系列体积排阻色谱柱

[align=center][b][font=Arial][font=宋体]天然多糖研究体积排阻色谱柱选择初探[/font][/font][/b][/align][font=Arial][font=宋体]多糖是最丰富的生物聚合物，已被发现参与许多生物过程，例如细胞间通讯、胚胎发育、细菌和[/font]/[font=宋体]或病毒感染以及体液和细胞免疫。因此，多糖与核苷酸、蛋白质、脂质一起构成了生命科学中最重要的四大生物大分子。[/font][/font][font=Arial][font=宋体]尽管多糖已在各种工业应用中使用了几十年，例如[/font] [font=宋体]药物、生物材料、食品和营养以及生物燃料，对多糖在生命科学中的重要性的日益了解和深入研究正在推动多糖用于新型（生物分子）应用的开发。不断有来自植物（膳食纤维、草药和木本植物）、藻类和地衣的生物活性多糖，以及来自动物的其他生物活性多糖（例如肝素、硫酸软骨素和透明质酸）被报道。[/font][/font][font=Arial][font=宋体]天然多糖发现的主要方法为提取纯化得到相对较纯的多糖组分，从而进行结构表征和活性评价。具体而言，通过水提醇沉得到粗多糖，再通过弱阴离子交换色谱法（[/font]DEAE[font=宋体]）进行纯化，得到不同盐梯度洗脱的组分。对于这些组分，需要通过体积排阻色谱法（[/font][font=Arial]SEC[/font][font=宋体]）分析判定，是否需要进一步纯化；得到纯品之后，需要测定多糖组分的分子量；研究多糖在体内的降解规律，也需要[/font][font=Arial]SEC[/font][font=宋体]判定多糖分子量的变化。因此，多糖研究实验室往往需要多支[/font][font=Arial]SEC[/font][font=宋体]色谱柱，以适应不同的用途。研究人员热切期望有一只首选[/font][font=Arial]SEC[/font][font=宋体]色谱柱，可以快速开展研究。本文以小秦艽多糖的研究为例，说明[/font][font=Arial]BioCore SEC-1000[/font][font=宋体]作为多糖研究的首选色谱柱，在多个用途中的效果。[/font][/font][font=Arial][font=宋体]小秦艽，学名为达乌里秦艽[/font]([/font][i][font=Arial]Gentiana dahurica Fisch[/font][/i][font=Arial])[font=宋体]，为龙胆科植物龙胆属多年生草本植物，始载于《神农本草经》，列为中品，具有祛风湿、清湿热、止痹痛、退虚热的功效。小秦艽多糖经过提取和除杂后，通过中压制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]（[/font][font=Arial]DEAE[/font][font=宋体]填料）填料纯化，得到四个组份。在后续多糖组份纯度判定和降解规律研究中，使用了[/font][font=Arial]BioCore SEC-1000[/font][font=宋体]色谱柱。[/font][/font][b][font=Arial][font=宋体]一、实验条件与方法[/font][/font][font=Arial]1.1. [font=宋体]仪器及色谱条件[/font][/font][/b][font=Arial][font=宋体]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]：安捷伦[/font] 1260 infinity II[font=宋体]，配有[/font][font=Arial]Wyatt[/font][font=宋体]，[/font][font=Arial]Optilab T-REX[/font][font=宋体]示差折光检测器（[/font][font=Arial]RI[/font][font=宋体]）[/font][font=Arial] [/font][font=宋体]岛津[/font][font=Arial]LC-2030C[/font][font=宋体]，配有岛津[/font][font=Arial]RID-20A1.2[/font][font=宋体]示差折光检测器（[/font][font=Arial]RI[/font][font=宋体]）；大连依利特有限公司 [/font][font=Arial]Elite 1100 [/font][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]，配有岛津[/font][font=Arial]RF-20AXS[/font][font=宋体]荧光检测器（[/font][font=Arial]FLD[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=Arial][font=宋体]色谱柱：[/font]T (13μm[font=宋体]，[/font][font=Arial]7.8×300mm)[/font][font=宋体]或[/font][font=Arial]Biocore SEC-1000[/font][font=宋体]（[/font][font=Arial]5μm, 7.8×300mm[/font][font=宋体]）；[/font][/font][font=Arial][font=宋体]流动相：[/font]50 mM NH[/font][sub][font=Arial]4[/font][/sub][font=Arial]OAc (80%)+Methanol (20%)[font=宋体]；[/font][/font][font=Arial][font=宋体]流速：[/font]0.5 mL/min[font=宋体]；[/font][/font][font=Arial][font=宋体]柱温：[/font]25[/font][font=宋体]℃[/font][font=Arial][font=宋体]；[/font][/font][font=Arial][font=宋体]进样量：[/font]20 μL[font=宋体]；[/font][/font][font=Arial][font=宋体]采集时间：[/font]30 min[font=宋体]。[/font][/font][b][font=Arial]1.2 [font=宋体]样品处理[/font][/font][/b][font=Arial]1[font=宋体]）秦艽多糖组份纯度分析：称取秦艽多糖[/font][font=Arial]GDP-3[/font][font=宋体]（即样品[/font][font=Arial]0.3 M[/font][font=宋体]）约[/font][font=Arial]5 mg[/font][font=宋体]，溶于流动相，配制成[/font][font=Arial]10 mg/mL[/font][font=宋体]溶液。上样前用[/font][font=Arial]0.22 μm[/font][font=宋体]滤膜过滤。[/font][/font][font=Arial]2[font=宋体]）多糖[/font][font=Arial]GDP-2[/font][font=宋体]体外稳定性的考察： [/font][font=Arial]GDP-2[/font][font=宋体]的经 [/font][font=Arial]FITC[/font][font=宋体]荧光标记（产物为[/font][font=Arial]FGDP-2[/font][font=宋体]），进行体外模拟消化。模拟胃液由胃蛋白酶[/font][font=Arial](10 g/L)[/font][font=宋体]和稀[/font][font=Arial]HCl (16.4 mL/L)[/font][font=宋体]组成，调节[/font][font=Arial]pH[/font][font=宋体]至[/font][font=Arial]1.3[/font][font=宋体]。将[/font][font=Arial]FGDP-2 (25 mg/mL)[/font][font=宋体]与各人工胃液和人工肠液[/font][font=Arial]10 mL[/font][font=宋体]混合，[/font][font=Arial]37[/font][/font][font=宋体]℃[/font][font=Arial][font=宋体]孵育。分别于[/font]0 h[font=宋体]、[/font][font=Arial]4 h[/font][font=宋体]、[/font][font=Arial]6 h[/font][font=宋体]、[/font][font=Arial]12 h[/font][font=宋体]取孵育液各[/font][font=Arial]500 μL[/font][font=宋体]作为[/font][font=Arial]HPLC-FLD[/font][font=宋体]测定样品。用[/font][font=Arial]0.2 M NaOH[/font][font=宋体]和[/font][font=Arial]TCA (20 % , w/w)[/font][font=宋体]终止反应。[/font][/font][b][font=Arial][font=宋体]二、结果与讨论[/font][/font][/b][font=Arial][font=宋体]多糖纯度及分子量的测定是多糖结构解析及构效关系研究的关键步骤。小秦艽多糖的纯化色谱洗脱曲线如图[/font]1[font=宋体]所示，一共得到四个组份。[/font][/font][align=center][img=,348,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302081451227890_6619_3237657_3.jpg!w436x207.jpg[/img][/align][align=center][font=Arial][font=宋体]图[/font]1 [font=宋体]小秦艽多糖的[/font][font=Arial]DEAE[/font][font=宋体]纯化色谱图（硫酸苯酚法重构）[/font][/font][/align][font=Arial][font=宋体]组份经透析、冻干后，首先需要确定它的纯度。如果组份不纯，则后续的核磁分析将是徒劳无功的。我们实验室前期配备了三支不同孔径的[/font]SEC[font=宋体]色谱柱，经分析组份[/font][font=Arial]1[/font][font=宋体]和[/font][font=Arial]2[/font][font=宋体]较纯，而[/font][font=Arial]3[/font][font=宋体]和[/font][font=Arial]4[/font][font=宋体]不纯。如果不纯，则需要通过凝剂渗透色谱（[/font][font=Arial]GPC[/font][font=宋体]）进一步纯化。[/font][font=Arial]SEC[/font][font=宋体]分析可以确定组份的数目，以在[/font][font=Arial]GPC[/font][font=宋体]纯化时收集馏分。[/font][/font][font=Arial][font=宋体]在用实验室已有[/font]SEC[font=宋体]色谱柱分析时（图[/font][font=Arial]2[/font][font=宋体]上），色谱峰数目不明确。该色谱柱孔径为[/font][font=Arial]450?[/font][font=宋体]，粒径为[/font][font=Arial]13 μm[/font][font=宋体]，分离度不理想，可能分子量超出其适用范围。于是改用孔径更大且粒径为[/font][font=Arial]5 μm[/font][font=宋体]的[/font][font=Arial]Biocore SEC-1000[/font][font=宋体]柱进行试验（图[/font][font=Arial]2[/font][font=宋体]下），结果表明分离效果好，明显识别为三个色谱峰。为该组份的后续纯化以及多糖稳定性的考察提供基础。[/font][/font][align=center][img=,264,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302081451353696_6101_3237657_3.jpg!w331x346.jpg[/img][/align][align=center][font=Arial][font=宋体]图[/font]2 [font=宋体]秦艽多糖分子量的分析色谱图[/font][/font][/align][align=center][font=Arial][font=宋体]（上图，实验室已有色谱柱[/font]T[font=宋体]；下图，纳谱[/font][font=Arial]Biocore SEC-1000[/font][font=宋体]）[/font][/font][/align][font=Arial][font=宋体]此外，该色谱柱，分离中等分子量多糖标准品（[/font]36 kDa ~ 131 kDa[font=宋体]）时，也呈现了较好的线性关系。因此，我们认为该色谱柱具有分子量适用范围宽的优点，可以作为多糖分析中的通用[/font][font=Arial]SEC[/font][font=宋体]色谱柱。[/font][/font][font=Arial][font=宋体]为了确定秦艽多糖的体外消化模式，选取了经测量相对较纯的秦艽多糖[/font]GDP-2[font=宋体]组分进行荧光标记，建立了[/font][font=Arial]HPLC - FLD[/font][font=宋体]分析方法，进行体外稳定性考察。通过上述实验对[/font][font=Arial]SEC[/font][font=宋体]柱的比较分析，选取了分离效果较好的[/font][font=Arial]Biocore SEC-1000[/font][font=宋体]进行该实验。[/font][font=Arial]FGDP-2[/font][font=宋体]在模拟胃液中的分子量随时间变化色谱图如图[/font][font=Arial]3[/font][font=宋体]所示，发现色谱峰的相对峰高向小分子偏移，说明[/font][font=Arial]FGDP-2[/font][font=宋体]在消化[/font][font=Arial]4 h[/font][font=宋体]后发生部分降解。可能是由于多糖对酶和强酸敏感，导致多糖的糖苷键断裂。然而，观察到整个消化系统中没有单糖出现，胃和肠道不会造成多糖结构的过度损失。[/font][/font][align=center][img=,288,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302081451479308_4610_3237657_3.jpg!w361x212.jpg[/img][/align][align=center][font=Arial][font=宋体]图[/font]3[font=宋体]模拟胃液消化过程中[/font][font=Arial]FGDP-2[/font][font=宋体]的[/font][font=Arial]HPLC - FLD[/font][font=宋体]表征[/font][/font][/align][font=Arial][font=宋体]三、小结[/font][/font][font=Arial][font=宋体]多糖研究人员往往面对不同来源的多糖分子，分子量差异较大，从几万到上百万的多糖分子量。在多糖的研究过程中，需要一支通用的[/font]SEC[font=宋体]色谱柱，进行快速分子量判断，以确定后续研究操作。[/font][font=Arial]BioCore SEC-1000[/font][font=宋体]在我们对小秦艽多糖的分子量纯度分析、分子量测定和体外消化稳定性等研究中，均获得了良好的效果。我们认为，[/font][font=Arial]BioCore SEC-1000[/font][font=宋体]可以作为多糖研究实验室的首选[/font][font=Arial]SEC[/font][font=宋体]色谱柱。[/font][/font][font=Arial] [/font][font=Arial][font=等线]公司：[/font][/font][font=等线][font=等线]苏州大学药学院[/font][/font][font=等线][font=等线]色谱柱信息：[/font][/font][font=Arial]BioCore SEC-1000 5μm, 7.8×300mm[/font][font=宋体] [/font]

[font=黑体][size=10.5000pt][font=黑体]我司产品目前对[/font]β[font=Arial]-[/font][font=黑体]内酰胺类抗生素聚合物检测均采用中国药典[/font][/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt]Sephadex G-10[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]的方法，该法分离机理为：由于[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] Sephadex G-10 [/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]的排阻分子量仅为[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] 700d[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]，因此，除部分寡聚物外，内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留，即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰。在特定条件下，内酰胺类抗生素由于分子间的氢键、静电相互作用，可以形成缔合物，导致其表观分子量增大，此时在[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] Sephadex G-10 [/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为。利用此原理，在[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] Sephadex G-10 [/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] [/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]再改变色谱条件，测定样品中高分子杂质和药物分离后的峰响应[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] [/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]按外标法计算，即得药品中的高分子杂质相当于药品本身的相对含量。我司在多批样品的测定实践中，遇到了很多问题，比较头疼的是系统适用性经常达不到要求，导致偏差产生，而经根本原因分析为方法本身问题，因此，选用专属性更好，灵敏度更高的方法具有非常大的现实意义。[/size][/font][b][font=黑体][size=10.5pt]【凝胶色谱原理】[/size][/font][/b][font=Arial][size=10.5000pt][font=黑体]一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5pt][font=黑体]【体积排阻色谱（[/font]SEC[font=黑体]）分离原理】[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]分子的体积排阻，样品组分和固定相之间原则上不存在相互作用，色谱柱的固定相是具有不同孔径的多孔凝胶，只让临界直径小于凝胶孔开度的分子进入（保留），其孔径大于溶剂分子，所以溶剂分子可以自由地出入。高聚物分子在溶液中呈无规则线团，线团的体积和分子量有一定的线性关系，对不同大小的溶质分子可以渗透到不同大小的凝胶孔内不同的深度，小的溶质分子，大孔小孔都可以进去，甚至可以渗透到很深的孔中。因此小的溶质分子保留时间长，洗脱体积大，而大的溶质分子保留时间短，洗脱体积小。[/size][/font][img=,454,385]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006231213444153_3585_3527267_3.png!w454x385.jpg[/img][font=Arial][size=12pt][color=#ff0000]Sephadex G-10[/color][/size][/font][font=宋体][size=12pt][color=#ff0000]与[/color][/size][/font][font=黑体][size=10.5pt][color=#ff0000]BioCore SEC-150[/color][/size][/font][font=黑体][size=10.5pt][color=#ff0000]参数比较[/color][/size][/font][font=黑体][size=10.5pt][color=#ff0000][img=,448,333]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006231215301619_5327_3527267_3.png!w448x333.jpg[/img][/color][/size][/font][b][font=黑体][size=10.5pt]液相色谱仪器条件[/size][/font][/b][font=Arial][size=10.5000pt][font=黑体]色谱柱[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt][font=黑体]：[/font]BioCore SEC-150,5um 7.8*300mm[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=黑体]流动相[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt][font=黑体]：[/font]150 mM [font=黑体]磷酸盐缓冲液（[/font][font=Arial]pH6.8[/font][font=黑体]）：乙腈[/font][font=Arial]=95:5[/font][/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=黑体]流速[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt]0.[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]6[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] mL/min[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=黑体]柱温[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]25[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] ℃[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=黑体]进样量[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]10[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] μL[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=黑体]检测器[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt][font=黑体]：[/font]268nm[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=黑体]样品[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=黑体]青霉素[/font]V[font=黑体]钾[/font][/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt][font=黑体]，流动相配制，浓度为[/font]5mg/ml[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]峰名称：因无聚合物对照品，根据分子筛分离原理，主峰前色谱峰均认定为不同聚合度的聚合物。[/size][/font][b][font=黑体][size=10.5pt]图谱：[/size][/font][/b][img=,690,341]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006231214046941_8802_3527267_3.png!w690x341.jpg[/img][img=,361,233]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006231214049627_1147_3527267_3.png!w361x233.jpg[/img][b][font=黑体][size=10.5pt]心得体验[/size][/font][/b][font=黑体][size=10.5000pt]此次首次采用纳谱分析开发的[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]SEC[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]色谱柱，流动相在色谱柱说明书推荐流动相基础上，加入[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]5%[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]乙腈，即得到较好的分离效果，理论板数由[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]G-10[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]柱的几百提高到现在的两万多，主峰与相邻峰分离度达到[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]1.7[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]，达到基线分离，各聚合物峰峰形较好，且彼此分开，与传统[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]G-10[/size][/font][font=黑体][size=10.5000pt]相比，具有无可比拟的优越专属性。纳谱分析品牌值得信赖，以后会继续支持！[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]本文为【纳谱分析第一有奖征文活动】获奖作品，原作者信息：[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]单位：西南药业股份有限公司[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]姓名：李[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]*[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]色[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]谱柱信息：[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]纳谱分析[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]BioCore SEC-150,5um 7.8*300mm[/color][/size][/font]

[b][font='Times New Roman'][font=宋体]解答[/font][/font][font=宋体]：[/font][/b][font='Times New Roman'][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]柱体积的计算可以按照公式[/font][/font][i][font='Times New Roman']V[/font][/i][font='Times New Roman']=π×[/font][i][font='Times New Roman']r[/font][/i][font='Times New Roman']×[/font][i][font='Times New Roman']r[/font][/i][font='Times New Roman']×[/font][i][font='Times New Roman']h[/font][/i][font='Times New Roman'][font=宋体]来计算，其中[/font][/font][i][font='Times New Roman']r[/font][/i][font='Times New Roman'][font=宋体]为液相色谱柱的半径，[/font][/font][i][font='Times New Roman']h[/font][/i][font='Times New Roman'][font=宋体]为液相色谱柱的长度（即圆柱体的高）。需要说明的是，安捷伦的色谱柱柱体积一般是色谱柱的柱管体积乘以[/font]65%[font=宋体]来计算。[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]以图[/font][/font][font=宋体]2-45[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]为例：[/font]1[font=宋体]个柱体积应为[/font][font=Times New Roman]2.5mL[/font][/font][font=宋体]×[/font][font='Times New Roman']65%=1.62m[/font][font=宋体]L[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]（图中[/font]1.5m[/font][font=宋体]L[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]是按[/font]60%[font=宋体]计算所得，粗略计算时可用，优点是计算方便）。[/font][/font][align=center][img=,591,234]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/03/202103182250121380_6731_3389662_3.jpg!w591x234.jpg[/img][/align][align=center][b][font=宋体]图[/font][font='Times New Roman']2[/font][font=宋体]-45[font=宋体]色谱柱标识[/font][/font][/b][/align][font=宋体][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]如果是在清洗再生色谱柱时，特别是色谱柱污染严重时，可以直接用柱管体积来进行计算冲洗所需要的溶液的量。如果是进行死体积或者死时间的计算时需要用[/font]1.62m[/font][font=宋体]L[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]来计算。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）除了安捷伦之外的[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]其他品牌的色谱柱，很多未装填柱体积需要乘以的系数是[/font]60%[font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font]4[font=宋体]）[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]另外也可以[/font][/font][font=宋体]在网上查询[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]，将色谱柱的柱长和直径输入进行计算得到。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]领取更多《实战宝典》请进：[/font][/font][url=http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI][u][font=微软雅黑][color=#0000ff]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/color][/font][/u][/url][font=微软雅黑] [/font]