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  • 双量程百万分之一天平功能解说

    [url=http://www.f-lab.cn/microbalances/mya-52y.html][b]双量程百万分之一天平MYA11-52.4Y[/b][/url]是专业的高精度百万分之一微量天平,具有两个量程范围,为客户提供高速和高精度称重测量,具有竞争力的百万分之一天平价格,百万分之一天平具有独特的天平内部自动校准功能,5.7''彩色触摸屏触控操作,非常方便用户使用。[b]双量程百万分之一天平MYA11-52.4Y[/b]精度测量精度由内部调节重量调整过程来保证的,这是由一个诊断环境条件变化的模块(在线)控制全自动过程。调整过程(内部和外部)可以按照特殊设计的时间表执行。[b]双量程百万分之一天平MYA11-52.4Y[/b]功能4y系列微量天平是一个优化的现代装置具有自动电平控制选项(传感)作为一种多功能。平衡定制的实际效果是获得平衡菜单个人用户配置文件和分级权限级别。可编程接近传感器提供的可能性范围广:称量室控制,归零,打印输出等几大功能差称量方便同一样本进行各种过程的多级质量控制。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]的校准功能是一个符合人体工程学的工具设计的校准和控制活塞[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]用重量法。媒体模块作为一个伟大的4y系列资产,提供用户屏幕上的帮助和支持。[b]双量程百万分之一天平MYA11-52.4Y符合标准[/b]由于安全系统的可能性和文档的过程通过打印输出(标准/编辑)的4y平衡,满足各行业GLP / GMP系统施加的要求(制药、石化、环保)。[img=双量程百万分之一天平-11g/1µ g-52.4g/10 µ g]http://www.f-lab.cn/Upload/MYA-4Y.JPG[/img]超微量天平:[url]http://www.f-lab.cn/microbalances.html[/url]

  • 双特异性抗体的功能与应用有哪些?

    [font=宋体][font=宋体]双特异性抗体是一种基因工程的产物,它有两种不同抗原的结合位点[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]可以结合两种不同的抗原。双特异性抗体可以通过结合靶细胞同时利用另一位点招募功能细胞,使得靶细胞与功能细胞相互作用,进而增强功能细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体主要包括含[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段和不含[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段两大类。含[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区双特异性抗体保持了传统的单克隆抗体定制结构,具有两个[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]区和一个[/font][font=Calibri]FC[/font][font=宋体]区。与传统单克隆抗体定制不同的是,这两个[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]可以结合不同抗原。不含[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区双特异性抗体缺失了[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区,由两个抗体的[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]区和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]区组成或者由[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段组成。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]如何制备双特异性抗体[/b][/font][font=宋体][font=宋体]制备双特异性抗体,科学界同仁已开发了诸多解决方案。杂交[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]杂交瘤法(也称为四源杂交瘤)是最早用于制备双特异性抗体的技术。基于两种不同杂交瘤细胞系的体细胞融合,表达所需特异性的鼠[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]。然而,这种方法制备的功能性双特异性抗体占比低,为后续的抗体纯化和质控带来了巨大的挑战。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过使用分子克隆技术,双特异性[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体由同一细胞系表达的两条不同重链和轻链组成。双特异性抗体的制备需要至少两个用于异二聚化重链的质粒和一个用于公共轻链的质粒。如果使用两个不同的轻链,则需要两个轻链质粒。一般建议[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]个单独的质粒上表达[/font][font=Calibri]HC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]LC[/font][font=宋体],因为调整质粒比率是一种简单有效的方法。随后,通常要经历复杂的过程从异质稳定转染池中选择最理想的克隆细胞系,以用于大规模抗体生产。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]与稳定转染相比,瞬时转染无需将重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]整合至宿主基因组中,可以在数天内快速得到结果。人胚肾细胞([/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体])可用于双抗的瞬时表达,适合应用于双抗药物开发的早期阶段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供:双特异性抗体生产服务[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/bispecific-antibody-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]双特异性抗体功能与应用[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①募集免疫细胞[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞毒性[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]淋巴细胞([/font][font=Calibri]CTL[/font][font=宋体])也称[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞,属于[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞的一种,可以特异性识别抗原肽[/font][font=Calibri]-MHCI[/font][font=宋体]类分子复合物,与之发生结合,释放细胞因子裂解细胞或直接进行靶细胞杀伤,但由于很多肿瘤细胞会通多种机制逃避机体免疫系统(包括[/font][font=Calibri]CTL[/font][font=宋体])识别和攻击,从而形成免疫逃逸。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]科学家们将[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞上面加上了一个特殊的[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]结构,其中带有能够特异性识别靶细胞的相关抗体序列,相当于给[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞装上了一个[/font][font=Calibri]GPS[/font][font=宋体],增强识别靶细胞能力和杀伤能力,使之成为一个超级卫士。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体[/font][font=Calibri](BsAb)[/font][font=宋体]如[/font][font=Calibri]CD19-CD3[/font][font=宋体]也具有相似的作用,[/font][font=Calibri]BsAb[/font][font=宋体]使[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞激活并定向接近肿瘤细胞,这个过程伴随着[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞和靶肿瘤细胞之间瞬时的溶细胞突触形成,随后[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞增殖和激活导致肿瘤细胞裂解。除了[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞,其他免疫细胞如巨噬细胞、单核细胞、粒细胞和自然杀伤细胞([/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体])也会发挥杀死肿瘤细胞的效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②阻断信号通路[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]信号通路是指将细胞外的分子信号经细胞膜传入细胞内发挥效应的一系列酶促反应通路。这些细胞外的分子信号[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]称为配体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]包括激素、生长因子、神经递质以及其它小分子化合物等。当配体特异性地结合到细胞膜或细胞内的受体后,在细胞内就会将信号传递下去,对细胞的生长、增殖、凋亡、血管生成、自吞噬等过程发挥着极其重要的生物学功能。某些肿瘤细胞异常高表达某种受体,从而导致肿瘤恶性增殖,利用双特异性抗体可以特异性的阻断两个或多个信号通路,减少其通过转换信号通路的方式形成的肿瘤细胞逃逸,提高治疗效果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③阻断细胞因子[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一些细胞因子被认为是引起炎症发生和自体免疫疾病的关键因子,因此阻断这些因子是有治疗潜力的。例如,抑制[/font][font=Calibri]IL17[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]TNF[/font][font=宋体]α对于牛皮癣、银屑病关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、少年关节炎和许多其他疾病有很好的治疗效果。[/font][font=Calibri]BsAb[/font][font=宋体]可以结合两个细胞因子受体,达到更好的治疗目的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④作为运载工具[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体具有蛋白识别的特异性。因此,通过一定的耦联技术将抗肿瘤药物或免疫调节药物等[/font][font=宋体]“绑定”在一起,而另一抗原结合位点靶向肿瘤部位,进而提高药物在肿瘤部位的浓度,加强药物疗效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多双特异性抗体详情可以参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody[/font][/font]

  • 具有双传感器自动切换功能的双通道24位高精度PID控制器

    具有双传感器自动切换功能的双通道24位高精度PID控制器

    [align=center][size=14px][img=双传感器自动切换PID控制器,690,426]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107281550092924_2978_3384_3.png!w690x426.jpg[/img][/size][/align][color=#990000]摘要:为了解决PID过程控制器中双传感器自动切换的难题,降低成本提高性价比,替代昂贵的英国欧陆公司2704系列产品,上海依阳实业有限公司推出了单通道和双通道系列的24位高精度PID过程控制器,每个通道都可以实现双传感器自动切换。采用双通道控制器还可以实现温度和真空度的同时测量和控制,温度和真空度测控都可以实现双通道自动切换。另外双传感器自动切换功能还可使备份传感器成为可能,可有效保证过程控制的连续性和安全性。[/color][align=center]~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~[/align][size=24px][color=#990000]1. 问题的提出[/color][/size][size=14px][/size]  在许多工业控制领域中,如真空热处理、冷冻干燥机、高压釜、半导体加热炉、空间环境模拟室等,被控参数的量程往往会很宽泛,为了覆盖全量程范围内的准确测量和控制,往往需要两只不同量程的传感器。[size=14px][/size]  如在温度测控过程中,往往在低温段采用热电偶温度传感器,在高温段采用红外测温仪,有时也会采用两种不同类型的热电偶温度传感器来覆盖宽的温度区间。[size=14px][/size]  如在真空度测控过程中,往往会采用10Torr和1000Torr两只薄膜电容真空计来完成0.1~760Torr全量程范围的真空度准确测量和控制。[size=14px][/size]  对于这种需要双传感器测量和控制的场合,目前普遍还是采用人工判断切换方式,这给实际应用带来很大不便。[size=14px][/size]  国外著名厂商欧陆(EUROTHERM)公司针对上述应用,专门推出了2704系列PID过程控制器,但价格较贵。[size=14px][/size]  为了解决PID过程控制器中双传感器自动切换的难题,降低成本提高性价比,替代昂贵的国外产品,上海依阳实业有限公司推出了单通道和双通道系列的24位高精度PID过程控制器,每个通道都可以实现双传感器自动切换,采用双通道控制器还可以实现温度和真空度的同时测量和控制,温度和真空度测控都可以实现双通道自动切换。另外双传感器自动切换功能还可以使备份传感器成为可能,有利于控制过程中若一只传感器出现故障而自动切换到第二只备份传感器,保证过程控制的连续性和安全性。[size=24px][color=#990000]2. 基本原理[/color][/size][size=14px][/size]  双传感器自动切换的基本原理是在控制器主输入接口的基础上引入了一个辅助输入接口,如图2-1所示为两只传感器切换的情况。以温度传感器为例,高切换点(2-3)是第一只传感器工作的高点,低切换点(1-2)是第二只传感器工作的低点,在这两点之间控制器进行平滑计算。当主输入PV1和辅助输入PV2的测量值连续采样低于下切换点,切换到低温传感器。当主输入PV1和辅助输入PV2的测量值连续采样高于上切换点,则切换到高温传感器。[align=center][color=#990000][img=双传感器自动切换原理,690,452]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107281552543835_2273_3384_3.png!w690x452.jpg[/img][/color][/align][size=14px][/size][align=center][color=#990000]图2-1 双传感器自动切换原理图[/color][/align][size=24px][color=#990000]3. 控制器参数设置[/color][/size][size=14px][/size]  双传感器高低量程的切换点数值判断以辅助输入测量值为判断依据,因此当系统采用双传感器测量和控制时,辅助输入接口做为高端量程传感器的信号输入源。[size=18px][color=#990000]3.1. 双传感器切换功能时,输入类型分辨率的设置[/color][/size][size=14px][/size]  (1)主输入接口输入类型为热电偶或热电阻时[size=14px][/size]  此时的温度单位“摄氏度”和“开尔文”设置为0.1度分辨率,温度单位“华氏度”为1度分辨率。即,主输入类型为热电偶或热电阻,温度单位为摄氏度或开尔文时,辅助输入通道小数点设置为1位小数。温度单位为华氏度时,小数点设置为0位小数。[size=14px][/size]  (2)主输入通道的输入类型为模拟信号时(真空度测控情况)[size=14px][/size]  根据小数点设定分辨率,两通道必须相同分辨率,即主输入和辅助输入保持相同小数位数,但相应的量程要根据传感器的实际量程进行设置。如对于10Torr和1000Torr两只真空计,其对应的模拟信号都是0~10V,但显示量程分别要设置为10和1000。[size=18px][color=#990000]3.2. 双传感器切换功能中的上下限切换点设置[/color][/size][size=14px][/size]  在使用双传感器切换功能时,还需在控制器上进行相应子菜单设置,分别设置上限切换点和下限切换点,具体内容详见控制器使用说明书。[size=24px][color=#990000]4. 双传感器自动切换功能的应用[/color][/size][size=14px][/size]  具有双传感器自动切换功能的PID过程控制器可应用于多种场合:[size=14px][/size]  (1)由于双传感器功能能够同时从两个独立的传感器接收输入信号,这就使得控制器可用于测量两传感器之间的差值和平均值,如温差、平均温度、真空压力差和真空压力平均值。[size=14px][/size]  (2)双传感器自动切换功能也可作为备份传感器切换功能使用,即在控制器上连接两只完全一样的传感器,当第一只传感器开路时,当前测量自动切换到第二只传感器测量值进行控制,由此对测量和控制起到保护和保险作用。[size=14px][/size]  (3)由于上海依阳公司的VPC2021-2系列PID过程控制器具有双通道同时测控能力,而每一通道都配备了辅助输入端口,这样就可以同时连接4只传感器。这种4只传感器的接入能力,能带来非常多的组态形式,如同时进行两路不同变量(如温度和真空度)的测量和控制,其中2只传感器同时测控温度和真空度,其他2只传感器用来同时监测其他两个测量点处的测量值变化情况。[size=14px][/size]  (4)在高真空工艺过程中,最常见的是使用扩散泵,并将扩散泵放置在真空炉膛和机械泵(粗真空)之间,而扩散泵和机械泵之间的区域称为前级室。机械泵将前级室气压降低到扩散泵的最大吸入压力以下,扩散泵才能开始正常运行。在典型的单室真空系统中,一般会配备三个真空计:在主真空室(或炉膛)中将安装两个真空计,一个用于低真空(皮拉尼真空计10-3 mbar),另一个用于高真空(有源倒磁控管AIM)仪表10-8mbar。而另一个皮拉真空计被视为单独的输入用来监控前级室气压。在实际应用中需要两个主真空室上的真空计进行自动切换,同时外加一个真空计监测前级室气压和一个温度传感器进行腔室温度测控。两种类型的真空计(每种都需要24V直流电源)提供2~10V直流对数输出,涵盖不同的真空范围。在实际控制过程中,两通道控制器将前级室与主真空室隔离并打开前级泵,当前级室达到设定的真空度时,控制器将改变其联锁装置,使扩散泵能够将炉子抽真空。同样,当炉子达到设定的真空度时,两通道控制器将控制执行设定的温度曲线,同时继续监测是否保持必要的真空度。[align=center]=======================================================================[/align][align=center][img=,690,349]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107281553360737_7536_3384_3.jpg!w690x349.jpg[/img][/align][size=14px][/size]

  • 高低温试验箱的除霜功能介绍只为进步

    高低温试验箱的除霜功能介绍只为进步

    [b] 高低温试验箱[/b]在试验产品检测过程中产生结霜情况,这样对测试会产生一定影响,所以高低温试验箱具备试验时除霜功能。今天以高低温试验箱的除霜功能及设备是怎样除霜做个介绍:[align=center][img=,348,348]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/04/202104221614526369_530_1037_3.jpg!w348x348.jpg[/img][/align]  高低温试验箱主要是通过压缩机制冷进行除霜,将空气中水分凝结成冰晶,霜主要是在预冷区内储能组件上面。  高低温试验箱主要是通过箱体内气流的相互转换进行交换热量。箱体内空气是与箱体外的空气隔绝、封闭的。由于箱体是封闭的,那么箱体内的水分是定量的,那么从理论角度上来说,不可能凭空增加一些水分去形成霜体,那么这些额外的水分又是从哪里形成的呢?  在进行测试时候,用户打开高低温试验箱的箱体门,箱体空气与外界形成空气交换,空气中的水分就会进入箱体。所以使用高低温试验箱在进行产品试验的时候,注意不得随意打开箱体的门,打开的话不仅会增加霜体,也会产生试验的数据的不确定性。

  • 美调查显示7种罐装食品发现双酚A 雀巢两产品上榜

    外媒今晨报道,美国乳腺癌基金会日前在新产品抽查中发现,在用于感恩节餐桌上的7种罐装食品发现双酚A.其中包括金宝汤清炖冬菇汤和绿巨人绿豆等。 研究发现,人体长时间吸进双酚A有害于肝功能及肾功能,特别严重的是它会降低血液中血红素的含量。此外,双酚A也是PC和环氧树脂的重要单体。PC塑料质地透明、耐摔,广泛应用于许多消费品,比如水杯、婴儿餐具、体育器械、医疗器械、光盘和家用电器。环氧树脂常用于一些食品和饮料罐的内涂层。 美国加州政府曾有研究证明18个月之前的婴儿可能会通过塑料罐装婴儿食品或婴儿塑料瓶过量摄入这种有雌性激素作用的化学品,而且鱼类或其它野生动物也有可能因为环境中的遗弃双酚A制品受到伤害。 目前中国婴儿奶瓶含有双酚A已有过不少报道,但是要全面禁止还需等待一段时间。 抽查的含有双酚A的食品 金宝汤清炖冬菇汤 金宝汤土耳其肉汁 康乃馨蒸馏奶(雀巢公司生产) 地扪甜玉米羹(糊状) 绿巨人绿豆(通用磨坊公司生产) Libby's南瓜酱(雀巢公司生产) 大洋牌火鸡酱(蔓越莓酱)

  • 双酶切连接反应之全攻略

    前一阵子一直在做双酶切质粒重组,失败了 很多次,不过很快改善了 实验方法,用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会,结合丁香园战友的宝贵经验,谈一下质粒重组的一些个人经验。1. 回收PCR产物 在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI、HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后,在各个酶的两边加上保护碱基,其原则可参照:http://img.dxy.cn/upload/2006/08/13/31219184.pdf。双酶切时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够。应用大体系,如100微升。纯化问题:纯化PCR产物割胶还是柱式,我推荐柱式,因为割胶手法不准,很容易割下大块的胶,影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物,既然如此,酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以,PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。我用的是TAKARA的纯化柱试剂盒。酶量的问题:以TAKARA的为例,其对1单位酶的定义如下:在50 μl 反应液中,30℃温度下反应1小时,将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。 而该酶浓度约为15单位/微升,在除外酶降解的 因素外,该酶可分解15 μg的DNA,而一般从1-4 ml菌液提出的 DNA约为3 μg,而PCR纯化后的产物(50体系)约为3 μg,所以即便全部加进去,只要纯化的 质量好,酶切完全切得动。2. 酶切、回收后的PCR产物与载体的连接摩尔比的计算,很多人凭经验也可以。但对于初学者从头认真计算则 非常有必要。回收的载体片段:回收的PCR产物片段=1:10 ,一般取前者0.03 pmol,后者取0.3 pmol。pmol为单位的DNA转换为为μg单位的DNA:(X pmoles×长度bp×650)/ 1,000,000 (注:长度bp×650是该双链DNA的分子量)所得数值即为μg,也可以直接用这个公式套.1 pmol 1000 bp DNA=0.66 μg,如载体是5380 bp,则0.03 pmol为0.03×5.38×0.66=0.106524 μg。测DNA浓度可以在专用机子上测,注意OD值,一般约1.8-2.0,另外,如果嫌麻烦,也可用MARKER进行估测,如MARKER2000,5微升的 MARKER每个条带约50 ng。连接反应:TAKARA的 连接酶上的 说明写的过夜,而其对连接酶单位的定义为:在20 μl的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时,有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。而它的浓度为350 U/μl ,所以完全够用。连接酶容易失活,注意低温操作,最好在冰上。时间3个小时足已。3. 转化a. 全量(10 μl)加入至100 μl JM109感受态细胞中,冰中放置30分钟。b. 42℃加热45秒钟后,再在冰中放置1分钟。c. 加入890 μl AMP阴性培养基,37℃振荡培养60分钟。取100 μl铺板。也可离心后余100 μl。几个非常重要的问题1. 做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解,为保险起见,一般连接3小时,16度。2. 对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来.我的方法是培基高温消毒后放在烤箱里,烤箱一般温度为55-60度,然后做的时候拿出来,这样好掌握温度。铺板前后注意用吹风机吹干。3. 对照的设立:为验证双酶切是否成功,可做如下对照:A 酶切反应时加各单酶分别切,两管,用同一种BUFFER,跑胶,看单切的两管是否成线性,如两管均成线性可初步判断双酶切成功。做转化时也要进行对照。设4个:A. 即拿双酶切的质粒产物也进行连接反应,这个对照可进一步看双酶切是否成功,如果长出克隆,说明很有可能只进行了单酶切,如没长出克隆,则证明双酶切成功,当然要保证感受态,培养基、连接酶都'正常'的情况下。B. 酶切过的未进行连接反应的双酶切产物,进行转化,这一步可以证明是否有残留的未被任何酶切的原始质粒。C. 设原始质粒为对照,意为检测整个操作过程中是否有误。D.AMP阴性板上用同一批感受态细胞铺板20微升足够,检测感受态状况。4. 所有的试剂切记低温保存 一步一个脚印,不要偷懒,图省事最后却更费事,注意设立对照。经PCR鉴定,克隆90%-100%的阳性率,所以在后面的 挑克隆中,我只挑选4个就足够了。然后双酶切鉴定,测序。

  • 【转】双酶切连接反应之全攻略

    前一阵子一直在做双酶切质粒重组,失败了 很多次,不过很快改善了 实验方法,用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会,结合战友的宝贵经验,谈一下质粒重组的一些个人经验。1、回收PCR产物:在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后,在各个酶的两边加上保护碱基双酶切时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够。应用大体系,如100微升。纯化问题:纯化PCR产物割胶还是柱式,我推荐柱式,因为割胶手法不准,很容易割下大块的胶,影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物,既然如此,酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以,PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。我用的是TAKARA的纯化柱试剂盒酶量的问题:以TAKARA的为例,其对1单位酶的定义如下:在50 μl 反应液中,30℃温度下反应1小时,将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。 而该酶浓度约为15单位/微升,在除外酶降解的 因素外,该酶可分解15μg的DNA,而一般从1-4ml菌液提出的 DNA约为3μg,而PCR纯化后的产物(50体系)约为3μg,所以即便全部加进去,只要纯化的 质量好,酶切完全切得动。2、酶切、回收后的PCR产物与载体的连接摩尔比的计算,很多人凭经验也可以。但对于初学者从头认真计算则 非常有必要。回收的载体片段:回收的PCR产物片段=1:10 ,一般取前者0.03pmol,后者取0.3pmol。pmol为单位的DNA转换为为µg单位的DNA:(X pmoles×长度bp×650)/ 1,000,000 (注:长度bp×650是该双链DNA的分子量)所得数值即为µg,也可以直接用这个公式套.1pmol 1000bp DNA=0.66μg,如载体是5380bp,则0.03pmol为0.03×5.38×0.66=0.106524µg。测DNA浓度可以在专用机子上测,注意OD值,一般约1.8-2.0.另外,如果嫌麻烦,也可用MARKER进行估测,如MARKER2000,5微升的 MARKER每个条带约50ng。连接反应:TAKARA的 连接酶上的 说明写的过夜,而其对连接酶单位的定义为:在20 μl的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时,有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。而它的浓度为350 U/μl ,所以完全够用。连接酶容易失活,注意低温操作,最好在冰上。时间3个小时足已。3、转化:a、全量(10 μl)加入至100 μl JM109感受态细胞中,冰中放置30分钟。 b、42℃加热45秒钟后,再在冰中放置1分钟。 c、加入890 μl AMP阴性培养基,37℃振荡培养60分钟。 取100μl铺板。也可离心后余100μl

  • 福美双农残检测

    小弟在用安捷伦6460C做 SN/T 0525-2012 这个方法 现在遇到这个问题 我把福美双标准物质配置成10ug/mL的标准溶液后,进行质谱全扫 之后提取241.2 这个母离子发现是啥都没有。。 小弟现在不知道该咋做了 在此向诸位大神请求做福美双的这个方法。 附件中是我做的全扫图

  • 水稻中福美双的检测

    请教高手,用液相做福美双的检测,我是用乙腈提取,过4g弗罗里硅土柱子,结果都没回收,有人做过吗!柱子应该没有问题,大家帮忙分析一下吧!!万分感谢

  • 化妆品知识-CC霜

    CC霜是随着BB霜的流行随之出现在市场上的遮瑕保养品。2012年面市,是BB霜的升级换代产品。CC.CREAM 是英文COLOR.CONTROL.CREAM或者Color Care Cream、Color Correcting Cream的缩写,中文名称:色彩调控全效修容霜,又称为“色彩调控霜”。 在防晒隔离粉底液的基础上添加了诸如美白、保湿、抗过敏等护肤精华成分,融合了保养美肤、修饰隔离于一体的功效。 提供皮肤保护及修护效果,并兼具视觉上调正肤色的特点。BB霜是兼有粉底和护肤功能的乳霜,CC霜是更兼具护肤功能的BB霜,它除了具备BB霜的功效如调节肤色、防晒、隔离、润肤、美白,更侧重于裸妆效果,因此许多男士化妆品也推出CC霜。BB霜出生于德国,发扬光大于韩国,但是公认的欧美大牌鲜有BB霜。但是,CC霜是许多欧美大牌如兰蔻、雅诗兰黛、夏奈尔、碧欧泉等都涉入的领域。从配方角度,BB霜多是硅油包水的体系,从目前市场产品看,CC霜的基质有水包油、油包水、凝胶等多种。

  • 多功能综合驱鸟器,利用雷达和声音“双探测”功能对在监测范围内活动的鸟类进行防御准备

    多功能综合驱鸟器,利用雷达和声音“双探测”功能对在监测范围内活动的鸟类进行防御准备

    [font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif] 树或者灌木丛是鸟儿最长见的栖息地[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif],[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]但是近些年随着智能电网[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]的[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]不断[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]发展,[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]高压铁塔[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]不断[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]地屹立在四地[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif],[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]这些铁塔对鸟类来[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]说是[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]理想[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]的“[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]家园[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]”。[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]从鸟[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]类的[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]身体结构来看[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif],[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]鸟类站在导[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]线[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]上[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]的[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]两只脚之间没有电压[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]存在,[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]也就不存在[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]电[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]流从它身上穿过[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif],[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]所以高压[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]电[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]拿鸟类没办法[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif],[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]这毫[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]无[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]疑问给[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]了[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]鸟类“胡作非[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]为[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]”的机会[/font][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]。[/font] [font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]大量鸟类会在电线铁塔或者再高压导线上聚集、安营扎寨。在这过程中,鸟儿们携带而来的大量树枝、布条等筑巢用品,可能会在其携带过程中掉落在线路铁塔上,线路铁塔被这些树枝、布条覆盖,在潮湿天气很容易使电网造成短路现象。[/font] [font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif]特力康双供电智能[/font][url=http://sztlk.com/product_detail-68.html][b]多功能综合驱鸟器TLKS-PUW-III[/b][/url][font='Microsoft YaHei', 微软雅黑, sans-serif],同时兼顾了两者的特点,特力康TLKS-PUW-III双供电智能驱鸟器对传统的驱鸟器进行了改良和升级,不同于单一的驱鸟功能。我司的双供电智能驱鸟器在不伤害鸟类的前提下,利用雷达和声音“双探测”功能对在监测范围内活动的鸟类进行防御准备。[/font][img=,690,385]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/11/202311061008300300_4537_6230095_3.png!w690x385.jpg[/img]-END-编者:余工

  • 纯镁双喷总是出现筛子孔,怎么回事。。。

    喷了几次了,总是出现筛子孔。孔经常先在样品边缘出现,然后才在中间出现,并且需要等待几十秒才能透光。。。这是怎么回事,求指点!还有就是束流用大的还是用小的?样品时变形态高纯镁(沿挤压方向压缩的纯镁挤压棒),圆片厚度50-60微米双喷液是5.3g氯化锂+11.16g高氯酸镁+100mL乙二醇丁醚+500mL甲醇双喷温度-55℃~-30℃(这个温度段的都试过),电压100v,电流50毫安左右

  • 【求助】:有人用气相做过福美双和硫醇吗?

    想请教一下有人用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]做过福美双和硫醇吗?福美双我查了一下物理性质,只有熔点,没有沸点.是不是沸点很高,或者不稳定啊?而且我看蔬菜,水果中检测福美双的国标是用分光光度法,不知道是不是因为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]不能做.还有有高手做过硫醇吗?不知道会不会很臭啊?希望有高手能予以指教,非常感谢.

  • 【求助】福美双的检测

    大家有没有做过福美双的检测,我用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]MS走样,标液都可以走出来,但是经过前处理后,都没回收,我是用GPC净化的。前处理过程是样品乙腈提取,旋转蒸干,乙酸乙酯:环己烷复溶,GPC净化,旋转蒸发,丙酮定容上机。大家能帮忙分析是什么原因吗?祈求有相关经验不吝赐教。

  • 双三元液相色谱仪的功能及应用

    随着分析方法的发展及科学研究的不断深入,复杂体系分离已成为分析化学研究的热点和难点之一。双三元液相色谱仪将两个液相泵集于一体,结合独特的阀切换技术及流路连接设计,可以覆盖常规分析和复杂样品的二维分析等

  • 代森锰锌、福美双液质检测

    用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]在代森锰锌和福美双的标样中分别扫到了159和140的前提离子,配制的是单标,响应不错,不清楚是不是目标物,求助!

  • 【分享】多功能生物催化剂--卤醇脱卤酶的研究进展

    多功能生物催化剂―――卤醇脱卤酶的研究进展 郑楷 汤丽霞 (电子科技大学生命科学与技术学院,四川成都610054) 摘要:光学纯的环氧化物及β-取代醇是一类高价值中间体,在手性药物及精细化工合成领域具有十分重要的应 用前景。卤醇脱卤酶是一类通过分子内亲核取代机制催化邻卤醇转化为环氧化物的脱卤酶,可以高效高选择地 催化环氧化物和邻卤醇之间的转化,因而可以用来合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等化合物。本文着重 介绍了卤醇脱卤酶的催化机理及其应用研究进展,并对研究的发展方向提出了一些设想。 关键词:卤醇脱卤酶 生物催化 亲核试剂 光学纯环氧化物与β-取代醇 中图分类号:Q814?9 文献标识码:A文章编号:0438-1157(2008)12-2971-07 1 卤醇脱卤酶研究概述 有机卤化合物已成为当今重要环境污染物之一,主要是由于工业排废以及人工合成卤化物在化 工合成以及农业上的广泛应用造成的。在自然界 中,大部分异生质卤化物自降解能力很差,同时许多化合物被疑是致癌或高诱变物质。因此,应用微 生物降解有机卤化物已引起人们广泛的关注。从 1968年Castro等[1]首次发现以2,3-二溴丙醇作为 唯一碳源而生存的黄杆菌(Flavobateriumsp?) 菌株至今,人们相继筛选到多种可以降解邻卤醇的 微生物[2-8]。其中包括从淡水沉淀物中分离的放射 形土壤杆菌(Agrobacteriumradiobacter)菌株 AD1和节杆菌(Arthrobactersp?)菌株AD2以及 从土壤中获得的棒状杆菌(Corynebacteriumsp?) 菌株N-1074等。它们降解有机卤化物的途径虽然 存在明显差异,但是卤醇脱卤酶作为关键酶之一, 催化碳卤键的断裂存在于所有的代谢途径中。 卤醇脱卤酶也叫卤醇-卤化氢裂解酶,通过分 子内亲核取代机制催化邻卤醇转化为环氧化物和卤 化氢,是微生物降解此类化合物的关键酶之一。大 部分已知的卤醇脱卤酶都已经被克隆并在大肠杆菌 中进行重组表达,并根据其序列同源性分为 HheA、HheB、HheC3类。相关的研究表明,卤 醇脱卤酶与依赖NAD(P)H的短链脱氢酶/还原 酶家族(SDR)具有一定的序列相似性,同时蛋白 质三级结构的研究进一步揭示卤醇脱卤酶与SDR 家族成员有一定的进化相关性[9]。SDR是一类依 赖于NAD(H)或NADP(H)并在功能上具有 多样性的一组酶类,主要催化醇、糖类、类固醇和 一些异生质的氧化还原反应[10-11]。由于辅酶结合 位点在卤醇脱卤酶中被卤离子结合位点取代,因而 卤醇脱卤酶是一类不需要辅酶参与的脱卤酶。同 SDR家族一样,在卤醇脱卤酶中严格保守的丝氨 酸、酪氨酸和精氨酸在催化过程中起着关键作用。 其催化机制(图1)为:保守的丝氨酸通过与底物 羟基氧原子之间形成氢键,稳定了底物的结合 精 氨酸可用以降低酪氨酸的pKa值 酪氨酸从底物 的羟基中夺取一个质子,然后以底物上的氧原子作 为亲核试剂,进攻邻位卤素取代的碳原子,进而释 放卤离子,形成环氧化物[9,12]。 卤醇脱卤酶备受关注的另一个原因是其在生物 催化领域的应用,可以用来合成具有光学纯的高价 值中间体。这些化合物在手性药物、手性农药以及 各类手性合成的合成领域中具有传统化学合成法所 无法比拟的优越性。其中光学纯的环氧化物以及用 来合成该类化合物的前体邻卤醇在有机合成中具有 特别重要的应用价值。因为环氧化物环具有非常活 泼的化学特性,易与亲核试剂发生反应生成一类重要的手性合成单元―――不对称醇类。因此,多种合 成光学纯环氧化物的生物学方法已被广泛研究,其 中包括人们熟知的脂肪酶、环氧化物水解酶等。卤 醇脱卤酶催化邻卤醇生成环氧化物将成为高效合成 光学纯的环氧化物的主要方法之一。本文将重点介 绍卤醇脱卤酶在催化合成环氧化物、短链β-取代 醇以及叔醇类化合物方面的研究进展。

  • 【资料搜集】霜霉威检测方法

    霜霉威检测方法1.分析目标化合物霜霉威、霜霉威盐酸盐2.仪器设备带碱热离子检测器或高灵敏度氮磷检测器的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]—质谱仪。3.试剂使用附录2所列试剂。4.标准品霜霉威:含霜霉威99%以上,熔点为45℃~55℃。5.试验溶液的制备谷类:将样品粉碎,通过420μm的标准网筛后,称取其20.0g,加入30mL 1mol/L盐酸,放置2小时。水果和蔬菜:准确称取约1 kg样品,必要时定量加入适量水,搅碎混合均匀后,称取相当于20.0g样品的量。加入80 mL丙酮:水(7:3)混合溶液(谷类为50mL),搅拌5分钟后,用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中。取出滤纸上的残留物,加入50mL丙酮:水(7:3)混合溶液,搅拌5分钟后,按上述同样操作,合并滤液于减压浓缩器中,40℃以下浓缩至约40mL。将其移入预先注入50mL乙醚和5g氯化钠的200mL分液漏斗中,振摇混合1分钟后,静置,弃去乙醚层。水层中加入50mL乙醚,按上述同样操作,水层移入200mL分液漏斗中。水层中加入5g无水碳酸钠(谷类为8g)和50mL乙醚,用振荡器激烈振荡5分钟后,静置,乙醚层移入200mL三角瓶中。水层中加入50mL乙醚,按上述同样操作,重复2次,合并乙醚层于上述三角瓶中。加入适量无水硫酸钠,不时振摇、混合,放置15分钟后,滤入磨口减压浓缩器中。再用10ml乙醚洗涤三角瓶,以此洗液洗涤滤纸上的残留物,重复操作两次。合并两洗液于减压浓缩器中,40℃以下浓缩至约1mL,室温下通空气进一步干燥。残留物中加入乙酸乙酯溶解,准确至1mL,此为试验溶液。6.操作方法a 定性试验按下列操作条件进行试验,试验结果应与标准品的一致。操作条件柱:内径0.25mm、长30m的石英毛细管,涂布0.25μm厚[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]用14%氰丙基苯基—甲基硅酮,老化。柱温:在60℃保持1分钟,此后每分钟升温10℃。到达160℃后保持2分钟,再每分钟升温4℃。到达180℃后每分钟升温20℃,到达260℃后保持5分钟。进样器温度:250℃进样方式:不分流检测器温度:250℃气体流量:以氦气作载气。调节流速使霜霉威约14分钟30秒流出。调节空气和氢气的流量至适当条件。b 定量试验根据与a 定性试验相同试验条件所得的试验结果,峰高法或峰面积法定量。c 确证试验按照与a 定性试验相同的试验条件,用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]—质谱仪测定,试验结果应与标准品的一致。此外,必要时用峰高法或峰面积法进行定量。7.定量限0.01 mg/kg8.注意事项霜霉威的分析值包括霜霉威和霜霉威盐酸盐。9.参考文献无

  • 霜霉威盐酸盐的分析检测

    [color=#444444]采用液相色谱仪检测,使用氨水或0.01%的庚烷磺酸钠作为流动相都检测不到霜霉威的峰,请问哪位大神检测过霜霉威?我是做分析检测的,急切寻找方法[/color]

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