酸水解氨基酸

氨基酸水解液，氮吹步骤有什么好的仪器推荐吗，用的氮吹仪针全腐蚀透了，真空旋转也腐蚀坏了??????

首先想请教大家，目前是否存在哪个单位组织水解氨基酸的能力验证或者测量审核？其次，目前是否有售分装基体氨基酸的标准样品（物质），可以供实验室做17种水解氨基酸的质量控制？最后，除加标回收，重复性检测外，大家实验室怎么做水解氨基酸的质量控制啊？欢迎各位前辈指教

大家好，请问各位有没有用微波消解仪水解测定饲料中氨基酸的有效方法呀，我想请教微波水解在氨基酸前处理中的应用问题，关于水解时间和水解温度等问题有好的意见分享一下，谢谢各位了！！

我正在做植物中氨基酸的定量测定遇到水解难题！！使用MARS5微波处理的程序是什么？步骤？？请大家帮助谢谢大家急盼回复

谷物水解氨基酸的实物标样在哪里可以买到？

问题: 有人做过氨基酸液相分析吗？咨询一下水解氨基酸的问题回复: 我们做水解的，加盐酸问题: 那是放在烘箱中110℃加热24小时？烘箱过夜开，没问题吗？而且酸水解，对色氨酸破坏会比较大啊回复: 是的，就是这个条件。 我们能做17种，好像有半胱氨酸吧！ 加碱中和脱酸， 还要一个一个调ph

[size=4] 有没有人用waters2695高效液相色谱做过水解氨基酸分析？样品前处理是不是有专门的设备？我现在想用这个仪器做丝织品的氨基酸分析，但在样品前处理时发现普通的玻璃瓶耐受不了在高温下长时间的水解，是不是得用专门的水解瓶？大家帮帮忙啊，谢谢！[/size]

氨基酸前处理时，水解时间过长，对检测结果有什么影响？

各位大哥：小弟初做蛋白质水解氨基酸，用的是waters的柱前衍生（2695—2487）accq-tag方法，效果不好，本人怀疑前处理不行。用传统酸水解（24h），是否酸度太大，是否可以中和，还有更好的前处理方法吗？？？需要加抗氧化的吗？？？愿听高论，跪求啊？？？？

最近忙氨基酸分析，用柱前衍生。发现样品有一个峰很高，尤其是水解之后更高。它不是17中氨基酸标准品中的一个，不知道是什么。。。。。。。。这样的话我怎么得知它是什么氨基酸呢？我算总量的时候可不可以用峰面积估算出这个峰代表的氨基酸的含量? 可不可以用质谱做？但是样品比较复杂。。。。。。。。。。。。。要怎么办呢？大侠们出手试试

检测氨基酸时，样品水解后，最多可以放置多长时间，不影响检测结果？

请教一下各位：用氨基酸分析仪能检测皮革水解蛋白吗？

一般测定水解氨基酸选择什么类型的离子色谱柱？

氨基酸的主要化学反应（一）茚三酮反应茚三酮反应(ninhydrin reaction)这是氨基酸的α-NH2所引起的反应。α-氨基酸与水合茚三酮一起在水溶液中加热，可发生反应生成蓝紫色物质。首先是氨基酸被氧化分解，放出氨和二氧化碳，氨基酸生成醛，水合茚三酮则生成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中，还原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽都产生蓝紫色，但脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质，因其α-氨基被取代，所以产生不同的衍生物。此反应十分灵敏，根据反应所生成的蓝紫色的深浅，在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量。也可在分离氨基酸时作为显色剂定性、定量地测定氨基酸。 （二）氨基酸与2,4-二硝基氟苯的反应 此反应又称桑格反应（Sanger reaction）。在弱碱性（pH 8~9）、暗处、室温或40℃条件下，氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯（缩写为FDNB）反应，生成黄色的2,4-二硝基氨基酸（dinitrophenyl amino acid，简称DNP-氨基酸）。该反应由F. Sanger首先发现。多肽或蛋白质的N-末端氨基酸的α-氨基也能与FDNB反应，生成一种二硝基苯肽（DNP-肽）。由于硝基苯与氨基结合牢固，不易被水解，因此当DNP-多肽被酸水解时，所有肽键均被水解，只有N-末端氨基酸仍连在DNP上，所以产物为黄色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯，所以可以用乙酸乙酯抽提并将抽提液进行色谱分析，再以标准的DNP-氨基酸作为对照鉴定出此氨基酸的种类。因此2,4-二硝基氟苯法可用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。（三）氨基酸与苯异硫氰酸（PITC）的反应 此反应又称艾德曼反应（Edman reaction）。在弱碱性条件下，氨基酸的α-氨基可与苯异硫氰酸（phenylisothiocyanate, PITG）反应生成相应的苯氨基硫甲酰氨基酸（简称PTC-氨基酸）。在酸性条件下，PTC-氨基酸环化形成在酸中稳定的苯乙内酰硫脲氨基酸（phenylthiohydantoin，简称PTH）。蛋白质多肽链N-末端氨基酸的α-氨基也可有此反应，生成PTC-肽，在酸性溶液中释放出末端的PTH-氨基酸和比原来少一个氨基酸残基的多肽链。PTH-氨基酸在酸性条件下极稳定并可溶于乙酸乙酯，用乙酸乙酯抽提后，经高压液相层析鉴定就可以确定肽链N-末端氨基酸的种类。该法的优点是可连续分析出N端的十几个氨基酸。瑞典科学家P. Edman首先使用该反应测定蛋白质N-末端的氨基酸。氨基酸自动顺序分析仪就是根据该反应原理而设计的。（四）α-羧基的反应 氨基酸的α-羧基和一般的羧基一样，可以和碱作用生成盐，其中重金属盐不溶于水。氨基酸的羧基还能与醇类作用，被酯化生成相应的酯。酯化作用在人工合成多肽中常用来保护氨基酸的α-羧基。例如，氨基酸在无水乙醇中通入干燥氯化氢气体，或加入二氯亚砜，然后回流，生成氨基酸酯的盐酸盐。氨基酸的α-羧基被还原可产生相应的α-氨基醇，例如被氢硼化锂还原的反应。此性质在蛋白质一级结构的测定中是鉴定C-末端氨基酸的一种方法。（五）R基的反应 氨基酸的R侧链含有官能团时也能发生化学反应，例如丝氨酸、苏氨酸和羟脯氨酸均为含有羟基的氨基酸，所以能形成酯。酪氨酸的R侧链含有苯酚基，具有还原性，所以可利用此性质定量地测定蛋白质。另外，苯酚基和组氨酸中的咪唑基具有芳香环或杂环的性质，能与重氮化合物（如对氨基苯磺酸的重氮盐）结合而生成棕红色的化合物，此反应可用于定性、定量测定。此外，半胱氨酸的侧链上的巯基（-SH）的反应性能高，在碱性溶液中容易失去硫原子并且容易被氧化而生成胱氨酸。另外，极微量的某些重金属离子，如Ag＋、Hg2+，都能与-SH基反应，生成硫醇盐，从而导致含-SH酶失活。

我单位新进日立L-8900氨基酸分析仪，主要分析浓缩果汁。前处理按照110度水解的办法48小时也不能处理好；后改用微波消解，使用6mol的盐酸，160度消解30分钟，仍然是黑乎乎的。请教分析过氨基酸的朋友，浓缩果汁的糖分含量一般较高，应该如何水解，如果用微波的话，应该怎么处理？

本规程规定了氨基酸分析仪(以下称仪器)的检定方法。规程中所列检定方法适用于利用柱前衍生C18柱分离氨基酸，带自动恒温水解装置的高效仪器。仪器适合于分析含氨基酸的样品，可对水解氨基酸及游离氨基酸进行定性、定量分析。广泛用于生化、医药、食品、化工 及农业等领域。资料中心下载:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/012547.shtml

最近刚接手日立的氨基酸分析仪，有几个疑问，向大家请教一下1.水解蛋白分析方法的前处理中，水解过程中大家是按照仪器说明书中的方法做的吗，我以前没用过水解管，是不是一定要充氮，水解管的封口是怎么处理的？2.水解蛋白分析方法和生理体液方法的针对的样品区别究竟在哪里，前者除了测蛋白水解后得到的氨基酸，还有其他的可以测吗，说明书上说前者还可以测加入了氨基酸的化学液体，这个究竟包括哪些样品呢

看到一个测定氨基酸样品前处理的配方，说是要加还原剂，这个所谓的还原剂应该就是酸水解吧？但天冬氨酸、色氨酸和谷氨酰胺怎么测定，它们三个不能用酸水解的呀？

把蛋白完全水解成氨基酸，可以在pmol到nmol水平上分离和定量。虽然氨基酸的序列信息已经无法得到，但是组成蛋白的氨基酸种类及含量信息可以得到,利用氨基酸的指纹信息可以鉴定蛋白。

[font=宋体]在所检测氨基酸样品中，有的样品中氨基酸以游离态存在，而有的样品中氨基酸以蛋白或多肽形式存在，当然，大多数样品氨基酸以两种形式同时存在。根据关注点不同，我们常常把样品分为游离样品和水解样品。[/font][b][font=宋体]水解样品前处理技术[/font][/b][font=宋体]水解技术适用于氨基酸以蛋白或多肽形式存在的样品，氨基酸主要是以肽键结合，需要设法将肽键打开，水解成单个游离氨基酸，而当前还没有哪一种水解剂能将所有的氨基酸毫无破坏的水解出来，这就决定了氨基酸总量测定前处理方法的复杂性和多样性。[/font][font=宋体]常用的水解方法分为：盐酸水解法、磺酸水解法、酶水解法、过甲酸氧化法和碱水解法。由于酸水解对色氨酸完全破坏，而胱氨酸水解成半胱氨酸，后者不能与茚三酮产生颜色反应；所以碱水解法是测定色氨酸最有效的方法，过甲酸氧化法只是用来测定胱氨酸。[/font][b][font=宋体]游离氨基酸测定样品的制备[/font][/b][font=宋体]游离氨基酸测定样品从形态上可分为两大类：液体样品和固体样品。测定游离氨基酸的样品，主要需要考去除杂质。如果氨基酸存在于组织等固体样品中，则需要从样品中中把氨基酸提取出来并去除杂质。杂质主要包括蛋白质和金属离子，金属离子用[/font]EDTA[font=宋体]去除，蛋白沉淀剂应用较多的有三氯乙酸法、苦味酸、磺基水杨酸（[/font]SAA[font=宋体]）法、乙醇沉淀法、超速离心法等，经过对蛋白沉淀实验比较，发现采用三氯乙酸法相比较其他方法去蛋白效果更好。脂肪含量高的样品仍需先用乙醚或者石油醚脱脂。[/font] [b][font=宋体]影响水解因素及其优化[/font][font=宋体]1.[/font][font=宋体]样品的性质[/font][/b][font=宋体]纯蛋白样品水解影响因素较小，而对含碳水化合物较多的如饲料样品就会因碳水化合物而回收率降低，使水解方法受到限制。如在盐酸水解时纯蛋白质中的蛋氨酸损失很小，而谷类样品中的蛋氨酸则会损失[/font]20-30%[font=宋体]，如果此时在酸中加入巯基试剂，谷类样品中的蛋氨酸回收率就会大大提高，一般是碳水化合物越多，回收率也就越高。[/font][b][font=宋体]2.[/font][font=宋体]水解试剂的选择[/font][/b][font=宋体]因对蛋白质中[/font]20[font=宋体]种氨基酸有极强的水解能力，所以最常用的水解剂是盐酸；对特殊要求如测定色氨酸时，最好选择碱做水解剂。如果在酸水解液中加入保护剂巯基乙醇可以提高胱氨酸和蛋氨酸的回收率；如要提高酪氨酸的回收率则应在盐酸中加入酚类化合物。如果要测定酰胺类化合物，应选用蛋白酶作水解液。怎么样选择水解液，最好要根据氨基酸的特性来选择。[/font][b][font=宋体]3.[/font][font=宋体]水解液的使用量[/font][/b][font=宋体]一般采用相当于蛋白质重量[/font]500-5000[font=宋体]倍的[/font]6mol[font=宋体]盐酸，相对加大[/font]6mol[font=宋体]盐酸与蛋白质重量的比例，可以避免氨基酸水解的损失，也就是说，水解液越多，对氨基酸的破坏越小。[/font][b][font=宋体]4.[/font][font=宋体]水解的真空度[/font][/b][font=宋体]水解管中含氧量在有空气存在的情况下，含硫氨基酸由于氧化而有较大损失，如酸水解可使蛋氨酸损失可达[/font]20-30%[font=宋体]，酪氨酸和组氨酸也会损失[/font]10%[font=宋体]左右。因此在水解管封管前要先充满高纯氮气，再封管。[/font][b][font=宋体]5.[/font][font=宋体]水解时间的影响[/font][/b][font=宋体]不同氨基酸形成的肽键对水解液反应不同，完全水解所需时间也会不同，缬、异亮肽键不易水解，[/font]72[font=宋体]小时才能达到最大值，而胱氨酸、苏氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸等氨基酸随水解时间延长而逐渐破坏，水解时间越长，回收率也就越低。[/font]24[font=宋体]小时是取一个相当于固定大的多数氨基酸回收率都较高的一个时间。[/font][b][font=宋体]6.[/font][font=宋体]水解温度的选择[/font][/b][font=宋体]水解温度过低会使水解不完全，温度太高又会使有极性侧链的氨基酸如苏氨酸、丝氨酸等破坏。常用水解温度是[/font]110[font=宋体]℃，水解时间为[/font]22-24[font=宋体]小时。也可以适当提高水解的温度，能缩减水解时间，提高工作效率，如用[/font]140[font=宋体]℃高温水解，仅水解[/font]4-5[font=宋体]小时实验结果就与[/font]110[font=宋体]℃条件下[/font]24[font=宋体]小时水解结果相似。[/font][font=宋体]在酸水解当中。一些氨基酸的破坏可以用实验值来进行校正。一种是用与水解蛋白质样品相同条件情况下来水解已知含量的氨基酸混合标准，用测定值来校正蛋白质水解后的氨基酸数值。例如[/font]110[font=宋体]℃条件下[/font]6mol[font=宋体]盐酸水解[/font]24[font=宋体]小时的[/font]Arg[font=宋体]精氨酸回收率为[/font]95.5%[font=宋体]，[/font]Leu[font=宋体]亮氨酸回收率为[/font]96.2%[font=宋体]，[/font]Ser[font=宋体]丝氨酸回收率为[/font]92.7%[font=宋体]等。另一种方法是用已知含量和组成的纯蛋白质，在相同条件下进行水解，用测定值得到各个氨基酸的回收率，用来去校正分析数据。[/font]

我想问一下，为什么我测饲料中氨基酸，测出结果跟实际的地相差特别大呢~低了快十倍~我就是用得螺纹的水解管然后充氮，不过我是用的油浴110度反应的~哪地方出错了呢~郁闷中~

为什么测得的氨基酸总和一直偏高呢？用柱前衍生化，测定16种氨基酸，氨基酸总和总比粗蛋白高，如果是样品前处理的问题，那问题应该是出在哪里呢？？酸水解时间的影响？目前是水解22小时，上机的样品瓶是用浓硝酸泡过，重复使用的，瓶盖隔垫也是重复使用的？这些会不会存在污染？氨基酸总和比粗蛋白高的意思是这样的，打个比方说鱼粉中粗蛋白含量是60%，而氨基酸总和却达到70%，粗蛋白与氨基酸总和的比例关系是比较固定的，除了玉米蛋白粉等少数原料以外，基本是不会出现氨基酸总和高于粗蛋白含量的.目前做了标样浓度梯度（100、150、200、250pmol/ul）和样品浓度稀释（2倍、4倍稀释）实验,结果显示标样的线性关系很好，上机样品液稀释后结果低于未稀释的，但是氨基酸总和高于粗蛋白含量的问题仍然存在？基本确定是样品前处理的问题，但是问题出在哪里呢？我用的标样的溶剂是0.1M盐酸，而上机样品液溶剂是水，这个影响很大吗？？如果样品上机液溶剂改用盐酸或者流动相，哪个更好一点？感谢大家提出的意见和建议问题已经解决了，再次谢谢大家的意见

小弟最近在做氨基酸组成分析，用岛津20A做的，是柱前衍生的PITC法，对于定性分析，现在相对较稳定，但对于定量分析效果很不理想，我一般测试蛋白多肽类产品，水解后测试绝对量，回收率少的可怜，只有15-20%，那位好心人帮帮我，看怎么提高氨基酸组成分析的回收率，或者有好的资料分享一下，小弟在此万分感谢。

准备找个地方学习氨基酸检测，包括水解和游离的。期望的地点的是权威点的地方，希望各位达人能够推荐，地点在湖北境内。邮箱：chenruobing_1980@163.com

我单位新进日立L-8900氨基酸分析仪，主要分析浓缩果汁。前处理按照110度水解的办法48小时也不能处理好；后改用微波消解，使用6mol的盐酸，160度消解30分钟，仍然是黑乎乎的。请教分析过氨基酸的朋友，浓缩果汁的糖分含量一般较高，应该如何水解，如果用微波的话，应该怎么处理？

怎样将蜂蜜中的糖脱掉水解后测其氨基酸含量呢??帮帮我

请教各位专家。氨基酸测定的国标中，对样品脂肪含量都进行了要求。即样品的脂肪含量必须低于4-5%才能进行水解，否则要先脱脂。想请教一下脱脂的目的是什么，脂肪的存在对氨基酸的测定有哪些不利影响？谢谢。

今天在检测食品的氨基酸时，要在110[sup]0[/sup]C玻璃管内水解24小时，不一会就发生爆炸了，声音很大，很危险，由于烘箱是防爆的，所以没有伤人，想彻底解决，但找不到好的方法

食品中氨基酸的定性检验可以采用比色法，加入下面的试剂()。 A、肽键水解酶 B、蛋白水解酶 C、水合茚三酮 D、水合硫酸铜

我的PICO-TAG氨基酸法，前几天干燥氨基酸样品用的真空小瓶（WATERS干燥、水解氨基酸工作台专用的）、碎了[em63] ,做DNFB、DNCB效果都不理想，没有办法，只好请大家帮帮我，谁以前用过这个方法，淘汰的真空小瓶卖我一个。具体办法我们可以商量。我的QQ是78724851。电话13936003097。我很急，多谢了。[em48]