血浆

想问一下做血浆脂肪酸检测，血浆质控样品要经过怎样的处理才能混匀做成质控呀？先前涡旋三分钟定量分析有些脂肪酸RSD相差比较大？所以想问问大家是怎样做的？

血浆速冻技术的新进展血浆是抗凝全血经物理方法分离制备的一种血液成分，其临床应用是现代成分输血的重要组成部分，尤其是新鲜冰冻血浆（PPT），在临床治疗中更有其重要的作用。血浆是多种血浆蛋白质的混合物，其中包含白蛋白、免疫球蛋白和凝血因子类蛋白。为了有效的保护血浆内的有效成分，特别是凝血因子，并随着我国成分输血技术的发展，新鲜冰冻血浆及冷沉淀的制备技术及应用随之也越来越广泛。目前我国《血站基本标准》实施细则中第92条规定：制备新鲜冰冻血浆时，抗凝剂为CPD、CP2D、CPDA-1的血液应在8小时内分离并速冻；抗凝剂为ACD的血液应在6小时内分离并速冻。其质量要求： 含有全部凝血因子。血浆蛋白为6~8g/%;纤维蛋白原0.2~0.4g%;Ⅷ因子含量：≥0.7 IU/ml 规格。可以看出，时间和温度是制备出质量合格的新鲜冰冻血浆两个关键点，尤其是对于活性很高的凝血因子VIII和V，时间和温度是影响其活性的重要因素。中国医学检验杂志1995年3月第18卷第2期《血浆凝血因子测定的影响因素探讨》，作者通过对比经过不同温度和时间后FVIII含量发现：32℃条件下6小时活性只有48%，24小时5%4℃条件下6小时活性有95%，24小时剩29%。由于在血浆结冰过程中，凝血因子VIII含量与时间呈指数下降关系，所以速冻时间越短，凝血因子VIII和V的损失也就越小。国际上通用的标准是1个小时内速冻完成，如果能在30分钟内完成速冻，那么效果将会更好。因此要保证新鲜冰冻血浆及冷沉淀等成分的疗效，必需在采供血过程中控制好冷链和时间链，其中血浆速冻技术是其中一个重要环节，速冻的时间和效果将直接关系到血浆及冷沉淀产品的质量和疗效。 随着《中华人民共和国献血法》的实施和无偿献血的深入开展，血站的采血方式已由有偿献血时代的站内采血为主转向站外无偿流动采血。要达到采血后6h（或8 h）内分离血浆并冻结有时存在一定的困难。因此为保证临床使用新鲜冰冻血浆、血浆冷沉淀的质量尽可能的缩短血浆速冻的时间就显的尤为重要了。我国血站采用的血浆速冻技术主要经过了以下几个发展阶段：1、用超低温冰箱来进行血浆速冻。此种方法的主要不足在于：冰箱内空间有限，将血浆叠加在一起，上下接触不均匀。冰箱制冷效率有限，速冻时间较长（通常需要6-8h）。显然是达不到要求的。2、强制对流型速冻机。最初的血浆速冻设备我们称为强制对流型速冻机（blast freezer）。该类设备的设计思路来源于普通冰箱，也是使用空气作为冷媒。通过更强的制冷功率来得到低温空气，并且使冷空气快速的流动，加快冷空气与溶液的热交换来实现快速冻结的目的，因此，也称之为“冷风制冷”。由于这类设备内冷空气流动速度比冰箱内空气流动速度有了很大提高，使得制冷效果得到提高，缩短了血浆冻结的时间。对于超低温冰箱来说，这种方式使得速冻的时间已经得到了大大的缩短，但由于关键技术的不足，其速冻时间通常都需要2h。3、平板接触式速冻机。这类设备是根据最新的平板接触制冷技术制造而成。它通过改变传统的“空气”冷媒，用特制不锈钢作为冷媒，加快血浆热交换实现速冻，从而达到缩短速冻时间的目的。今天，我们来讲讲血浆速冻技术的新进展：平板接触式血浆速冻技术。平板接触式速冻（contact plate freezing）。该技术通过高效压缩机使金属板稳定在-50℃的温度，血浆袋通过与-50℃的低温金属板直接接触进行热传递，由于空气的热传导率仅为0.28 w/m•k，而金属的热传导率为58.02w/m•k是空气的上百倍。因此使得降温效率得到极大的提高，降温过程所需时间更少，因此可以得到更多的凝血因子，得到更好质量的新鲜冰冻血浆。平板接触式速冻技术，虽然出现的时间不长，但是它已经以其强大的技术优势已经在国际上占据了血浆速冻市场40%的份额。

大肠埃希菌也产生血浆凝固酶，可是通常做大肠埃希菌鉴定时没有做血浆凝固酶试验。而金黄色葡萄球菌要做。是什么原因？

今天给测试中心的一个老师打电话说了我的样品处理方式。我取血浆100ul，加入200ul的乙酸乙酯涡旋3min,然后高速离心12000r/min 10分钟，取上层清液进气质，测试中心的老师说这样不行，必须的衍生化，因为血浆中还有很多的甘油三酯，会污染气质，我看文献都没有衍生化呢？

本人用沉淀蛋白方法处理血浆样品，100ul血浆+100ul对照品（10ug/ml)+400ul乙腈沉淀后，离心取上清液吹干，100ul流动相复溶，进样20ul，用液相做的，结果发现峰面积比纯的10ug/ml对照品还要大，回收率大于100%，而空白样品中没有干扰，我就比较困惑了，不知道什么原因，请大家帮帮。多谢！

五糖分子量在2000一下，想做其在血浆中的定量，已知其完全游离于血浆中不与血浆蛋白结合，用3KDa的超滤离心管离心取滤液进样但未出峰，是孔径太小还是提取方法不合适，求指教

请问：在处理血浆样品的时候，有什么方法可以既沉淀蛋白又去处血浆中的氯离子。谢谢！！

做一个药物的药物动力学，样品是血浆基体，药物极性特强，含氮多碱性，在C18上基本不保留，想用离子色谱做试试，但没有查到离子色谱做血浆样品的文献，样品准备用乙腈沉淀蛋白后离心的上清液直接进样，离子色谱柱可以吗？

请高手指点。我前一阵做血浆中的药物检测，用的是AB公司的UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS，血浆前处理采用乙腈：水=1：1沉淀蛋白，结果[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]检测时，柱压飙升，采用的是水-甲醇梯度洗脱，0-5min,0-100%甲醇，请问造成柱压飙升是不是因为蛋白没有除净？怎样才能把血浆处理得更干净呢？谢谢

新手，我现在有一份血液，没药物的，做工作曲线。我是直接加甲醇沉淀蛋白后上清就是血浆吗？然后加标曲溶液就是工作曲线了？

使用液相色谱检测血浆中样品含量注意事项，已经操作步骤？还有开始能够检测出样品含量一段时间和为什么检测不出呢？很迷惑

小女在做方法学时，用的血浆在-20℃冰箱中放了很久（几个月），实验中也没什么异常，做预试时，用新鲜的空白血浆添加样品和内标，响应比同等条件下的老血浆小了百分之十左右，大家有没有遇到过类似情况呀，急啊，还望各位大侠赐教~~

本人正在使用岛津HPLC做一条肽的药代动力学，用的C18硅胶柱，流动相是水和乙腈梯度洗脱（都含有千分之一三氟乙酸），求做过多肽血浆样品的高手给一些血浆处理方法的建议，目前使用乙腈沉淀法发现峰几乎检测不到，加了点甲酸好一点。参考文献中做万古霉素的方法，血浆样品加入25%三氯乙酸酸与乙腈（2:1），药品的峰还是特别小。使用乙酸乙酯萃取法也做了，提取下层水层，也是没有峰，而且血浆中杂蛋白特别多。多肽药做血浆样品是不是不能用乙腈沉淀法呢？调整乙腈的比例会出现理想的效果吗？最近几天测纯样品（当天解冻的)不加到血浆里发现目标峰面积表小很多，内标就比较正常，不清楚是柱效问题还是紫外检测器问题。以上问题求高手给一些建议，感激涕零！

本人是做药代动力学方面的工作。经常测定药物在体内代谢后的浓度，例如在血浆中，全血中血清中等。但是本人外行，一直不清楚一些道理，例如血浆用水稀释倍数对药物浓度有什么影响，红细胞如何破裂，有的药物容易进入红细胞，而有的药物游离在血浆中。哪位大仙有相关的文献啊！急用，十分感谢！

SPE 规格是 3mL 35mg.250uL 的血浆加2mL 缓冲液混匀之后上样. 结果有的SPE柱堵的非常严重. 血浆样品即使加高负压也不能透过SPE柱.药物含量很低,不能再减少血浆体积了.请问,哪位大侠知道如何解决这个"堵"的问题?

我要用液质联用技术定量检测血浆中的固醇类物质，首先向血浆中加入乙腈，有沉淀产生，需要离心取上清液吗？

我是学医的，最近老板叫我看有关用高效液相测定人血浆中氯吡格雷的血药的文献，以便下一步开展这方面的科研任务，我也看了一下文献，但是我对文献当中的关于血浆样品处理方法还是不是很清楚，感觉文献当中讲的有些太简洁了，有可能是我不是专门搞这方面的研究的问题的吧。我想请教大家关于血浆样品该怎样处理啊，越具体越好！谢谢大家了！

我做血浆样品有半个月了，预考察药物在血浆中的稳定性（水解反应的过程）用血浆样品直接进样发现蛋白对药物的检测有干扰，后来改了条件，好不容易运行出来了，但第二次又不能重现；也用超离心的办法虽然做出来了，但每次预处理花的时间长，不能监测反应的过程（反应1小时多就完成了）。谁做过这方面的阿，还望指教！！！

我用沉淀蛋白处理血浆样品，为了使药物更好的从血浆蛋白中释放 需要加入磷酸盐 可以进质谱么？

各位大侠！我是刚毕业的本科生，我做生物等效性的，在处理空白血浆的时候一直有干扰峰，换流动相没法消除，分不开峰，现急求血浆处理方法，我准备用５％高氯酸沉淀蛋白的方法，但是对于高氯酸沉淀后，取上清液直接进样有点担心，ＰＨ值合适吗？能直接进样吗？会不会伤柱子啊？请各位大侠帮帮新人！先谢谢啦！我做了好多次了，空白一直有干扰，是新鲜的空白血，应该不会污染到的．

大家讨论一下：血浆样品处理方法的前处理方法哪个好，比如液液萃取，还是沉淀蛋白法好？有听说血浆样品用沉淀蛋白法比较好，胆汁尿液之类的样品用液液萃取法比较多，大家有什么经验分享一下吧

近在做一个甾体类的药物，极性挺小的，现在在选择萃取溶剂，但是不知道该用哪种，大家一起讨论下吧我用了一个环己烷和乙酸乙酯的混合溶剂，但是血浆样品处理完做液相重复性太差，并且20分钟以后基线就漂移上去了，这是为什么？我还可以用什么萃取溶剂呢？比如己烷，异丙醇等，请大家讨论下 ，单独乙酸乙酯也用过，但是重现性不是很好

请问我想处理含药血浆，也就是想从血浆中提取该药，药为环烯醚帖苷类，我选何种SPE小柱？还有其他处理方法吗？

作者：李寅;陈凤仪;张国添;杨辉;黄玉玲;谢清春;钟鸣; (广州市番禺区中心医院;广东药学院药物研究所;广州汉方现代中药研究开发有限公司;)摘要：目的:测定厄贝沙坦在人血浆中的蛋白结合率。方法:采用HPLC法测定厄贝沙坦的浓度。采用平衡透析法测定厄贝沙坦的人血浆蛋白结合率。结果:以Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾水溶液(磷酸调pH至2.6)(45∶55)为流动相,检测波长为245 nm,血浆样品中其他成分不干扰厄贝沙坦的测定,厄贝沙坦的线性范围为0.10~10.40μg/ml,定量下限为0.10μg/ml。厄贝沙坦的低、中、高浓度的蛋白结合率分别为93.0%、91.5%、92.3%。结论:厄贝沙坦具有较强的蛋白结合率。谱图：无

有没有大神儿做过栀子苷的血浆前处理啊，文献说其极性大，乙酸乙酯提取回收率不及格，用乙腈跟甲醇，为啥我做的乙酸乙酯提取回收率不高，信号只有4次方，但是甲醇，乙腈前处理只有5000左右的信号，有没有帮忙解答一下啊。奶茶答谢啊，研究生太难了，处理过程就是加甲醇或者乙腈，离心取上清液。氮气吹干，流动相复溶，过膜，进样，别的药物也是这样做的，没啥问题啊，555555

最近做血浆样品遇到了这样的情况：做方法学的时候，空白血浆添加药物出的峰形很好，与杂质峰的分离度等都很好，所有方法学考察的数据都很好。到做实际样品的时候问题出现了，在进样后1min的时候以及目标峰刚结束的时候出了两个很大的杂峰（不成峰形，就是一大坨），后面那个杂峰干扰目标峰。刚开始以为是进样时间长了导致柱子脏（实际上柱压没变化），就用常规冲洗方法反复冲洗色谱柱，再进样还是这个情况，而且很有规律：每次序列进样前5个样品没问题，从第6个样品开始那两个大杂峰就出现了。百思不得其解，后来查药物手册才知道这个药物与血浆蛋白的结合率达99%。 我的前处理方法是：200uL血浆+2mL正己烷/异丙醇（95：5，V/V）涡旋2min后10000r/min离心10min,取上层40度N2吹干，流动相复溶，12000r/min离心10min,取上清HPLC检测。 尝试过加酸（1mol/L盐酸）或者乙腈等沉淀蛋白方法，杂峰多、干扰严重且回收率低。用我上述方法回收率等方法学数据很好，峰形也很好，就是做实际样品时出现了那样的情况。 想请群里的朋友帮忙想想办法，解决这个问题！谢谢！

报道了一种简单的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]紫外检测器测定人血浆中环丙沙星的方法。该方法用乙腈沉淀蛋白质将药物与血浆蛋白分离。使用ACE 5 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）与磷酸盐缓冲液（pH 2.7）和乙腈（77：23，v/v）组成的等度流动相进行分离。紫外检测器设置为277nm。该方法在0.05–8 μg/ml的线性范围内进行了验证，具有可接受的测定间和测定内精密度、准确度和稳定性。该方法的特点是简单快速，可用于量化外周动脉疾病患者血浆中这种广泛使用的抗生素，同时也能为相关研究者提供有益的方法借鉴。详见[url]https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2015.01.006[/url]