显色反应

分光光度计的显色反应一般要求影响显色反应因素选择性好、灵敏度高，生成的有色化合物性质稳定，显色剂与有色物颜色反差大，显色反应要易于控制显色剂用量、反应液的酸碱度（pH）、反应温度、显色反应时间干扰离子的影响。1、显色反应一般要求（1）选择性好：显色剂最好只与一种被测组分起显色反应;（2）灵敏度高：灵敏度高有笪微量组分的测定;（3）有色化合物性质稳定：确保前后测定准确.（4）显色剂与有色物颜色反差大：两者最大吸收波长之差应大于60nm;（5）显色反应要易于控制：结果的确保实验再现性.2、影响显色反应的主要因素（1）显色剂用量：通过实验来确定最适用量;（2）反应液的酸碱度（pH）：溶液酸碱度直接影响金属离子与显色剂存在形式以及有色化合物组成的稳定性.（3）反应温度：不同的显色反应需要不同的反应温度,一般显色反应可在室温下完成.（4）显色反应时间：显色反应的速度有快有慢.（5）干扰离子的影响：应采用适当方法消除其影响.

实验室分光光度计显色反应的因素　　分光光度计的显色反应一般要求影响显色反应因素选择性好、灵敏度高，生成的有色化合物性质稳定，显色剂与有色物颜色反差大，显色反应要易于控制显色剂用量、反应液的酸碱度（pH）、反应温度、显色反应时间干扰离子的影响。　　1、显色反应一般要求　　（1）选择性好：显色剂最好只与一种被测组分起显色反应;　　（2）灵敏度高：灵敏度高有笪微量组分的测定;　　（3）有色化合物性质稳定：确保前后测定准确.　　（4）显色剂与有色物颜色反差大：两者最大吸收波长之差应大于60nm;　　（5）显色反应要易于控制：结果的确保实验再现性.　　2、影响显色反应的主要因素　　（1）显色剂用量：通过实验来确定最适用量;　　（2）反应液的酸碱度（pH）：溶液酸碱度直接影响金属离子与显色剂存在形式以及有色化合物组成的稳定性.　　（3）反应温度：不同的显色反应需要不同的反应温度,一般显色反应可在室温下完成.　　（4）显色反应时间：显色反应的速度有快有慢.　　（5）干扰离子的影响：应采用适当方法消除其影响.

分光光度计的显色反应一般要求影响显色反应因素选择性好、灵敏度高，生成的有色化合物性质稳定，显色剂与有色物颜色反差大，显色反应要易于控制显色剂用量、反应液的酸碱度（pH）、反应温度、显色反应时间干扰离子的影响。　　1、显色反应一般要求　　（1）选择性好：显色剂最好只与一种被测组分起显色反应;　　（2）灵敏度高：灵敏度高有笪微量组分的测定;　　（3）有色化合物性质稳定：确保前后测定准确.　　（4）显色剂与有色物颜色反差大：两者最大吸收波长之差应大于60nm;　　（5）显色反应要易于控制：结果的确保实验再现性.　　2、影响显色反应的主要因素　　（1）显色剂用量：通过实验来确定最适用量;　　（2）反应液的酸碱度（pH）：溶液酸碱度直接影响金属离子与显色剂存在形式以及有色化合物组成的稳定性.　　（3）反应温度：不同的显色反应需要不同的反应温度,一般显色反应可在室温下完成.　　（4）显色反应时间：显色反应的速度有快有慢.　　（5）干扰离子的影响：应采用适当方法消除其影响.

光度法中对显色反应有何要求？

分析聚磷酸铵中各组分的含量，方法见http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120908/4231868/。前面层析分离的效果不错，显色时我嫌方法里加异丁醇-苯萃取弄来弄去的麻烦，就想直接向水解液中加钼锑抗显色剂显色得了！结果不行，不显色！我计算过了，我加的样品量足够显色反应用的！并且为了排除样品量不够的因素，我向水解液中又加了一些磷酸二氢钾，还是不显色！确认了钼锑抗试剂没问题！是什么物质使得显色反应不能发生？水解液中可能存在的物质有：三氯乙酸、异丙醇、氨水、硫酸、高氯酸、盐酸。我准备老老实实按照方法里，萃取后再显色了。可是上述现象是什么原因呢？

已酰丙酮与甲醛在一定温度下会反应显色，通过吸光度测试甲醛浓度，此时溶液体系中含有异丙醇会不会有影响？

土壤板块最近冷清的很啊。我来发个帖子活跃下气氛吧，总结一下显色反应，如果大家觉得有用的话，再把常用的滴定反应总结一下。做土壤肥料实验，常常用到一些显色反应，通过比色法，判断待测物质浓度的大小。本文对土壤肥料实验室常用的显色反应做一简单归纳。土壤：1，有效磷，测土壤中的有效磷需要用到钼锑抗显色法，其基本操作过程：用0.5mol/L碳酸氢钠溶液浸提土壤中的有效磷，有效磷与钼锑抗试剂反应生成蓝色的杂环磷钼酸盐。需注意的事项：第一，切记显色剂中要加抗坏血酸，否则显色慢，显色不完全，标准曲线的质量也很差，有的文献中没有提到要加抗坏血酸，是不对的；第二，浸提液是碳酸氢钠溶液，显色液是浓酸液，加入时有大量二氧化碳气体生成，务必小心，避免气体带着液体喷出，影响实验结果，加显色剂时应缓慢添加，边加边振荡。2，有效硼，土壤中的硼使用热水浸提，甲亚胺-H酸显色法测定，加显色剂三小时后测定吸光度，我只做过一次，本来没做这个指标的，临时帮人做一下，做的效果不太好，建议参考roseblown的http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101130/2967769/ ，个人认为写的非常好。3，速效钾，速效钾可以用四苯硼钠比浊法测定，严格讲应该不能算显色法，就不多说了。肥料：1，有机肥中的磷，可以采用硫酸-过氧化氢消煮后，使磷酸根离子与钒钼酸铵试剂反应，生成黄色三元杂多酸，测定其浓度以计算得到磷的含量。个人经验是有的有机肥样品含铁离子较多，样品溶液呈较深的黄色，此时必须做样品空白，否则会得到明显错误的实验结论。当测定结果过高时（有机肥中的五氧化二磷含量在2个点左右比较正常），可以用沉淀法佐证。2，尿素态氮，在加热条件下，二乙酰一肟分解生成双乙酰，尿素会与双乙酰反应生成红色的二嗪，红色物质的浓度与尿素的含量成正比，此方法多用在医学上，测定血清、尿液中的尿素等，用于肥料行业中仅见于HG/T4135-2010 稳定性肥料。此方法准确度较高，容易操作。个人认为尿素的国家标准中只有总氮含量的测定，似乎不能排除掺假，如果出一个标准，用此方法测定尿素的纯度，也不错啊。3，硝态氮，可以用直接比色法、酚二磺酸法、还原-比色法测定，可参考我的另一篇帖子http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111018/3592790/ 。

都有哪些显色剂？反应条件是什么？？

分光光度法显色反应中有哪些干扰及消除方法？

如何确定显色反应生成物在哪个波长有最强吸收呢？岛津UV-1700分光光度计有这种功能吗？

[color=#DC143C][size=4]在紫外区前处理，最大的问题是干扰，我选择了很多方法，有的失败，有的试验中， 如果找一种显色剂与三聚氰胺反应，在可见区测定就方便了。 这样可以最大限度的避免干扰，大家想想办法[/size][/color]

我配显色酸是用来作显色反应测定食酒中的甲醇含量的。配溶液时显色酸0.1克加水10ml溶解后，加90%硫酸90ml. 但是加热了也不能完全溶解啊！

测定氨基酸含量，除了利用氨基酸与茚三酮的显色反应外，还有什么别的方法？

如题，低聚糖、脂肪酸、糖脂用什么显色剂比较合适，试过碘熏的方法，效果不是特别明显。其他什么显色剂比较合适能够同时对以上三种物质显色的？

跑氨基酸的薄层时，如果展开剂中有氨水的话，用2%茚三酮显色后常常弄得整个板子都是红色的（时间一长还发黄呢），搞得背景很不好看，不太明白是怎么回事？ 氨基酸显色的机理是：（水合茚三酮与a-氨基酸反应生成）还原型茚三酮+NH3+茚三酮===紫红色化合物。关键是如果光NH3+茚三酮是不足以反应显色的，不知整块板子都变红了是什么原因造成的。哪位大虾解释一下啊！！

之前就遇到过一次不显色，当时想可能是标液或者试剂过期的原因，后来把所有试剂重新配置了，换了新氨标液（除了次氯酸钠，这个是买的标液），后来就好了。但昨天又遇到不显色，就更诡异了，所有反应试剂是上周配置的（次氯酸钠依然用的买回的标液，一直封口冰箱保存），上午做了曲线，做出来斜率是0.085，截距0.005，R平方3个9，一切正常，都没有问题，下午再做质控样，就开始不显色，所有样品和空白显示为黄色。吸光度再0.04-0.05之间。真的很奇怪。于是今天我把所有显色试剂都重新配了（除了次氯酸钠和吸收液母液，母液是上周配的）还是不显色。请教下问题可能出在哪里。你说试剂不新鲜，可是上午曲线又能做出来，线性还挺好。总不能就差半天就变质吧。如果是次氯酸钠的问题，同样的次氯酸钠，上次不显色，后来其它溶液换过之后，它又能做出曲线。看了论坛里也有类似的讨论，但始终没有一个结果。不知大神能否帮忙解惑！

今天按GB/T5750.10-2006中AHMT分光光度法测甲醛做标线，所有的吸光度值都差不多，连空白的吸光度值都在0.4左右。我将EDTA-KOH溶液与AHMT溶液混合后，溶液就变红成红色了，过了20min加高碘酸钾之后红色加深。想问一下有经验的前辈们，这个反应正常情况下空白是否有颜色？与甲醛的反应过程中是加AHMT后就显色，还是在加了高碘酸钾氧化后才显色？我怀疑AHMT试剂有问题，但这个试剂也是新买的，国药沃凯的。不知大家都是哪里买的呢？急求解，谢谢

样品与过硫酸钠在150℃加热40分钟后，然后进行显色反应，发现显色的电压曲线先下降后上升，请问这是怎么回事？莫非40分钟加热过硫酸钠没有完全分解，从而使颜色褪去，还是有新的物质影响颜色变化，谢了！

按国标 酚试剂分光光度法做的，没有一个管有显色反应，但没找到原因，必须要用甲醛标准 才有反应变蓝，就是用浓度1mg/ml的才会有变色反应，这是为什么？补充，用硫代硫酸钠定量 甲醛标准贮备液是1.1012mg/ml，但稀释1000倍后做出的标准系列管加吸收液，和硫酸铁铵溶液，却没有变色反应，太奇怪了……能有谁帮我总结下，标准系列管不变色的可能性有哪些，感激不尽！！！！！！

一般显色反应中需要加入显色剂，在计算溶液浓度的时候，显色剂的体积是否也要算进去？比如，取0.1ml标准溶液，加0.9ml水，再加4ml显色剂，最终溶液的浓度是0.1/10还是0.1/50，今天把一个没作过的方法让新员工做了下，结果造成歧异，导致结果出现误差。

2、酚类鉴定试剂（1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质。1～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取1m1样品的乙醇溶液，加入试剂1～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或蓝色斑点为阳性反应。（2）4－氨基安替匹林－铁氰化钾(Emerson)试剂检查酚羟基对位无取代基的化合物。溶液I：2％4－氨基安替匹林乙醇溶液。溶液Ⅱ：8％铁氰化钾溶液。作色谱显色剂用，先喷洒溶液I，再喷洒溶液Ⅱ，用氨气熏，显橙红或深红色斑点为阳性反应。（3）Gibbs试剂检查酚羟基对位无取代基的化合物。溶液I：0.5％2，6－溴(氯)苯醌氯亚胺的乙醇溶液。溶液Ⅱ：1％氢氧化钾乙醇溶液。取lml样品的乙醇溶液，滴加溶液Ⅱ，使pH9～10，再加入1滴～2滴溶液I，显深蓝色为阳性反应。（4）铁氰化钾－三氯化铁试剂检查酚类、芳香胺类及还原性物质。溶液I：1％铁氰化钾溶液。溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液。临用前等体积混合。喷洒后酚性成分呈蓝色斑点，再喷20％盐酸，能使颜色加深。纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液。（5）重氮化(Pauly)试剂检查酚羟基对位无取代基化合物。溶液I：0.35g对硝基苯胺溶于5ml盐酸中，加水稀释至50ml。溶液Ⅱ：5g亚硝酸钠溶于70ml水中。取1m1样品的乙醇溶液，加入1m13％碳酸钠溶液，在沸水浴中加热3min，再在冰水浴中冷却后，加入1～2滴溶液Ⅰ于Ⅱ的混合液(临訚鞅，在冰水浴中等量混合)，显红色为阳性反应。作色谱显色剂用，将溶液I于Ⅱ各l0ml混合，再加20ml1％碳酸钠溶液(均临訚鞅在冰水浴中混合)，喷洒后，显黄、红、紫等色斑点为阳性反应。（6）牢固蓝B盐试剂检查酚类化合物。溶液I：新配的0.5％牢固蓝B盐的溶液。溶液Ⅱ：0.5％氢氧化钠溶液。先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，呈棕、紫、或绿色者为阳性反应。能偶合的芳香胺类有干扰。

一般显色反应中需要加入显色剂，在计算溶液浓度的时候，显色剂的体积是否也要算进去？比如，取0.1ml标准溶液，加0.9ml水，再加4ml显色剂，最终溶液的浓度是0.1/1还是0.1/5，今天把一个没作过的方法让新员工做了下，结果造成歧异，导致结果出现误差。

2、酚类鉴定试剂（1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质。1～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取1m1样品的乙醇溶液，加入试剂1～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或蓝色斑点为阳性反应。（2）4－氨基安替匹林－铁氰化钾(Emerson)试剂检查酚羟基对位无取代基的化合物。溶液I：2％4－氨基安替匹林乙醇溶液。溶液Ⅱ：8％铁氰化钾溶液。作色谱显色剂用，先喷洒溶液I，再喷洒溶液Ⅱ，用氨气熏，显橙红或深红色斑点为阳性反应。（3）Gibbs试剂检查酚羟基对位无取代基的化合物。溶液I：0.5％2，6－溴(氯)苯醌氯亚胺的乙醇溶液。溶液Ⅱ：1％氢氧化钾乙醇溶液。取lml样品的乙醇溶液，滴加溶液Ⅱ，使pH9～10，再加入1滴～2滴溶液I，显深蓝色为阳性反应。（4）铁氰化钾－三氯化铁试剂检查酚类、芳香胺类及还原性物质。溶液I：1％铁氰化钾溶液。溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液。临用前等体积混合。喷洒后酚性成分呈蓝色斑点，再喷20％盐酸，能使颜色加深。纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液。（5）重氮化(Pauly)试剂检查酚羟基对位无取代基化合物。溶液I：0.35g对硝基苯胺溶于5ml盐酸中，加水稀释至50ml。溶液Ⅱ：5g亚硝酸钠溶于70ml水中。取1m1样品的乙醇溶液，加入1m13％碳酸钠溶液，在沸水浴中加热3min，再在冰水浴中冷却后，加入1～2滴溶液Ⅰ于Ⅱ的混合液(临訚鞅，在冰水浴中等量混合)，显红色为阳性反应。作色谱显色剂用，将溶液I于Ⅱ各l0ml混合，再加20ml1％碳酸钠溶液(均临訚鞅在冰水浴中混合)，喷洒后，显黄、红、紫等色斑点为阳性反应。（6）牢固蓝B盐试剂检查酚类化合物。溶液I：新配的0.5％牢固蓝B盐的溶液。溶液Ⅱ：0.5％氢氧化钠溶液。先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，呈棕、紫、或绿色者为阳性反应。能偶合的芳香胺类有干扰。

今天做污水处理厂废气硫化氢，样品加入显色剂后显黄色，加过量的磷酸氢二铵也没反应！一样的试剂标液是显蓝色的！

我们在做阿奇霉素的释放度的检测，具体的方法是0.1mol/L的盐酸2小时，然后再加入0.2mol/L的磷酸盐，调节Ph至6.8，45分钟，去溶液适量，滤过，去续滤液1ml，加0.1mol/L的盐酸4ml,加硫酸（75→100）5ml，显色，放冷后在测紫外！我们遇到的问题是，加硫酸后不显色！！后来也确定了是磷酸盐的问题，我想问的是磷酸盐是怎么对显色反应起到干扰作用的，（有问题的磷酸盐是能够把药品完全溶解的），同时还想问的是：加入硫酸显色的原理是怎样的！

如题，做六价铬和总铬需要这个显色剂，然后今天现用现配，但是丙酮加下去以后就浑浊了（看不到明显沉淀，但是看上去雾蒙蒙的那种），请问这是什么原因造成的？会不会是二苯碳酰二肼固体存放的时候受潮了？另外，丙酮加好以后加水，感觉反应也不如之前剧烈（之前配的时候加水下去有很多气泡还有放热的感觉）现在我用样品试了一下，显色倒没问题，但是这样还是会影响结果的吧？

我是做合成的生物碱类 用薄层检测反应展开剂是氯仿加少量乙醇 用碘化铋钾显色结果展开的色谱 两边的偏高 中间较低 应该不是边缘效应因为斑点明显呈弧状 [em0715] 加急 谢谢

二、苷类鉴定试剂1、糖鉴定试剂（1）－萘酚－硫酸试剂检查还原糖。①溶液I：10％—萘酚乙醇溶液。溶液Ⅱ：硫酸。取lml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I2～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液Ⅱ，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。②15％—萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13ml、乙醇87ml及水8ml混匀后使用。喷洒于薄层板上，100℃烤3～6min，多数糖显蓝色，鼠李糖显橙色，所显颜色于室温可稳定2天～3天。（2）斐林试剂检查还原糖。‘溶液I：6.93g结晶硫酸铜溶于l00ml水中。溶液Ⅱ：34.6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于l00ml水中。取lml样品热水提取液，加入4～5滴訚鞅配制的溶液Ⅰ、Ⅱ等量混合液，在沸水浴中加热数分赜，产生砖红色沉淀为阳性反应。如检查多糖和甙，取lml样品水提液，加入lmll0％盐酸溶液，在沸水浴上加热l0min，过滤，再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。（3）氨性硝酸银试剂检查还原糖。硝酸银1g，加水20ml溶解，小心滴加适量氨水，边加边搅拌，至开始产生的沉淀将近全部溶解为止，过滤。取lml样品的水溶液，加入lml试剂，混匀后，40℃微热数分赜，管壁析出银镜或产生黑色沉淀为阳性反应。本试剂也可作为色谱显色剂，喷洒后于110〗萦热数分赜，显棕黑色斑点为阳性反应。还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰。（4）茴香醛－硫酸试剂检查糖类化合物。硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中，需临用前配制。喷洒于薄层板上，105〗萦热至显示色斑，不同糖显不同颜色。（5）苯胺－邻苯二甲酸试剂检查糖类化合物。苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。作色谱显色剂用。喷后105℃烤5min，显红棕色斑点。（6）l3－二'羟基萘酚－磷酸试剂检查酮糖、醛糖。0.2％1，3--'二羟基萘酚乙醇溶液50ml于85％磷酸50ml混合均匀后使用。喷后105℃烤5min～10min，酮糖呈红色，醛糖显淡蓝色。（7）苯胺－二苯胺－磷酸试剂检查糖类化合物。苯胺4ml、二苯胺4g及85％磷酸20ml溶于丙酮200ml中。喷洒于薄层板上，85〗萦热10min，不同糖显不同颜色。（8）2，3，5－三苯基氯化四氮唑(T．T．C)试剂检查还原糖。溶液Ⅰ：4％T．T．C甲醇溶液。溶液Ⅱ：4％氢氧化钠溶液。临訚鞅将溶液Ⅰ和Ⅱ等体积混合。喷洒后，100〗萦热5～10min，显红色斑点为阳性反应(醛类无干扰)。（9）三氯化铁－冰醋酸(K．K)试剂检查－去氧糖，常用于强心甙。溶液I：1％三氯化铁溶液0.5ml，加冰醋酸至l00ml。溶液Ⅱ：硫酸。取样品乙醇提取液lml，譂髟管中，水浴上蒸去乙醇，残渣用0.5ml溶液I溶解，沿试管壁缓缓加入溶液Ⅱlml，静置分层，上层渐显蓝色，下层显红色或棕色为阳性反应(其颜色随苷元羟基和双键的位置和个数不同而不同)。（10）占吨氢醇试剂检查－去氧糖(常用于强心甙)。10mg占吨氢醇溶于100ml冰醋酸中，再加入lml硫酸混合。取lml样品，加入试剂lml，置水浴上加热30min，显红色为阳性反应。（11）Gregg-Gisvold试剂检查2．6－去氧糖。溶液I：10％三氯化铁溶液。溶液Ⅱ：1％盐酸甲醇溶液(97.2ml甲醇中含2．8ml盐酸)。0.5ml溶液I于100ml溶液Ⅱ混合。将样品的乙醇溶液点于滤纸片上，晾干后，喷洒上述混合试剂，110〗萦热5min，显蓝色为阳性反应。（12）3，5－二氨基苯甲酸－磷酸试剂检查2－去氧糖。3，5－二氨基苯甲酸二盐酸盐1g溶于80％磷酸25ml，加水稀释至60ml。喷洒后，100〗萦热15min，2－去氧糖在日光下显棕色，在紫外光下显黄绿色荧光。（13）对硝基苯胺－过碘酸试剂检查去氧糖。溶液I：饱和偏高碘酸溶液1份加水2份混匀。溶液Ⅱ：1％对硝基苯胺乙醇溶液4份于盐酸1份混合。先喷溶液I，放置10min，再喷溶液Ⅱ，去氧糖显黄色，紫外光下显强荧光，再喷5％氢氧化钠甲醇溶液，颜色转绿，乙二醇同样显色。

在用分光光度计检测时,需要一定的显色时间,假如一个反应达到5分钟后,吸光度值还是在缓慢的增长,就是没有完全稳定,可以把5分钟确定为这个反应的显色时间吗?有根据吗?多谢各位!

我在做一个测定淀粉酶活性的实验，用的是碘液与可溶性淀粉显色反应来侧面反应酶分解淀粉的多少，从而推算其酶活性，但平行度一直不好。我配制的可溶性淀粉溶液先用少量冷水溶，然后倒入沸腾的热水，继续沸腾约2min，冷却定容而来，但晚上放在4摄氏度的冰箱中保藏。 我想问的是：这个实验的淀粉能否保藏继续使用，如果不行，为什么？？是什么原因影响显色。 其二，如果当天配当天使用，沸腾的时间是否有讲究？因为《食品化学》中提到高温会破坏支链淀粉的螺旋结构，使其不能与碘液呈色。 谢谢！！！！