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生物代谢产物

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生物代谢产物相关的论坛

  • 微生物已经产生大量的代谢产物，这样的肉就不能吃

    不能吃变质的肉，肉变质有以下几个表现：颜色变深。新鲜的肉表面有光泽，颜色均匀。新鲜猪肉呈红色或淡红色，脂肪洁白;牛羊肉颜色鲜红，脂肪大多颜色发黄;禽肉皮肤为淡黄色或白色，肉色白里泛红。随着贮藏时间的延长，由于肌红蛋白被氧化，肉色会逐渐变成红褐色。颜色越深，可食性越低。而当肉表面变成灰色或灰绿色，甚至出现白色或黑色斑点时，说明微生物已经产生大量的代谢产物，这样的肉就不能吃。表面发黏。新鲜的肉外表微干或湿润，切面稍潮湿，用手摸有油质感，但不发黏;而肉变质以后，由于微生物大量滋生，会产生黏性代谢产物，造成肉表面发黏，甚至出现拉丝。肉类表面发黏是腐败开始的标志。弹性变差。新鲜的肉质地紧密且富有弹性，用手指按压凹陷后会立即复原。贮藏越久，肉里面的蛋白质、脂肪会逐渐被酶分解，肌纤维被破坏，所以肉会失去原有的弹性，手指压后的凹陷不仅不能完全复原，甚至会留有痕迹。有异味。新鲜肉具有正常的肉味，而变质的肉由于蛋白质、脂肪、碳水化合物被微生物分解，会产生各种胺类、吲哚、酸类、酮类等物质，因而有明显的腐臭味。此外，新鲜的肉煮熟后肉汤透明，汤表面聚集大量油滴。而变质肉中的蛋白质被微生物分解，会产生很多低级代谢产物散落在汤里，造成肉汤浑浊，并且汤面几乎无油滴。

  • 离子阱质谱定性鉴识代谢产物有何设定？

    离子阱质谱进行代谢产物的定性鉴识，在已经优化了色谱条件的情况下，质谱设定有没有什么特别的规定？问1：口服给药较高的剂量大鼠，收集尿液进行定性鉴识，采用固相萃取浓缩10倍，才可以检测到，浓缩5倍，2倍，检测的代谢产物较少，因此想知道在仪器设定上有什么特别的要求没有？就是质谱参数这一块，怎么能够提高检测灵敏度？问2：3级质谱扫描的结果往往都不好，很多的3级质谱都没有结果，也就是现在除了浓度特别高的以外，大多数的都是只有2级质谱的结果。请问是不是参数设定上有问题？因为实验对象是代谢产物，所以浓度低，但是也有在文献中看到别人尿液稀释后进样也有测定出结果的，因此想问问，代谢产物鉴识，离子阱质谱有什么特别的设定要求？

  • 【极限体验】Ultimate XB-C18柱系列体验之结合型代谢产物的鉴定

    【极限体验】Ultimate XB-C18柱系列体验之结合型代谢产物的鉴定

    前言 代谢产物的鉴定在药物代谢研究过程中意义重大，如何准确地鉴定代谢产物的结构一直是广大药物代谢研究工作者致力攻克的难题。代谢产物的鉴定之所以难主要有以下几点原因：1.代谢产物在生物样品(血浆、尿液、胆汁、粪便等)中浓度极低。2.代谢产物容易受生物样品中内源性物质的干扰。3.代谢产物的不稳定性。4.仪器的灵敏度不够，等等。目前鉴定代谢产物的方式多为通过HPLC与质谱检测器进行联用推测代谢产物的结构，但该方法存在缺陷，如对同分异构体束手无策等。本实验前期通过专业的分离技术，得到某代谢产物M1，为重要的Ⅱ相代谢产物，该代谢产物因为量少(6mg)无法完全通过核磁鉴定，本文通过核磁给出的结构信息结合酶水解巧妙地鉴定了该代谢产物的结构，涉及保密，只给出有差别的部分结构信息。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112280311_341823_2160661_3.jpg1.试剂 色谱甲醇(Fisher)，去离子水(Eyela Still Ace, SA-2100 E1, 日本）,三氟乙酸(TFA,Dima)，β葡萄糖苷酶(Sigma)。2.液相色谱条件 Shimadzu HPLC system, 由LC-10ATVP 泵, SPD-10AVP 紫外检测器, 以及CTO-10ASVP 柱温箱组成, 工作站为浙江大学N3000工作站。 色谱柱：Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm) 流动相：A通道：甲醇，B通道：水(0.05% TFA) 流 速：A通道0.500mL/min；B通道0.500mL/min 柱 温：30℃ 检测波长：275nm 进样量：20μL3.样品准备 对照品溶液的配置：取各纯品0.5mg，加入1mL50%甲醇水溶液，涡旋1mL，微孔滤膜过滤。水解过程：取代谢产物M1 0.5mg，溶于1mL水中，加入适量葡萄糖水解酶，37℃孵育2h，加入2mL的乙酸乙酯萃取，萃取2次，合并萃取液，45℃减压浓缩至干，用1mL50%甲醇水溶液溶解，进样分析。 4.结果与讨论http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112280325_341830_2160661_3.jpg图1.代谢产物M1水解前的分析图谱(tR=8.951min)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112280315_341825_2160661_3.jpg图2.代谢产物M1水解后的分析图谱(tR=8.958min为剩余的未水解的M1，tR=14.720min为水解产物)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112280325_341831_2160661_3.jpg图3.已知化合物C1的分析图谱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112280325_341832_2160661_3.jpg图4.已知化合物C2的分析图谱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112280326_341833_2160661_3.jpg图5.水解产物与C1和C2合并进样分析图谱1.代谢产物M1只有6mg，理论上核磁是可以鉴定的，但基于一些原因，核磁谱图结果不理想，只能通过别的方法鉴定。但是从图1来看，代谢产物M1的纯度是很高的，如果用面积归一化法来计算的话，其含量至少在95%以上，但作者在此给大家透露点信息，代谢产物不同于植物中的化学成分，即使在色谱图上显示单一的色谱峰，但绝对纯度不一定很高，往往有未知的内源性成分如影子一样伴随着它，作者推测这可能是核磁图谱测试不理想的原因之一。2.机缘巧合的是，代谢产物M1两种水解产物均作为已知化合物被作者分离得到，并准确鉴定，因此剩余的实验就显得顺理成章。3.化合物C1和C2在结构上很相似，仅仅是葡萄糖醛酸基的位置不同，因此其表现在色谱行为上的差别也很小，如图5所示，二者没有达到基线分离。4.从各分析图谱可以看出，相同化合物的保留时间重现性非常高，且峰形之正太有目共睹，体现了Ultimate XB-C18柱的优越性能，保证了代谢产物结果鉴定的准确性。具体参数如：理论塔板数、分离度、对称因子等在此不一一列举。5.在整个分析过程中系统压力为19.4MPa左右，波动不超过0.2，换算为PSI也仅为2800左右，在流动相比例为50%的情况下，如此低的压力给测试者营造了“轻松的”实验氛围，避免了系统压力高产生的漏液报警的烦恼。6.一句话小结：本实验运用酶水解结合HPLC分析，成功鉴定了代谢产物M1的结构。

  • 【极限体验】Ultimate XB C18柱分析某黄酮成分胆汁中的代谢产物

    【极限体验】Ultimate XB C18柱分析某黄酮成分胆汁中的代谢产物

    前言 药物代谢(drug metabolism)是研究药物在生物体内的吸收、分布、生物转化和排泄等过程的特点和规律的一门科学，即药物分子被机体吸收后，在机体作用下发生的化学结构转化。也是药物研发产业链中的重要环节，贯穿药物研究过程的始终。排泄是药物代谢研究过程中的一个重要环节，本实验涉及的是某黄酮成分在大鼠体内排泄的研究。1.Chemical and reagents 甲醇(色谱纯，天津大茂)，水(哇哈哈纯净水，杭州)，三氟乙酸(TFA, Dikma, USA)，其它试剂均为分析纯。2.animals Wista大鼠(220-250g，SPF级，由本校动物实验中心提供)3.HPLC analysis of two important metabolites Waters 高效液相色谱系统，由Waters Model 600 controller液相色谱，Millennium 32 工作站，Model Delta 600 泵，以及Waters 996 DAD检测器组成。 色谱柱：Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm) 流动相：A通道：甲醇，B通道：水(0.05%TFA) 梯度洗脱，具体流程未透露 流 速：1mL/min 柱 温：30℃ 检测波长：190-400nm扫描 进样量：20μL3.Sample preparation 大鼠灌胃给予该成分，剂量为30mg/200g，15min后用20%的乌拉坦溶液腹腔注射麻醉，行胆汁插管手术，缝合伤口，用规格为15mL的离心管收集12h内的胆汁，收集的胆汁过ODS，水洗脱，之后用甲醇洗脱，甲醇洗脱部分定溶到某体积，取一定体积过0.45μm微孔滤膜，HPLC分析，相同条件下与尿液中的代谢产物进行对照，确定该成分经大鼠灌胃后胆汁中排泄的代谢产物。4.Results and discussionhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110042336_321120_2160661_3.jpgFig. 1. The HPLC chromatogram of blank bile.http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110042337_321121_2160661_3.jpgFig. 2. The HPLC chromatogram of bile sample(12h).http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110042338_321122_2160661_3.jpgFig. 3. The HPLC chromatogram of urine sample.讨论1. 首先要说明的是此部分实验是之前实验的续集，所以之前的实验请参考我以前发的体验贴，图3给出的是尿液中代谢产物的色谱图，从图中我们可以很明确地看到8个代谢产物的色谱峰，这8个色谱峰已经通过各种柱色谱手段分离得到，且结构已经用1D NMR和2D NMR以及MS等谱学手段进行了鉴定。讨论2. 图1和图2 分别为胆汁空白和样品色谱图，从该结果可知，有5种主要的代谢产物（M1 M2 M5 M6和M7）以及少量的M8经胆汁排泄，主要是通过保留时间，和紫外吸收进行了指认。讨论3. 此外我们还发现，尿液中大量存在的代谢产物M3不经胆汁排泄。讨论4. 通过对该成分在大鼠尿液中的代谢和胆汁排泄研究，我们可以得出这样的结果，尿液的内源性成分多为极性较大成分，多集中在保留时间靠前的范围，而胆汁中的内源性物质极性较小，如图2中50min左右的成分。讨论5.该实验尚未发表，因此代谢产物的结构不便透露，待发表之后，具体的结果会和广大息友进行交流。讨论6.最后也是最重要的，Ultimate XB C18柱对该类代谢产物表现了良好的保留能力和分离性能，代谢产物因为其结构中会结合亲水基团，如硫酸基，葡萄糖醛酸基等使其极性增加，易于从体内排出，因此这些成分往往表现了比较差的色谱行为，如强酸性导致的拖尾现象，因此需要在流动相中加入酸或者其它试剂进行调节，本实验流动相均为甲醇：水（含0.05%TFA），在此条件下，这些代谢产物在Ultimate XB C18柱上表现了良好的色谱行为。

  • 【第三届原创参赛】代谢产物分离与纯化的心得体会(大鼠篇)

    【第三届原创参赛】代谢产物分离与纯化的心得体会(大鼠篇)

    维权声明：本文为qweaxi原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。代谢产物的分离与纯化心得体会(大鼠篇)代谢的概念 什么叫代谢，在这就不解释啦，大家应该都知道，我们主要做两个方面：大鼠与人。这个原创里面，讨论的是大鼠代谢产物的分离与纯化。大鼠的介绍 大鼠我们用过的有两种（SPF级）SD大鼠和wistar大鼠，这两只大鼠的区别： SD大鼠: 生长快，繁育性能好，大多用于安全性试验及营养与生长发育有关的研究。 该品系对性激素敏感，对呼吸道疾病有较强的抵抗力。广泛用于药理、毒理、药效及GLP实验。 Wistar大鼠 ：其被毛呈白色，特征为头部较宽、耳朵较长、尾的长度小于身长。Wistar大鼠性情温顺，性周期稳定，早熟多产，平均每窝产自10只左右，生长发育快，乳腺癌发病率很低，对传染病抵抗力强。 个人觉得SD大鼠挺暴躁，很容易咬人的，Wistar大鼠比较好哦，乖乖鼠。大鼠喂养 这个问题很关键，饲料控制不好，大鼠会超重地：一天喂2次，水应该给足，要不然会发生惨案的，垫料要3天换一次，要不然，会被熏坏的，消毒必须的，要不然出血热就会光顾你们实验室的，记得去年就在我们这发生啦，封楼2周呢，当时，我们爽坏啦，有时间玩嘛。给药前准备 第一:大鼠禁食12小时，期间给以0.4%的盐水，为什么禁食呢，让其胃里的饲料代谢完，要不然对以后的分离工作有影响。 第二：给药剂量药换算好，要不然没有根据，发文章会有问题的。大鼠给药 这个比较讲究，我们常用的方法是灌胃和腹腔给药，腹腔给药简单，扎一针就好啦，灌胃挺有讲究的，本人不才，学了半天才会，牺牲在我手中的大鼠有5只多，那叫一个惨啊。警告大家，在不会灌胃的情况下，千万别自以为是，要不然。。。尿液富集 有些时候怕样品不稳定，发生变化（代谢产物在尿液中不稳定，个人经验），有三招来防止： 第一招:在收集瓶中加无水乙醇，个人觉得效果很好。 第二招：在收集瓶里加酸，PH＝4为好。 第三招；冰水浴，个人觉得那个麻烦，但也有点效果。尿液储存 放在冰箱里，冷藏，不易降解滴。尿液处理 不同的样品处理不一样，我们这做过黄酮，生物碱之类的化合物，据我了解，这个生物碱不好做，黄酮挺好做的，我个人觉得有两种方法:大孔和萃取。大孔树脂，我们这用得D1O1比较多，本人首次用AB-8，觉得不错的，我热衷于大孔。萃取:必须加酸调节PH3，要不然萃不出来的。样品的分离与纯化 呵呵，代谢产物分离。个人经验：进行大孔柱色谱以后，可以考虑进行凝胶柱色谱，内源性物质一般可以除去，非常好的方法，我记得凝胶下来我就分到一个纯的，哈哈，真爽啊。 由于代谢物极性过大，最好不用硅胶来分，要不然，死吸附严重，样品就这样浪费啦，呵呵，用ODS分离，最好。 最后补充，做代谢的，最好有液质联用，盲分容易浪费时间，浪费经费。下图为凝胶分的纯品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009252351_246992_2160429_3.jpg

  • 乙烯菌核利、咪鲜胺及其代谢产物的检测

    乙烯菌核利判定，2763中规定，残留物：乙烯菌核利及其所有含3,5-二氯苯胺部分的代谢产物之和，以乙烯菌核利表示。请问各位，其所有含3,5-二氯苯胺部分的代谢产物是什么？有单独标样吗？检测时得同时走乙烯菌核利和其所有含3,5-二氯苯胺部分的代谢产物两种标样吗？谢谢

  • 关于中药体内代谢产物的质谱解析

    抱歉这两天打扰大家了。问题:我知道质谱的解析，需要把你的化合物导入到仪器的软件里，然后进行比对。药物代谢，进入体内的不仅有药物原型，还有代谢产物。我的问题是，这些代谢产物，是不是要自己事先预测好，计算好，然后一并导入软件？（例如：小檗碱是C20H18NO4，它的葡糖醛酸化结构是C26H26NO10，我不紧要把小檗碱导入，还要把后者分子式一并导入数据库，对吗？）还有一个问题：质谱的解析，主要是数字的加减和核对，这样理解对吗？

  • 拟除虫菊酯代谢产物

    拟除虫菊酯的代谢产物3PBA(3-苯氧基苯甲酸)能用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]检测吗，可用的检测方法有哪些

  • 【分享】关于莱克多巴胺代谢产物的一些探讨！

    早在2000年，TCC莱克多巴胺特异性专利单克隆抗体发明人Shelver(就职美国农业部)、Smith和Berry在农业食品化学（J. Agric. Food Chem.2000, 48.4020-4026）共同发表了文章《Production and Characterization of a Monoclonal Antibody against the β-Adrenergic Agonist Ractopamine》文中指出：1.莱克多巴胺葡萄糖苷酸是莱克多巴胺在不同物种体内的主要代谢物，而莱克多巴胺葡萄糖苷酸又分为莱克多巴胺葡萄糖苷酸A、莱克多巴胺葡萄糖苷酸B和莱克多巴胺葡萄糖苷酸C，其中：莱克多巴胺葡萄糖苷酸A由66%和33%（1S,3R）和(1R,3S) 莱克多巴胺组成；莱克多巴胺葡萄糖苷酸B由等量（1R,3R）和(1S,3S)两种莱克多巴胺异构体组成；莱克多巴胺葡萄糖苷酸C由27%（1R,3R）莱克多巴胺，19%（1S,3R）莱克多巴胺，28%(1S,3S) 莱克多巴胺，26%(1R,3S) 莱克多巴胺四种异构体混合组成2. TCC莱克多巴胺检测试剂盒的交叉反应率如下 TCC莱克多巴胺特异性专利单克隆抗体对三种主要莱克多巴胺代谢物： （1R,3R）-Ractopamine的交叉反应率为489% （1S,3R）-Ractopamine的交叉反应率为134% ractopamine glucuronide C的交叉反应率为384% 任何一种检测不出以上三种代谢产物的试剂盒会带来检测结果的假阴性！ 大家如果需要这篇英文文献，可以发邮件给我 wyynjau@126.com 联系人 南京农水生物技术有限公司 吴园圆 13951613290 [em17]

  • 【极限体验】Ultimate C18柱分析黄酮代谢产物在大鼠尿液中的降解(6月份)

    【极限体验】Ultimate C18柱分析黄酮代谢产物在大鼠尿液中的降解(6月份)

    前言 药物代谢(drug metabolism)是研究药物在生物体内的吸收、分布、生物转化和排泄等过程的特点和规律的一门科学，即药物分子被机体吸收后，在机体作用下发生的化学结构转化。也是药物研发产业链中的重要环节，贯穿药物研究过程的始终。本实验涉及黄酮类成分在大鼠体内代谢的研究，大鼠灌胃给予药物，累积24h尿液，尿液经处理，运用各种色谱手段，分离得到目标代谢产物。在此过程中有一关键的因素时刻威胁着我们，即代谢产物的降解，因此要设法保证代谢产物的稳定，如低温保存样品，调节尿液的酸碱性，等等。 本实验利用Ultimate XB-C18对两个重要的代谢产物在尿液中的稳定性进行简单的考察。1.Chemical and reagents 甲醇(色谱纯，天津大茂)，水(哇哈哈纯净水，杭州)，三氟乙酸(TFA, Dikma, USA)，其它试剂均为分析纯。2.animals Wista大鼠(220-250g，SPF级，由本校动物实验中心提供)3.HPLC analysis of two important metabolites Waters 高效液相色谱系统，由Waters Model 600 controller液相色谱，Millennium 32 工作站，Model Delta 600 泵，以及Waters 996 DAD检测器组成。 色谱柱：Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm) 流动相：A通道：甲醇，B通道：水(0.05%TFA)=(20:80, v/v) 流 速：1mL/min 柱 温：35℃ 检测波长：190-400nm扫描 进样量：20μL3.Sample preparation 代谢产物M1和M2之前已制备分离得到，各取1mg，混合溶于2mL水中(M1和M2水溶性很强，也可溶于甲醇)，取20μL进样分析；剩余部分置于250mL锥形瓶中，加入新鲜收集的大鼠尿液10mL，室温放置24h，之后该混合溶液，过ODS亲水柱，先用水洗脱，弃去，再用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱溶液，45℃浓缩并定容至2mL。取20μL进样分析。4.Results and discussionhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107010000_302457_2160661_3.jpg图1. M1与M2纯品混合色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106302310_302433_2160661_3.jpg图2. M1与M2纯品混合色谱图(局部放大图10-20min)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106302310_302434_2160661_3.jpg图3. M1与M2在尿液中放置24h后色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106302310_302435_2160661_3.jpg图4. M1与M2在尿液中放置24h后色谱图(局部放大图20-30min)5.conclusion 1. M1与M2在尿液中放置24h后发生了降解，在保留时间为25分钟左右，出现2个降解产物，其紫外吸收与M1和M2分别对应相似，M1紫外吸收(~271nm, ~310nm), M2紫外吸收(~273nm, ~343nm)。 2. 降解产物可能为M1与M2水解产物，因为M1与M2为极性较大的代谢产物，推测可能为葡萄糖醛酸或硫酸结合产物，其降解过程可能为水解脱掉葡萄糖醛酸基或硫酸基。 3. 这样的结果提示我们，在研究黄酮类成分的代谢过程中要注意样品的保存，在收集到尿液后要快速处理，或者在收集的过程中就进行预防，所采用的方法文献报道有加入乙醇或加酸调pH至5左右，可以防止该类代谢产物的降解。Acknowledgement感谢月旭公司提供Ultimate XB-C18柱。

  • 【金秋计划】银黄含片对健康人气道微生物群组成和代谢产物的影响

    [size=15px][color=#595959]许多研究证实，[b]微生物组-宿主相互作用[/b]影响[b]呼吸道传染病(RID)[/b]的进展。呼吸道微生物群的代谢物参与调节机体的炎症反应。[b]肺部微生物群[/b]，如葡萄球菌和假单胞菌，通过抑制GPR109A和GPR41或抑制组蛋白去乙酰化酶来改变吞噬和趋化，改变细胞增殖，减少炎症反应，从而防御呼吸道疾病。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959]银黄（YH）[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]含片由黄芩和金银花组成，具有散风、清热、解毒作用，我国临床主要用于咽炎或急[b]慢性扁桃体炎[/b]、上[b]呼吸道感染[/b]。有实验表明，YH制剂对蛋氨酸和胆碱缺乏饮食引起的小鼠代谢相关[b]脂肪肝[/b]有改善作用。然而，关于YH含片在[b]呼吸道微生物群和代谢物谱中的作用[/b]的证据仍然缺乏。该研究的目的是分析服用YH含片后呼吸道微生物群组成和循环代谢物谱的变化。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959]研究参与者被随机分为两组，YH组和安慰剂组。YH组(n?=?32)给予银黄含片，每日6次，每次2片，连用7d。安慰剂组(n?=?31)，安慰剂以相同剂量服用（由银黄含片中使用的辅料组成）。中国[b]临床试验[/b]注册中心的注册号为ChiCTR2000029633。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]采集60名健康受试者的咽拭子和血清样本，进行16S核糖体RNA基因[b](16S rRNA)[/b]高通量测序和非靶向超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS)分析。[/color][/size][font=&][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]给药后气道微生物组成发生明显变化。放线菌和普雷沃氏菌的丰度增加，潜在致病性假单胞菌和杆状杆菌的丰度降低。在血清样本中共鉴定出168种显著的HMDB分类代谢物，其中脂质代谢物所占比例最大。相关分析显示，循环代谢物与气道微生物群组成变化显著相关。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [color=#3573b9]结论[/color][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][font=&][/font][font=&][/font][/color][/size][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]YH含片具有抑制条件致病菌，增加上呼吸道有益微生物，调节机体代谢途径的作用[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。这些发现为YH含片在治疗和预防呼吸系统疾病中的作用机制提供了见解。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]

  • 【分享】一种全新的微生物鉴定方法-代谢指纹法

    历史上对微生物尤其是细菌的鉴定，主要是根据其形态、染色和生化特征，进行手工分类鉴定。20世纪70年代以来，随着微生物学和光电、色谱等技术的发展和计算机的广泛应用，微生物鉴定的自动化逐步成为现实。目前常见的微生物鉴定原理有以下几种：　　1． 酸碱反应：细菌代谢碳水化合物，一般产生酸性物质；分解蛋白质或氨基酸，则产生碱性物质，根据不同细菌的理化性质不同，测定细菌的分解底物导致PH值变化而产生的不同颜色，来判断菌种。　　2． 酶谱分析：根据细菌生长产生酶的特性，在测定底物中加入基质。使其与细菌生长过程中的酶结合成荧光物质，可以在较短的时间判定菌种。　　3．高压液相色谱分析：用气相色谱检测细菌在液体培养基中的代谢产物（挥发和非挥发脂肪酸），结果与数据库数据比较后，得出鉴定结果。　　4．代谢指纹法：20世纪80年代初，美国BIOLOG公司开发了一种新的微生物鉴定方法-代谢指纹法，并将其应用于微生物的自动化检测。其原理是根据细菌对碳源（或氮源）利用的差异来区别和鉴定细菌，不同的细菌会利用不同碳源（或氮源）进入新陈代谢过程（称为呼吸），而对其他一些碳源（或氮源）则无法利用，将每种细菌能利用和不能利用的一系列碳源（或氮源）进行排列组合，就构成了该种细菌特定的代谢指纹，由于细菌在利用碳源进行呼吸时，会发生一系列的氧化-还原反应，产生电子，TTC（四唑紫，2，3，5-TriphenylTetrazoliumChloride）在呼收电子后，会由无色的氧化型转变为紫色的还原型，通过肉眼观察或计算机控制的读数仪，将反应结果同数据库中的指纹进行比对，从而得到细菌的鉴定结果。　　BIOLOG公司的基于代谢指纹法原理的细菌鉴定系统，在全球拥有二十多项专利，该系统在在96孔板条上实现95个反应，大大提高了鉴定的准确率，代谢指纹技术的运用，使该系统与传统的酸碱或细菌的生长反应相比。细菌鉴定的范围更为广泛。目前，BIOLOG的微生物鉴定系统不仅能够鉴定常见的肠杆菌、芽孢杆菌、棒状杆菌、嗜血杆菌、厌氧菌、酵母样真菌、丝状真菌等近2000种微生物，几乎覆盖了所有重要的人体、动植物微生物和大部分环境微生物。　　现在，美国半数以上的州立实验室和国家疾控中心（CDC）都在使用BIOLOG公司的产品，十几年来，BIOLOG公司在全球六十多个国家和地区共销售了1700多套微生物鉴定系统********************************************************************（该段有广告内容）。

  • 【讨论】兽药代谢产物为三聚氰胺

    不知道有没有人注意过这条新闻，环丙氨嗪在动物体内代谢产物是三聚氰胺。谁知道评价结果？环丙氨嗪再评价会议在京召开作者：未知 动物用药来源：农业部兽药评审中心 点击数：20 更新时间：2008-10-14[关键词]：环丙氨嗪健康网讯：　　根据农业部兽医局的指示，我处于2008年10月9日组织部分评审专家在中监所召开了兽用化学药品环丙氨嗪再评价会议，会议对环丙氨嗪的使用及其在动物植物中的相关代谢与残留进行了评价。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　二〇〇八年十月十三日

  • 上海有机所在抗肿瘤天然产物生物合成研究中取得新进展

    对结构独特、活性显著的天然产物进行生物合成研究是从基因簇、生物合成途径及酶催化反应角度理解自然界“全合成”的生物-化学过程。中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室唐功利课题组多年来致力于复杂抗肿瘤天然产物的生物合成研究，经过几年的努力，该课题组最近在两个课题上均取得突破。 抗生素谷田霉素（Yatakemycin，YTM）可以抑制致病真菌，且对肿瘤细胞表现出极强的毒性（比抗肿瘤药物丝裂霉素的活性高约1000倍）；该家族化合物属于DNA烷基化试剂，典型的结构特征是吡咯吲哚环上的环丙烷结构。为了阐明其独特的生物合成机制，课题组利用全基因组扫描技术定位其生物合成基因簇，通过基因敲除结合生物信息学分析确定了基因簇边界。在对突变株的发酵检测中成功分离鉴定了中间体YTM-T的结构，并结合体外生化实验揭示了一类同源于粪卟啉原III-氧化酶（Coproporphyrinogen III oxidase）的甲基化酶以自由基机理催化YTM-T发生C-甲基化（J. Am. Chem. Soc., 2012, 134, 8831-8840），这是此类蛋白催化自由基甲基化反应的首例报道。这一阶段性结果为下一步阐明YTM结构中最重要的环丙烷部分生物合成途径奠定了基础。 萘啶霉素(Naphthyridinomycin，NDM)、奎诺卡星(Quinocarcin，QNC)及Ecteinascidin 743 (ET-743)均属于四氢异喹啉生物碱家族化合物，它们都具有显著的抗肿瘤活性，其中ET-743已发展为第一例海洋天然产物来源的抗肿瘤新药。这三种化合物都具有一个独特的二碳单元结构，其生物合成来源问题一直没有得到解决。为了揭示这一谜团，唐功利课题组在克隆了NDM和QNC生物合成基因簇的基础上，通过前体喂养标记、体内相关基因敲除-回补以及体外酶催化反应等多种实验手段相结合的方式，阐明了二碳单元的独特生源合成机制：NapB/D及QncN/L在催化功能上均属于丙酮酸脱氢酶及转酮醇酶的复合体，它们负责催化二碳单元由酮糖转移至酰基承载蛋白（ACP）上，而后经过非核糖体蛋白合成（NRPS）途经进入到最终的化合物中。这一结果发表在《美国国家科学院院刊》(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2012, 109, 8540-8545)上。这种将基础代谢中的酮糖直接转化为次级代谢所需要的二碳单元在非核糖体肽合成途经中是首次报道，该研究结果也有助于揭示海洋药物ET-743独特的二碳单元生物合成来源，为非核糖体聚肽类天然产物的组合生物合成带来新的前体单元。 上述研究工作得到国家自然科学基金委、科技部和中国科学院的资助。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201207/W020120704343205531340.pngYTM合成机制http://www.cas.cn/ky/kyjz/201207/W020120704343205536236.gif四氢异喹啉生物碱化合物的独特生源合成机制

  • 液质检测硝基呋喃类代谢产物

    请问下，哪位老师用LC-MS/MS检测硝基呋喃类代谢产物，我们购买的呋喃西林标准品证书标识分子量为111.53，而标准GB/T21311-2007中母离子为209，我进了一针标样，没有209的目标峰，是怎么回事？

  • 生物工程的一个新的分支：代谢工程

    张星元：生物工程的一个新的分支：代谢工程代谢工程（Metabolic engineering）是生物工程的一个新的分支。代谢工程把量化代谢流及其控制的工程分析方法和用以精确制订遗传修饰方案并付之实施的分子生物学综合技术结合起来，以上述“分析——综合”反复交替操作、螺旋式逼近目标的方式，在较广范围内改善细胞性能，以满足人类对生物的特定需求的生物工程。为了满足人类对生物的特定需求而对微生物进行代谢途径操作，已有将近半个世纪的历史了。在氨基酸、抗生素、溶剂和维生素的发酵法生产中，都可以找到一些典型实例。操作的主要方法是，用化学诱变剂处理微生物，并用创造性的筛选技术来检出已获得优良性状的突变菌株。尽管这种方法已被广泛地接受并已取得好的效果，但对突变株的遗传和代谢性状的鉴定是很不够的，更何况诱变是随机的！ DNA重组的分子生物学技术的开发把代谢操作引进了一个新的层面。遗传工程是我们有可能对代谢途径的指定酶反应进行精确的修饰，因此，有可能构建精心设计的遗传背景。DNA重组技术刚进入可行阶段不久，就出现了不少可用来说明这种技术在定向的途径修饰方面的潜在应用的术语。如分子育种（1981年），体外进化（1988年），微生物工程或代谢途径工程（1988~1991年），细胞工程（1991年）和代谢工程（1991年）。尽管不同的作者提出不完全相同的定义，这些定义均传达了与代谢工程的总目标和手段相似的含义。我们曾经把代谢工程定义为，代谢工程就是用DNA重组技术修饰特定的生化反应或引进新的生化反应，直接改善产物的形成和细胞的性能的学科。这样定义代谢工程强调了代谢工程工作目标的确切性。也就是说，先要找到要进行修饰或要引进的目标生化反应，一旦找准了目标，就用已建立的分子生物学技术去扩增、去抑制或删除、去传递相应的基因或酶，或者解除对相应的基因或酶调节，而广义的DNA重组只是常规地应用于不同步骤中，以便于达到这些目标。尽管在所有的菌种改良方案中都有某种定向的含义，但与随机诱变育种相比较，在代谢工程中工作计划的定向性更加集中更加有针对性。这定向性在酶的目标的选择，实验的设计，数据的分析上起着支配的作用。不能把细胞改良中的所谓“定向” 解释为合理的途径设计和修饰，因为“定向选择”与随机诱变之间没有直接关系。相反地我们可借助于“逆行的代谢工程”（reverse metabolic engineering）, 从随机诱变而获得的突变株及其性状的实验结果，来提取途径及其控制的判断信息（critical information）。与所有传统的工程领域一样，代谢工程也包含“分析” 和“综合”两个基本步骤。因为代谢工程借助于DNA重组技术作为一种启用技术而出现，所以一开始人们的注意力仅仅放在这个领域的综合方面，譬如：新的基因在不同寄主中的表达，内酶的扩增，基因的删除，酶活力修饰，转录的解调或酶的解调等。这样前面定义的代谢工程，在相当程度上似乎是应用分子生物学技术表现形式，几乎没有工程的内容，因此从生物过程的角度来衡量，并不是够格的代谢工程。而更加重要的工程内容存在于代谢工程的分析方面。譬如，怎样确定定义生理状态的参数？怎样用这信息解释代谢网络控制的结构体系，进而提出达到某个目标的合乎道理的修饰位点？怎样进一步评估这些遗传修饰和酶的修饰的真实的生化效果，以便进行下一轮的途径修饰，直到达到目的？能不能提出一个可用来确定代谢修饰的最有希望的靶位的合理的步骤？在综合方面，代谢工程的另一个不同寻常的方面是它关注的是代谢途径集成的整体，而不是单个反应。这样，代谢工程研究的是整个生化反应网络，涉及到其自身的途径合成和热动力学可行性，还有途径流量及其控制。我们研究的出发点正在经历从单个酶反应向相互影响的生化反应体系转变。因此，通过对整个反应体系而不是一个个孤立的反应的考察就有可能获得关于代谢和细胞功能的更全面的认识，在这个的意义上“代谢网络”的观念是最为重要的。代谢工程让人们把注意力转向整个体系而不是其组成部分。因此，代谢工程使用来自还原论者的大量的研究的技术和信息来设法进行综合和设计；而关于整个体系的运转状态的观察，对于进一步的合理的分解和分析其自身来说，又是最好的指导。尽管代谢和细胞生理学可以为某组反应途径的分析提供主要的背景知识，应该指出流量及其控制的测定结果具有更广阔的应用范围。因而，代谢工程的概念除了可用来分析流经某组代谢途径的物质流和能量流，同样可以应用于在信号传感途径的信息流量的分析。对于信息流量尚未很好地定义，一旦信号途径的概念得到具体化，以上观念和方法将会在信号传感途径的相互作用的研究，以及胞外刺激控制基因表达的复杂机制的解释方面发挥作用。也许代谢工程最重要的贡献在于对活体条件下代谢流及其控制的强调。代谢流的概念本身实际上并不是新的。代谢流及其控制引起生化研究人员中的少数先知的注意，已有大约30多年历史了。作为他们工作的结果，代谢控制的观念成熟了，并且被严格的定义了，尽管这些观念曾经没有得到传统的生物学家广泛地接受。代谢工程最初被设想为特定的途径操作，很快又变成工程师们的分析技能的预期的输出端。发酵工程师们建立了量化代谢流及其控制的工程分析方法，从而看到了利用代谢控制分析这个有效的平台向这个过程导入严密性的机会，以及生化工程与发酵工程在生物学领域的交叉和互补。

  • 【原创大赛】高效液相色谱法分析苯并芘大鼠肝脏线粒体的代谢产物

    【原创大赛】高效液相色谱法分析苯并芘大鼠肝脏线粒体的代谢产物

    高效液相色谱法分析苯并芘大鼠肝脏线粒体的代谢产物 本实验建立了一种用高效液相色谱法分析苯并芘及其在大鼠肝脏线粒体中的六种代谢产物的分析方法。使用乙腈、水梯度洗脱作为流动相，紫外探测器分析得到苯并芘的羟基化代谢产物以及苯并芘酮，包括3-羟基苯并芘、9-羟基苯并芘、苯并芘4,5-二氢二醇、苯并芘-7,8-二氢二醇、9，10-二羟基-9，10-二氢苯并芘、苯并芘二酮。其中苯并芘二酮含量最低。该实验结果对于推断细胞CYP1A1酶在体内体外模型中对于苯并芘增毒和解毒作用奠定了重要的基础。 前言：苯并芘是苯与芘稠合而成的一类多环芳烃，苯并芘和其他多环芳烃主要是有机物的不完全燃烧或热解生成，并且在环境中普遍存在。除了污染空气的吸入，摄入的主要途径有吸烟和饮食以及一些职业的摄入如煤、焦炭、沥青的燃烧以及煤焦油的使用。苯并芘能够导致细胞毒性、致畸致突变的毒性以及致癌的毒性。动物实验长期暴露于苯并芘中可导致动物的皮肤、胃、肺组织的癌变。苯并芘在作用于DNA之前需要代谢活化，这也是苯并芘发挥毒性很重要的代谢步骤。细胞色素P450（CYP）酶和环氧化物酶是主要的苯并芘的活化酶,首先CYP酶将苯并芘氧化为环氧化物然后在环氧化物水解酶的作用下生成二氢二醇，CYP同工酶将其进一步的活化为活性成分苯并芘-7,8 - 二氢二醇-9,10 - 环氧化物（BPDE），其可作用于DNA，其优先在鸟嘌呤残基上形成加合物，该加合物是BPDE在体内体外试验中于DNA主要的加合物。在CYP酶中，CYP1A1和B1认为是BaP代谢活化中重要的酶，但是CYP1A1在体内排毒的作用较大于其活化BaP的作用。为了解释这些发现，BaP的体内体外代谢与解毒作用应该进一步进行评价，定性和定量分析BaP在CYP同工酶和环氧化物酶下的所有代谢产物，以及这些致癌物与DNA加成物的评价也很有必要。本实验优选色谱条件使得BaP在大鼠肝脏线粒体内的代谢产物能够很好的分离以及通过紫外检测器灵敏的检测。苯并芘在生物体内的代谢步骤：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409291248_516273_2360169_3.jpg材料和方法试剂甲醇（色谱级）乙腈（色谱级），苯并芘 ,NADP+,葡萄糖-6-磷酸，二喹啉甲酸，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶微粒体的制备微粒体来自于10只SD大鼠的肝脏，预先用苏丹I处理。微粒体蛋白质浓度通过二辛可宁酸蛋白质测定法测定，牛血清蛋白作对照。CYP同工酶的含量通过示差光谱测定。孵化体系：用于研究BaP代谢的孵化体系包含有100mM磷酸钠缓冲液（pH7.4），NADPH生成体系（1毫NADP+，10mL D-葡萄糖-6 - 磷酸，1U/mL的D-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）,0.5mg的微粒体蛋白质，50μM的BaP（溶于5μl甲醇），总体积为500微升。通过加入50μl的NADPH生成体系来启动反应的发生。孵育体系通过未加入酶体系或无NADPH生成体系或无的BaP来控制。孵化在敞开的试管中进行（37℃），20分钟后，取5μl 1mM的非那西丁乙醇溶液加入作为内标物。BaP的代谢物用乙酸乙酯（2×1毫升）萃取两次，并蒸发至干。将样品溶解在25μl的甲醇，通过HPLC分离。BaP代谢物的HPLC分析：安捷伦液相1200高效液相色谱仪配紫外可见检测器，色谱柱为diamonsil 4.6﹡150﹡5u色谱条件：所用的色谱条件如下表： 时间流动相A(乙腈)流动相B（水）流速00%100%0.6ml/min3530%70%4060%40%4580%20%50100%0%我们还对代谢产物进行了质谱

  • 【分享】如何减少质谱分析中 II相代谢产物 源内裂解

    [size=16px]源内裂解：[/size][font=Arial][size=16px][color=#4a90e2][/color][/size][/font][size=16px]当离子从高压电离源进入质量分析仪的真空区域时，可能发生离解或碎片化事件。某些药物代谢物的源内[back=#f7f8fa]（[/back][font=Arial][back=#f7f8fa]CID[/back][/font][back=#f7f8fa]）[/back]可能会产生与药物母体离子（目标分析物）相同的碎片离子。因此，将在用于定量药物的相同单反应监测（SRM）转换中检测到代谢物。在母体药物和代谢物之间缺乏足够的色谱分离度的情况下，可能会将代谢物来源中的CID产物离子误解为药物，从而使测定法没有选择性。[/size][size=16px]可以通过源内CID影响母体药物定量的最常见代谢物是：[/size][size=16px][color=#0080ff][b]酰基葡糖醛酸苷，O-和N-连接的葡糖醛酸苷，N-氧化物，硫酸盐结合物和内酯/羟基酸[/b][/color][/size][size=16px]如何控制或减少代谢产物的内源裂解：[/size][font=Arial][size=16px][back=#f7f8fa][/back][/size][/font][list][*][font=等线][size=16px]一般认为ESI应优先于大气压化学电离(APCI)，以减少内源CID或化合物的热分解[/size][/font][*][font=等线][size=16px]ESI源的锥孔电压参数与源温度对源内裂解起主要作用[/size][/font][*][font=等线][size=16px]不同的加和离子，+NH4，以及负离子模式（-H），优于正离子模式（+H）[/size][/font][/list][font=等线][/font][size=18px][b][color=#ff0000]解决问题的终极方法，还是需要 裂解峰与待测物峰 色谱分离，其它的只能说是降低源内裂解发生的机率[/color][/b][/size][size=18px][b]文章来源，微信公众号“临床与分析哪些事”。[/b][/size][size=18px][b][color=#ff0000][/color][/b][/size]

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