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小鼠小肠组织

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  • 载锌蒙脱石对肉鸡组织金属元素沉积、抗氧化功能及小肠养分转运和屏障功能的影响

    【序号】:1【作者】:王海波. 【题名】:载锌蒙脱石对肉鸡组织金属元素沉积、抗氧化功能及小肠养分转运和屏障功能的影响【期刊】:甘肃农业大学【年、卷、期、起止页码】:王海波. 载锌蒙脱石对肉鸡组织金属元素沉积、抗氧化功能及小肠养分转运和屏障功能的影响[D].甘肃农业大学,2021.DOI:10.27025/d.cnki.ggsnu.2021.000207.【全文链接】:https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=WfYi3ZLogAbsASQ-D5HwROLh7RUWiKsVLTKMIvRKp1S2u7Oo11uaRj_BAthR2uLZiqyMLJRDTjNhtj8aWQOnQg748ro_Akgq7uQdPAEZqYPdNKmGHAcBwPoG2uwnrQDhGEyGLWQ2vyK3mRx9GKvPlA==&uniplatform=NZKPT&language=CHS

  • 【转帖】盐酸林可霉素造成小鼠肠道菌群失调规律的研究

    目的:通过观察盐酸林可霉素对小鼠肠道菌群,肠道组织病理学改变,血中淋巴细胞数的影响规律,以期为科学研究正确使用盐酸林可霉素造成菌群失调动物模型提供参考资料。方法:盐酸林可霉素连续灌胃3d停止给药,于停药后第1天,第4天,第7天,和第10天检测肠球菌数,双歧杆菌数,血中淋巴细胞数和肠道病理改变,评价盐酸林可霉素对小鼠肠道菌群的影响规律。结果:灌胃3d停止用药后第1天和第4天双歧杆菌减少,肠球菌增加,与正常组比较差异有统计学意义(P0.05),肠道黏膜皱褶变浅,上皮内杯状细胞减少。停药后第1天出现血中淋巴细胞数减少。结论:盐酸林可霉素短期大量给药,可造成小鼠菌群失调,肠道组织损伤,免疫功能受损,该损伤持续约1周。盐酸林可霉素是科学研究中用于造成菌群失调动物模型的常用抗生素,其抑制细菌生长,尤其抑制益生菌的作用非常明显,但各家用该药的方法、剂量有较大差别,由于动物的耐受性较强,菌群失调能持续的时间不清,本实验尝试在肠道菌群变化、肠组织损伤等方面来研究林可霉素造成菌群失调的规律。以期为该药在科学研究中的使用提供数据依据,现报告如下。

  • 48.10 5'-DFUR在小鼠结直肠癌模型内转化分析

    48.10 5'-DFUR在小鼠结直肠癌模型内转化分析

    【作者】 但操;【导师】 张继民; 【作者单位】 广州医学院, 外科学,【摘要】 研究背景:5’-脱氧氟尿苷(5’-deoxy-5-fluorouridine, 5’-DFUR)是临床治疗消化道恶性肿瘤的口服抗癌药物,为5-氟尿嘧啶(5-FU)的前体药物。其本身没有细胞毒作用,需要在细胞内经过胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)转化为5-FU才能发挥抗肿瘤作用。已有文献报道乳腺癌和胃癌细胞可以表达TP活性,而大肠癌细胞是否表达TP则持论不同。我们在前期研究中发现大肠癌组织中TP活性主要由间质细胞中的巨噬细胞表达,而测定6株结肠癌细胞系也几乎没有TP蛋白表达。在癌细胞不表达TP的情况下5’-DFUR在结直肠癌组织中如何转化尚属疑问。我们前期体内实验对结肠癌小鼠动物模型应用化疗药物5’-DFUR进行治疗,结果发现与5-FU相比平均荷瘤生存期更长,平均瘤重轻,同期平均体重下降缓慢,提示5’-DFUR在小鼠结肠癌组织比正常组织中转化率高,抗癌选择性高。其原因可能是TP酶在癌组织中分布较正常组织多。前期体外实验把5’-DFUR加入培养基中同人血单核细胞一起培养24h,5’-DFUR对4种癌细胞的IC50明显下降,提示血液中单核细胞也可表达TP。由于尚未发现实验比较在癌组织和血液中TP含量,故两者TP的含量高低尚需要实验进一步证实。本实验应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定应用5’-DFUR后癌组织和血液中5-FU的转化情况,间接推断TP酶在癌组织和血液中分布差异,为进一步研究5’-DFUR在结直肠癌组织中转化及TP酶调控机制提供资料。实验材料:1、实验动物SPF级近交系BALB/c小鼠28只,6-8周龄,雄性,体重20.00±2.34g,购自广东省医学实验动物中心。2、肿瘤细胞株BALB/c小鼠结肠腺癌细胞株(CT26),购自美国菌种保藏中心(American Type Culture Collection, ATCC)。3、实验药物5’-DFUR由Roche公司日本研究中心提供; 5-FU注射液,江苏南通精华制药有限公司生产(批号: 080607);5-FU标准品购自Sigma有限公司提供(批号: 097K1352)。4、实验仪器岛津高效液相系统;色谱柱:Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm)实验方法:1、小鼠结肠癌CT-26细胞株的培养10%胎牛血清1640培养基,含青霉素100×103 U/L和链霉素100 mg/L,37℃,5%CO2水浴恒温培养箱中培养,隔日换液,2-3天酶消化法传代。2、细胞悬液制备制备模型当天取指数生长期的细胞,用0.25%胰蛋白酶消化,机械吹打成细胞悬液,2 000r/min离心5 min,弃上清液,加适量生理盐水调整细胞浓度至1×107个/ml,以台盼蓝测定细胞活力在95%以上。3、结肠癌模型制作方法将体外培养的CT26细胞悬液0.2ml注入小鼠(BALB/c)背部皮下,约2周后基本可以形成肉眼可见的肿瘤隆起。4、动物分组及给药荷瘤小鼠28只随机分为4组:①5’-DFUR给药15分钟组;②5’-DFUR给药30分钟组;③5-FU给药15分钟组;④5-FU给药30分钟组。根据动物体重,5-FU用量0.020mg/g ,配制浓度为1.0 mg/ml。5’-DFUR用量0.038mg/g;配置浓度为2.0mg/ml。各组分别腹腔注射给药15分钟、30分钟后处死小鼠立即取血和瘤组织。5、标本处理小鼠眼眶动静脉取血0.5 ml后放置入37℃水浴30分钟,3200rpm离心5min,取上清液4℃保存。肿瘤组织用滤纸吸干血迹后称重,然后按0.5g组织与4 ml生理盐水(1:8)加入匀浆器匀浆5min, 3200rpm离心5min,取上清液4℃保存。6、制作血液和肿瘤组织的5-FU药物标准曲线取未给药小鼠血清7份,每份90μL,分别加入由5-FU对照品和蒸馏水配制的系列标准液适量并混匀配成100μL,使血清中药物浓度分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100.0,200.0,400.0μg·mL-1,制作血清标准曲线;取未给药小鼠肿瘤组织匀浆液7份,每份90μL,分别加入由5-FU对照品和蒸馏水配制的系列标准液适量并混匀配成100μL,使肿瘤匀浆液中药物浓度分别为1.0,2.0,4.0,8.0,16.0,32.0,64.0μg·mL-1,制作肿瘤标准曲线。7、测量各标本浓度取血清100μL,置于5mL玻璃试管中,加入乙酸乙酯2mL,漩涡振荡2min后,3200rpm离心5min,取上层析液置于另一玻璃试管中。再次加入乙酸乙酯2mL进行第二次提取,漩涡振荡2min后,3200rpm离心5min,取上层析液,然后合并两次提取的上层析液,离心浓缩挥干。加入100μL流动相定容,混匀取出,置于EP管中,10000rpm离心7min,取上层析液20μL进样。记录药物峰面积,代入相应标准曲线计算药物浓度;取肿瘤匀浆液100μL,以同样方法处理标本测量浓度。8、观测指标给药15分钟、30分钟处死组5’-DFUR组和5-FU组小鼠血液与癌组织5-FU浓度。9、统计学方法应用统计软件SPSS13.0数据包对5’-DFUR组和5-FU组小鼠血液与癌组织5-FU浓度采用配对样本t检验进行比较。当P0.05时,认为差异有统计学意义。结果:1、注射药物5’-DFUR 15、30分钟后,癌组织转化的5-FU浓度分别54.64μg/g±12.80μg/g和45.58μg/g±18.82μg/g,血清中中5-FU浓度分别为8.83μg/ml±1.68μg/ml和9.82μg/ml±2.93μg/ml,15分钟、30分钟组癌组织5-FU浓度分别为血清的6.36、4.47倍(P0.05);2、注射药物5-FU 15、30分钟后,癌组织转化的5-FU浓度分别86.13μg/g±15.42μg/g和94.68μg/g±39.89μg/g,血清中5-FU浓度分别为133.35μg/ml±20.69μg/ml和112.70μg/ml±26.27μg/ml,15分钟、30分钟组血清5-FU浓度分别为癌组织的1.59、1.62倍(P0.05)。结论:小鼠结肠癌模型体内,癌组织内5’-DFUR转化率高于血液,考虑分布在癌组织中的PyNPase酶比血液高。 【谱图】http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208142214_383901_1609970_3.jpg

  • 显微镜下的人体---小肠绒毛

    http://www.people.com.cn/mediafile/pic/20110923/30/463244090871576054.jpg绒毛有效增大了小肠壁和食物接触的面积,从而帮助人体更好地吸收营养。如果仔细看,你还能在这些褶皱间找到食物残渣呢。

  • 【转帖】哈佛育出能“闻”出光线的小鼠

    哈佛育出能“闻”出光线的小鼠 为气味和感受间关系的研究开辟新途径 据美国物理学家组织网10月18日(北京时间)报道,哈佛大学神经生物学家培养出一种能“闻”出光线的小鼠,为研究人员更好地理解嗅觉功能的神经机制提供了一种新工具。本周的《自然·神经科学》杂志详述了这项研究,这为未来研究气味和感受之间的关系以及其他感知系统的神经机制开辟了新方向。 要分析大脑的嗅觉感知是如何辨别气味的,最好的方法是研究大脑的活动方式。但气味种类繁多,化学成分非常复杂,变化微细让人难以捉摸,因此追寻这些由嗅觉刺激形成的大脑模式非常困难。 如果让鼻子作为视网膜那会怎么样呢?哈佛大学分子与细胞生物学教授温卡泰斯·默西和冷泉港实验室的同事利用遗传光学技术,把一种光敏蛋白质跟小鼠的嗅觉输入系统结合,培育了一批转基因小鼠,它们的所有嗅觉感受神经元都能表达视网膜素转导通道2(channelrhodopsin-2)蛋白质,这些转基因小鼠的嗅觉路径因此变成由光来激活,代替气味来研究大脑神经细胞如何区别不同气味。 嗅觉信息会在大脑中形成不同的三维空间组织形态,由于光输入很容易被控制,研究人员因此能设计一系列试验,利用光选择性地刺激鼻子里的特定感觉神经,研究大脑中嗅球的激活模式。 默西说,因为用外来光照代替气味在大脑中形成的空间组织只是一种临时性结构,新研究也存在一定的局限,并不能完全解释气味感受能力。研究还显示,在气味被感受的过程中,“嗅闻”的时机起着很大作用。

  • 【金秋计划】四君子汤减轻溃疡性结肠炎小鼠炎症和肠上皮屏障损伤并调节肠道微生物群

    [b][size=15px][color=#595959]溃疡性结肠炎[/color][/size][size=15px][color=#595959](UC)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是一种慢性、弥漫性、非特异性炎症性疾病,其病因尚不清楚。目前各种治疗药物如[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]免疫[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]调节剂、氨基水杨酸、糖皮质激素、生物制剂,甚至手术,已被用于治疗UC。然而,这些治疗策略往往伴随着不良反应、耐药性和不理想的临床疗效。因此,寻找一种新颖、安全、有效的治疗方法势在必行。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]从中医角度看,[b]脾虚[/b]是UC的主要病因。[b]四君子汤[/b]对脾胃气虚有较强的治疗作用,是具有代表性的经典方剂。基于此,近年来四君子汤被广泛应用于中医临床治疗UC。然而,四君子汤在现代医学中的药理作用机制尚不完全清楚,限制了其临床应用。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]研究目的:观察四君子汤对急性UC小鼠的治疗作用,探讨其潜在的药理机制。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]采用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由灌胃法建立UC小鼠模型。通过评价临床参数、结肠形态、组织病理学、[b]炎症[/b]因子含量、[b]肠上皮屏障[/b]蛋白表达水平、肠道菌群平衡状态的变化,分析四君子汤对小鼠UC的缓解作用。最后,通过多元[b]统计[/b]分析来阐明炎症因子、肠上皮屏障蛋白和肠道微生物群之间的关系。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]四君子汤能明显缓解UC的临床表现,降低DAI评分,减轻结肠损害。此外,四君子汤还能显著抑制IL-6、IL-1β、TNF-α,提高occludin和ZO-1的表达水平。随后,进一步的研究表明,四君子汤可以改变[b]肠道菌群的稳态[/b]。四君子汤对另枝菌属(Alistipes)、阿克曼氏菌(Akkermansia)、螺菌属NK4A136组(Lachnospiraceae _ NK4A136 _ group)等细菌均有调节作用。最后,多变量统计分析表明,关键肠道微生物与炎症因子和肠上皮屏障蛋白密切相关。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]四君子汤对UC有明显的预防和治疗作用。其机制与[b]通过调节肠道菌群改善炎症和肠上皮屏障损伤[/b]密切相关。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]

  • 新人跪求帮助!有关小鼠内脏湿法消化和火焰原子吸收光谱的问题!跪求大佬指导!

    大佬们好,小弟现在做一批铅中毒小鼠预实验,现在想测定肾脏肝脏中铅含量,遇到大量问题,以下是我现在准备使用的实验方法:1 取组织0.5g放入消化管内,加入5ml 浓硝酸与浓盐酸 的混合液(1:3),先静置2h消化,后加热至180℃4h消化,消解至冒白烟,消化液呈无色透明或略带黄色终止实验。而后用蒸馏水定容至10ml备用。问题一:所用到的玻璃器皿需要硝酸提前浸泡过夜吗?假如需要,那么硝酸浓度应该配置为多少?问题二:所用两种酸可以完全消化组织吗?在消化中途需要再次添加硝酸吗?怎么判断添加时机呢?问题三:测定小鼠组织内铅含量时,必须要做标曲吗?问题四:火焰[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]法测铅含量的具体方法,有详细描述的相关文献吗?真心求帮助,有偿亦可!不知怎么感谢大家,小弟就在此给大家拜个早年叭!

  • 【金秋计划】清络饮中SIRT1抑制剂可减轻抗原诱导的关节炎小鼠白色脂肪组织介导的炎症

    [size=15px][color=#595959]迄今为止,最常见的[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]自[/color][/size][size=15px][color=#595959]身免疫性[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]疾病[b]类风湿关节炎(RA)[/b]仍无法彻底治愈。除关节损伤外,[b]代谢并发症[/b]是RA相关研究领域中研究最多的。[b]白色脂肪组织(WAT)[/b]释放大量炎症介质,这与类风湿关节炎(RA)[/color][/size][size=15px][color=#595959]的病理有关。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]中药方[b]清络饮(QLY)[/b]由国医大师李济仁处方,几十年来一直成功用于治疗热证相关[/color][/size][size=15px][color=#595959]类[/color][/size][size=15px][color=#595959]风湿性关节炎[/color][/size][size=15px][color=#595959]。中药成分有四种:[b]苦参、清风藤、黄柏、萆薢[/b]。除抗风湿作用外,QLY还能有效[b]影响脂质代谢和脂肪细胞功能[/b]。但连接这两种特性的分子机制尚不清楚。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]探讨WAT在清络饮(QLY)治疗抗原性关节炎(AIA)小鼠中的作用。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]分别采用酶联免疫吸附法和比色法测定细胞因子和生化/代谢指标。流式细胞术检测单核细胞。对组织进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]、western-blot和组织学分析。在体内实验的不同小鼠血清中培养前脂肪细胞,并对部分前脂肪细胞进行化合物或脂多糖处理。随后,测试了SIRT1的催化活性和热稳定性。基因/蛋白表达和细胞因子的产生也进行了研究。在一些细胞中,NAMPT和SIRT1被siRNA沉默。[/color][/size] [align=center][size=16px][color=#3573b9]结果[/color][/size][/align] [size=15px][color=#595959]AIA小鼠存在炎症性脂肪因子介导的代谢和免疫紊乱。[/color][/size][size=15px][color=#595959]除了联合保护作用,QLY疗法有利于脂肪细胞分化和抑制炎症脂肪因子的释放。[/color][/size][size=15px][color=#595959]因此,外周组织中[b]脂肪酸氧化[/b]和[b]炎症单核细胞极化[/b]的上调受到抑制。[/color][/size][size=15px][color=#595959]QLY普遍促进PPARγ的表达。[/color][/size][size=15px][color=#595959]然而,SIRT1活性受损,表现为NAD+水平下降和ace-p65表达增加。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]QLY有效抑制AIA小鼠血清培养的前脂肪细胞中eNAMPT的释放。这种作用被白藜芦醇(一种SIRT1激动剂)拮抗,并被NAMPT沉默所掩盖。QLY相关化合物小檗碱、薯蓣皂苷和苦参碱与SIRT1具有较高的结合亲和力,在体外稳定SIRT1蛋白,抑制其去乙酰化活性。当SIRT1被沉默时,它们对ace-p65表达的影响减弱。[/color][/size] [align=center][size=16px][color=#3573b9]结论[/color][/size][/align] [size=15px][color=#595959]QLY中的SI[/color][/size][size=15px][color=#595959]RT1[b]抑制剂[/b]减少AIA小鼠的eNAMPT生成并上调PPARγ,导致炎症缓解。这些线索表明,除了众所周[/color][/size][size=15px][color=#595959]知的[b]抗炎[/b]功能,SIRT1也[b]参与炎症反应[/b],可能是一个潜在的抗风湿病靶点。[/color][/size]

  • 资料 小鼠养殖环境

    小白鼠俗称“小鼠”、尖嘴鼠,由于颜色纯白而得名。我国饲养小白鼠历史最早,据记载,公元307~1641年就有人捕获野生小鼠进行饲养,并作为古代僧侣们的祭物。据资料介绍,从18世纪开始,小鼠开始成为实验动物,有的也进行观赏饲养。一、生物学特性(一)分类学地位小白鼠是野生鼷鼠的变种,隶属于动物界,脊椎动物门,哺乳纲,啮齿目,鼠种。我国目前饲养最广泛的是1946年从印度某研究所引入到云南昆明饲养的品种,又名昆明种。50年代由昆明引到北京生物制品研究所,以后输送到全国各地饲养。(二)形态特生小白鼠经过人们长期选择,定向培育,已形成许多品种类型。一般人们把它分为普通常用小白鼠和满足特殊需要的特种小白鼠两种。特种小白鼠有高癌鼠、低癌鼠、糖尿病鼠及先天性肌肉萎缩病鼠等。有的将小白鼠根据不同杂交方法和获得遗传特性而划分为近交品系、突变品系、远交和杂交群等。1972年以前,国际上公认的小白鼠近交系已有250多个。各品种小白鼠形态特征略有差异,但基本上相差不多。普通小白鼠体长约8厘米,尾略短或略长于体长,面部尖实,嘴前部有长长的触毛,耳耸立呈半圆形,眼睛大,嘴尖,被毛有纯白色和白斑色。90日龄昆明种小白鼠,体长9~11.0厘米,一般雄鼠大于雌鼠,尾有四小白鼠经过人们无数代的定向选择,生活习性有了一定的改变,环境适应性较差。如果把它们放回到室外环境,往往会因缺乏竞争力而难以生存。在人工饲养条件下的小白鼠,胆小怕惊,温顺,较易捕捉。当它受惊时,尾巴挺直并猛力甩动。夜间比白天活跃,喜群居。白日常集群而卧,下午4~5点钟以后活动加强,尤其在晚上更加活跃。当人在晚上进入鼠舍,即可听到小鼠不停地活动与啃咬所发出的沙沙响声。小白鼠喜阴暗、安静的环境,对环境温度、湿度很敏感,经不起温度的骤变和过高的温度。夏季温度过高常影响种母鼠的受胎率和仔鼠生长发育。冬季室温过低,不仅会影响种鼠的生长繁殖,且易发生多种疾病。小白鼠最适宜的室温是18~22℃,相对湿度为50~60%时较理想。此外,小白鼠尚有在干燥角落营巢的习性。白化小白鼠怕强光,在比较强烈光照下,哺乳母鼠易发生神经紊乱,可能发生吃仔鼠的现象。受到噪音的刺激,也会吃仔鼠。雄鼠好斗,性成熟的雄鼠放在一起,常发生互斗咬伤。雄鼠具有分泌醋酸氨臭气的特征,是引起饲养室内特殊臭气的原因。小白鼠为杂食性动物,可供利用的饲料很多,但作为实验动物饲养,应针对不同类型的小白鼠和各个生长发育阶段来制定合理的日粮标准。健康小白鼠一般能活存18个月至20个月,最长的可活至二年半。但年老的小鼠常体弱毛稀,多死于各种疾病,尤以肿瘤为多。(一)饲养设施经过长期入工饲养的小白鼠,对环境的适应性差,不耐冷热,要求生活在清洁无尘,空气新鲜,温度在18~22℃,相对湿度50~60%,噪音85分贝以下,氨浓度20PPm.通风换气8~12次/小时的环境中。因此,它对饲养房舍的建筑、环境条件要求比较严格。目前,国外饲养实验小白鼠多采用全封闭式的饲养设施,室内温度。湿度、光照、通风全部自动控制。国内饲养条件,尽管因陋就简,也要满足小白鼠对生活环境的基本要求。此外,笼具是小白鼠的生活场所,也是从事饲养人员每天都得操作的用具,因而笼具的结构、质量、式样以及重量等,是否合乎科学饲养要求,这对动物的生长繁殖,改善工作人员的劳动条件和提高工作效率等,都是十分重要的。1.鼠舍饲养小白鼠的房舍不宜过大,以20~25平方米为宜。这样有利于鼠群的调整及房舍的消毒。如果是平房,每幢房舍之间应有一定的距离,至少不少于15米,这样既可保证周围环境的宽敞,又可较有效地控制疾病的传播。除饲养房舍之外,还应合理设计辅助设施。例清洁消毒室,饲料、笼具、垫料贮藏室以及工作人员的更衣室、消毒室等。2.鼠罐当前在国内使用的有白瓷罐。泥瓦罐和塑料罐3种,还包括配备相应的罐盖。白瓷罐外形呈桶状,上口直径22厘米,下底直径18厘米,罐高吸厘米。其优点是上口较大,空气流通,夏季小白鼠居住凉爽,因其不渗水,不易引起铁鼠架的腐蚀。缺点是冬季保温性能差,笨重不易操作。泥瓦罐外形呈鼓状,有二个耳把。上口直径16厘米,下底直径15厘米,中间直径18厘米,罐高17厘米。优点是冬季保温性能好,使用轻便,价格便宜。具有防潮、暗光、价廉以及减少疾病传播等优点,是我国饲养小白鼠的传统用具。缺点是易渗水,腐蚀铁架,长期使用时,鼠粪和鼠尿熏染的臭气大。经过洗刷煮沸消毒,其臭味仍不易除去,有的破损率较大,过于笨重。塑料罐外形呈桶状,上口直径23厘米,下底直径19厘米,罐高14厘米,罐口上缘有卷边,罐重约150克。原料为聚乙烯塑料。其优点是使用轻便,不吸水,耐磨损,便于洗刷消毒,易干燥,贮存方便,耐腐蚀,耐用,破损少,老化后仍可回收,劳动强度轻。各种罐盖的外形结构及其大小都是按照鼠罐上口边缘的外形大小用铁丝编制而成。盖面上有填装饲料及饮水瓶的同斗,其孔大小,以逃不出仔鼠为原则。3.鼠盒小型盒长37厘米,宽26厘米,高17厘米。鼠盒可用于一公多母配种生产使用,也可用作待发小白鼠或饲养试验用鼠。利用鼠盒饲养小白鼠,其活动面积较大,但铁皮制作的盒底,容易被鼠的粪尿腐蚀。鼠盒盖的制法与要求同鼠罐。4.鼠架鼠架有木制及铁制两种。现在多为铁制的,材料多选用三角铁和薄铁皮(或塑料板)焊接而成。鼠架的大小根据条件、饲养数量等情况而定。一般的尺寸为高171厘米,长160厘米,宽50厘米,连同架盖分为五层。除顶盖外,每层鼠架可容纳鼠罐12个,每个鼠架分4层,共容纳鼠罐48个。目前国外已推广使用能够拆开的活动鼠架,用不锈钢制成,有很好的防腐性能。5.饮水器饮水器是饲养小白鼠的必备用具。常用的有玻璃瓶、塑料瓶和乳头式自动饮水器3种。其中以玻璃瓶使用最为广泛,一般采用容量250毫升和5吗毫升两种型号的玻璃瓶,瓶口使用生理盐水瓶上的瓶塞,从中间打孔插入铝管或玻璃管,其内径为0.5厘米,外径0.7厘米。6.铺垫物垫料,能吸附水分、动物的排泄物,维持笼内和动物本身的清洁卫生,垫料应不含挥发性、刺激性物质,无毒性,不会干扰动物实验。垫料的原料常用锯末、木刨花、木屑、碎玉米芯等。垫料的原材料常会携带各种微生物和寄生虫,使用前要经加工处理、消毒灭菌、除虫等。欧洲国家多用白杨木屑做垫料,而美国多用碎玉米芯,考虑到了材料的毒性因素和取材的难易。目前我国实验动物垫料尚未标准化,多采用混合木屑,其成分和毒性都不确定,可喜的是,现已开展了相关的研究,莎适合国情的标准化垫料,指日可待。

  • 建立糖尿病小鼠模型最好用什么品系的小鼠?

    [font=&][color=#4d5865]网上看资料觉得应该用C57小鼠比较合适,可以C57 小鼠也有好几个亚型,比如C57BL/6J和C57BL/6N,另外我看实验室是有3-8W,9-12W和4-7月龄的,选哪个年龄段的比较好呢?[/color][/font]

  • 关于《食品安全国家标准 食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》等标准 调整实施日期的说明

    关于《食品安全国家标准 食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》等标准调整实施日期的说明中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会2016-09-22   我委与食品药品监管总局于2016年8月31日联合发布了2016年第11号公告。为与检验机构实验室管理工作相衔接,现调整其中《食品安全国家标准 食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》(GB 4789.8-2016)等82项检验方法标准实施日期为2017年3月1日。请以新标准文本为准。  相关链接:关于发布《食品安全国家标准 食品添加剂 磷酸氢钙》(GB 1886.3-2016)等243项食品安全国家标准和2项标准修改单的公告

  • 美用藻类生产出低成本抗疟疾疫苗 已在小鼠试验中获得成功

    科技日报 2012年05月19日 星期六 本报讯 据物理学家组织网5月17日报道,美国加州大学圣迭戈分校的科学家宣称,他们用工程藻类生产出一种抗疟疾疫苗,并在小鼠试验中获得成功。这种疫苗易于生产,成本低廉,有望成为对抗疟疾的有力武器。相关论文5月17日发表在美国《公共科学图书馆—综合》杂志网站上。 疟疾是一种由疟原虫造成的、通过疟蚊传播的全球性急性寄生虫传染病。在世界范围内,每年受该病威胁的人数近5亿,致死人数在100万到200万之间。虽然目前已有部分疫苗能够起到防止感染的作用,但由于价格昂贵无法在易感地区大范围推广。 领导该项研究的加州大学圣迭戈分校生物学教授斯蒂芬·梅菲尔德说,制造抗疟疾疫苗面临的一大挑战就是必须找到能生产出具有复杂三维结构、类似于寄生虫生产出来的蛋白质,只有这样才能使人体产生抗体,扰乱疟疾的传播。目前,大多数疫苗的制造都采用由工程菌生产出的简单蛋白质,复杂蛋白质也可以生产,但需要使用哺乳动物细胞培养,过程复杂且较为昂贵;此外,人工生产过程中还会伴随发生一种被称为糖基化的过程,使这些蛋白质表面附上一层糖。引发疟疾的寄生虫所生产的就是一种复杂蛋白质,但这些寄生虫并不会让糖附着在这些蛋白质上。“如果你有一个被糖包裹着的蛋白质并将其作为疫苗注入某人体内,这些‘疫苗’对抗的将是糖而不是那些侵入机体的有害蛋白。”梅菲尔德说。 为解决这一问题,研究人员曾尝试通过无糖的细菌制造疫苗,而后再将其折叠成正确的三维形状,但效果并不理想。之后,他们将注意力转向了一种可以食用的绿藻,这种名为莱茵衣藻的藻类如同果蝇和大肠杆菌一样,在实验室中的使用极为广泛。此前就有研究表明,可以使用莱茵衣藻生产如单克隆抗体和生长激素这样的复杂蛋白。 这引起了在梅菲尔德实验室工作的博士后研究员詹姆斯·格雷戈里的注意,他设想,如果能够通过藻类生产复杂蛋白,将能完美解决上述问题。目前对抗疟疾的最大困难就是抗疟疾疫苗的生产成本较高,而藻类不但成本低廉,还几乎可以在地球上任何有水的地方进行生长,无论是池塘里还是浴缸中。 梅菲尔德小组的研究人员随即与该校热带病专家约瑟夫·文斯利用这一方法制造出抗疟疾疫苗,并在实验室中对小鼠进行了实验。结果发现,实验鼠体内产生了抗体,成功阻止了蚊虫对疟疾的传播。 格雷戈里说,虽然目前还很难说这种疫苗是完美的,但实验结果表明,这种由藻类生产的蛋白成功产生了抗体并阻止了疟疾传播。就目前而言还没有比这更经济有效的抗疟疾疫苗生产方法。 研究人员已经对该发现申请了专利,下一步他们将确定这种疫苗能否在人体中起效,以及能否通过直接食用的方式产生抗体。(王小龙)

  • 小鼠MRI立体定位器

    [url=http://www.f-lab.cn/stereotaxis/srp-6m-ht2.html][b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2[/b][/url]是用于核磁共振环境的[b]小鼠立体定位仪器[/b],它采用兼容MRI的材料制造,是[b]小鼠核磁共振[/b]和显微操作实验的理想选择。[b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2[/b]头部固定器组件是由100%塑料制成,AP框架棒和基板都由金属制成,保证了稳定和精确的立体定位记录,头部固定组件能够从基板拆卸下来,使得MRI可以扫描固定在相应位置的动物,核磁共振扫描之后,相应位置固定着动物的头部固定组件,能够轻易地放回在基板的原有位置,[b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2[/b]能够用于多种多样的应用,只需更换头部固定组件用于小鼠,结合该设备可以注入标记或造影剂,用于MRI扫描,头部固定组件可以进行立体定位,记录对准动物的MRI扫描点。[img=小鼠MRI立体定位器]http://www.f-lab.cn/Upload/srp-6m-ht2_.jpg[/img][b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2特色[/b]自从NARISHIGE的立体定位操作器根据此标准制作后,AP框架具有18.7mm的方形形状。如提供的 SM-15 立体定位显微操作器。需要带显微操作器的版本请访问SRP-6M。SRP-5M-HT2 和 SRP-6M-HT2 之间的差别在于AP框架杆的数目。 SRP-5装配有一个AP框架杆,而SRP-6装配有两个AP框架杆。用于大鼠的版本分别是SRP-5R-HT2 和 SRP-6R-HT2(SRP-5R 和 SRP-6R不带显微操作器)小鼠MRI立体定位器:[url]http://www.f-lab.cn/stereotaxis/srp-6m-ht2.html[/url]

  • 【原创大赛】一种简便测定小鼠耗氧量的实验方法

    【原创大赛】一种简便测定小鼠耗氧量的实验方法

    [align=center]一种简便测定小鼠耗氧量的实验方法[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安评中心:苏敏[/align][b] 1引言[/b]小鼠在密闭的缺氧瓶内不断消耗氧气,而产生CO[sub]2[/sub],CO[sub]2[/sub]被缺氧瓶中的钠石灰所吸收,瓶内氧分压逐渐降低而产生负压,缺氧瓶与水减压计接通,由于负压吸引将水柱内侧液面上升。及时由滴定管中滴入一定水,使水减压计恢复至原先的压力水平,保持小鼠处于常压状态下,记录所滴入装置中的水容积,以此表示在一定时间内,小鼠吸取的O[sub]2[/sub]的容积。黄芪是经典的补气药,具有利尿,强壮,降压,提高机体免疫功能等作用。本实验通过黄芪降低耗氧量的实验研究,介绍了小鼠整体耗氧量的测定的装置。[b]2材料与方法[/b]2.1材料动物:小鼠,体重18~22g,雌雄均有。器材:小鼠氧耗量装置(125ml缺氧瓶,200ml具塞广口瓶和微量滴定管,水减压计),秒表。药品及试剂:黄芪水煎液(2g/ml),普萘洛尔,钠石灰,凡士林。2.2方法2.2.1分组及给药选取体重18~22g健康小鼠48只,雌雄兼用,分别称重,编号,按体重和性别均分为4组: 生理盐水组,黄芪水煎液组,普萘洛尔组。生理盐水组小鼠每只腹腔注射等容量的生理盐水,黄芪水煎液组每只腹腔注射黄芪水煎液3g/kg,每只皮下注射ISP20mg/kg 普萘洛尔组,每只皮下注射普萘洛尔30 mg/kg。2.2.2测定方法 在室温25℃条件下,将微量滴定管及通气管插入200ml具塞广口瓶内;125ml缺氧瓶内,插上水减压计;用导管将缺氧瓶与广口瓶相接,如图1所示。20~45分钟后,测定小鼠5分钟内的耗氧量。将小鼠放入缺氧瓶内,盖好盖子,关闭与大[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]通的地方(空气入口处和滴定管活塞,水减压计开口处),通入空气,此时水减压计的压力即为常压状态下的压强。立即停止通气,此时开始记录时间,当小鼠呼出的CO[sub]2[/sub],被钠石灰吸收时,装置内的气体容积减少,水减压计压力降低,及时从滴定管加水至装置中,使水减压计恢复至常压状态下压强。由滴定管放入装置中的水容积,即代表5分钟内该小鼠吸取O[sub]2[/sub]的容积,可以毫升表示,从而判断药物有无降低机体的氧耗量作用。 [align=center][img=,690,512]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807011428075958_3362_2904018_3.png!w690x512.jpg[/img] [/align][align=center]图1 氧耗量测定装置[/align][align=center]1.缺氧瓶2.水减压计3.滴定管4.广口瓶[/align][b]3结果[/b]普萘洛尔和黄芪水煎液组耗氧率显著降低,黄芪组的耗氧量降低幅度稍弱于普萘洛尔组。[b] 表1 黄芪水煎液对小鼠整体耗氧量的影响([/b][img=,14,18]file:///C:\Users\ADMINI~1\AppData\Local\Temp\ksohtml\wpsF5F9.tmp.png[/img][b]±ѕ , n=10)[/b][table][tr][td][align=center][b]组别[/b][/align][/td][td][align=center][b]剂量(mg/kg)[/b][/align][/td][td][align=center][b]5分钟累积耗氧量(ml/只)[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]生理盐水[/align][/td][td][align=center]10[/align][/td][td][align=center]5.43±0.33[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]普萘洛尔组[/align][/td][td][align=center]30[/align][/td][td][align=center]3.2±0.55[sup]**[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]黄芪水煎液[/align][/td][td][align=center]3000[/align][/td][td][align=center]4.25±0.42[sup]**[/sup][/align][/td][/tr][/table]与生理盐水组比较:[sup]*[/sup][i]P[/i]0.05,[sup]**[/sup][i]P[/i]0.01[b]4讨论[/b]本文介绍一种在缺氧实验及抗心肌缺氧药物筛选中简易的方法,所用装置使用方便,耗资少。测定装置各接口处应密封无漏气,可涂少许凡士林于口密封。实验测氧耗量时,计时应准确。动物体重、室温、玻瓶容积等因素对实验结果有一定影响,实验中应加以控制。当小鼠耗氧量较多时,由于水比重小,水很容易通过虹吸现象进入缺氧瓶内,影响实验的进行。因此,连接缺氧瓶与广口瓶的导管不应离液面太近。应及时补充滴入水。由于钠石灰吸收CO[sub]2[/sub]会饱和,每测定1只小鼠要换钠石灰,否则影响实验结果准确性。小鼠整体氧耗量测定还可用小鼠放在密封小瓶内,通过连接测氧仪测定氧耗量。各组实验在一个时间段内进行。也可以用测氧仪来测耗氧量。[align=left][b]参考文献[/b]陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社,2006:782.[/align]

  • 小鼠骨髓细胞数检测的仪器

    大神们,帮忙推荐台主要针对小鼠骨髓细胞数检测的仪器,再一个就是能对小鼠血细胞的种类分类,计数。要求不高。。但是这种针对性的仪器还这难找。。

  • 【资料】放射性同位素标记法研究加替沙星在小鼠体内的吸收、分布和排泄

    本文用3H标记的方法研究加替沙星在小鼠体内的吸收、分布和排泄。小鼠静脉注射3H-加替沙星三个剂量:4mg/Kg、8mg/Kg、16mg/kg,用液体闪烁谱仪测定不同时间血药浓度,建立血药浓度-时间关系。结果显示:静脉注射3H-加替沙星在小鼠体内代谢符合二房室开放模型,分布相半衰期T1/2α分别为0.16h,0.15h和0.19h;消除相半衰期T1/2β分别为55.55h,45.75h,和52.11h;表观分布容积V分别为0.77L·Kg-1,0.62L·Kg-1和0.95L·Kg-1;曲线下面积 AUC分别为74.08?g·h·L-1,89.28?g·h·L-1和211.88?g·h·L-1。3H-加替沙星在小鼠体内分布很广,没有发现特异性组织积累。

  • 【金秋计划】健脾调肝饮通过调节肠道微生物群和粪便代谢减少小鼠肥胖

    [b][size=15px][color=#595959]健脾调肝饮(JPTGY)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]具有[b]疏肝、理气、健脾、化痰[/b]的功效,长期临床实践发现其可[b]有效治疗肥胖[/b]。前期研究发现,JPTGY对肥胖患者的减肥效果令人满意,显著降低了患者的总胆固醇和甘油三酯水平,没有任何副作用。然而,由于中药制剂具有多途径和多靶点的特点,JPTGY治疗肥胖症的[b]机制尚不充分[/b]。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]该研究旨在采用[b]高脂饮食(HFD)诱导的肥胖小鼠[/b]模型来评估[b]健脾调肝饮(JPTGY)的作用与肠道微生物群和粪便代谢变化之间的关系[/b]。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]通过HFD诱导C57BL/6小鼠建立肥胖动物模型。采用[b]脂质代谢的血清生化指标[/b]评价JPTGY在肥胖小鼠中的药效学。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]通过16s rDNA基因序列结合基于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])的[b]非靶向粪便代谢组学技术[/b],对对照组、HFD组和JPTGY暴露肥胖组的[b]粪便样本中的细菌群落和代谢产物[/b]进行了研究。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]JPTGY显著降低总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959]JPTGY可以上调粪便微生物群的丰度和多样性[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959],其特征是蛋白质细菌门较高。一致地,在属水平上,补充JPTGY诱导毛螺菌科NK4A136组、大肠杆菌、Turicibacter、梭状芽胞杆菌1和拟杆菌的富集,它们与14种关键的粪便代谢产物密切相关,对JPTGY治疗有反应。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]代谢组学进一步分析表明,JPTGY对肥胖的治疗作用涉及亚油酸(LA)代谢途径、α-亚麻酸(ALA)代谢途径,甘油磷脂代谢途径、花生四烯酸(AA)代谢途径和嘧啶代谢途径,这暗示了JPTGY治疗肥胖的潜在机制。[/color][/size][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][/color][/size][color=#3573b9]结论[/color][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]肥胖表型与肠道菌群和粪便代谢的联系揭示了JPTGY治疗高脂血症和肥胖的潜在因果关系[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]

  • 常吃葡萄好处多 保护肝脏、降低转氨酶含量

    1.杀死癌细胞。美国宾州州立大学最新研究发现,葡萄中的化合物能杀死培养皿中及小鼠体内的结肠癌干细胞;另一项研究发现,吃葡萄的小鼠,肿瘤发生率降低了50%。2.抑制呼吸道炎症。美国乔治亚州立大学研究表明,葡萄中的白藜芦醇可作为抗氧化剂对抗由呼吸道病原菌引起的炎症。3.助减肥。美国佛罗里达大学最新研究证实,葡萄籽油可减缓人体脂肪细胞的形成,有效降低体重,避免肥胖。4.减轻化疗副作用。澳大利亚阿德莱德大学研究表明,葡萄籽能显著减轻化疗引起的小肠炎症和组织损伤。5.有益视力。中国暨南大学和中国科学院联合研究发现,葡萄籽中富含的低聚原花青素,可通过抑制细胞凋亡保护眼睛视力。6.防晒。美国巴塞罗那大学和西班牙国家研究委员会的研究人员表示,葡萄中的黄酮类物质可以阻止破坏皮肤的酶产生,使皮肤细胞免受伤害,甚至能预防皮肤癌。7.助记忆。美国一项最新研究证明,吃葡萄有助减缓甚至防止记忆衰退。美国辛辛那提大学研究人员通过观察12名75~80岁有记忆力丧失早期症状的志愿者发现,常喝葡萄汁的志愿者,记忆水平呈上升趋势。葡萄汁富含的抗氧化物质是橙汁的4倍,有助保持血管弹性、降血压。

  • 小鼠骨髓细胞数检测的仪器

    大神们,帮忙推荐台主要针对小鼠骨髓细胞数检测的仪器,再一个就是能对小鼠血细胞的种类分类,计数。要求不高。。但是这种针对性的仪器还这难找。。

  • 【求助】消解小鼠器官侧金属含量

    我现在想要消解小鼠器官,测器官里面金属“金”的含量。由于实验室没有微波消解。所以想采用湿法消解。想请教一下各位该怎么做?直接加入王水,加热,至澄清?还是用高氯酸和双氧水,再加入王水?我是第一次做,实验室以前也没人做过。比较着急,大家能不能给一个现成的操作步骤?万分感激!!!

  • 小鼠读脑仪在美研制成功

    中国科技网讯 (记者何屹)据每日科学网站2月20日(北京时间)报道,斯坦福大学的科学家开发出一种系统,可以实时观察活鼠大脑活动情况,对研究诸如阿尔茨海默氏症等神经退行性疾病的新治疗手段具有十分重要的作用。该研究发表在近期出版的《自然·神经科学》杂志上。 研究人员首先利用基因疗法令老鼠神经细胞表达绿色荧光蛋白,该蛋白对钙离子敏感。当神经元受到刺激时,细胞内充满钙离子,荧光蛋白被激活,整个细胞会发出明亮的绿色荧光,就像一朵灿烂的绿色小烟花在黑色背景下绽放。随后,研究人员在老鼠大脑负责空间和情景记忆的海马体上方植入一个微型显微镜,显微镜与相机芯片相连,并可将数字图片传送到电脑,在电脑屏幕上显示老鼠大脑活动的实时视频。 海马体对环境非常敏感,在不同的环境下会有不同的细胞响应。当老鼠在实验环境的某个特定区域挠墙时,刺激特定的神经元闪烁绿色荧光。当小鼠流窜到别的区域时,绿色荧光会从某个神经元褪色,转而刺激新的神经元细胞发光。科学家在掌握了小鼠行为和神经元之间的关联后,仅仅通过小鼠脑部荧光闪烁的混乱图景,就能够清楚地了解老鼠究竟位于何处。 该研究小组发现,小鼠神经元的刺激模式十分稳定,实验间隔时间长达一月之后,仍可保持不变。而观察相同的细胞对于了解脑部疾病非常重要。如果某一个特定的神经元在测试时发生功能障碍,表明正常神经元已经死亡或出现神经退化疾病。研究人员就可以利用某些实验性的治疗试剂进行治疗,然后在相同刺激条件下,确定神经元能否恢复功能。 目前这项技术尚不能应用于人类,但小鼠模型是研究人类神经退行性疾病新疗法的一个重要起点,该系统将成为临床前研究评估的一种非常有用的工具。目前研究人员已经成立了一个公司,生产和销售该设备。 总编辑圈点 一般所说的“读脑仪”,通常指对脑意识进行探测和显现的电子设备,譬如测谎仪就算一种读脑设备。但在本文的研究中,“读脑”是为了找出实验对象的行为和神经元之间的关联,再进行医学药理学的分析。与意识探测相同的是,关乎“脑”研究,人类都还只是接触到皮毛,不过,随着近几年新进展的不断出炉,无论是“倾听大脑的思想”,还是将小鼠模型应用于研究人类神经退行性疾病新疗法,相信只是时间问题。 《科技日报》(2013-02-21 一版)

  • 【金秋计划】银杏二萜内酯葡胺注射液对缺血性脑卒中小鼠黑质脑区的调控机制研究

    脑卒中是全球致伤致残致死3大原因之一,据全球疾病负担统计2019年全世界有1 220万人发病[1],我国有394万人首发[2];另一统计称2020年我国有340万人首发并有约220万人留下残疾[3-4]。缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)约占卒中类型的85%[4-5]。IS预后结局差,复发率高而且极有可能造成后遗症如偏瘫、后肢痉挛、震颤等。其病理机制也十分复杂,涉及细胞过度自噬、离子失衡与谷氨酸过度释放、氧化应激与自由基、炎症爆发和神经细胞凋亡[5-7]等。 目前治疗IS的主要方法为重组组织型纤溶酶原激活剂(recombinant tissue-type plasminogen activator,rt-PA)静脉溶栓、手术取栓和神经保护。手术风险高,rt-PA治疗时间窗短,且有出血风险,符合治疗条件的病人不到10%[8],而神经保护的药物在临床上的效果不如动物实验那么有效,目前急需开发更安全可靠的治疗IS的用药。在长期的医学实践中,银杏叶提取物在治疗脑卒中和心肌梗死方面疗效显著[9]。其中,银杏内酯作为天然的血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)受体拮抗剂,因其具有抗炎、抗氧化、抗凋亡和神经保护的作用[10-12]而越来越受到关注。 银杏二萜内酯葡胺注射液(Diterpene Ginkgolides Meglumine Injection,DGMI)以银杏叶提取物为原料,主要组成为银杏内酯A(ginkgolide A,GA,35%)、银杏内酯B(GB,60%)、银杏内酯C(GC,2%)、银杏内酯K(GK,2%),含总银杏内酯5 mg/mL[13],银杏二萜内酯成分达98%以上[14]。临床显示,DGMI可有效改善IS发病90 d时患者的神经缺损评分,同时改善患者认知和行动能力,并且在中老年患者中疗效优于银杏叶提取物注射液(金纳多)[15-18],Zhao等[15]认为DGMI与rt-PA联用治疗急性卒中效果更佳。最新一项临床研究发现,单独使用DGMI对急性缺血性脑卒中治疗有效[19]。也有多项体内外实验证明DGMI具有改善脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)的作用,主要与PAF受体[20]、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)- 蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)、核因子-红细胞2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)[13]等通路有关。 黑质为重要的运动和感知调节中枢,是脑内合成多巴胺的主要核团,与背侧基底核、底丘脑构成基底运动环路[21],可能通过多巴胺能神经与IS引发的震颤等运动障碍相关。为明确DGMI在黑质脑区抗CIRI的作用通路,本研究通过建立小鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,模拟急性IS时脑内局灶性缺血缺氧的状态,利用转录组测序对小鼠脑样本进行测序,并结合生信分析鉴定DGMI在黑质脑区抗脑缺血损伤的作用通路及功能效应,为深入探索其作用机制提供思路。 1 材料 1.1 动物 SPF级雄性C57BL/6小鼠,6~8周龄,体质量18~22 g,购自南京市江宁区青龙山动物养殖场公司,生产质量合格证SCXK(浙)2019-0002。动物于江苏康缘药业有限公司动物房普通清洁级环境中适应性饲养1周,温度(24±2)℃、12 h光昼交替,自由进食饮水。动物实验经江苏康缘药业有限公司动物委员会批准(批号2023110101)。 1.2 药品与试剂 DGMI(商品名为尤赛金,国药准字z20120024,批号220703)由江苏康缘药业有限公司提供;银杏叶提取物761(Ginkgo biloba extract-761,EGb-761,商品名为金纳多,3.5 mg/mL,国药准字HC20181022,批号P6001)由台湾济生医药生技股份有限公司提供;1800AA型小鼠硅胶线栓购自广州佳灵生物有限公司;舒泰50(货号BN8G4VA)购自法国维克公司;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC,批号BCCJ6488)购自美国Sigma公司;RNA提取试剂盒(批号AM90890A)购自日本Takara公司;Qubit RNA BR Assay kit(批号2506001)、Qubit 1X dsDNA HS assay kit(批号2483579)购自美国Invitrogen公司;Illumina Poly(A) Capture(批号20733163)、Illumina RNA Prep Ligation(批号20723247)、IDT for Illumina RNA Index Anchors(批号20717954)、IDT for Illumina DNA/RNA UD Indexes(批号20739487)、NextSeqTM 2000 P3 300循环试剂盒(批号20751014)购自美国Illumina公司;RNA Screen Tape(批号02020849-192)、RNA Screen Tape缓冲液(批号0006698095)、D1000 Screen Tape(批号0202853-39)、D1000试剂(批号0006739609)购自美国Agilent公司。 1.3 仪器 DOM-1001型显微镜、RFLSI ZW型激光散斑血流成像系统(深圳市瑞沃德生命科技有限公司);PY-SM5(LCD)型LCD高精度智能温控器(余姚市品益电器有限公司);NanoDrop分光光度计(美国Thermo Fisher Scientific公司);4150型TapeStation自动化电泳系统(美国Agilent公司);Qubit 4.0型核酸定量仪(美国Invitrogen公司);NextSeqTM 2000型测序仪(美国Illumina公司)。 2 方法 2.1 动物分组、造模及给药 小鼠适应性饲养5 d后,随机分为假手术组、模型组、DGMI(25 mg/kg)组及EGb-761(100 mg/kg)组,为确保各组术后存活10只小鼠,假手术组设置10只,模型组设置16只,EGb-761组和DGMI组设置14只。 小鼠ip舒泰50麻醉后,参照LONGA法[22]复制MCAO模型。用线栓阻塞小鼠大脑中动脉血流,缺血1 h时,拔出线栓恢复血流,进行再灌注,并结扎颈外动脉剪口。假手术组小鼠进行颈动脉暴露处理,但不插入栓线。手术过程室温控制在(26±1)℃,术后使用加热垫等设备维持小鼠体温保持37 ℃。线栓进入后,将小鼠俯卧位固定,纵向剪开头皮,充分暴露颅骨,置于激光散斑血流成像系统下进行血流检测,确保造模成功。采用RFLSI Analysis v2.0.29.26606软件分析数据,在缺血侧及对侧一致位置添加相同的区域,得到脑血流量统计结果。对造模小鼠进行筛选,排除造模不成功、大出血、蛛网膜出血及过早死亡的小鼠,最终纳入统计的共有40只小鼠,每组分别10只。 基于本课题组预实验结果,DGMI对小鼠MCAO模型术后24 h脑梗死面积改善程度的最佳剂量为25 mg/kg。因此,本研究采用25 mg/kg剂量开展DGMI的药效评价。DGMI组术后30 min ip药物(DGMI以生理盐水将稀释成2.5 mg/mL的溶液),EGb-761组术前1 h ip药物,假手术组和模型组ip等体积生理盐水。 2.2 神经功能评分与脑组织TTC染色 小鼠再灌注24 h后进行改良版神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS)[23]。评分后取血,迅速取脑组织,?20 ℃冰箱中冷冻15 min,随后将冷冻后的脑组织切成厚度为2 mm的冠状切片共6片,使用2% TTC染液于37 ℃恒温水浴锅中避光染色10 min,用4%多聚甲醛溶液对脑片进行固定,24 h后拍照。使用Image-Pro Plus 6.0软件计算脑梗死面积。 脑梗死面积=白色缺血面积/总面积 2.3 脑黑质RNA提取和转录组测序 取小鼠脑黑质,每组4个样本,经高速冷冻研磨机粉碎成匀浆后,按照RNA提取试剂盒说明书提取RNA。经过RNA质量控制后,筛选3个符合条件的样品,按照Illumina文库制备体系,完成文库的构建稀释与上机测序。 2.4 转录组数据分析 2.4.1 转录组数据处理与质量分析 利用Trimmomatic[24]软件对测序数据进行滤过,获取高质量的数据信息,直接从基因组网站下载参考基因组和基因模型注释文件,使用HISAT2[25]和String Tie[26]软件将clean reads与参照基因组进行比对和拼接。 2.4.2 降维分析与模型评价 将各组数据进行降维分析,主要分为主成分分析和tSNE降维分析,比较各组离散程度。 2.4.3 差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)筛选 采用DESeq[27]软件包对各组细胞的基因表达量进行差异分析,模型组DEGs以模型组vs假手术组筛选,给药组DEGs以给药组vs模型组筛选,筛选标准为|log2差异倍数(fold change,FC)|≥2且Padjust≤0.05。 2.4.4 基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA) GSEA通路富集分析不局限于某些目标基因集,而是从所有基因的表达丰度出发,分析在不同的通路中的基因的整体表达影响,理论上更容易囊括细微但协调性的变化对生物通路的影响。参照徐小波等[28]研究,计算药物干预后表达趋势逆转的通路数与模型组特征通路总数的比值(响应值),并评价药物抗脑缺血再损伤的能力。 2.4.5 基因本体(gene ontology,GO)功能及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析 运用R语言limma[29]软件包对差异基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,并用R语言将相关信息可视化。GO功能包括生物学过程(biological process,BP)、细胞组分(cellular component,CC)和分子功能(molecular function,MF)。使用超几何检验进行富集分析。FDR校正的P≤0.05被认为显著富集。 2.5 qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证关键基因表达 按照试剂盒说明书提取脑黑质中总RNA并合成cDNA,进行qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]分析。采用2?ΔΔCt法计算相关关键基因表达。溶质载体家族6成员A3(solute carrier family 18 member A3,Slc6a3)、钙调蛋白样4(calmodulin like 4,Calml4)、G蛋白亚基γ14(G protein subunit gamma 14,Gng14)、C-C基序趋化因子2(C-C motif chemokine ligand 2,Ccl2)、色氨酸羟化酶2(tryptophan hydroxylase 2,Tph2)、C-X-C趋化因子1(C-X-C motif chemokine ligand 1,Cxcl1)、β-actin引物序列见表1。 图片 2.6 统计学分析 实验结果使用Graghpad prism 9.0软件进行统计分析。两组间比较采用独立样本t检验,组间多重比较采用单因素方差分析(One way ANOVA)和Dunnett-t检验,数据以表示。 3 结果 3.1 脑血流成像结果 通过脑血流仪监测小鼠脑皮质血流量变化,如图1和表2所示,发现插入线栓缺血时,与假手术组比较,各组小鼠手术缺血侧脑皮质血流量均显著降低(P<0.001),表明缺血造模成功,建立的小鼠MCAO脑缺血再灌注模型稳定可靠。 图片图片 3.2 DGMI对MCAO模型小鼠的药效评价 3.2.1 DGMI对MCAO模型小鼠mNSS的影响 脑缺血再灌注后24 h,各组小鼠mNSS结果见图2,假手术组为0分,无神经功能损伤;与假手术组比较,模型组小鼠mNSS显著升高(P<0.001),神经功能损伤严重;与模型组比较,各给药组mNSS显著降低(P<0.01、0.001)。表明MCAO造模可导致小鼠神经功能受到损伤,引起小鼠行为学发生变化;EGb-761和DGMI可显著改善小鼠缺血再灌注造成的神经功能损伤。 图片 3.2.2 DGMI对MCAO模型小鼠脑梗死面积的影响 如图3所示,TTC染色后,假手术组脑切片呈均匀的红色,模型组脑切片缺血侧有明显的白色梗死部位;与模型组比较,各给药组小鼠脑梗死面积 显著减小(P<0.001)。表明DGMI和EGb-761可显著改善小鼠脑梗死面积,对小鼠脑梗死有一定治疗作用。 图片 3.3 转录组测序分析 3.3.1 转录组测序数据质量分析 在建立的测序文库中,超过Q30的比例在94%以上,对测序数据中reads进行滤过后,数据质量控制结果显示,与参考基因组的序列比对率在70%以上,表明测序结果较好。 3.3.2 降维分析与模型评价 经主成分分析发现,假手术组和模型组明显分离(图4-A)。对各组进行tSNE降维分析,发现DGMI组与模型组明显分离(图4-B)。 图片 3.3.3 DEGs分析 如图5-A~C所示,与假手术组比较,模型组共筛选得到88个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),其中78个基因上调,10个基因下调。与模型组比较,DGMI组有21个基因上调,108个基因下调;EGb-761组有92个基因上调,84个基因下调。分别对模型组和DGMI、EGb-761组的DEGs取交集,如图5-D所示,DGMI组与模型组共有32个差异基因重合,EGb-761组与模型组共有31个差异基因重合,三者共有10个DEGs重合。 图片 图6中展示了EGb-761组、DGMI组和模型组DEGs重叠部分的热图,共53个DEGs。可以发现,这部分DEGs在给药后有不同程度的逆转。此外,在Lv等[30]通过131个小鼠和39个大鼠样本MCAO模型筛选出的15个共同DEGs中,模型组DEGs中有活化转录因子3(activating transcription factor 3,Atf3)、组织基质金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,Timp1)、分化抗原14(cluster of differentiation 14,Cd14)、半乳糖结合凝集素3(lectin, galactoside-binding, soluble 3,Lgals3)、血红素加氧酶(heme oxygenase 1,Hmox1)、Ccl2、上皮膜蛋白1(epithelial membrane protein 1,Emp1)、热休克蛋白家族B成员1(heat shock protein family B member 1,Hspb1)、血小板反应蛋白基序1型去整合素和金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1,Adamts1)、波形蛋白(vimentin protein,Vim)共10个基因重合(66.7%)。Lv等[30]发现的与人类卒中易感基因联系最强的基因Adamts1、锌指蛋白(zinc finger protein 36,Zfp36)、核因子κB抑制剂zeta(nuclear factor kappa B inhibitor zeta,Nfkbiz)、Ccl2和Hmox1中,本研究模型组中也有3个重合。 图片 3.3.4 GSEA结果 如图7所示,GSEA结果显示,与假手术组比较,模型组表达相反的通路有35条,定义这些通路为模型组的特征通路;DGMI与模型组趋势相反的通路有7条,如帕金森症、色氨酸代谢、嘧啶代谢等通路,响应值为20%左右。 图片 3.3.5 DEGs的GO功能富集分析 为明确小鼠MCAO造模及药物干预后所涉及的生物学功能变化,对模型组和DGMI组小鼠脑组织DEGs进行GO功能富集分析,见图8。结果显示,模型组主要富集在细胞对白细胞介素-1和γ干扰素的反应、趋化因子互作和免疫细胞的浸润等BP,细胞外空间、细胞外区域等CC,趋化因子受体结合等MF。DGMI干预后,主要富集在分泌颗粒、神经肽激素信号通路等BP,细胞外空间与区域,多巴胺能神经突触等CC,S100蛋白结合、激素与神经肽激素等MF。 图片 3.3.6 DEGs的KEGG通路富集分析 为明确DGMI对MCAO模型小鼠KEGG通路的影响,基于获得的DEGs进行KEGG通路富集分析,见图9。结果显示,模型组前15条KEGG通路主要与炎症、凋亡和免疫反应相关,富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)信号通路、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)信号通路、趋化因子信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路等。DGMI组KEGG通路主要富集在神经活性配体-受体作用、多巴胺能神经突触等。 图片 进一步分析发现,模型组KEGG通路中出现频率较高(≥3)的关键差异基因为Ccl12、Ccl2、Cxcl1等,见表3。DGMI组KEGG通路中出现频率较高(≥3)的关键差异基因是Gng14、Slc6a3、Calml4等,见表4。 图片 Ccl12、Ccl2与免疫细胞趋化浸润脑区有关,Gng14编码的蛋白质参与G蛋白偶联受体通路,而Slc6a3、Calml4与多巴胺在脑内的转运分泌密切相关,提示DGMI治疗IS可能与多巴胺能信号通路密切相关。 3.4 qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证关键基因表达 对模型组和DGMI组部分关键基因表达进行qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证,如图10所示,与对照组比较,模型组小鼠脑组织Slc6a3、Tph2基因表达水平显著降低(P<0.001),Calml4、Ccl2、Gng14、Cxcl1基因表达显著升高(P<0.05、0.01、0.001);与模型组比较,DGMI组小鼠脑组织Slc6a3、Tph2基因表达显著升高(P<0.01、0.001),Calml4、Ccl2、Gng14、Cxcl1基因表达显著降低(P<0.05、0.01、0.001)。6个基因表达量的qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测结果均与转录组测序结果一致;值得注意的是,Calml4和Gng14 2个基因通过qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]和转录组测序方法获得的表达量在3个受试样本间差异较大,这可能是由于2种检测方法对基因的检测区域不同产生的,因此说明qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测对RNA-seq结果验证的必要性。总之,综合qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]与转录组测序结果,DGMI可能通过影响炎症和多巴胺相关通路改善IS。 图片 4 讨论 目前,银杏叶提取物作为天然药物产物,已被证明具有抗炎、抗氧化等多种药理作用,可以有效治疗IS。DGMI是国内常用的银杏叶提取物制剂之一,目前虽然在临床前和临床研究上都获得一定成果,但是其治疗IS的作用机制尚缺乏深入的探索。在DGMI作用机制探索的初期首先面对3方面主要的问题。第一,缺乏机制研究方向的指导。面对此问题,在组学水平,例如采用转录组测序方法,获得与疾病进程和发展相关,以及药物治疗途径相关的必要信息,将对后续针对性及更深入的研究提供方向指导。第二,对于IS,临床实验样本的获取比较困难,使得目前相关研究集中在细胞和动物实验,目前关于DGMI在动物IS实验上的转录组测序还没有相关研究内容发表以作参考。第三,由于大脑功能的实行分区域进行,且十分复杂,采用全脑均质化样本进行检测难以对获得的结果进行解析,取特定的脑区进行研究可以更精准地反映疾病和药物对脑特定的功能结构造成的变化影响。 4.1 多巴胺能神经、黑质与卒中炎症 CCL2基因编码的单核细胞趋化蛋白,可以吸引单核和淋巴细胞。CCL2/CCR2趋化因子信号通路在卒中急性期中呈现促炎作用[31],临床试验和动物实验都证明CCL2基因高表达是IS的危险因素,而且在临床上CCL2可作为多种卒中亚型急性期的标志物[32-33]。CCL2因子可由小胶质细胞促炎亚型分泌,CCL2还可能与其他趋化因子共同作用,在急性期介导CD8+ T细胞在脑中的活化和浸润[34]。不过在急性期后的慢性期,CCL2可能有利于促进血管生成和卒中恢复[35]。卒中后活化的星型胶质细胞等分泌的CXCL-1是中性粒细胞趋化因子,可以募集中性粒细胞浸润脑区。中性粒细胞会通过胞外诱捕网等方式进一步加剧卒中[36-38]。 DGMI组和模型组黑质脑区DEGs的KEGG以及GO结果显示,DGMI治疗IS可能和多巴胺能神经相关,尤其是多巴胺的转运和代谢。溶质载体蛋白(solute carrier,Slc)是一类跨膜转运蛋白,Slc18a2基因调控的囊泡单胺转运蛋白2(Vesicular monoamine transporter 2,VMAT2)依赖于质子浓度,介导多巴胺在突触前神经元中从胞质溶胶进入囊泡储存[39-41],囊泡经突触小泡循环将多巴胺运至突触前膜附近,释放多巴胺进入突触间隙,多巴胺结合突触后膜的受体后失活,而Slc6a3调控的多巴胺转运蛋白1(dopamine transporter1,DAT1)位于突触前末梢周围,依赖于Na+/Cl?从突触间隙再摄取多巴胺至突触前末梢[42]。包括多巴胺、乙酰胆碱在内的多种神经递质的受体为G蛋白偶联受体,小鼠Gng14编码的蛋白为G蛋白γ亚基,与人类GNG14同源,Gng14可能通过调节G蛋白亚基发挥作用,而Calml4是钙调蛋白,通过与钙离子结合作用于钙离子信号通路对下游信号产生影响。TPH2是5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)合成的关键酶,同时也会影响多巴胺的浓度,涉及其转运与代谢[43]。 多巴胺能神经元控制着脑内的奖赏系统、成瘾性以及运动功能[44],还能调控疼痛和神经炎症[45-46]。黑质-纹状体通路是主要的多巴胺能通路之一

  • Gut:益生菌和肠道疾病相关性的研究新进展

    益生菌来源于传统发酵食品、有益的共生环境以及周围环境中。益生菌可以通过多种机制影响肠道固有菌群的组成以及功能、促进肠上皮细胞更新,并影响肠道免疫应答。益生菌已被证实在一些已知肠道菌群紊乱的临床疾病使用,具有一定的临床效果,如过敏性皮炎、坏死性小肠结肠炎、储袋炎以及肠易激惹综合征等。然而,并没有研究对益生菌引起的肠道菌群改变和有因果联系的临床症状改善之间的相关性进行研究。是否易于导致疾病发生的肠道菌群状态是否可以通过益生菌制品的应用而达到一个更加健康、适应性更强的一种无病状态仍然是一个悬而未决的难题。既往研究多集中在利用某种疾病的动物模型或相关人群研究益生菌对疾病状态的影响,而现今人们开始将目光转向研究健康状态下益生菌对疾病发生的预防作用。 http://img.dxycdn.com/cms/upload/userfiles/image/2013/12/19/383038660_small.jpg图1. 益生菌的来源及其在人群中的主要作用美国科罗拉多世纪乳业文化技术产业Mary Ellen Sanders等人对益生菌在治疗或预防胃肠道疾病方面的研究进展进行了更新性综述。包括益生菌对肠易激惹综合征、感染性腹泻(包括院内感染)、炎症性肠病、坏死性小肠结肠炎以及结直肠癌的发生和治疗这些疾病状态的影响,以及益生菌在降低肠道感染性疾病、过敏性疾病发生率,改善肠道功能和免疫状态方面的作用等。主要内容简介如下:肠易激惹综合征虽然初步研究证实在肠易激惹综合征患者中存在肠道菌群的改变,但这种改变究竟是造成肠易激惹综合征发生的原因,还是肠易激惹综合征发生后所诱发的结果目前尚不明确。在啮齿类动物研究中发现益生菌能够影响肠道神经系统以及大脑信号转导,能够改善内脏痛觉反射。Mogyyedi等人对19项随机对照研究中共1650名肠易激惹综合征患者使用益生菌治疗的研究进行了综述,结果指出益生菌对症状的改善显著优于安慰剂组,但所纳入的实验收到样本量过小、使用益生菌菌株不一致等条件限制,影响了结果的可靠性。感染性腹泻在发展中地区进行的研究表明,急性感染性腹泻使用益生菌(布拉迪酵母菌、鼠李糖乳杆菌等)可以明显缩短腹泻的持续时间,对于持续性腹泻也可显著改善症状(腹泻持续时间至少缩短4天)。同时,益生菌可以降低医院内抗生素相关性腹泻、轮状病毒感染性腹泻的发生几率(发生率降低40-60%),对儿童患者安全性较好。但对于益生菌是否对艰难梭菌感染引起的腹泻是否有效尚存争议。炎症性肠病虽然动物实验和机制学说证实益生菌制剂对炎症性肠病治疗有效,但临床应用上并未达到预期的效果,特别是克罗恩病。益生菌制剂在克罗恩病的治疗和复发的预防中研究的结果并不一致。而对溃疡性结肠炎,研究证实乳酸杆菌、双歧杆菌和链球菌组合的益生菌制剂可以使患者受益。尼氏大肠杆菌在轻、中、重度溃疡性结肠炎患者中使用,可有助于诱导及维持缓解。益生菌的使用可以预防储袋炎的发生,并可降低应用抗生素成功治疗后的炎症复发。炎症性肠病,与结直肠癌、胃癌、非酒精性脂肪性肝炎以及自身免疫性疾病一样,存在基因、固有菌群以及环境因素的共同影响,存在很大的异质性。所以单一固定成分的益生菌制品难以在所有患者中获得疗效。在炎症性肠病中存在有160多个基因多态性,涉及粘膜屏障功能缺陷、粘膜愈合缺陷、细菌识别缺陷、细菌杀灭缺陷、免疫调节异常等多种功能异常。对于肠道内环境紊乱的患者而言,单纯的利用传统的益生菌制剂抑制有害细菌生长可能会得到事与愿违的结果,而恢复内环境的稳态,补充固有菌群,如柔嫩梭菌和芽孢梭菌等等反而效果更好。例如,炎症性肠病相关基因有一类可以调节粘液糖基化,如Fut2可编码α1,2-岩藻糖基转移酶,该基因异常与肠道菌群组成失调有关,在这种情况下改变肠道菌群状态、补充益生菌即可得到较好的治疗效果。提取自益生菌或人工合成的益生菌主要成分,能够保护整个肠道的内环境稳态,对于辅助炎症性肠病治疗也是有益的。例如低聚果糖和菊粉就具有选择性增强肠道内生性固有菌群的生长和功能而减少有害细菌生长的作用,并可增加有益于肠粘膜上皮细胞代谢的短链脂肪酸的含量,有利于损伤粘膜的愈合。可见益生菌应用在炎症性肠病治疗中有广阔的前景,但仍需对益生菌的组成和如何实现个体化治疗进行进一步的研究。坏死性小肠结肠炎与足月儿相比较,早产儿的肠道菌群组成有所不同,而这种异常将会增加早产儿罹患坏死性小肠结肠炎的可能。在坏死性小肠结肠炎患儿体内,厚壁菌门数目减少,而γ变形菌门数目增多。Meta分析结果显示,联合应用乳酸菌、双歧杆菌、酵母菌和/或S-嗜热链球菌组合的益生菌可以降低坏死性小肠结肠炎的发病率并降低整体死亡率。虽然美国儿科学会承认有证据证实极低体重儿应用益生菌制剂可以有效预防坏死性小肠结肠炎的发生,但在将其列入指南推荐条目的话还需要更多的实验研究验证益生菌有效的剂量和菌属组成。癌症和癌症治疗大量研究结果证实环境因素,如肥胖和饮食习惯等与结直肠癌的发生密切相关。而这些环境因素又会引起肠道固有菌群的失衡。动物实验也指出传统小鼠与无菌处理小鼠相比较结直肠癌发病率更高且肿瘤体积更大。这些实验结果均指出肠道固有菌群与结直肠癌的发病相关,但两者之间的因果关系尚不清楚。Sears等人研究指出产肠毒素B脆弱杆菌可以靶向引起E-cadherin分解,促发肠道炎症反应,增加结直肠癌的发病风险。也有研究指出与健康人群相比较,结直肠癌患者肠道菌群密度减少、组成改变、具核梭杆菌数目增多。动物实验证实益生菌对癌前病变和肿瘤有一定疗效,其潜在机制可能为改变肠道固有菌群及其代谢、改变肠道pH值、降低某些癌基因的活性、增强机体免疫应答、减轻肠道炎症、降低上皮增殖速度并促进凋亡等。生物标记研究指出合生元可以减轻粪便中水的代谢产物引起的基因毒性损伤。目前的研究一致认为合生元制剂在影响和改变结直肠癌发病风险方面比单一的益生菌或益生元制剂效果要好。对肿瘤治疗而言,益生菌制剂有助于减轻肿瘤放疗和化疗的副反应。动物实验中发现在无菌小鼠或使用抗生素处理后的荷瘤小鼠,更容易对放疗产生耐受。鼠李糖乳杆菌可以通过TLR2-、COX2-、MyD88依赖模式减轻肠道损伤和促进肠上皮细胞凋亡。研究益生菌制剂保健作用的挑战基础研究结果展现出诱人的前景,但在研究成果向有效应用产品转化的过程中仍存在很多问题。如成果转让和技术转化的监管问题,这一领域就涉及怎样设计人群的临床试验研究才能开发出具有重大科学意义的相适应的产品,对于不同的疾病或不同的人体状态,怎样的益生元组成配比和剂量能获得最大的收益等都是亟需解决的问题。益生菌引起的健康人群有意义的生理变化也需要更好的定义及测量方法。益生菌产品对人群生活质量影响的指标效应评估、广泛使用的安全性和有效性、对社会经济的影响都需要在纳入各种推荐指南前进行更严谨更有效的基础及临床的实验研究。

  • 转基因小鼠制备实验

    1、 选取7~8周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午3:00左右,每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。2、 47~48小时后,每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU),并与正常公鼠合笼;另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体,阴道口潮红,与结扎公鼠合笼。3、第二天上午9:00前观察供体、受体,有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。4、10:30左右,断颈处死供体,手术取出整个输卵管,放入透明质酸酶~0.3mg/M2液中。显微镜下,用镊子撕开输卵管壶腹部,受精卵随同颗粒细胞即一同流出。5、仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵,当受精卵周围的颗粒细胞脱离时,将受精卵吸出,放入M2液中洗涤,最后放在M16液中放入5% CO2,37C0培养箱培养。6、在显微镜下观察,挑选细胞饱满,透明带清晰,雄原核清晰可见的受精卵待用。7、安装持卵针和注射针,使其末端平行于载物台,在凹玻片的中央滴入一滴M2液,覆盖石蜡油,移入待注射的受精卵。DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。8、在高倍镜下,将注射针轻触持卵管,使DNA缓慢流出并控制其流量;反复吹吸受精卵,使其处于最佳位置,将注射针刺入受精卵的雄原核,直至看到原核膨大即退出。将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置,不致于混搅,注射完毕后,放入5% CO2,37C0培养箱培养。9、将受体麻醉,注射计量为1%戊巴比妥钠0.01ml/g,腹腔注射。手术取出卵巢连接输卵管,用脂肪镊固定,在显微镜下找到输卵管开口。吸取注射后经培养成活的受精卵,吸取方法是先吸一段较长的M2,吸一个气泡,然后吸取受精卵,尽量紧密排列,再吸一段液体,吸一个气泡,再吸一段液体,共四段液体三个气泡。除较长的那段液体,其余的液体大致1cm左右,气泡0.2cm左右。将移植管口插入输卵管口,轻轻将移植管内的液体吹入,看到输卵管壶腹部膨大并清晰地看到三个气泡,即移植成功。将卵巢连同输卵管放回腹腔,缝合肌肉和皮肤。10、受体每隔一个星期称体重一次,当第二次比第一次称重增加时,即可初步判断怀孕。手术后19~21天仔鼠分娩,待仔鼠3周后,剪耳、编号,剪尾,交分子组检测。(一般选取4-5周龄的雌鼠作为供体,此时的小鼠卵数较多,状态较好。用pms诱导卵细胞成熟,用hcg超排。)

  • 求助:小鼠囊胚透射电镜样品制备

    [em53] 俺是个新手,老板刚给定下来课题,做小鼠囊胚的免疫电镜,有没有同仁做过,小鼠囊胚这么小怎么固定,脱水,包埋。很愁人,给点建议,帮帮俺吧,谢谢!

  • 【金秋计划】新型二萜类天然产物靶向塑造肠道免疫系统缓解结肠炎

    [font=宋体]近年来,肠道菌群的失调已经被证实与炎症性肠病([/font][font=Times New Roman]IBD[/font][font=宋体])有关,具体表现为有益共生菌群的丧失、病原菌的增多以及微生物生态系统生物多样性的降低。肠道微生物可以产生多种代谢物(尤其是[/font][font=Times New Roman]SCFA[/font][font=宋体]),这些代谢物可以塑造肠免疫系统、影响肠道屏障的完整性。因此,肠道菌群成为预防和治疗[/font][font=Times New Roman]IBD[/font][font=宋体]的有效靶点和策略。虽然粪便微生物群移植和益生菌补充是目前公认的[/font][font=Times New Roman]IBD[/font][font=宋体]治疗方法,但利用安全有效天然产物或小分子药物对肠道菌群进行调节的报道较少。[/font] [font=宋体]南开大学陈悦教授、张泉教授和李静副教授团队在[/font][font=Times New Roman]Acta Pharmaceutica Sinica B[/font][font=宋体]在线发表题为“[/font][font=Times New Roman]5S-Heudelotinone alleviates experimental colitis by shaping the immune system and enhancing the intestinal barrier in a gut microbiota-dependent manner[/font][font=宋体]”的文章,报道了新型降二萜类天然产物[/font][font=Times New Roman]5S-heudelotinone[/font][font=宋体]的合成,并揭示了其以肠道微生物群依赖的方式塑造免疫系统并增强肠道屏障,从而缓解实验性结肠炎。[/font] [b][font=宋体][font=Times New Roman]5S Heudelotinone[/font]可减少小鼠[font=Times New Roman]CAC[/font]的发展[/font][font=&][/font][/b] IBD[font=宋体]是[/font][font=Times New Roman]CAC[/font][font=宋体]发生和发展的独立危险因素[/font]。[font=宋体]为了验证[/font]5S heudelotinone[font=宋体]([/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体])是否影响[/font][font=Times New Roman]CAC[/font][font=宋体]的发展,作者将原癌基因[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体]与[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=宋体]个[/font][font=Times New Roman]2%DSS[/font][font=宋体]循环相结合,化学触发[/font][font=Times New Roman]CAC[/font][font=宋体];然后,按照[/font][font=Times New Roman]AOM/DSS[/font][font=宋体]方案,每天给小鼠服用[/font][font=Times New Roman]5S-heudelotinone[/font][font=宋体]([/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体])[/font]([font=宋体]图[/font][font=Times New Roman]8[/font]A)。[font=宋体]首先,作者评估了小鼠的体重,以评估疾病的发展。结果显示,在第一轮[/font]DSS[font=宋体]给药中,三个模型组的小鼠均表现出体重减轻。从第[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]天开始,[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体](仅[/font][font=Times New Roman]AOM/DSS[/font][font=宋体]治疗)组小鼠的体重显著下降,并在恢复正常饮水后的第二天达到最低值。与[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体]组相比,两个[/font][font=Times NewRoman]5Sheudelotinone[/font][font=宋体]([/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体])治疗组的小鼠体重开始下降,直到第[/font][font=Times New Roman]6[/font][font=宋体]天,腹泻和便血明显改善。经过两周的恢复,三组小鼠的症状和体征稳步恢复。在剩下的两轮[/font][font=Times New Roman]DSS[/font][font=宋体]治疗中,结肠炎引起的发病率与第一轮相似,尽管症状有很大不同:[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体]组的小鼠在第二轮[/font][font=Times New Roman]DSS[/font][font=宋体]治疗中表现出轻微的症状,但由于结肠炎和肿瘤发生发展的不同阶段,在第三轮出现了严重的体重减轻和便血[/font]([font=宋体]图[/font][font=Times New Roman]8[/font]B[font=宋体])。与对[/font][font=Times New Roman]DSS[/font][font=宋体]诱导的结肠炎的影响一致,[/font][font=Times New Roman]5S-heudelotinone[/font][font=宋体]([/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体])治疗也增加了结肠和肠的长度(图[/font][font=Times New Roman]8C[/font][font=宋体]和图[/font][font=Times New Roman]S18A[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]S18B[/font][font=宋体])。此外,在第[/font][font=Times New Roman]12[/font][font=宋体]周结束时,[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体]组中[/font][font=Times New Roman]100%[/font][font=宋体]的小鼠在整个结肠中,特别是在中远端出现肿瘤(图[/font][font=Times New Roman]8D[/font][font=宋体])然而,低剂量组和高剂量组分别只有[/font][font=Times New Roman]62.5%[/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]32.5%[/font][font=宋体]的小鼠出现肿瘤形成(图[/font][font=Times New Roman]8E[/font][font=宋体])。此外,与单独使用[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体]相比,[/font][font=Times New Roman]5S heudelotinone[/font][font=宋体]([/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体])治疗显著减少了每只小鼠的肿瘤数量,并减小了肿瘤的平均大小(图[/font][font=Times New Roman]8F[/font][font=宋体])。[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体]组小鼠的肿瘤大小(直径≥[/font][font=Times New Roman]3mm[/font][font=宋体])通常大于[/font][font=Times New Roman]5S heudelotinone[/font][font=宋体]([/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体])治疗组小鼠(直径[/font][font=Times New Roman]1-2mm[/font][font=宋体])。此外,[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体]组的小鼠小肠肿瘤负荷较高,每只小鼠有[/font][font=Times New Roman]7.1[/font][font=宋体]个腺瘤,而低剂量和高剂量[/font][font=Times New Roman]5S heudelotinone[/font][font=宋体]组的小鼠平均每只小鼠分别有[/font][font=Times New Roman]4.2[/font][font=宋体]个和[/font][font=Times New Roman]4.1[/font][font=宋体]个腺瘤(图[/font][font=Times New Roman]S18C[/font][font=宋体])。[/font] [font=宋体]作者还测量了不同组别小鼠脾脏的重量。结果显示,当小鼠接受[/font][font=Times New Roman]5S heudelotinone[/font][font=宋体]([/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体])治疗时,高剂量组小鼠的脾脏重量恢复到对照组观察到的水平(图[/font][font=Times New Roman]S18D[/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]S18E[/font][font=宋体])。最后,对结肠组织并进行[/font][font=Times New Roman]H&E[/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]Ki67[/font][font=宋体]染色。组织学检查表明,[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体]组小鼠的结肠组织结构紊乱,表现为隐窝结构和杯状细胞紊乱、肌肉层增厚和纤维化、腺体结构扭曲、细胞核增大和染色较暗、结肠中远端大腺瘤和大量炎性细胞浸润。相比之下,在[/font][font=Times New Roman]5S heudelotinone[/font][font=宋体]([/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体])治疗组中,结肠组织黏膜相对完整,隐窝结构和杯状细胞仅受到轻微破坏,炎性细胞的浸润减少。此外,增生减少,主要位于肠远端,肿瘤恶性程度明显低于[/font][font=Times New Roman]AOM[/font][font=宋体]组(图[/font][font=Times New Roman]8G[/font][font=宋体])。此外,[/font][font=Times New Roman]Ki67[/font][font=宋体]染色显示,[/font][font=Times New Roman]5S heudelotinone[/font][font=宋体]([/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体])治疗显著降低了[/font][font=Times New Roman]Ki67[/font][font=宋体]阳性细胞的数量,表明恶性增殖细胞的数量和肿瘤的恶性程度都有所降低(图[/font][font=Times New Roman]8H[/font][font=宋体])。这些结果表明,[/font][b][font=宋体][font=Times New Roman]5S heudelotinone[/font]([font=Times New Roman]2[/font])能有效减少小鼠[font=Times New Roman]CAC[/font]的发展。[/font][/b]

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