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  • 什么是体细胞数?如何降低生鲜乳中的体细胞数?

    生鲜乳中体细胞数(SomaticCellCount,简称SCC)反应生鲜乳卫生状况和奶牛乳房健康的状态。体细胞通常由巨噬细胞、淋巴细胞、脱落上皮细胞和中性白细胞等组成。当乳腺被感染或受机械损伤后,体细胞会上升,受感染乳区的乳汁中大约99%的细胞是白细胞。  1、高体细胞数对乳制品的影响主要有:(1)牛奶味道变异;(2)牛奶贮存期缩短;(3)乳清量增加、酪蛋白收缩性降低,导致奶酪的产量下降。  2、引发高体细胞数原因有:(1)可能有隐性乳腺炎发生 发生隐性乳腺炎时,感染牛很少有临床症状,肉眼观察乳汁正常,故常常误将感染乳区的乳作正常牛奶处理,造成生鲜牛奶中体细胞的升高。(2)牛群结构偏老 一般而言,胎次越小的牛只体细胞越低。因为老龄牛只长期接触乳腺炎病原菌,免疫功能下降,有更多的被感染机会。  3、降低生鲜乳中SCC,重点应从以下方面着手:(1)减少乳房机械性损伤。牛床、运动场、挤奶厅、饲槽、水槽等奶牛活动区域无尖锐物品,机械挤奶时不可过挤,以避免引起乳房损伤。(2)减少病原菌等生物侵袭。加强环境消毒,及时杀灭环境中的有害微生物。(3)日粮营养充足、均衡,提高机体抗感染能力。(4)定期(至少每月1次)进行牛群隐性乳房炎检测,及时进行乳房炎预防。(5)隔离患有传染性乳房炎的奶牛,淘汰患有慢性乳房炎的母牛等。

  • 中医药可整体布局防乳腺癌转移

    中医药可整体布局防乳腺癌转移  乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率已居女性恶性肿瘤发病率的首位,严重威胁着妇女身体健康。目前,手术切除仍然是乳腺癌的主要治疗方法,但术后的并发症、复发或转移是威胁患者生存的主要原因,中医药扶正固本、祛邪,在术前、术中及术后的运用,在改善术后患者体力、调动机体抗病能力、减轻放化疗毒副反应、提高生活质量、控制肿瘤复发转移、延长生存期方面有着重要作用和独特优势。  在乳腺癌手术前给予患者中医药治疗,可改善机体一般状况,增强体质,调理因疾病引起的脏腑功能障碍,减轻手术对患者机体的损伤,有利于手术进行,对控制肿瘤的发展和潜在的转移及术后患者体质的恢复,有很好的帮助。  在乳腺癌手术中,由于麻醉、创伤出血等易导致机体耗气伤阴、气血两虚,中医常予益气滋阴、清热养血、健脾益气等方法治疗,使手术造成的损伤尽早康复,以利于接受其他治疗。  乳腺癌手术后,通过中药辅助治疗,可防止和减少复发、转移,延长生存时间。临床与实验研究初步证实,长期使用中药治疗可达到这一目的。扶正中药可以改善机体免疫功能,活血化瘀中药可降低血液黏度、血小板聚集,抑制肿瘤灶周围新生血管形成,使癌细胞不能集聚停留,增加了宿主细胞的杀灭机会。其他如对肿瘤基质降解酶、血小板黏附蛋白表达等的研究也显示了中药抗浸润、抗转移作用的可能性。  中医药防治乳腺癌转移是多步骤、多环节与多途径的整体防治,不同于西医仅是单环节的阻断某一个转移步骤或途径,相比之下,有着整体的优势和丰富的治疗途径。中药在抗乳腺癌复发转移方面首先表现在改变癌毒特性,最大限度杀灭癌毒;其次能整体调控,提高机体抗癌能力,又能改善病理瘀滞,阻断转移途径,是从肿瘤病因病理基础上起效。如对肝转移者,在化疗基础上,加用健脾益气、活血化瘀药物,通过扶正与祛邪结合,既有支持强壮作用,又有明显的抗癌效果,对提高乳腺癌患者的生存质量具有明显疗效,对化疗减毒亦有较好的作用。摘自人民网

  • 新鲜的蔬菜水果可抗乳腺癌

    新鲜的蔬菜水果可抗乳腺癌。加拿大国家癌症研究会综合12项研究资料认为,新鲜的蔬菜水果对不同年龄的妇女都有抗乳腺癌作用。从红葡萄、红苹果皮、辣椒、洋葱等普通的蔬菜中提取出的黄酮类化合物山柰酚和槲皮素可预防和治疗早期乳腺癌。卷心菜、花椰菜、球芽甘蓝等十字花科蔬菜,以及胡萝卜、芦笋、大蒜等均对预防乳腺癌有较好的效果。

  • 气相色谱法测定乳腺癌患者乳腺脂肪中六六六、滴滴涕残

    [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法测定乳腺癌患者乳腺脂肪中六六六、滴滴涕残留量  农业上大量使用六六六、滴滴涕农药造成环境污染,人体内的六六六、滴滴涕主要来自饮食,大量文献报道,六六六、滴滴涕在人体脂肪中蓄积。近年来,有机氯农药与人体乳腺癌之间的联系引起了人们的重视和研究。本文对测定人体乳腺脂肪中的六六六、滴滴涕的方法进行了探讨,改进了脂肪中有机氯的提取方法,测定了乳腺癌病人乳腺脂肪中六六六、滴滴涕的残留量,取得了满意的结果。材料和方法  一、仪器GC—RIA[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url](日本岛津公司生产);RPR—GI数据处理机(日本岛津公司生产);玻璃研钵;具塞三角烧瓶(125ml);层析柱(1.0 m×30 cm);振荡器;K—D浓缩器。二、试剂1.正己烷,分析纯。2.弗罗里硅土,中性氧化铝,硅镁吸附剂。3.无水硫酸钠。4.六六六标准液:准确称取α-666、β-666、γ-666、δ-666各0.1mg,用正己烷定容至10ml,浓度为10 μg/ml(10 mg/L)。5.滴滴涕标准液:准确称取P,P’-DDT、P,P’-DDE、O,P-DDE、O,P’-DDT各0.1mg,用正己烷定容至10 ml,浓度为10 μg/ml(10 mg/L)。6.混合标准溶液:取六六六标准液1 ml,滴滴涕标准液2.5 ml于50 ml容量瓶中,用正己烷定容至刻度,六六六4种异构体的浓度均为0.2mg/L,滴滴涕4种异构体的浓度均为0.5 mg/L。三、测定方法1.样品提取:称取1 g乳腺癌患者乳腺脂肪样品于研钵中,加无水硫酸钠一起研磨,直至成干粉状,转移至具塞三角烧瓶中,加20ml正己烷浸泡2小时,置振荡器上振荡3分钟提取。然后用定量滤纸通过无水硫酸钠过滤到瓷蒸发皿中,再用20ml正己烷分两次洗涤样品一并过滤至蒸发皿中,于30℃水浴上蒸发至5 ml,以备上柱净化。2.净化:于层析柱底端垫以少量脱脂棉,然后加入5 g无水硫酸钠,4 g弗罗里硅土,用15ml正己烷淋洗,弃去淋洗液,加入上述样品提取液,待5 ml样品溶液作者单位:250062 济南市,山东省劳动卫生职业病研究所全部从层析柱上洗脱后,再用60 ml正己烷淋洗,收集洗脱液,于30℃水浴上蒸发至2~3ml后移入K—D浓缩器中,通氮气吹至1 ml,供色谱分析。3.色谱分析:①色谱条件:电子捕获检测器;玻璃填充柱(2 m ×3 mm)内装涂有1.5%OV-17+19.5%QF-1固定液的ChromosorbW AW-DMCS担体;柱温:205℃;汽化室温度:250℃;检测室温度:270℃;载气:高纯氮流量,40ml/min。②样品分析:将处理好的样品溶液用1μl微量注射器取0.2 μl注入色谱柱中,以保留时间定性,峰面积定量,用外标法计算残留量(10个样品带一个质控样)。结果与讨论  一、色谱柱的选择由于所测的六六六、滴滴涕农药各有4种异构体,且脂肪样品中的有机物干扰样品测定,为此我们选择比较了5%OV-210,5%OV-17,1.5%OV-17+19.5%QF-1三种类型的填充柱,实验结果表明:5%OV-210和5%OV-17填充柱能很好的分离8种标样,但与脂肪中的有机物杂质不能很好的分离。而1.5%OV-17+19.5%QF-1填充柱,既能使六六六、滴滴涕的各种异构体很好的分离,又能把样品中的杂质分离开来,因此我们选择了1.5%OV-17+19.5%QF-1填充柱。二、提取方法的选择近年来报道的脂肪中有机氯的提取方法一般多采用将样品与能和水混溶的有机溶剂,如丙酮、氯仿、乙腈等一起混合提取或用索氏提取器加热回流提取,然后再用其他有机溶剂,如正己烷、二氯甲烷进行液-液分配,将有机氯转移至有机溶剂中,此提取方法繁琐,易产生乳化,经过多重转移而造成被分析物损失大。为此,我们探讨了一种简便易行提取方法,即脂肪样品用无水硫酸钠除去水份后,直接用正己烷提取,回收率在86.9%~95.2%之间。三、净化柱的选择及淋洗剂用量的选择用正己烷提取脂肪样品,样品中的杂质亦会被提取而干扰色谱测定,为此我们试验了中性氧化铝、硅镁吸附剂及弗罗里硅土对样品的净化效果,发现在弗罗里硅土净化柱上六六六、滴滴涕可定量的吸附和解吸,并能与杂质峰很好的分离。实验证明,用60ml正己烷就可以把被测样品全部洗脱下来。四、回收率试验称取1 g样品(共18份)分成3组,每组分别加入1.0、3.0、5.0 ml混合标准溶液(六六六4种异构体的浓度均为0.2mg/L,滴滴涕4种异构体的浓度均为0.5 mg/L),然后按样品处理步骤进行,测得结果见表1。五、检测乳腺癌患者乳腺脂肪中六六六、滴滴涕的残留量用本方法测定了100例乳腺癌患者乳腺脂肪样品,测定结果见表2。表2乳腺癌患者乳腺脂肪中六六六、滴滴涕的残留量 (μg/kg) 参考文献1 Dale WE,Quinby GE.Chlorinatedinsecticides in the body fat of people in the United States.Science,1963,142:5952 Strassman SC,Kutz FW.In Toxicology of Halogenated Hydrocarbons.In:Khan MAQ,Stanton RH,Eds.Health & Ecological Effects.New York:Pergamonpress,1981:38-493 Mes J,Daries DJ, Turton D.Polychlori-nated biphenyl and otherchlorinated hydrocarbon residues in adipose tissue of Canadians.BullEnviron Contam Toxical,1982,28:794 Snyder D, Reinert R.Rapid separation of polychlorinated biphenylsfrom DDT and its analogues on silica gel.Bull Environ Contam Toxicol,1971,6:385

  • 数字PCR在乳腺癌预防及诊断中的应用

    乳腺癌是女性排名第一位的常见恶性肿瘤。2011年美国CA: A Cancer Journal for Clinicians杂志公布的最新统计数据显示,美国2011年预计将有超过23万女性罹患乳腺癌,占女性新发恶性肿瘤的30%。其中15%-25%的乳腺癌患者显示为HER-2基因过表达。HER-2/neu(又称c-erbB-2)基因为表皮生长因子受体家族成员之一,是一种原癌基因,研究表明,HER-2/neu基因扩增或过表达的乳腺癌患者易早期复发且生存期缩短。检测HER-2基因是否高表达对于患者的预后判断、治疗方案的选择具有重要意义,HER-2是乳腺癌明确的预后指标和药物治疗效果的预测指标。

  • 《自然》公布乳腺癌耐药性与FOXA1相关

    《自然》公布乳腺癌耐药性与FOXA1相关最近一期的生命科学前沿杂志《自然》公布了一项乳腺癌研究结果,结果显示,部分乳腺癌患者对常规乳腺癌标准激素治疗产生极强的耐药性,是因为雌激素受体在受到一种名为FOXAI蛋白质的干扰,在这种蛋白的感受下雌激素受体“工作路线”发生改变,导致雌激素受体与DNA链条上的基因结合紊乱,这一紊乱造成了乳腺癌激素治疗的耐受。  激素与乳腺癌的关系  ER影响基因引发连锁致癌  新桥医院肿瘤生物治疗中心的专家告诉我们雌激素作为一种生理性激素,一旦水平升高,会延长雌激素对乳腺上皮的刺激,改变体内内分泌环境,导致细胞恶变,从而造成乳腺癌发生。因此乳腺癌的发生、发展与雌激素密切相关。  1896年,Bentson就发现乳腺细胞的增生及癌变与激素密切相关,并观察到切除卵巢可使进展期乳腺癌消退。  1967年,Jensen发现人类乳腺癌细胞中含有雌激素受体(ER),这是一种能与基因结合的物质,通过与基因结合,从而改变基因的表达。  大多乳腺癌患者,由于雌激素受体(ER)影响DNA的正常表达,引发了癌症的连锁反应。这种不正常的受体与DNA的结合物随后移位到细胞核与成千上万的基因结合并激活它们,从而产生生物学效应,肿瘤生产的帕多啦从此被打开。  但在这个过程中部分细胞会保留正常的受体系统,肿瘤细胞含有激素受体的功能与正常细胞相似,该肿瘤细胞的生长,仍然依赖原来的激素环境调节,这类肿瘤称为激素依赖性肿瘤,临床上称为ER阳性肿瘤;相反,有些肿瘤在癌变过程中,其受体系统保留很少或完全丧失,不能再作为激素的靶细胞,其生长不再受激素的控制与调节,此乃非激素依赖性肿瘤。  新桥医院肿瘤细胞免疫治疗中心的专家说:临床上我们把这种肿瘤细胞内激素受体含量水平,作为乳腺癌内分泌治疗预后的指标,对于激素依赖性乳腺癌患者,内分泌治疗非常重要,临床中约有60%—70%的乳腺癌是“激素依赖性”,如雌激素受体(ER)阳性和孕激素受体(PR)阳性的乳腺癌被认为是激素依赖性肿瘤,此类复发转移乳腺癌患者内分泌治疗有效率可达30%—50%,早期术后患者接受内分泌治疗可以减少约二分之一的复发危险和三分之一的死亡危险。在内分泌治疗的同时结合自体免疫细胞治疗,可起到巩固内分泌治疗的作用。  FOXA1的研究 揭示乳腺癌耐受的根源  对FOXA1蛋白质的研究,这是一个很重要的研究课题,可能揭示一些激素依赖性乳腺癌患者为何产生耐药。  一般来说,雌激素受体会和基因组上固定的一些位点结合,从而产生生物学效应,一些药物就是抑制这种结合,达到治疗肿瘤的目的。而根据研究报告,在FOXA1蛋白的作用下,雌激素受体改变了“工作线路”,不再结合到常规的基因组位点上,而与其他基因组位点结合,这样就导致了原本针对性的药物作用降低甚至失去效应,导致药物无效。了解了这一原理,对乳腺癌用药具有指导意义。  从FOXA1入手 能够攻克乳腺癌  能否针对FOXA1蛋白,开发出特定的药物,改善乳腺癌治疗效果?  新桥医院肿瘤专家表示有这个可能,但需要一个过程。因为从细胞学研究到临床转化是一个长期的过程。但我们在这段过程中要时刻留意患者的耐受情况,发现耐受应迅速更换方案,寻求一种肿瘤标志物引导的更科学的生物治疗方案。

  • 【转帖】美研究人员发现两项乳腺癌风险因素

    美国梅奥诊所一项最新研究显示,拥有致密型乳腺和乳腺小叶未退化的女性罹患乳腺癌的风险显著提高。梅奥诊所研究人员在新一期美国《国家癌症研究所杂志》(JNCI)网络版上报告说,他们对2666名年龄在18至85岁患有良性乳腺病的妇女进行了超过13年的追踪调查,其间共有172名妇女患上乳腺癌。结果发现,致密型乳腺和乳腺小叶未退化是诱发乳腺癌的两项独立风险因素。与拥有非致密型乳腺以及乳腺小叶完全退化的妇女相比,同时具有致密型乳腺和乳腺小叶未退化两项风险因素的妇女患乳腺癌的几率显著提高。据介绍,致密型乳腺是指乳房拥有较多的胸腺组织和导管,而脂肪含量较少,这意味着癌细胞将有更多发展和隐藏区域;乳腺小叶退化是乳腺上皮细胞的正常生理萎缩,并随着年龄的增长而加快。梅奥诊所研究人员在此前一项研究中发现,乳腺癌变通常发生在乳腺小叶,如果乳腺小叶随着年龄增长而逐渐退化,妇女患乳腺癌的风险将会降低。

  • 新方法能快速早期诊断乳腺癌

    新华社柏林11月2日电 乳腺癌是女性健康的主要杀手之一。早期诊断乳腺癌的病理切片检查要多次进行,令患者非常痛苦。近日,德国科研人员开发出一种核磁共振与超声波检查相结合的新方法,能够快速、准确地为患者做病理切片检查,大大减轻患者的痛苦。 德国弗劳恩霍夫协会日前发表公报说,这一名为“超声波磁共振成像”系统是由德国弗劳恩霍夫生物医学技术研究所和医学影像处理研究所专家联合开发的。 这项新技术仅需在检查开始时用核磁共振仪对患者胸部进行一次扫描,接下来的病理切片过程将在超声波的引导下进行。新系统会把初始的核磁共振图像精确地传输到屏幕上。医生可以同时看到超声波扫描与核磁共振的图像,准确地把针头插入疑似肿瘤所在的位置。 研发这一新系统最大的挑战在于,患者在核磁共振扫描时要面朝下躺着,而在进行病理切片时要仰面朝天,体位的变化会改变患者胸部的形状,从而使疑似肿瘤所在位置发生极大改变。 为了克服这一难题,研究人员让病人在接受核磁共振扫描的同时,让超声波探头附着在患者的胸部皮肤上。这样,医生既可以看到连续的核磁共振扫描数据,也可以看到超声波图形。 当患者到另一房间接受病理切片时,超声波探头仍附着在其胸上,以连续记录超声波数据并跟踪胸部形状的变化。通过特殊的算法分析这些超声波数据,就可以相应更新核磁共振图像和疑似肿瘤部位的位置变化,从而更精确地引导取样的针头。 除进行乳腺癌的病理切片外,研究人员表示这一新系统的关键技术还可被应用于肺部、肾脏等器官的检查中。

  • 新X光乳腺成像法可使辐射剂量降低25倍

    中国科技网讯 据物理学家组织网10月22日报道,一个国际研究小组开创了一种新型X光乳腺成像方式,能够以比现在常用的二维放射摄影术低出约25倍的辐射剂量拍摄乳房的三维X光图像。同时,新方法还能使生成的三维高能X射线计算机断层扫描(CT)诊断图像的空间分辨率提升2倍至3倍。相关研究论文发表在同日的美国《国家科学院学报》在线版上。 目前常用的乳腺癌扫描技术是“双重视图数字乳腺摄影术”,它的缺陷在于只能提供两幅乳腺组织的图像,这就解释了为何10%至20%的乳腺肿瘤都无法被探测到。此外,这种摄影术偶尔也会出现异常,造成乳腺癌的误诊。 而CT这种X射线技术虽能生成精确的人体器官三维可视图像,但却不能经常应用于乳腺癌的诊断之中,因为其对于乳房等对辐射敏感的器官而言,可能造成长期影响的风险过高。 新技术则有望克服上述限制。目前科研人员正在利用同步加速器X光对这一技术进行测试,其一旦在医院投入使用,将使CT扫描成为能够补充双重视图数字乳腺摄影术的诊断工具之一。 高能X射线和相衬成像技术的使用,再加上复杂的新型EST数学算法,能够基于X光数据重建CT图像,使CT扫描有望用于早期的乳腺癌排查,成为抗击乳腺癌的强大工具。身体组织将在高能X射线的照射下变得更加透明,因此所需的辐射剂量能够显著降低6倍左右。相衬成像也允许在拍摄同样的照片时使用更少的X射线,EST算法也可在降低4倍辐射的情况下获得相同的图像质量。研究团队以这种方式从多个不同角度拍摄了512张乳房图片,并据此形成了比传统乳腺摄影清晰度、对比度和整体图像品质更高的三维图像。 科研人员称,这些高质量的高能X射线CT图像是欧洲同步加速器辐射源(ESRF)研究中心10年的奋斗成果,同样付出努力的还有德国慕尼黑大学以及美国加州大学洛杉矶分校。他们还表示,下一步的研究目标是基于此项技术实现其他人类疾病的早期可视化,并开发出大小适合的X射线源,力图早日实现该技术的临床应用。(张巍巍) 《科技日报》(2012-10-24 二版)

  • 【转帖】六部门:严禁在乳品广告中宣传“无抗奶”等内容

    据卫生部网站消息,近期,少数乳品企业宣称生产“无抗奶”,误导消费者,严重扰乱乳品生产经营秩序。卫生部、农业部、工商总局、质检总局、工业和信息化部和国家食药监局联合发出公告,严禁在乳品标签、标识和广告中宣传“无抗奶”等不科学、不符合实际的内容。 公告称,自即日起,各乳品 生产经营和餐饮企业应当停止“无抗奶”生产经营活动。自2009年6月30日起,各有关监管部门开始依法查处。 公告要求,奶畜养殖者、生鲜乳收购者和乳制品生产企业要严格执行《乳品质量安全监督管理条例》、《兽药管理条例》等法规的规定,禁止销售、收购和加工尚在用药期和休药期内的奶畜产的、不符合健康标准或者未经检疫合格的奶畜产的以及其他不符合法规标准的生鲜乳,确保乳品质量安全。 公告指出,各地要加强奶畜养殖、生鲜乳收购、乳品生产流通和餐饮消费等环节的监督管理,依职能、依法查处违反《食品标识管理规定》、乳品质量不符合《动物性食品中兽药最高残留限量》规定的违法行为,维护乳品生产经营秩序。 公告强调,发现乳品违法生产经营活动和宣传“无抗奶”的,消费者有权向当地卫生、农业、工商、质量技术监督和食品药品监管部门举报。 名词解释:无抗奶 无抗奶是指用不含抗生素的原料生产出来的牛奶。“抗”是指用来治疗病牛所用的各类抗生素,常见的有青霉素、链霉素等。奶牛在每年换季时易患乳腺炎,并且采用机械榨乳也比人工挤奶使乳牛更易患乳腺炎,向牛乳房部位直接注射抗生素,奶牛能尽快恢复健康。经过抗生素治疗的奶牛,在一定时间内产生的牛奶会残存着少量抗生素,这种奶不能作为食用奶原料进行加工生产。无抗奶已成为通用的国际化原料奶收购的标准 ,一个企业的乳制品要想进入国际市场,原料奶必须达到“无抗”的标准。

  • CATO独家 | 新型治疗乳腺癌杂质——帕布昔利布杂质

    CATO独家 | 新型治疗乳腺癌杂质——帕布昔利布杂质

    ◇关于帕布昔利布杂质 帕布昔利布杂质是一种治疗乳腺癌的杂质,它也是一种新型的CDK4/6抑制剂,它是FDA首个获得批准的药物。帕布昔利布杂质是通过调节细胞周期,抑制CDK4和CDK6的活性,从而阻止细胞从G1期进入到S期,进一步抑制DNA的合成。 帕布昔利布首次于 2015 年 2 月在美国获得批准,CATO标准品提供的帕布昔利布杂质,在妇女绝经后的人群中还显示它还可以与来曲唑合并用于 HR+、HER2-晚期或转移性乳腺癌治疗。[img=,600,523]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/02/202402040904326373_1427_6381607_3.png!w600x523.jpg[/img]

  • 【金秋计划】小柴胡汤治疗乳腺癌的网络药理学机制探索及实验验证

    [size=15px][color=#595959]在全球范围内,[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]乳腺癌[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是女性中最常见的[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]恶性肿瘤[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959],也是中国女性中最常见的癌症,是第五大癌症死亡原因。此外,乳腺癌已成为威胁全世界妇女健康的严重疾病。目前,乳腺癌的主要治疗方法是手术、放疗和化疗。化疗是不能接受手术的乳腺癌患者最重要的治疗方法之一。然而,[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]放化疗[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]的严重副作用往往会阻碍治疗计划的实施,导致治疗效果不理想。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]许多研究表明,中药在治疗癌症方面具有独特的优势,可以改善乳腺癌患者的[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]生活质量[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。因此,研究中药的抗乳腺癌作用及其分子机制对乳腺癌的治疗具有重要意义。[b]小柴胡汤(XCH)[/b]是中药经典方剂,最早载于《伤寒论》,并已载入《中华人民共和国药典》。在中国,XCH在临床上用于治疗多种肿瘤,如[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]肺癌[/color][/size][size=15px][color=#595959]、[/color][/size][size=15px][color=#595959]结直肠癌[/color][/size][size=15px][color=#595959]、[/color][/size][size=15px][color=#595959]肝癌[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]等,也包括乳腺癌。然而,其潜在的作用机制尚不明确。[/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]采用[b]Q - Exactive Orbitrap[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱联用技术([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS)[/b]对XCH煎剂中的化学成分进行鉴定。然后,从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)中筛选XCH汤的有效成分和靶点。接下来,利用Cytoscape和metscape构建了一个活性成分-靶标-疾病网络,其中包括蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络、GO富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)途径分析。最后通过分子对接和体外实验对[b]网络药理学[/b]分析结果进行验证。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]通过Q Exactive Orbitrap [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS分析,鉴定出70多种主要化合物。共鉴定出XCH煎剂与乳腺癌相关的162种有效成分和153个靶点,构建复方靶点-疾病网络。GO和KEGG分析显示,XCH煎剂调节[b]药物反应、细胞凋亡过程、肿瘤通路和PI3K/Akt信号通路[/b]。分子对接和实验验证表明,XCH汤通过调节凋亡相关蛋白的表达,[b]抑制PI3K/Akt通路,抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡[/b]。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]该研究提示XCH煎剂可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、下调PI3K/Akt信号通路来治疗乳腺癌,为XCH汤在乳腺癌治疗中的临床应用提供了理论依据。[/color][/size]

  • 牛奶分析应用导致乳制品中抗生素污染的途径

    牛奶分析器与牛奶分析仪的共同结论,最终导致乳制品中抗生素污染的途径主要有以下几个方面:(1) 饲料污染:为了防治奶牛的肠胃疾病、乳腺炎等,奶农会将抗生素直接掺杂在奶牛的饲料中。为了快速治愈这些疾病,奶农常常大量的掺加抗生素,从而导致奶牛体内抗生素大量积累,进而污染牛奶。(2) 乳房内注射:乳腺炎是奶牛的易患病之一,治疗奶牛乳腺炎的方法有很多,其中最直接的,同时也是奶农最常用的方法就是乳房内注射抗生素。这种方法快速、有效,但是很容易导致牛奶中含有抗生素。(3) 在牛奶中直接掺加:挤出的牛奶有时不能及时的送往奶站,如果保存不当就会使牛奶变质。有些不法分子为了防止牛奶变质,直接在牛奶中加入抗生素进行防腐。(4) 牛奶分析仪可检测出,在给患病奶牛使用过的挤奶工具和贮奶设备,未经彻底清洗和消毒就用于其他健康奶牛,造成牛奶中抗生素的污染。 如果牛奶中含有抗生素,不但对消费者有较大的危害,对于乳制品厂商也有不利的影响。虽然可以利用市面上的牛奶分析仪与乳制品检测仪检测出来,但是并不普及。其危害主要有以下几个方面:(1) 有些人对抗生素过敏,食用含有抗生素的乳制品会造成不同程度的过敏反应,严重的可能危及生命。(2) 长期食用含有抗生素的乳制品,相当于长期低剂量摄入抗生素,这样会使人体内的细菌产生抗药性,给今后患病时使用抗生素治疗带来不利的影响;另外还会破坏人体内正常菌群的平衡状态,使菌群失调,甚至造成二重感染,使重症患者病情难以控制。(3) 牛奶中残留的抗生素会影响牛奶的品质,同时也影响牛奶的发酵,致使其深加工制品,如黄油、酸奶、奶酪等的产量和质量降低,给生产者造成经济损失。(4) 一些性质稳定的抗生素被排泄到环境中会造成环境污染,破坏生态平衡。2010 年底到 2011 年初闹得沸沸扬扬的“超级细菌”问题就是典型的抗生素滥用的后果之一。通过牛奶分析仪和乳制品检测仪可以检测,不过如果长期食用含有抗生素的乳制品,人体内很可能出现“超级细菌” 这样人们在需要使用抗生素治疗时就会面临无药可用的状态,这样的后果是很严重的

  • 【资料】DHI相关知识

    体细胞乳成份组合型乳品分析仪(DHI系统)一、仪器适用范围和检测范围:DHI组合式乳品分析仪是基于红外技术,以及流动细胞技术,用于快速检测牛奶和各种乳制品中的各种理化指标以及牛奶中的体细胞数的分析仪器。可以用做乳制品研究开发,收奶站按质论价以及成品质量控制和奶牛牧场的管理等方面。(一)、牧场管理首要的工具为了配合畜牧场提高原料奶质量的要求,必须了解每一头奶牛的生理状况的正确信息,这些信息可以通过加入DHI(牛奶育种改良)协会作为会员获取,协会记录每一头奶牛的产奶量,并对牛奶进行分析(每年11次)这种方法获得的产奶量理化指标成分含量以及体细胞含量等数据可以应用于:饲养最优化;育种选择;亚临床乳腺炎早期检定。(二)、提前发现奶牛亚临床乳腺炎能够减少损失奶牛乳腺炎是牧场中支出最大的奶牛疾病。兽医的费用、抗生素、滞留奶、产量减少、牛奶收购价格的降低以及病牛剔除等,每一例病的平均损失约在250-300美元。临床乳腺炎是奶牛分泌不正常的牛奶,同时乳房肿大。而亚临床乳腺炎不会引起可见的变化,所以更难发现。但在亚临床乳腺炎阶段,奶牛的产奶量已经大幅度降低。当牛群中没有一头牛具有临床乳腺炎症状的时候,即有15-40头牛患亚临床乳腺炎,这意味着未被发现的感染造成的潜在的损失是非常巨大的。发现亚临床乳腺炎的最好方法是逐月对每一头牛的奶样进行体细胞书的跟踪检测,就如DHI奶牛育种改良组织所进行的那样。(三)、保证更理想的产品质量、货架期和收益从乳品业的角度来看,根据体细胞数含量和理化指标的测定对原料奶收购进行分级支付,其好处是显而易见的,因为高的体细胞数含量的原料奶会导致: 蛋白质、脂肪和乳糖的含量降低,导致干酪产量的下降等 脂肪酶活性和游离脂肪酸含量提高,导致成品酸败、货架期缩短 免疫球蛋白水平的提高对牛奶的发酵有副作用钠和氯化物的增多将会产生难闻的盐味二、仪器可以检测的指标:经济型组合式乳品分析仪可以检测原料奶及各种乳制品中的脂肪、蛋白质、总固含量、乳糖等组分,同时可以对体细胞进行计数,还可以对样品进行温度的控制。系统配置自动进样系统。[~160244~]

  • 【分享】3种方法检测牛奶中抗生素残留

    长期使用抗生素会造成畜禽免疫力下降,引起畜禽内源性感染和残留,而食用过抗生素超量的畜产品的人,会产生抗药性,或大量蓄积而对机体产生毒害。近年,牛奶中的抗生素残留成为人们日益关注的话题。  奶牛乳腺炎是世界奶牛养殖业中发病率最高、流行最快、造成损失最大的疾病之一。根据美国奶协统计,亚临床型奶牛乳腺炎发病率高达50%,而总发病率可占整个牛群的70%。  抗生素是目前国内外普遍采用的一种治疗奶牛乳腺炎的手段。欧美等国多年前明文禁止抗生素残留超量的牛奶上市。1990至1991年期间,美国奶业基金会规定超过允许量标准的牛乳及其乳品全部废弃处理,不得食用。近年来,我国也颁布了相关管理条例,但是牛奶中抗生素残留问题仍然不时发生。  目前抗生素的检测方法,按照检测原理和使用的仪器可分微生物法、免疫法、理化仪器法等3类:  微生物测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留。微生物法的优点是费用低,一般实验室都能操作。缺点是时间长、显色状态判断通过肉眼辨别、易产生误差、对微红色者无法做出准确判断、操作复杂。

  • 【分享】3种方法检测牛奶中抗生素残留

    长期使用抗生素会造成畜禽免疫力下降,引起畜禽内源性感染和残留,而食用过抗生素超量的畜产品的人,会产生抗药性,或大量蓄积而对机体产生毒害。近年,牛奶中的抗生素残留成为人们日益关注的话题。 奶牛乳腺炎是世界奶牛养殖业中发病率最高、流行最快、造成损失最大的疾病之一。根据美国奶协统计,亚临床型奶牛乳腺炎发病率高达50%,而总发病率可占整个牛群的70%。 抗生素是目前国内外普遍采用的一种治疗奶牛乳腺炎的手段。欧美等国多年前明文禁止抗生素残留超量的牛奶上市。1990至1991年期间,美国奶业基金会规定超过允许量标准的牛乳及其乳品全部废弃处理,不得食用。近年来,我国也颁布了相关管理条例,但是牛奶中抗生素残留问题仍然不时发生。 目前抗生素的检测方法,按照检测原理和使用的仪器可分微生物法、免疫法、理化仪器法等3类:

  • 【分享】乳业标准之争:分级还是一步到位?

    对于炙热的乳业标准争论,国内一家奶业企业董事长也按捺不住发出一份建言书,直言国家标准牛奶卫生指标过低,建议增加牛奶体细胞检测。 业内人士预计,如执行每毫升60万的体细胞检测标准,预计国内80%的牛奶不合格。 而此前,内蒙古奶业协会秘书长那达木德在接受《人民日报》采访时表示,如果现在就要求按照乳业发达国家的标准来执行,那么占总量70%的散养户绝大部分都要倒奶、卖牛、杀牛。 针对此现状,有业内人士提议,可对牛奶进行分级,通过市场选择渐进地提高乳业标准。 国内奶牛健康状况不佳 据了解,牛奶中的体细胞由巨噬细胞、淋巴细胞和多形核嗜中性白细胞等组成,体细胞的数量反映奶牛的健康状况,有乳房炎、乳腺炎的奶牛所产的牛奶体细胞数量较多,健康奶牛所产的体细胞数量较少。上述董事长在建言书中表示:"国家标准对牛奶中的体细胞一定要检,它体现奶牛健康状况,有乳房炎、乳腺炎的牛奶是不能喝的。" 有业内人士向《第一财经日报》记者透露,中国奶牛乳房炎发病率与国外先进水平差距较大,美国奶牛乳房炎的发病率3%~5%,中国奶牛乳房炎的发病率不低于30%,如果按照每毫升牛奶体细胞数量不超过60万的标准来检查,国内估计有80%的牛奶无法达标,只能倒掉。 在微生物指标方面,生鲜乳菌落总数以前允许每毫升50万个,按照新的国家标准,菌落总数提升到每毫升200万个,这一标准被广州市奶业协会会长王丁棉批评为全球最差的标准。 有发改委官员曾经指出,这样的标准出台后引起社会较大争议。上述董事长表示:"牛奶中的微生物主要是从挤奶到加工前这一段后期感染造成的,微生物指标主要体现企业对原奶过程控制的手段和管理水平。" 在封闭的环境中,奶牛通过挤奶设备挤出后迅速进入鲜牛奶冷藏罐中,然后通过冷链运输系统进入加工车间,只要尽量减少接触空气以及外部环境,可以最大程度减少牛奶中微生物的数量。建议书称,澳大利亚要求微生物每毫升超过50万就不能食用,按照这个标准,国内只有30%~40%的牛奶能够达标。

  • 夏季多吃丝瓜好处多

    夏季多吃丝瓜,丝瓜可以去风湿、通经络、凉血、解毒、清热化痰。常用于治疗夏季的中暑、咳嗽哮喘、支气管炎、乳腺炎、细菌性痢疾、慢性肠炎、湿疹等。

  • 【转帖】六部委叫停乳品“无抗奶”宣传

    日前,卫生部、农业部、工商总局、质检总局等六部委联合发出公告,叫停乳品“无抗奶”宣传,并指出即日起各乳品生产经营和餐饮企业应停止“无抗奶”生产经营活动。  所谓“无抗奶”是指用不含抗生素的原料生产出来的牛奶,因为有些奶牛在每年换季时易患乳腺炎,向牛乳房部位直接注射抗生素,奶牛才能尽快恢复健康。但若长期食用有抗生素残留的牛奶,慢慢地人体有可能就会对该药物产生抵抗性。而我国《乳品质量安全监督管理条例》、《兽药管理条例》中也指出,处于用药期和休药期内的奶畜产的奶,是禁止使用的。  专家表示,既然牛奶本来就应该是“无抗”的,那众多乳品企业宣传自家的牛奶是“无抗奶”就是一种概念炒作和过度宣传。也有业内人士称,“治理”企业过度宣传是表面原因,更深层原因是为了防止部分企业为了“无抗”而在牛奶中使用生鲜牛乳抗生素分解剂。  据悉,目前标榜“无抗生素”的液态奶、奶粉产品主要集中在光明、完达山、三元品牌,涉及光明17个单品以及完达山、三元10个品种。从今年6月30日起,各有关监管部门将开始对仍做“无抗奶”宣传的企业依法查处。(来源:茂名新闻网)

  • 奶牛常见的疾病

    我查到的奶牛疾病:隐形乳腺炎、结核病、副结核病、口蹄疫、布鲁氏菌病、牛传染性鼻气管炎、病毒性腹泻-粘膜病、白血病、轮状病毒、炭疽杆菌、早早孕、体细胞、呼吸道病毒、副流感病毒、新孢子虫病、巴贝丝虫病、食道线虫抗体、边缘无浆体、牛瘟、马孢疹病毒、牛脑海绵状病可能有疏漏,请大家一起补充啊!

  • 【金秋计划】石蒜碱调控线粒体氧化损伤介导人乳腺癌细胞自噬及凋亡作用机制

    乳腺癌是世界范围内女性最常见的致死性恶性肿瘤,据统计,2020年女性乳腺癌已超越肺癌成为全球癌症发病率最高的癌种[1-2]。其中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)均呈阴性表达的乳腺癌亚型,占所有乳腺癌的15%~20%[3],具有侵袭力强、转移率高、术后复发率高、预后差的特点[4]。由于TNBC内分泌治疗的不确定性及靶向治疗的不应答性,导致临床上的治疗效果不理想[5-6]。因此,寻找有效抑制TNBC增殖转移的药物、降低患者的病死率一直是乳腺癌基础研究的一个重要方向[7-8]。 石蒜碱是石蒜Lycoris radiata (L'Hér.) Herb.、文殊兰Crinum asiaticum L. var. sinicum (Roxb. et Herb.) Baker、朱顶红Hippeastrum rutilum (Ker.-Gawl.) Herb.等石蒜属植物鳞茎中含量较高的异喹啉类生物碱,具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎镇痛、保肝等药理活性[9-10],近年来石蒜碱的抗肿瘤作用受到众多研究者的关注。有文献报道石蒜碱对人乳腺癌MCF-7细胞[11]、人宫颈癌Hela细胞[12-13]、人肝癌HepG-2细胞[13-16]、人胃癌SGC-7901细胞[17]、人结肠腺癌LoVo细胞[18-19]具有显著的抑制作用,但对其作用机制的研究仍然处于初始阶段。本研究以人乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,主要通过体外实验从细胞水平和分子水平探讨石蒜碱对MDA-MB-231细胞的体外抑制活性及其通过线粒体氧化损伤诱导肿瘤细胞自噬及凋亡的机制,为今后石蒜碱抗肿瘤新药的深入研发和临床实践提供理论基础和实验参考。 1 材料 1.1 细胞株 MDA-MB-231细胞由国家教育部抗肿瘤天然药物工程技术研究中心提供。 1.2 药品与试剂 石蒜碱(批号34296,质量分数98%)购自阿拉丁试剂有限公司;胎牛血清(批号0201021)购自浙江杭天生物科技公司;RPMI 1640细胞培养基(批号AD123707271)购自美国HyClone公司;二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO,批号20200901)购自天津中和盛泰化工有限公司;Hoechst 33258染液(批号C1011)、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(批号P0015)、吉姆萨染液(批号C0131)、CCK-8试剂盒(批号C0043)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒(批号S0033S)、PMSF(批号ST505)、HRP标记的山羊抗大鼠IgG二抗(批号A0192)、Western blotting及IP细胞裂解液(批号072318180723)、30% Acr-Bis(批号093018181017)购自碧云天生物技术研究所;碘化丙啶(propidium iodide,PI)染液(批号R20285)、Rhodamine 123(批号R8004)购自美国Sigma公司;台盼蓝(批号72-52-1)购自美国默克公司;Reagent A染液(批号5000113)购自北京诺博莱德科技有限公司;聚山梨酯20(批号20190207)购自美国Biotopped公司;Tris(批号181127)购自美国Amresco公司;兔抗半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)抗体(批号WL02512)、兔抗B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)抗体(批号WL01506)、兔抗Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)抗体(批号WL02385)、兔抗细胞色素C(cytochrome-C,Cyt-C)抗体(批号WL04963)、兔抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)抗体(批号WL01114)购自沈阳万类生物科技有限公司;兔抗线粒体内膜转位酶(translocase of inner membrane,TIM)抗体(批号PSI-RF16109)、兔抗线粒体外膜转位酶(translocase of outer membrane,TOM)抗体(批号PSI57577)、兔抗E3泛素连接酶(E3 ubiquitin protein ligase,PARKIN)抗体(批号PSI50248)、兔抗PTEN诱导的激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)抗体(批号PSI7859)、兔抗微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3-B)抗体(批号BS79705)、兔抗p62抗体(批号p196-269)购自艾美捷科技有限公司。 1.3 仪器 ECO-170P-230型细胞培养箱、Model 680型酶标仪(美国NBS公司);Adventurer型万分之一电子天平(美国OHAUS公司);EPICS-XL型流式细胞仪、AllegraTM 64R型低温高速离心机(美国Beckman-Coulter公司);CKX-41-32型倒置显微镜(日本Olympus公司);荧光显微镜、TCS-SP2激光共聚焦扫描显微镜(德国Leica公司);680型全自动酶标仪(美国Bio-Rad公司);P型微量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url](芬兰百得公司);标准型PB-10 pH计(德国Sartorius公司);GIS-2019型Tannon凝胶成像系统(天能科技有限公司);DYY-7C型电泳仪、M344039型垂直电泳转印槽(北京六一仪器厂)。 2 方法 2.1 细胞培养 MDA-MB-231细胞复苏后接种于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中,置于5% CO2、37 ℃恒温培养箱中培养,待细胞长势良好时进行传代,取对数生长期的细胞进行实验。 2.2 CCK-8法检测细胞增殖活性 MDA-MB-231细胞以2×103个/孔接种于96孔板中,细胞培养24 h后,给药组每孔加入不同浓度(2、4、8、16、32 μmol/L)的石蒜碱100 μL,对照组加入100 μL细胞培养基,每组均设置6个平行孔,处理48 h后,每孔加入10 μL CCK-8试剂,继续培养4 h。采用酶标仪检测490 nm处的吸光度(A)值,计算各组细胞的增殖抑制率与石蒜碱对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)。 2.3 倒置显微镜、荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态变化 MDA-MB-231细胞以3×103个/孔分别接种于2块6孔板中,细胞培养24 h后,根据石蒜碱对MDA-MB-231细胞的IC50设定3个给药剂量,分别以3、6、12 μmol/L的给药浓度每孔加入石蒜碱1 mL,对照组加入1 mL细胞培养基,继续处理48 h。取1块板用倒置显微镜观察并拍照后,每孔加入1 mL多聚甲醛固定1 h,冲洗后加入200 μL Hoechst 33258染液,37 ℃孵育30 min后,用荧光显微镜观察并拍照;取另1块板收集各组细胞,用预冷的PBS重悬细胞并弃去上清液,加入Annexin V-FITC于37 ℃避光孵育15 min,冲洗后加入PI染液于4 ℃避光孵育15 min后,用激光共聚焦扫描显微镜观察并拍照。 2.4 集落实验检测细胞克隆能力 MDA-MB-231细胞以1×103个/孔接种于6孔板中,细胞培养24 h后,按“2.3”项下方法对细胞进行分组和给药,连续培养7 d后弃去培养基。PBS洗涤后用甲醇固定10 min,冲洗后加入吉姆萨染液染色后,用倒置显微镜观察细胞集落形成率并拍照。 2.5 划痕实验检测细胞迁移能力 MDA-MB-231细胞以1×105个/孔接种于6孔板中,细胞培养24 h,细胞融合至70%~80%后,用200 μL[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]倚靠直尺,枪头垂直于每孔底部竖直划痕。PBS冲洗后,按“2.3”项下方法对细胞进行分组和给药,培养48 h后,用倒置显微镜观察细胞的迁移情况并拍照记录,比较各组间的划痕宽度,使用Image J软件测量并计算划痕愈合率。 2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡率 按“2.3”项下方法对细胞进行分组和给药,培养48 h后,收集各组细胞,加入70%冷乙醇2 mL于4 ℃固定24 h后离心。弃去上清液,PBS冲洗后,加入800 μL PI染液,4 ℃避光孵育30 min,经尼龙网滤过后,采用流式细胞仪进行检测,激发波长为488 nm。 2.7 流式细胞仪检测ROS水平 按“2.3”项下方法对细胞进行分组和给药,培养48 h,收集各组细胞,PBS洗涤后加入5 μmol/L DCFH-DA染液0.2 mL,37 ℃避光孵育20 min,经尼龙网滤过后,采用流式细胞仪进行检测。 2.8 流式细胞仪检测线粒体膜电位 按“2.3”项下方法对细胞进行分组和给药,培养48 h后,收集各组细胞,PBS洗涤后,避光加入Rhodamine 123染料,避光孵育30 min后离心弃去上清液,用PBS洗涤并混匀细胞,经尼龙网滤过后,采用流式细胞仪进行检测。 2.9 激光共聚焦扫描显微镜检测线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)活性 按“2.3”项下方法对细胞进行分组和给药,培养48 h后,收集各组细胞,加入37 ℃预热的Reagent A染液500 μL,离心后弃去上清液。37 ℃避光加入染色工作液,混匀后孵育20 min,离心去除上清液,将细胞吹打混匀后,经尼龙网滤过,采用激光扫描共聚焦显微镜检测并进行拍照。 2.10 Western blotting检测线粒体自噬相关蛋白TIM、TOM、PARKIN、PINK1、LC3-B、p62和凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2、Cyt-C表达 按“2.3”项下方法对细胞进行分组和给药,培养48 h后,收集各组细胞,加入含PMSF的细胞裂解液,冰上裂解30 min后将细胞加入EP管中,离心15 min。取上清液,煮沸使蛋白变性,采用BCA试剂盒定量蛋白浓度。采用SDS-PAGE凝胶电泳,转至PVDF膜,5%脱脂奶粉封闭2 h后,加入一抗,4 ℃孵育过夜。TBST洗膜后加入二抗,37 ℃孵化2 h,洗膜后加入化学发光试剂,采用凝胶成像系统拍照并进行分析。 2.11 统计学分析 用SPSS 21.0软件进行统计分析,数据以表示,多样本均数比较采用One-way ANOVA分析,通过Graphpad Prism 8软件绘图。 3 结果 3.1 石蒜碱对MDA-MB-231细胞增殖的影响 如图1所示,石蒜碱对MDA-MB-231细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.01),且呈浓度相关性。石蒜碱对MDA-MB-231细胞的IC50为6.21 μmol/L,并参考IC50值设定后续石蒜碱给药浓度分别为3、6、12 μmol/L。 3.2 石蒜碱对MDA-MB-231细胞形态的影响 采用倒置显微镜、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察石蒜碱对MDA-MB-231细胞形态的影响,如图2所示,与对照组比较,石蒜碱给药后,随着给药浓度增加,细胞生长逐渐变稀疏,细胞膜破裂现象更加明显,细胞间轮廓更加模糊,细胞核固缩形成凋亡小体,发出较强荧光。 3.3石蒜碱对MDA-MB-231细胞克隆、迁移的影响 集落实验结果表明,石蒜碱可以抑制MDA-MB-231细胞的克隆能力(图3-A),且随着浓度的增加细胞集落数量逐渐减少,且呈浓度相关性。划痕实验结果显示,石蒜碱可以显著抑制MDA-MB-231细胞的迁移能力(P<0.01,图3-B、C),呈剂量相关性。 3.4 石蒜碱对MDA-MB-231细胞凋亡率、ROS水平的影响 如图4-A、B所示,经流式细胞仪PI单染法检测出现明显的凋亡峰,表明DNA的合成受到抑制,且随着给药浓度增加,凋亡峰越明显,凋亡率也呈上升趋势,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),且呈浓度相关性。如图4-C、D所示,随着给药浓度增加,细胞内ROS水平逐渐升高,具有显著性差异(P<0.01),且呈浓度相关性。 3.5 石蒜碱对MDA-MB-231细胞线粒体膜电位和MPTP的影响 如图5-A、B所示,经流式细胞仪检测,随着石蒜碱给药浓度增加,细胞内线粒体膜阳性表达率逐渐降低,具有显著性差异(P<0.01),且呈浓度相关性。如图5-C、D所示,应用激光扫描共聚焦显微镜结合AM染色技术对不同浓度的石蒜碱作用48 h后的MDA-MB-23细胞进行检测,激光扫描共聚焦显微镜扫描得到的荧光象素强度反映出细胞膜通透性的改变,随着给药浓度增加,细胞内线粒体膜通透性逐渐升高,具有显著性差异(P<0.01),且呈浓度相关性。 3.6 石蒜碱对MDA-MB-231线粒体自噬和凋亡相关蛋白表达的影响 应用凝胶成像系统分析MDA-MB-231细胞中线粒体自噬和凋亡相关蛋白表达的情况。如图6所示,随着石蒜碱浓度增加,细胞自噬相关蛋白TIM、TOM和p62蛋白表达量逐渐降低,PARKIN、PINK1和LC3-B蛋白表达量逐渐升高,均具有显著性差异(P<0.01)。如图7所示,随着石蒜碱浓度增加,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Bax、Caspase-3和Cyt-C蛋白表达量逐渐升高,均具有显著性差异(P<0.01)。 4 讨论 乳腺癌已成为全球最常见的恶性肿瘤,与乳腺癌的其他分子亚型相比,TNBC最具侵袭性和高度异质性[20-22],使其在临床上难以得到有效治疗。因此如何有效抑制TNBC侵袭、增殖和转移是目前亟待解决的问题。近年来,有研究表明中药在抗肿瘤方面具有显著的优势[23-25]。石蒜碱是异喹啉类生物碱,广泛分布于石蒜属植物鳞茎中,具有较强的抗肿瘤活性[26-27]。基于石蒜碱的抗肿瘤作用,结合课题组前期研究中TNBC细胞活性筛选,发现石蒜碱对MDA-MB-231细胞较为敏感,故选择MDA-MB-231细胞作为研究对象,本研究结果发现石蒜碱对MDA-MB-231细胞的增殖和迁移具有显著抑制作用,且呈浓度相关性。 ROS水平升高和线粒体功能障碍是诱导肿瘤细胞自噬和凋亡的重要途径[28]。研究发现,过量ROS的产生会诱发肿瘤细胞的损伤、自噬及凋亡并降低细胞的多药耐药性[29]。此外,肿瘤细胞对外源性ROS比正常细胞更敏感且ROS具有一定的细胞毒性。因此,促进ROS水平升高的药物可表现出一定的抗癌活性。有研究表明,线粒体功能障碍与多种恶性肿瘤的发生及ROS的过量产生密切相关[30]。本研究通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测结果表明,石蒜碱可以显著提高MDA-MB-231细胞凋亡率和ROS水平,并使线粒体膜电位下降,MPTP开放。这表明石蒜碱诱导细胞自噬和凋亡作用可能与线粒体的氧化损伤有关。 TOM及TIM是线粒体膜蛋白,当线粒体自噬增强时,其细胞内表达水平下降。研究表明线粒体损伤会使线粒体膜电位降低,导致PINK1在线粒体外膜上表达,从而使PINK1-PARKIN依赖性线粒体自噬反应被激活[31]。LC3-B是自噬体形成的特异性标志物,其含量与自噬泡数量成正比,因此被广泛用于监测细胞自噬。p62作为自噬降解的产物,自噬增强,p62水平会下降。p62还可与自噬体膜上的LC3-B蛋白及泛素化的蛋白形成复合物,在自噬溶酶体内完成降解[32]。ROS的过度累积,会触发MPTP开放,导致线粒体膜电位下降,引起Cyt-C从线粒体释放并进入细胞质中,进而激发Caspase的级联反应并启动细胞线粒体凋亡[33]。Bcl-2为抗凋亡蛋白,Bax为促凋亡蛋白,当接收到凋亡刺激信号后可转位至线粒体膜上,Bcl-2和Bax可形成二聚体或多聚体,从而增加细胞线粒体膜的通透性,进一步激活Caspase级联反应,Caspase-3可通过抑制凋亡抑制物,从而破坏细胞结构使蛋白丧失功能[34]。本研究通过Western blotting检测自噬相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达,结果显示石蒜碱能够上调PARKIN、PINK1、LC3-B、Caspase-3、Bax和Cyt-C蛋白表达,下调TIM、TOM、p62和Bcl-2蛋白表达,表明石蒜碱可通过线粒体的氧化损伤介导MDA-MB-231细胞的自噬及凋亡。 综上,石蒜碱对MDA-MB-231细胞具有生长抑制作用,并可通过调控线粒体氧化损伤介导MDA-MB-231细胞的自噬及凋亡。本研究为石蒜碱抗肿瘤新药的深入研发和临床实践提供理论基础。

  • 【分享】中药——落地生根

    【分享】中药——落地生根

    [color=#333333]名称:落地生根类别:其他 拼音:Luo Di Sheng Gen拉丁:[i]Bryophyllum pinnatum (Linn. f.) Oken[/i]别名:打不死、脚目草药用部位:全草药材性状:栽培要点:产地:分布在云南、广西、广东、福建及台湾。采收加工:全年可采,多鲜用。地道沿革:性味归经:淡、微酸、涩,凉。功能主治:解毒消肿,活血止痛,拔毒生肌。外用治痈疮肿毒,乳腺炎,丹毒,瘭疽,外伤出血,跌打损伤,骨折,烧烫伤,中耳炎。 用法用量:鲜叶适量,捣烂敷患处,或绞汁滴耳。 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/06/201006282214_227499_1620630_3.jpg[/img][/color]

  • 【原创大赛】喝豆浆能丰胸、天天喝会得乳腺癌...关于豆浆的谣言你信了几条?

    [align=left][/align][align=left][font='宋体'][size=16px]老 爸 辟 谣[/size][/font][/align][align=left][font='calibri'][size=13px][color=#5a5a5a]平时我们总会收到很多提问,涉及到生活的各方面,很感谢大家信任我们,愿意向我们提问,寻求解决办法。为了能集中回答一些相似的问题,让更多人可以看到,我们开了一个新的栏目,老爸辟谣。[/color][/size][/font][/align][align=left][/align][align=left][font='calibri'][size=13px][color=#5a5a5a]我们会选取一些大家关心的主题,或者谣言聚集点,给大家做统一回复。有什么问题,大家还可以继续留言提问。[/color][/size][/font][/align][align=left][/align][align=left][font='calibri'][size=13px][color=#5a5a5a]本期作为第一期,是关于[/color][/size][/font][font='calibri'][size=13px][color=#5a5a5a]豆浆的 8 大谣言[/color][/size][/font][font='calibri'][size=13px][color=#5a5a5a]。豆浆是我们传统早餐中必不可少的一部分,但是关于它的谣言也不少,比如“喝豆浆可以丰胸”“天天喝豆浆会得乳腺癌”,也不知道豆浆作何感想。[/color][/size][/font][/align][align=left][/align][align=left][font='calibri'][size=13px][color=#5a5a5a]今天就一起来击碎 8 大谣言,开心喝豆浆吧~[/color][/size][/font][/align][align=left][/align][align=left][font='calibri'][size=13px][color=#5a5a5a]如果喜欢这种形式,欢迎拉到文章底部,转发、点赞、在看支持。[/color][/size][/font][/align][align=left][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009091645208897_7441_1834892_3.jpeg[/img][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009091645211744_8359_1834892_3.jpeg[/img][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009091645214918_139_1834892_3.jpeg[/img][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009091645216368_5305_1834892_3.jpeg[/img][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009091645217496_8263_1834892_3.jpeg[/img][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009091645218702_8712_1834892_3.jpeg[/img][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009091645219693_5947_1834892_3.jpeg[/img][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009091645220846_6979_1834892_3.jpeg[/img][/align][align=left][/align][align=left][font='宋体'][size=14px][color=#5a5a5a]本期老爸辟谣——豆浆篇到这里就结束了,大家还对生活中的什么问题感到困惑,欢迎留言~[/color][/size][/font][/align][align=left][/align][align=left][font='宋体'][size=14px][color=#5a5a5a]最后,安心喝豆浆的同时,别忘了分享给你的朋友们。[/color][/size][/font][/align]

  • 【分享】维生素E和硒对奶牛乳房炎影响的研究

    奶牛乳房炎是危害奶牛最常见的疾病之一。全世界约有2.2亿头奶牛,其中约有1/3的奶牛患各种类型的乳房炎。目前,国内外学者对奶牛乳房炎的非抗生素治疗十分关注,试图通过调节乳腺免疫机能,增强机体对病原微生物的抵抗力,减少乳腺的感染。采用免疫接种,增强机体对某一种传染性病原的特异性免疫能力;或通过生物效应调节剂,调节乳腺的免疫功能,增强机体对各种病原的非特异性免疫能力,如细胞因子、中草药和营养微量因子等,是常用的两种方法。近十年来的研究显示,乳房炎的发病率和严重性与牛群中的维生素E和硒的状况有关。奶牛日粮中补充维生素E和硒能降低临床型乳房炎的发病率,并缩短临床症状持续时间。应用维生素E和硒可以增强奶牛对乳房炎的抗病力,维生素E和硒的作用可能涉及奶牛的非特异性防御机制。[color=#DC143C]1.维生素E和硒的生物学功能2.硒和维生素E对乳腺的保护作用3.硒和维生素E增强中性粒白细胞免疫功能的途径[/color]来源于:中国食品产业网

  • 【讨论】三聚氰胺之外的乳品“四大顽症”

    经过二个多月"运动式"的检查、清理、整顿,由三聚氰胺引发的乳业风暴趋于平缓,但是对这一事件的检讨和反思,还远未到可以结束的程度。牛奶中出现有毒的三聚氰胺是偶然的吗?中国乳业究竟出了什么问题?半月谈记者独家采访了沈阳乳业有限责任公司(辉山乳业)常务副总经理徐广义。 这位从大学卫生检验专业毕业、多年从事食品乳品行业的行家里手,憋了太多话要说。三聚氰胺之外的乳品"四大顽症"  [B]业内所知的乳品质量安全问题还有很多,三聚氰胺只是冰山一角。[/B]  [B]一是抗生素[/B]。一些奶牛因疾病(最常见的是因为挤奶不当引发的乳腺炎)使用药品,由此很容易造成大量抗生素存留在奶中。光明奶业曾向市场推出过"无抗奶",但很快就被同行打压了下去。如今行业内还出现了青霉素降解酶等化学物质,将其掺入含有抗生素的牛奶,便可"合格"通过检测。  [B]二是防腐剂[/B]。鲜奶是各种食品中保质期最短的一类,然而现在很多牛奶的保质期长达8个月甚至1年,业内人士开玩笑,就是毒药放上一年多都可能过期了。为拉长保质期,如今牛奶中的防腐剂种类繁多,有的是国家允许的,有的是国家不允许的,加入之后谁也不会在包装上明示。  [B]三是增稠调香[/B]。不少朋友都问,辉山奶怎么这么稀,是不是兑水了?而且不如大品牌的奶那么香。这让人哭笑不得,真正的牛奶是清淡的鲜香,而如今越来越多奶走黏稠、浓香路线。一些乳企收来劣质奶、过期奶甚至假奶,增稠调香后,产品反而味道更好。国际上对纯牛奶的定义是"从牛乳挤出的原奶,不能添加也不能提取任何物质",而我们个别乳企,奶产品靠添加剂来增稠调香,却打出"高端纯牛奶"的噱头大加宣传,价格比正常奶高出几倍。  [B]四是产地标识不明[/B]。一些大品牌在全国不少地方建厂,但包装上只统一打出总公司一个产地,然后加印一个特殊编号来区分产地,供企业内部掌握。产品出了问题,消费者无法辨认手中的产品是总厂生产的还是分厂生产的,什么批次也不清晰,给消费者维权带来很大困难。

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