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石蜡切片

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石蜡切片相关的论坛

  • 石蜡切片与冷冻切片的区别

    1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组 织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片, 而那些稳定的抗原,能经受住石蜡切片的的考验,一般来讲也可以用冰冻切片来做,总得来讲,对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原,用石蜡切片检 测的染色效果要比冰冻切片好一些。2、从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确,而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构,并造成抗原的弥散,从而定位不准确。3、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好,而石蜡切片在组织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。4、从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单,而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程,比较繁琐。5、总之,石蜡切片对标本的长期保存较合适,且组织细胞形态结构保持好;而冰冻切片适合对新鲜组织的制片,然后立即固定、染色效果较好,且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰

  • 【分享】石蜡切片技术实验

    【分享】石蜡切片技术实验

    一、取材与固定1 准备工作:工具、药品、计划等2 动物的麻醉:氯仿麻醉3 解剖取材4 材料分割:保持样品的完整性与代表性,考虑切片方向,实心组织大小5*5*2mm,空心细长组织10mm长。5 固定:布温氏固定液固定24h。6 漂洗:70%乙醇换洗3次,每次20~60min。7 保存:70%乙醇0~4 ℃ 。二、脱水、渗透与包埋1 脱水:85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇,每步30min~60min2透明:1/2乙醇+1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯,每步30min~60min3 渗透: 1/2二甲苯+ ½ 石蜡→石蜡→石蜡,每步20min~60min,温度62℃4 包埋:将材料放入盛有石蜡的纸盒中,摆好位置(要考虑下一步的修快与切片方向),在水中冷却5~10min.三、切片1 修块 用单面刀片在玻璃板上修快使达到以下要求:(1)一个蜡块含一个材料,蜡块呈正方形或长方形,材料位于蜡块正中央。(2)材料边缘与蜡块边缘平行,各面要平直,材料边缘与蜡块边缘的距离约3mm。2 固着 将修好块的蜡块用烧热的解剖刀固着在样品台上。3 切片 按以下顺序进行(1)将样品台固定在切片机样品臂上,使切面竖直;(2)调切片厚度5~10um;(3)将切片刀用纱布蘸少许二甲苯擦净后装到切片机上,调刀角15~20,将刀固定好;(4)调刀距 使样品与刀口尽可能靠近;(5)切片顺时针摇动切片机速度40-60r/min;(6)将切好的蜡带光面向下用毛笔放到台纸上[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912141513_189942_1769204_3.jpg[/img] 贴片(1)清洗载波片;(2)加粘片剂,要求薄、匀;(3)放切片,光面向下;(4)加水于切片下面;(5)展片将载波片放于50℃的温台上至切片完全展平;(6)烤干吸掉多余水,继续放于温台上至水完全干燥;5 贴标签 临时标签,用铅笔写明组号、姓名。

  • 石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别

    一、石蜡切片 把修好的蜡块装在旋转切片机上,即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利,切片厚度通常为5~7um,也可根据染色需要切成不同厚度,一般不旋转式切片机超过10um。切好的蜡带,放人40℃左右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕,切片厚度均一平整。切片如有上述问题,在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。为能得到平整无皱褶的组织切片。可采用两次展片,即先将组织切片漂浮在30%的乙醇溶液中进行第一次展片,然后将切片捞起,再次放人45~50℃的水浴中进行第二次展片,乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。为防止脱片,载玻片要涂黏片剂。对HE染色的切片,可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油,但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应,故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。二、冰冻切片 冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法,其最突出的优点是能够较[font='Songti SC Regu

  • 石蜡切片干燥器优点及相关参数

    [url=http://www.f-lab.cn/slide-dryers/slide-dryer.html][b]石蜡切片干燥器[/b][/url]专业为超薄[b]石蜡切片烘干[/b]而设计的[b]石蜡切片烘干仪[/b],一次可同时烘干44个切片,提供室温到99摄氏度的温度范围,温度采用LED显示技术。切片干燥器采用氧化发黑表面工艺提供超高的对比度,并自动记忆先前设定的参数。切片干燥器优点1) 叠瓦式设计:切片干燥器采用叠瓦式设计,纵向具有四个斜角的切片加热板提高干燥效率的同时还充分利用了空间,一次性可干燥多个切片,也消除了操作人员接触加热板而烫伤的风险。2)微处理器温控加热系统切片干燥器内置微处理,自动管理设定的切片加热干燥温度点,有效干燥了玻璃切片的水分。 [img=石蜡切片干燥器]http://www.f-lab.cn/Upload/embedding-systems-slide-dryer.jpg[/img]切片干燥器技术参数干燥温度范围:室温-99摄氏度达到设定温度所需时间:10-15分钟工作环境温度:0-40摄氏度用电要求:220V/50Hz功耗:300W尺寸:415 x 310 x 120 mm干燥面积:: 295 x 270 mm净重: 6.2 kg石蜡切片干燥器:[url]http://www.f-lab.cn/slide-dryers/slide-dryer.html[/url]

  • 石蜡切片制作过程有哪些步骤

    石蜡切片操作步骤:1、取材2、固定3、脱水:30%--50%---70%(每步60分钟)---85%---95%--100%---100%(每步30钟)。4、透明:转入1/2二甲苯+1/2无水酒精混合液20ml透明1h,纯二甲苯20ml透明1h,再用纯二甲苯20ml透明40min,并回收各液。5、浸蜡:(1)将材料分别放入25%、50%、75%的石蜡-二甲苯溶液中,每级30分钟。该过程在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行;(2)将材料放入溶解的纯蜡中,时间为30分钟,该过程再重复两次。在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行。6、包埋(1)将溶解好的石蜡在加入预先折好的纸船中,石蜡溶解后应过滤后使用,以免含杂质影响切片;(2)材料放入纸船,并摆好在蜡中的位置,如果包埋的组织块较多,应进行编号;(3)将纸船放置在冷水上加速冷却过程。7、切片(1)修整:用刀片修成方形或长方形蜡块;(2)以少许热蜡液,将蜡块底部粘附于小木块上,以少许石蜡融化在蜡块边缘,加强粘附的强度;(3)木块粘附于切片机上,调整切片机,使蜡块切面与切片刀刃平行;(4)切成连续的蜡带,切片刀的锐利度、蜡块的硬度都会影响切片质量,可用热水或冷水适当改变石蜡的硬度,也可在冰箱中放置一段时间;(5)分割蜡带,分开的蜡片放在45℃温水上,使蜡片展开。8、粘片与烤片(1)可用粘片剂防止蜡片滑脱,但粘附剂通常容易被染色而使切片背景有颜色,影响观察,实验表明,载玻片洗的足够干净,一般不会滑片;(2)用载玻片捞取展开后的蜡片,调整蜡片的位置使位于载玻片中央,自然干燥。9、脱蜡与醇化(1)将切片放入纯二甲苯溶液中10分钟,使石蜡完全溶解,共2次;(2)溶去石蜡的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中,每级10分钟;(3)再将切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中进行醇化,每级10分钟。10、染色(1)将切片放入番红染液中30分钟,番红染色后,将切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分级洗脱,每级10分钟;(2)洗脱后的切片放入固绿染液中染色1分钟;11、脱水、透明与封片(1)染色后的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分级洗脱,每级10分钟;(2)洗脱后的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明,每级10分钟,出现浑浊表示脱水不彻底,需重来;(3)滴1-2滴中性树胶,将洁净的盖玻片倾斜放下,封片,镜检,选择好的贴上标签,性切片制作完成。

  • 【求助】石蜡切片问题

    请问各位大侠,用石蜡切片-光镜观察法可以看到什么东西啊?我想观察冷冻-解冻后的鱼体的细胞结构的变化可以吗?最好用什么方法呢?非常感谢啊!

  • 【原创】【第三届原创大赛】植物官石蜡切片及显微摄影学习经历

    【原创】【第三届原创大赛】植物官石蜡切片及显微摄影学习经历

    植物的一切生命活动,都是以细胞作为基本结构和功能单位进行的。因此,对植物的组织、器官的研究就显得非常重要。石蜡切片法是动物、植物和病理组织切片制作上最重要、最常用的一种方法。由此方法制作的切片在显微镜下观察清晰,能显示其细致结构,反映其真实性,而且可以长期保存。除某些材料确实经不住石蜡法中各种药剂的处理或加温而不能应用外,一般的材料都可以采用石蜡切片法来制成装片在显微镜下观看或长期保存。本法的优点是可以极薄的切片,并可制作大批或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块还可以长期保存。番红-固绿染色法可以区分开结构中的木质化和纤维化部分。  显微摄影是一项重要的显微技术,在生物科学的研究中,从再现显微镜中物体影像的各种方法中比较,显微摄影是最好的方法。基建的结果除文字的描述外,显微照相能客观而生动的记录下生物体的细微结构或形态,它常与生物绘图技术配合,起到相辅相成的作用。本实验采用盆中冲洗的方法。整个冲洗过程需在暗室中进行。若为涂塑像纸则直接晾干,普通像纸要进行上光。  1 材料  1.1 材料  某植株(完整植株,长有新鲜叶片)、乐凯全色黑白胶卷(ASA100)、涂塑相纸、普通像纸  1.2 试剂  1.2.1 浓度为35%、70%、85%、95%、100%的酒精  1.2.2 二甲苯、二甲苯酒精等量混合液  1.2.3 包埋剂:纯石蜡配制  1.2.4 染色剂:浓度为2% 番红水溶液(用水配制)、0.1% 固绿(由95%酒精配制而成)  1.2.5 固定液FAA(福尔马林 、冰醋酸、70%酒精以1:1:6比例配制)  1.2.6 封固剂:加拿大树胶  1.2.7 D-72显影液: 50℃温水 750ml,米吐尔 3.1g,无水亚硫酸钠 45g,无水碳酸钠67.5g,对苯二酚 12g,溴化钾 1.9g,然后加冷水至1000ml。  1.2.8 定影液F-1和F-5。  F-5定影液:50℃温水600ml,结晶硫代硫酸钠240g,无水亚硫酸钠15g,28% 乙酸 48ml,硼酸 7.5g硫酸铝钾 15g,然后加冷水至1000ml。  1.2.9 停影液: 水  1.3 工具及仪器  双面刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、染色缸、镊子、旋转切片机、金属温台、毛笔、OlympusBH2型显微照相系统、放大仪、印相仪、上光仪等。  2 石蜡装片的制作  2.1 取材  从植株上取新鲜、健康、有代表性的叶片,用锋利的刀片切取幼茎、叶柄、叶片,并用水清洗干净。将幼茎与叶柄切成约5毫米长的小段,将叶片从主脉处切取5mm× 8mm的长方形,并保证切主脉两侧的叶片相等且主脉与短边平行,底部能立于包埋盒内。  2.2 固定  将已经配制好的FAA固定液倒入一个小试剂瓶中,再把已经切好的材料浸入其中,在瓶上贴好标签,待用。  2.3 浸洗  用50%酒精或70% 酒精浸洗一、二次就可以进行脱水。  2.4 脱水  包埋前的第一个重要步骤为脱水。本实验以酒精为脱水剂,采用逐渐提高酒精浓度来减少材料中水分的含量。可以以此梯度进行操作,70% 酒精、85%酒精 、95%酒精、无水酒精I、无水酒精II,在每级酒精中浸2~24小时,使脱水充分。  2.5 透明  酒精不能作为石蜡的溶剂,因此必须经过透明剂透明。二甲苯可以溶解石蜡,有利石蜡透入,同时还有脱去酒精的功效。但二甲苯易使组织收缩变脆,故浸留时间不宜过长。同时若脱水不干净,就会引起不良后果。为了避免组织收缩,在纯酒精或丙酮脱水以后,并不直接移入二甲笨中,其间必须经过几个梯度,逐渐置换,在每一级中停留的时间为1—2小时,二甲苯易挥发,在切片透明之后,从染色缸中取出封藏,手段要敏捷,不宜久置。在纯酒精中脱水后需要经过的几种溶液配比如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011151102_259410_1856701_3.jpg  2.6 浸蜡  石蜡能溶于透明剂二甲苯中。把已透明的材料投入熔化的石蜡中,即可取代透明剂,而使组织中的一切空隙为石蜡透入而填满,即为浸蜡。为了使石蜡更好地浸透到组织中去,浸蜡一般需要经过四个不同配比的溶液,在前三杯溶液中停留半小时左右,在温箱中或在包埋箱中进行。然后取出在经第四种溶液。保温箱的温度要适宜,太高,会使材料收缩,太低,石蜡会冻结而不能透入组织。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011151102_259411_1856701_3.jpg  2.7 包埋  包埋是将浸过蜡的组织块包埋于石蜡中以利于切片。将已熔化的石蜡倒入做好的包埋盒内,然后用酒精灯加热的镊子将材料从石蜡液中取出,迅速放入纸盒里的石蜡中。放置的方向要按照切片的方向而定,最好把切面向下,并且放正。若石蜡中有气泡,也可用热针刺入石蜡中,将气泡烫去。材料块放置妥当后,以左右手分持纸盒两耳,半浸于冷水中,并用口吹气使蜡表面凝结,蜡凝后,除去纸盒即成蜡块。  包埋过程中应注意的事,包埋蜡的温度不宜过高,否则会将组织烫坏。  2.8 切片  首先要修块,将已凝固的蜡块取出,用刀片把它切至何时大小,修整平滑。然后将蜡块底部稍融化贴在一小木块上,再用融化的蜡粘在蜡块的四周使蜡块牢固帖在木块上。将带石蜡的木块装在旋转式切片机上,将切片刀装在夹刀部位上,调整切片刀的角度,进行切片。将切下的条状蜡带,用毛笔取下放于一张纸上,挑取较好的一小条蜡带做切片。  2.9 粘片和展片  以手指涂一薄层Mayer甘油蛋白于干净载玻片上,再用滴管滴一滴蒸馏水于载玻片上,然后用镊子挑取一段切片蜡带置于载玻片的水面上(注意:要以石蜡切片背面比较光滑的一面放在水上,才易展平)。然后将载玻片放在金属温台上加热,使切片蜡带自由展平。注意,载玻片上的水要多放一点,加热温度不要过高,否则石蜡会熔化,组织脱落。自然风干。  2.10 番红-固绿染色  2.10.1 溶蜡  将切片放入二甲苯溶液中,5~10分钟,彻底除去切片上的石蜡。如果室温过低,需延长脱蜡的时间,脱蜡要彻底,否则染色困难。  2.10.3 复水  将切片经纯酒精和二甲苯的1:1的溶液,100%、95%、70%、35%酒精溶液各3分钟。逐步过渡,防止材料收缩。  2.10.4 蒸馏水浸洗  因为染色液番红是用蒸馏水配置的,应将切片放入蒸馏水中3分钟,以便彻底复水,然后进行染色。  2.10.5 初染  将切片放入2%的番红水溶液中染色10~20分钟,使红色染透,否则材料容易褪色。如果番红染色过度,应返回到酒精中进行轻微脱色,再进行以下操作。  2.10.6 流水冲洗  用流水冲去多余染液,以冲洗去切片上的番红余色。而且对一些不易被固绿着色的幼嫩组织材料,其切片经水冲洗后吸水膨胀,染色剂易于渗入组织进行染色。  2.10.7 镜检  将载玻片放在显微镜的载物台上,进行镜检,染色效果良好,则可进入下一步操作。  2.10.8 脱水  将切片依次经过35%,70%的酒精各30秒。因为固绿是用95%酒精配置的,因此应脱去水分再进行固绿染色。  2.10.9 复染  用0.1%固绿染色5~10秒,时间不宜过长,否则绿色太深,将切片变为蓝绿色或深绿色,失去的双重染色的意义。  2.10.10 镜检  将切片放入95%的酒精过一下后,进行镜检。所染材料的木质化部分呈红色,纤维素部分呈绿色。  2.10.11 浸洗  用100%的酒精溶液浸洗3分钟,以洗去切片上固绿的余色,同时也使切片过度到纯酒精中。该步时间不宜过长,由于固绿在纯酒精中易褪色。  2.10.12 透明  将切片放入纯酒精和二甲苯的1:1的混合溶液中浸3分钟,使切片从酒精中逐步过渡到纯的二甲苯溶液中。然后将切片放入纯的二甲苯溶液中,浸5分钟,使切片完全过渡到二甲苯溶液中。至材料完全透明后应立即进行封片(为防止二甲苯使组织收缩)。  对于脱水不彻底的材料投入到二甲苯溶液中时会出现乳白色雾状,这表明该材料无法进行透明,应该退回到无水酒精和95%的酒精进行重新脱水。  2.11 封片  把切片从二甲苯溶液中取出,用纸擦去载玻片上的多余液体。滴一滴加拿大树胶于组织上,用镊子夹取一片盖玻片,与载玻片成一倾斜的角度,使盖玻片的一个边缘与加拿大树胶完全接触,然后轻轻地覆盖下,防止产生气泡。树胶的量要适中,使盖玻片与载玻片之间没有空隙。  3 显微照相  3.1 安装好显微照相系统  将小型显微照相连接器连接到OlympusBH2型显微镜上。  3.2装胶片  打开相机后盖,装入35毫米胶片,盖好后盖。注意把胶片头部放入收片轴的片槽里时,不要使它超出片槽的另一端。  3.3 设置自动曝光器  根据胶片感光度(ASA)选择控制器上感光度标记,按下感光片类型标记按钮(35)。将胶片倒易律失效特性的修正数设置在中间档。  3.4 试拍  通过自动

  • 石蜡切片染色注意事项

    一、染色注意事项 1.染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法,不同的染色液染色后的处理是不一样的。 2.染色过程中所用的时间要根据染色时的室内温度、染液的新鲜程度及实验室的实际情况等灵活掌握。在室温高、切片、染色液又是新配制的,染色时间就要短,反之时间就长。 3.伊红有水溶的和醇溶的,如果用的是水溶的,应该在脱水前进行染色,如果是醇溶的,应使用与溶解伊红等浓度的酒精开始脱水。 4.在二甲苯脱蜡之前可以先在60℃烤箱内0.5~1小时,这样可以使切片粘附更牢固不易脱片,也有利于脱蜡。 5.二甲苯在HE染色中有脱蜡、透明的作用。二甲苯脱蜡的好坏主要取决于切片在二甲苯内放置的时间和脱蜡时的温度以及二甲苯的使用次数。染好的切片必须经过透明,有利于显微镜观察,同时并为封片起到了桥梁作用。 6.用梯度酒精脱水时,在低浓度酒精中时间不宜过长,到高浓度时逐步延长脱水时间。以免脱水不彻底,影响二甲苯透明的效果。 7.在酸性分化液内停留的时间不要过长,分化不可过度,避免使细胞核内该染上色的结构脱色。不需分化处理的苏木精染色时要注意掌握染色时间,以防止组织切片染色背景过深或细胞核、胞质染色不足。

  • 切片能看不

    原子力显微镜能看动物石蜡切片不,有什么特殊的要求吗

  • 【原创大赛】轮转式切片机的应用体会

    [align=center]轮转式切片机的应用体会[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安平中心:粟荣霞[/align]切片是病理切片制作过程中关键的步骤。一般病理切片包括轮转式切片机是在病理切片制作过程中很关键的仪器石蜡切片和冷冻切片,而石蜡切片常用的仪器是平推拉切片机和轮转式切片机,而相比于平推式切片机,轮转式切片机切片容易成卷,切片厚度不均匀。因此,就这些问题进行讨论,总结出轮转式切片机应用的一些体会。在石蜡切片之前,首先要进行充分的准备工作:1.将包埋好的是蜡块进行冷冻。2.调节室温小于20℃。3.开启摊片机和烤片机,将温度分别调至40℃和60℃。4.准备载玻片、镊子、毛笔等。冷冻时可将蜡块置于冷台1小时以上或者置于冰箱(2~8℃),置于冰箱时,切片过程中可将其转移到碎冰中。如果温度不够低,切片效果不好时,可放置到-20℃冰箱,时间不宜过长,放置蜡块冻裂。其次,准备工作做好之后,先进行修片,待修片全部结束。进行切片,切片时应迅速,手避免接触石蜡组织包埋面,以防止蜡块温度过高,影响切片效果。此外,切片时,还会卷片,这时用小头毛笔轻轻按压住成卷的切片,进行切片,同时转动毛笔,展开所切新片,那么之后的切片就不会再卷。切完片要进行摊片,先用冷水进行摊片10 min~30 min,再用40℃温水摊片,时间不宜过长。切片的厚度,应根据不同的组织进行相应的调节。仪器的使用过程也是一个不断学习的过程,只有用心去总结,才能提高工作效率与质量。

  • 6 种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响

    6 种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。由于其制作过程较石蜡切片快捷、简便,而多应用于手术中的快速病理诊断。但在冰冻切片制过程中影响制片的质量因素较多,从而影响手术中的快速病理诊断。因此,快速制作一张高质量的冰冻切片对于确保病理诊断极其重要。其中固定是冰冻切片制作中关键步骤之一,对切片的制片质量有着重要的影响。本文通过6种不同固定液短时固定对冰冻切片制片染色的比较,探讨不同固定液对冰冻切片制片效果的影响。1资料与方法1.1材料选自病理科手术切除的新鲜组织标本40例,包括有乳腺、甲状腺、胃、子宫、卵巢等组织。1.2固定液6种固定液分别为:10%福尔马林;95%酒精;AF固定液;丙酮∶甲醇∶乙醚酒精(乙醚∶酒精1∶1)。1.3方法1.3.1取材及切片取材大小为1.5cm×1.5cm,厚2~3mm的新[/font

  • 显微镜基本技术--切片的制作【2】

    四、水洗 1.目的: 洗去渗入组织中的固定液,终止固定。以免影响对组织内结构的观察、分析和研究。 2.原则和方法: 固定后的组织块的冲洗,一般情况下是置水龙头下以自来水流水冲洗,这样可以使组织中的固定液随时溢出,洗得更干净彻底,有些还需要进行特殊的洗涤。 (1)各种以水配制的固定液如甲醛,都必须用流水冲洗,大块组织一般冲洗24小时,小块组织一般冲洗2—10小时。 (2)固定液为多聚甲醛时,用于免疫组织化学等特殊染色的应将组织投入PB缓冲液中,每60分钟更新洗涤液一次,累计6小时。 (3)固定液为酒精或是酒精混合液,一般不需用水冲洗,其组织块的洗涤应用与固定液浓度相等垢酒精换洗或者直接进行脱水的程序。 (4)用锇酸或含有锇酸的固定液固定的组织,必须用流水彻底冲洗干净。 (5)经含有苦味酸的固定液固定的组织块,无论其固定液是水溶性还是酒精溶性,都应充分冲洗,水溶性固定液固定的组织块一般须冲洗12小时,再进入70%的酒精溶液洗涤,酒精溶性固定液固定的组织块直接进入70%的酒精溶液洗涤,该溶液可以脱掉苦味酸的黄色,但最好从50%酒精开始洗涤。 (6)冲洗好的组织可存放在75%酒精内 五、脱水包埋 (一)脱水 1.脱水的目的 组织内的水不能和支持剂混合,所以必须把组织中的水分彻底脱除。脱水有利于组织的透明和浸蜡,有利于组织的永久保存。 2.脱水剂 (1)乙醇:可作固定剂,又可脱水剂,但乙醇与水混合时有较剧烈的物理反应。高浓度的酒精对组织有强烈收缩及脆化的缺点,因此用乙醇脱水不能直接入纯酒精中脱水,而必须经过由高到低的一系列不同浓度的酒精,逐渐取代组织中水分,以保证组织脱水彻底,并避免组织过度收缩和硬化。 (2)丙酮:脱水能力比酒精强,但对组织的收缩更大,在组织学制片中较少使用,多用于病理快速切片,或用于某些组化水解酶的固定。 (3)正丁醇:是较好的脱水兼透明剂,可与酒精及石蜡混合,用于脱水是可先经过各种不同浓度的正丁醇和乙醇混合液,再入正丁醇,进行石蜡包埋时,可先用正丁醇和石蜡等量混合液,然后浸入纯石蜡包埋,正丁醇用于脱水的优点是很少引起组织收缩和脆硬,可替代二甲苯,是很好的脱水剂,但由于价格较贵,不常使用。 3.步骤 (1)乙醇脱水过程 50%乙醇 6~8小时 75%乙醇 6~8小时 85%乙醇 3~5小时 95%乙醇 1~2小时 95%乙醇 1~2小时 100%乙醇Ⅰ 1小时 100%乙醇Ⅱ 1小时 (2)丙酮脱水 如果是丙酮固定的组织,则不必再经过乙醇,可以用新丙酮更换一次,便直接浸入二甲苯或苯中透明。其他水溶液固定的组织,均按上述乙醇脱水方法脱水,亦可由100%乙醇中移入丙酮继续脱水2~4小时再入二甲苯透明,透明后浸蜡包埋。 (3)正丁醇脱水 组织用正丁醇脱水前,先经50%乙醇脱水,然后移入正丁醇和乙醇混合液进行脱水。 50%乙醇 6~12小时 50%乙醇+20%正丁醇+30%蒸馏水 5~8小时 50%乙醇+35%正丁醇+15%蒸馏水 4~6小时 45%乙醇+45%正丁醇+10%蒸馏水 3~5小时 25%乙醇+75%正丁醇 2~3小时 25%乙醇+75%正丁醇 1~2小时 15%乙醇+85%正丁醇 1~2小时 5%乙醇+95%正丁醇 1~2小时 100%正丁醇Ⅰ 1小时 100%正丁醇Ⅱ 1小时 4.注意事项: (1)脱水的过程应逐步地而不应骤然地进行,不能操之过急。 (2)脱水的时间应根据组织块的大小和组织的类型而定。 (3)组织块在高浓度,特别是无水乙醇内不能放置的时间太长。无水乙醇吸水能力太强,容易造成组织块的过度硬化,使得切片理组织易碎裂。 (4)在脱水的过程中可以将组织块停留在70%~80%的酒精中。 (5)每次更换新的脱水剂时(组织块从低浓度到高浓度),都要把组织块放在吸水纸上吸干,装组织块的容器也要控干水分,以免将水及低浓度脱水剂带入高浓度脱水剂中,影响脱水效果。 (6)脱水剂的先择要根据实验的要求及实验室的条件 (二)透明 1.透明的目的 置换组织内的脱水剂,为下一步的浸蜡起到桥梁作用; 使组织呈现不同程度的透明状态,有利于光线的透过。 2.透明剂 (1)二甲苯:是现在应用最广的一种透明剂,价格较便宜,不能和水混合,遇水则变成乳白色浑浊,因此必完全脱水后才能使用;易溶于酒精又能溶解石蜡,透明力强;其最大的缺点是容易使组织收缩变硬变脆,所以组织不能在其停留过久,透明时间视组织块的大小、性质而定;有的组织如肌肉、肌腱、软骨、骨、皮肤、头皮及眼球等,不宜用二甲苯透明,因组织过硬不易切片;长时间接触,对粘膜有刺激作用。 (2)苯:性质与二甲苯相似,对组织收缩也较小,组织也不易变脆,但透明较慢,组织在其内可以滞留12~24小时,但毒性较大。 (3)香柏油:用为透明剂,效果很好,有高度透明作用,能与醇和二甲苯混合,香柏油对组织的硬化及收缩程度比任何其他透明剂都要小,但透明的速度较慢,3mm以下厚度的组织块需12小时以上。香柏油与石蜡不易融合,即香柏油不易被石蜡取代,因此经香柏油透明以后,可经过二甲苯短时间媒浸,再进行石蜡包埋。肌肉、皮肤、血管、膀胱、垂体及肾上腺等用香柏油效果较好。 3.二甲苯的步骤:两次透明 第一次透明约40分钟 第二次时间不一定,要视透明效果而定 4.注意事项 (1)时间不宜过长,否则组织会变脆; (2)组织块脱水必彻底。 (三)浸蜡、包埋(石蜡包埋法) 1.浸蜡 (1)浸蜡的目的 置换组织中的透明剂,为包埋做准备。 (2)浸蜡的步骤 在60度恒温蜡箱中放置3个蜡杯,分别编号1(52℃~54℃)、2(52℃~54℃,或54℃~56℃)、3(56℃~58℃),其中分别盛软蜡、软蜡、硬蜡,取透明好的组织块放入软蜡中各1小时,迅速取出放入硬蜡,同样放置1小时。如果时间来及包埋,可以将已经完成浸蜡的组织块取出放在温箱外,第二天继续。 (3)注意事项 温箱中的温度必须严格控制在60℃的范围,不能超过60℃;浸蜡时间不宜过长。浸蜡温度过高或时间过长使组织收缩过度收缩和脆变。 2.包埋 (1)步骤 ①准备包埋蜡:一般应用硬蜡(56~58℃或60~62℃)为好,所用的石蜡要求透明无杂质,新的石蜡要反复熔凝,并有一定的粘韧性,可以加一些蜂蜡。蜡的熔点应与组织的硬度相适应。包埋用过的石蜡可以反复使用。 ②准备包埋框:可以用金属的,也可以用硬纸摺叠。 ③点燃酒精灯,准备好无齿尖镊子,需作标记应先写好标签。 ④在金属框中倒入硬蜡,然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中,置好方向。可室温下冷却。 ⑤包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结,若表面已凝结形成一层固体状,即可放入冷水中,加速其凝固。 ⑥待蜡块完全凝固以后,便可拆卸包埋框架, 或拆开纸盒,取出蜡块。 (2)注意事项 ①包埋时夹取组织的镊子,用酒精灯随时烧热,以免石蜡凝结后粘附在镊子上,造成蜡块凝固不均匀。 ②包埋操作要迅速,组织从浸蜡杯中取出置入包埋框中的时间应尽量缩短。 ③包埋后的蜡块应呈均质半透明状,如果出现白色混浊状,一般出现在组织周围或组织的底部,应考虑这样几个方面的问题:a. 脱水不彻底。b.包埋蜡温度低了,组织进行包埋时,包埋框中的蜡已成凝结状。c.组织内还残留有较多的透明剂,d.石蜡不纯。 ④包埋箱中的温度必须保持恒定。 ⑤如包埋得不好,可将蜡块溶化,重新浸蜡和包埋。 ⑥较小的组织可在脱水透明时开始用伊红染色 石蜡切片基本步骤之四 切片

  • 【原创大赛】Leica RM2245半自动轮转式切片刀使用心得

    [align=center]Leica RM2245半自动轮转式切片刀使用心得[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安评中心:胡楠[/align]Leica RM2245是带独立控制面板的半自动轮转式切片机,用来制作不同硬度的样品薄切片,以供医疗机构实验室作组织学、病理学石蜡切片。这台仪器,主要有仪器控制面板、独立控制面板、手轮锁定装置、平滑旋转的手轮、手轮制动杆、刀架上的护刀器、可调节方向的样品夹固定器、侧向移动锁杆、带侧向移动的E型刀架、切片刀和刀架底座。由于该仪器使用时,需要装置上锋利的刀片,因此,该经过专业的培训再进行操作。在仪器使用过程中,有很多需要注意的事项。以下是我在使用过程中总结出来的需要注意的要点。首先,在仪器使用前,打开电源开关,要注意LOCK框中的黄色LED灯光是否亮起。若亮起,则表明手轮锁定。此时,可以正常的安装刀片。安装刀片时,转动刀架上的制动杆,翻下护刀器,从刀架的一侧将刀片插入,用镊子小心将刀片推入刀架合适的位置上,锁定刀架制动杆。其次,在使用过程中,应该确认操作模式。按TRIM和SECT按钮切换操作模式。如果SECT亮起,则为切片模式;如果TRIM亮起,则为修片模式。用控制面板上的箭头来调节刀架位置。应将刀架调试在合适的位置,这样有利于顺利切片。转动手轮时,应匀速转动,这样切片薄厚均匀,较少有刀痕。如果切片过程中需暂停,切记锁定手轮,注意安全。最后在完成切片或者修片操作后,要对切片机进行维护。长时间不使用仪器时,应将刀片取出。将切片废物槽内的废弃切片丢入垃圾桶,并将一起上粘附的蜡进行清理。对于该仪器,我是初次接触,在以后的工作学习中,会有更多收获。

  • 求购动物组织切片

    最近实验需求一些动物组织切片,比如有癌变的动物组织切片,不限动物种类或器官种类,有切片服务的公司也可以给提供一下,不胜感激!

  • 关于冷冻切片机

    冷冻切片机 仪器价格: 12万元 购置日期:2001年 仪器所在地:中医肝病研究所实验室 联 系 人: 顾宏图 联系电话: 51322444 收费标准: 暂未定 开放时间: 8:00~17:00 仪器简介: 徕卡CM1850是应用于组织学和临床组织病理学的一种快速低温恒冷切片机,它是将切片机置于冷冻室以外的低温恒冷切片机。CM1850的特色之一是具有宽敞的冷冻室,快速冷冻室可同时存放多达10个样品,并和一个可持续冷却的吸热器相连,以保证样品托上的样品快速冷却。切片刀温度可冷却到-35℃,样本可以快速冷冻到-40℃。切片机有狭槽盖防护,避免残渣进入机器内部。增强绝热性能(真空面板)及温度控制系统,减低压缩机运作费用及提高耐用性,比传统绝热系统使用寿命长,可以保证冷冻箱温度,例如:在35℃室温保持-35℃。同时可以做到电脑诊断维护。高质量无焊接缝的不锈钢冷冻室表面光滑利于清洁和防止污染。切片机配备双速马达驱动粗进,控制键布置在左方靠手,符合人工学原理。具备自动及人工除霜功能。独特设计的玻璃反卷板可保证连续的切片。切片机具备方便的调节功能,可快速及精确对样本切片定位。切片机推进系统运作平稳、流畅,切片厚度为1~60μm,切片精度可达1μm,最大样品直径55mm。 应用范围 可提供各种冰冻切片服务。 目前应用于: 1. 为快速病理诊断提供冰冻切片。已成为癌症诊断的重要工具。 2. 细胞学:显示脂肪、脂类以及特种组织成份。 3. 免疫细胞化学、免疫组织化学和分子生物学技术等研究工作。 4. 神经生物学研究。 5. 常规组织胚胎学研究。 6. 皮肤病理学研究。 7. 动脉血管外科学研究。 同类仪器情况 : 中药研究所: SPOCTRA MXA190 2002年 倪跃元 解剖实验室: LION 1998年 余安胜 张建华

  • 【讨论】石蜡是否含有短链型氯化石蜡?

    关于SONY SS-00259标准内容中,短链型氯化石蜡是禁用物质,特别是作为阻燃剂用途的石蜡,请见我司标准附表及SONY标准中文版第27页,但石蜡主要用作脱模剂使用(涂在环型产品灌环氧树脂的模具上,方便取下模具),是否可以使用?是否真正含有短链型氯化石蜡?请帮忙确认回复!谢谢! 短链型氯化石蜡 CP 禁止含有 用作含有附件产品的外框(外壳)、印刷电路板

  • 怎么确定石蜡的熔点?

    怎么确定石蜡的熔点?

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_646666_2692547_3.jpg该图是石蜡的DSC谱图,升温速率为10℃/min,按理说应该算第一个峰处为该石蜡的熔点,但该石蜡的实际熔点接近于第二个峰处的温度,这个怎么办?我知道石蜡的熔点不是定值,但是这也差太多了吧!

  • 组织学切片机分类及应用

    切片机分为很多种类,包括药材类切片机,器材类切片机,食品类切片机,组织切片类切片机等。按其结构又可分为摇动式切片机、轮转式切片机、滑动式切片机、推动式(雪橇式)切片机等。组织切片机是一种对人体组织及动植物组织作病理切片分析的设备。组织切片机一般分为:轮转式切片机和冷冻切片机。轮转式切片机:是借转动手摇轮进行切片动作。蜡块台镶装于可在沟槽内上下运动的金属夹座中,借微动螺旋向前推进切断平整的切片。有的转轮式切片机的机头上装有三只旋钮和一个紧固旋钮能使其向各个方向偏转并紧固,便于调整蜡块的切面。切片刀的切制角度可以调整(切片刀倾斜)。由于这种切片机上使用的是一种重而大的切片刀,故除切制硬组织时一般不发生颤动。切片厚度借旋钮可以1-30微米之间调[font='Songti S

  • 石蜡组份分析

    市售的石蜡有不同牌号,是不是牌号不同,石蜡的组份也不同?

  • 【原创】纸样品切片

    我在做表层含纸纤维比较多的纸样品时,不管用液氮冷冻切片,还是用切片机切都有很多纸纤维溢出,请问那位高手做过类似的样品,指教一下,谢谢!

  • 【求助】请教:把样品混在石蜡里扫样品问题?

    急求液体石蜡法的操作要点今天用石蜡糊法做了个样,先用涂有液体石蜡的溴化钾片扫的背景,然后把样品混在石蜡里扫样品,可是扫出来的样品图谱里还有石蜡的峰,请问各位前辈这是怎么回事呀,哪位前辈知道石蜡糊法的具体操作,石蜡糊法应该注意些什么呢?

  • 【原创】工业石蜡泛滥使用

    工业石蜡一般从石油当中直接提取,在工业提取过程当中会含有多环芳烃和稠环芳烃,这两种物质是非常强的致癌物。此外,人体摄入石蜡后,还会造成腹泻等肠胃疾病。 目前部分火锅底料、油料、方便粉丝和一些劣质桶装方便面(桶壁)中含有此类物质,甚至一些方便筷和纸杯中也能发现工业石蜡的存在。那么,食品中工业石蜡的含量是如何检测的,提供检测方法者有积分奖励

  • 求组织切片机

    实验室要做皮革横截面微观感官,需要进行横截面的切片,求一便宜好用的组织切片机要求:1.切出来的试样够平整,放大50倍的情况下不能出现凹凸不平。 2.价格10000以内,好保养,好使用求各位大神推荐下!谢谢!

  • GC 丁基橡胶中的石蜡

    最近公司进了几批丁基橡胶的胶塞,发现含有石蜡(请第三方检测过),打算用GC定性测定石蜡;打算用KB-1的柱子,网上只有很少的资料,我找到的只有食品里的石蜡检测;想知道各位谁做过对于石蜡的测定,急求!!

  • 【求助】求助关于粉末超薄切片的问题

    这次参加催化会议,有位老师提到了对分子筛类材料做TEM观察的时候把样品要先包埋后超薄切片,这样观察时候可以排除活性组分负载于分子筛外表面的情况。我有个问题想向各位版友咨询一下,一般包埋-切片的步骤是否麻烦,需要什么样的原料与设备。包埋时候是不是把我的无机粉末撒到环氧树脂里就成了?树脂固化后只是用切片就可以直接去观察了么?不需要其他减薄手段么?各位对于超薄切片机有没有什么厂家和型号推荐一下啊!多谢了!

  • 显微镜基本技术--切片的制作

    石蜡切片基本步骤之一 器材和试剂 一、准备工作(一) (一)洗涤实验所需器皿:(玻璃器皿的清洗) 1、 用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷 2、 将器皿在自来水下冲洗干净 3、 将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干 注:一般情况下,经以上步骤后,用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用,如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时,再经自来水彻底冲洗,再用蒸馏水过洗1~3次 烘干备用。 (二)配制: 硫酸洗液的配制 (三)载玻片与盖玻片的处理 1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后,放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时 2. 流水冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍 3. 95%~100%酒精浸泡24小时,用绸布擦干备用 注:在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时,要一片片地投入,使其不致重叠。 二、准备工作(二)常用液体的配制 (一)缓冲溶液: 1.磷酸盐缓冲液 A液:0.1mol/L磷酸二氢钠 B液:0.1mol/L磷酸氢二钠 A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(3:7≈PH7.0) 2.枸椽酸缓冲溶液 A液:0.1mol/L枸椽酸 B液:0.1mol/L枸椽酸钠 A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(6.2:42.8≈PH6.2) (二)固定剂: 1.甲醛:10%甲醛 福尔马林 100ml 蒸馏水 900ml 注:实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。 2.10%中性福尔马林钙固定液 甲醛液 10ml 蒸馏水 90ml 加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后,放置24小时取上清液使用。 3.4%多聚甲醛: 8%多聚甲醛 多聚甲醛 8g 蒸馏水 100ml 加温至60℃左右,不时搅拌,成为乳白色溶液。滴加1N NaOH,并不停搅动至液体清明。 1N NaOH lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量 氧化钠(NaOH );分子量=40.005,当量价=1 1N Na0H的配制方法为:m=40.005/1=40.005g。取40.005gNaOH溶解于1L蒸馏水中 4%多聚甲醛 8%多聚甲醛 50ml 0.1M磷酸盐缓冲液 50ml PH7.2 先取50 ml 8%多聚甲醛,用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2 4.Bouin液: 苦味酸饱和水溶液 75ml 36%~40%福尔马林液 25ml 冰醋酸 5m1 5.改良Bouin氏固定液 苦味酸饱和水溶液 45ml 95%酒精 45ml 36%~40%福尔马林液 5ml 冰醋酸 5m1 6.Carnoy液: 冰醋酸 10 m1 氯仿 30 m1 无水乙醇 60 m1 以上三者临用前混合,预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。

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