分装工作，且适配试管、三角瓶、离心管等各种容器。解放微生物实验人员双手，减少重复繁琐工作。控制终端内置7寸彩色触摸屏，无需外接电脑操作简单，自动化程度高 使用灵活度高分区管理，可放置不同规格容器、设置不同分液体积，灵活度高兼容容器可达到250mm可根据不同容器定制样品通量高18mm×180mm试管，可达320个易于清洁灭菌与液体接触部件均易于拆卸，可高温高压灭菌多种校准模式可选自动校准、手动校准、自定义校准三种模式可选，满足不同状态的校准需求，保证分液准确性应用标准举例GB 4789.1-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则 GB 4789.2-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标 GB/T 7918.2-1987 化妆品微生物标准检验方法 细菌总数测定 GB/T 7918.3-1987 化妆品微生物标准检验方法 粪大肠菌群 《中华人民共和国药典》2020年版四部 通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 《中华人民共和国药典》2020年版四部 通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 GB/T 13091-2018饲料中沙门氏菌的测定… …

灭菌重点介绍-液体篇在日常实验室的工作中，无论从事哪种实验方向都会与灭菌产生交集。灭菌的样本范围大体包括以下几种：液体（培养基）、固体（实验器材器械）、废弃物（固体废弃物为主）。不同类型的样品需要使用不同的灭菌程序，不同程序之间的灭菌方法也不尽相同，所采用的技术和工艺也有极大差异。本次我们主要来讨论液体样品的灭菌重点。液体灭菌经常会存在以下几个问题：1.装载培养基的瓶盖需要保留空隙，不能密闭。2.培养基灭菌后用于培养标的物达不到很好的培养效果。3.灭菌之后培养基的装载容器破碎、炸裂。4.培养基降温之后液面下降浓度改变。以上几个问题都是经常被忽略的技术点：1.瓶盖保留空隙是为了在降温阶段瓶内的蒸汽可以逸出来进行蒸发冷却。2.培养基灭菌后达不到好的灭菌效果，主要是因为培养基是液体，液体的比热容大升降温速度较慢，热量需要蒸汽经过容器传导到培养基中。一般灭菌器的温度探头通常固定在腔体内部顶端，当高温蒸汽接触到温度传感器时立即开始计算灭菌时间，但由于液体样品的升温延迟，培养基没有经历一个完整的灭菌循环就开始降温，对培养基的灭菌效果有影响。也有用户会相应增加灭菌的时长，由于没有对样品真实温度的精确把控，随意增加灭菌时间又会让样本长时间保持在高温下使内部营养物质焦糖化，造成实验假阴性。3.容器破碎、炸裂主要是因为泄压时样品内外部压差变化过快从而导致容器破损。4.液面下降是因为在冷却时蒸发走全部都是培养基的水分。以上问题的根本原因主要体现在以下4点：1.无法探知样品的真实温度。2.无法探知培养基是否经历了一个完整的灭菌循环，并且达到了有效的灭菌效果。3.压力下降过快。4.蒸发导致的液体损失。Systec高压灭菌器配备了PT-100柔性温度探头，通过放置对比瓶的方法实时探知样品的真实温度，在液体达到121℃之后开始计算灭菌时间，在降温过程中升高压力保证液体全程不沸腾无液体损失。Systec深耕灭菌领域多年，为您提供优异、安全的灭菌解决方案。

p 　　撰文：王文 /p p 　　在透射电子显微镜中，搭建nano-lab，原位观察纳米材料在外场，如力、热、光、电、磁等作用下的行为，对于纳米材料研究者已经并不陌生。目前，原位电镜研究进行地如火如荼，并取得了很多令人瞩目的成果。今天，就为大家简单介绍一下原位透射电镜技术中的一种——液体环境透射电镜(Liquid cell TEM)。 /p p 　　 strong 一、为什么要研究液体环境透射电镜技术? /strong /p p 　　绝大多数的液体，包括水和其他有机溶剂，有着较大的饱和蒸气压，无法在透射电镜的高真空环境中存在，因此在研究液体环境中纳米材料的行为时，需要构建液体存放单元，将液体与电镜中高真空环境隔离开来，这就需要利用Liquid cell TEM。Liquid cell TEM实际上就是通过微纳加工，制作液体存放单元(Liquid cell)，然后将它固定在普通样品杆或者专用液体样品杆头部，放入电镜进行观察。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/ad89408b-a05e-4162-a393-3ace84a9b2e2.jpg" title=" 1.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　 strong 　图 1. Liquid Cell 结构示意图 /strong /p p 　　 strong 二、原位液体透射电镜技术发展史 /strong /p p 　　In-situ Liquid cell TEM的雏形可以追溯到1934年，比利时布鲁塞尔自由大学的Morton，利用两片铝箔包裹样品的方法首次尝试活体生物样品的透射电子显微学研究，但是由于铝片及液体层较厚，其分辨率仅能达到微米量级。 /p p 　　近年来得益于微纳加工技术以及微流控技术的进步，Liquid cell的制备得到突破性进展。2003年F. M. Ross设计制作的原位电化学Liquid cell芯片，是近代Liquid cell制备的里程碑。其结构如图2所示，底层硅片沉积一层多晶金电极，与顶层硅片之间通过SiO2环垫片胶合形成电化学反应器，顶层硅片有两个容器，分别引出两个电极用来施加电偏压。使用时将液体注入，通过毛细作用流入观察窗口，然后将Liquid cell密封，放入电镜中观察。由于成像电子束需要透过100nm氮化硅薄膜窗口，以及接近1μm液体层空间分辨率仅为5nm。这种在两层硅片之间形成液体腔室，采用氮化硅薄膜做观测窗口的芯片，是后续很多改进Liquid cell的发展原型。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/472b1387-271a-44da-a837-6d00c56951ea.jpg" title=" 2.jpg" / /p p 　　 strong 图2 (A). Liquid cell示意图，(B)二电极Liquid cell光学照片(Rosset al., Nat. Mater., 2003, 532)。 /strong /p p 　　目前Liquid cell制作方式主要有两种，一类是closed cell，另一类是包含液体流通管道的flow cell(见图3)。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/f501f1c1-4897-4d45-a12b-57c2381ca6f6.jpg" title=" 3.jpg" / /p p 　　 strong 图 3. A.closed cell 三维结构示意图，B. 沿A图中横线横断面结构图(Zhenget al., Science, 2009, 1309)C. flow cell结构示意图(de JongeN et al., PNAS, 2009, 106). /strong /p p 　　2009年郑海梅报道了一种超薄氮化硅窗口Liquid cell如图3A& amp B，其氮化硅薄膜厚度仅为25nm，上下层芯片之间用超薄铟垫片键合形成Liquid cell室，观测窗口内液体层厚度约为200nm。在此基础上，2014年Liao等人对超薄氮化硅窗口Liquid cell技术进行改进，将氮化硅薄薄膜度进一步减小为13nm，液体层厚度约为100nm，有效地将空间分辨率提高到原子级。 /p p 　　2009年Neils de Jonge等人设计了开放Liquid cell，如图3C，在无需冷冻和干燥的条件下，原位观察完整细胞中的单个分子。其液层厚度约为7μm，空间分辨率可以达到4 nm。 /p p 　　除了采用氮化硅薄膜作为观测窗口，2012年Jong Min Yuk首次提出利用石墨烯薄膜制备Liquid cell，并原位研究了钯纳米晶体的生长过程，如图4。利用石墨烯作为观察窗口材料，可以有效较少甚至忽略电子散射进而实现原子级分辨率。随后，利用石墨烯作为电子束透射窗口，衍生出了多种复杂的石墨烯Liquid cell结构。特别的，2014年JongMin Yuk利用Liquid cell观察了硅纳米颗粒表面各向异性锂化过程，使得利用石墨烯Liquid cell进行电化学研究成为可能。但由于石墨烯薄膜很薄，很难放置常规的电化学电极，石墨烯Liquid cell用来研究电化学过程仍然受到很大的限制。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/d7943de3-4150-46a7-b462-f5f785b7233b.jpg" title=" 4.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 strong 图 4 石墨烯 Liquid cell 示意图(Li et al.,Science 2010,330). /strong /p p 　　Liquid cell TEM不仅可以用来原位观察液体环境中纳米材料的行为，还可以在Liquid cell芯片和液体杆上集成加热、冷冻元件，用于纳米材料功能性测试，极大地拓宽了透射电镜的研究范围。如Haimei Zheng 课题组Kai-Yang Niu等利用可加热Liquid cell，原位研究了柯肯达尔作用下，氧化铋空心纳米颗粒的形成过程。K.Tai利用冷冻平台，研究了结晶期间冰中的相变，以及结晶前表面与金颗粒的动态相互作用。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/a142ae6e-5b9c-46c5-805d-1c81aab4e20f.jpg" title=" 5.jpg" / /p p 　　 strong 图5. A.Hollownanoparticle growth dynamics via Kirkendall effect (Paul Alivisatoset al., Nano Lett,2013,13). B.The dynamic interactions of Aunanoparticles at the ice crystallization front (Dillon et al.,Microsc. Microanal, 2014, 330) /strong /p p 　　综上，目前Liquid cell芯片多是基于硅基衬底加工，窗口材料一般采用超薄氮化硅薄膜，Haimei Zheng课题组可以将氮化硅薄膜做到13nm左右，其他课题组以及商业化Liquid cell窗口材料一般做到30nm左右，窗口大小50*50μm。分辨率可以达到原子级，接近电镜固有分辨率。并且可以集成加热和冷冻功能，但对liquid cell稳定性要求较高，并不容易实现。 /p p 　 strong 　三、原位液体透射电镜技术的应用 /strong /p p 　　利用In-situ Liquid cell TEM可以观察纳米颗粒成核和生长的过程，用实验证明一直存在争议的问题，例如纳米颗粒液相生长过程中主导机制是单体附加，还是颗粒融合。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/deb70f24-dd19-4eba-8290-004651bb1c0e.jpg" title=" 6.jpg" / /p p 　 strong 　图 6. Video images showing simple growth by means of monomer addition (left column) or growth by means of coalescence (right column). (Zheng et al., Science, 2009, 1309) /strong /p p 　　可以研究异质纳米晶体生长过程 /p p style=" text-align: center" img style=" width: 450px height: 246px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/d3a4a6f9-e362-45d2-9efc-3eb88e58cc1c.jpg" title=" 7.jpg" height=" 246" hspace=" 0" border=" 0" vspace=" 0" width=" 450" / /p p 　　 strong 图7. Comparison of Pdgrowth on 5 and 15 nm Au seeds. (a, d)Starting dark-field STEM images of a 5 nm(a) and a 15 nm (c) Au nanoparticles in 10 μM aqueous PdCl2 solution (samescale). (b,e) The same two particles after Pd deposition (84 s total beamexposure). (c, f) Schematic illustration of the Pd growth morphology for thetwo sizes of Au seed nanoparticles (E. A. Sutter et al., Nano Lett, 2013, 13) . /strong /p p 　　可以研究纳米颗粒自组装过程 /p p style=" text-align: center" img style=" width: 450px height: 409px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/a1977cd7-4f4d-412b-a23d-ae50c19761d1.jpg" title=" 8.jpg" height=" 409" hspace=" 0" border=" 0" vspace=" 0" width=" 450" / /p p 　　 strong 图8.TEM images of NPassembly formed under electron beam irradiation (a,b) and drop casting (c,d) onSiNx TEM grid. The scale bar is 100 nm (Jungwon Park et al., ACS NANO, 2012, 6) . /strong /p p 　　可以研究锂离子电池锂化过程。Huang 等人在开放 Liquid cell 中原位研究锂离子电池锂化过程中,氧化锌纳米线的膨胀、伸长和螺旋行为。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/965878a3-55a6-46c9-b846-05e5d30fc04a.jpg" title=" 9.jpg" / /p p 　　 strong 图 9. Schematic of the experimental setup(Li et al.,Science 2010,330). /strong /p p 　　还可以用来观察一些生物样品。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/a94ef351-8826-4e37-be8b-e3ff343c362c.jpg" title=" 10.jpg" / /p p 　　 strong 图 10. Image of the edge of a fixed COS7 cell after 5-min incubation with EGF-Au(de Jonge N et al., PNAS, 2009, 106). /strong /p p 　　当然Liquid cell TEM的研究内容不仅局限于这些，感兴趣的可以阅读Hong gang Liao 2016年发表在Annu. Rev. Phys.Chem.的一篇综述文章Liquid Cell Transmission Electron Microscopy。 /p p 　　看到这里，估计有人会问，在研究过程怎么排除电子束对反应过程的影响呢?电子束的确是让人又爱又恨的存在，既需要利用它来成像，又不希望它与研究材料发生相互作用影响实验结果。不过，别担心，Liquid cell TEM领域大牛Ross已经为你提供了量化电子束影响的理论依据!说到这里，小编不禁要感叹，Ross是一位学术造诣很深又乐于分享的大牛。某次会议有幸向Ross当面请教，她非常nice地鼓励了我蹩脚的英语和并不成熟的想法，并且很耐心地给我讲解，我们刚入门的科研人需要这样优秀的偶像。 /p p style=" text-align:center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201803/insimg/ef62778c-b47c-42b7-af9f-ca7df8f18d17.jpg" title=" 00.jpg" / /p p 　 strong 　四、国内研究现状 /strong /p p 　　08年以来国内的透射电镜发展十分迅速，目前国内应该有超过60台带有球差校正的透射电镜，而且这一数字还在迅速增加。其中做Liquid cell TEM相关研究的课题组也有不少，并取得了不少重量级研究成果，鼓掌~~~~目前国内从事Liquid cell TEM研究的课题组主要有：浙江大学张泽院士、厦门大学廖洪刚教授、北京工业大学隋曼龄教授、上海交通大学邬剑波研究员、华东理工大学陈新教授，等。当然，还有弱弱的小编~(如有遗漏，恕小编才疏学浅)。 /p p 　　那么最后一个问题来了，想做in-situ Liquid cell TEM研究去哪里找芯片呢?目前Liquid cell芯片和液体样品杆已经部分商业化，如Hummingbird 和Protochip等，但其售价比较昂贵，适合土豪课题组。很多课题组仍然在使用自制液体芯片，或与其他国内微纳加工公司合作。 /p p 　　小编只是抛砖引玉，为大家做一下简单介绍一下，如有兴趣，可以先参阅Frances M. Ross, Honggang Liao, Xin Chen三位的综述文章。没错，其中有两位是中国人，而且目前在国内任职，小编是如此骄傲~~~ /p

内容简介放射性示踪技术在生命科学的发展中起着重要作用。虽然发展了许多替代技术，但是在许多特定的条件下，放射性示踪仍然是首选的高效、专一、可靠的实验方法。液闪计数分析，作为b射线检测的一种实验技术，在蛋白质的功能研究中起着重要的作用，尤其是上世纪70年代末为医药工业的高通量筛选建立的、近年来在基础研究的多个领域崭露头角的临近闪烁分析方法，对蛋白质功能研究提供了一些新思路，使得蛋白质功能的研究从分子到细胞成为可能。本期Webinar邀请到的主讲人张洪杰博士为中国科学院生物物理研究所科学平台的同位素实验技术主管。其负责的放射性同位素实验室面向所内、所外提供技术支撑服务。目前实验室有3H、14C、32P、33P、35S、51Cr、125I等7种核素，经过近几年的改造、建设，同位素示踪实验平台已经基本形成了放射实验场所（辐射）清洁、放射操作安全防护配套、放射试剂许可剂量充足、放射废弃物处理规范、放射样品的制样设备和检测仪器齐全的开放共享的实验场所。目前该平台已助力两个实验室在Cell，多个实验室在nature子刊等影响因子大于10的学术期刊上发表研究成果。本期讲座主要以在中科院生物物理所同位素实验室完成的实验结果为基础，结合一些其它实验室发表的文献数据，对酶、转运蛋白的活性分析，配体和受体的结合分析以及蛋白质的体内代谢分析，介绍相关测试过程中的样品制备、测试信号选择中的一些注意事项，帮助大家理解液闪分析中的一些关键步骤，提高实验的成功率。 讲座题目：液体闪烁技术在蛋白质功能研究中的应用:从分子到细胞讲座时间：2019年6月27日14：00-15:00主讲人：张洪杰 博士（中科院生物物理研究所）讲座形式：网络讲座，手机或PC即可参与（会议链接和如下报名链接相同） 主讲人简介张洪杰博士，放射性同位素实验技术主管， 高级工程师，复旦大学化学系理学学士，中科院生物物理研究所分子生物学博士，在生物物理学和分子生物学领域从事过多年的研究工作，2012年开始负责放射性同位素的运行管理和实验技术指导，有着较为丰富的经验。近几年已经有20余篇和同位素技术支撑相关的被致谢的文章。 关于珀金埃尔默：珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案，助力科学家、研究人员和临床医生解决最棘手的科学和医疗难题。凭借深厚的市场了解和技术专长，我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在全球，我们拥有12500名专业技术人员，服务于150多个国家，时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭，改善人类生活质量。2018年，珀金埃尔默年营收达到约28亿美元，为标准普尔500指数中的一员，纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。了解更多有关珀金埃尔默的信息，请访问www.perkinelmer.com.cn

日前，仪思奇（北京）科技发展有限公司杨正红总经理在长沙举办的“锂电及多孔材料的粒度和形貌表征技术进展研讨会”上高调介绍了Xigo系列胶体和悬浮液颗粒比表面积分析仪。在液体中测颗粒的比表面积？是的，你没有看错——测定胶体、乳液和悬浮液中颗粒的比表面积！ 有什么用途？ 浆料体系的颗粒比表面积与颗粒在体系的分散状态有关。比表面积能反映材料的许多性能，例如：涂料的遮盖能力，纳米颗粒的改性和包覆效果，乳液或浆料配方的稳定性，催化剂的活性、药物的疗效以及食物的味道等等。但是，目前的经典方法是气体吸附法测干燥固体的比表面。然而，绝大多数的样品无论是在生产过程中还是最终使用时，却都是分散在液体中，通过制浆过程形成终产品。因此，必须知道样品在悬浮液状态下的比表面信息，而固体样品的比表面积不具有代表性。美国Xigo Nanotools公司为我们提供了革命性的技术手段，使得电池隔膜用陶瓷浆料、锂电池正负极浆料、电子浆料、墨水、石墨烯和碳纳米管浆料以及原料药批次间的质量控制有了快速简便的解决方案，并且结合美国分散技术公司（DT）的声学技术，可为浆料体系和纳米粒子的粒度、表面化学状态或吸脱附状态及微观电学性质的研究，为破解导致不同批次之间差异和配方不稳定的原因提供了强有力的武器。 什么原理？Xigo系列采用专利的核磁共振技术（中国专利号：ZL200780016435.3），探知乳液或悬浮体系中“颗粒”与“溶剂”之间的表面化学、亲和性、浸润性，并在该状态下计算颗粒的比表面积。这一划时代的分析手段可以直接测量悬浮液，无需样品处理，无需稀释，无颗粒形状的限制，测量过程仅需5分钟，对研磨和粉碎过程可基本实现实时监控。因此，该方法对任何大小、任何形状的固体或液体颗粒，特别是高浓体系样品是最理想的选择。由于软件可以自动设定所要优化的测量参数，操作者几乎不经培训即可操作，它将在品质管控和改善、缩短开发时间和工艺配方的筛选等方面提供助力。 仪思奇科技同时宣布，即将引进法国高端技术公司（Cordouan Technologies）的产品进入中国，包括Vasco kin原位时间分辨纳米粒度分析仪和MAGELLAN（麦哲伦）痕量纳米颗粒浓度测定仪。 Vasco kin 的突出特点就是不接触样品，原位远程测定包装物及反应釜中的粒度分布及随时间的变化，具有极高的分辨率，并且可以和其它分析手段联用。为制药行业的反应监测和药瓶中的蛋白质聚集体纳米阶段的生成监控，甚至监控和研究中药汤剂在加热过程中的粒度变化都提供了有效的技术手段。同时，也是环境科学、功能化油墨，油田化学、锂电材料、催化剂、化妆品和食品等领域的动力学研究工具。 MAGELLAN（麦哲伦）痕量纳米颗粒浓度测定仪用于水中纳米颗粒的痕量表征，灵敏度高于传统的动态光散射技术一万倍，浓度测定低至ng/L的范围，可对10nm到1000nm之间的颗粒进行计数，为水处理在线监测、超纯水监测、滤膜效率及完整性监测以及过滤工艺、污染检测等提供了前所未有的计数手段。结合法国ZetaCAD流动电位分析仪，MAGELLAN将引领我国膜分析技术跨上新台阶！仪思奇（北京）科技发展有限公司是“产学研商网”一体的仪器技术研发及应用推广的仪器科技创新与服务平台。公司致力于在新能源领域、生物医药、催化基础与应用研究等领域的颗粒特性表征的前沿仪器产品和技术的引进与推广。自2019年6月起，仪思奇（北京）科技发展有限公司正式成为美国XIGO NANOTOOLS公司在中国区的总代理，全权负责该公司全系产品在中国境内的推广销售及售后服务工作。法国高端技术公司（Cordouan Technologies）全新纳米测量仪器的引入，更是填补了国内纳米科学研究技术手段的空白，对仪思奇目前拥有的Occhio图像法粒度粒形和zeta电位分析技术，超声法粒度和zeta电位分析技术是一个完美的补充，使公司能够提供（粒度）从纳米到厘米，（固含量）从极稀到极浓的体系的全方位解决方案，纳米颗粒分析研究将如虎添翼！

产品简介Vitae 100 是一款功能强大、高性价比的全自动液体处理工作站，适用于高通量处理多种基因组学研究的实验室以及研究机构。Vitae 100 配有不同的工作模块，包括单通道、4/8通道、振荡、加热制冷等，用户可以根据应用需求选择不同的模块，并且可以灵活应对常规的液体处理工作，如随机挑选、母液配制及盘面重排等。我们具备应用开发解决方案及定制化开发，可为用户提供专属的工作站。Vitae 100 全自动液体处理工作站作为一个真正开放平台，兼容市面上绝大多数品牌试剂耗材，可根据不同的实验需求定制适合的实验模块，灵活性强，性价比极高。因此，拥有Vitae 100 即可将耗时而复杂的液体处理工作实现全自动化，减轻人工负担，节约成本与时间，使您的实验得心应手。 紧凑型设计，动作迅速盘面紧凑：标准9盘位，独特的磁吸与加热振荡器，可节约盘面空间以及实验时间快速分液：每孔分配50μL液体，一块96孔板时间小于1分钟。 具备可扩展性，满足不同实验需求4/8通道空气泵移液模块，兼单通道功能，可全自动化处理1到96个样品。 防止样品污染选配紫外灭菌灯与 HEPA 空气过滤装置，用于消除污染和洁净空气。 兼容性强开放平台，兼容市面上绝大多数品牌试剂耗材。 高效便捷的PIVOTING控制软件界面简洁，一目了然界面人性化设计，拖拽式布局，操作方便，易于使用；模块端口自动扫描，无需用户手动配置，用户使用更为省心；用户根据使用耗材拖拽式布置盘面，方便快捷；拖拽式生成实验流程，每个动作可独立配置参数，满足用户不同的实验需求。 产品参数移液体积：1μL-250μL 或 1μL -1000μL盘面容量：9个盘位（支持各种离心管（0.2 mL 到 50 mL）及孔位数高达 384 孔的各种孔板）液体处理模块：4/8通道空气泵移液模块，配备Tip更换器，兼单通道功能，1~6通道大体积试剂喷加器，分液范围(100μL-5000μL)选配模块：温控模块 （4℃-90℃）试剂冷槽 （4℃-90℃）独特的磁吸与加热（室温-90℃）振荡器，振荡器的转速可根据实际情况进行调节紫外灭菌灯与HEPA空气过滤装置通量：全自动完成96个样品，无须人工干预 应用领域基因组学：DNA/RNA 提取纯化DNA/RNA 片段长度选择酶反应体系构建文库标准化建设与混合单一/多重RT-PCR体系构建测序反应体系构建Oligo合成体系构建磁珠纯化应用 通用液体处理：盘面转移、复制与重排系列稀释、平行稀释ELISA操作（微孔板包被与洗板）母液配制和分装细胞接种和更换培养基细胞检测类实验基于孔板的生化类检测化合物及试剂添加创新点：1.可根据客户换移液端，单通道/四通道/八通道/1+8通道灵活定制； 2.功能模块可根据实际实验操作量身定做； 3.软件界面新颖时尚，使用简便，具有权限管理系统； 4.性价比高，纯国产自主研发，成本大幅降低。 5.测试结果准确可信，产品检验结果符合国际最新ISO9001-2015标准 睿科 Vitae 100全自动液体处理工作站

随着高通量、高灵敏度、高分辨率生物质谱技术的出现，蛋白质组学技术取得飞速发展，蛋白质组学（Proteomics）是蛋白质（protein）与 基因组学（genomics）两个词的组合体，表示“一种基因组所表达的全套蛋白质”，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学研究，就是要把一个基因组表达的绝大多数蛋白质或一个复杂的混合体系中绝大多数蛋白质进行精确的定量和鉴定。蛋白质组本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识。蛋白质组学研究主要包括蛋白质分离、鉴定与生物信息学分析，其中样品中蛋白质的分离至关重要，会直接影响后续的分析结果。对比传统的柱层析分离方式，磁珠法提取蛋白质能轻松实现高通量和多样品平行处理。磁珠法提取蛋白质与提取核酸原理类似，都需经过“结合-洗涤-洗脱”等过程，蛋白纯化后，还需经过裂解、二硫键还原、酶解等多步预处理才能将蛋白样品裂解为可检测的肽段，这些过程同样涉及多次移液、加热、震荡等步骤。Vitae 100全自动液体处理工作站● 睿科Vitae 100全自动液体处理工作站整合移液、磁吸、震荡、加热功能于一体，可全自动完成磁珠法蛋白纯化，可替代蛋白酶解实验过程中大部分手工操作，实现高通量、高效率、高一致性的蛋白纯化。Vitae 100配置了可选4或8通道的空气注射泵移液器，机械定位准确至0.05mm，高通量提取时准确性、均一性均优于手工操作。另外Vitae 100创新性的整合了“磁吸-加热-震荡”三合一模块，节省盘面空间，减少移液步骤，利用自动化操作来减少人为实验操作带来的误差，提升实验结果的稳定性，减少污染的可能性，同时利用自动化精准的时间控制和操作，来优化实验流程，提高实验室运行效率。▲蛋白质组学自动化前处理解决方案睿科生化科技公司睿科生化科技公司是睿科集团旗下专注研发生产生命科学领域样品前处理设备的高科技企业。公司提供自动化的生物样品前处理设备，服务于生物/药物分析、分子诊断、临床检测、蛋白组学、代谢组学等领域。公司核心团队拥有10多年丰富的行业经验，掌握自主核心技术，系统化架构和集成式开发，可提供灵活的定制化服务，为客户提供个性化的产品和服务。

8月6日，北京莱伯泰科仪器股份有限公司联合仪器学习网共同举办了“新一代全自动液体处理平台”新品发布会，重磅推出莱伯泰科新品：MiniLab3000全自动液体处理平台。期间，莱伯泰科有机事业部高级产品经理刘雪和高级应用工程师田鑫为大家详细讲解了产品功能特点，并进行了仪器现场实操演练，受到了在线观众的热烈关注和积极互动，共有652位用户在线观看直播。现场直播画面首先，主持人公布了上周举办的朋友圈海报“集赞赢奖”活动中奖用户名单，共收集到106位用户的点赞截图，十分感谢他们的积极参与，从中我们选取了点赞数排名前20名的朋友，赠送活动奖品。我们已开始添加各位中奖用户的微信，并邮寄礼品。尚未领取奖品的用户，请扫码下方二维码，添加我们工作人员微信，中奖名单如下：此外，在刘雪和田鑫进行仪器实操演练环节，在线观众提出了许多问题，他们都做出了详细解答。如若需要了解仪器更多内容，朋友们可以关注我们莱伯泰科公众号，或者直接与我们联系：400-070-8778。直播过程中，我们总共进行了两轮抽奖活动，第一轮抽奖送出了20分精美礼品，分别是10个全自动高级雨伞和10个精美U盘；第二轮抽奖，根据用户在公屏上打出的“莱伯泰科 yyds”字幕顺序，总共抽取20名幸运观众，赠送乐扣水杯。请还未添加工作人员微信的中奖用户，在此及时添加，以便邮寄礼品。两份中奖名单详情如下：最后，热烈祝贺我们莱伯泰科首次线上新品发布会直播圆满成功，我们莱伯泰科将继续秉承着“全心全意为客户服务”的理念，保证所有客户都能开心、放心、安心。也感谢在本场直播中陪伴了我们一上午的观众朋友们，后续莱伯泰科也会推出更多在线直播活动和仪器新品，好礼送不停。有兴趣的朋友，可以多多关注！ 关于莱伯泰科北京莱伯泰科仪器股份有限公司（股票代码：688056.SH）成立于2002年，公司自成立之初便专注于科学仪器设备的研发，立志为环境检测、食品安全、医疗卫生、疾病控制、材料研究等众多基础科学及行业应用提供实用可靠的实验室设备和整体解决方案。公司发展至今已拥有各类专利及软件著作权100余项，持续通过高新技术企业认证，连续多年被业内媒体评为中国仪器仪表行业“最具影响力企业”。产品服务涵盖实验室分析仪器、样品前处理仪器、实验室设备、医疗设备、实验室耗材和实验室工程建设等。 公司拥有LabTech、CDS、Empore等行业知名品牌，在中国和美国设有研发和生产基地，并在中国北京、中国香港、美国波士顿等地设有产品营销和服务中心。公司产品服务立足本土面向全球，可为全球多种类型用户提供从实验室建设到样品分析的一站式解决方案。目前，公司产品已销往全球90多个国家，共计服务客户3万余家。如需了解莱伯泰科的详细信息，请访问http://www.labtechgroup.com/。

p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 液体活检的监管政策——“双通道”制 /strong /span /p p style=" text-indent: 2em " 从目前中国和美国液体活检的产品来看，液体活检总体来说还处在萌芽期，产品较少，市场尚未完全打开。主要的新产品都是在近年才公布，可以说未来还有很大的发展空间。那些已有获批产品的公司将有机会抢先占有市场，有利于未来的市场竞争。FDA批准有助于产品的市场推广，但并不是产品进入市场的唯一方式，也不是判断产品优劣的唯一标准。目前中国和美国的检测市场实行“双通道”的准入形式，除了FDA批准的产品，获得CLIA（国内是CFDA和卫计委）的产品一样可以进入市场。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/76ae12ad-07ef-4f6c-a658-4d672939a1f8.jpg" title=" 1.jpg" alt=" 1.jpg" / /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 部分用于液体活检的产品 /span /p p style=" text-align: left " span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 资料来源：宽华集团投研部整理 /span /p p style=" text-indent: 2em " 美国液体活检服务主要有两种提供形式：（1）经FDA审批的相关仪器和配套试剂盒；（2）经医疗保险和医疗补助服务中心（CMS）认证的第三方实验室。同时，相关产品服务的宣传由联邦贸易委员会（FTC）监管，在广告中不得存在错误和虚假宣传的情况。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/c7ef1740-c3ad-4653-bbe9-9253d74cbb52.jpg" title=" 2.jpg" alt=" 2.jpg" / /p p span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 美国的液体活检监管体系 /span /p p span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 资料来源：银河证券 /span /p p style=" text-indent: 2em " FDA以《医疗器械修正案》为依据，监管对象为临床级产品，对液体活检相关仪器和配套试剂耗材进行审批。经过批准的仪器和试剂可以作为临床级产品商业化。CMS依据《临床实验室改进法案修正案》（CLIA），针对第三方实验室的自建项目，监管对象为实验室消费级和科研级应用，包括实验室人员知识水平、实验室质量控制、技术检查和能力验证等。第三方医学实验室是美国医疗体系中的重要组成部分，平均每年有近一半的临床样本在其中完成。目前美国有近80%的实验室通过了CLIA认证。获得CLIA认证说明该实验室实验操作的准确性、时效性和可靠性都已得到保证，临床第三方实验室即可根据市场需求开发实验室自建项目（LDT）。 /p p style=" text-indent: 2em " 我国对液体活检的监管认证体系与美国相似，CFDA的职能与FDA类似，依照《医疗器械监督管理条例》对仪器、试剂等进行监管。卫计委与CMS的职能相似，负责发放肿瘤诊断与治疗相关技术的临床试点单位牌照。但2015年7月2日，根据《国务院关于取消非行政许可审批事项的决定》，卫计委决定取消第三类医疗技术临床应用准入审批，之前发布的数十家肿瘤基因检测试点单位将不再独享特权。卫计委简政放权后，对液体活检等第三类医疗技术临床应用的监管由事前准入变为事后监管，责任主体改为由医疗机构对医疗技术临床应用进行管理。与美国监管体系相比，中国的监管体系不仅放宽了对临床试点单位的监管，并且缺少类似美国FTC的职能单位，因此国内产品存在虚假宣传的隐患。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/96eb0863-2717-415b-9406-86bd66316759.jpg" title=" 3.jpg" alt=" 3.jpg" / /p p span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 中国的液体活检监管体系 br/ /span /p p span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 资料来源：银河证券 /span /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 液体活检的商业模式——目前多通过第三方医学实验室提供服务 /strong /span /p p style=" text-indent: 2em " 液体活检公司目前的商业模式主要是以第三方独立医学实验室向肿瘤患者提供个体化医疗相关检测技术服务，随着自主研发的体外诊断试剂陆续获得CFDA认证，公司商业模式将逐步扩展为个体化医疗检测技术服务和提供检测试剂盒产品相结合的商业模式。 /p p style=" text-indent: 2em " 产品和服务的商业化应用主要包括以下几个方面：独立或与第三方体检机构合作，面向健康体检人群，提供肿瘤早期筛查体检套餐检测服务；将医院作为客户和合作伙伴，为医院提供数据分析服务，或协助医院为病人提供癌症伴随诊疗及治疗疗效监测服务；面向科研机构或公司，提供标记物检测、基因测序、数据分析等服务。盈利手段主要以检测试剂盒的销售、提供检测服务和数据分析服务为主。成本主要在于商业推广、试剂盒的生产运输储存、服务中的各种试剂和耗材，仪器折旧以及人工成本。定价通常根据政策法规、市场情况、经营成本等因素综合考虑。 /p p style=" text-indent: 2em " 不同的商业模式，对企业的融资和营收有着不同的影响。液体活检公司目前主要集中于研发CTC和ctDNA，ctDNA公司在融资和营收方面的表现都要优于CTC公司。ctDNA厂商自2010年以来已经吸引了超过37亿美元投资，而CTC厂商则仅融资2.8亿美元。在营收方面，ctDNA厂商也同样占据了显著的优势。这主要源自商业模式的差异：大多数ctDNA厂商在它们自己的CLIA实验室，利用自己开发的方法进行测试，无需FDA的核准。此外，ctDNA的另一个优势是DNA相比活体细胞更容易存储和运输。相比之下，大部分CTC厂商则开发直接销售给终端用户的仪器设备及耗材。CTC分离应用的大部分仪器仍仅用于研究阶段，因为FDA在核准它们的临床应用前，仍需要更多的证据从患者的存活率来证明CTC分析的优势。 /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 液体活检产业链——上下游区分不明显 /strong /span /p p style=" text-indent: 2em " 液体活检全产业链包括上游的仪器、检测试剂盒等耗材供应商和中下游的液体活检服务商。目前产业链上下游区分不明显，上游的制造商往往直接将检测技术和服务提供给医院、科研机构和患者个人，用于早期筛查、指导治疗方案、治疗监测或者复发监控。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/e639f566-a9fc-4fa0-9604-5081238327a9.jpg" title=" 4.jpg" alt=" 4.jpg" / /p p span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 液体活检全产业链 br/ /span /p p span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 资料来源：宽华集团投研部整理 /span /p p style=" text-indent: 2em " 产业链上游的仪器主要包括CTC分析仪、数字PCR仪、二代测序仪、外泌体捕获和分析仪等，试剂盒主要为CTC或ctDNA检测试剂盒，关键原材料是抗体和芯片。中下游的液体活检服务商主要提供ctDNA检测，较少公司提供CTC检测，很少公司提供外泌体检测。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201811/uepic/6c097ad3-27f9-4505-af2c-abf3367e8527.jpg" title=" 5.jpg" alt=" 5.jpg" / /p p span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 2017年液体活检市场的生态系统 /span /p p span style=" color: rgb(165, 165, 165) font-size: 14px " 资料来源：Yole development /span /p p style=" text-indent: 2em " 捕获技术和癌症基因组的认知能力将联合推动液体活检行业的发展，影响对癌症基因组认知能力的因素包括癌症基因组样本量、测序技术、以及基因组数据解读能力。ctDNA的检测方法主要有两种：第一种是以聚合酶链式反应（PCR）为核心技术的检测方法，大致原理为针对肿瘤基因突变位点设计引物，该引物不能与正常基因互补配对，从而在PCR过程中无法扩增正常基因；第二种是以高通量测序为核心技术的检测方法，对获取的血液样本进行高通量全基因组测序，从而获取血液中全部游离DNA的序列信息。然而，现有的ctDNA检测方法均严重依赖肿瘤基因组学知识，基于PCR的方法需要更加完备的肿瘤基因组学知识来设计癌症基因特异性引物，基于全基因组测序的方法更是需要充足的肿瘤基因组学知识储备以解读测序得到的信息。在肿瘤早期筛查市场，由于肿瘤早期ctDNA含量少，需要先富集目的序列再进行深度测序。对DNA进行深度测序并不存在技术难度，市面上有成熟的仪器和方法进行检测。通过ctDNA进行的癌症早期筛查瓶颈主要在于高效的靶向扩增和数据分析，其中最关键的是目的基因的靶向富集技术。血液中的CTC含量稀少，1ml血液中含有数十亿个细胞，其中仅包含1个CTC。因此，CTC检测技术中，细胞的捕获是当前面临的最大的技术瓶颈。捕获的活体CTC，可通过全基因组测序进一步丰富对癌症基因组的认知，以及通过药物敏感性分析、蛋白表达、免疫组化试验等分析加强对肿瘤细胞在蛋白组水平和代谢组水平的认知，对癌症分型、个性化用药、治疗监测以及耐药性分析具有重要的指导意义。 /p p span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 小结 /strong /span /p p style=" text-indent: 2em " 目前中国和美国的液体活检市场实行“双通道”的准入形式，除了FDA批准的产品，获得CLIA（国内是CFDA和卫计委）的产品一样可以进入市场。美国和中国大部分液体活检公司都是走CLIA或卫计委认证，而非FDA或CFDA认证。液体活检“双通道”的准入形式一方面决定公司目前的商业模式主要是以第三方独立医学实验室向肿瘤患者提供个体化医疗相关检测技术服务；另一方面决定产业链上下游区分不明显，上游的制造商往往直接将检测技术和服务提供给医院、科研机构和患者个人；此外，中下游液体活检服务商主要提供ctDNA检测，较少公司提供CTC检测，且ctDNA公司在融资和营收方面的表现都要优于CTC公司。 /p

ESI公司最新退出了一款适用于ICP和ICP-MS的远程液体采样系统，型号为scoutDX。特点与优势：性能：可实现远程采样（最远100米）粘度大的样品可稀释后进行远程采样快速传输到ICP检测器自动样品稀释和自动校准可靠性：所有含氟聚合物路径恒定精密的采样通道没有交叉污染注射泵导入样品能长期稳定全范围的QC和QC内标控制安全性：安全可防泄露、火、排气小体积样品的转移防止样品回流低成本：1台ICP-MS可监测多个采样站设计紧凑，占地面积小模块设计，灵活性大运行成本低关于凯来上海凯来实验设备有限公司成立于2004年，主要经营进口实验室仪器，总部位于上海张江高科，目前在北京，广州, 重庆，杭州，南京，青岛，西安，合肥，长沙等地设有办事处，福建和辽宁设有联络点。凯来最值得骄傲的地方，是拥有一支专业、年轻、充满活力的团队，员工都具备扎实的专业基础，认真负责的态度。我们的关注点不仅在于销售，更在于提供完善的售后服务与解决方案。凯来致力于成为一个专业、灵活、周到的生命科学和化学分析实验室仪器供应商，以快捷的业务模式为每一个实验室客户提供性能卓越、质量可靠、价格合理的产品和服务。更多信息请关注凯来公司官网：www.chemlabcorp.com

德国Hirschmann液体处理产品诚征各地经销商&mdash &mdash 德祥科技有限公司 自1964 年以来，德国赫施曼实验室仪器公司 (Hirschmann Laborgerä te) 一直致力于生产和开发高品质的瓶口分配器、移液器、滴定仪、精密玻璃毛细管等液体操作系列和玻璃仪器。 完美的设计多次获得全球工业设计大奖（如&rdquo iF&rdquo 、&rdquo Red Dot&rdquo ），*的产品销往世界100多个国家和地区，得到了广大客户的赞誉，是您在液体操作仪器领域强有力的合作伙伴。 德祥科技有限公司现作为Hirschmann授权经销商，诚征全国各地经销合作伙伴，欢迎有意者来电来函与我司洽谈联系： 联系人： Ms. Feng 电话： 021-52610159-832 传真： 021-52610122 E-mail： ronnie_feng@tegent.com.cn 网址： www.tegent.com.cn Hirschmann主要产品线： 瓶口分配/液器：手动/电动、高精度、易操作、可灭菌，实现液体样品快速*地移取、分配。耐腐蚀，对有机样品、氢氟酸等强酸样品有专用机型。电动机型可连接PC，并可与滴定仪一体化，实现同机功能切换。 滴定仪：电动/太阳能、高精度、智能化、可灭菌，实现液体样品快速精确地滴定。与分液仪一体化，实现同机功能切换，数据可输出PC。 移液管移液器/移液控制器：手动/电动、高精度、宽量程、人体工学设计、易操作、可灭菌，取代吸耳球，连接移液管实现液体快速精确移取（各种型号移液管都适用）。 微量移液器：单道/多道、手动/电动、高精度、人体工学设计。对于高粘、高压、易发泡的液体有专用型号。 精密玻璃毛细管：高精度、*原材料制造，可用于血液分析，世界顶尖高精密玻璃毛细管仅有的三家生产商之一。 真空镊子：电动、抗静电、可灭菌、一键式操作，取代传统的手工镊子帮助操作者移取敏感、精细物件（如微小电子元件等）。 PS：Hirschamnn所有产品都具有单独系列编号和出厂全检质量报告，DIN EN ISO 9000认证证书、CE认证证书。

德国Hirschmann液体处理产品诚征各地经销商，德祥科技有限公司 自1964 年以来，德国赫施曼实验室仪器公司 (Hirschmann Laborgerä te) 一直致力于生产和开发高品质的瓶口分配器、移液器、滴定仪、精密玻璃毛细管等液体操作系列和玻璃仪器。 完美的设计多次获得全球工业设计大奖（如&rdquo iF&rdquo 、&rdquo Red Dot&rdquo ），*的产品销往世界100多个国家和地区，得到了广大客户的赞誉，是您在液体操作仪器领域强有力的合作伙伴。 德祥科技有限公司现作为Hirschmann授权经销商，诚征全国各地经销合作伙伴，欢迎有意者来电来函与我司洽谈联系： 联系人： Ms. Feng 电话： 021-52610159-832 传真： 021-52610122 E-mail： ronnie_feng@tegent.com.cn 网址： www.tegent.com.cn Hirschmann主要产品线： 瓶口分配/液器：手动/电动、高精度、易操作、可灭菌，实现液体样品快速*地移取、分配。耐腐蚀，对有机样品、氢氟酸等强酸样品有专用机型。电动机型可连接PC，并可与滴定仪一体化，实现同机功能切换。 滴定仪：电动/太阳能、高精度、智能化、可灭菌，实现液体样品快速精确地滴定。与分液仪一体化，实现同机功能切换，数据可输出PC。 移液管移液器/移液控制器：手动/电动、高精度、宽量程、人体工学设计、易操作、可灭菌，取代吸耳球，连接移液管实现液体快速精确移取（各种型号移液管都适用）。 微量移液器：单道/多道、手动/电动、高精度、人体工学设计。对于高粘、高压、易发泡的液体有专用型号。 精密玻璃毛细管：高精度、*原材料制造，可用于血液分析，世界顶尖高精密玻璃毛细管仅有的三家生产商之一。 真空镊子：电动、抗静电、可灭菌、一键式操作，取代传统的手工镊子帮助操作者移取敏感、精细物件（如微小电子元件等）。 PS：Hirschamnn所有产品都具有单独系列编号和出厂全检质量报告，DIN EN ISO 9000认证证书、CE认证证书。

扫描电镜（SEM）在现代科学研究以及工业生产的应用十分广泛，其对于样品的要求往往是固体样品。但是随着科学研究的深入发展以及工业产品的丰富，往往需要对液体样品进行观察，但是扫描电镜需要在真空状态下工作，所以在液体会在真空状态下挥发，并且污染电镜腔体，产生设备损坏。针对以上情况，市场上有厂家研发了大气压扫描电镜电镜，即可以在大气压下观察样品，但是由于气体对于电子束的强烈的散射作用，使得电子束发生偏转，大幅降低了电镜的分辨率，从而影响了其应用的范围。第二种解决方案是利用环境扫描模式，实际上就是可以把样品室的真空度变为很高的气压值，使得低于气体的蒸汽压，从而对含水样品进行观测，但是此种模式的缺点是由于样品仓真空度较低，使得样品室容易被污染，进而影响电镜灯丝的寿命以及拍摄效果。因此人们采用液体封装的技术来解决液体样品观察的技术难题，其本质的设计思路就是将液体单独封装在一个密封空间内，使得液体与样品室进行物理的隔绝，以避免液体对样品室的污染。其原理都是利用超薄的氮化硅材质作封装的窗口，因为氮化硅相对于电子束是透明的，可以透过其观察封装在内的液体样品。图 1液体封装技术示示意图[1]其实现形式有两种，第一种是上下两片的形式进行封装，如图2所示，待测液体放置在中间区域，且承载液体区域的上下两片都采用氮化硅材质。此类封装芯片价格相对较低，但是封装操作较为繁琐。第二种方式是采取侧面封装的结构，如图2所示，待观测液体由侧面注入，并进行封装的模式。图2 上下对粘液体封装系统与侧面液体封装系统示意图那么我们来看一看液体封装的实际应用案例吧。首先是在半导体工业上面，我们知道晶圆的制造过程中，需要对其进行精密的抛光处理，其抛光剂的组成形态往往直接对应着抛光效果的优良，因此经常要对抛光液的颗粒进行观察，但是由于抛光过程是在液体形式下进行的，所以单独观察抛光剂在干燥情况下的状态并不是真实的工作状态，同时由于在液体抛光剂干燥的过程中往往会产生颗粒的聚集，影响颗粒真实状态的观测，因此，液体封装技术对其观察可以得到真实的颗粒的分布状态。图3表示了在干燥后与液体条件下对Cu颗粒的电镜观察照片。 图3 Cu颗粒在不同模式下的电镜图像（左干燥后，右液体环境）第二个应用方面是在催化剂方面，因为催化剂的微观形态直接影响其化学活性以及催化效果，那么其生成的溶液环境的原味观察就十分必要了。如图4所示HAuCl4溶液中的电子束诱导生成枝晶结构的STEM观察。图4 SEM中液体封装系统显示电子束诱导HAuCl4溶液中的枝晶生长（STEM模式）[2]在Li金属电池中，工作环境常常是在液体环境中，其锂化反应的机理也需要在液体环境下进行观察，如图5所示了液体封装观察的示意图以及锂化反应中Si纳米线的反应过程，以及在变化过程中纳米线的形态变化以及成分变化。图5 液体封装锂电池锂化反应示意图[3]图6 LiFePO4材料在Li2SO4电解质中充放电过程中的结构与化学成分变化

p 　　 strong 前言：液体活检的产业发展概况 /strong /p p 　　2017年6月，世界经济论坛与《科学美国人》杂志的专家委员会联合选出了2017年度全球十大新兴技术榜单，其中肿瘤的无创诊断技术成功入选并荣膺榜首。肿瘤无创诊断技术即液体活检(liquid biopsies)的出现，标志着人类在攻克肿瘤的道路上又前进了一大步。与传统的组织活检相比，液体活检具备实时动态检测、克服肿瘤异质性、提供全面检测信息等独特优势。目前，临床研究中，液体活检主要包括游离循环肿瘤细胞(CTCs)检测、循环肿瘤DNA(ctDNA)检测、外泌体及循环RNA(Circulating RNA)检测等，与传统的依靠临床症状或影像学诊断技术比较，利用液体活检技术可以更早地发现疾病进展。 /p p 　　近十年来，肿瘤液体活检研究热度不断攀升，多个国家及地区积极投入其中。目前，美国的 CTC 临床研究水平遥遥领先于其他国家。而在近几年中国的CTC临床研究水平发展势头迅猛，实力不可小觑。援引21世纪经济报的统计，中国目前有47家公司在从事肿瘤液体活检，其中，26家公司选择ctDNA路线，9家公司选择CTC，代表性企业包括华大基因、药明康德、燃石生物、普世华康等。JP摩根和高盛预测，液体活检在全球的市场规模高达230亿美元，其中，美国占据61%的市场份额。中国液体活检市场在5-10年内的市场潜力约为200亿，近年来，肺癌、结直肠癌、胃癌、乳腺癌等癌症的患病率在中国逐年增加，肿瘤分子诊断的需求不断增加。根据国家癌症中心发布的数据，我国5年内诊断为癌症且仍存活的病例数约为749万，适合使用液体活检技术的肿瘤病人至少为 542 万人，占比达到了72%[1]。 /p p style=" text-align: center " img title=" 001.png" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/f169c5ec-0a68-4632-a402-6e5f09b33e47.jpg" / /p p 　　ctDNA检测作为一种“液体活检”技术，其具有简便、快捷，且在一定程上能克服肿瘤时间和空间异质性等优势，近年来被广泛用于治疗前肿瘤分子分型，参与靶向治疗选择性决策，以及在患者治疗过程中评估肿瘤动态和负荷变化，实时监测治疗的有效性，及监测患者机体的微小残留病灶、复发、预后评估、耐药的产生等多个方面。 /p p style=" text-align: center " img title=" 002.png" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/62a15883-e36d-4ace-9040-c9cb57d5a179.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong 　　近10年CTC相关发表文章数 /strong /p p style=" text-align: center " strong img title=" 003.png" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/84f91e00-1c73-4c5f-9df4-e006551a4625.jpg" / /strong /p p style=" text-align: center " strong 　　近10年ctDNA相关发表文章数[2] /strong /p p strong 　　技术的成熟催生了资本市场的火爆 /strong /p p 　　2015年，液体活检技术被《MIT Technology Review》评为年度十大科技突破之一。根据Piper Jaffray预测，2026年广义液体活检全球市场总容量约326亿美元，包括肿瘤领域286亿美元、无创产前诊断(NIPT)20亿美元、器官移植20亿美元。而2026年全球肿瘤液体活检市场容量可达286亿美元，其中早期筛查150亿美元、伴随诊断17亿美元、治疗监测50亿美元、复发监测69亿美元。[3] /p p 　　目前国外从事液体活检的主要公司包括：Grail、Guardant Health、Personal Genome、Trovagene、Genomic Health、Janssen Diagnostics、Qiagen、RainDance和Biocept等，其中不乏有Illumina、罗氏等巨头涉足其中，他们通过成立子公司或并购等方式，布局ctDNA领域，甚至完成大量融资来进行肿瘤早筛的临床研究。而国内的主要参与者包括华大基因、泛生子、达安基因、安诺优达、药明康德、贝瑞和康、诺禾致源等公司。涉及液体活检的基因检测公司早已被具有敏锐嗅觉的资本追捧，有些公司估值已经到了10亿以上。 /p p style=" text-align: center " img title=" 004.png" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/67d60a4d-daf4-4b9f-bd9f-a9724123dcf2.jpg" / /p p style=" text-align: center " img title=" 005.png" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/79e478b4-6cb8-4ef5-8536-3f19c3d37f9a.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong 国外CTC、ctDNA、外泌体公司[4] /strong /p p 　　基于目前行业火爆的现状，业界对于液体活检市场未来的发展也普遍持乐观态度。2017年2月，MARKET RESEARCH FUTURE发布了《Liquid Biopsy Market Research Report Global Forecast to 2022》，该报告预测：2016年至2022年，全球液体活检市场将以21.6%的复合年增长率增长 成本效益和消费者偏好的改变，将推动市场的发展。[5] /p p 　 strong 　液体活检如何一步步成为时代焦点? /strong /p p 　　早在1000年以前，阿拉伯医生Abulcasis就发明了活检技术，该技术的好处是医生可以根据病灶组织学结构对病情做出判断。随着近几年测序技术的发展与成熟，医生还可以对患者的肿瘤组织测序，进而给出更加精确的诊断结果。 /p p 　　但随着科学家们对肿瘤研究的深入，他们发现在肿瘤的诊断和治疗过程中组织活检技术具有一定局限。 /p p 　　液体活检作为体外诊断的一个分支，通过收集患者的血液或尿液等对肿瘤等疾病做出诊断。其中ctDNA作为一种无创肿瘤标志物，被认为具有良好的发展前景，但当时在ctDNA的检测技术上仍面临一些问题，如敏感性不足、适用范围有限等。 /p p 　　这里就不得不提到一篇突破性的研究，2014年4月，发表在Nature Medicine杂志上的一篇研究报告中[6]，来自斯坦福大学医学院的研究人员就开发了一种高敏感性的ctDNA定量检测方法(cancer personalized profiling by deep sequencing，Capp- Seq) ，有助于解决敏感性、适用范围等困难。 /p p 　　参与该研究的Maximilian Diehn博士说：“我们的目标是开发出一种能够克服ctDNA领域两大关键障碍的方法：首先，极高的检测灵敏度，能够检测出血液中极少量的ctDNA 第二，能广泛应用于绝大多数癌种，适于临床应用。” /p p 　　即便是在晚期肿瘤患者体内，绝大多数的循环DNA(cfDNA)都来自于正常的、非癌性细胞。因此需要采用一种综合性的策略从血液中分离出循环肿瘤DNA(ctDNA)，检测ctDNA的变异情况。为了提高这一技术的灵敏度，研究人员在提取、处理和数据分析方面进行了优化。 /p p 　　研究人员将这种通过深度测序来进行肿瘤个体化变异分析的技术命名为CAPP-Seq。该研究报道了CAPP-Seq技术在非小细胞肺癌(NSCLC)中的应用，研究人员在NSCLC引入Capp-Seq技术，设计为能够覆盖在95%以上肿瘤中鉴别出的体细胞突变，利用该技术，研究人员能够在100%的II-IV期NSCLC患者及50%的I期NSCLC患者的血液中检测到ctDNA的存在。在检测突变率低至0.02%的等位基因突变时，该技术的特异性能够达到96%。 /p p 　　尽管本研究的样本源自罹患非小细胞肺癌的患者(包括大多数的肺癌，如肺腺癌、肺鳞状细胞癌和大细胞癌)，但研究者发现这种方法应该可以广泛适用于不同的实体瘤。未来，其应用场景将不仅局限于追踪肿瘤确诊患者的病情进展，还能够用于健康或高危人群早期的肿瘤筛查。 /p p 　　两年后，同样是斯坦福大学医学院的研究人员进一步开发出一种称为集成数字错误抑制(IDES)的校正方法，能够检测到频率低至0.004%的基因突变，相关研究于2016年5月刊登于国际杂志Nature Biotechnology上[7]。2014年时，Capp-seq技术的检测极限是0.02%，存在一定的错误率，为矫正这些错误，研究团队首先设计了一种分子标签技术，许多ctDNA检测开发者也采用这种方案来降低错误率。由于单链DNA和双链DNA分子标签技术各有优劣，双链DNA分子标签技术在降低错误上效果更佳，但效率不及单链DNA，因此不适合ctDNA量有限的样本。为此，斯坦福大学的研究人员着手设计出一种混合策略。首先，他们设计出测序接头，可用于单链和双链的分子标签 第二步，斯坦福的团队设计了一种计算工具，可以校正测序或PCR的系统错误。 /p p 　　随后，研究人员在NSCLC患者样本上验证了上述检测。首先，他们检测了41名晚期NSCLC患者的EGFR热点突变。从88个血浆样本中检测到412个EGFR变异，所有变异都已经通过肿瘤活检样本确认。接着，他们在参考细胞系上评估了检测的技术限制，创建了参考细胞系混合物，等位基因的变异频率在0.05-1.6%。他们发现，分子标签技术和计算校正方法是互补的，结合使用效果更佳。这种方法的理论检测极限是0.00025%。最后，他们利用这种方法来监控30名NSCLC患者中的突变(这些患者的肿瘤已经过基因分型)研究人员发现，他们能够检测到频率低至0.004%的突变。 /p p 　　在有了优秀的技术后，斯坦福大学的科研人员创立了Capp Medical公司，致力于通过基因组学的方法来检测患者肿瘤类型。 /p p 　　而另一边，跨国公司罗氏早在几年前就已经开始着手开发基因组学检测肿瘤的新方法。2008年罗氏公司以34亿美元的价格收购了Ventana Medical Systems公司，迈出了基因检测肿瘤患者的第一步。 /p p 　　2015年4月，研发出CAPP-seq技术的团队以及其归属的Capp Medical公司也被罗氏收于麾下，不难看出罗氏希望在液体活检这一领域继续深入的决心。 /p p 　　罗氏公司拥有世界上最强大的肿瘤研发部门，在获得了优秀的团队和技术的条件下，自然是如虎添翼。2017年5月8日，罗氏宣布在全球推出AVENIO ctDNA分析试剂盒，其能针对靶向用药、耐药机制研究、动态监测三个不同临床应用方向，推出了三款Panel，包括AVENIO ctDNA Targeted Analysis Kit、AVENIO ctDNA Expanded Analysis Kit及AVENIO ctDNA Surveillance Analysis Kit。此三款Panel可以全面的检测包括SNP、InDel、SV及Fusion在内的肿瘤变异类型，并且匹配后续的数据分析服务器、分析软件，提供一站式的ctDNA检测整体解决方案。这款产品结合了肿瘤液体活检的便捷性与NGS的高效性，能够帮助研究人员自行完成检测及分析。同时，多项研究结果验证了AVENIO ctDNA分析试剂盒在不同的实验室均能保持良好的稳定性和可重复性。 /p p style=" text-align: center " img title=" 007.png" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/f0ad901c-cf56-4b6e-a67e-9da1b8af7e25.jpg" / /p p 　　基于NGS方法检测的三款试剂盒可广泛应用于肿瘤学研究： /p p 　　AVENIO ctDNATargeted试剂盒是基于靶向捕获测序技术的肿瘤液体活检基因分型检测试剂盒，包含17个NCCN等权威指南推荐的基因，用于肺癌、结直肠癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤靶向用药基因检测。 /p p 　　AVENIO ctDNA Expanded 试剂盒是基于靶向捕获测序技术的肿瘤液体活检基因分型检测试剂盒，包含77个NCCN等权威指南推荐的基因及临床研究热点基因，可应用于肺癌、结直肠癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌等多类肿瘤耐药机制研究。 /p p 　　AVENIO ctDNASurveillance试剂盒是基于靶向捕获测序技术的肿瘤液体活检试剂盒，包含NCCN等权威指南推荐基因在内的197个基因，用于肺癌和结直肠癌等肿瘤突变负荷长期监测研究 /p p 　　在这儿不得不提到罗氏强大的战略思维和长远眼光。从早年的Genetech到液体活检领域的“祖师爷”Capp-seq技术，罗氏优秀的投资和并购策略让其在生命科学领域成为了强大的中流砥柱。 /p p strong 　　液体活检技术的缺点及行业壁垒 /strong /p p 　　凭借一管血液来检测肿瘤是数十年来全球医学界共同的梦想。而液体活检技术能利用各种检测手段从血液中捕捉肿瘤相关基因变异信息，用于肿瘤分子分型、靶向用药、耐药机制研究、复发监测等，可避免传统组织检测方法难以解决的肿瘤异质性问题、无法实时动态监测等局限。 /p p 　　尽管如此，液体活检技术还存在一定的技术缺陷。对于肿瘤早期筛查而言，CTC和ctDNA检测都面临的一个共同挑战，即二者DNA浓度较低，对检测技术的灵敏度要求极高。其次，液体活检的另一个挑战来自成本。在高成本的基因检测领域中，价格因素可能会影响液体活检的广泛应用。第三个挑战是液体活检并不适用于所有类型的肿瘤，由于血脑屏障会阻碍ctDNA进入血液，比如，胶质母细胞瘤释放到外周血中的ctDNA极低，并不适合液体活检。 /p p style=" text-align: center " img title=" 008.png" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/9ef9005c-1ea0-4b3c-b02b-7df5a7dbad43.jpg" / /p p 　　除了技术层面的问题以外，将液体活检研究成果转化为临床应用仍面临几个关键的壁垒。 /p p 　　一、缺乏检测标准，从Panel设计中基因位点的选择、实验过程中的质控标准建立、生物信息学分析流程的标准化，以及变异解读中数据库的选择，不同实验室之间并未形成统一的标准，检测结果可比性不强，因此，目前这种检测方法进入常规临床检测存在着一定障碍。标准化的试剂盒、规范化的数据分析流程、专业的遗传咨询解读，以及全流程整体解决方案是液体活检在临床广泛应用的前提。 /p p 　　二、患者或消费者的经济承受力。包括我国在内的许多国家并未将液体活检纳入医保报销范围内，而液体活检产品往往价格不菲。此外，肿瘤液体活检并未纳入肿瘤患者管理的标准临床指南中，这进一步影响了保险机构的承保决定，阻碍了液体活检的普及。 /p p 　　三、基础研究人员和临床医生间的信息互通。基础研究是液体活检技术发展的基石，而临床医生则负责落实患者的具体治疗方案，双方是否能够非常顺畅地交流信息，并且对于患者的检测报告以及治疗方案达成共识，这直接决定了液体活检技术能否真正让患者获得更好的个性化治疗。 /p p 　　随着检测手段的不断进步，检测灵敏度和稳定性的逐步提高，技术瓶颈终将突破，监管政策也将逐步完善。 /p p strong 　　科学研究仍未停止脚步 /strong /p p 　　2017年关于液体活检的研究依然如火如荼地进行，世界各地不断出现重磅级的研究成果。 /p p 　　今年不得不提到8月份NEJM杂志刊登了香港中文大学的卢煜明(Dennis Lo)教授的重磅级研究成果。 /p p 　　由于ctDNA在血液中的含量非常低，因此卢煜明教授带领其研究团队将研究对象转为会引起鼻咽癌的EB病毒的DNA。研究人员优化了筛查方法，结果显示，该种方法有效提高了鼻咽癌的早期检测和生存率。[8] /p p 　　EB病毒与鼻咽癌的发生有密切相关性，因此实验设计寻找从肿瘤进入血液大量的病毒DNA，而不是癌细胞本身的DNA。研究人员在约2万名进行筛选的男性中，发现1112人(5.5%)检测出病毒DNA。其中309人在一个月后进行了验证性实验。通过内窥镜检查和核磁共振检查后，确认34人得了肿瘤。34种肿瘤中有16例是非常早期的，这种肿瘤在早期阶段不会有任何症状。三年后，除了一个病人外，所有的病人都活了下来，在接受标准放疗后没有肿瘤的迹象。相比之下，通常只有70%的鼻咽癌患者能够存活。 /p p 　　使用肿瘤筛查也能够改善很多肿瘤患者的生存率，但研究人员认为肿瘤筛查的费用较为昂贵，据统计593名个体共需要花费28600美元来筛查一种肿瘤。要知道在诸如美国等地方，鼻咽癌非常罕见，用过高的花费来筛查鼻咽癌显得没有必要。而这种通过检测EB病毒DNA的液体活检筛查技术非常具有潜力，未来能够帮助挽救众多肿瘤患者的生命。 /p p 　　另外，8月14日，发表在Cancer Cell杂志上的一篇研究报告中，来自荷兰阿姆斯特丹自由大学医学中心的研究人员设计了一种新型的液体活检途径，即通过检测被循环血小板(circulating platelets)吸收的肿瘤RNA。这种名为thromboSeq的新型检测技术能够以接近90%的准确率对非小细胞肺癌进行诊断[9]。 /p p 　　研究人员表示，thromboSeq技术可以检测到血小板中约5000种不同的RNA分子，通过不断优化它的RNA基因panel(panel of RNA genes)，最终找到了少数能够预示肿瘤的RNA。研究人员利用这一检测方法对血液样本进行了测试，以确定其在肿瘤诊断中的准确性。结果证实，thromboSeq诊断早期肿瘤的准确率为81%，诊断晚期肿瘤的准确率为88%。在一个匹配年龄、吸烟状况和血液存储时间的验证对照组中，该方法的准确率高达91% 研究人员表示，这种新型技术未来有望进入临床试验中。 /p p 　　2017年10月，一项发表在国际杂志Nature Materials上的研究报告中，来自加州大学圣地亚哥医学院、穆尔斯肿瘤中心和中山大学癌症研究中心等机构的研究人员基于对包含循环肿瘤DNA(ctDNA)的血液样本进行研究，开发了一种用于肝细胞癌早期诊断和预后判断的新型液体活检技术[10]。 /p p 　　该研究中研究者共使用了1098例肝癌患者和885例正常人的临床样本数据。首先根据肝癌样本和正常样本的临床数据，从485，000个甲基化标记(来源于TCGA数据库)中筛选出了1，000个甲基化标记，随后挑选出扩增效率较高及甲基化特征多样化的401个甲基化标记进行深入研究。通过计算机深度学习715个肝癌患者ctDNA和560个正常样本的临床数据后，从401个甲基化标记中筛选出了10个甲基化标记，建立了肝癌的综合诊断模型cd-score。随后研究人员针对1049例肝癌患者的临床数据进行分析，得到综合预后模型cp-score(combined prognosis score)，并拟合出了Kaplan–Meier 曲线。研究发现，预后情况不同的肝癌患者其cp-score具有显着不同。多变量分析显示cp-score和风险分级密切相关，并且可以作为一个独立的风险因子用于肝癌的风险分级。 /p p strong 　　逐渐完善的监管政策 /strong /p p 　　除了有技术上的突破，近年来国家在政策上对于包括液体活检在内的测序行业也逐渐利好。 /p p 　　目前我国对于基因检测项目进入临床，实行的是双重监管。根据CFDA 在2014 年1 月公布的《食品药品监管总局办公厅关于基因分析仪等三个产品分类界定的通知》，基因测序诊断产品(包括基于测序仪及相关诊断试剂和软件)，符合医疗器械的定义，应作为医疗器械管理，其中测序反应通用试剂盒(测序法)划为I 类医疗器械管理产品，基因测序仪作为III 类医疗器械管理。 /p p 　　2015年4月国家卫计委发布了《关于开展肿瘤诊断与治疗高通量测序检验(多基因检测)室内质量评价预研的通知》，2015年7月卫计委又发布《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)》和《肿瘤个体化治疗监测技术指南(试行)》。 /p p 　　总的来说，所有仪器设备，试剂归CFDA 报批管理，临床实验归属卫计委管理。 /p p style=" text-align: center " img title=" 009.png" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201712/insimg/ef35b33c-6d37-430a-94d6-981e3f1b8e8e.jpg" / /p p 　　经历了“全面叫停”后，近年来国家政策对于基因测序、精准医疗行业的发展起了很大的推动作用。2015年3月卫计委发布《国家卫生计生委医政医管局关于肿瘤诊断与治疗项目高通量基因测序技术临床应用试点工作的通知》，试点包括了14家医疗机构和6家第三方检验实验室。另外还发布了以肿瘤个体化治疗、药物代谢酶及作用靶点基因检测的技术指南，旨在规范化推广相关技术。 /p p 　　2016年4月国家发改委下发了《关于第一批基因检测技术应用示范中心建设方案的复函》正式批复27个省市发改委关于基因检测技术应用示范中心的建设方案。 /p p 　　2017年1月，国家发改委正式印发了《“十三五”生物产业发展规划》，明确了基因检测能力覆盖50%以上出生人口的目标，强调了以个人基因组信息为基础，结合蛋白质组、代谢组等相关内环境信息，整合不同数据层面的生物学信息库。 /p p 　　2017年11月，CFDA和卫计委联合颁布《医疗器械临床试验机构条件和备案管理办法》，规定了对列入需进行临床试验审批目录的第三类产品，应当在三级甲等医疗机构专业范围内开展临床试验 规定开展创新医疗器械产品或需进行临床试验审批的第三类医疗器械产品临床试验的主要研究者应具有高级技术职称并且参加过3个以上医疗器械或药物临床试验等等。 /p p 　　综合来看，国内政策对于液体活检和其他基因测序产品，经历了“叫停”、“试点”、“规范发展”三个阶段，未来的市场仍有很大的空间。 /p p 　　令人振奋的是，2017年11月，FDA在一个月内先后批准了纪念斯隆凯特琳癌症研究中心的多基因检测分析产品MSK-IMPACT?，以及Foundation Medicine 的 FoundationOne CDx，这两款产品的获批在美国甚至全球都具有相当重要的意义。 /p p 　　从FDA的审批标准中，我们不难看出对于肿瘤基因检测产品，FDA在检测结果的精准性、数据的管理更新过程、和报告解读能力三个方面均高度关注，这也是给国内从业者的一些启示。 /p p 　　CFDA对于国内的政策制定，很大程度上都会借鉴FDA的做法，包括目前对于基因检测临床的双重监管等，而FDA在批准基于NGS的肿瘤检测产品的实践中，已经踏出了重要的一步。这个消息公布后，对于业内人士来说是机会和挑战并存，但对于整个行业来说，无疑是前景大好。 /p p strong 　　结语 /strong /p p 　　液体活检是一项富有挑战性的新技术，在肿瘤精准医学中扮演着越来越重要的角色。随着检测技术的标准化，检灵敏度和特异性的提高，液体活检将成为肿瘤诊断的重要技术手段。液体活检要广泛进入临床应用，不仅需要检测技术灵敏度和特异性的提升、临床研究的广泛积累，还需要建立相应的检测标准、建设规范的监管体系。 /p p 　　如今，越来越多的科研单位和企业已投身该领域，2017年即将结束，相信2018年液体活检技术将在肿瘤分子分型、靶向用药、耐药机制研究、复发监测，甚至肿瘤早期筛查等多个领域实现不断地突破与发展。 /p p 　　参考资料： /p p 　　[1].《肿瘤液体活检市场初成预计中国市场规模200亿》，21世纪经济报 /p p 　　[2].数据来源Pubmed数据库 /p p 　　[3].数据来源Piper Jaffray测算 /p p 　　[4].数据来源火石hsmap /p p 　　[5].Liquid Biopsy Market Research Report Global Forecast to 2022， MARKET RESEARCH FUTURE /p p 　　[6].An ultrasensitive method for quantitating circulating tumor DNA with broad patient coverage. Nat Med. 2014 May 20(5)：548-54. /p p 　　[7].Integrated digital error suppression for improved detection of circulating tumor DNA. Nat Biotechnol. 2016 May 34(5)：547-555. /p p 　　[8].Analysis of Plasma Epstein-Barr Virus DNA to Screen for Nasopharyngeal Cancer. N Engl J Med. 2017 Aug 10 377(6)：513-522. /p p 　　[9].Swarm Intelligence-Enhanced Detection of Non-Small-Cell Lung Cancer Using Tumor-Educated Platelets. Cancer Cell. 2017 Aug 14 32(2)：238-252.e9. /p p 　　Circulating tumour DNA methylation markers for diagnosis and prognosis of hepatocellular carcinoma. Nat Mater. 2017 Nov 16(11)：1155-1161. /p p & nbsp /p

p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201709/insimg/23bbbddb-dca5-4a13-aea3-4a0b5dcacc1e.jpg" title=" 奥美泰克.jpg" / /p p 　　AMTK& reg LH1406低通量自动液体处理工作站基于低通量液体处理而研发的一款设备，该设备具有体积小巧、灵活、可整合性强、移液头自动切换、高性价比、高开放性等特点。 /p p 　　可整合磁分离模块、加热、制冷模块、震荡模块。该系统可用于单管、整板单排转管、配液、液体梯度稀释等流程，应用于NGS样品前处理、检验检疫、法医、药物筛选、基础科研、分子生物学等多个行业领域 软件人机交互界面友好， 编程灵活、并具有断点续接功能可从任意一步开始，停止，和实时板位图对照等独特功能，并可实现样品条码跟踪和内部管理系统信息互通功能。 /p p br/ /p