肾小球

新华社东京1月7日电 日本研究人员经临床试验发现，因高血压造成肾功能低下的慢性肾脏病患者，如果连续3年服用降压药令血压恢复到正常值，肾功能也会随着血压的下降得到改善。 慢性肾脏病是绝大多数肾脏疾病的临床统称，诸如肾小球肾炎、肾盂肾炎、膜性肾病、糖尿病肾病、高血压肾病等都可归为慢性肾脏病的范围。慢性肾脏病目前尚无根治方法，病情恶化会发展为肾衰竭，并可能并发心血管疾病。 据日本《每日新闻》日前报道，以京都大学为中心的研究小组，以354所医院的780名患者为对象进行分析研究。这些患者都是坚持服用降压药的高血压患者，并且他们的肾小球滤过率指标和血压记录都较完善。 肾小球滤过率（eGFR）是判断肾功能的重要指标，数值越低表示肾功能越差。正常成年人的这一数值应该在90以上，低于60且超过3个月，就可能存在慢性肾脏病，低于15就可能需要透析。 在试验中，有98名患有慢性肾脏病的患者在服用降压药3年后血压恢复到了正常值，同时他们的肾小球滤过率也从试验开始时的平均52上升到58，表明肾功能得到了改善。 研究人员认为，降压药改善肾功能是因为，血压下降后肾脏过滤体内废物的负担也有所减轻，本次研究的结果有望用于开发预防肾功能恶化的新方法。

我们准备取大鼠肾皮质观察足细胞计数、足突平均宽度(FPW )及足突融合率、基底膜(GBM)平均厚度，参考资料方法如下(1)3500倍足细胞计数:每例观察3个肾小球,随机取10个视野,计数足细胞数。(2)8000倍FPW:测定裂孔膜水平上足突两侧膜间的距离,取其平均值。(3)8000倍足突融合率:首先量出基底膜总长度,设为X,然后量出基底膜上足突融合的总长度,设为Y,最后以Y /X,即得融合率。(4)8000倍GBM:以1 cm为单位,把基底膜分成若干个点,然后测定每点基底膜的厚度,再把各点基底膜的厚度相加设为X,计算其测定的点数设为Y,最后以X /Y,即得各组基底膜的平均厚度。 我们因为对电镜没有经验，有几个问题麻烦指点： 1、3500倍电镜下观察3个肾小球,随机取10个视野,计数足细胞数，这个方法可行吗？这个方法需要多少张照片？ 2、3500倍下每个视野大概能观测到几个肾小球？ 随机取十个视野怎么计算出每个肾小球足细胞数？ 3、8000倍下可以使用医学统计软件计算出足突平均宽度(FPW )及足突融合率、基底膜(GBM)平均厚度吗？ 多谢各位，急盼回复！

最新发现与创新 新华社广州1月8日电（记者肖思思）中山大学附属第一医院8日发布IgA肾病重要研究成果——对亚洲受试者的研究中发现了IgA肾病新的易感基因。 中山大学附属第一医院肾内科余学清教授带领科研团队联合国内二十多家医院和研究机构，并与新加坡专家合作，完成了基于汉族人群IgA肾病全基因组易感基因筛查研究。 余学清介绍，IgA肾病是全球最常见的原发性肾小球疾病，在亚太地区占原发性肾小球疾病的比例高达40%—50%。该病是以IgA或IgA为主的免疫球蛋白在肾小球沉积，肾小球系膜细胞增生和细胞外基质积聚为主要特征。根据目前的资料，有15%—40%的患者最终发展至终末期肾脏病（尿毒症）。研究发现，IgA肾病存在明显的家族聚集倾向，被列入多基因遗传病范畴。IgA肾病发病隐匿，早期诊断和治疗对延缓肾功能恶化具有重要意义。 余学清介绍，这次研究是迄今为止最大样本的亚洲全基因组关联分析研究，包括1万多名受试者（4137例IgA肾病患者与7734例健康人群），利用先进的遗传学分析方法和策略，在全基因组水平进行研究。 “研究人员既验证了欧美学者的部分研究结果，更为重要的是首次发现了中国人群中IgA肾病独有的两个新的易感基因位点——17号染色体和8号染色体，证明了遗传因素在IgA肾病的发病机制中起重要作用，并能够影响IgA肾病的发病过程及临床表现。”他说，由于遗传基因的差异，IgA肾病的临床表现差异很大，有慢性肾脏病历史的家族中的后代和一级亲属的发病率，要高于没有该病历史的家族。 《科技日报》（2012-1-9 一版）

微离子导入疗法从病人免疫角度入手，以人体各组织器官发出的生理病理信息和药物作用信息为依据，以治疗肾脏的病理破坏为宗旨，通过清除肾脏破坏性物质和免疫复合物，治疗系膜增生，改变肾小球硬化，改善肾脏血流灌注，增加肾小球滤过率而使病人康复。具体说来，微离子导入疗法就是将常用中药微离子化，通过外用导入人体肾区，以达到调整和维持人体的内部平衡的效果。这种疗法避免了单纯口服药物无法被肾脏充分吸收的问题，可以使药物尽可能充分的到达肾脏，被肾脏吸收，大大提高了药物的利用率。同时辅之以口服中草药，达到内外结合、互相促进的效果。本文摘自：[url]http://www.jixingshen.com/html/20091121/article96.html[/url]

3月8日是第二个“世界肾脏日”。中国慢性肾脏病形势严峻，资料显示，40岁以上人群慢性肾脏病患病率达8%—9%。肾脏疾病已成为威胁全球公共健康的“隐形杀手”之一。与其他危害人类健康的重大疾病相比，慢性肾脏病表现更为隐匿，起病时可无明显症状，不少病人开始就医时就已经是尿毒症。专家称，早期发现和预防是防治慢性肾脏疾病及其相关糖尿病和心血管疾病的最有效方法。　　如果你的尿检出现蛋白尿、血尿或者出现肾功能异常，或者出现肾脏形态结构异常，时间超过3个月的话，就可能患有慢性肾脏病。慢性肾脏病包括多种肾脏疾病：如慢性肾小球肾炎、间质性肾炎、慢性尿路感染、肾小管疾病、糖尿病肾病、狼疮性肾炎、肾血管疾病和肾功能不全尿毒症等。如治疗不及时或不当，可能导致尿毒症，使得大量代谢废物在体内蓄积，机体内环境遭到破坏，最终可能导致死亡。　　护肾食谱　　宜食清淡易消化、营养丰富、维生素多的食物，忌海鲜、烟酒等辛辣刺激性食物。　　尿蛋白量多、肾功能正常者，可进正常或偏低蛋白饮食。　　水肿、高血压患者，应减少盐分摄入，水肿患者还要减少水分摄入。　　肾衰患者，应限制蛋白质的总摄入量，并且摄入的蛋白质应以人体必需的优质动物蛋白(如牛奶、蛋类、鱼和瘦肉等)为主，植物蛋白应减少，同时保证充足的热量(如多吃红薯、麦淀粉饮食等)。　　肾衰患者，还应少食含钾高的食品。如：香蕉、柑橘、草莓、西瓜、菌类食品、土豆、西红柿、南瓜等。　　注意保持大便通畅，如大便干结，可适当服用温和导泻剂。　　血尿酸高者，尤其忌食动物内脏、鱼虾蟹蚌、啤酒、菇类、豆类、坚果类。

【序号】： 1【作者】： 位红兰【题名】： 急性感染后肾小球肾炎【期刊】： 肾脏病与透析肾移植杂志【年、卷、期、起止页码】： 2010年第4期【全文链接】：http://epub.cnki.net/grid2008/detail.aspx?QueryID=4&CurRec=1

【序号】：1【作者】：罗春雷，唐政【题名】：急性链球菌感染后肾小球肾炎研究进展【期刊】：江苏医药【年、卷、期、起止页码】：2010年 15期【全文链接】：http://epub.cnki.net/grid2008/detail.aspx?QueryID=7&CurRec=1

[font=宋体][size=3]【序号】：[/size][/font][size=3][font=Arial] 1[/font][font=宋体]【作者】：[/font][/size][font=宋体]杨政[/font][font=Verdana] [/font][size=3][font=Arial], [/font][font=宋体]【题名】：[/font][b][color=#10619f][font=宋体]成人系膜增生性肾小球肾炎肾小球区[/font][font=Verdana]I[/font][/color][color=red][font=宋体]型胶[/font][/color][font=宋体][color=#10619f]原和[/color][/font][color=red][font=Verdana]IV[/font][/color][color=red][font=宋体]型胶原[/font][/color][font=宋体][color=#10619f]定量分析[/color][/font][/b][/size][size=3][font=Arial]..[/font][font=宋体]【期刊】：[/font][font=宋体][b][color=#10619f]中国优秀硕士学位论文全文数据库[/color][/b][/font][/size][size=3][font=Arial].. [/font][font=宋体]【年、卷、期、起止页码】：[/font][font=Arial][/font][/size][size=3][font=宋体]【全文链接】：[/font][font=Arial]http://dlib.edu.cnki.net/kns50/detail.aspx?QueryID=139&CurRec=4[/font][/size]

【序号】1【题名】2551例患儿肾小球疾病病理类型分析及其临床意义【作者】刘光陵;高远赋;夏正坤;樊忠民;任献国;茅松;何旭;孙涛【杂志缩写或全称】：医学研究生学报【年, 卷(期), 起止页码】：2011,(03):294-297【全文链接】： http://epub.cnki.net/grid2008/detail.aspx?QueryID=166&CurRec=1 【序号】2【题名】药物致急性间质性肾炎的临床及病理特征【作者】陈冬梅;唐政;罗春雷;周岩;陈惠萍;曾彩虹;刘志红【杂志缩写或全称】：中国实用内科杂志【年, 卷(期), 起止页码】：2011,(02):122-124.【全文链接】： http://epub.cnki.net/grid2008/detail.aspx?QueryID=241&CurRec=1

有不同层，或者是组成渐变的小球（特小，200nm），用电镜能观察到这种变化吗？

请问哪位高手指导，大球上嵌入许多小球的结构在论文中应该怎样描述，谢谢！

请问哪里能买到变形能力或者弹性模量不同的小球，有可能是PDMS小球，直径在微米级别，几十微米，或者10微米左右

二乙烯基-乙基乙烯苯型高分子多孔小球是二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球吗

我需要将陶瓷材料吹成直径1毫米的小球，谁有这样的设备，或用过这样的设备告诉我那个厂家生产。急啊！先谢谢！

请教大家，新买的100ml新针筒中，会放塑料泡沫小球，作用是什么？

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怎样看尿常规化验单　　尿常规化验包括尿的颜色、透明度、酸碱度、比重、有无蛋白和糖，以及尿中段沉渣试验等。　　一些疾病可以使尿色改变。例如出现尿深黄如浓茶样，多见于急性黄疸型肝炎；尿混浊、尿少淋漓，多见于急性尿路感染、蜜月性膀胱炎；尿色红呈血样，提示可能罹患急性肾小球肾炎、肾结石、肾结核、尿路或肾肿瘤和泌尿系外伤等　　在一张尿化验单上，如果一些项目后面写了“＋”号（或“＋＋”、“＋＋＋”，表明程度不同），这在医学上叫做阳性结果；相反，“－”号就叫阴性结果。阳性结果通常是泌尿系统疾病的标志。　　报告单上报告验出大量白血球（WBC＋＋---＋＋＋）和上皮细胞，多提示泌尿系统感染。尿中大量红血球（RBC＋---＋＋＋），说明患有肾脏结石、肿瘤、急性肾炎、膀胱炎和泌尿外伤。如果尿中化验出有管型阳性，那就表示肾脏有一定损伤，常见于急慢性肾炎、肾盂肾炎和肾病综合症等。如果尿糖试验是阳性，那就很可能是糖尿病，因为正常人尿中只有微量的糖，一般化验不出来。大量吃糖或推注葡萄糖时，会有短暂的尿糖出现。糖尿病患者不但尿糖阳性，而且血糖明显增高。

大家有没有使用用聚苯乙烯小球的，是那种可选择某特定规则半径的？在哪里可以找到啊～

分子成像和基于细胞的检测可以对临床前的疗效研究给出非常重要的提示。组织样本和非侵入性成像可以对疾病及其前景提供极其重要的预测。生命科学中多达70%的数据是图像格式的并且这个数字不断上涨。实验室的高通量图像采集设备每天正产生成千上万的图片。现在，图像的分析主要是医疗领域的专家依靠他们多年的经验完成的，这种手动的过程非常慢，而且带有主观性。为整个企业作自动图像分析解决方案，并且实验室实验台和病床之间联系的需求加大，然而，尽管进行了数十年的研发，自动图像分析解决方案已经远远落后于他们当初承诺的那样。Definiens Cognition Network Technology是由扫描隧道显微镜和原子力显微镜的发明者之一，1986年诺贝尔物理学奖获得者Gerd Binnig和他的开发团队开发的，这种革命性的技术模仿人类从图片提取信息的认知过程。为了模拟人类思维认知的能力，Definiens公司从根本上摆脱了传统方法，利用Definiens专利技术中的分割和分类程序，开发了展示语义网络知识的有效的方法。该项技术检测像素不是孤立的，而是联系环境的。它建立一个图像，反复识别对象的像素群。正如人类的思维一样，它利用对象的颜色、形状、纹理、大小以及它们的环境和相互关系来得出结论和推断，且同经验丰富的分析家得出结论的一样。以下为Definiens一些解决方案。案例： 一、微核探测 Definiens智能图像分析软件可实现全自动化探测微核并对其进行定量分析。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384364997_small.jpg可输出以下统计学信息：1. 单个细胞面积2. 单个细胞核面积3. 图像中细胞总数4. 图像中细胞核总数5. 图像中微核总数6. 微核细胞比例二、肾盂上皮组织探测 肾盂中全自动化探测：1. 上皮组织2. 阳性及阴性细胞核探测和区分3. 增值指数的计算http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384365004png_small.jpg图1. 原始图像http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384365005png_small.jpg图2. 所探测到的上皮组织、阳性和阴性细胞核轮廓线描述http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384365007_small.jpg图3. 所探测到的上皮组织面积，阳性与阴性细胞核数量信息三、肾小管增值细胞检测 Definiens智能图像分析软件可实现全自动化分割并分类肾小管中BrdU染色阳性与阴性细胞。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384365008_small.jpg1. 精确提取肾小管中细胞核，忽略肾小球与结缔组织中的细胞核2. 根据BrdU染色区分阴性与阳性细胞核3. 增值指数计算4. 批量处理上千张图像http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384365010_small.jpg四、肾皮质与髓质判定 Definiens智能图像分析软件可实现全自动区分肾皮质与髓质，并对其进行详细的形态学定量分析。分析策略与途径：1. 探测肾小球2. 根据肾小球的分布辨别并提取皮质3. 辨别并提取髓质http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384365014_small.jpg五、肌细胞荧光染色 Definiens智能图像分析软件可以实现从多噪点图像数据中全自动化探测肌细胞抗体染色区域，并对其进行定量分析。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384365016_small.jpg

急需购买现货二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子小球[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱，直径0.25~0.18mm，谁哪里有现货请和我联系，谢谢！[em09509]电子邮件：wuyong331@126.com

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糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）最常见且严重的微血管病变之一，常伴有肾小球硬化和肾小管间质纤维化，最终可发展为终末期肾脏病（ESRD），严重危及生命。西医治疗DN主要以降糖、降压、调脂、抗感染为主，但这些手段仍难以阻止炎症反应与肾纤维化的发生，且存在一定的局限性及不良反应，因此，探寻行之有效的DN防治策略，提高治疗水平迫在眉睫［1-3］。中医药根据辨证分型对DN进行治疗已有上千年的历史，对其记载可追溯至《黄帝内经》之“消瘅”及“消渴病”继发的“虚劳、水肿、尿浊、关格、肾劳”等，可通过调节代谢、自噬、抗氧化、抗炎、抗纤维化等机制，对DN进行多靶点调控治疗。在改善DN客观指标、保护肾功能及远期疗效方面，中医药都显示出了独特的优势［4-5］。 黄芪六一汤始载于《太平惠民和剂局方》，由黄芪60 g、甘草10 g组成，具有大补肺气、滋益肾水、调和脾胃的功效［6］。课题组前期发现［7-11］，由黄芪六一汤提取、分离出来的黄芪总皂苷、黄芪总黄酮、黄芪多糖、甘草酸所组成的黄芪六一汤组分（简称“HQD”）具有防治DN、显著改善肾功能的作用。并鉴定出HQD中6个主要原型入血成分（黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、甘草酸）。然而，HQD作为中药复杂化学成分的混合体，其在体内发挥抗DN药效的分子作用机制尚不完全明确，制约了其深层次开发利用。 网络药理学能高效整合中药、成分和靶点之间关系，构建中药-成分-靶点网络，诠释药物与疾病之间的复杂关系，为中药及其复方作用机制研究提供了行之有效的新方法［12-13］。故本实验首先采用网络药理学技术对HQD抗DN的机制进行探索，发现HQD发挥药理作用可能与细胞自噬缺陷有关。据报道［14-15］，自噬缺陷可导致肾小管上皮细胞的损伤，而激活自噬能够减轻这一损伤从而保护肾功能。根据药效学及网络药理学实验结果，推测HQD发挥抗糖尿病肾病的作用机制可能和肾小管上皮细胞自噬水平失调有关，为验证推测结果，本研究从细胞自噬角度出发，采用DN大鼠模型对筛选出的核心通路进行验证，以期为黄芪六一汤及中药复方的分子作用机制研究及深层次开发提供创新思路与借鉴。 1　材料 1.1　仪器 EnVision酶标仪（PerkinElmer）；H1-16KR台式高速冷冻离心机（湖南可成仪器设备有限公司）；Rayto全自动生化分析仪（Chemray 800）；Tissuelyser-24L多样品组织研磨仪（上海净信实业发展有限公司）；三诺血糖仪（长沙三诺生物传感技术有限公司）；Multiskan FC酶标仪（Thermo Scientific）；免染蛋白印迹系统（ChemiDooTM）、蛋白快速转印仪（Trans-Blot Turbo）、胶凝成像系统（GBOXChemiXL1.4）均购自美国Bio-rad公司；电泳仪（PowerPacBasic）、核酸蛋白紫外检测仪（Biomate 3S）、垂直电泳槽，均购自美国Thermo公司；纯水超纯水机（四川优普超纯科技有限公司）；透射电子显微镜（日本电子JEOL）生物显微镜（麦克奥迪实业集团有限公司）；台式高速微量离心机（大龙兴创实验仪器北京股份）；超薄切片机（LEICA）；组织脱水机（LEICA）。 1.2　试药 黄芪（批号220604、211104、220901，四川盛世锦荣药业有限公司）、甘草（批号201024、200306、220805，四川盛世锦荣药业有限公司），黄芪、甘草经贵州中医药大学谢军丽讲师鉴定分别为豆科植物膜荚黄芪 Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根、豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.干燥根和根茎。细胞凋亡检测试剂盒（货号E-CK-A322，Elabscience），DAPI（货号C1002，上海碧云天生物技术有限公司），抗荧光淬灭封片剂（货号0100-01，southernbiotech），苏木素（货号H9627，Sigma）；二甲苯（货号10023418）、包埋石蜡（货号69019361）、伊红Y（水溶性，货号71014544）、中性树胶（货号10004160）均购于中国医药集团有限公司；肌酐（Scr，货号C074-d）、尿素氮（BUN，货号C010-a）、总胆固醇（TC，货号C048-a）、三酰甘油（TG，货号C019-a）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C，货号C047-a）检测试剂盒均购于长春汇力生物科技有限公司；尿蛋白测试试剂盒（货号C035-2，南京建成生物工程研究所），RIPA裂解液、PMSF、蛋白酶抑制剂、磷酸化蛋白酶抑制剂、BCA蛋白定量试剂盒、1xTBST 缓冲液、5x蛋白上样缓冲液、β-actin 兔多克隆抗体（货号AC230205001）均购于武汉塞维尔生物科技有限公司；mTOR（货号66888-1-lg）、Beclin 1（货号66665-1-lg）、p-mTOR（货号66882-1-lg）、HRP标记的羊抗鼠 IgG（货号SA00001-2）、HRP标记的羊抗兔 IgG（货号20000373）鼠单克隆抗体均购于武汉Proteintech有限公司；LC3α/β（货号R10241506）、PI3K（货号N09263380）、Akt（货号M04201652）兔多克隆抗体购于沈阳万类生物科技有限公司，链脲佐菌素（STZ，索莱宝生物有限公司，批号2230520002）。 根据本课题组前期确定的HQD制备工艺［10］，按照原处方黄芪与甘草6∶1比例，取符合药典标准的黄芪饮片12 kg和甘草饮片2 kg，制备得质量分数为72.04%的黄芪总皂苷干浸膏76.02 g（含黄芪甲苷2.69%）；质量分数为70.03 %的黄芪总黄酮干浸膏31.64 g（含毛蕊异黄酮葡萄糖苷1.72%、毛蕊异黄酮1.52%、芒柄花苷0.94%、芒柄花素0.31%）；质量分数为67.12%的黄芪总多糖干浸膏185.04 g，质量分数为80.05%的甘草酸精制品22.01 g。将上述制备所得黄芪总皂苷、黄芪总黄酮、黄芪多糖干浸膏与甘草酸精制品全部混合均匀，即得本实验所需HQD样品。 1.3　实验动物 SPF级雄性SD大鼠35只，体质量（300.00±10.82）g，购自长沙市天勤生物技术有限公司，实验动物生产许可证号SCXK（湘）2022-0011，饲养于通风良好，室温18～25 ℃，相对湿度50%～70%，按常规定期消毒的动物房。按每笼4只分装，由专人饲养管理，自由饮水及饲料，实验操作和处理严格遵循国际准则。 2　方法 2.1　HQD抗DN的药效实验 2.1.1 　DN模型大鼠的制备 大鼠适应性喂养1周后，选取8只作为对照组，对照组大鼠喂食普通饲料。其余大鼠高糖高脂饲料喂养2周，尾iv STZ（溶于pH 4.5，0.01 molL-1无菌柠檬酸钠缓冲液）33 mgkg-1，注射4周后测定空腹血糖（FBG）及24 h尿蛋白（24 h U-Alb）含量，以FBG≥11.1 mmolL-1［16-17］，肾组织出现病变为造模成功。其中，24只大鼠造模成功，3只血糖低于11.1 mmolL-1，无死亡大鼠。 2.1.2　分组及给药 将造模成功大鼠随机分为模型组，HQD高、低剂量给药组，每组8只。以黄芪六一汤临床生药用量（黄芪60 g、甘草10 g）的4倍、1倍剂量，换算本实验的HQD高剂量（0.66 gkg-1）与低剂量（0.17 gkg-1）。按照给药剂量，每日固定时间ig 1次，对照组与模型组ig等量的0.9%氯化钠溶液，连续给药8周。 2.1.3　各组大鼠相关生化指标检测 实验期间观察各组大鼠活动情况、精神状态、毛色、进食、饮水量及排泄量状况等。末次给药后，代谢笼收集24 h尿液并记录尿量（禁食不禁水），1 400 rmin-1离心5 min，收集上清。尾静脉采血测FBG，于腹主动脉取血，4 ℃下3 000 rmin-1离心15 min，收集上清。取血后断颈处死各组大鼠，取肾脏，除去被膜，部分肾组织用于病理学、细胞凋亡等检测，其余组织于-20 ℃保存备用。采用全自动生化分析仪，检测血清Scr、BUN、TG、TC、LDL-C水平。按照尿蛋白定量测试盒说明书操作测定尿总蛋白。 2.1.4　肾脏组织病理学观察 取上述部分肾脏置于4%多聚甲醛中固定，蒸馏水冲洗，将组织包裹在石蜡块中，组织脱水，浸蜡、包埋、切片、烤片、切片脱蜡，HE染色、Masson染色，封片，光镜下观察肾脏组织病理学改变。 2.1.5　TUNEL检测细胞凋亡情况 取肾组织石蜡切片进行脱蜡、水化，以蛋白酶K工作液在25℃下消化组织15 min，PBS漂洗，按照说明书对切片进行TUNEL染色，荧光显微镜下观察采集图像，计算细胞凋亡率。 2.1.6　数据统计分析 所有数据以±s表示，统计分析采用SPSS 27单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。 2.2　网络药理学研究 2.2.1　活性成分靶点预测 以HQD中6个主要原型入血成分（黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、甘草酸）为研究对象。采用PubChem数据库 （https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下载活性成分的SDF格式，将其导入SwissTargetPrediction 数据库（http：//swisstargetprediction.ch/）进行活性成分的靶点预测。剔除重复靶点，获取与6个活性成分相关的靶点。通过UniProt数据库 （https：//www.uniprot.org/）将得到的活性成分靶点蛋白名称进行标准化。 2.2.2　DN的靶点预测 通过GeneCard（https：//www.genecards.org/）、DisGeNET（https：//www. disgenet.org/）和OMIM（https：//omim.org/）数据库以“Diabetic nephropathy”为关键词进行检索，剔除重复得到疾病靶点，并用Venny工具将6个活性成分的作用靶点与DN靶点进行交集比对，得到其共同作用的靶点作为6个活性成分治疗DN的潜在靶点。 2.2.3　蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络的构建 为了进一步明确HQD治疗DN预测靶点之间的直接或间接调控关系，将潜在靶点导入STRING数据库（https：//string-db.org/）中构建PPI网络，限定物种为“Homo sapiens”，为了具有高置信度，设置minimum required interaction score≥0.9，并隐藏游离蛋白，以TSV格式保存结果，将其导入可视化的Cytoscape 3.6.0软件进行拓扑分析，筛选得到核心靶点。 2.2.4　基因本体（GO）注释及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析 将交集靶点导入Metascape（http：//metascape.org/gp/index.html），进行GO功能富集分析；将交集靶点导入KOBAS 3.0数据库（http：//kobas.cbi. pku.edu. cn/ kobas3/genelist/），进行KEGG通路富集分析。下载分析结果，将其分别按P值和“Count”（每条通路中含有的潜在基因靶点的数量）值的大小进行排序。 2.3　实验验证网络药理学预测结果 2.3.1　透射电镜观察肾小管上皮细胞中自噬体及自噬溶酶体的形成 取“2.1.3项”下对照组、模型组、HQD高剂量给药组大鼠部分肾组织约1 cm3，经3%戊二醛预固定24 h左右，1%四氧化锇再固定2 h；依次加入30%、50%、70%、80%、95%、100%的丙酮溶液进行逐级脱水，每次20 min；脱水后，采用丙酮和Epon812包埋剂对其进行渗透和包埋；采用超薄切片机制备60～90 nm的超薄切片；并以醋酸铀避光染色10～15 min，再用柠檬酸铅避二氧化碳染色1～10 min，超纯水清洗3次，滤纸吸干、室温干燥过夜后，采用JEM-1400FLASH透射电镜对各组肾组织中的肾小管上皮细胞外形及其中的自噬体及自噬溶酶体进行观察。 2.3.2 Western blotting检测肾脏组织中自噬相关蛋白及磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路关键蛋白的表达 随机从对照组、模型组、HQD高剂量给药组选取3只大鼠的肾组织，加入含蛋白酶和磷酸化酶抑制剂的RIPA裂解液，冰上匀浆，裂解1 h后，12 000 rmin-1离心10 min，收集上清液；BCA法测定总蛋白浓度。每孔以20 μg蛋白上样，100 V电泳，100 V湿转；5%的脱脂牛奶封闭2 h，加入Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ一抗（1∶1 000），4 ℃孵育过夜，加入二抗（1∶10 000）室温孵育1 h，显色曝光。扫描胶片，分析胶片灰度值。考察HQD对肾组织中Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、PI3K、Akt、mTOR及p-mTOR蛋白表达的影响。 3　结果 3.1　HQD抗DN的药效实验 3.1.1　各组大鼠相关生化指标检测 结果见图1。对照组大鼠精神状态良好，饮食、饮水与大小便正常，皮毛有光泽，体质量逐渐增加。模型组大鼠呈明显的多饮、多尿、多食、体质量下降等糖尿病“三多一少”症状，后期出现不同程度的体毛暗淡、稀疏、精神萎靡，反应迟钝症状。与对照组比较，模型组大鼠FBG、Scr、BUN、TG、TC、LDL-C、24 h U-Alb显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，HQD高剂量组均能显著降低上述药效指标（P＜0.05、0.01）；低剂量组FBG、Scr、BUN、TG、24 h U-Alb显著降低（P＜0.05、0.01）。 3.1.2　肾脏组织病理学观察 HE染色结果显示，细胞核呈蓝色，细胞浆、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。对照组肾小球结构清晰，肾小球系膜区未见明显改变。模型组大鼠肾小球系膜基质增宽、增多，基底膜弥漫增厚，肾小囊腔狭窄，肾小球体积增大。HQD给药组大鼠肾小球系膜轻度增生，肾组织损伤情况较模型组明显减轻，见图2。 Masson染色结果显示，胶原纤维、黏液、软骨呈蓝色，肌肉、胞浆、纤维素、红细胞呈红色，胞核呈蓝黑色。主要用于区分肌纤维和胶原纤维。与模型组相比，HQD给药组大鼠的肾纤维化程度较轻，见图3。 3.1.3　TUNEL检测细胞凋亡情况 荧光显微镜下组织切片上凋亡的细胞呈红色荧光，细胞核呈蓝色荧光。每个样品选取3个高倍视野（400倍），每个高倍视野计数各视野总细胞数，同时计数各视野的凋亡阳性细胞。结果见图4。与对照组比较，模型组细胞凋亡率明显上升（P＜0.01）；而HQD高、低剂量组细胞凋亡率显著下降（P＜0.05）。 3.2　网络药理学研究 3.2.1　潜在靶点 通过检索SwissTargetPrediction得到各个活性成分所对应的靶点基因共600个，去掉重复的244个，剩余356个靶点。通过GeneCard、DisGeNET和OMIM 数据库共获得1 480个与DN相关的靶点，通过制作韦恩图分析，得到114个药物-疾病共同靶点作为活性成分治疗DN的潜在靶点，见图5。 3.2.2　潜在靶点的PPI网络分析 为了获得有关潜在靶点交互作用的信息，将114个潜在靶点上传到STRING平台，进行PPI网络分析，结果见图6。并将结果的TSV文件导入Cytoscape 3.6.0 进行可视化和拓扑分析，PPI网络包括102个节点和451条边，选择“度”（degree）、“介数中心性”（betweenness centrality）和“接近中心性”（closeness centrality）高于中位数的靶点作为关键目标，首次筛选值为degree＞6，betweenness centrality＞0.003 836 8，closeness centrality＞0.413 800 8，筛选后，获得了一个包含41个节点和258条边的新网络；随后筛选值为degree＞10，betweenness centrality＞0.007 837 44，closeness centrality＞0.571 428 57，获得包含19个节点和107条边的中心网络；为了在PPI网络中找到最关键的目标，最后一次筛选值为degree＞11，betweenness cenTrality＞0.014 000 41，closeness centrality＞0.72，筛选获得STAT3、EGFR、VEGFA、JUN、TNF、AKT1、CASP3、mTOR及IL2作为PPI网络中的核心靶点，见图7。其中，mTOR是调节自噬的关键激酶，抑制mTOR可促进自噬。 3.2.3　GO分析和KEGG分析 将114个交集靶点导入Metascape平台进行GO富集分析，共获得 1 581条结果，包含1 388条生物过程（BP）结果，122条分子功能（MF）结果，71条细胞组成（CC）结果，分别选取显著丰富的前15个结果进行可视化处理，见图8。BP主要对激素的反应、MAPK级联调节、细胞对氮化合物的反应、细胞对有机氮化合物的反应和蛋白质磷酸化的正调控等；CC主要涉及膜筏（membrane raft）、膜微区（membrane microdomain）、细胞外基质（extracellular matrix）、膜面（side of membrane）和囊泡腔（vesicle lumen）等；MF主要涉及激酶结合（kinase binding）、蛋白激酶结合（protein kinase binding）、激酶活性（kinase activity）、内肽酶活性（endopeptidase activity）和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性（protein serine/threonine kinase activity）等。表明HQD治疗DN的机制涉及多种生物学过程，体现多重治疗作用。 使用KOBAS3.0共检索到235条富集通路，选取P＜0.001的结果，获得147条显著富集通路，并按“Count” 值由高到低排列，选取前20条通路作为核心通路进行展示，见图9。显示6个成分治疗DN的靶点主要涉及癌症通路、癌症中的蛋白多糖、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路和糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路等信号通路，其中PI3K-Akt信号通路、MAPK通路均与自噬调控相关。与上述“3.2.2 ”项下PPI网络分析得出的“HQD核心作用靶点”进行联合分析后，选择对自噬经典通路PI3K/Akt/mTOR进行验证。 3.3　实验验证 3.3.1　透射电镜观察肾小管上皮细胞中自噬体及自噬溶酶体的形成 结果见图10。检测自噬的金标准是电镜下可观察到结构完整的自噬体及自噬溶媒体。采用透射电镜观察对照组、模型组、HQD高剂量组大鼠肾小管上皮细胞中自噬体及自噬溶酶体的数量。结果显示，对照组肾小管上皮细胞形态结构较正常；细胞核呈椭圆形或类圆形，核仁明显；线粒体呈圆形、椭圆形或长梭形，嵴排列较紧密，胞浆中可见大量溶酶体、自噬溶酶体和空泡。模型组肾小管上皮细胞形态结构出现明显异常。细胞核呈类圆形或椭圆形，核仁明显；线粒体发生肿胀，仅可见少量残留嵴结构，基质颗粒大量丢失；胞浆中自噬溶酶体数量较对照组明显降低。HQD高剂量组肾小管上皮细胞形态结构轻度异常。细胞核呈类椭圆形或类圆形，核仁明显；部分线粒体轻度肿胀，嵴溶解断裂，基质颗粒减少；胞浆中自噬溶酶体及自噬小体数量较模型组有所增加，溶酶体与自噬小体融合较好。 3.3.2　Western blotting检测肾脏组织中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ及PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白的表达 结果见图11。与对照组比，模型组PI3K、Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平显著升高；Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）。与模型组比，HQD高剂量给药组PI3K、Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平显著降低；Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著升高（P＜0.05、0.01）。 4　讨论 自噬是真核细胞的一种自我保护机制，也是细胞内蛋白质降解的主要途径之一。自噬活性正常时，细胞能够及时降解自噬小体内包裹的受损细胞器、侵入的病原体及衰老的蛋白质等，以维持细胞稳态、能量生成及细胞器的更新［19-20］。研究表明［21-23］，DN发生时，肾脏存在显著的自噬失调。自噬缺陷可导致肾小管上皮细胞的损伤，激活自噬能够减轻这一损伤从而保护肾功能。恢复自噬活性可能成为保护肾脏免受高糖损伤的一种新的治疗选择，有望成为防治DN的新靶点。 课题组前期已鉴定出HQD中6个主要原型入血成分（黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、甘草酸）。文献报道［24-28］，黄芪甲苷可通过激活AMPK/eNOS信号通路，改善大鼠糖尿病肾损伤；毛蕊异黄酮葡萄糖苷具有保护血管内皮细胞的作用，能延缓DN患者的血管病变；毛蕊异黄酮能通过调节NF-κB/p65/NLRP3/TXNIP炎症小体信号通路延缓DN的发展；芒柄花素可通过调节Sirt1/PGC-1α通路减轻DN大鼠的肾小管及线粒体损伤；芒柄花苷能通过降低氧化应激和炎症标志物减轻链脲佐菌素诱导的DN大鼠模型的肾损伤；甘草酸能通过调节SNARK/AMPK信号通路保护高糖诱导的肾小球足细胞损伤。然而， HQD在体内发挥抗DN药效作用的分子机制尚不完全明确，限制了其深层次研究。网络药理学能基于中药多靶点效应，从生物信息学上整体分析在HQD治疗DN上所涉及的靶点及信号通路。故本实验以HQD中6个主要原型入血成分为研究对象，采用网络药理学方法对HQD作用靶点及信号通路进行预测，并将114个潜在靶点进行了PPI分析，发现HQD可能主要作用于STAT3、EGFR、VEGFA、JUN、TNF、AKT1、CASP3、mTOR及IL2等核心靶点。其中，mTOR是调控自噬的重要因子。mTOR是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白酶，是磷脂酰肌醇3激酶的相关激酶（PIKK），mTOR复合体是调节细胞自噬的关键分子之一，可作为多条信号通路的中间环节参与细胞自噬调节过程，并影响自噬标志性蛋白LC3的表达。mTOR可与其他调控蛋白相互作用至少形成两个不同的复合物，分别是mTOR复合物1（mTORC1）和复合物2（mTORC2）。虽然这两个复合物含有相同的催化亚基——TOR，但均可磷酸化不同的下游靶点，从而显示出不同的细胞功能。抑制mTOR可促进自噬，响胰岛素抵抗和炎性反应［29-30］。因此，调控mTOR不同的上游信号通路可能是治疗DN的一个新思路。 KEGG通路功能富集分析显示，HQD可能通过作用于癌症通路、癌症中的蛋白多糖、PI3K-Akt信号通路、MAPK等信号通路发挥药理作用。其中PI3K/Akt/mTOR通路为自噬调控的经典通路，通路活化后可激活mTORC1抑制细胞自噬过程［31］。据报道［32］，Beclin-1、LC3蛋白参与自噬小体的形成与自噬溶酶体降解过程，是经典的自噬标志物。自噬小体的减少会导致Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平降低，而激活Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ表达可诱导细胞发生自噬。故本项目选择对经典自噬调控通路PI3K/Akt/mTOR进行验证，并进一步考察HQD对自噬标志蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的调节作用。Western blotting结果表明，HQD可以上调肾组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达，抑制PI3K/Akt通路活化，抑制mTOR的激活；透射电镜观察显示，HQD可以增加肾小管上皮细胞自噬体及自噬溶酶体数量。研究结

二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球是极性的吗，它和PorapakQ什么关系

2012年 第19号　　根据《中华人民共和国食品安全法》和《新资源食品管理办法》有关规定，现批准蛋白核小球藻、乌药叶、辣木叶为新资源食品，变更新资源食品蔗糖聚酯的食用量，公布梨果仙人掌（Opuntia ficus-indica(Linn.)Mill，米邦塔品种）为普通食品。生产经营上述食品应当符合有关法律、法规、标准规定。　　特此公告。　　附件: http://www.foodmate.net/member/fckeditor/editor/images/ext/doc.gif 蛋白核小球藻等4种新资源食品.doc　　卫生部　　2012年11月12日

随着天气变热，冷饮市场销售火爆起来。辽宁省鞍山市中心医院有关专家提醒，入夏后食用冷饮要适量，某些病人更应注意饮食禁忌，否则会影响健康。 具体而言，以下８类人群在食用冷饮时要特别注意。 老人和幼儿。这类人群由于体质较弱，在短时间内吃大量冷饮，可能出现口腔肌肉麻痹、痉挛；由于胃肠骤然受冷，刺激肠粘膜引起胃肠不规则收缩，可能出现腹痛；由于冷热不均，胃肠血管的正常收缩和舒张受到不良影响，导致胃肠功能失调，肠蠕动加快，容易发生腹泻等症状。 糖尿病患者。冷饮料一般含有较多糖分，病人食之可使血糖升高，导致病情加重。 十二指肠溃疡、慢性胃炎、慢性结肠炎、胆囊炎、消化不良患者。这些病人的消化系统功能较差，吃冷饮后容易刺激胃肠粘膜，加重病情。 龋齿、牙质过敏患者。这类病人吃冷饮会诱发牙痛。 高血压、冠心病和动脉硬化患者。这类病人如果大量食用冷饮，会突然刺激胃肠道，使血管收缩，升高，加重病情，容易诱发脑溢血。 咽喉炎、支气管炎、支气管哮喘、关节炎患者。在冷饮的刺激下，这部分人可能咽喉部炎症加重或诱发咳嗽，或引起旧病复发。 肾病患者。这类病人不宜食用含有香精、色素香料等成分的冷饮，因为这些成分会加重肾小球过滤排毒的负担，同时可使浮肿症状更加严重。 肥胖患者。冷饮中含糖多，会增加肝糖元，转化为脂肪，使身体更加肥胖，容易诱发脂肪肝和高脂蛋白血症。

我们实验室购买了一台安捷伦的7890A/5975C的气质联用仪，现在想用这台气质对微藻中，如小球藻，螺旋藻等一些藻类中脂肪酸进行分析。但不知道怎么进行前处理（选择怎样的脂肪酸/油脂甲酯化方法），查了很多文献，感觉越看混乱。还有气质设定怎样的程序，想问问有没有做这方面研究的朋友，给点建议，实在是不知道怎么开始。

根据《中华人民共和国食品安全法》和《新资源食品管理办法》有关规定，现批准蛋白核小球藻、乌药叶、辣木叶为新资源食品，变更新资源食品蔗糖聚酯的食用量，公布梨果仙人掌（Opuntiaficus-indica(Linn.)Mill，米邦塔品种）为普通食品。生产经营上述食品应当符合有关法律、法规、标准规定。　　特此公告。　　附件: http://www.foodmate.net/member/fckeditor/editor/images/ext/doc.gif 蛋白核小球藻等4种新资源食品.doc　　卫生部　　2012年11月12日

[b][size=15px][color=#595959]金匮肾气丸(JGSQW)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是一种传统的中药配方，传统上用于缓解[b]泌尿系统疾病[/b]，如尿频和多尿。临床研究表明，JGSQW与降糖药物联用时具有协同作用，可改善[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]糖尿病[/color][/size][size=15px][color=#595959]肾病(DN)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]，但其作用机制和作用靶点尚不清楚。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]采用DN [b]db /db小鼠[/b]模型，探讨中药金匮肾气丸的治疗作用及其机制。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]采用超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱联用技术对复方金匮肾气丸的主要活性成分、血药浓度和药动学进行分析。此外，采用db/db小鼠模型研究了JGSQW和[b]二甲双胍[/b]对糖尿病肾病小鼠血糖水平、血脂水平、肾功能和肾脏病理的治疗作用。蛋白质组学分析确定了JGSQW治疗DN的主要靶点。[b]免疫印迹[/b]、免疫组织化学和免疫荧光验证了其作用机制。然后通过分子对接和分子动力学、转染、药物亲和反应靶稳定性(DARTS)实验和细胞热迁移实验(CETSA)进一步验证了靶向结合效果。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [align=center] [/align][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]JGSQW联合二甲双胍可显著改善DN小鼠的血糖水平、血脂、肾功能和肾脏病理。JGSQW主要通过靶向主要组织相容性复合体II类[b](MHC II类)分子[/b]发挥其对DN的治疗作用。免疫组化结果显示，JGSQW抑制I型胶原、纤维连接蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。免疫荧光和Western blot结果显示，JGSQW抑制MHC II类分子H2-Ab1和H2-Aa的表达，从而抑制CD4+ T细胞浸润，改善糖尿病[b]肾纤维化[/b]。[b]芍药苷与H2-Aa的结合能力[/b]通过分子、DARTS和CETSA检测进行了预测和验证。80 μM芍药苷可有效减轻高糖诱导的MPC-5损伤模型。在此模型浓度下，H2-Aa过表达，Western blotting进一步证实[b]芍药苷通过调节H2-Aa减轻肾小球足细胞纤维化[/b]。[/color][/size][color=#3573b9]结论[/color][size=15px][color=#595959][/color][/size] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][font=&][/font][/color][/size][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][/color][/size][b][size=15px][color=#595959]JGSQW联合二甲双胍可能通过下调免疫复合物MHC II类分子，减弱MHC II类对CD4的抗原递呈作用，具有协同缓解糖尿病肾病肾纤维化的作用。[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][font=&][/font][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]

有用过二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球为固定相的毛细管柱的吗？国厂进口都行？我在市场上买不到？有知道的朋友告一下货号和品牌。谢了！