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糖酵解水平

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  • 【金秋计划】大承气汤通过抑制HIF-1α介导的糖酵解减轻急性肺损伤

    [size=15px][color=#595959][b]脓毒症[/b]是一种由于对感染反应不正常而导致的器官功能紊乱,[b]急性肺损伤[/b]([b]ALI[/b])是最常见的并发症,作为一种侵袭性肺部炎症性疾病,其特点是死亡率高。[/color][/size][size=15px][color=#595959]越来越多的研究人员发现,中草药在预防和治疗炎症性肺部疾病方面具有很高的疗效。[/color][/size][size=15px][color=#595959]其中,[b]大承气汤[/b]([b]DCQD[/b])被认为是中医“肺肠联合治疗”的代表性方剂,其由大黄、枳实、厚朴和芒硝组成,共同起到峻下热结的作用。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]现代药理学研究表明,DCQD具有[b]抗炎、抗氧化、抗菌和抗内毒素[/b]的作用,改善胃肠道运动,增强[/color][/size][size=15px][color=#595959]免疫[/color][/size][size=15px][color=#595959]力。在临床实践中,它用于治疗急性胰腺炎、术后胃肠[/color][/size][size=15px][color=#595959]功能障碍[/color][/size][size=15px][color=#595959]、肠梗阻等疾病[b]。研究表明,DCQD可以治疗脓毒症引起的ALI,主要通过抑制炎症因子的产生。关于DCQD治疗ALI的研究相对较少,其对ALI的潜在保护机制值得进一步研究。[/b][/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]基于“肺肠联合治疗”理论,通过网络药理学和实验研究验证DCQD减轻ALI的保护作用和分子机制。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]采用超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱法测定DCQD的有效成分。采用[b]网络药理学和分子对接技术[/b]筛选DCQD治疗ALI的有效成分-靶点通路。此外,根据预测结果构建了气管内滴注脂多糖诱导的ALI模型并进行了体内验证。[/color][/size] [align=center][size=16px][color=#3573b9]结果[/color][/size][/align] [size=15px][color=#595959]通过网络药理分析筛选出34个有效成分,570个潜在靶点。此外,还获得了950个ALI靶基因和2095个脓毒症相关靶基因,鉴定出570个两者相互关联的靶基因。最终筛选出199个对DCQD治疗ALI和脓毒症至关重要的共同靶基因,然后用GO和KEGG进行富集。在ALI模型中,研究发现DCQD减轻ALI的炎症反应,可能是通过抑制HIF-1α介导的[b]糖酵解[/b]作用。[/color][/size] [align=center][size=16px][color=#3573b9]结论[/color][/size][/align] [size=15px][color=#595959]该研究[b]证实了DCQD对ALI的预防作用,发现DCQD可通过调节HIF-1α的表达,下调糖酵解,减轻炎症,从而改善ALI[/b]。[/color][/size]

  • 【金秋计划】清下解胰方颗粒剂通过抑制糖酵解作用抑制M1巨噬细胞极化,减轻急性胰腺炎

    [size=15px][color=#595959]中药复方是治疗[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]急性[/color][/size][size=15px][color=#595959]胰腺炎[/color][/size][size=15px][color=#595959](AP)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]患者的常见和完善的做法。[b]清下解胰方(QXJYF)[/b]是在清胰汤基础上改良而成的方剂,在我国应用多年,临床疗效满意。它可以降低[b]重型AP[/b](SAP)患者的感染率并恢复胃肠动力。然而,QXJYF颗粒的个别成分、[b]对AP的确切作用和机制[/b],以及对pSAP患者SAP发病率的影响仍有待阐明。 [size=15px]评价QXJYF颗粒剂对急性胰腺炎的影响,并探讨其分子机制。[/size] [size=15px]采用UPLC-Q-Orbitrap质谱法(UPLC-Q-Orbitrap MS)对[b]QXJYF颗粒中的主要化合物进行鉴定[/b]。阐明QXJYF颗粒对实验性AP模型体外和体内的影响,并详细阐述其作用机制。分别[b]腹腔注射雨蛙素或L-精氨酸诱导小鼠两种AP模型[/b],并用QXJYF颗粒对AP小鼠进行体内治疗。[/size] [size=15px]观察[b]胰腺和肺的组织学变化[/b]、血清淀粉酶和脂肪酶水平、血清炎症因子、炎症细胞浸润和巨噬细胞表型。体外培养骨髓源性巨噬细胞(BMDMs),并对其进行QXJYF颗粒处理。[b]测定BMDM表型和糖酵解水平[/b]。最后,[b]验证QXJYF颗粒对AP患者的临床疗效[/b]。对符合纳入条件的预测严重AP (pSAP)患者进行[b]入组评估[/b]。[/size][size=15px][/size] [/color][/size][align=center] [/align][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959]QXJYF颗粒中鉴定出[b]9种主要化合物[/b]。数据显示,QXJYFf颗粒在体内均能显著减轻雨蛙素或L-精氨酸诱导的AP模型的严重程度,胰腺损伤和炎症细胞浸润,全身炎症、肺损伤和炎症细胞浸润均得到改善。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]QXJYF颗粒在体内和体外均能显著降低AP期间[b]M1巨噬细胞[/b];QXJYF处理后M1巨噬细胞中inos、Tnfα、Il1β、Il6等M1基因mRNA表达水平明显低于M1巨噬细胞。在机制上,发现M1巨噬细胞中HK2、PFKFB3、PKM、LDHα水平升高,但经QXJYF治疗后明显降低。临床资料显示,QXJYF颗粒能显著抑制CRP水平,缩短器官衰竭持续时间,从而[b]降低SAP的发生率,防止pSAP患者向SAP发展[/b]。[/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][color=#3573b9]结论[/color][size=15px][color=#595959][/color][/size] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][font=&][/font][/color][/size][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][/color][/size][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]QXJYF颗粒通过抑制糖酵解作用,抑制M1巨噬细胞极化,减轻AP[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。[/color][/size]

  • 长期摄入果糖好吗?

    很多饮品中都在使用果糖,那么果糖到底有危害吗? 果糖是一种单糖,在自然界中主要存在于水果和蜂蜜等食品中,在植物中也有存在,尤以菊科植物为多。在各种天然糖中,果糖的甜度最高,其甜度大约是蔗糖的1.8倍。在蜂蜜中果糖约含49%。在体内,果糖可以转化为葡萄糖或合成糖元,但葡萄糖和糖元不能逆向转化为果糖,机体的果糖主要由肠道的二糖酶将蔗糖分解为葡萄糖和果糖而来。由于果糖可绕过糖酵解中的限速酶,故肝脏中的分解速度快于葡萄糖,且不受胰岛素的影响。正是由于果糖的这些特点,人们往往放松了对果糖的戒备。特别是一些糖尿病患者利用蜂蜜作为甜味剂,认为蜂蜜中的果糖不会造成血糖升高,以此作为养生的佳品。实际上,果糖吃多了危害性更大。在我们的血液中果糖的含量非常少,主要的糖是葡萄糖,我们平时所说的血糖也是指血液中葡萄糖含量。那么我们每天摄入的果糖哪儿去了?当果糖进入体内后,在肠道与肠粘膜上皮细胞载体蛋白结合后,能顺利地被吸收转化,果糖转化的主要场所是肝脏,可分别转化成糖原、葡萄糖和脂肪。所以,血液中果糖的含量不多。从这一点来看,果糖摄入过多后,同样会导致血糖的变化,并不是糖尿病患者安全的甜味剂。果糖不仅可以转化成葡萄糖,还可转化成脂肪,并引起脂肪合成增多。与葡萄糖相比,果糖转化合成脂肪更容易。在人体内有一种物质叫做磷酸果糖激酶,又被称为糖酵解的限制酶,对糖的酵解有调节作用,而果糖则不受磷酸果糖激酶的控制,因而很容易转化为合成脂肪需要的甘油部分。当果糖摄入量少时,果糖能转变为葡萄糖,使肝脏中糖原的储存量增加。但是,当果糖摄入量大时,果糖就成为合成脂肪不受限制的原料。在导致人体肥胖的因素中,可以说果糖的危害性甚至超过了葡萄糖和蔗糖。

  • 糖代谢复习笔记

    1. 糖除了供能外,还有何功用? 糖类不只是能量的来源,它也是组织细胞的重要组成成分,如,核酸,蛋白聚糖,糖蛋白,糖脂等。2. 葡萄糖是如何在缺氧条件下转变为乳酸?有什么意义? 葡萄糖在糖酵解途径中产生的还原当量(NADH+H+)要重新氧化为NAD+,酵解才能继续进行。因为细胞中NAD+含量甚微。因此,缺氧条件下,丙酮酸可以作为氢受体,接受氢后转变为乳酸从而再生NAD+。这样以来,糖酵解才可以继续进行下去。在剧烈运动中,肌肉供氧不足,酵解作用是重要的产能手段,而积累在肌肉中的乳酸可由血液运至肝中变为葡萄糖。无氧酵解虽然仅利用葡萄糖所储存能量的一小部分。但这种释能方式很迅速,对肌肉收缩很重要,此外,像视网膜,红细胞及脑等细胞组织,即使在有氧情况下也要产生一些乳酸,其中红细胞因无线粒体则更依赖于酵解供能。3. 试述丙酮酸脱氢酶复合体的组成和催化作用?受什么因素调节? P129丙酮酸脱氢酶复合体由3个不同的酶组成(丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酰胺转乙酰酶、二氢硫辛酰胺脱氢酶)。有TPP,FAD,硫辛酸和NAD+和CoA参加。 这个酶催化的是不可逆反应。也是调节酶,受别位效应物和化学修饰调控。4. TAC中有几个调节酶?他们分别受什么物质调节?他们催化哪些反应?TAC中有四个调节酶,丙酮酸脱氢酶复合体(不属于TAC中的,是丙酮酸向乙酰CoA转化的一个步骤),柠檬酸合酶,异柠檬酸脱氢酶和α酮戊二酸脱氢酶复合体是关键的调节酶。 丙酮酸脱氢酶复合体(催化丙酮酸到乙酰CoA的转化)受其催化产物ATP,乙酰CoA和NADH,脂肪酸的有力抑制; 受AMP,NAD+,CoA,Ca2+的激活。柠檬酸合酶(催化乙酰CoA到柠檬酸的转化): 受NADH, 琥珀酰CoA,柠檬酸和ATP的抑制, 受ADP激活。异柠檬酸脱氢酶(催化异柠檬酸到α酮戊二酸的转化): 受ATP,NADH抑制,受Ca2+和ADP激活。 α酮戊二酸(催化α酮戊二酸向琥珀酰CoA的转化): 受琥珀酰CoA, NADH的抑制; 受Ca2+的激活。5. 何谓磷酸戊糖途径?如何反应?有何生理意义? 葡萄糖的主要代谢途径是糖酵解,还有其他的代谢方式,例如磷酸戊糖途径,这途径产生磷酸戊糖和NADPH。6-磷酸葡萄糖+NADP+ ====6磷酸葡萄糖酸内酯+NADPH+H+6-磷酸葡萄糖酸内酯+H2O ====6-磷酸葡萄糖酸6-磷酸葡萄糖酸+NADP+ ====5-磷酸核酮糖+CO2+NADPH+H+5-磷酸核酮糖 ----5-磷酸核糖在一些组织中,磷酸戊糖途径就止于此处,总的结果是:6-磷酸葡萄糖+2 NADP++H2O ====5-磷酸核糖 +CO2+2 NADPH+ 2H+生理意义:戊糖途径产生的磷酸戊糖核、NADPH都可供核酸和其它物质的合成。6. 试述肝如何合成糖原,又如何分解糖原?受什么因素调节?糖原是动物储存糖的形式,肝脏和肌肉是储存糖原的主要地方,肝储存糖原主要是用于维持血糖浓度,供应全身利用,而肌糖原是供予肌肉本身产生ATP作收缩用。 糖原的分解:糖原+ Pi2- ====1-磷酸葡萄糖 + 糖原(降解了一个G) 糖原磷酸化酶催化α糖苷键的磷酸解。1-磷酸葡萄糖====6-磷酸葡萄糖6-磷酸葡萄糖+H2O====葡萄糖+Pi2-糖原的合成:葡萄糖+ATP====6-磷酸葡萄糖+ADP6-磷酸葡萄糖====1-磷酸葡萄糖1-磷酸葡萄糖+ UTP====UDP-G + PPiUDP-G+ 葡萄糖n====(葡萄糖)n+1 + UDP分支链的形成:当糖原合酶以α1====4糖苷键延伸直到长度达11个葡萄糖基后,分支酶可将约7个葡萄糖残基的一段链转移到邻近糖链上以α1====6糖苷键连接。糖原的合成合代谢的调节:糖原分解代谢途径的糖原磷酸化酶和糖原合成途径中的糖原合酶都是催化不平衡的反应。这两个酶是各自代谢途径的调节酶。1,糖原磷酸化酶 受别构效应物和共价修饰调节。2,糖原合酶 别构调节和共价修饰调节。cAMP(由腺苷酸环化酶催化ATP而来)是调节糖原磷酸化酶和糖原合酶的重要细胞内信号。细胞内cAMP的增高通过两种不同的机制激活糖原磷酸化酶,也同样通过这两种机理抑制糖原合酶。

  • 【求购】胶结力测试

    我们现在测胶结力,是用比较手工作坊式的方法.用粘土和沙子加水做成长方体试条,干燥后,在中间放上重物将其压断,这个重量就是胶结力的数值.现要求购一台测胶结力的仪器.或者这个机器就是抗折机或抗压机,找了好多资料,都没有相关信息,我们老板说国外有专门测胶结力的仪器,国内有吗?有谁用过,听说过?给点信息好吧?谢谢

  • 上海药物所在中药牛蒡子治疗肿瘤的机理研究中取得新进展

    选择性杀伤肿瘤细胞而减轻对正常组织的损伤是目前治疗肿瘤策略所面临的重大挑战。研究表明,由于肿瘤细胞的快速增殖,实体瘤细胞通常处于氧气、葡萄糖或其他营养物质匮乏的状态。因此,靶向葡萄糖缺乏的肿瘤细胞可能会成为选择性杀伤肿瘤细胞的一个新策略。 牛蒡子苷元是临床常用传统中药牛蒡子的主要活性成分。现有研究表明,牛蒡子苷元具有抗肿瘤活性,能够在多种肿瘤模型中有效抑制肿瘤生长。中科院上海药物研究所俞强课题组对牛蒡子苷元的抗肿瘤机制进行了深入研究,发现在葡萄糖缺乏条件下,牛蒡子苷元通过抑制线粒体呼吸造成肿瘤细胞内ATP水平下降以及活性氧族水平升高,从而促使肿瘤细胞死亡。 研究同时还发现,牛蒡子苷元和糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖联合使用能够选择性杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞的毒性较低。 该项研究成果为用中药治疗肿瘤提供了新的依据和策略。相关论文已在线发表于Biochemical Pharmacology杂志。 该研究工作得到了国家自然科学基金和国家重大科技专项的资助。 论文链接http://www.cas.cn/ky/kyjz/201208/W020120806465949579476.jpg中药牛蒡子治疗肿瘤的机理研究取得进展

  • 【求购】胶结力测试仪器

    寻测胶结力的仪器?仪器名称?我们现在测胶结力,是用比较手工作坊式的方法.用粘土和沙子加水做成长方体试条,干燥后,在中间放上重物将其压断,这个重量就是交接力的数值.现要求购一台测胶结力的仪器.

  • 请问怎么确定gc-ms的条件呢

    我用的是岛津的仪器,想要做尽可能多的TCA循环,糖酵解相关的小分子有机酸,只需要知道相对值,这样的话只能做非靶向的scan模式吗?我之前用的scan条件在质谱库自动检索基本检测不到想要的物质,而且峰形也不太好,但是不知道如何改进方法。网上也搜索不到前处理和目标物质都相似的文章,请问样品处理时的溶剂和方法也会影响色谱条件吗?不同的仪器品牌的方法参考价值吗?感谢各位老师同行赐教

  • 生物化学名词解释大全 第10章

    第十章 1,戊糖磷酸途径(pentose phosphare parhway):那称为磷酸已糖支路。是一个葡萄糖-6-磷酸经代谢产生NADPH和核糖-5-磷酸的途径。该途径包括氧化和非氧化两个阶段,在氧化阶段,葡萄糖-6-磷酸转化为核酮糖-5-磷酸和CO2,并生成两分子NADPH;在非氧化阶段,核酮糖-5-磷酸异构化生成核糖-5-磷酸或转化为酵解的两用人才个中间代谢物果糖-6-磷酸和甘油醛-3-磷酸。 2,糖醛酸途径(glucuronate pathway):从葡萄糖-6-磷酸或葡萄糖-1-磷酸开始,经UDP-葡萄糖醛酸生成葡萄糖醛酸和抗坏血酸的途径。但只有在植物和那些可以合成抗坏血酸的动物体内,才可以通过该途径合成维生素C。 3,无效循环(futile cycle):也称为底物循环。一对酶催化的循环反应,该循环通过ATP的水解导致热能的释放。Eg葡萄糖+ATP=葡萄糖6-磷酸+ADP与葡萄糖6-磷酸+H2O=葡萄糖+P i反应组成的循环反应,其净反应实际上是ATP+H2O=ADP+Pi。4,磷酸解(phosphorolysis)作用::通过在分子内引入一个无机磷酸,形成磷酸脂键而使原来键断裂的方式。实际上引入了一个磷酰基。5,半乳糖血症(galactosemia):人类的一种基因型遗传代谢缺陷,是由于缺乏1-磷酸半乳糖尿苷酰转移酶,导致婴儿不能代谢奶汁中乳糖分解生成的半乳糖。6,尾部生长(tailward growth):一种聚合反应机理经过私有化的单体的头部结合到聚合的尾部,连接到聚合物尾部的单体的尾部又生成了接下一个单体的受体。7,糖异生作用(gluconenogenesis):由简单的非糖前体转变为糖的过程。糖异生不是糖酵解的简单逆转。虽然由丙酮酸开始的糖异生利用了糖酵解中的七步进似平衡反应的逆反应,但还必需利用另外四步酵解中不曾出现的酶促反应,绕过酵解过程中不可逆的三个反应。看了楼主的帖子,不由得精神为之一振,自觉七经八脉为之一畅,七窍倒也开了六巧半,自古英雄出少年,楼主年纪轻轻,就有经天纬地之才,定国安邦之智,古人云,卧龙凤雏得一而安天下,而今,天佑我大中华,沧海桑田5000年,中华神州平地一声雷,飞沙走石,大舞迷天,朦胧中,只见顶天立地一金甲天神立于天地间,这人英雄手持双斧,二目如电,一斧下去,混沌初开,二斧下去,女娲造人,三斧下去,小生倾倒.得此大英雄,实耐之幸也,民之福也,怎不叫人喜极而泣.......古人有少年楼主说为证,少年之楼主如红日初升,其道大光;河出伏流,一泻汪洋;潜龙腾渊,鳞爪飞扬;乳虎啸谷,百兽震惶;鹰隼试翼,风尘吸张;奇花初胎,皇皇;干将发硎,有作其芒;天戴其苍,地履其黄;纵有千古,横有八荒;小生对楼主之仰慕如滔滔江水连绵不绝,海枯石烂,天崩地裂,永不变心.

  • 【资料】二虎食品添加剂-酸度调节剂之乳酸

    2 乳酸科技名词定义中文名称:乳酸 英文名称:lactic acid 其他名称:α羟基丙酸 定义:无氧糖酵解的终产物。是由乳酸脱氢酶的作用使丙酮酸还原而生成的。 所属学科:生物化学与分子生物学(一级学科);新陈代谢(二级学科) 百科名片乳酸纯品为无色液体,工业品为无色到浅黄色液体。无气味,具有吸湿性。相对密度1.2060(25/4℃)。熔点18℃。沸点122℃(2kPa)。折射率nD(20℃)1.4392。能与水、乙醇、甘油混溶,不溶于氯仿、二硫化碳和石油醚。在常压下加热分解,浓缩至50%时,部分变成乳酸酐,因此产品中常含有10%-15%的乳酸酐。生物学  在发酵过程中乳酸脱氢酶将丙酮酸转换为左旋乳酸。在一般的    乳酸新陈代谢和运动中乳酸不断被产生,但是其浓度一般不会上升。只有在乳酸产生过程加快,乳酸无法被及时运走时其浓度才会提高。乳酸运输速度由一系列因素影响,其中包括单羧基转运体、乳酸脱氢酶的浓度和异构体形式、组织的氧化能力。一般来说血液中的乳酸浓度在不运动时为1-2mmol/L,在强烈运动时可以上升到20mmol/L。   一般来说当组织的能量无法通过有氧呼吸得以满足,组织无法获得足够的氧或者无法足够快地处理氧的情况下乳酸的浓度会上升。在这种情况下丙酮酸脱氢酶无法及时将丙酮酸转换为乙酰辅酶A,丙酮酸开始堆积。在这种情况下假如乳酸脱氢酶不将丙酮酸还原为乳酸的话糖酵解过程和三磷酸腺苷的生产会获得抑制。产生乳酸的过程为:丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD   这个过程的意义在于重建糖酵解所需要的烟酰腺嘌呤二核苷酸(NAD+)来保持三磷酸腺苷的生产。在氧气充足的肌肉细胞中乳酸可以被氧化为丙酮酸,然后直接用来作为三羧酸循环的燃料。它也可以在肝脏内糖异生的过程中通过科里循环转化为葡萄糖。乳杆菌属的细菌也可以进行乳酸发酵。这些细菌可以生活在口内,它们产生的乳酸是导致龋齿的原因。在医学里乳酸常被用在乳酸林格氏液中。这是一种与人的血液等张的氯化钠、氯化钾和乳酸在蒸馏水中的溶液。在损伤、手术或烧伤失血后常使用乳酸林格氏液来补充失血。 编辑本段基本信息  名称:乳酸 乳酸英文名:Lactic acid;2-Hydroxy propionic acid   别名:2-羟基丙酸;α-羟基丙酸;丙醇酸   分子式: C3H6O3   结构简式:

  • 细菌的生理、生化试验

    微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下:一、糖酵解试验  不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。  试验方法:以无菌操作,用接种针或环移取纯培养物少许,接种于发酵液体培养基管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。接种后,置36±1.0°C培养,每天观察结果,检视培养基颜色有无改变(产酸),小倒管中有无气泡,微小气泡亦为产气阳性,若为半固体培养基,则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡,有时还可看出接种菌有无动力,若有动力,培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力,从而进行各种细菌的鉴别,因而每次试验,常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫,溴百里蓝和An-drade指示剂。

  • 求助gc-ms色谱条件方法的建立

    我用的是岛津的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]质谱联用,想要做尽可能多的TCA循环,糖酵解相关的小分子有机酸,只需要知道相对值,这样的话只能做非靶向的scan模式吗?我之前用的scan条件在质谱库自动检索基本检测不到想要的物质,而且峰形也不太好,但是不知道如何改进方法。网上也搜索不到前处理和目标物质都相似的文章,请问样品处理时的溶剂和方法也会影响色谱条件吗?不同品牌仪器的方法参考意义大吗?感谢各位老师同行赐教

  • 【讨论】酵母葡聚糖的抗辐射作用详解

    【讨论】酵母葡聚糖的抗辐射作用详解

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211307_284139_1641058_3.jpg 以上这个图是酵母葡聚糖对致死剂量的辐射的保护作用研究,小鼠经致死剂量的辐射后,观察其存活率。红色曲线是服用了酵母葡聚糖的小鼠存活率,蓝色是只用生理盐水的空白对照样小鼠。可以看到10天以后,服用了酵母葡聚糖的小鼠存活率显著高于空白对照样。到第16天后,空白样组小鼠没有存活,而服用酵母葡聚糖的小鼠还有50%左右存活。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211308_284140_1641058_3.jpg 人在遭受辐射后,白细胞水平会大大降低,严重影响免疫系统。这是酵母葡聚糖对辐射后白细胞水平恢复的作用研究。可以看到,服用酵母葡聚糖后,第10天开始,白细胞水平开始恢复,而空白对照样在第15天才开始恢复。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211309_284143_1641058_3.jpg 以下是我们酵母多糖胶囊对辐射小鼠白细胞计数的影响研究。可以看到辐照后小鼠的白细胞数都会显著降低,而服用酵母多糖的小鼠白细胞数比空白对照组较高,说明酵母多糖对辐射有保护作用。在30天后,酵母多糖组的小鼠白细胞数恢复较快,比对照组显著高。

  • 【资料】一种反映血糖水平的物质——果糖胺

    果糖胺是血浆中的蛋白质在葡萄糖非酶糖化过程中形成的一种物质,由于血浆蛋白的半衰期为17天,故果糖胺反映的是1-3周内的血糖水平。   果糖胺是血浆中的蛋白质与葡萄糖非酶糖化过程中形成的高分子酮胺结构类似果糖胺的物质,它的浓度与血糖水平成正相关,并相对保持稳定。它的测定却不受血糖的影响。由于血浆蛋白的半衰期为17~20天,故果糖胺可以反映糖尿病患者检测前1~3周内的平均血糖水平。从一定程度上弥补了糖化血红蛋白不能反映较短时期内血糖浓度变化的不足。果糖胺的测定快速而价廉(化学法),是评价糖尿病控制情况的一个良好指标,尤其是对血糖波动较大的脆性糖尿病及妊娠糖尿病,了解其平均血糖水平有实际意义。但果糖胺不受每次进食的影响,所以不能用来直接指导每日胰岛素及口服降糖药的用量。血清果糖胺正常值为1.64~2.64mmol/L,血浆中果糖胺较血清低0.3mmol/L。

  • 【资料】生物化学 题1

    一、 单项选择题(请在备选答案中选择一个正确的答案,并将其填写在括号内,每小题2分,共40分)1、测得 某一蛋白样品含氮量是0.2克,此样品的约含蛋白质多少克?( )A、1.00克 B、1.25克 C、1.50克D、3.20克 E、6.25克2、蛋白质的变性是由于?( ) A、蛋白质氨基酸组成的改变 B、蛋白质氨基酸顺序的改变 C、蛋白质肽键的断裂, D、蛋白质空间构象的破坏E、蛋白质水解3、核酸分子中核苷酸之间的连接方式是?( ) A、2 ,3—磷酸二酯键 B、3,5—磷酸二酯键 C、2,5—磷酸二酯键 D、糖苷键 E、氢键4、大部分真核细胞mRNA的3—末端都具有( ) A、多聚 A B、多聚U C、多聚T D、多聚C E、多聚G5、成人体内氨的最主要的代谢去路为( )A、合成非必需的氨基酸 B、合成必需的氨基酸 C、合成NH4+随尿排出 D、合成尿素E、合成嘌呤、嘧啶,核苷酸等6、肌糖原不能直接补充血糖的原因是因为( )?A、肌肉组织是储存糖原的器官B、肌肉组织缺乏葡萄糖激酶C、肌肉组织缺乏葡萄糖-6-磷酸酶D、肌肉组织缺乏磷酸化酶E、肌糖原分解的产物是乳酸7、生物膜含最多的脂类是(   )? A、甘油三酯 B、糖脂 C、磷脂 D、胆固醇 E、胆固醇脂8、下列那种激素,可以降低血糖浓度( ) A、生长激素 B、糖皮质激素 C、肾上腺素 D、胰岛血糖素 E 、胰岛素9、底物浓度饱和后,再增加底物浓度( )?A、反应速度随底物浓度的增加而增加B、随着底物浓度的增加酶逐渐失活C、酶的结合部位全部被底物占据D、再增加酶的浓度反应速度不再增加E 、形成酶—底物复合体增加10、一分子葡萄糖酵解时净生成ATP分子数为 ?( ) A、1 B、2 C、3 D、4 E、3611、酶的Km值的大小与( ) A、酶性质有关 B、酶浓度有关C、酶作用温度有关 D、酶作用时间有关E、以上均有关12、将DNA核苷酸顺序的信息转变成蛋白质中氨基酸顺序的过程包括( ) A、复制与转录 B、复制及反转录 C、翻译 D 、转录及翻译E 转录13、蛋白质生命合成中,直接负责传递信息的是( )? A、蛋白质 B、tRNA C、mRNAD、rRNA E、DNA14、 蛋白质合成的操纵子调节学说属于那一水平的调节( )?A、复制水平的调节 B、转录水平的调节 C、翻译水平的调节 D、反转录水平的调节 E、以上都不是15、下列关于维生素的说法那一项是错误的( )? A 、维持正常生命所必须 B、是体内的能量来源 C、是小分子化合物 D、体内需量少,但必须由食物供给 E、它们的化学结构各不相同16、下列那一种氨基酸经脱羧后,能生成一种扩张血管的化合物( )? A、精氨酸 B、天冬氨酸 C、组氨酸D、谷氨酰胺 E、脯氨酸17、血中NPN (非蛋白质)明显增高的主要原因是( )?A、蛋白质进食太多 B、肝脏功能不全C、肾脏功能不全 D、尿素合成增加E、谷氨酰胺合成增加 18、红细胞糖酵解的特点之一是产生(   ),它具有调节血红蛋白结合氧的功能。A、3—磷酸甘油酸      B、2—磷酸甘油酸   C、3—磷酸甘油醛    D、1,3—二磷酸甘油E、2,3—二磷酸甘油酸19、引起手足抽搐的原因是因为血浆中( )A、 结合钙浓度降低 B、 结合钙浓度升高C、离子钙浓度升高D、离子钙浓度降低 E、离子钙浓度升高,结合钙浓度降低20、苯丙酮酸尿症患者,尿中排出大量的苯丙酮酸、苯丙氨酸,因为体内缺乏那种酶( ) A、铬氨酸转氨酶 B、磷酸吡多醛 C、苯丙氨酸羟化酶 D、多巴脱羧酶 E 、铬氨酸羟化酶 二 、多项选择题(每小题2分,共10分)1、胞嘧啶核苷酸从头合成的原料,包括( ) A、5—磷酸核糖 B、谷氨酰胺 C、CO2 D、一碳单位 E 、天冬氨酸2、关于翻译过程的描述正确的是( )A、mRNA 上三个相邻核苷酸编码一个氨基酸B、终止密码指令多肽链合成终止C、密码的最后的一个核苷酸较前两个具有较小的专一性D、一种氨基酸有一种以上的密码E、起始密码只有一个3、酶蛋白和辅酶之间有下列关系( )A、两者以共价键相结合,二者不可缺一 B、只有全酶才有催化活性C、在酶促反应中两者具有相同的任务D、一种酶蛋白通常只需一种辅酶E、不同的酶蛋白可使用相同辅酶,催化不同的反应 4、以下必需的氨基酸( )? A、谷氨酸 b、半胱氨酸 C、色氨酸 D苏氨酸 E、纈氨酸5、2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)的作用是( )A、调节红细胞的运氧能力,降低血红蛋白对O2的亲和力B、作为血红蛋白带氧的载体C、促进红细胞内NADPH的生成D、调节红细胞的运氧功能,提高血红蛋白对O2的亲和力E 、2,3-DPG氧化时可生成ATP,是红细胞内能量的储存形式

  • 【我们不一YOUNG】维生素B5

    [align=center][font=DengXian]维生素[/font]B5[/align] [font=DengXian]维生素[/font]B5[font=DengXian]又称烟酸、维生素[/font]PP[font=DengXian]或抗癞皮病维生素,包括尼克酸([/font]Niacin[font=DengXian])和尼克酰胺。[/font][font=DengXian]它们是许多脱氢酶的辅酶,在糖酵解、脂肪合成及呼吸作用中发挥重要的生理功能。烟酸广泛存在于动植物体内,酵母、肝脏、瘦肉、牛乳、花生、黄豆中含量丰富,谷物皮层和胚芽中含量也较高。[/font][font=DengXian]烟酸具有抗癞皮病的作用。当缺乏时会出现癞皮病,临床表现为“三[/font]D[font=DengXian]症”即皮炎([/font]Dermatitis[font=DengXian])、腹泻([/font]Diarrhea[font=DengXian])和痴呆([/font]Dementia[font=DengXian])。这种情况常发生在以玉米为主食的地区,因为玉米中的烟酸与糖形成复合物,阻碍了在人体内的吸收和利用,碱处理可以使烟酸游离出来。[/font]

  • 细菌的生化试验

    微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下:   一、糖酵解试验  不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。  试验方法:以无菌操作,用接种针或环移取纯培养物少许,接种于发酵液体培养基管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。接种后,置36±1.0°C培养,每天观察结果,检视培养基颜色有无改变(产酸),小倒管中有无气泡,微小气泡亦为产气阳性,若为半固体培养基,则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡,有时还可看出接种菌有无动力,若有动力,培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力,从而进行各种细菌的鉴别,因而每次试验,常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫,溴百里蓝和An-drade指示剂。  二、淀粉水解试验  某些细菌可以产生分解淀粉的酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇碘不再变蓝色。  试验方法:以18~24h的纯培养物,涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板(一个平板可分区接种,试验数种培养物)或直接移种于淀粉肉汤中,于36±1°C培养24~48h,或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面,若为液体培养物,则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果,阳性反应(淀粉被分解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。  淀粉水解系逐步进行的过程,因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间,培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性,以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱,因而以临用时制备为妥。

  • 【原创】手持糖度计的使用方法

    手持式糖度计的原理及使用方法一、目的及原理  利用手持式折光仪测定果蔬中的总可溶性固形物(Total Soluble Solid,TSS)含量,可大致表示果蔬的含糖量。  光线从一种介质进入另一种介质时会产生折射现象,且入射角正弦之比恒为定值,此比值称为折光率。果蔬汁液中可溶性固形物含量与折光率在一定条件下(同一温度、压力)成正比例,故测定果蔬汁液的折光率,可求出果蔬汁液的浓度(含糖量的多少)。   常用仪器是手持式折光仪,也称糖镜、手持式糖度计,该仪器的构造如下图所示。   通过测定果蔬可溶性固形物含量(含糖量),可了解果蔬的品质,大约估计果实的成熟度。二、药品与器材  番茄、柑桔、菠萝  蒸馏水  烧杯、滴管、卷纸、手持式折光仪三、操作步骤  打开手持式折光仪盖板(a),用干净的纱布或卷纸小心擦干棱镜玻璃面。在棱镜玻璃面上滴2滴蒸馏水,盖上盖板。于水平状态,从接眼部(b)处观察,检查视野中明暗交界线是否处在刻度的零线上。若与零线不重合,则旋动刻度调节螺旋,使分界线面刚好落在零线上。打开盖板,用纱布或卷纸将水擦干,然后如上法在棱镜玻璃面上滴2滴果蔬汁,进行观测,读取视野中明暗交界线上的刻度,即为果蔬汁中可溶性固形物含量(%)(糖的大致含量)。重复三次。 [em0815]

  • 【分享】细胞代谢呼吸动态分析仪同步侦测OCR、CDPR、ECAR

    北京华威中仪科技代理的由美国Seahorse Bioscience 公司最新研发的XF生物能量测定仪(细胞代谢呼吸动态分析仪)XF extracellular analyzer是世界首创使用24孔及96孔微孔盘为平台,采用无损伤专利固态探针侦测技术即时同步侦测有氧呼吸O2(OCR)以及糖酵解作H+(OCAR)、 CO2产率(CDPR)的动态分析仪,透过此系统的协助,研究者得以更快的速度、更简易的设计了解细胞以及线粒体如何运用不同的受质作为能量的来源、评估疾病与氧代谢及线粒体运作状态之交互作用、分析代谢调节药物对于生理的效应、建立细胞品管系统、快速筛选出具开发潜力之药物及药物毒性评估等多种不同应用。此系统现已被广泛应用于免疫学、药物筛选、肝脏及外源性毒理、糖尿病及肥胖症、老化、干细胞、细胞生理、药物转化等各个领域,哈佛大学等名校已借助该系统在nature、cell上发表文章几十篇,其他SCI高影响因子文章200多篇,现在就拥有Seahorse Bioscience 公司的细胞代谢呼吸动态分析仪,领先下一个细胞与线粒体研究的黄金十年。

  • 大规模动物细胞培养的问题及对策

    大规模动物细胞培养的问题及对策动物细胞培养开始于本世纪初,到1962年规模开始扩大,发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法,利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等,已成为医药生物高技术产业的重要部分。由于动物细胞体外培养的生物学特性、相关产品结构的复杂性和质量以及一致性要求,动 物细胞大规模培养技术仍难于满足具有重要医用价值生物制品的规模生产的需求,迫切需要进一步研究和发展细胞培养工艺。目前,世界众多研究领域集中在优化细胞培养环境、改变细胞特性、提高产品的产率并保证其质量和一致性上。1.细胞培养环境细 胞培养环境中抑制因素的积聚是提高细胞密度的主要限制因素。体外动物细胞培养中氨离子的积累是抑制细胞生长的主要因素之一。氨的积聚使细胞内UDP氨基己 糖(UDP-N-乙酰葡糖胺和UDP-N-乙酰半乳糖胺)增加,影响细胞的生长及蛋白的糖基化过程。氨抑制Gln代谢途径,使Asp和Glu消耗增加。细胞消耗Asp增加,可能是细胞线粒体膜上苹果酸-天冬氨酸泵转运NADH加快,使细胞维持糖酵解途径的需要。Asp消耗增加可能会从Gln代谢多经天冬氨 酸转氨酶途径而不是丙氨酸转氨酶或谷氨酸脱氢酶途径得以补偿。氨来源于两方面:一是直接来源于培养基,一是细胞代谢所产生。但两者都涉及谷氨酰胺,因此需要防止培养基中Gln自然分解,限制Gln用量,并尽量去除培养基中的氨。乳酸是细胞糖代谢的产物。高浓度乳酸会抑制乳酸脱氢酶(LDH),从而减少乳酸产生。LDH受抑制后阻止了NADH向NAD的再生及其偶联的丙酮酸/乳酸转 换,从而导致NADH[font=T

  • 【原创大赛】夏日消暑之良膳——甜酒酿

    【原创大赛】夏日消暑之良膳——甜酒酿

    学习微生物的同学们,用你所学习的微生物知识,做下甜酒酿吧。即消暑,又有营养,又能够巩固微生物知识。同时, 也可以用你的知识成就一道营养的消暑佳肴,那是多么好的事情啊。 从小就喜欢吃甜酒酿,哦,对了,北方的朋友们一般称之为醪糟。酒酿是我国古代劳动人民的聪明结晶。在古代,吃得起甜食说明这个家庭比较富裕。而甜食的几大来源中,酒酿是其中之一。早在春秋时期,酒酿就已经供应战士的能量所需。 酒酿顾名思义,一定是用粮食发酵而成。酒酿为什么是甜的呢? 这呀,是因为,酒药中的根霉和米曲霉等微生物将糊化后的淀粉糖化,将蛋白质水解成氨基酸。酒酿为什么有酒味呢?这是因为酒药中的酵母菌利用糖化产物进行生长和繁殖,并通过糖酵解途径将糖转化为酒精。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507152316_555724_1626663_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507152316_555725_1626663_3.jpg 而如何做甜酒酿呢?这首先要懂得如何灭菌。 我们所用的容器,搅拌用的筷子,勺子,都需要放在热水中,煮沸并保持3分钟左右。然后,这些物品,才能够使用。 家庭做甜酒酿当然不需要烘箱等高档仪器,所以,夏天效果比冬天好。我们做甜酒酿的步骤,概括为: 糯米——去杂质——浸泡——烧煮——接种——搅拌——搭窝——发酵——成品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507152317_555727_1626663_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507152317_555728_1626663_3.jpg工艺摘要: 糯米一定要浸泡。浸泡的温度一般在35摄氏度,有利于米粒吸水膨胀。书本要求浸泡8h-12h。但是,根据我的经验,3h即可。一般教科书要求用蒸的方法来烧米。但是,我用高压锅烧煮,效果也不错。 米烧好后,一定要冷却至室温。然后把米舀到搪瓷碗或瓷碗中。(不能用金属制品,木制品,塑料制品盛米)放入适量(200g米用0.5g左右酒药)。拌匀。米压平。在中心挖一个出气孔(大小约1cm-2cm直径)。表面撒上约0.1g酒药。放入焖烧锅,密闭2-3天。 如果温度在30摄氏度,2天发酵完全。 一般在发酵一天后,白色菌丝出现,用灭菌的勺子或筷子进行搅拌,继续发酵。(让酵母菌喝到甜液)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507152318_555729_1626663_3.jpg(这里面是两步发酵。首先糖化酶(一些霉菌)首先作用,其酶活力呈现S型增长,40h,糖化酶活力稳定,56h后,进入霉菌衰亡期。 糖含量随着淀粉水解而增加,酒精发酵进行而减少。糖作为酵母的C源,随着糖的出现,酵母的酵解同时进行,速度对数增长期和稳定期。) 如果你觉得让酒味更加浓郁的话,可以多发酵几天。这样甜味降低,酒味增加。但是,有可能会更加酸一点。因为,酸是由于发酵过程中产生有机酸和甘油。所以,在发酵30h左右可以加入少许蔗糖,让酸味下降,苦味下降。 根据文献资料:最佳的甜酒酿生产工艺在酒药添加量0.3%,发酵温度30摄氏度,发酵时间60h。不过,我做的时候,发觉差不多就吃了。根据国标GB/T13662-2000,感官指标:甜酒酿醇厚,鲜甜。 总糖(以葡萄糖计)100g/L;酒精度(20摄氏度)10%vol;总酸(以乳酸计)5.6g/L ;氨基酸态氮0.35g/l;pH 4.5. 这样,鲜甜的酒酿就做成功了。酒酿中有酵母菌,产生了许多酵素,有美容作用。酒酿中的氨基酸,很容易被人体吸收,同时,酒酿中的葡萄糖,也是很容易被人吸收。之前,曾经做过小鼠实验,发现,吃过酒酿的小鼠,它患肥胖症概率要小于喂食同样的高脂肪食品的小鼠,说明酒酿还有减肥功能(对于实验白鼠而言,人类是否有作用,等待后人研究)。参考文献:周桃英等.甜酒酿生产工艺的优化研究.中国酿造,2009(9).鲁永强等.甜酒酿的制作与发酵控制.农产品加工,2007(6).

  • 【分享】琼脂糖凝胶电泳技术

    电泳基本原理 迁移率(或泳动度)是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度,可用下列公式计算: U =υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/Vt U为迁移率(cm2•V-1•min-1);υ为颗粒泳动速度(cm•s-1);E 为电场强度( V•cm-1);d为颗粒泳动的距离(cm);l为滤纸有效长度(cm);V为实际电压(V);t为通电时间(s或min)。通过测量d, l, V, t, 即可计算出被分离物质的迁移率。 1迁移率单位= 10-5 cm2•V-1•min-1在确定的条件下,某物质的迁移率为常数,是该物质的化学特征常数。 颗粒带净电荷多,直径小而接近于球形,则在电场中泳动速度快,反之则泳动速度慢。 迁移率还与分子的形状,介质粘度,颗粒所带电荷有关,迁移率与颗表面电荷成正比,与介质粘度及颗粒半径成反比。 影响琼脂糖电泳迁移的主要因素 电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗现象 温度的影响 支持物的影响 按分离原理分类: 1.区带电泳 2.移界电泳 3.等速电泳 4.聚焦电泳 按有无固体支持物分类 1. 纸上电泳 2. 醋酸纤维素膜电泳 3. 薄层电泳 4. 非凝胶性支持物区带电泳(支持物有:淀粉、纤维素粉、玻璃粉、硅胶) 5. 凝胶支持区带电泳(淀粉凝胶、聚丙稀酰胺凝胶、琼脂糖凝胶) 影响琼脂糖电泳迁移的主要因素 DNA的大小 DNA的构象 琼脂糖浓度 缓冲液 不同构像质粒 缓冲液 TAE:乙酸盐缓冲液 TBE:硼酸盐缓冲液 TPE:磷酸盐缓冲液 实验操作 1. 用胶带将洗净、干燥的水平板的边缘封住,形成一个胶模并水平放置。 2. 按水平板的长×宽×0.5cm胶厚,量取0.5×TBE,并按0.7%的浓度称取agarose琼脂糖,在微波炉或电炉上加热至全熔(清澈透明)。 3. 等凝胶温度降至大约50-60以下时,加入1 mg/L溴化乙锭(EB)至终浓度为0.5ug/mL ;摇匀并轻快地倒入水平板中,除掉气泡,插入梳子。 4. 凝固后,将梳子轻轻拔出。 5.去掉胶带,将水平板放入加有0.5×TBE电泳缓冲液的电泳槽中,并且使电泳缓冲液高出凝胶约1mm。 6.在parafilm膜上依次加: ddH2O 6ul,上样Buffer 2ul ,DNA 4ul 分别混匀后点样,记录点样次序。 7. 在水平板两边的点样孔中分别加入6 μ l的λΔΝΑ/EcoRI+HindIII marker。 8. 盖好电泳槽盖子,选择适当的电泳电压(≤5V/cm)及电泳方向(DNA阴极阳极),开始电泳。 9. 当色素接近胶的先端,停止电泳,样品在紫外灯下观察、成像℃

  • 【金秋计划】琼脂糖凝胶电泳技术详细操作步骤和详解

    [size=10px][b]一、琼脂糖凝胶电泳原理[/b] 琼脂糖凝胶电泳是一种重要的分子生物学研究方法,?它利用琼脂糖凝胶的网络结构,?通过电场作用使带电颗粒(?如DNA或RNA)?在凝胶中移动,?根据分子大小和电荷性质的不同实现分离。?这种技术不仅操作简单迅速,?而且具有高分辨率,?因此在基因操作中扮演着关键角色,[font='PingFang SC']其[b]原理主要基于DNA分子的两大特性:电荷效应和分子筛效应。[/b][/font] ?琼脂糖是一种天然的长链状聚合分子,它在沸水中溶解,当温度降至45℃时开始凝固并形成多孔刚性立体网状结构,其孔径的大小取决于琼脂糖的浓度。 [b]分子筛效应[/b]指的是琼脂糖凝胶由琼脂糖分子交联形成的网状结构,其孔径大小与琼脂糖浓度成反比。当DNA分子通过凝胶时,会受到凝胶孔径的阻碍。较小的DNA片段可以通过凝胶孔隙,而较大的DNA片段则会被阻挡,导致迁移速率降低。?? [/size][align=center][size=10px] [/size][/align][size=10px][b]电荷效应[/b]指的是DNA分子在碱性条件下(pH7)会电离,带负电荷。当DNA样品置于电场中时,在外加电场的作用下受到电场力的作用,向正极方向移动。DNA分子的迁移速率与其所带的电荷量成正比,而电荷量又与DNA片段的长度成正比。因此,在相同电场条件下,较长的DNA片段迁移速率较慢,而较短的DNA片段迁移速率较快。不同DNA的分子量大小及构型各不相同,因此它们在电泳中的迁移率也会有所不同,从而可分离出不同的区带。[b]为什么核酸条带显示荧光?[/b]主要便于观察,对核酸进行了染色。溴化乙锭EB是一种扁平状分子,在紫外光照射下能发射荧光。当EB与DNA分子形成EB-DNA复合物后,其发射的荧光强度比游离状态的EB提高10倍以上,且荧光强度与DNA的含量呈正比。 [b]二、?琼脂糖凝胶电泳的详细操作步骤(1%琼脂糖凝胶电泳为例) [font='Times New Roman', 'serif']1.安装制胶模具[/font][font='Times New Roman','serif']:[/font][/b]利用电泳托盘,安装制胶模具,水平放置于试验桌上。 [b][font='Times New Roman', 'serif']2.[/font]制备琼脂糖凝胶:[/b]将琼脂糖粉末溶解于缓冲液中,加热煮沸,冷却后凝固成凝胶。(根据电泳所需要的分辨率准备琼脂糖-电泳缓冲液凝胶溶液)[font='Times New Roman','serif'](1)[/font]称取[font='Times New Roman','serif']1g[/font]琼脂糖,放入盛有[font='Times New Roman','serif']100mL 0.5×TBE[/font]缓冲液的[font='Times New Roman','serif']500mL[/font]三角瓶中,摇匀用天平称量其重量,摇匀。在微波炉中,使琼脂糖完全溶解,放回天平上,加入蒸馏水补齐至初始重量。冷却至不烫手([font='Times New Roman','serif']55℃[/font]左右),加入[font='Times New Roman','serif']100μL[/font][font='Times New Roman','serif']0.5mg/mL EB[/font]溶液(终浓度为[font='Times New Roman','serif']0.5 μg/mL[/font]),或加入[font='Times New Roman','serif']5-10μL[/font][font='Times New Roman','serif']StarGreen DNA Dye(GenStar)[/font],摇匀。 [font='Times New Roman','serif'](2) [/font]将凝胶溶液倒入安装好的制胶模具中,凝胶厚度应在[font='Times New Roman','serif']3-5mm[/font]。 [font='Times New Roman','serif'](3) [/font]选择合适的梳子,梳子的插入深度应使齿的底部和板的表面距离在[font='Times New Roman','serif']0.5[/font]到[font='Times New Roman','serif']1.0mm[/font]。要检查梳子齿下方或之间是否有气泡,在室温下冷却凝固。 [font='Times New Roman','serif'](4) [/font]待凝胶充分凝固后,垂直向上小心拔出梳子,以保证点样孔完好。 [font='Times New Roman','serif'](5)[/font]将凝胶置入电泳槽中,加入[font='Times New Roman','serif']0.5×TBE[/font]缓冲液[font='Times New Roman','serif'],以浸没凝胶约1mm为合适。[/font] [/size] [size=10px][b][font='Times New Roman','serif']3[/font][font='Times New Roman','serif'].[/font]制备DNA样品:[/b]将DNA样品与上样缓冲液混合。[/size] [size=10px]把DNA样品和上样缓冲液混合,利用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]把电泳样品加到没入缓冲液中凝胶槽中,在凝胶的两侧样品槽内加入合适的分子量标准品。[/size] [size=10px]上样量的多少根据样品中DNA片断的多少和大小而定,已知浓度的DNA用于估测样品质粒DNA的浓度。 [b][font='Times New Roman','serif']4.[/font]电泳:[/b]将DNA样品加载到凝胶上的样品孔中,在电场的作用下进行电泳。[/size] [size=10px]盖上电泳槽的盖子,正确连结电泳槽上的导线。电泳电压以正负电极的距离的一到五倍为合适(1到5V/cm)。如果电泳线连接正确,那么在进行电泳时可以看到有气泡从电泳槽内电极导线处产生,同时,在几分钟后,可见溴酚蓝条带从负极向正极移动,从上样槽内移入胶体。[/size] [size=10px][b]5.观察:[/b]当核酸样品移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳。电泳结束后,利用紫外灯观察DNA片段的迁移情况。当DNA样品在凝胶内移动到合适的距离时,关闭电源,去除电泳导线和电泳槽盖子。在室温下,用电泳缓冲液或水配制的EB溶液(0.5 μg/ml)对凝胶进行染色[b][font=-apple-system, helvetica, sans-serif]。[/font] 三、琼脂糖凝胶电泳的主要应用[/b] [/size] [size=10px][b]1.DNA片段的鉴定:[/b]通过比较DNA片段的迁移距离,与标准品进行对照,可以判断DNA片段的大小。[/size] [size=10px][b]2.DNA片段的分离:[/b]利用不同大小DNA片段的迁移速率差异,可以将DNA片段进行分离。[/size] [size=10px][b]3.DNA的纯化:[/b]通过电泳将目的DNA片段与其他杂质分离,得到纯化的DNA片段。(割胶回收)[/size] [size=10px][b]四、操作技巧和注意事项[/b][/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]1.EB毒性[/size][/font][/b] [size=10px]EB是一种很强的诱变剂。在接触含有EB溶液时,应该全程戴手套和口罩。[/size] [size=10px]电泳中使用的溴化乙锭(EB)为中度毒性、强致癌性物质,务必小心,勿沾染于衣物、皮肤、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在专门电泳区域操作,戴一次性手套,并及时更换。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]2. 加热熔化琼脂糖[/size][/font][/b] [size=10px]用微波炉加热熔化琼脂糖时,溶液体积不能超过三角瓶容量的1/3,以免煮沸时溶液溢出。同时,琼脂糖必须完全熔化,否则可能导致电泳图像模糊不清。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]3.凝胶厚度[/size][/font][/b] [size=10px]凝胶的厚度一般为4-6nm,若太厚可能会影响检测的灵敏度。待凝胶充分凝固后才能拔出梳子,以保证点样孔形状完好,防止漏样。[b][font='Times New Roman','serif']4.上样[/font][/b][/size] [size=10px]上样时,须先除去点样孔中的气泡,并且加样操作需小心谨慎,以免漏样或损坏胶孔。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]5.电泳电压[/size][/font][/b] [size=10px]选择适当的电泳运行条件很重要,包括电压和距离。推荐的电压范围是4-6V/cm,电压太低会降低迁移率,电压太高会降低分辨率。[/size]

  • 提高肉类嫩度的方法

    多聚磷酸盐嫩化法多聚磷酸盐包括焦磷酸、偏磷酸和三聚磷酸盐。1950年开始应用于肉食品 加工中,嫩化方法是将多聚磷酸盐配成腌制液用于腌制或注入肉中,然后进行滚揉。一般添加量为0.125%-0.375%,不超过0.5%。其作用机理:提高肉的pH值,鳌合金属离子,增加蛋白质静电斥力,增加肌球蛋白的溶解性,使肌动球蛋白发生解离,提高盐溶性蛋白的数量。钙盐注射嫩化法有试验表明,肌肉韧性强、嫩度差的家禽肉,在宰后立即于鸡胸肌注入浓度为0.15mol的氯化钙溶液,12小时后,其剪切力值比对照值(注入等量KC1)明显降低,嫩度得到明显提高,为肉嫩化提供了一个新的途径。其机理是:高浓度的钙渗透肌细胞中,激活CANP酶及碱性磷酸酶,促进糖酵解,加速溶酶体破裂,组织蛋白释出,共同促进了嫩度的提高。盐酸半胱酸嫩化法盐酸半胱酸可使酶分子活性基团-SH打下,改变结构,激活解胱酶系统,释放出活性蛋白质,水解聚合的胶原蛋白的肽结构、结缔组织中弹性蛋白质也有部分水解。碳酸盐嫩化法所用碳酸盐包括碳酸钠、碳酸氢钠,嫩化方法是将碳酸盐配成液体(1%-2%),将一些原料如粗老干硬动物性原料浸入其中。碳酸盐溶液一般呈碱性,对蛋白质有一定腐蚀作用,可破坏肉类的组织结构,促使结构发生改变,从一定程度提高了肉类嫩度,但同时对营养也有一定的损失。 ??

  • 生物化学名词解释大全 第9章

    第九章 1,酵解(glycolysis):由10步酶促反应组成的糖分解代谢途径。通过该途径,一分子葡萄糖转化为两分子丙酮酸,同时净生成两分子ATP和两分子NADH。 2,发酵(fermentation):营养分子(Eg葡萄糖)产能的厌氧降解。在乙醇发酵中,丙酮酸转化为乙醇和CO2。 3,巴斯德效应(Pasteur effect):氧存在下,酵解速度放慢的现象。 4,底物水平磷酸化(substrate phosphorlation):ADP或某些其它的核苷-5′—二磷酸的磷酸化是通过来自一个非核苷酸底物的磷酰基的转移实现的。这种磷酸化与电子的转递链无关。 5,柠檬酸循环(citric acid cycle):也称为三羧酸循环(TAC),Krebs循环。是用于乙酰CoA中的乙酰基氧化成CO2的酶促反应的循环系统,该循环的第一步是由乙酰CoA经草酰乙酸缩合形成柠檬酸。 6,回补反应(anaplerotic reaction):酶催化的,补充柠檬酸循环中间代谢物供给的反应,例如由丙酮酸羧化酶生成草酰乙酸的反应。 7,乙醛酸循环(glyoxylate cycle):是某些植物,细菌和酵母中柠檬酸循环的修改形式,通过该循环可以收乙乙酰CoA经草酰乙酸净生成葡萄糖。乙醛酸循环绕过了柠檬酸循环中生成两个CO2的步骤

  • 【转帖】高温下形成焦糖有害健康 街头“开口栗子”慎买

    金黄饱满、香甜软糯的栗子在申城街头飘香,而在新长发、好好栗子等名店更是常常出现排队盛况。记者昨天从上海果品行业协会获悉,栗子好吃,挑选却有讲究,面对一些无证摊贩炒出的栗子、开了口的栗子,市民选购时要特别留意。  据果品专家介绍,上海市场上的糖炒栗子主要有大别山野生栗、舒城板栗和天津良乡糯栗。购买糖炒栗子千万别挑开了口的。炒栗子时,锅里的圆砂和糖在高温下发生反应,会形成焦糖,时间长了以后会变成黑色。这种焦糖里含有一定的有害成分,是不宜食用的,开口栗子容易粘到这些黑焦糖。目前,申城街头卖的现炒板栗多是属于生栗的一种,板栗虽大,吃口不糯。还有一些店家买来廉价的生栗加糖并在炒之前划开口子,冒充天津糯栗出售。

  • 关于焦糖色,你知道多少?

    关于焦糖色,你知道多少?

    [color=#c65405][b]焦糖色[/b][/color]在中国又被称为“酱色”,是一种在全球范围内广泛使用的食品着色剂。焦糖色的应用领域非常广泛,包括酱油、调味品、软饮料、黄酒、方便面、焙烤食品等,几乎涵盖了食品领域的方方面面。随着生活水平的提高,原来酱油市场的淡色酱油逐渐被各种花色酱油取代,如草菇老抽、特红老抽、烧烤酱油、海鲜酱油等五花八门,各具特色。这些花色酱油的[b][color=#c65405]特点[/color][/b]为[color=#3f3f3f]浓度高、体态稠厚挂碗,色率深,色泽金红透亮[/color],烹饪时使用能保持鲜艳的色彩、不退色、不发黑,且香味醇厚。以前只有传统的晒酱工艺和高盐稀态工艺才能满足,但其成本高、周期长、产量小,不适合工业化生产,也远不能满足消费者的需求。因此,市场上的很多老抽酱油都是通过改良工艺,在发酵后期加入20%左右高品质的[color=#c65405][b]焦糖色[/b][/color]制成的。[img]file:///C:\Users\syzhao\AppData\Roaming\Tencent\Users\731412791\QQ\WinTemp\RichOle\3DNZDO$%AXC9{N[8A027NP6.png[/img][img=,442,302]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711090948_01_3057315_3.png!w442x302.jpg[/img]酱油中添加焦糖色在我国有悠久的历史。[color=#c65405][b]焦糖色[/b][/color]可以增加酱油色泽,改善体态,提高品质,缩短发酵周期,还可以提高酱油的收率,减少氨基酸因颜色的深化而造成的损失。优质的酱油使用的焦糖色也需要更多的考量。随着人们生活水平的提高,人们对酱油的品质有了更高的要求,酱油用焦糖色的着色性能的要求也越来越高。根据酱油的发酵工艺,酱油用的焦糖色既要求[color=#c65405][b]耐盐性好[/b][/color],又要求[color=#c65405][b]着色能力强[/b][/color]。

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