融合蛋白

[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白（[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]融合蛋白）是指在基因水平上将目的基因同免疫球蛋白部分片段基因相连，并在真核或原核表达系统中表达的重组蛋白。抗体融合蛋白具有抗体的特性及融合功能蛋白的活性，可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化及抗体和抗原的定量分析等，特别可用于免疫导向药物的制备。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同，可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白与单链抗体（[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]）融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白结构：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、单链抗体融合蛋白研究表明，抗体可变区的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端空间结构上与互补决定区（[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]）形成的抗原结合部位十分接近，有的抗体可变区[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端残基甚至直接参与抗原结合部位的形成，如果将效应蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端结合，可能对抗体可变区的空间构型造成较大影响，从而降低抗体与抗原的结合能力。因此，通常将蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端进行结合，形成抗体融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在结构上是将抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区与功能蛋白进行融合，可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端与目的基因进行融合。根据结合蛋白的不同，可以有多种构型。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白作用原理：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]含有抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白与[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]融合蛋白含有抗体的可变区，可以进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，其作用原理为利用抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异性结合的特性，通过这种特性的引导，将具有生物活性的蛋白靶向引导至细胞的特定部位，进而发挥一定的生物效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不含抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该类融合蛋白含有的抗体功能区为[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区，不能进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的作用为延长药物在血浆内的半衰期、增加融合蛋白的稳定性等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白药理作用的发挥依赖于功能蛋白部分，利用受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体之间的相互作用产生一系列的生物学效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白制备：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]最初抗体融合蛋白制备的方法为化学交联法，但这种方法制备的抗体融合蛋白组成不均一、性能不稳定、免疫源性大，随着基因工程技术的发展，该技术已被淘汰。目前主要利用基因工程技术来进行抗体融合蛋白的制备。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其制备原理为：将抗体基因与目的蛋白基因通过一段接头序列（[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]）进行链接，然后将链接产物亚克隆至载体中，并用原核或者真核表达系统进行表达。制备抗体融合蛋白过程中，一个关键的问题是两蛋白间的接头序列[/font][font=Calibri](Linker)[/font][font=宋体]的长度，[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]的长短对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短，可能影响两蛋白高级[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]结构的折叠，从而相互干扰；如果接头序列太长，又涉及免疫原性的问题。抗体融合蛋白与双特异性抗体抗体融合蛋白是将抗体的部分片段与目的蛋白进行融合表达得到的重组蛋白，若将两个具有不同抗原特异性的抗体片段连接至同一蛋白，即可得到双特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单克隆抗体与抗体融合蛋白区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]单克隆抗体抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]结构：[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]型[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制备方法：杂交瘤技术[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]基因重组[/font][/font][font=宋体][font=宋体]表达系统：真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理：特异性识别抗原，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段引起[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ADCP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]等作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]结构：具有多种结构[/font][font=宋体]制备方法：基因重组[/font][font=宋体][font=宋体]表达系统：真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理：功能蛋白与靶分子间的受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体的相互作用[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以参考：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白是一种将抗体片段与功能蛋白融合表达的重组蛋白，具有抗体的特性和功能蛋白的活性。它可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化、抗体和抗原的定量分析以及免疫导向药物的制备等领域。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同，可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]与[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]scFv[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]）[/b][/url]融合蛋白。制备抗体融合蛋白的方法主要有化学交联法和基因工程技术，其中基因工程技术是目前主要的方法。在制备过程中，需要注意两蛋白间的接头序列的长度，以确保蛋白质的折叠和稳定性。抗体融合蛋白在免疫学、生物制药和医学等领域具有广泛的应用前景，为疾病的诊断、治疗和药物研发提供了新的工具和方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体如何与蛋白融合[/font][font=Calibri]?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]双特异性抗体是一种特殊的抗体，具有两个不同的抗原结合位点。通过技术手段，可以将双特异性抗体与另一种蛋白质融合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①使用基因工程技术，将双特异性抗体的基因与目标蛋白质的基因进行融合，然后通过表达载体在细胞内表达融合蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②使用化学手段，将双特异性抗体与目标蛋白质进行化学偶联。这需要使用特定的化学偶联剂，将双特异性抗体的特定基团与目标蛋白质的特定基团连接起来。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要注意的是，融合蛋白质的功能和性质取决于其组成成分的特性和比例，因此在融合过程中需要谨慎选择和设计组成成分，以确保融合蛋白质具有所需的功能和性质。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体融合蛋白具有广泛的应用，包括但不限于以下方面：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①免疫诊断：抗体融合蛋白可以用于检测抗原，如病毒、细菌、肿瘤标志物等。通过将抗体片段与荧光蛋白、酶等标记物结合，可以实现对抗原的高灵敏度检测。[/font][font=宋体]②免疫治疗：抗体融合蛋白可以用于治疗肿瘤、感染性疾病等。通过将抗体片段与细胞毒素、免疫调节因子等效应分子结合，可以实现对肿瘤细胞的靶向杀伤或调节免疫反应。[/font][font=宋体]③抗体纯化：抗体融合蛋白可以用于分离和纯化抗体。通过将抗体片段与亲和标签结合，可以利用亲和层析等技术实现对抗体的纯化和富集。[/font][font=宋体]抗体和抗原的定量分析：抗体融合蛋白可以用于定量分析抗体和抗原的浓度。通过将抗体片段与荧光染料等标记物结合，可以利用流式细胞术等技术实现对抗体和抗原的定量分析。[/font][font=宋体]④免疫导向药物的制备：抗体融合蛋白可以用于制备免疫导向药物，即将药物与抗体片段结合，利用抗体的特异性结合能力，将药物定向引导至病变部位，提高药物的疗效并降低副作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font='calibri'][size=13px]融合蛋白[/size][/font][font='calibri'][size=13px]是什么？[/size][/font][font='calibri'][size=13px]融合蛋白和单抗的区别[/size][/font][font='calibri'][size=13px]及优势？[/size][/font]融合蛋白是指将目标蛋白与免疫球蛋白融合而产生的新型重组蛋白，其中，目标蛋白可以是细胞因子、受体、抗原肽或者其他具有生物学活性等功能蛋白质。融合蛋白具有较强的生物活性，还具有一些抗体性质，可以用于疾病治疗，可以通过延长血浆半衰期，加强其治疗能力，同时，降低肾小球清除率，可以提高药物在体内的药物浓度。单抗即单克隆抗体，是由单一的B细胞克隆产生的抗单一表位的抗体，具有多个优点，包括高度的特异性：能够特定的针对单一的抗原表位，选择性的杀伤靶细胞，具有更强的疗效；安全性：由于单抗只针对靶细胞，对机体的其他细胞影响不大，相比其他药物不良反应少；多样性：不同的单抗结合，不同的抗原表位作用机制各不相同，可以针对不同的疾病选择相应的单抗。融合蛋白和单抗具有各自的优点和作用特点，近年来，对这两种相关药物的研究越来越多，对于一些恶性肿瘤等相关性疾病的治疗得到了较大的提高。因此，融合蛋白和单抗具有上述区别，但用于疾病的治疗各自有优势。单克隆抗体定制服务推荐：义翘神州是一家抗体试剂和定制抗体的领先供应商，目前已成功交付了数以万计的抗体项目，客户涵盖科研院校、生物制药公司、诊断公司和其他生物技术公司等。针对定制单克隆抗体，义翘神州提供了一套全面的解决方案。我们将与您通力合作，完成从抗原设计、纯化和抗体验证的完整过程。义翘神州拥有包括杂交瘤、噬菌体抗体库和单B细胞在内的抗体发现平台， 我们可根据您感兴趣的靶点、抗体应用和时间表等，来选择最合适的技术平台。 此外，义翘神州还提供ELISA、WB、流式细胞术、IHC、基于细胞的筛选、亲和力检测等多种表征和筛选技术，确保最终鉴定到最佳的抗体，以满足研究、诊断和治疗领域等应用。单克隆抗体定制服务：https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services

[font=宋体][b]什么是重组蛋白？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白[/b][/url]的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，哺乳动物细胞蛋白表达，酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白和重组蛋白的区别[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组蛋白[/font][/font][font=宋体]重组蛋白是指应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。[/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白是指通过重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术将你要表达的目的蛋白基因同表达载体上融合蛋白基因相连，这样表达出的蛋白质就会是同时具有目的基因蛋白和融合基因蛋白两个部分的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白与重组蛋白不是一个层次上对立的概念，融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。融合蛋白又称标签（[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]），常用的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总结：在生物制药领域，重组蛋白具有较高的活性和纯度，更易吸收，安全性也更高的特点。重组蛋白的利用率也更高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白，基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素：[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易，应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说，重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务，例如义翘神州[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]参考重组蛋白生产的详细服务清单）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]等相关信息，详情可以关注[/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白生产：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白，亦被称为[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]融合蛋白，是通过在基因层面上巧妙地将目标基因与免疫球蛋白的部分基因片段相互连接，随后在真核或原核表达系统中实现表达而得到的一种重组蛋白。这种独特的蛋白不仅继承了抗体的卓越特性，更融合了功能蛋白的活性，使其在多个领域展现出广泛的应用前景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在免疫诊断领域，抗体融合蛋白能够精准识别并绑定抗原，为疾病的早期发现和诊断提供了有力工具。在免疫治疗领域，它则能够引导药物直达病灶，提高治疗效果并减少副作用。此外，抗体融合蛋白在抗体纯化、抗体和抗原的定量分析等方面也发挥着重要作用，特别是在免疫导向药物的制备中，其重要性更是不言而喻。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据与[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段结合方式的不同，抗体融合蛋白可分为多个类型，包括[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]以及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]scFv[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]）[/b][/url]融合蛋白。这些不同类型的抗体融合蛋白各具特色，为科学研究和临床应用提供了丰富的选择。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]结构[/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、单链抗体融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]研究表明，抗体可变区的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端空间结构上与互补决定区（[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]）形成的抗原结合部位十分接近，有的抗体可变区[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端残基甚至直接参与抗原结合部位的形成，如果将效应蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端结合，可能对抗体可变区的空间构型造成较大影响，从而降低抗体与抗原的结合能力。因此，通常将蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端进行结合，形成抗体融合蛋白。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在结构上是将抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区与功能蛋白进行融合，可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端与目的基因进行融合。根据结合蛋白的不同，可以有多种构型。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]作用原理[/font][/b][font=宋体]含有抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白与[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]融合蛋白含有抗体的可变区，可以进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，其作用原理为利用抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异性结合的特性，通过这种特性的引导，将具有生物活性的蛋白靶向引导至细胞的特定部位，进而发挥一定的生物效应，也就是所谓的“生物导弹”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不含抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]该类融合蛋白含有的抗体功能区为[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区，不能进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的作用为延长药物在血浆内的半衰期、增加融合蛋白的稳定性等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白药理作用的发挥依赖于功能蛋白部分，利用受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体之间的相互作用产生一系列的生物学效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体融合蛋白制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]最初抗体融合蛋白制备的方法为化学交联法，但这种方法制备的抗体融合蛋白组成不均一、性能不稳定、免疫源性大，随着基因工程技术的发展，该技术已被淘汰。目前主要利用基因工程技术来进行抗体融合蛋白的制备。其制备原理为：将抗体基因与目的蛋白基因通过一段接头序列（[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]）进行链接，然后将链接产物亚克隆至载体中，并用原核或者真核表达系统进行表达。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制备抗体[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]过程中，一个关键的问题是两蛋白间的接头序列[/font][font=Calibri]( Linker )[/font][font=宋体]的长度，[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]的长短对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短，可能影响两蛋白高级[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]结构的折叠，从而相互干扰；如果接头序列太长，又涉及免疫原性的问题。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白与双特异性抗体[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白是将抗体的部分片段与目的蛋白进行融合表达得到的重组蛋白，若将两个具有不同抗原特异性的抗体片段连接至同一蛋白，即可得到[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]单克隆抗体与抗体融合蛋白区别[/font][/b][font=宋体] [/font][img=单克隆抗体与抗体融合蛋白区别,690,155]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403081113369902_7816_5907840_3.png!w690x155.jpg[/img][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白是一种由免疫球蛋白（如[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等）的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段与目标蛋白序列融合而成的新型重组蛋白。通过将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域与其他蛋白质或肽段融合，可以赋予这些蛋白质或肽段新的特性和功能，同时利用[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域的稳定性和免疫系统的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体相互作用，增强融合蛋白的稳定性和半衰期。例如，普通重组[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]的体内半衰期较短，只有[/font][font=Calibri]6.9[/font][font=宋体]分钟，这限制了其在体内的持续作用时间。然而，通过与免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合，重组[/font][font=Calibri]IL-2/Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在体内半衰期延长了近[/font][font=Calibri]700[/font][font=宋体]倍，从而使其能够在体内更长时间地发挥作用。此外，延长半衰期还可以降低药物的剂量和频率，减少潜在的副作用和毒性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]结构域[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白的主要特点是含有[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段，这也是影响其理化性质和生物学活性的关键因素。类似于单克隆抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段，融合蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段可以延长功能蛋白在血浆中的半衰期，增加分子的稳定性，并且能够特异性地结合体内的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体，发挥相应的生物学功能。此外，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段还可以特异性地结合[/font][font=Calibri]protein A[/font][font=宋体]，有利于简化[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白的纯化过程，对相关生物制品的研发制备具有重要意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白功能[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]功能蛋白能特异性地识别某个靶点分子，并决定了融合蛋白的药理活性。功能蛋白的种类很多，可以是能结合内源性受体（或配体）的可溶性配体（或受体），或其他需要延长半衰期的活性物质，如细胞因子、毒素、酶等。功能蛋白的作用各不相同，主要包括抗炎性感染、抗病毒感染、抗瘤免疫、抗移植排斥、治疗痛觉过敏以及自身免疫性疾病的治疗等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri][url=http://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins]Fc[/url][/font][font=宋体][url=http://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins]融合蛋白[/url]的优势[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①延长半衰期：[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在血浆内有较长的半衰期。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与新生[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体（[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体]）的结合并呈[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]依赖性：在[/font][font=Calibri]pH 7.4[/font][font=宋体]的生理条件下，[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]不结合；在细胞内涵体[/font][font=Calibri]pH 6.0~6.5[/font][font=宋体]的酸性条件下，两者结合，从而避免了融合蛋白在细胞内被溶酶体等快速降解。另外，[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段能够增大分子体积，不易被肾小球滤过，也从一定程度上延长了半衰期。这就是[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白长效原理。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②增强稳定性：[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白通过[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]铰链区的二硫键连接形成稳定的二聚体。如果对二硫键进行基因工程改造，还可以使[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白形成更稳定的六聚体复合物。另外，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域可以独立折叠，确保分子的稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③发挥生物学效应：[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白可以结合不同的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体，包括[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ [/font][font=Calibri](CD64)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ [/font][font=Calibri](CD32)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅲ [/font][font=Calibri](CD16)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ和[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体]，从而介导不同的生物学功能，如炎症反应、抗体依赖性细胞毒性（[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]）和补体依赖性细胞毒性（[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]）、调节细胞因子分泌等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可参看：[/font][font=Calibri]http://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font]

[font=宋体][b][font=宋体]什么是[/font][font=Calibri]fc[/font][font=宋体]融合蛋白？[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由免疫球蛋白（如[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等）的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段与目标蛋白序列融合而成的新型重组蛋白。通过将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域与其他蛋白质或肽段融合，可以赋予这些蛋白质或肽段新的特性和功能，同时利用[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域的稳定性和免疫系统的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体相互作用，增强融合蛋白的稳定性和半衰期。例如，普通重组[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]的体内半衰期较短，只有[/font][font=Calibri]6.9[/font][font=宋体]分钟，这限制了其在体内的持续作用时间。然而，通过与免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合，重组[/font][font=Calibri]IL-2/Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在体内半衰期延长了近[/font][font=Calibri]700[/font][font=宋体]倍，从而使其能够在体内更长时间地发挥作用。此外，延长半衰期还可以降低药物的剂量和频率，减少潜在的副作用和毒性。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白有哪些？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由至少两个结构域组成的蛋白，这些结构域由被连接起来的独立基因编码，因此能够作为一个单元被转录和翻译，产生单克隆多肽。现在几乎所有的重组蛋白都是利用融合结构域制备，也被称为[/font][font=宋体]“标签”（参阅重组蛋白标签的完整列表）。因此，融合蛋白又称融合标签蛋白或嵌合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大体上有两种类型的融合蛋白：第一种是由两个蛋白或蛋白亚单位端对端融合，通常由一个[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]连接，第二种是来自两个供体的氨基酸穿插在融合蛋白产物中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白应用：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白最重要的三个用途是：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]作为克隆基因纯化的辅助手段[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]作为报告的表达水平[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]作为组织化学标签，使蛋白质在细胞、组织或生物体中的位置可视化[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白在纯化中可以通过亲和层析简单方便地纯化，如葡萄球菌蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、谷胱甘肽[/font][font=Calibri]-S-[/font][font=宋体]转移酶[/font][font=Calibri](gst)[/font][font=宋体]、麦芽糖结合蛋白[/font][font=Calibri](mbp)[/font][font=宋体]和纤维素结合蛋白。 重组融合蛋白最常用作报告构建体的融合伙伴，包括 β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]半乳糖苷酶、荧光素酶和绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合蛋白中，最多的一类称为荧光蛋白，如绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）、橙色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体]）和黄色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体]）。 绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP) [/font][font=宋体]等荧光蛋白能够直接观察动态细胞内过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）是一种荧光蛋白，最初是从水母维多利亚发光管中分离出来的。 与荧光素酶不同，[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]具有不需要任何底物、荧光素以及 [/font][font=Calibri]ATP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]O2 [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]Mg2+ [/font][font=宋体]的优势。 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]在被蓝光或紫外线激发时会发出绿光，在许多情况下可用于活的、完整的细胞和生物体，从而确保 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]作为自发荧光蛋白的功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白标签[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合标签中，既有短序列（如[/font] [font=Calibri]PolyHis[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PolyArg[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Streptag [/font][font=宋体]等），也有大蛋白（[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP [/font][font=宋体]等）。 在许多情况下，短序列不会影响分子的三级结构及其生物学特性，而大融合分子更常用于增强所需蛋白质的溶解度。 与短序列标签不同，需要从重组构建体中去除大的融合标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]有许多融合标签，既包含经过充分验证的标签，也包含最近开发的具有各种特性和不同优缺点的标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font]

[font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]：根据是否需要发挥[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段结合[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]来介导抗体依赖细胞介导的细胞毒性（[/font][font=Calibri]antibody-dependentcell-mediated cytotoxicity[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]）或结合补体[/font][font=Calibri]C1q[/font][font=宋体]来介导补体依赖的细胞毒性（[/font][font=Calibri]complement-dependent cytotoxicity[/font][font=宋体]， [/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]）等的生物学活性，可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白分为溶细胞性（[/font][font=Calibri]cyto-lytic[/font][font=宋体]）和非溶细胞性（[/font][font=Calibri]non-lytic[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]溶细胞性融合蛋白[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由功能性蛋白与天然或活性提高的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合而成。不仅具有功能蛋白的生物学活性和长效血浆半衰期，并且保留 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段介导 [/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]效应的能力，可以靶向杀伤功能蛋白受体阳性细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]非溶细胞性融合蛋白[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由功能性蛋白与活性降低的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合，通过对[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段上补体受体结合域或糖基化模式的突变改造，调节[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]与相关受体的结合亲和力，降低或消除[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]效应，只保留功能蛋白的生物学活性和 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段长效体内半衰期，而不产生细胞毒性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白优势有哪些？[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]延长半衰期：[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在血浆内有较长的半衰期。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与新生[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体（[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体]）的结合并呈[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]依赖性：在[/font][font=Calibri]pH 7.4[/font][font=宋体]的生理条件下，[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]不结合；在细胞内涵体[/font][font=Calibri]pH 6.0~6.5[/font][font=宋体]的酸性条件下，两者结合，从而避免了融合蛋白在细胞内被溶酶体等快速降解。另外，[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段能够增大分子体积，不易被肾小球滤过，也从一定程度上延长了半衰期。这就是[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白长效原理。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]增强稳定性：[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白通过[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]铰链区的二硫键连接形成稳定的二聚体。如果对二硫键进行基因工程改造，还可以使[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白形成更稳定的六聚体复合物。另外，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域可以独立折叠，确保分子的稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]发挥生物学效应：[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白可以结合不同的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体，包括[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ [/font][font=Calibri](CD64)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ [/font][font=Calibri](CD32)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅲ [/font][font=Calibri](CD16)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ和[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体]，从而介导不同的生物学功能，如炎症反应、抗体依赖性细胞毒性（[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]）和补体依赖性细胞毒性（[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]）、调节细胞因子分泌等。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]蛋白的应用[/font][/font][/b][font=宋体]在临床方面[/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）大部分 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]融合蛋白药物的作用机制为受体与配体之间的相互作用，同时辅以 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]片段的多种生物学功能。截止 [/font][font=Calibri]2014[/font][font=宋体]年 [/font][font=Calibri]9 [/font][font=宋体]月，已有 [/font][font=Calibri]9 [/font][font=宋体]种人 [/font][font=Calibri]IgG-Fc [/font][font=宋体]融合蛋白药物经美国食品及药品监督管理局（[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]）批准临床使用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]融合蛋白也可以作为一种新型疫苗形式，将病原体的部分抗原肽与 [/font][font=Calibri]IgG-Fc [/font][font=宋体]片段进行融合，诱导机体产生抗原特异性免疫应答。研究表明，[/font][font=Calibri]HIV-1 Gag p24[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]gp120 V3 [/font][font=宋体]以及流感病毒 [/font][font=Calibri]HA [/font][font=宋体]胞外域与小鼠 [/font][font=Calibri]IgG2a-Fc [/font][font=宋体]的融合疫苗，可提高小鼠抗原特异性体液免疫反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]融合蛋白较传统蛋白类药物具有多种新特性，在全世界范围内受到广泛关注。随着相关技术与理念的不断进步，[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]融合蛋白在临床治疗、医学生物研究等领域必将发挥更大的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在疫苗方面[/font][font=宋体][font=Calibri](1) [/font][font=宋体]疫苗设计的关键在于有效活化抗原递呈细胞（[/font][font=Calibri]antigen presenting cell[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]），由于 [/font][font=Calibri]APC [/font][font=宋体]表面能够表达 [/font][font=Calibri]FcR[/font][font=宋体]，所以抗原[/font][font=Calibri]-Fc [/font][font=宋体]融合蛋白能够作为抗原运载工具，借助[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段靶向结合 [/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]，缩短抗原在血浆中的游离时间，减少蛋白酶对抗原的降解，提高抗原半衰期，从而加强抗原的递呈。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](2) [/font][font=宋体]转染抗原[/font][font=Calibri]-Fc [/font][font=宋体]基因的[/font][font=Calibri]DC [/font][font=宋体]细胞，不仅能够持续表达抗原[/font][font=Calibri]-Fc [/font][font=宋体]融合分子，产生较长效的免疫激活，还可以克服其他体外抗原刺激方法不可避免的问题，如抗原 [/font][font=Calibri]MHC [/font][font=宋体]复合物解离或细胞 [/font][font=Calibri]MHC[/font][font=宋体]分子降解。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](3) [/font][font=宋体]由于细胞内能够结合 [/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]并影响免疫反应的受体蛋白如[/font][font=Calibri]FcRL[/font][font=宋体]和 [/font][font=Calibri]TRIM21[/font][font=宋体]等不断被发现，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白类疫苗能结合的受体不仅仅局限于[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]表面的[/font][font=Calibri]FcR[/font][font=宋体]，应用前景也将大大扩展。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[/font][font=Calibri]FC[/font][font=宋体]融合蛋白表达服务，更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font]

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]是指与靶蛋白相连的融合蛋白（参阅什么是融合蛋白）的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具，可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化，并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]根据不同的应用，融合标签主要分为三类：表位标签、亲和标签和荧光标签。[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如[/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②亲和标签一般较长，可用于蛋白纯化或增加蛋白溶解度。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③荧光标签可用于活细胞和死细胞，并广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]标签揭秘选择[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选择将标签融合到目标蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，很大程度上取决于蛋白本身：蛋白的折叠方式，以及您选择的末端是否有功能要求。例如，如果[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端在蛋白内部折叠，那么您收到融合蛋白信号的可能性非常小；或者，如果蛋白在标签融合末端进行翻译后剪切，那么标签将从目标蛋白中移除。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果有资源或准备开展新型实验，最好同时克隆[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端标签的构造，从而确定最佳选择。一研究小组发现，与[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的标签融合蛋白相比，更多的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端融合蛋白定位于目标亚细胞腔隙。但是，需要强调的是，虽然[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端标签蛋白的定位和表现往往符合预期，但并不是始终可以预测。融合蛋白定位是否正确，可通过免疫荧光进行检测；免疫印迹有助于确认融合蛋白的大小是否正确并以预期的水平表达，免疫共沉淀有助于评估融合蛋白与已知底物的相互作用方式。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合标签优缺点：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点：无需特异性蛋白即可分离目标蛋白；有时可在纯化后裂解标签；可将多个标签连接到同一蛋白上，增加其功能；避免免疫沉淀中出现抗体干扰；荧光标签可用于显示活细胞中的蛋白；多种标签供选择，适合不同的应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：某些标签可能会影响蛋白功能；可能需要多次尝试才能找到最佳标签位置，导致实验成本增加。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州蛋白标签页：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

月旭科技秉持分享传承生物制药相关技术，汇集生物制药相关细分技术，以生物技术分享传承和助力发展为初衷，月旭材料是集生物分离纯化介质研发、生产、销售于一体的高新技术企业。公司专注生物分离填料的研制和生物工艺下游技术工艺开发。有琼脂糖微球填料，葡聚糖微球填料，琼脂糖交联葡聚糖微球填料，琼脂糖交联纤维素微球填料，琼脂糖交联纤维素交联葡聚糖微球填料，涵盖离子交换，亲和，排阻和疏水等多款高品质填料。[b]融合蛋白不挂金属螯合亲和层析柱01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因：[/b][/color][b]超声的功率不对( 太大，蛋白炭化，太小，蛋白没有释放)[/b][color=#fcb441]解决方法：[/color]改变超声功率或超声前尝试添加溶菌酶增加细胞破碎率。[b]02 [/b][color=#1a237e][b]可能原因：[/b][/color][b]组氨酸标签暴露不完全[/b][color=#fcb441][b]解决方法：[/b][/color]在变性条件下( 用4-8 M 脲，或4-6 M 盐酸胍) 进行纯化，常规Ni-6FF(IDA) ,在变性条件下镍离子容易脱落，此时可选择[b]耐受变性剂的螯合填料（推荐月旭材料的亲和填料Ni Tanrose FF(NTA)。03 [/b][color=#1a237e][b]可能原因：[/b][/color][b]His标签丢失[/b][color=#fcb441][b]解决方法1：[/b][/color]WB 检查His 是否表达，上游构建，改变His-tag 的位置(C- 端或N- 端)，必要时增加His 个数。[color=#fcb441][b]解决方法2：[/b][/color]孵育的时间不够，降低流速和增加孵育的时间。[color=#fcb441][b]解决方法3：[/b][/color]改变螯合的金属离子，寻找到最佳的结合金属离子。[color=#fcb441][b]解决方法4：[/b][/color][b]选择高载量高特异性的螯合填料（月旭材料的亲和填料 Ni Tanrose FF（IDA) )。融合蛋白结合在螯合填料上洗脱不下来01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因：[/b][/color][b]洗脱条件太温和(融合蛋白质仍然结合在柱上，结合力较强)[color=#fcb441]解决方法：[/color][/b]增加咪唑的梯度洗脱或降低pH 来找出最佳的洗脱条件。[b]02 [/b][color=#1a237e][b]可能原因：[/b][/color][b]降低pH 的方法洗脱，若pH 低于3.5，会导致镍离子脱落[color=#fcb441]解决方法：[/color][/b]改变洗脱办法，咪唑竞争性洗脱。[b]03 [/b][color=#1a237e][b]可能原因：[/b][/color][b]蛋白已沉淀在柱上[color=#fcb441]解决方法1：[/color][/b]减少上样量，或使用咪唑的线性梯度而不是分步洗脱以降低蛋白的浓度。试用去污剂或改变NaCl 的浓度，或在变性条件( 去折叠) 下洗脱( 用4-8 M 脲，或4-6 M 盐酸胍)。[b][color=#fcb441]解决方法2：[/color][/b]蛋白在柱上变性固化，用0.5M氢氧化钠洗柱。[b]04 [/b][color=#1a237e][b]可能原因：[/b][/color][b]非特异性疏水或其他相互作用[color=#fcb441]解决方法：[/color][/b]加非离子去污剂到洗脱缓冲液(如：2% Triton X-100)或增加NaCl 的浓度。[b]05 [/b][color=#1a237e][b]可能原因：[/b][/color][b]在填料表面形成高密度融合蛋白的聚集[color=#fcb441]解决方法：[/color][/b]选择合适载量的填料，切勿一味追求高载量。[b]镍柱使用中出现棕色是怎么回事01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因：[/b][/color][b]缓冲液中DTT的影响， DTT会对镍柱的颜色和纯化效率有很大的影响,在碱性的缓冲液条件下，镍离子会被DTT还原生成棕色的沉淀，所以要尽量避免DTT的参与。[color=#fcb441]解决方法：[/color][/b]若样品中含有DTT，在上样之前, 我们推荐采用不含还原性试剂的空白运行来除去任何较弱结合的镍离子；空白运行方法（使用不含还原剂的平衡液和洗脱液）1）5倍柱体积的双蒸水洗柱 ；2）5倍柱体积的平衡液洗柱；3）5倍柱体积的洗脱液洗柱；4）10倍柱体积的平衡液平衡。当不使用时，勿将Ni Tanrose 6FF（IDA）保存于含还原性试剂的缓冲液中。

[font=宋体][font=宋体]融合标签是已知的蛋白或多肽[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]可融合到目标蛋白上。在重组蛋白中，常常将目的蛋白末端与一些标签进行融合表达，这是为什么呢？常见的融合标签有哪些呢？它们都有什么区别呢？下面是[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]融合标签蛋白纯化[/b][/url]常见问题解析分享：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：什么是融合标签？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：融合标签是指利用 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]体外重组技术，在目的蛋白 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端或 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端进行融合表达的特定蛋白、多肽或寡肽标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：融合标签有什么作用？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：重组蛋白通过融合标签与包被在固相基质上的特异配基结合，使重组蛋白定向固定并得以纯化，大大简化了重组蛋白的检测，同时既能保留天然蛋白的大部分结构，又能实现增加溶解度，防降解，促进分泌，便于纯化等功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：融合标签的分子量和功能有关吗？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：蛋白融合标签的分子量越大，对蛋白质本身的功能影响越大，所以大分子融合标签一般只用于检测或蛋白纯化等。常见的小分子量的融合标签，因其具有很多商品化的标签抗体，可以节省使用者制备目的蛋白的单克隆抗体的时间与成本。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：是否所有的融合标签都需要切除？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：融合标签较小，免疫原性也很弱，一般不需要切除，对蛋白质的后续应用和研究不会产生影响。但是有些大标签是需要切除的，例如：[/font][font=Calibri]Dsb [/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]FkpA [/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]蛋白、[/font][font=Calibri]SUMO [/font][font=宋体]标签等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了便于将重组蛋白的融合标签去除，在设计构建载体时需要在标签蛋白和目的蛋白之间加上蛋白酶识别位点，常用的蛋白酶位点有：[/font][font=Calibri]HRV 3C [/font][font=宋体]蛋白酶切位点、[/font][font=Calibri]TEV [/font][font=宋体]蛋白酶切位点、肠激酶切位点、[/font][font=Calibri]SUMO [/font][font=宋体]蛋白酶切位点等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：融合标签加在 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端或 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端，有什么区别？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]：蛋白融合标签对于 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端或 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端的选择性对重组蛋白的结构与特性会造成一定的影响。例如，对于较难表达或较容易降解的蛋白，可将融合标签选择在 [/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’ 端，可以提高重组蛋白的稳定性，也可减小对重组蛋白的免疫原性。但是重组蛋白为分泌蛋白，在其分泌到高尔基体的过程中，处于 [/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’ 端的融合标签会随着 [/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’ 端信号肽的切除而切除，从而失去作用。在目的蛋白结构未知的情况下，可以分别于两端构建标记的表达克隆，以确定哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看义翘神州蛋白标签：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

想问下大家伙，融合蛋白的CE-SDS纯度怎么做，由于其自身带有大量的糖以及二硫键，在做CE-SDS时与单抗相比，明显峰变宽，这肯定不是最佳纯度检测方法，想问下CE纯度究竟该怎么做呢？

各位前辈好，有谁做过融合蛋白的还原性毛细管电泳分析吗？做单抗的话分离效果很好，但是做单链融合蛋白的就很少，烦请赐教，不胜感激

[font=宋体][b]重组蛋白、融合蛋白与天然蛋白的区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白是利用基因工程技术产生的，通常是由转基因动物的乳腺产生，其作为生物制药在医学领域中作用显著。利用基因工程技术，可以使哺乳动物本身变成[/font][font=宋体]“批量生产药物的工厂”。方法：是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品，因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白又称为[/font][font=宋体]“标签蛋白”，常用的标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Strep[/font][font=宋体]标签。融合蛋白是通过[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术将要表达的目的蛋白基因和表达载体上融合蛋白基因相连，通过这种方式表达出来的蛋白质，就是既含有目的基因蛋白又含有融合基因蛋白的重组蛋白。融合蛋白表达是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]天然蛋白质是在自然界中存在的，不经过人工的任何修饰或加工，比如大豆中的蛋白质和病毒表面的蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]重组蛋白常见问题解析：[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]蛋白为什么要冻干？冻干对蛋白的影响有哪些？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质对热敏感，冻干能使绝大部分蛋白质的活性保留下来，提高蛋白的稳定性并延长保存时间，同时降低运费。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂？一般冻干保护剂有哪几种？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]保护剂是用来在冻干和储存过程中保护蛋白的。常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加[/font][font=Calibri]8%[/font][font=宋体]（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集；甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂，可以降低某些蛋白的冻干后聚集情况。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]温馨提示：对于大多数蛋白，重悬后在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃仅能短期保存[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]周[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。如想长期保存，请先配制成稀释液[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]其中必须含有载体蛋白，如[/font][font=Calibri]0.1% BSA[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]5%HSA[/font][font=宋体]，或[/font][font=Calibri]10% FBS)[/font][font=宋体]，然后分装冻存于[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃或[/font][font=Calibri]-80[/font][font=宋体]℃。一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]如何重构冻干粉？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]请查看您的货物随附的分析证书以获取有关重构的确切说明，因为并非所有产品都在相同条件下重构。一般来说，我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中，轻轻摇晃以完全溶解蛋白质。不要涡旋。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]为什么我的管内几乎看不见蛋白产品？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白产品中不含载体蛋白或其它添加物[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如牛血清白蛋白[/font][font=Calibri](BSA)[/font][font=宋体]，人血清白蛋白[/font][font=Calibri](HSA)[/font][font=宋体]和蔗糖等，并以最低含盐量的溶液进行冻干时，常常不能形成白色网架结构，而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]应如何确定细胞因子的种属交叉活性？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]除少数例外，大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性。[/font][font=Calibri]2) [/font][font=宋体]许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞，但比活性可能低于对应的人类细胞因子。 [/font][font=Calibri]3) IL-7[/font][font=宋体]等为数不多的人类细胞因子作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。[/font][font=Calibri]4) [/font][font=宋体]干扰素，[/font][font=Calibri]GM-CSF, IL-3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IL-4[/font][font=宋体]等细胞因子种属特异，对非同源细胞几乎没有活性。[/font][font=Calibri]5) [/font][font=宋体]相反，成纤维细胞生长因子[/font][font=Calibri](FGFs)[/font][font=宋体]和神经营养素[/font][font=Calibri](neurotrophins)[/font][font=宋体]高度保守，在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]什么是载体蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]载体蛋白如[/font] [font=Calibri]HSA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]BSA [/font][font=宋体]用于提高重组蛋白的稳定性，并有助于避免产品粘在小瓶壁上。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]我应该如何储存重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于长期储存，蛋白质溶液应与载体蛋白（例如[/font] [font=Calibri]0.1% BSA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]0.1% HSA[/font][font=宋体]）分装保存，并在 [/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]下冷冻保存。请记住，每个冷冻[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]解冻循环都可能导致蛋白质变性。除非分析证书上另有说明，否则大多数重组蛋白的保质期为一年。如果将它们保存在分析证书上所述的最佳存储条件下，则提供此保证。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]8.[/font][font=宋体]如何确定重组蛋白的数量？为什么我的检测产生的蛋白质数量与您的结果不同？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]我们通过[/font][font=Calibri]BCA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]等方法确定重组蛋白的数量。不同的测定产生不同的量化结果。有时，如果您进行不同的检测，差异可能会很大。蛋白质也有可能在储存过程中形成聚集体，在重组和离心后导致损失。我们对每批产品进行质量控制测试，但是，同一批次中的一些小瓶可能与其他小瓶不同（这种情况很少发生）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]重组蛋白资源[/b][/url]详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/font]

分子排阻高效液相色谱法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白纯度_王婉如

大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在，需要不同的纯化策略。现在，许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能，这些自然需要将蛋白质纯化出来后，进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。必须承认，表达蛋白纯化比起DNA克隆和操作来是更具有艺术性的，尽管DNA序列具有异乎寻常的多样性(因而它是唯一适合遗传物质的)，但它却有标准的物理化学性质，而每一种蛋白质则有它自己的由氨基酸序列决定的物理化学性质(因而它具有执行众多生物学功能的用途)。正是蛋白质间的这些物理性质上的差异使它们得以能进行纯化但这也意味着需要对每一种待纯化的蛋白质研发一套新的方法。所幸的是，尽管存在这种固有的困难，但现已有多种方法可以利用，蛋白质纯化策略也已实际可行。目前，待研究蛋白或酶的基因的获得已是相当普遍的事。可诱导表达系统特别是Studier等发展的以噬菌体T7RNA聚合酶为基础的表达系统的出现使人们能近乎常规地获得过表达(overexpression)，表达水平可达细胞蛋白的2%以上，有些甚至高达50%.(一)试剂准备采用T7· Tag Affinity Purification Kit1. T7·Tag抗体琼脂。2. B/W缓冲液：4.29mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl，3. 0.137mM NaCl，1%吐温-20，pH7.3。4. 洗脱缓冲液： 0.1M柠檬酸，pH2.2。5. 中和缓冲液：2M Tris,pH10.4.6. PEG 20000.(二)操作步骤1.100ml 含重组表达质粒的菌体诱导后，离心5000g×5min，弃上清，收获菌体，用10ml预冷的B/W缓冲液重悬。2. 重悬液于冰上超声处理，直至样品不再粘稠，4℃离心 14000g×30min，取上清液，0.45μm膜抽滤后作为样品液。3. 将结合T7·Tag抗体的琼脂充分悬起，平衡至室温，装入层析柱中。4. B/W缓冲液平衡后样品液过柱。5. 10ml B/W缓冲液过柱，洗去未结合蛋白。6. 用5ml洗脱缓冲液过柱，每次1ml,洗脱液用含150μl中和缓冲液的离心管收集，混匀后置于冰上，直接SDS-PAGE分析。7. 将洗脱下来的蛋白放入透析袋中，双蒸水透析24hr,中间换液数次。8. 用PEG 20000浓缩蛋白。(三)注意事项蛋白在过层析柱前，要0.45μm膜抽滤，否则几次纯化后，柱子中会有不溶物。

70kDa）中的七个得到了可溶性表达，而其它的融合标签（GST，MBP和hexahistidine）系统则只得到了四个可溶性表达的蛋白。表1. 用大量的目标蛋白评估NusA标签对提高融合蛋白可溶性的作用参考文献a目的蛋白数目目的插入序列种属目标蛋白大小范围NusA融合蛋白可溶性比例Shih等（2002）40酵母，哺乳动物，植物，昆虫9-10060Korf等（2005）75人6-12760bKohl等（2008）96人1-11844ca. Korf等和Kohl等的研究中包含了六组氨酸标签。b. 可溶性蛋白量大于等于10%即认为该融合蛋白可溶。c. 纯化后的融合蛋白如果在SDS-PAGE后考染在合适位置出现条带即认为可溶。Korf等的还发现对于定位于真核细胞细胞器，质膜或者骨架的蛋白，相对于其它标签系统来讲，NusA标签是最好的可溶性表达的选择。Kohl等（2008）也发现只要在20-25℃诱导表达，NusA标签能够大大提高难表达的蛋白比如膜蛋白的可溶性。与Korf等的研究结果一致，Kohl等也发现25℃诱导表达比30℃或37℃诱导表达可以纯化得到更多的NusA融合蛋白。切除NusA标签获得后保持活性且正确折叠的蛋白表2总结了16个采用NusA标签成功获得可溶性蛋白，在切除标签后这些蛋白仍有正确折叠结构和活性。大部分这种研究是是关于分子量小于或接近20kDa的目标蛋白。纯化后的目标蛋白产量范围在1.5-100mg/L。趋化因子和细胞因子可以得到高达30-100mg/L的产量。其它关于这些蛋白表达和纯化的有参考价值信息包括：■ 植物磷酸烯醇式丙酮酸—羧化酶激酶（Ermolova 2003）——目标蛋白切除标签后用BDA（蓝色葡聚糖）亲和层析树脂纯化。纯化后蛋白的催化活性比未切除标签的融合蛋白高50倍。■ Xklp3a，Tep3Ag和E8R（De Marco 2004）——用蛋白酶切割后，His-融合的TEV和NusA被Ni2+离子亲和色谱选择性去除。与Ni2+亲和结合的标签被紧密地结合在树脂上，在流出液中则可以得到纯化的目的蛋白。所有这三种蛋白在纯化后都正确折叠且均一分散在溶液中。纯化的膜结合蛋白E8R牛痘病毒蛋白在Tris缓冲液中除去NusA后出现了沉淀，然而加入0.02%的月桂酰基麦芽糖苷和150mM的氯化钠后，蛋白又重新变得可溶。■ 环麦芽糖糊精酶（Turner 2005）——这个蛋白属于α-淀粉酶家族。这个家族的蛋白通常在大肠杆菌中很难以活性形式表达出来。将其与肠激酶混合孵育24小时以上会使其活性逐渐增强，直到达到未经肠激酶处理过的融合蛋白的2倍以上，这也说明标签的存在降低了该酶的活性。可以用固化了Cu2+的亲和层析柱去除切除的融合标签。■ 八种人趋化因子（Magis-trelli 2005）——所有的蛋白都在OrigamiTM B菌株中表达提高它们在胞质中的二硫键形成率。在趋化因子编码序列的C端引入了AviTMTag（亲和素）生物素化序列。切割后的细胞趋化因子可以用单体的亲和素树脂亲和层析与切割下的NusA标签和蛋白酶混合物分离开。所有切割纯化后的蛋白在细胞趋化实验中都显示了活性，而没有一个融合蛋白有这样的活性。■ 蚯蚓血红蛋白（Karlsen 2005）——酶切后，用分子筛分离纯化蚯蚓血红蛋白，纯化后的蛋白通过圆二色谱检测得到的α-螺旋结构与模型预期结果一致，且纯化后的蛋白可以以单体的形式稳定保存。■ 人白介素-29（Li 2006）——用S-蛋白亲和层析比Ni2+亲和层析可以得到更纯的目的蛋白。将融合蛋白N端的NusA/His•Tag®/S•Tag™标签切掉后，用链亲和素琼脂去除生物素标记的凝血酶。用水疱性口膜炎病毒（VSV）处理固定的人羊膜上皮细胞（WISH 细胞）后，通过检测纯化的IL-29对细胞的保护效应来检测其抗病毒活性。■ 人干扰素-λ2（Li 2007）——酶切后，用Novagen提供的EKaptureTM琼脂除去重组的肠激酶。先用纯化后的干扰素-λ2处理WISH细胞，24小时后加入VSV病毒，可以观察到干扰素-λ2可以有效地保护细胞免于病毒介导的病变。表2. 切除NusA标签获得后保持活性且正确折叠的蛋白参考文献目的蛋白目的蛋白分子量（kDa）切割用蛋白酶融合蛋白亲和层析固定介质纯化后目的蛋白产量（mg/L）Ermolova等（2003）植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶32凝血酶Ni2+1.5De Marco等（2004）Xklp3ATep3AgE8R15NRa32bTEV酶TEV酶TEV酶Ni2+5.02.54.0Turner等（2005）环麦芽糖糊精酶69肠激酶Cu2+1.6Magistrelli等（2005）八种人趋化因子8-21Xa因子Ni2+30-100Karlsen等（2005）蚯蚓血红蛋白15TEV酶Ni2+NRaLi和He（2006）人白介素-2920凝血酶S-蛋白60Li和Huang（2007）人干扰素-λ220肠激酶Ni2+65a. 未报道b. 根据NCBI报道预测的全长蛋白分子量与NusA标签融合且具有活性的蛋白 与这些切除NusA标签后保持活性且正确折叠的蛋白不同，还有很多报道指出目的蛋白在“NusA-目的蛋白”的融合形式时具有很好的活性。比如单链（ScFv）催化活性抗体14D9（Zheng 2003），来自Aequorea victoria的绿色荧光蛋白（Nallamsetty 2006），人二氢叶酸还原酶（Nallamsetty 2006），来自Ensis directus蛏子的精氨酸酶激酶（Compaan 2003），来自B. thuringiensis的修饰δ-内毒素（Kumar 2005），人BCMA跨膜受体（Guan 2006），植物α-双加氧酶1（Liu 2006），以及来自Plasmodium falciparum的b-ketoacyl-acyl载体蛋白合成酶（Lack 2006）等，反映了各种不同背景的蛋白都显示出了与NusA标签融合后的活性。NusA标签提高蛋白可溶性的可能机制 Houry（1999）等揭示NusA蛋白是分子伴侣GroEL在体内的必须底物。而GroEL与其共作用因子GroES是大肠杆菌唯一的在所有生长条件下必需的分子伴侣系统。Douette等（2005）研究了融合蛋白NusA-UCP1（uncoupling protein 1）的可溶产量。UCP1是一种线粒体膜蛋白。这些作者发现16℃培养时，当GroEL共过表达的情况下，融合蛋白的可溶性有更大的提高。这个结果也表明NusA与分子伴侣途径相作用，从而阻止参与蛋白的聚集。总结 已有充分的证据证明NusA标签系统能显著提高多种不同来源蛋白的可溶性表达，而这些蛋白在单独表达时往往形成不可溶的包涵体。在一些研究报告中，用蛋白酶切除NusA标签能使目的蛋白仍保持正确折叠和生物学活性；相反，在另外许多报道中也指出当目的蛋白与NusA融合而非切除时，融合蛋白也同样具有活性。NusA标签系统的成功至少部分地是由于其与大肠杆菌分子伴侣系统相互作用的结果。

[font=宋体][font=宋体]蛋白质的检测在生物科学研究中占据着至关重要的地位。其中，免疫分析方法被广泛应用，包括[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、酶联免疫吸附试验（[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]）和免疫沉淀法（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）等。这些方法依赖于抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体间的特异性反应，通过注射目标蛋白作为抗原至动物体内，产生免疫反应后分离抗体，进而进行检测。尽管应用广泛，但这种方法的缺点在于每次更换目标蛋白时都需要制备对应的抗体，操作繁琐且成本高昂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合标签技术的出现为蛋白质免疫分析带来了通用化和便利化。通过将特定的标签与目标蛋白融合，两者实现共同表达。通过对融合标签的检测，我们可以了解目标蛋白的表达情况。这种蛋白标签技术利用基因克隆手段，将具有特定功能的多肽、蛋白质结构域甚至完整蛋白质与目标蛋白结合，广泛应用于目标蛋白的表达、纯化、检测和跟踪等方面。经过长期研究，已经发展出一些成熟的检测标签技术。这些标签不仅简化了实验操作，降低了成本，而且为蛋白质研究提供了强有力的工具。下面就挑几个来介绍一下：[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]His[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]-tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]标签[/b][/url]是当前最为热门的标签蛋白之一。[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是指六个组氨酸残基组成的融合标签（[/font][font=Calibri]HHHHHH[/font][font=宋体]），可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析（[/font][font=Calibri]IMAC[/font][font=宋体]），对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体][font=Calibri]Flag-tag[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]Flag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），同时载体中构建的[/font][font=Calibri]Kozak[/font][font=宋体]序列使得带有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]③[/font][font=宋体][font=Calibri]AviTag[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]④[/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]是从人的[/font][font=Calibri]O6[/font][font=宋体]－甲基鸟嘌呤[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]甲基转移（[/font][font=Calibri]O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase[/font][font=宋体]）获得。[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团，释放出了鸟嘌呤。这种新的硫醚键共价结合使[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞，方便快捷地进行活细胞内[/font][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]融合蛋白的标记与检测。它们也可特异性地标记大肠杆菌，酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的[/font][font=Calibri]SNAP-tag[/font][font=宋体]融合蛋白。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑤[/font][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]（谷胱甘肽巯基转移酶）[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用[/font][font=Calibri]10mM[/font][font=宋体]还原型谷胱甘肽洗脱。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化：该表达系统表达的[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和树脂进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑥[/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（绿色萤光蛋白）是由下村修等人在水母中发现的。它在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签可位于蛋白质的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，该系统已广泛应用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等，相应的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签抗体也被广泛应用。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]在检测蛋白表达、蛋白和细胞荧光示踪、研究蛋白质之间相互作用和构象变化中，起到了重要的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]该如何选择表达克隆的标签[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、首先，需要确定融合标签的目的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化[/font] [font=宋体]：标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]常被用于细胞内源蛋白的纯化。[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景，因此极少使用[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测：若需要做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达，你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势，成为[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验中常用的[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀反应：[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中最常用的[/font][font=Calibri]Tag. [/font][font=宋体]其他常用的标签有：[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]cMyc.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀。首先，裂解您的样本，以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时，加入靶向融合标签的抗体，抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白[/font] [font=Calibri]A [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]G [/font][font=宋体]偶联微珠结合，后者拉出您的目标蛋白，以及与之复合的其他蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞成像：荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Fluorescent Proteins, FPs[/font][font=宋体]）是活细胞成像常用的标记蛋白。其中最常用的是绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）和它的衍生物（[/font][font=Calibri]CFP, YFP, etc.[/font][font=宋体]），以及一些红色变体，如[/font][font=Calibri]dTomato[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]mCherry.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、考虑融合标签的影响[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、考虑是在[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端标记和[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]技术现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]标签蛋白[/b][/url]主要分为两类：一类为自发荧光标签，它们主要应用于目标蛋白表达代谢的动态监测，另一类就是主要辅助蛋白质分离纯化的亲和吸附标签。本期盘点的内容主要针对亲和吸附标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和吸附标签不仅便于对融合蛋白的检测与纯化，而且可能对目标蛋白的理化性质产生有利的影响：可以提高重组蛋白的产量，增强重组蛋白的可溶性，促进重组蛋白的正确折叠。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]常用亲和吸附标签蛋白[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签被认为是蛋白纯化的首选标签，它由六个组氨酸残基（[/font][font=Calibri]HHHHHH[/font][font=宋体]）组成，分子量极小只有[/font][font=Calibri]~0.84KD[/font][font=宋体]，可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签融合蛋白的纯化是借助于层析介质上的过渡金属离子（如[/font][font=Calibri]Cu[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Zn2+[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Ni2+[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Co[/font][font=宋体]等）与[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]融合蛋白上的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签的配位作用实现目标蛋白的分离。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签很小，几乎不影响目标蛋白的理化性质及其可溶性，在目标蛋白结晶后对其蛋白结构几乎没有影响；并且其免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行抗体制备。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]然而，并不是所有的蛋白质都可以与[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签融合后，采用固定化金属离子亲和层析分离纯化。宿主蛋白中含有半胱氨酸及天然发生的组氨酸丰富区域，在固定化金属离子亲和层析时可能会导致其他蛋白的非特异性结合[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]目标蛋白含有金属离子，一般也不采用[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签与固定化金属离子亲和层析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]FLAG[/b][/url][/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]FLAG [/font][font=宋体]标签是由[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸[/font][font=Calibri]( DYKDDDDK) [/font][font=宋体]组成的一个短肽，分子量很小，因而不会遮盖融合蛋白中其他的蛋白表位与结构域，也不会改变融合蛋白的功能、分泌或运输。目的蛋白[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端融合了[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]多肽后，[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端还可以融合其他模块或者不同的亲和配体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签的基础上，将[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]FLAG [/font][font=宋体]标签串联在一起，便形成了一个由 [/font][font=Calibri]22 [/font][font=宋体]个氨基酸组成的[/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]× [/font][font=Calibri]FLAG [/font][font=宋体]标签。与原始[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签相似，[/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]× [/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签的分子量很小，只有[/font][font=Calibri]2.7 kDa[/font][font=宋体]，天然亲水，因而不会改变融合蛋白的功能，且同时含有一个肠激酶切割位点，便于除去标签。更为重要的是，该标签具有更高的检测敏感性，特别适合于哺乳动物细胞表达系统中低表达水平蛋白质的检测。而对于某些需要维持生物活性的小分子目标蛋白，在其免疫沉淀纯化中，结合一个高效接头结构的[/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]× [/font][font=Calibri]FLAG [/font][font=宋体]标签表现出更显著的纯化效果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]标签由 [/font][font=Calibri]211 [/font][font=宋体]个氨基酸组成，大小约为[/font][font=Calibri]26kDa[/font][font=宋体]，广泛用于重组蛋白融合表达与亲和纯[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]化。[/font][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]标签可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达，起到提高表达量的作用；[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]可在一定程度上增大融合蛋白的可溶性，不仅促进了目标蛋白的正确折叠，提高了蛋白产量，而且有助于后续的蛋白纯化；[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可很好的保留融合蛋白的抗原性和生物活性，并可使用不同的蛋白酶方便去除。但[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]易于同源二聚化，从而增加纯化难度，且相对短肽标签，分子量较大，在融合表达时可能会影响蛋白功能，并增加细胞代谢负担。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]标签蛋白（[/font][font=Calibri]EQKLISEEDL[/font][font=宋体]），其大小为[/font][font=Calibri]1.2kDa[/font][font=宋体]，它作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中可识别其相应的抗体。[/font][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]标签常应用于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]、免疫沉淀和细胞流式术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。但需要注意的是[/font][font=Calibri]Myc[/font][font=宋体]标签蛋白本身即为人的[/font][font=Calibri]Myc[/font][font=宋体]基因的一部分，所以应尽量避免将该蛋白应用于人的细胞或组织相关实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/ha-tag-protein-production[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签（氨基酸序列：[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]）是?段来源于?流感病毒?凝素（[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]）蛋?第 [/font][font=Calibri]98[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]106 [/font][font=宋体]位氨基酸的短序列，分?量为[/font][font=Calibri]1.1 KDa[/font][font=宋体]，是?前?泛应?的表位标签之?，能形成强烈的抗体识别位点。通过分??物学?段将[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签融合到?的蛋?的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端后，抗 [/font][font=Calibri]HA [/font][font=宋体]标签抗体可?于[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标记的靶蛋?的检测、分离和纯化，??需蛋?特异性抗体或探针。[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]对外源蛋白的空间结构影响小，容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如何选择合适的亲和吸附标签？通常需要注意以下[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]① 根据实验目的选择合适的标签，例如蛋白纯化选择[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签，[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]通常选择[/font][font=Calibri]FLAG[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]② 确定标签蛋白对目的蛋白的表达是否产生干扰、[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③ 确定标签蛋白标记的位置是在目的蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体]在生物学研究中，融合标签作为一种强大的工具，广泛应用于蛋白质纯化、定位和功能分析等方面。而在众多的融合标签中，表位标签、亲和标签和荧光标签是三种常见的分类。它们各自具有独特的特性和应用，为生物学研究提供了便利。表位标签主要用于蛋白质的检测和识别，通过特定的抗体与表位结合，实现对目标蛋白质的精准定位。亲和标签则依赖于其与特定配体的亲和力，用于蛋白质的纯化和分离。荧光标签则以其独特的发光性质，为蛋白质在细胞内的定位和动态变化提供了直观的观察手段。本文将深入探讨这三种标签的区别及其在各自领域的应用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]为什么要考虑融合标签？融合标签的优缺点：[/font][/b][font=宋体]优点：[/font][font=宋体]①无需特异性蛋白即可分离目标蛋白[/font][font=宋体]②有时可在纯化后裂解标签[/font][font=宋体]③可将多个标签连接到同一蛋白上，增加其功能[/font][font=宋体]④避免免疫沉淀中出现抗体干扰[/font][font=宋体]⑤荧光标签可用于显示活细胞中的蛋白[/font][font=宋体]⑥多种标签供选择，适合不同的应用[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：[/font][font=宋体]①某些标签可能会影响蛋白功能[/font][font=宋体]②可能需要多次尝试才能找到最佳标签位置，导致实验成本增加[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]标签揭秘：表位标签、亲和标签和荧光标签[/font][font=宋体][/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]融合标签主要分为三类，适用于不同的应用：表位标签、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/affinity-tag][b]亲和标签[/b][/url]和荧光标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如[/font] [font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。[/font][/font][align=center][font=宋体] [/font][img=表位标签抗体+序列,534,481]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403051443476642_6751_5907840_3.png!w534x481.jpg[/img][/align][font=宋体]亲和标签一般较长，可用于蛋白纯化或增加蛋白溶解度。[/font][align=center][font=宋体] [/font][img=亲和标签抗体+序列,500,284]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403051444164170_2397_5907840_3.png!w500x284.jpg[/img][/align][font=宋体]荧光标签可用于活细胞和死细胞，并广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。[/font][align=center][img=荧光标签抗体+序列,537,191]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403051444342533_295_5907840_3.png!w537x191.jpg[/img][/align][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]标签揭秘选择[/font] [font=Calibri]C [/font][font=宋体]端还是 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端？[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]选择将标签融合到目标蛋白的[/font] [font=Calibri]C [/font][font=宋体]端还是 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端，很大程度上取决于蛋白本身：蛋白的折叠方式，以及您选择的末端是否有功能要求。例如，如果 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端在蛋白内部折叠，那么您收到融合蛋白信号的可能性非常小；或者，如果蛋白在标签融合末端进行翻译后剪切，那么标签将从目标蛋白中移除。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]如果您有资源或准备开展新型实验，最好同时克隆[/font] [font=Calibri]C [/font][font=宋体]端和 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端标签的构造，从而确定最佳选择。一研究小组发现，与 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端的标签融合蛋白相比， 更多的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端融合蛋白定位于目标亚细胞腔隙。但是，需要强调的是，虽然 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端标签蛋白的定位和表现往往符合预期，但并不是始终可以预测。[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]定位是否正确，可通过免疫荧光进行检测；免疫印迹有助于确认融合蛋白的大小是否正确并以预期的水平表达，[url=https://cn.sinobiological.com/services/ip-co-ip-service][b]免疫共沉淀[/b][/url]有助于评估融合蛋白与已知底物的相互作用方式。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体]蛋白标签是指与靶蛋白相连的融合蛋白的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具，可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化，并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。如果有针对这些标签的特异抗体，这些标签也可应用于目的蛋白的亲和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.Flag[/font][font=宋体]标签蛋白[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），其融合表达目的蛋白后具有以下优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）作为融合表达标签，[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）融合在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]，可以被肠激酶切除（[/font][font=Calibri]DDDK[/font][font=宋体]），从而得到特异的目的蛋白。因此[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签现已广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）易于用[/font][font=Calibri]Anti-Flag[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.HA[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签蛋白，序列为[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]个氨基酸残基多肽，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，对外源靶蛋白的空间结构影响小[/font][font=Calibri], [/font][font=宋体]容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。易于用[/font][font=Calibri]Anti-HA[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.c-Myc[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]C-Myc [/font][font=宋体]标签蛋白，是一个含[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基的小标签，标签序列[/font][font=Calibri]Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu[/font][font=宋体]，这[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基作为抗原表位表达在不同的蛋白质中仍可识别其相应抗体。[/font][font=Calibri]C-Myc tag[/font][font=宋体]已成功应用在 [/font][font=Calibri]Western-blot[/font][font=宋体]杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][b]4.Avi Tag[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]Avi Tag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]标签蛋白[/b][/url]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化。为了纯化重组蛋白，选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]标签系统具有以下几大优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）无论在体外或者体内，几乎所有的蛋白都可以在一个独特的[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]位点轻易且有效地被生物素化；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）生物素化是通过酶和底物的反应来实现，反应条件相当温和而且标记的专一性极高；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）生物素[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]只有[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸，对蛋白空间结构的影响非常小；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）生物素与链亲和素具有很高的很专一的结合活性，非常便于后期检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]可以查看：[/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体]蛋白标签是指与靶蛋白相连的融合蛋白的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具，可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化，并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。如果有针对这些标签的特异抗体，这些标签也可应用于目的蛋白的亲和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression]Flag[/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression]标签蛋白[/url][/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），其融合表达目的蛋白后具有以下优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）作为融合表达标签，[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）融合在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]，可以被肠激酶切除（[/font][font=Calibri]DDDK[/font][font=宋体]），从而得到特异的目的蛋白。因此[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签现已广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）易于用[/font][font=Calibri]Anti-Flag[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.HA[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签蛋白，序列为[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]个氨基酸残基多肽，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，对外源靶蛋白的空间结构影响小[/font][font=Calibri], [/font][font=宋体]容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。易于用[/font][font=Calibri]Anti-HA[/font][font=宋体]的抗体进行检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.c-Myc[/font][font=宋体]标签[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]C-Myc [/font][font=宋体]标签蛋白，是一个含[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基的小标签，标签序列[/font][font=Calibri]Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu[/font][font=宋体]，这[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基作为抗原表位表达在不同的蛋白质中仍可识别其相应抗体。[/font][font=Calibri]C-Myc tag[/font][font=宋体]已成功应用在 [/font][font=Calibri]Western-blot[/font][font=宋体]杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][b]4.Avi Tag[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]Avi Tag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]标签蛋白[/b][/url]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化。为了纯化重组蛋白，选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]标签系统具有以下几大优点：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）无论在体外或者体内，几乎所有的蛋白都可以在一个独特的[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]位点轻易且有效地被生物素化；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）生物素化是通过酶和底物的反应来实现，反应条件相当温和而且标记的专一性极高；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）生物素[/font][font=Calibri]Avi Tag[/font][font=宋体]只有[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸，对蛋白空间结构的影响非常小；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）生物素与链亲和素具有很高的很专一的结合活性，非常便于后期检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]更多蛋白标签可以查看：[/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b][font=Calibri]SUMO [/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]small ubiquitin-like modifier[/font][/b][/url][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]）标签蛋白[/b][/url]是一种小分子泛素样修饰蛋白，研究发现[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以进一步提高融合蛋白的表达量，且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白可溶性等功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]蛋白最早于[/font][font=Calibri]1996[/font][font=宋体]年在酵母中发现其修饰的蛋白，后来发现从酵母到真核细胞都有泛素化修饰的蛋白。泛素化修饰作为一种很常见的蛋白翻译后修饰，也是目前一个研究热点。目前研究发现真核细胞中有多种[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]蛋白， [/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]化主要修饰蛋白质的赖氨酸残基，[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]化修饰是一个动态可逆的过程，通过修饰解离动态调节蛋白结构以维持不同的生理功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]作为融合标签蛋白的优势[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]与[/font][font=Calibri]MBP,GST,GFP,TrX[/font][font=宋体]等标签比较具有更大优势：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]促进靶蛋白可溶性表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]作为伴侣蛋白，促进蛋白质正确折叠；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]对热和蛋白酶有很强的耐受性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]有配套的特异性蛋白酶可以切除标签，精准结构性识别，相比较于以来蛋白氨基酸序列的酶切位点具有更好的特异性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]标签的分子量较小，相对于目标蛋白占比性较高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]在蛋白质表达中的应用[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Sumo[/font][font=宋体]融合标签被广泛的应用于原核表达系统，除了用于常规蛋白的表达外还用于毒性蛋白，抗菌肽，蛋白二聚体的表达；但是其不能用于真核表达系统，原因是真核细胞内有[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]蛋白酶。但是道高一尺，魔高一丈，目前已经有公司开发出既可用于真核又可用于原核系统的[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]标签，以及配套的蛋白酶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification[/font][/font]

[font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]（1）蛋白标签是什么？[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]一些特定的肽类和蛋白质被广泛用于生产重组蛋白，与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白的表达、检测和纯化。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]（2）常见的蛋白标签有哪些？[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]①His。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]His是由组氨酸残基组成的融合标签，可以插在目的蛋白的C端或N端。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]His-tag主要用于重组蛋白的分离纯化。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]His-tag主要特点：分子量小，对蛋白结构影响较小；可以在变性条件下进行纯化；可用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用；免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物制备抗体；可以与其它亲和标签一起构建双亲和标签。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]②Flag。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Flag-tag为编码8个氨基酸的亲水性多肽。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Flag-tag主要用于提高蛋白表达量。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Flag-tag主要特点：不会与目的蛋白相互作用；不会影响目的蛋白的功能和性质；融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除，从而得到特异的目的蛋白。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]③MBP。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]MBP标签大小为40kD。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]主要用于增加原核表达中融合蛋白的溶解性。然而，由于MBP-tag过大，因此，需要用位点专一的蛋白酶切割标签。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]④HA。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]HA标签蛋白主要由9个氨基酸组成。主要用于Anti-HA抗体检测和ELISA检测。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑤Myc。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Myc标签蛋白是一个含11个氨基酸的小标签。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Myc-tag主要应用于WB检测、免疫沉淀和流式细胞计中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑥GST。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]GST标签蛋白大小为26KD。主要应用在原核表达中。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]GST-tag主要特点：增加外源蛋白的可溶性；可以在大肠杆菌中大量表达，提高蛋白的表达量。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑦eGFP/eCFP/eYFP/mCherry。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]这几类主要是荧光标签，即绿色荧光蛋白/黄绿色荧光蛋白/黄绿色荧光蛋白/红色荧光蛋白。主要用于蛋白的定位和跟踪。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑧Strep-II。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Strep-II主要由8个氨基酸组成，其分子量很小，不会影响融合蛋白的表位和结构域。主要用于蛋白的分离纯化。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑨Avi。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]Avi-tag标签蛋白是一个由15个氨基酸组成的短肽。可用于蛋白的分离纯化和蛋白质相互作用研究。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]⑩SUMO。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]SUMO可作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以提高融合蛋白的表达量。由于其具有抗蛋白酶水解，促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白的可溶性。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]此外，SUMO还可以用于完整地切除标签蛋白，因此，SUMO标签也常用于和其他标签一起应用，作为特异酶切水解位点。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]?荧光素酶。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]常用的荧光素酶也属于标签蛋白，包括萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。[/color][/size][/font]

[font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白纯化原理：[/font][/font][font=宋体][font=宋体]谷胱甘肽[/font][font=Calibri]-S-[/font][font=宋体]转移酶[/font][font=Calibri](GST)[/font][font=宋体]是一个由[/font][font=Calibri]211[/font][font=宋体]个氨基酸组成的大小为[/font][font=Calibri]26kDa[/font][font=宋体]序列，它是另一种广泛使用的可提高靶蛋白的溶解度亲和标签。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签与固定化的谷胱甘肽具有亲和力，常用于原核表达。它可以与一个蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端融合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]谷胱甘肽亲和是一种有效的一步纯化[/font][font=Calibri]GST([/font][font=宋体]谷胱甘肽[/font][font=Calibri]S-[/font][font=宋体]转移酶[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]标签蛋白的方法。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]可作为一种可溶性蛋白在大肠杆菌细胞质中大量表达，并具有完全的酶活性。此外，许多在大肠杆菌中表达时不溶的真核蛋白，在表达为[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白时被证明至少部分可溶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]谷胱甘肽[/font][font=Calibri]S-[/font][font=宋体]转移酶（[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]）的应用：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]谷胱甘肽[/font][font=Calibri]S-[/font][font=宋体]转移酶（[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]）是具有多基因、多功能的[/font][font=Calibri]II[/font][font=宋体]相代谢酶家族成员，广泛存在于动物、植物、昆虫、真菌、酵母和各种细菌中。能够催化还原型谷胱甘肽与各种亲电化合物进行亲核加成反应，从而使其极性提高，易于从尿液中排出。因此，[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]家族蛋白是一类在外源化合物生物转化、保护机体免受过氧化作用损害和药物代谢过程中的一类极为重要的多功能蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在生物研究领域，来源于日本血吸虫的谷胱甘肽巯基转移酶（[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]）标签，是目前应用最为广泛的融合标签之一。融合标签技术是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术将某种标签编码基因融合于目的基因的[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]′端或[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]′端，再通过适宜的宿主来表达融合蛋白。表达的融合蛋白可以通过其融合标签与包被在固相基质上的特异性配基结合，从而纯化出融合蛋白。[/font][font=Calibri]1988[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Smith[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Johnson[/font][font=宋体]首次提出[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白的亲和纯化法，此后广泛使用。目前，国内外纯化[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白的主要方法是亲和纯化法。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白亲和纯化，其配基通常是[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]的底物谷胱甘肽（[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]），通过酶与底物的特异性结合来实现[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]蛋白的分离纯化。其原理是：在固相基质上通过巯基结合一个谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶之间的特异性作用力，使得带[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的融合蛋白与基质上的谷胱甘肽结合，达到分离纯化的目的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]自[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白亲和纯化法问世以来，[/font][font=Calibri]GST-pull down[/font][font=宋体]技术也随即成为一种研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的热门手段。该技术的原理是：利用重组技术将诱饵蛋白与[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签融合表达，融合表达的蛋白经纯化后与待测蛋白共同孵育，并用[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]琼脂糖凝胶或[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]琼脂糖磁珠将其分离下来，再通过[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]鉴定待测蛋白与诱饵蛋白的相互作用。这种方法简单易行，操作简单。此外，[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签还有助于对目标蛋白的检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression]GST[/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression]标签蛋白纯化[/url]常见问题解答：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为什么使用[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签来表达和生产蛋白？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在蛋白[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端添加[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签有利于通过[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]亲和树脂对其进行检测、分离和纯化。更重要的是，由于[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]是具有很好的溶解性的高表达的蛋白，将难以表达的蛋白与[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签相融合，有时可以显著提高重组蛋白的表达量和溶解性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化后如何裂解[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在某些应用（如蛋白的结晶）中需要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签。为了裂解[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签，需要在标签和蛋白之间设计一个蛋白酶裂解位点。在 [/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签后面的[/font][font=Calibri]EK[/font][font=宋体]裂解位点[/font][font=Calibri](GST-EK[/font][font=宋体]位点[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白结构[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]可以使[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签和裂解位点完全去除，在[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的特异裂解后不留下任何额外的氨基酸。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签纯化蛋白的优劣势？[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]适用范围广，可在不同宿主中表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]增强外源蛋白可溶性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]可用不同的蛋白酶进行去除；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]有助于保持蛋白的抗原性与生物活性，提高外源蛋白的稳定性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]特异性好，纯化方便且温和。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]分子量较大，可能会影响蛋白质的功能和下游实验；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]仅能纯化可溶性蛋白，若蛋白不可溶，则很难用变性的方法纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：义翘神州[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]蛋白标签（[/font][font=Calibri]Protein Tag[/font][font=宋体]）又称为标签蛋白，是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]体外重组技术，将目的蛋白与其融合表达形成的一种多肽或蛋白。这种标签有助于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等操作。随着技术的不断进步，研究人员已经成功开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。然而，由于不同的蛋白标签具有各自的特性，因此在质粒构建过程中常常会遇到多种问题。今天，我们将深入探讨蛋白标签的各个方面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白标签类型[/b][/font][font=宋体]蛋白标签主要分为三类，适用于不同的应用场景：表位标签、亲和标签和荧光标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如 [/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。最常用的表位标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②亲和标签一般较长，可增加蛋白溶解度，广泛应用于重组蛋白的纯化，如[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③荧光标签可用于活细胞和死细胞检测，最常用的荧光蛋白包括绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）、橙色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体]）、红色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]RFP[/font][font=宋体]）和黄色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体]）。它们被广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]蛋白标签在重组蛋白生产中有什么作用[/font][font=Calibri]?[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、识别：给蛋白加标签使其易于识别，进而快速鉴定感兴趣的蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、纯化：利用标签蛋白对目的蛋白进行纯化。例如，[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是一种由六个组氨酸残基组成的融合标签，可以插入目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，这使得[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]标签可用于固定化金属螯合层析[/font][font=Calibri](IMAC)[/font][font=宋体]，从而对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定量：通过量化标签来确定目的蛋白的存在量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、定位：通过定位标签蛋白定位到目标蛋白在细胞中的特定位置，进而研究其生理功能、信号通路等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、跟踪：在细胞、组织和生物体中，通过追踪标签蛋白质追踪目的蛋白，以研究它们的表达、分布、代谢等生物学过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，蛋白标签在重组蛋白生产中扮演着重要的角色，它们不仅提高了生产效率，还为蛋白的检测、纯化和示踪提供了便利。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用的[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]有：[/font][font=Calibri]His-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production][b]Myc-Tag[/b][/url][/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SUMO-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]……义翘神州不仅可提供重组蛋白表达定制服务，也可提供对应标签抗体产品及融合蛋白标签切除常用工具酶，如[/font][font=Calibri]EK[/font][font=宋体]蛋白酶、[/font][font=Calibri]3C[/font][font=宋体]蛋白酶等。下图是具体蛋白标签的序列和大小介绍，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[b][font=宋体]蛋白标签是什么？[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一些肽类和蛋白质被广泛的用于大量生产重组蛋白，它们与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白表达、检测、示踪和纯化。这类多肽或蛋白，被称为标签蛋白（[/font][font=Calibri]Protein Tag[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]蛋白标签的具体作用包括以下几个方面：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、识别：给蛋白加标签使其易于识别，进而快速鉴定感兴趣的蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、纯化：利用标签蛋白对目的蛋白进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定量：通过量化标签来确定目的蛋白的存在量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、定位：通过定位标签蛋白定位到目标蛋白在细胞中的特定位置，进而研究其生理功能、信号通路等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、跟踪：在细胞、组织和生物体中，通过追踪标签蛋白质追踪目的蛋白，以研究它们的表达、分布、代谢等生物学过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]常见的蛋白标签有：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]一、[/font] [font=Calibri]His6[/font][/font][font=宋体][font=宋体]序列：[/font][font=Calibri]CATCACCATCACCATCAC[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析[/font][font=Calibri](IMAC)[/font][font=宋体]，对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]His-tag[/font][font=宋体]有以下特点优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]标签的分子量小，只有[/font][font=Calibri]~0.84KD[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]可用于蛋白质[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白质、蛋白质[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]相互作用研究；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.His[/font][font=宋体]标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二、[/font][font=Calibri]Flag[/font][/font][font=宋体][font=宋体]序列：[/font][font=Calibri]GACTACAAAGACGATGACGACAAG[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]标签蛋白为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），同时载体中构建的[/font][font=Calibri]Kozak[/font][font=宋体]序列使得带有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]融合表达目的蛋白后具有以下优点：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.FLAG[/font][font=宋体]作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]融合[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的目的蛋白，可以直接通过[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.FLAG[/font][font=宋体]作为标签蛋白，其可以被抗[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的抗体识别，这样就方便通过[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]等方法对含有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白进行检测、鉴定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]融合在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]，其可以被肠激酶切除（[/font][font=Calibri]DDDK[/font][font=宋体]），从而得到特异的目的蛋白。因此现[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、[/font][font=Calibri]HA[/font][/font][font=宋体][font=宋体]序列：[/font][font=Calibri]TACCCATACGATGTTCCAGATTACGCT[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]标签蛋白，标签序列[/font][font=Calibri]YPYDVPDYA[/font][font=宋体]，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小，容易构建成标签蛋白融合到[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或者[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。易于用[/font][font=Calibri]Anti[/font][font=宋体]－[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]抗体检测和[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]四、[/font][font=Calibri]Myc[/font][/font][font=宋体][font=宋体]序列：[/font][font=Calibri]GAACAAAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTG[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Myc[/font][font=宋体]标签蛋白，是一个含[/font][font=Calibri]11[/font][font=宋体]个氨基酸的小标签，标签序列[/font][font=Calibri]Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu[/font][font=宋体]，这[/font][font=Calibri]11[/font][font=宋体]个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。[/font][font=Calibri]Myc tag[/font][font=宋体]已成功应用在[/font][font=Calibri]Western-blot[/font][font=宋体]杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]在重组蛋白生产中具有非常重要的作用，使得各种蛋白的表达和纯化得以实现，在实验过程中标签的选择，可根据实验目的来选择。义翘神州的可提供重组蛋白表达定制服务，通过适合的标签快速表达出目的蛋白。更多蛋白标签详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]体外重组蛋白表达技术已经渗透到生物学的各个领域。目前，体外重组蛋白表达系统主要有四类：原核表达系统、哺乳动物细胞表达、酵母表达系统及昆虫细胞表达。表达的一般实验包括载体构建[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]表达鉴定[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白纯化三大步骤。在构建载体阶段，除了一些必要的表达元件，还需要考虑的密码子优化和标签的选择。选择合适的标签不但有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。本文详细介绍了几种蛋白纯化标签，帮助我们更好的设计实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白纯化标签比较[/b][/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑]融合标签[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]大小（[/font][font=微软雅黑]KD）[/font][/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]功能[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]是否切除[/font][/b][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]HIS[/font][/td][td][font=微软雅黑]0.84[/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]有利纯化，能纯化可溶性[/font][font=微软雅黑]/包涵体蛋白[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑]标签小，对蛋白无影响[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]GST[/font][/td][td][font=微软雅黑]26[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强蛋白可溶性，仅能纯化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑]标签较大，影响较大[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]MBP[/font][/td][td][font=微软雅黑]44.4[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]NusA[/font][/td][td][font=微软雅黑]55[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]SOMO[/font][/td][td][font=微软雅黑]11.2[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强可溶性，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]（组氨酸标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]HIS-Tag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]蛋白纯化[/b][/url]的首选标签[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]本身的特性对目的蛋白没有影响，不会形成二聚体；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]分子量较小，只有[/font][font=Calibri]0.84KD[/font][font=宋体]，对蛋白的下游应用不会产生影响；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫原性低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可与其他标签构建双标签表达，可用于多种蛋白表达系统，纯化条件温和对蛋白影响较小。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]由[/font][font=Calibri]6-10[/font][font=宋体]个组氨酸残基组成，分子量不到[/font][font=Calibri]0.84KD[/font][font=宋体]，，通常插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。[/font][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]是目前原核表达最常用的标签，蛋白纯化完之后可以不需切除此标签，也不会对蛋白产生功能影响。同时，蛋白纯化步骤简便，纯化条件温和，对蛋白也不会产生太大影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]（谷胱甘肽巯基转移酶标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]相对分子质量较大，约为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]，插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端，大肠杆菌中常用在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端。[/font][font=Calibri]GST([/font][font=宋体]谷胱甘肽巯基转移酶[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶。一般选择[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的目的有两个，一是提高蛋白表达的可溶性，二是提高蛋白的表达量。蛋白表达纯化结束后需根据不同的蛋白应用而确定是否切除标签，标签较大，切除与否需根据下游应用考虑。如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。检测方法可用[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]的优缺点[/font][/font][/b][font=宋体]增加外源蛋白的可溶性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可在不同的宿主中表达，适用范围广；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可用不同的蛋白酶可以方便去除；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]很好保留了蛋白的抗原性和生物活性，提高外原蛋白的稳定性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]高特异性，纯化方便且温和；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]分子量较大，可能会影响蛋白质的功能和下游实验；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如果蛋白不可溶，很难用变性的方法纯化。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]亲和纯化原理[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]亲和层析是利用[/font][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]融合蛋白与固定的谷胱甘肽[/font][font=Calibri](GSH)[/font][font=宋体]通过硫键共价亲和，通过[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]交换洗脱的原理来进行纯化 。该纯化柱中，凝胶手臂上通过硫键结合一个谷胱甘肽。然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶（即[/font][font=Calibri]GST-tag[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]26 KDa[/font][font=宋体]））之间酶和底物的特异性作用力，使得带[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的融合蛋白能够与凝胶上的手臂谷胱甘肽结合，从而将带标签的蛋白与其他蛋白分离开。谷胱甘肽通常有氧化型[/font][font=Calibri]GSSG[/font][font=宋体]和还原型[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]，当我们使用[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]洗脱时，[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]会与凝胶上的谷胱甘肽竞争结合融合蛋白，从而将目标蛋白洗脱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶[/font][font=Calibri](Glutathione sepharose)[/font][font=宋体]亲和树脂进行纯化。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等。如果蛋白表达在包涵体中，可复性后再纯化。此外要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]MBP-Tag[/font][font=宋体]（麦芽糖结合蛋白标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]（麦芽糖结合蛋白[/font][font=Calibri]maltose binding protein[/font][font=宋体]）， 残基数[/font][font=Calibri]346[/font][font=宋体]，分子量[/font][font=Calibri]42.5KDa[/font][font=宋体]，由大肠杆菌[/font][font=Calibri]K12[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]malE[/font][font=宋体]基因编码，构建时刻放在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，用来提高可溶性（尤其是真核蛋白）。[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]的折叠需要[/font][font=Calibri]DnaK-DnaJ-GrpE[/font][font=宋体]和[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]GroEL-GeoES[/font][font=宋体]两个分子伴侣系统的帮助，这可以使这些分子伴侣聚集到目的蛋白的附近帮助其正确折叠。另外，以标签蛋白形式存在的麦芽糖结合蛋白可以减少目的蛋白的降解，提高表达产物的水溶性，也为以后对目的蛋白的纯化提供了基础。麦芽糖结合蛋白能够被多糖树脂吸附，因此在过柱时，能够使融合蛋白与其它蛋白成份分离。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]氨基酸序列：[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]标签的优缺点[/font][/font][/b][font=宋体]简单亲和纯化即可实现；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]增加蛋白表达量和蛋白稳定性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]促进蛋白的可溶性和正确折叠；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]标签较大，对蛋白的结构[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]功能会有一定影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]NusA-Tag[/font][font=宋体]（转录终止[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗终止蛋白标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]是大肠杆菌自身的一种蛋白，即转录抗终止因子，残基数[/font][font=Calibri],495[/font][font=宋体]，分子量[/font][font=Calibri]:54.87KDa[/font][font=宋体]，由[/font][font=Calibri]1999[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]Davia[/font][font=宋体]将[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]从[/font][font=Calibri]4000[/font][font=宋体]种大肠杆菌蛋白库中筛得。[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]不具有独立的纯化标签功能，所以要与其它标签[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]联用。利用原核表达时，[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]标签可以明显的提高蛋白的可溶性，例如含有[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]标签的人白介素[/font][font=Calibri]-3 [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][font=Calibri](NusA/hIL-3 )[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃条件下诱导表达几乎全部可溶[/font][font=Calibri](97%)[/font][font=宋体]，而当其单独表达或融合[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签表达时都是包涵体形式。另外[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]标签还可以提高不溶性靶蛋白如牛生长激素（[/font][font=Calibri]bGH)[/font][font=宋体]、人干扰素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]γ [/font][font=Calibri](hIFN-[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的可溶性。来自草木犀根瘤菌[/font][font=Calibri](Rizobiummeliloti)[/font][font=宋体]的酪氨酸激酶因为分子量大[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]超过[/font][font=Calibri]54kDa)[/font][font=宋体]并且基因含有大量稀有密码子，自身在大肠杆菌中无法过量表达，但是与[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]融合后却可以高效表达。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]氨基酸序列：[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]的优缺点[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]可以提高蛋白质的溶解性，可选的标签有[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]这些标签不能用专门的亲和基质纯化，融合蛋白构建时必须与可用于纯化的小亲和标签连用。尤其是当[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]蛋白增加融合蛋白溶解性时，一些在大肠杆菌中表达为不溶性的蛋白在与[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端融合时则变成可溶。但是由于它的分子量较大，导致靶蛋白的得率相对降低；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]本身不具有独立的纯化标签功能，所以要与其它标签如[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签联用；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]对蛋白下游应用会有影响，如蛋白需进行结构分析（晶体衍射或核磁共振）。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]（小泛素相关修饰物）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]SUMO[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]标签蛋白[/b][/url]是一种小分子泛素相关修饰蛋白，是存在于真核生物中高度保守的参与蛋白质小泛素化相关修饰的一类大蛋白。与[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]相比，[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]不仅可以作为重组蛋白表达的融合标签还具备分子伴侣的功能，能促进蛋白的正确折叠，对热和蛋白酶具有耐受性，更有助于保持目的蛋白的稳定性。此外，[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]标签有着与其配套的蛋白酶（专一性强），此蛋白酶识别的是[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]的三级结构，切割的特异性极高，不存在任何氨基酸的残留，因此适用于重组蛋白表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]纯化：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]重组蛋白是由操作基因[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]重组基因编码的蛋白，由特异性重组表达系统生产。重组基因是一种新的遗传组合，其中插入了来自不同分子或来自其他物种的一个或多个[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段或基因。与天然蛋白相比，重组蛋白可以相对轻松地实现大量生产。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]重组蛋白在细胞因子和生长因子的研究、酶和激酶的研究以及补体系统功能等生物过程方面发挥着重要作用。此外，重组蛋白被称为高效药物，不会产生脱靶副作用，比小分子药物的开发时间更短。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]下面是关于重组蛋白资源常见问题解析：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]蛋白为什么要冻干？冻干对蛋白的影响有哪些？[/font][/font][font=宋体]蛋白质对热敏感，冻干能使绝大部分蛋白质的活性保留下来，提高蛋白的稳定性并延长保存时间，同时降低运费。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂？一般冻干保护剂有哪几种？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]保护剂是用来在冻干和储存过程中保护蛋白的。常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加[/font][font=Calibri]8%[/font][font=宋体]（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集；甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂，可以降低某些蛋白的冻干后聚集情况。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]温馨提示：对于大多数蛋白，重悬后在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃仅能短期保存[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]周[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。如想长期保存，请先配制成稀释液[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]其中必须含有载体蛋白，如[/font][font=Calibri]0.1%BSA[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]5%HSA[/font][font=宋体]，或[/font][font=Calibri]10%FBS)[/font][font=宋体]，然后分装冻存于[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃或[/font][font=Calibri]-80[/font][font=宋体]℃。一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]如何重构冻干粉？[/font][/font][font=宋体]请查看您的货物随附的分析证书以获取有关重构的确切说明，因为并非所有产品都在相同条件下重构。一般来说，我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中，轻轻摇晃以完全溶解蛋白质。不要涡旋。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]为什么我的管内几乎看不见蛋白产品？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]蛋白产品中不含载体蛋白或其它添加物[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如牛血清白蛋白[/font][font=Calibri](BSA)[/font][font=宋体]，人血清白蛋白[/font][font=Calibri](HSA)[/font][font=宋体]和蔗糖等，并以最低含盐量的溶液进行冻干时，常常不能形成白色网架结构，而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]应如何确定细胞因子的种属交叉活性？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1)[/font][font=宋体]除少数例外，大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性。[/font][font=Calibri]2)[/font][font=宋体]许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞，但比活性可能低于对应的人类细胞因子。[/font][font=Calibri]3)IL-7[/font][font=宋体]等为数不多的人类细胞因子作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。[/font][font=Calibri]4)[/font][font=宋体]干扰素，[/font][font=Calibri]GM-CSF,IL-3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IL-4[/font][font=宋体]等细胞因子种属特异，对非同源细胞几乎没有活性。[/font][font=Calibri]5)[/font][font=宋体]相反，成纤维细胞生长因子[/font][font=Calibri](FGFs)[/font][font=宋体]和神经营养素[/font][font=Calibri](neurotrophins)[/font][font=宋体]高度保守，在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]什么是载体蛋白？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]载体蛋白如[/font][font=Calibri]HSA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]BSA[/font][font=宋体]用于提高重组蛋白的稳定性，并有助于避免产品粘在小瓶壁上。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]我应该如何储存重组蛋白？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]对于长期储存，蛋白质溶液应与载体蛋白（例如[/font][font=Calibri]0.1%BSA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]0.1%HSA[/font][font=宋体]）分装保存，并在[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]下冷冻保存。请记住，每个冷冻[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]解冻循环都可能导致蛋白质变性。除非分析证书上另有说明，否则大多数重组蛋白的保质期为一年。如果将它们保存在分析证书上所述的最佳存储条件下，则提供此保证。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]8.[/font][font=宋体]如何确定重组蛋白的数量？为什么我的检测产生的蛋白质数量与您的结果不同？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]我们通过[/font][font=Calibri]BCA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]等方法确定重组蛋白的数量。不同的测定产生不同的量化结果。有时，如果您进行不同的检测，差异可能会很大。蛋白质也有可能在储存过程中形成聚集体，在重组和离心后导致损失。我们对每批产品进行质量控制测试，但是，同一批次中的一些小瓶可能与其他小瓶不同（这种情况很少发生）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]9.[/font][font=宋体]如何区分重组蛋白、融合蛋白和天然蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白是利用基因工程技术产生的，通常是由转基因动物的乳腺产生，其作为生物制药在医学领域中作用显著。利用基因工程技术，可以使哺乳动物本身变成[/font][font=宋体]“批量生产药物的工厂”。方法：是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品，因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白又称为[/font][font=宋体]“标签蛋白”，常用的标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Strep[/font][font=宋体]标签。融合蛋白是通过[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术将要表达的目的蛋白基因和表达载体上融合蛋白基因相连，通过这种方式表达出来的蛋白质，就是既含有目的基因蛋白又含有融合基因蛋白的重组蛋白。融合蛋白表达是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]天然蛋白质是在自然界中存在的，不经过人工的任何修饰或加工，比如大豆中的蛋白质和病毒表面的蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]重组蛋白资源[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/font]