[size=5][font=宋体]实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。[/font][font=Arial]OD600[/font][font=宋体]是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液,之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作,必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数,做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的[/font][font=Arial]OD[/font][font=宋体]值出现负值,原因是采用了显色的培养基,即细菌培养一段时间后,与培养基反应,发生变色反应。另外,需要注意的是,测试的样品不能离心,保持细菌悬浮状态。[/font][font=Arial][/font][font=Arial][/font][font=Arial] [/font][font=宋体]分光光度计的重要配件[/font][font=Arial] —— [/font][font=宋体]比色杯[/font][font=Arial][/font][font=Arial] [/font][/size][size=5][font=宋体]比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不适合比色法测定。因为反应中的染料(如考马斯亮兰)能让石英和玻璃着色,所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。[/font][font=Arial][font=宋体]由于另外测试的样品量不同,所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量,亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯,样品用量仅需50μl,比色杯单个无菌包装,可以回收样品。如Eppendorf UVette?塑料比色杯,是目前比色杯市场上一个革新。随着生命科学以及相关学科发展,对此类科学的实验研究提出更高的要求,分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器,也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一。[/font][/font][/size]
[size=24px][img=,690,975]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/05/202305261120254433_6375_5029957_3.png!w690x975.jpg[/img][img=,690,974]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/05/202305261105270608_3607_5029957_3.png!w690x974.jpg[/img]GB/T 18883-2022《室内空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]量标准》中微生物指标“细菌总数”,做方法验证时,需不需要做估计偏差和精密度?按照RB/T 033-2020《微生物检测方法确认与验证指南》里,是验证具体基质,但是空气中细菌总数,就不太好操作人工加污染物进去。[img=,690,682]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/05/202305261119177402_7183_5029957_3.png!w690x682.jpg[/img][/size]
[align=center]双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法[/align][align=center]季学猛[/align][align=center](南开大学 医学院, 天津 300071)[/align]摘 要:双歧杆菌在维护宿主健康方面具有重要作用,因此对其高密度培养条件的探索具有重要意义。目前,双歧杆菌的高密度培养主要受到培养基组分和培养条件的优化的影响。这里报道了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法。该方法使用补料与碱泵耦合的方法进行补料,通过控制发酵培养基的pH值来调节补料培养基的补入量。此外,本研究还进行了补料培养基的优化实验,通过调整氢氧化钠和葡萄糖浓度的比例,比较了不同补料培养基的发酵性能。实验结果表明该补料培养基及补料方法适用于两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌等多种双歧杆菌,而且能够达到较高的活菌密度。本研究提出的补料培养基及补料方法可为双歧杆菌的高密度培养提供有效的解决方案。关键词:双歧杆菌;高密度培养;补料培养基;补料方法;碱泵耦合中图分类号:G482[color=gray] [/color]文献标识码:A[align=center]A supplementary culture medium and supplementation method for high-density cultivation of Bifidobacterium[/align]JI Xuemeng(School of Medicine, Nankai University, Tianjin 300071, China)Abstract: Bifidobacterium plays a significant role in maintaining host health, making the exploration of high-density cultivation conditions crucial. Currently, the high-density cultivation of Bifidobacterium is mainly influenced by the optimization of culture medium components and cultivation conditions. Here, we report a supplementary culture medium and supplementation method for high-density cultivation of Bifidobacterium. The method utilizes coupling of supplementation with an alkaline pump to control the supplementation rate of the culture medium by adjusting its pH value. Furthermore, optimization experiments of the supplementation culture medium were conducted by varying the ratio of sodium hydroxide to glucose concentrations, comparing the fermentation performance of different supplementation culture media. Experimental results demonstrate that this supplementation culture medium and supplementation method are applicable to various Bifidobacterium strains such as Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, and Bifidobacterium longum, achieving high viable cell densities. The proposed supplementation culture medium and supplementation method in this study offer an effective solution for high-density cultivation of Bifidobacterium.Key words: Bifidobacterium high-density cultivation supplementary culture medium supplementation method alkaline pump coupling双歧杆菌广泛分布于动物和人类的肠道中,已经发现双歧杆菌在维护宿主健康方面起着极其重要的作用,双歧杆菌作为益生菌的功能特性已经引起了越来越多的关注[sup][back=yellow][1-3][/back][/sup]。双歧杆菌的益生菌制剂有潜力通过选择和加强有益菌群来调节肠道微生物群的组成和微生物平衡,从而更有利于人体健康。双歧杆菌制剂已被报道能改善肥胖相关特征、缓解便秘和增强免疫力[sup][back=yellow][4-6][/back][/sup]。双歧杆菌已经成为国内外正在快速发展的微生态制剂中的主要菌种之一。努力探索双歧杆菌的高密度生长条件,对于提高该菌的生产效率和应用推广具有重要意义。双歧杆菌的高密度培养条件的摸索主要涉及培养基组分和培养条件的优化。目前,MRS培养基是最常用的双歧杆菌等乳酸菌培养基,被广泛地用于双歧杆菌的发酵中[sup][back=yellow][7][/back][/sup]。双歧杆菌的最适生长 pH 值在 6.0-7.0 之间[sup][back=yellow][8][/back][/sup],然而,由于双歧杆菌发酵过程中会产生有机酸等代谢副产物,导致培养过程中培养基的 pH 值不断地降低,限制细菌的生长[sup][back=yellow][9-11][/back][/sup]。为解除酸等代谢副产物对双歧杆菌生长的限制,一些创新型的发酵培养方法已经被提出,比如细胞周期培养、透析培养、细胞固定培养和嵌入法[sup][back=yellow][12-15][/back][/sup]。然而,这些方法在工业应用中受到了各种因素的限制。目前,分批的发酵罐内恒定pH培养方法仍然是主流,在发酵中通过添加碱性溶液来控制培养基的pH值,以减轻酸性生长抑制。在解除酸性生长抑制后,双歧杆菌的生长还受到渗透压和底物不足的限制[sup][back=yellow][16][/back][/sup]。许多营养物在高浓度下导致的高渗透压对细胞有抑制作用,而为了达到高细胞密度,又必须供给大量的营养物质。因此,为了双歧杆菌培养中有效地利用底物,必须优化培养过程以解决底物浓度和渗透压之间的矛盾。将浓缩营养物以与其消耗速率成比例地加入反应器中是一种有效的解决底物浓度和渗透压之间的矛盾的方法,为此产生了多种形式的补料喂养模型:间歇喂养,恒定喂养和指数喂养[sup][back=yellow][17-19][/back][/sup]。在间歇补料喂养中,通过周期性检查并补充生长基质中的葡萄糖含量达到稳定葡萄糖浓度的目的,然而,这种补料模型决定了必然需要大量人力。而且在对数生长阶段,细菌细胞快速消耗葡萄糖,因此在任何两个测量间隔期间可能发生底物缺乏,可能会导致补料不及时,进而影响细菌的生长。在恒定补料喂养中,饲料介质以恒定的流速持续添加到发酵培养基中。这种方法优点是减少了人力需求。但是,益生菌对葡萄糖的消耗速率不是恒定的,这就导致了低喂养速率可能导致细菌生长的底物不足,而高喂养速率会引起过量底物积累,也会抑制细菌生长。对于指数喂养模型,在益生菌前期生长阶段,指数喂养能够很好的耦合细菌对数生长。然而,在细菌对数生长后期,细菌生长速率趋缓,而流加速率继续指数增加会导致底物浓度迅速增加,进而对细菌菌株的生长能力造成不良影响。因此,指数喂养模型也不是合理的方法。综上所述,在益生菌菌株生长期间,这些方法均不能准确控制生长介质中的葡萄糖含量。目前,针对双歧杆菌等厌氧菌发酵过程中产酸,而且产酸与消耗的碳源成正比的特性[sup][back=yellow][20][/back][/sup],通过将补料与碱泵偶联,可实现了补碱的同时补加碳源。然而,补料与碱泵偶联对于发酵罐技术要求高,该技术仍没有在实验室和工厂中得到广泛推广。1? 补料系统的设计为克服现有技术中的缺陷,这里提出了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法,技术方案如下:一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基,该补料培养基包括质量比为1:10的氢氧化钠与葡萄糖。其中氢氧化钠浓度小于等于50 g/L,葡萄糖浓度小于等于500g/L。可减少补料培养基中氢氧化钠、葡萄糖和溶氧氧化还原反应产生的副产物浓度。为了减少补料培养基中氢氧化钠、葡萄糖和溶氧的氧化还原反应,配制补料培养基的水应尽可能减少溶氧。可通过高温灭菌、煮沸、通氮气或通二氧化碳的方法减少溶氧。氢氧化钠和葡萄糖溶液应分别进行灭菌后进行混合。使用所述的补料培养基的补料方法,需将补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接,根据所述的发酵培养基的pH值控制所述的补料培养基的补入量即成。碱泵的流速为5-10mL/min;碱泵的每次开启时间小于等于30s;发酵培养基的pH值的检测周期为20s。补料培养基补入后发酵培养基的pH值与补入前发酵培养基的pH值之差小于等于0.1。用于双歧杆菌高密度培养的发酵的方法包括如下步骤:(1)将双歧杆菌种子液接种至发酵培养基中进行发酵;(2)将补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接,根据所述的发酵培养基的pH值控制所述的补料培养基的补入量;(3)在发酵过程中,间隔1小时对发酵培养基取样,检测580nm-620nm下的吸光度值,并检测葡萄糖浓度与活菌数目,当吸光度值大于0.5且相邻2次取样的吸光度值相等或降低即为发酵结束。2? 补料培养基的优化制备如下5种补料培养基,其中氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值分别为1:2、1:5、1:10、1:20、1:40,以比较发酵性能。发酵培养基组成如下:1000mL蒸馏水、14.3g大豆蛋白胨、16.7g酵母粉,10g葡萄糖,0.5g可溶性淀粉,1g氯化钠,1g磷酸氢二钾,1g磷酸二氢钾,0.01g FeSO4?7H2O,0.005g MnSO4,0.2gMgSO4,0.5g L-半胱氨酸,使用50g/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.8;其中L-半胱氨酸配制为50g/L浓度,膜过滤除菌,在发酵培养基灭菌结束后再按照1/100(v/v)加入L-半胱氨酸。发酵罐通气孔中接入氮气,使得溶氧降至1mg/L以下;设置发酵参数:发酵温度设为37.0℃范围内,搅拌转速200r/min,培养基温度达到37.0℃后,在火焰圈的无菌环境下按照5%(v/v)的接种量加入种子液,同时,加入3滴消泡剂;开启发酵罐搅拌器,设置种子液加入后的培养基的当前pH值6.6为发酵设定pH值。补料设置参数:将补料培养基中碱泵利用软管连接,设置碱泵最大流速为10mL/min,设置碱液根据pH自动控制加入,设置碱泵启动参数为pH值小于6.55,设置每隔10秒测定一次pH值,设置每次碱泵开启时间15秒;发酵中,每隔3小时测OD,每隔5小时取样监测培养液葡萄糖浓度,检测到15小时。如[back=yellow]图1[/back]所示,发现在发酵前5小时,各补料培养基都可以维持葡萄糖浓度处于适宜双歧杆菌快速生长的浓度(灰色范围),而从发酵10小时开始,氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值为1:2的补料出现了葡萄糖浓度的下降,说明该碱碳比例在发酵后期不足以满足双歧杆菌开始生长对碳源的需求。同样的,从发酵10小时开始,氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值为1:40的补料出现了葡萄糖浓度的过高,说明该碱碳比例在发酵后期不足可能产生高渗透压,不适合双歧杆菌的生长。而氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值1:5至1:20补料可以维持发酵过程中葡萄糖浓度的稳定。综合下来,我们发现了补料培养基中氢氧化钠浓度(C碱,g/L)和葡萄糖浓度(C料,g/L)的合适比值为1:5至1:20。[align=center][back=yellow]图1[/back] 不同配比的补料培养对发酵体系葡萄糖浓度的影响的柱状图[/align]3? 补料系统的应用实践3.1? 两歧双歧杆菌高密度培养如[back=yellow]图2[/back]所示,使用本方法,发酵体系中pH值始终保持在6.6±0.1,葡萄糖浓度始终维持在9-13g/L,发酵结束时,发酵液总体积达到4.9L,吸光度达到OD620 12.8,活菌密度最高达到 8.5±0.2 ×10[sup]9[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图2[/back] 两歧双歧杆菌的高密度培养的曲线图3.2? 长双歧杆菌高密度培养如[back=yellow]图3[/back]所示,使用本方法,发酵体系中pH值始终保持在6.9±0.1,葡萄糖浓度始终维持在8.5-13g/L,发酵结束时,发酵液总体积达到4.4L,吸光度达到OD[sub]620[/sub] 9.2,活菌密度最高达到 6.4±0.2 ×10[sup]9[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图3[/back] 长双歧杆菌的高密度培养的曲线图3.3? 青春双歧杆菌高密度培养如[back=yellow]图4[/back]所示,使用本方法,发酵体系中pH值始终保持在6.7±0.1,葡萄糖浓度始终维持在7-11g/L,发酵结束时,发酵液总体积达到4.6L,吸光度达到OD[sub]620[/sub] 15.3,活菌密度最高达到 1.2±0.1 ×10[sup]10[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图4[/back] 青春双歧杆菌的高密度培养的曲线图3.4? 动物双歧杆菌的高密度培养如[back=yellow]图5[/back]所示,使用本方法,发酵体系中pH值始终保持在6.5±0.1,葡萄糖浓度始终维持在7-12g/L,发酵结束时,发酵液总体积达到4.2L,吸光度达到OD[sub]620[/sub] 20.5,活菌密度最高达到 1.7±0.1 ×10[sup]10[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图5[/back] 动物双歧杆菌的高密度培养的曲线图4? 结语该研究提供了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法,补料方法包括如下步骤:将补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接,根据发酵培养基的pH值控制补料培养基的补入量即成。通过优化补料培养基及补料方法,无需发酵罐补料偶联技术便实现了根据pH值变化,利用碱泵自动补充碳源和碱液,实现了保持pH值和碳源浓度的稳定;该补料方法对发酵罐的设备技术要求低,操作简单,降低了发酵成本。参考文献(References):[1]杨硕,唐宗馨,段勃帆,陈禹含,郭欢新,孟祥晨.双歧杆菌及其制剂对炎症性肠病作用机制研究进展[J].食品科学,2023,44(05):275-281.[2]马岩,王中江,杨靖瑜,李哲,彭霞,单秀峰,李柏良,马微微.动物双歧杆菌乳亚种XLTG11对克林霉素诱导的抗生素相关性腹泻的改善作用[J].食品科学,2023,44(03):170-178.[3]李虔全,罗京,周江,刘亭,陈于彪,彭霞,杨建,胡闵山.孟鲁司特钠联合双歧杆菌四联活菌治疗儿童过敏性紫癜有效性Meta分析[J].海峡药学,2023,35(01):127-133.[4]石英,拉巴普尺,张丹瑛,翁书强,刘心怡,汪皓琪.双歧杆菌对高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠非酒精性脂肪肝的影响[J].中国临床医学,2022,29(03):473-480.[5]陆敏,袁琳,胡娜,钟霄毓,姜逸,林敏,陆雄.双歧杆菌三联活菌对肥胖小鼠慢性低度炎症的影响[J].卫生研究,2022,51(05):797-802.DOI:10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2022.05.020.[6]李亦汉,王琳琳,赵建新,张灏,王刚,陈卫.两歧双歧杆菌CCFM1167通过提升肠道中乙酸水平以抑制炎症从而缓解便秘[J].食品与发酵工业,2023,49(06):35-41.DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.031238.[7]Umar Farooq. 小米膳食纤维作为主要碳源对益生菌生长和发酵过程中短链脂肪酸产量的影响研究[D].江南大学,2013.[8]杨玲,张栋,齐世华,马新颖,周帅康,艾连中,王世杰.两歧双歧杆菌TMC3115冻干菌粉生产工艺优化[J].乳业科学与技术,2021,44(05):12-17.DOI:10.15922/j.cnki.jdst.2021.05.003.[9]熊三玉. 两歧双歧杆菌驯化及培养条件优化的研究[D].中国海洋大学,2007.[10]冯诗诗. 长双歧杆菌F16的益生特性及其在酸浆豆腐制备中的应用[D].河南工业大学,2022.DOI:10.27791/d.cnki.ghegy.2022.000088.[11]武婷,郭帅,杨阳等. 动物双歧杆菌乳亚种Probio-M8在发酵山羊乳中的应用[C]//中国食品科学技术学会.第十七届益生菌与健康国际研讨会摘要集.[出版者不详],2022:149-150.DOI:10.26914/c.cnkihy.2022.018592.[12]赵春燕,张颖,王丹,刘臻.乳酸菌细胞固定化发酵的研究进展[J].中国酿造,2009(05):11-14.[13]李秀凉,雷虹,张龙丰,周东坡,平文祥.从L-乳酸菌酸菜发酵液中初步分离肽类抑菌物质[J].食品工业科技,2008(07):91-93.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2008.07.022.[14]邓鹏超. 乳酸菌的高密度培养及酸奶冻干发酵剂的研究[D].华中农业大学,2008.[15]于修鑑. 乳酸菌高密度培养及浓缩型发酵剂研究[D].南京工业大学,2004.[16]黄晓英. 传统发酵食品中具有抑菌特性乳酸菌的筛选、抑菌机理及其在泡菜发酵中的应用[D].西南民族大学,2022.DOI:10.27417/d.cnki.gxnmc.2022.000050.[17]彭海芬. 阿维拉霉素高产菌株的选育及其发酵条件优化[D].河南工业大学,2022.DOI:10.27791/d.cnki.ghegy.2022.000511.[18]吴斌.罗非鱼无乳链球菌SIP-pET32a基因工程菌高密度发酵工艺及SIP蛋白提取方及SIP蛋白提取方法研究[J].中国水产,2022(11):73-78.[19]熊华仪,陈曦,刘月锋,陈雄,李沛,王志.补料策略优化促进乳球菌HB03发酵合成Nisin[J/OL].食品科学:1-11[2023-05-18].http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.2206.ts.20230428.1620.026.html[20]孙东霞,周子安,冯志合,胡修玉,祁光霞,董黎明.pH值调控柠檬酸污泥厌氧发酵产酸及碳源潜力研究[J].中国环境科学,2022,42(11):5198-5207.DOI:10.19674/j.cnki.issn1000-6923.20220620.001.收稿日期:2023-10-19 修改日期:第一作者简历:季学猛,硕士,实验师,研究方向为生物化工、机器学习;生物信息学。E-mail:jixuemeng@nankai.edu.cn。
求大神指导表面染菌密度的检测方法和判定标准
各位老师,平均功率密度该如何计算呀,辐射设备显示分钟数值
[em09509]我要做非均相溶液密度与温度关系测定,谁有好的仪器帮忙推荐下,是非均相液体哦
基本原理发酵工业是既古老又崭新的工业,它的形成经历了漫长的岁月。随着科学技术的发展,发酵工业不断地得到发展和充实。现代发酵工业就是传统的发酵技术与现代DNA重组、细胞融合等新技术相结合,而发展起来的现代生物技术,并通过现代化学工程技术生产有用物质或直接用于工业化生产的一种大工业体系,是生物技术的重要组成部分。 发酵工业在基因工程药物的研制方面起着不可替代的作用。重组DNA技术和大规模培养技术的有机结合,使得原来无法大量获得的天然蛋白特别是基因工程药物能够大量生产,应用于临床的基因工程药物的市场正以每年5~15%的速度增长。采用高密度发酵技术,可以提高菌体的密度,最终提高产物的比生产率(单位体积单位时间内产物的产量)不仅可以减少培养体积、强化下游分离提取,还可以缩短生产周期,减少设备投资从而降低生产成本,提高市场竞争力。 发酵工程菌除有高浓度、高产量、高产率外还应该满足:能利用易得的廉价原料;不致病,不产生内毒素;容易进行代谢调控;易于进行DNA重组技术。目前应用最多的是大肠杆菌(遗传背景清楚、操作简便、培养条件容易控制、成本低)。 工程菌生长繁殖需要的条件是:良好的物理环境--发酵温度、pH值、溶氧量等;合适的化学环境--适宜工程菌生长代谢所需的各种营养物质的浓度,并限制阻碍生长代谢的有害物质的浓度。在发酵过程中许多控制参数对工程菌的生长构成影响,需不断加以调整(见下表),从而达到优化控制目的。http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2012/08/1345599372_small.jpg发酵工艺分为批式发酵、流加式培养(Fed-batch)和程控发酵
"试件在测试状态下平均密度:****,试件有效平均厚度:****"请问在这句话中的:测试状态下平均密度,有效平均厚度。怎么理解?该怎么计算?多谢。
据报道,全球已有170人感染了超级细菌。其中,一名比利时男子确诊为感染超级细菌死亡;而在英国,超级细菌至少造成5人死亡。这超级细菌究竟是何方神圣?难道真是被人类给逼出来的吗? 8月11日,医学权威杂志《柳叶刀》刊登的一篇论文说,2009年英国发现有一种带有NDM-1的大肠杆菌感染病例增加。这种细菌超级顽强,几乎能抵御目前所有的抗菌药物,并已经导致一些病人死亡。英国的研究者发现,感染这种细菌的患者中有许多在1年内曾经去过印度或巴基斯坦接受手术治疗,因此怀疑这种细菌来源于南亚。科学家们担心这种超级细菌很可能向全球蔓延。 何谓超级细菌 NDM-1是新德里金属β内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase 1)的英文缩写。之所以被称为金属β-内酰胺酶,是因为它上面含有金属离子,这种酶就是依靠上面的金属离子来破解抗菌药物的活性密码,使病菌对许多药物产生了抗药性。我国也曾发现金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的感染病例。最近发现的这种带有金属β-内酰胺酶大肠杆菌是一种新类型,怀疑是从印度传入的,因此被冠以印度首都新德里之名。 超级细菌是人类逼出来的 超级细菌身上的NDM-1实际上是人类给逼出来的。由于人类抗菌药物的广泛应用,尤其是不合理的使用,使许多细菌在抗菌药物的强大压力下不得不逐渐进化,改变自己体内的基因,产生对这些抗菌药物的抗药性,继续在这种恶劣的抗菌环境下生存。
本文是USP24细菌内毒素检查法(BACTERLAL ENDOTOXINS TEST)的译文,但目前执行的标准是USP24版第二增补本(USP—NF19 Second Supplement)的细菌内毒素检查法,读者可对照学习,从中可看出USP24细菌内毒素检查的不足之处。本文将介绍用鲎试剂检测样品内或样品上存在的细菌内毒素浓度的方法。鲎试剂(Limulus Amebocyte,LAL)来自鲎的循环细胞,经水提取而行,制备和检验后,用于凝固法。反应的终点是将供检样品稀释后,与平行稀释的参考内毒素标准进行直接比较得到的。测得的内毒素含量用规定的内毒素单位表示。鲎试剂也是用浊度法或显色法来读取数据的,这些试齐只要能满足这些选择方法的要求,就可以使用。在做试验时,需要先做出一条标准曲线,并用该曲线计算供检样品的内毒素含量,包括样品和对照液加鲎试剂后的培育时间和在分光光度计上读取光密度时使用的波长等操作,都应该事先规定好。如果是终点浊度法,则到达培育期后,应立刻读取读数。而动力学检测(凶手浊度法和显色法),光密度的测定是贯穿于整个反应期间,而用于计算结果的百分数就是从这些读数中计算出来的。在用终点法的显色法检测时,在到达事先规定的反应时间后,添加停止酶反应的试剂使反应停止后,再读取数据。1、参考内毒素标准与对照内毒素标准参考内毒素标准(Reference standard endotoxin,RSE)是美国药典(USP)的内毒素参考标准,其效价为每瓶10 000个USP内毒素单位(EU)。每瓶参考内毒素标准加5ml鲎试剂用水(LAL Reagent Watet),用旋转搅拌器间歇搅拌30min使其溶解,制成原液,用这一原液制作合适的系列稀释。原液应保存于冰箱中,用于以后的稀释,但保存时间不得超过14d。用前,用旋转搅拌器强力搅拌至少3min,每一步稀释,至少搅拌30s,然后才能用它稀释下一步。经稀释的参考内毒素不得贮存待以后使用,因为吸附作用会使其失去活性。对照内毒素标准(Contuol standard endotoxin,CSE)是以参考内毒素标准为标准另行制备的。一批新的对照内毒素标准在使用前应进行检定。检定时使用的鲎试剂应为试验中使用的同批鲎试剂。参考内毒素标准对照内毒素标准进行检定时,可使用鲎试剂的凝固法,按“试验操作”进行。每批对照内毒素标准,至少取1瓶与1瓶参考内毒素标准进行对比。参考内毒素标准的每个稀释度作4管。每瓶或每个样品的对照内毒素标准的每个稀释度也都要4管。参考内毒素标准终点的对数Log10的平均值和对照内毒素标准终点的对数Log10平均值之间的差值的反对数等于对照内毒素标准效价的标定值。可根据情况,将其变换成每ng干燥制剂的单位数或每瓶所含的单位数。适宜的对照内毒素标准的效价应不小于2EU/ng也不大于50EU/ng。2、试验的准备鲎试剂的灵敏度应经过确证。试验中使用的所有容器和用具,都必须在≥250℃的烤箱中,用足够的时间进行加热处理、破坏这些用具表面上可能存在的外源性内毒素。内毒素试验的结果是否可靠,还必须从试验使用的各种用具、溶液、洗涤用品中取样或提取样品,并用适当的方法证明它们对反应没有抑制或拉强或其它干扰作用。可按下述方法进行抑制试验或增强试验。试验中应设置阴性对照。如果鲎试剂的原材料、生产方法或处方发生改变时都要重新进行试验。3、鲎试剂灵敏度的确认试验为了确认鲎试剂标签上的灵敏度,每批至少取1瓶样品进行检定。参考内毒素标准(或对照内毒素标准)作2倍系列稀释,稀释成2.0λ,1.0λ,0.5λ和0.25λ。其中λ是鲎试剂标签上的灵敏度EU/ml。上述4个稀释度和阴性对照都要重复做4管。所得结果的几何平均值的对数应大于或等于0.5λ,小于或等于2.0λ。每一批新的鲎试剂,使用前都必须作标签灵敏度的确认试验。4、抑制试验和增强试验用不超过地大有效稀释而检测不出内毒素的样品,不加或内毒素,使最后浓度等于2.0λ,1.0λ,0.5λ和0.25λ。按照试验操作(Test Procedure)项的规定用标准内毒素进行检定。不加和加内毒素的样品管至少做4管。同时,用水稀释上述相同浓度的内毒素和阴性对照各两管,做平行两管试验。按照计算和判定项的方法,计算样品终点内毒素浓度的几何平均值。如果所得结果大于或等于0.5λ,小于或等于2.0λ,则该样品适合作细菌内毒素检查。用中和、灭活或除去干扰物质方法或用不超过最大有效稀释度稀释检品后,可重做抑制试验和增强试验。如果用不超过最大有效稀释法,对已知加量的内毒素可以克服抑制和增强作用。则样品可以经过稀释后,再作内毒素检查。如果在试验条件下,对未处理的样品检查出有内源性内毒素。则该样品不适合用于作抑制或拉强试验。不过,这种样品可用超过滤法将存在的内毒素去掉或做适当稀释、使之适合于作抑制或增强试验。稀释未处理样品(像开瓶溶解或在使用前注射前稀释那样),稀释到检验不到内毒素但不超过最大有效稀释倍数。再用这些已稀释的样品重作抑制试验或增强试验。5、最大有效稀释度(MVD) 最大有效稀释度是指在使用时将药物溶解或稀释成恰好用于注射或其它非经口途径使用的浓度。有时为了避免给药量的体积(EU/ml)计算。用试剂标签上的灵敏度(EU/ml)λ除限定浓度,就可以得到MVD因子。如果某一试剂的限量浓度是按重量或按药品的活性单位
有这样一个问题,是男人的手干净还是女人的手干净,你会不会认为“那还用说,当然是女人的手干净了”?一则女人在条件允许的情况下通常更讲卫生,二则女人做粗活的也比男人少。实际情况又是如何呢?一项最新研究发现,女性跟男性比,手上细菌种类更多。据美联社报道,在美国国家卫生研究院与美国国家科学基金会资助的一项研究中,研究人员取得了重要发现。他们从五十一名大学生的一百零二只手提取了样本,通过最新的高精密度的系统检测细菌的脱氧核糖核酸(DNA),看到四千七百四十二种细菌,每只手上都存在的仅仅为百分之五,平均每只手有一百五十种细菌。美国科罗拉多大学生物化学助理教授罗布奈特说:“让人感到吃惊的是,人不同,细菌种类就这么不同,而且一个人两只手上的细菌也很不相同。”该校生态学与进化生物学助理教授诺厄法伊尔说:“受试者手上细菌种类的数量多得惊人,女人手上细菌的多样性同样让人惊叹不已。”女性手上为什么会藏有如此之多的细菌呢?研究人员还没有准确的结论。尽管如此,法伊尔依然表示,这很可能与皮肤的酸碱性有关系。用奈特的话说就是,男性皮肤的酸性要比女性的大。还有就是男女在出汗与油脂分泌、润肤霜和化妆品的使用次数、皮肤厚度与激素分泌等方面有差别。还有一种可能不能忽视,那就是女性身上的一些细菌生活在皮肤下面,那种地方看不到,因而无法洗掉。不过,奈特强调说,“我们身上的大多数细菌无害也无益,病菌仅仅是一小部分。”另一个有意思的现象就是前面提到的,左右手之间“藏污纳垢”能力也不相同,研究人员称,两手相同的细菌种类占人手上细菌种类总数的百分之十七。有人干什么都用“正手”,有人则是左撇子。两手之间细菌种类差别那么大,原因很可能是环境条件不同造成的,比如油脂分泌、盐分、水分以及每个人一只手接触物体表面的多少。手上为什么会有这么多细菌呢?研究人员给出的答案就是,要么就是手刚刚洗完,细菌王国就迅速重新建立了起来,要么就是根本没洗掉,一些参与试验的学生就是这种情况。由此看来,洗手不仅要经、认真,还要注意保持洗手效果。尽管试验得出了结果,可是研究人员并不认为这一试验具有普遍性。这是因为不同地区的人两手的作用不太相同,“任务”各异。也正是这个原因,研究人员希望在其他国家开展他们的试验。这些试验也许能知道有多少种细菌出现在手上,可是每一只手上有多少细菌却数也数不过来。好在多数细菌无海也无益,否则我们每天别的都不用干了,就为手上的细菌忙活得了。吓着您了,对不起。
方法的精密度精密度(precision)是指用一特定的分析程序在受控条件下重复分析均一样品所得测定值的一致程度,它反映分析方法或测量系统所存在随机误差的大小。极差、平均偏差、相对平均偏差、标准偏差和相对标准偏差都可用来表示精密度大小,较常用的是标准偏差。在讨论精密度时,经常要遇到如下一些术语:1. 平行性平行性系指在同一实验室中,当分析人员、分析设备和分析时间都相同时,用同一分析方法对同一样品进行双份或多份平行样测定结果之间的符合程度。2. 重复性重复性系指在同一实验室内,当分析人员、分析设备和分析时间三因素中至少有一项不相同时,用同一分析方法对同一样品进行的两次或两次以上独立测定结果之间的符合程度。3. 再现性再现性系指在不同实验室(分析人员、分析设备、甚至分析时间都不相同),用同一分析方法对同一样品进行多次测定结果之间的符合程度。方法精密度用变异系数(C.V.)表示。 CV =标准偏差/平均值 X 100% 根据Horwity方法,实验室内和实验室间分析方法的变异系数范围如表7-5。表7-5 残留分析方法的实验室间和实验室内变异系数分析浓度C.V(%)实验室间实验室内10 mg/kg1171 mg/kg1611100μg/kg231510μg/kg32211μg/kg45300.1μg/kg6443
[color=#333333]常见的细菌性食物中毒细菌有哪些?[/color]
密度计是印刷厂常用的原稿测量仪器。是测量黑白原稿的灰度值和测量连续调或网点值的光电测量仪器。密度计分为透射式密度计和反射式密度计两种。透射式密度计适于测量透明原稿,反射式密度计适于测量实地原稿。密度计的测量范围是0—2.5,数字越大,黑度越高。 密度计 测量的基本原理是,衡量感光材料曝光和显影后的变黑程度即黑度 密度计。在制版时,感光材料上的溴化银,受到光照作用,显影后还原成金属银,形成一定的阻光度。黑度大的,密度高;黑度小的,密度低。带有滤光片的测量计,还可以测量彩色原稿的彩色密度。其测量原理与上述基本原理相近。 在物理实验中使用的密度计,是一种测量液体密度的仪器。它是根据物体浮在液体中所受的浮力等于重力的原理制造与工作的。密度计是一根粗细不均匀的密封玻璃管,管的下部装有少量密度较大的铅丸或水银。使用时将密度计竖直地放入待测的液体中,待密度计平稳后,从它的刻度处读出待测液体的密度。 常用密度计有两种,一种测密度比纯水大的液体密度,叫重表;另一种测密度比纯水小的液体,叫轻表。
.4 水质的细菌学检测 9.4.1 水中细菌总数的检测 9.4.1.1 目的和原理 水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关,它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。由于重金属及某些其它有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用,因此总细菌数少的水样,并不能排除已被这些物质所污染。本试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数,这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法,由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状,成簇或成团的形式存在,此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求,所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。细期总数是指1毫升水样在营养琼脂培养基中,37℃、24小时培养后所生长的菌落数。一般规定,1毫升自来水中总菌数不得超过 100个。 9.4.1.2 材料和器皿 (1)培养基①营养琼脂培养基②2216E培养基:蛋白胨 5.0克 酵母膏 1.0克 FePO4 0.01克 琼脂 18.0克 陈海水 1000毫升 pH 7.6~7.8 (2)无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿,盛有90ml及 9mL灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。 9.4.1.3 方法和步骤 (1)采集水样。(2)吸取10 ml水样(河水、污水、游泳池水或港湾水等),注入盛有90ml无菌水或无菌海水的三角瓶中,混匀成10-1稀释液,在吸水样前,水样应彻底搅动均匀。(3)按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、10-4。(4)根据水样的洁净程度,污染严重者选取10-2、10-3、10-4稀释度;中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度,每个稀释液分别注入两个培养皿,每皿 1ml。稀释度的选择是本试验精确度的关键,选择适宜者,平皿上菌落总数介于30—300个之间。(5)注入彻底融化,然后冷却到45℃的营养琼脂培养基(用于河水样)或2216E培养基(用于海水、港湾水样)约15ml,立即旋摇培养血,充分混匀,水平放置至固化。(6)接种河水的培养皿,倒置于37℃培养24小时。接种海水样,港湾水样的培养皿,应倒置后于18—20℃下培养到长出明显菌落(5天左右)止。 9.4.1.4 结果与分析 取同一稀释度的平板培养物,依菌落计算原则进行计算。(1)菌落计算原则平皿菌落的计算,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,防止遗漏,也可借助于菌落计数器计数。对长得相当接近,但不相触的菌落,应予以—一计数。对链状菌落,应当作为一个菌落来计算。平皿中若有较大片状菌落时则不宜采用,若片状菌落少于平皿的一半时,而另一半中菌落分布又均匀,则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。算出同一稀释度的平均菌数,供下一步计算时用。(2)计算方法①首先选择平均菌落数在30~300者进行计算。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,即可用它作为平均值乘其稀释倍数(见表5-9的例1)。②若有两个稀释度的平均菌落数都在30—300之间,则应按两者的比值来决定。若其比例小于2,应报告两者的平均数;若大于2,则报告其中较小的数字(见表7-例2和例3)。③如果所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表5-9例4)④若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表5-9例5)。⑤如果全部稀释度的平均菌落数均不在30—300之间,则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表5-9例6)。③菌落计数的报告,菌落在100以内时,按实有数报告;大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算,为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示(见表5-9的“报告方式”栏)。 表5-9 稀释度选择及菌落报告方式 例次 不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比 菌落总数(个/ml)报告方式(个/ml) 10 -1 10 -2 10-3 1136016420-1640016000或1.6×104 22760295 461.63775038000或3.8×104 3289027160 2.22710027000或7×104 4无法计数4651513-513000510000或5.1×105 527 11 5 -270 270或2.7×102 6无法计数305 12- 30500 31000或3.1×104
一.蔗聚糖—泛影葡胺(Feicoll-Hypaque)溶液 1.蔗聚糖――泛影葡胺可使红细胞聚集成串后沉降,及粒细胞沉降,最多用于人外周血单细胞分离,常用400×g,15-30分钟,水平离心; 2.可用膜滤器除菌,也可用加热高压灭菌; 3.离心时保持20度效果较为重要,温度过高或过低均影响分离效果; 4.可用于人外周血、骨髓等分离单个核细胞、E花环、EA细胞分离、肿瘤细胞分离、TIL等分离及死细胞去除等。 二.Percoll分层溶液 1.Percoll可以制备成不同密度使用液,形成不连接密度,用于分离各种不同密度的细胞;也可用转角离心机2000×g转角离心(28度)1小时,产生S形连续梯度,其不同部位的密度可用不同密度的色珠指示,用于分层分离不同密度的细胞; 2.可高压灭菌,但压力过高可形成胶状,长期储备的原液有时会析出结晶,不影响其使用; 3.常用于人单核细胞、NK细胞、B淋巴细胞、小鼠低密度细胞、枯否氏细胞等分离。 三.Metrizamide 1.可用PBS配制不同密度,用于各种细胞分离;但浓度过高易引起细胞聚集。 2.常用于树突状细胞。
在理化实验中,经常出现精密度要求如水分,精密度要求两次平行结果的绝对差值不超过算术平均值的5%是不是这样理解:如两次测定结果分别为A、B,平均值为X=(A+B)/2如果︱A—B︳/X<5%,则结果认同,最终结果取平均值。那这个︱A—B︳/X是不是就是相对偏差?如果不是,相对偏差应该是多少?
请问精密度的计算是这样的吗?两个面积计算平均值,然后用其中的一个面积减去平均面积的差除以平均值的结果.
在理化实验中,经常出现精密度要求如水分,精密度要求两次平行结果的绝对差值不超过算术平均值的5%是不是这样理解:如两次测定结果分别为A、B,平均值为X=(A+B)/2如果︱A—B︳/X<5%,则结果认同,最终结果取平均值。那这个︱A—B︳/X是不是就是相对偏差?如果不是,相对偏差应该是多少?
[b]织物组织密度测试工作指示[/b]1.0目的与范围1.1 本方法适用于测定任何布料的密度。1.2 本方法是适宜于下列标准:梭织物:ASTMD3775 针织物:ASTMD38872.0原理梭织物:量度1英寸的纱线根数。针织物:量度1英寸内的纵行数或者横列数。3.0设备织物密度镜4.0标准温湿度环境相对温度:20±2℃ 湿度:65±2%5.0试样对整匹织物的检验,抽取一块长为2米,有幅宽的织物。6.0测试程序 将测试织物放入恒温恒湿室至少4小时以上。 6.1 梭织物测试:6.1.1 当织物宽度在40英寸以上,取样位置离布边6英寸以上,离头尾不少于0.5码。 6.1.2 当织物宽度少于40英寸而大于5英寸,取样位置离布边在幅宽的1/10以上,离头尾不少于0.5码。 6.1.3 当织物宽度少于5英寸,数完所有长度的密度。 6.1.4 对于提花织物组织至少数完一个循环内的密度。 6.1.5 当织物密度每英寸少于25根时,每个位置数3英寸内的根数。 6.1.6 当织物密度每英寸多于25根时,每个位置数1英寸内的根数。 6.1.7 延着织物长度,宽度方向数五个不同的位置点,求出平均数。6.2 针织物测试 6.2.1 织物密度每英寸内多于10圈,每个位置数2英寸以上的圈数。 6.2.2 织物密度每英寸少于10圈,每个位置数4英寸以上的圈数。7.0 测试报告 7.1.1 织物密度,取五个数的平均数。 7.1.2 织物密度=经向x纬向 =纵向x横列向
据台湾《联合晚报》报道,台湾“中央研究院”院长翁启惠和基因体研究中心副研究员马彻共同领导的研究团队,成功解构了细菌的保护屏障,突破了苦恼全球科学家20年的“细菌谜团”。 长久以来,医药界一直以转胜肽酶为标的,设计出一系列对抗细菌的抗生素,其中最有名的就是盘尼西林;然而,随着细菌抗药性的增加,这类抗生素的威力大不如前,人类在遭受各种细菌的强大威胁时,也逐渐面临无药可用的窘境。 马彻说,虽然科学家清楚知道透过抑制转醣酶来开发新一代抗生素,但因对转醣酶的结构及作用机制不清楚,20年来进展有限。“中研院”基因体研究中心近年来针对转醣酶进行一系列研究,成功利用X光绕射方法,清晰解构出金黄色葡萄球菌细胞壁上转醣酶及其受质的复合结构。今后只要设计出可阻断转醣酶继续作用下去的小分子药物,就能开发出可杀死细菌的新一代抗生素。 据报道,这项重要的研究发现,发表在“美国国家科学院期刊”最新一期刊物中,引起全球科学界高度重视。翁启惠认为,这是未来解决具抗药性细菌的利器,很有前景。
这是决定HDPE特性的主要变量,虽然被提到的4种变量确实起到相互影响作用。乙烯是聚乙烯主要原料,少数的其它共聚单体,如1一丁烯、l一己烯或1一辛烯,也经常用于改进聚合物性能,对HDPE,以上少数单体的含量一般不超过1%-2%。共聚单体的加入轻微地减小了聚合物的结晶度。这种改变一般由密度来衡量,密度与结晶率呈线性关系。美国一般分类按ASTM D1248规定, HDPE的密度在 0.940g/。C以上;中密度聚乙烯(MDPE)密度范围0.926~0.940g/CC。其它分类法有时把MDPE归类于HDPE或LLDPE。均聚物具有最高密度、最大的刚度,良好的防渗透性和最高的熔点,但一般具有很差抗环境应力开裂(ESCR)。ESCR是PE抗由机械或化学应力所引起的开裂性的能力。更高的密度一般改进了机械强度性,例如拉伸强度、刚度和硬度;热性能如软化点温度和热变形温度;防渗透性,如透气性或水蒸气透过性。较低的密度改进其冲击强度和E-SCR。聚合物密度主要是受共聚单体加入的影响,但较少程度也受分子量影响。高分子量百分数使密度略有降低。例如,在一个较宽分子量范围内均聚物具有不同的密度。
请教:流体在加热时会温度不均而产生密度不同,因而有密度差产生的流动,其一般的计算内容及公式如何?
细菌内毒素1 设备:电冰箱、恒温水浴箱、超净工作台、旋涡混合器、计时器2 用具:剪刀、镊子、无热原空安瓿5mg/支、浮板、封口膜、精密[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url](50ml-250ml、250ml-1000ml)、吸头(50ml-250ml、250ml-1000ml)、PH试纸3 试剂3.1 细菌内毒素工作标准品:用于仲裁鲎试剂的灵敏度和各种阳性对照。3.2 鲎试剂:为冻干品制剂,灵敏度为0.25EU/ ml,规格为:0.1ml/支3.3 细菌内毒素检查用水:内毒素含量不超过0.03EU/ml注射用水。(BET水)3.4 0.1mol/L HCl溶液、0.1mol/L NaOH溶液(临用时用细菌内毒素检查用水配制)。3.5 清洁液:75%酒精4 操作步骤4.1 鲎试剂灵敏度复核试验:鲎试剂灵敏度定义为在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度,用EU/ml表示。4.2 根据鲎试剂灵敏度的标示值(λ),将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解,在旋涡混合器上混匀15分钟,然后制成2.0λ、1.0λ、0.5λ或0.25λ四个浓度为内毒素标准溶液,每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟,按检查法项下试验,每一浓度平行做4支,同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照,如最大浓度2.0λ管均为阳性,最低浓度0.25λ管均为阴性,阴性对照管均为阳性,按下式计算,反应终点浓度的几何平均值,即为鲎试剂灵敏度的测定值(λc)。λc=lg-1(∑x/4)当λc在0.5λ-2.0λ(包括0.5λ-2.0λ)时,方可用于细菌内毒素检查,并以λ为该批鲎试剂的灵敏度。5 干扰试验5.1 用细菌内毒素检查用水和未检出内毒素的供试品溶液或其不超过最大有效稀释倍数的稀释液分别将同一支细菌内毒素工作标准品制成含细菌内毒素工作标准品2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ四种浓度的内毒素溶液。用细菌内毒素检查用水和供试品溶液制成每一浓度平行做4支,另取细菌内毒素养检查用水和供试品溶液各做2支阴性对照管。如果最大浓度2.0λ管均为阳性,最低浓度0.25λ管均为阴性,阴性对照管均为阴性时,按下式计算,用细菌内毒素检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(Es)和用供试品溶液或其稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值(Et)。Es=lg-1(∑xs/4)Et=lg-1(∑xt/4)当Es在0.5 λ-2.0λ,且当Et在0.5Es和2.0Es时,则认为供试品在该浓度下I 干扰试验。6 检查法6.1 精密称取土霉素检品适量,加0.1mol/L HCl溶液适量溶解,加0.1mol/L NaOH溶液适量,调节PH在6.5-7.5之间,加BET水稀释至一定浓度,备用。6.2 取装量为0.1mol/L的鲎试剂5支,备用。6.3 NC管的制备:取0.2ml BET水加入一支鲎试剂中,摇匀。6.4 PC管的制备:取0.1ml BET水溶解一支鲎试剂,加0.1ml用BET水稀释的含2λ的内毒素工作标准品的溶液,摇匀。6.5 PPC管的制备:取0.1ml BET水溶解鲎试剂,加0.1ml的用供试品的稀释液稀释的含2λ内毒素工作标准品,摇匀。6.6 供试品管的制备:取0.1ml BET水溶解鲎试剂,加0.1ml的供试品稀释液,摇匀。6.7 以上各管按顺序排列,置浮板上,放置37±1℃的恒温水浴箱中,保温1小时±2分钟。7 结果判断:将试管从恒温器中轻轻取出,缓缓倒转180°时,管内凝胶不变形,不从管壁滑脱者为阳性(+)。凝胶从管壁滑脱者并不能保持完整者为阴性(-),供试品管2支均为阴性(-)。应认为符合规定;如2支为阳性(+),应认为不符合规定。如2支中1支为正(+),1支为负(-),按上述方法另取4支供试品管复试。4支中1支为(+),即认为不符合规定。阳性对照品为(-)或供试品阳性对照品管为(-),或供试品阴性对照品为(+),试验无效。[em62]
概念:物理学上用来表示物质分布密集程度的物理量。定义为物质质量与其体积的比值可以用于气、固、液体。实际检测中使用的密度还有印刷上的光密度、粉末颗粒的堆密度等,我这里只讨论最简单的液体的密度的测量。液体密度的测量可以为工艺设计提供数据、推测物质的纯度、快速确定物质的浓度等。在许多液体产品的中间控制和成品检验中,密度是一项重要的指标。密度测定方法:(1)体积称重法:根据概念,只要得知一定的体积的液体的重量,就可以算出密度。采用这一原理测量的方法有密度瓶法。当然我们还有更简单的方法:用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]取一定体积的液体在电子天平上称,由于无法控温,只能用于要求不高的场合。(2)浮力法:根据阿基米德物体所受浮力与体积、密度关系原理所做的测定方法有密度(浮)计、以及我们表面张力仪和天平所带的密度附件。密度计由干管和躯体两部分组成,干管是一顶端密封的、直径均匀的细长圆管,熔接于躯体的上部,内壁粘贴有固定的刻度标尺,躯体为一直径较粗的圆管,底部呈圆锥形或半球状,填有适当质量的重物,可以垂直稳定地漂浮在液体中。测量时要根据测液体密度值的范围密度计。根据不同浓度的液体密度不同,可以将其刻度改为浓度表示来测定酒精浓度、糖度、盐度等。(3)U型管法:利用U型管的振荡频率与其质量关系制作的仪器,它用的样品量少,精度高。我们有一台DMA4000密度计,温度可以控制在15-40度,密度范围0-3g/ml,精度为小数点后4位,2ml样40秒内出数。但有一个含微小颗粒的样品,始终不能读数,还以为机器有了问题,再清洗后拿水校正,发现一切正常,所以以后对样品的测试还是要选择的。
细菌内毒素的概念 细菌内毒素,英文称作Endotoxin,是G-菌细胞壁个层上的特有结构,内毒素为外源性致热原,它可激活中性粒细胞等,使之释放出一种内源性热原质,作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖中的类脂A 细菌内毒素这个概念在1890年的时候就已被提了出来,它是在研究发热物质过程所引成的,1933年Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来,进行化学免疫学方面的研究,到1940年时候,Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体,到了1950年以后,随着生物学,物理化学,免疫学以及遗传学等的进步发展,细菌内毒素的研究工作,尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加明确起来。 细菌英文叫Bacteria:为原核生物中的一类单细胞微生物由二分裂法繁殖。若按革兰氏染色法可将细菌分为G+菌和G-菌两大类。这两类细菌细胞壁的结构和化学组成存在很大差异。唯有肽聚糖为其共同成分,但其含量的多少和肽链的性质有所不同,见下表:细胞壁结构革蓝氏阳性菌革蓝氏阴性菌厚度厚,15—50薄,10—15肽聚糖含量多,占胞壁干重50—80%少,占胞壁干重10%左右脂类含量少,约1—4%多,约11—22%磷壁酸有无外膜无有脂蛋白无有脂多糖无有 细胞壁较薄,厚约10-15nm,结构也较复杂。肽聚糖含量低,仅占细胞干生10%左右,层薄又较疏松,因肽聚糖之间仅四肽侧链直接联结,缺乏五肽桥;肽聚糖居于细胞最内层,外面由内向外还有脂蛋白,外膜和脂多糖的三层聚合物。 (1)脂蛋白(lipoprotein) 由类脂和蛋白质构成,联结在外膜与肽聚糖层之间,类脂一端经非共价键联结到外膜的磷脂上,另一端由共价键联结到肽聚糖肽链中的二氧基庚二酸 残基上,使外膜和肽聚糖层构成一个整体。 (2)外膜(outer membrane) 是革兰氏阴性菌细胞壁的重要结构,位于肽聚糖的外侧,其结构类似细胞膜,为液态的磷脂双层,其中镶嵌一些特异蛋白质,穿透外膜的内外双层,呈液态镶嵌体。外膜中间有微小孔道,容许水溶性的小分子通过,以进行细胞内外的物质运输和交换。除此之外,外膜还能防止胰蛋白酶和溶菌酶等进入,起到保护性屏障作用。(3)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS) 由多糖O抗原、核心多糖和类脂A(lipid A)组成(图1-8),位于最外层。多糖O抗原向外,由若干个低聚糖的重复单位组成的多糖链,即革兰氏阴性菌的菌体抗原(O抗原),有特异性。核心多糖由庚糖、半乳糖、2-酮基-3-脱氧辛酸(2-keto-3-deoxyoctonic acid, KDO)等组成,所有革兰氏阴性细菌都有此结构。类脂A是以脂化的葡萄胺二糖为单位,通过焦磷酸酯键组成的一种独特的糖脂化合物,具有致热作用,是革兰氏阴性细菌内毒素的毒性成分。 细菌内毒素即:许多病原性细菌所产生的毒素。 一般细菌毒素可分为两类,一类为外毒素(Exotoxin);它是一种毒性蛋白质,是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。另一类为内毒素(Endotoxin)。是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构。细菌在生活状态时不释放出来,只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时,才表现其毒性,内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。
1.如何使用天平进行密度测定?通过选配相应的密度组件,使天平实现密度测定应用。超越系列天平具有密度测定应用程序,可直接显示出密度测定结果,其他天平均需手工计算得出密度结果。 2.是否可以使用下挂钩称量测定非破坏性大体积样品的密度?通常情况是可行的,但需要客户自行设计适用的密度组件。 3.使用天平进行密度测定,使用一段时间后发现测定结果不断减小,且样品取下后天平显示读数为负值,这是什么原因?原因可能有两点:1)密度组件可能安装不正确,建议重新安装;2)天平的称量可能不准确,可使用标准砝码进行测试。4.测量玻璃密度时,消泡剂效果不明显,该如何解决?使用什么辅助溶液较好?玻璃块进行密度测定前是否进行过前处理,是否在前处理过程中引入憎水物质导致表面张力增加;使用小毛刷刷去玻璃表面的气泡;使用蒸馏水作为辅助液体,可减少气泡现象。5.用于测定液体密度的测量块的金属丝断裂,是否可以维修?金属丝是经过校准的,即在20℃的水里,30g的漂流物的测量误差不超过0.0059 g/cm3;且金属丝靠一直径为0.2mm的铂金丝悬挂,而此铂金丝的价格占整个零件价格的90%,故梅特勒-托利多不提供金属丝的维修,建议客户重新购买。6.密度组件(11132680,适用于XP精密天平)为何不适用于XP10002SDR?密度组件11132680,仅适用于XP/XS精密天平可读性0.1mg/1mg的型号。
标准要求以平均值报出结果,是必须要做平行吗?根据精密度要求计算出的数据叫什么?相对偏差的绝对值?
产品的细菌内毒素不大于20EU/件,灵敏度:0.25EU/ml,细菌内毒素供试品浓度怎么计算?
据台湾媒体报道,病菌检测是治疗许多疾病的基础,但检测时间往往费时。近日台湾大学今天发表重大突破新技术,以纳米科技研发的新型检验晶片,相较于传统技术,能使细菌筛检增快百倍。 此项研究的名称为"捕捉与侦测细菌双功能快速检验晶片",研究成果于11月15日刊登在知名国际期刊"自然通讯"(NatureCommunications)。该研究的负责人刘定宇说,就像每种乐器都有特定音色一样,每个分子都有特定的"分子拉曼光谱指纹",因此科学家可藉此光谱来区分细菌种类。"捕捉与侦测细菌双功能快速检验晶片"就是利用表面增强拉曼光谱为基础,晶片表层"万古霉素"可从血液中直接捕捉细菌,再由第2层"银纳米粒子阵列",放大细菌表面分子的拉曼光谱讯号。 "捕捉与侦测细菌双功能快速检验晶片"使用纳米科技新技术,具有超高敏感度,几秒钟内就能取得单只细胞光谱,刘定宇指出,过去要筛检败血症病人血液中细菌,需费时2至5天,如今这样的新技术,可在短短30分钟内就能筛检出败血症病人的血液中细菌,速度增快约百倍。 刘定宇还表示,此技术潜在效益可观,不仅能针对血液临床检体使用,也可推广至环境污染(水质检测)、食品药品微生物(大肠杆菌和塑化剂)甚至病毒、癌症筛检等检测。台湾大学医院创伤医学部主治医师韩吟宜认为,这项新技术相较于传统细菌培养方法,能缩短血液检验时间,增加检测准确率,盼能尽快在临床应用,进而提升疾病治愈率,减少抗生素滥用。