加热蛋白溶菌酶能杀灭诺如病毒日本东京海洋大学的一个研究小组日前宣布，在实验中发现，加热处理鸡蛋蛋白含有的溶菌酶，能灭活诺如病毒。这是由于溶菌酶能破坏包裹诺如病毒基因的外壳。诺如病毒会引发急性肠胃炎和食物中毒。这种病毒具有强大的感染力，只要有10至100个病毒体进入人体，就会导致感染，目前还没有有效的抗病毒剂。研究小组利用实验鼠的诺如病毒替代人类诺如病毒进行了实验。他们将蛋白中含有的溶菌酶在100摄氏度下加热40分钟，使其变性。接下来，将含有1％加热处理过的溶菌酶的溶液与实验鼠诺如病毒混合在一起，并观察了1分钟之后的变化。溶菌酶是蛋白等含有的一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。研究人员发现，诺如病毒基因量大幅减少，以致无法检出，并观察到病毒体出现膨胀。他们认为这是由于包裹病毒基因的外壳被破坏导致的。研究人员指出，实验鼠诺如病毒和人类诺如病毒从遗传学上来看非常类似，所以这种加热变性处理的蛋白溶菌酶对人类诺如病毒应该也有效果。他们希望将其制成消毒喷雾剂，在下一年度达到实用化。
[align=center][font='宋体'][size=29px]溶菌酶[/size][/font][/align][size=24px]赵浩博[/size][size=12px]溶菌酶又称细胞壁质酶或[/size][size=12px] N- 乙酰胞壁质聚糖水解酶。1922 年英国细菌学家 A. Fleming 发现人的唾液、 眼泪中存[/size][size=12px]在有溶解细菌细胞壁的酶，[/size][size=12px] 因其具有溶菌作用， 故命名为溶[/size][size=12px]菌酶。[/size][size=12px] 此后在人和动物的多种组织、 分泌液， 及某些植物、[/size][size=12px]微生物中也发现了溶菌酶的存在。[/size][size=12px] 随着研究的不断深入， 发[/size][size=12px]现不仅有溶解细菌细胞壁的溶菌酶，[/size][size=12px] 还有作用于真菌细胞壁[/size][size=12px]的种类，[/size][size=12px] 同时对其作用机制也有了更进一步的了解。 近几[/size][size=12px]年，[/size][size=12px] 人们根据溶菌酶的溶菌特性， 将其应用于医疗、 食品、[/size][size=12px]畜牧及生物工程中。[/size][size=12px]溶菌酶来源不同，其分子大小不一样，其氨基酸排列顺序也有所不同，如：[/size][size=12px] T4 噬菌体溶菌酶由 164 个[/size][size=12px]氨基酸组成，分子量为[/size][size=12px] 19 ku；鸡蛋溶菌酶只有 129 个[/size][size=12px]氨基酸，其分子量约为[/size][size=12px] 14.3 ku；人溶菌酶由 130 个氨[/size][size=12px]基酸残基组成，分子量为[/size][size=12px] 14.6 ku；植物中分离出的溶[/size][size=12px]菌酶，其分子量较大，约为[/size][size=12px] 24 ku~29 ku。各种溶菌酶[/size][size=12px]的等电点在[/size][size=12px] 10.7~11.5 之间，化学性质十分稳定， pH 在1.2~11.3 范围内剧烈变化时，其结构几乎不变，活性不[/size][size=12px]受影响，此外，溶菌酶对热也极为稳定，在[/size][size=12px] pH3.0 条件[/size][size=12px]下，沸水浴中加热[/size][size=12px] 60 min 其活力仍保持 90 %以上。[/size][size=12px]目前鸡蛋清溶菌酶是研究最清楚的一种溶菌酶并已投入商业化生产。它是由[/size][size=12px] 18 种 129 个氨基酸残基[/size][size=12px]构成的单一肽链，有[/size][size=12px] 4 个 S-S 键的氨基酸 Cys，等电点[/size][size=12px]约为[/size][size=12px] 11.1，最适溶菌温度为 45 ℃~50 ℃， pH 为 6.0~7.0。在酸性环境中，溶菌酶对热的稳定性很强， pH4~7[/size][size=12px]范围内，[/size][size=12px] 100 ℃处理 1 min 仍有近 100 的活力， 210 ℃加[/size][size=12px]热[/size][size=12px] 1.5 h 仍具有活性；在中性水溶液中，溶菌酶可维持[/size][size=12px]数天而不失去活性；在碱性条件下，其稳定性较差[/size][size=12px]。[/size][font='宋体'][size=14px]1. [/size][/font][font='宋体'][size=12px]溶菌酶的理化性质[/size][/font][size=12px]溶菌酶纯品呈白色、微黄或黄色的结晶体或无定形粉末，无异味，微甜，易溶于水，不溶于丙酮、乙醚。溶菌酶遇碱易被破坏，但在酸性环境下，溶菌酶对热的稳定性很强，在[/size][size=12px]pH值为4-7时，100℃处理1min，仍能较好地保持活力:pH值为3时，能耐100℃加热处理45min。 [/size][size=12px]溶菌酶化学性质非常稳定，当[/size][size=12px]pH值在一定范围内剧烈变化时，其结构几乎不变。溶菌酶不可逆变性的临界点是77℃，随溶剂的变化，不可逆变性临界点也发生变化，当溶菌酶所处溶液pH值小于1时，不可逆变性临界点降低到43℃。[/size][size=12px]溶菌酶最适[/size][size=12px]pH为5.3~6.4，可用于低酸性食品防腐；溶菌酶作为防腐剂安全性高，可被冷冻或干燥处理，且活力稳定。 [/size][size=12px]溶菌酶对几种变性剂的敏感程度为[/size][size=12px]:二恶烷二甲基乙酰胺二甲基甲酰胺丙酮，并且随溶剂用量的增加而直线下降。[/size][font='宋体'][size=14px]2. [/size][/font][font='宋体'][size=12px]溶菌酶的制备[/size][/font][size=12px]目前溶菌酶可以以鸡蛋清和蛋壳膜为材料提取制得，常用的方法有亲和层析法、离子交换树脂法、直接结晶法和聚丙烯酸沉淀法等。[/size][size=12px]亲和层析法是利用蛋白质和酶的生物学特异性，即蛋白质或酶与其配体之间所具有的专一性亲和力而设计的色谱技术。酶一底物复合物形成之后，在一定的条件下分离复合物便得到纯净的酶。常常使用的吸附剂为几丁质及其衍生物，如：几丁质粉、羧甲基几丁质、几丁质包埋纤维素、脱氨几丁质粉、[/size][size=12px]N-酰化壳聚糖、脱氨再生几丁质凝胶。[/size][size=12px]离子交换法是利用离子交换剂与溶液中的离子之间所生的交换反应来进行分离的，分离的效果较好，广泛用于微量组分的富集。一般流程为：鲜蛋一预处理一搅拌吸附一上柱洗脱一等电点沉淀一透析一喷雾干燥一成品。[/size][size=12px]溶菌酶在等电点以下较广泛的[/size][size=12px]pH值范围内，分子带正电荷，可吸附于弱酸性阳离子交换树脂上，洗脱后盐析，可得溶菌酶沉淀，再进行精制可得成品。蛋清吸附724树脂，洗涤缓冲液洗脱，硫酸铵溶液盐析透析，用NaOH去碱性蛋白，冻干溶菌酶，冻干粉沉淀干燥得到溶菌酶。在5—10℃下，将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg 724树脂中，搅拌吸附6h，在0—5℃静置过夜。倾出上层蛋清，树脂离心甩干，用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白，然后将树脂装入柱内，用0.15mol/L、pH=6.5磷酸缓冲溶液约150L洗涤树脂，再用约600L的10%硫酸铵溶液洗脱，收集洗脱液。洗脱液中加硫酸铵，使最终含硫酸铵量为40%，有白色沉淀生成，冷处放置过夜。虹吸上层清液，沉淀吸滤抽干，再用1倍蒸馏水溶解沉淀呈稀糊状，然后装入透析袋，在约5℃的条件下，对蒸馏水透析24h左右，中间换水2—3次。离心去除沉淀，沉淀再用少量水洗一次，洗液与离心液合并。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH值上升到8.0—9.0，如有白色沉淀，即离心除去。然后用3mol/L盐酸调pH=5.0，冷冻干燥，即得白色片状溶菌酶。也可将离心液用3mol/L盐酸调pH=3.5，在搅拌下缓慢加入5%的固体氯化钠，在约5℃的温度下静置48h，离心，沉淀用0℃丙酮洗涤，干燥，即得溶菌酶。[/size][size=12px]在蛋清中加入一定量的碘化物或碳酸盐等盐类，并调[/size][size=12px]pH值至9.5—10.0，溶菌酶会以结晶形式慢慢析出，而大多数蛋白质仍然在溶液。在超滤浓缩脱盐后，为获得较纯产品，采用结晶纯化酶液经超滤处理后，用NaOH调整pH 9.5，离心去除。上清液在缓缓搅拌下，加NaCl至5%，静置一周，得粗结晶。结晶溶于pH 4.6醋酸水中，分去不溶物后，进行重结晶，结晶的最终得率为60%左右。即每公斤蛋清中可得重结晶品近1.3 g，活力测定为8000U/mg。 [/size][size=12px]聚丙烯酸沉淀法为将提取过滤后含酶洗脱液，首先经过吸附步骤，即将过滤后的澄清溶液用[/size][size=12px]20%的NaOH溶液调pH至6.0，在调pH值的过程中不停的搅拌。有少量的乳白色沉淀析出，然后加入15%聚丙烯酸，立即有白色沉淀析出，加至pH值为3.0为止，静置17个小时进行静析，得到粘附于底部的乳白色胶状物。第二步解离，将前步得到的溶菌酶聚丙烯酸凝聚物。加入少量蒸馏水并用0.5 mol/L的碳酸钠，将其溶解，转移后，将pH值调到9.5。加入5%CaCl2溶液将溶菌酶聚丙烯酸解离，至无沉淀析出，然后过滤，得到澄清溶液。第三步盐[/size][size=12px]析，将所得澄清溶液加入[/size][size=12px]5%的NaCI溶液搅拌均匀。放入冰箱调温度为0℃。待有晶体析出后，用无水乙醇洗涤数次，置恒温培养箱中40℃条件下干燥称重。[/size][font='宋体'][size=14px]3. [/size][/font][font='宋体'][size=12px]溶菌酶的应用[/size][/font][font='宋体'][size=12px]本文主要从溶菌酶在食品添加剂中的应用展开进行论述。[/size][/font][size=12px]3[/size][size=12px].1 用于水产、肉类的防腐[/size][size=12px]将溶菌酶应用于水产品、肉类的保鲜防腐，目前已做了大量的研究。如早在[/size][size=12px] 2001 年前陈舜胜等就研[/size][size=12px]究了溶菌酶复合保鲜剂在冷藏（[/size][size=12px]5 ℃）与冰藏（0 ℃~1 ℃）[/size][size=12px]条件下对虾、带鱼段、扇贝柱和柔鱼的保鲜效果，结果表明，使用溶菌酶（[/size][size=12px]0.05 %）复合保鲜液浸泡后冷藏或[/size][size=12px]用溶菌酶（[/size][size=12px]0.05 %~0.08 %）复合保鲜液制备保鲜冰冰[/size][size=12px]藏，与常规保鲜方法相比，可将上述水产品的保鲜期延长约一倍的时间。[/size][size=12px]2012 年张观科又报道：采用溶[/size][size=12px]菌酶、[/size][size=12px]Nisin、甘氨酸、VC、山梨酸钾、NaCl 等不同的配比[/size][size=12px]的复合生物保鲜剂在不同温度对牡蛎进行保鲜贮藏研究。结果表明，采用[/size][size=12px] Nisin 和溶菌酶配合的生物保鲜[/size][size=12px]剂的保鲜效果最佳（在[/size][size=12px]-3 ℃微冻条件下，保藏 30 天后[/size][size=12px]感官性状仍然良好）[/size][size=12px] 。而钱曦利用海藻糖、蜂胶、茶多[/size][size=12px]酚、魔芋葡甘露聚糖、[/size][size=12px]Nisin、溶菌酶、壳聚糖和姜汁 8种[/size][size=12px]天然保鲜剂对鹿肉保鲜进行研究，结果表明：单独使用时，溶菌酶对鹿肉样品就有较明显的抑菌作用（最佳抑菌浓度为[/size][size=12px] 0.5 %）；而采用复合天然保鲜剂（茶多[/size][size=12px]酚、溶菌酶、海藻糖、[/size][size=12px]Nisin 复合）效果更好，可以有效的[/size][size=12px]提高鹿肉的货架期至[/size][size=12px] 36 d。从以上研究结果来看，溶菌[/size][size=12px]酶尤其是它在与其他保鲜剂按一定比例复合使用时，对水产及肉类能起到较好的防腐保鲜效果。[/size][size=12px]3[/size][size=12px].2 在低度酒类、饮料中的应用[/size][size=12px]日本已成功的使用鸡蛋清溶菌酶代替水杨酸作防腐剂用于清酒的防腐[/size][size=12px]。在国内，倪瑛和钟立人研[/size][size=12px]究了溶菌酶在葡萄酒生产中的应用。因为在葡萄酒生产中乳酸菌会将苹果酸转变为乳酸，但如果在酒精发[/size][size=12px]酵的前期就完成了这种反应，会对葡萄酒的感官产生不良影响，而控制乳酸菌生长的传统方法是使用[/size][size=12px] SO2，[/size][size=12px]但[/size][size=12px] SO2 的使用不仅对人体产生毒性，同样影响葡萄酒[/size][size=12px]的品质。因此，倪瑛等尝试将溶菌酶替代或补充[/size][size=12px] SO2 调[/size][size=12px]控乳酸菌的生长，结果显示，在葡萄原汁中加入[/size][size=12px] 0.1 %~0.15 %的溶菌酶，乳酸菌生长被抑制；在白葡萄酒中溶[/size][size=12px]菌酶剂量加至[/size][size=12px] 0.5 %时，可完全抑制苹果酸向乳酸的转[/size][size=12px]变。此外，将溶菌酶用于饮料防腐也有报道，如常凯等将溶菌酶（[/size][size=12px]0.05 %） 、甘氨酸和 NaCl 进行复配用于生[/size][size=12px]产脱脂山核桃乳，其抑菌效果较显著，降低了山核桃乳的杀菌强度，延长了产品货架期。从以上结果看，在葡萄酒的生产中溶菌酶可作为[/size][size=12px]SO2 天然的、安全的替代或补充品来抑制乳酸菌的生[/size][size=12px]长，在其他低度果酒中也可做类似的尝试；同样将溶菌酶用饮料的防腐也有较显著的效果。[/size][size=12px]3[/size][size=12px].3 在乳制品中的应用[/size][size=12px]由于溶菌酶对肠道中腐败性微生物有特殊的杀灭作用，同时可直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖[/size][size=12px]。因此，有大量有关溶菌酶应用于婴幼儿奶粉的[/size][size=12px]专题论述[/size][size=12px] 冯棋琴，等：溶菌酶在食品工业中的研究进展[/size][size=12px]35研究报道，如刘浩强等研究了鸡蛋溶菌酶对婴幼儿[/size][size=12px]配方奶粉的抑菌效果，结果表明，婴幼儿配方奶粉在喷雾干燥后添加[/size][size=12px] 10 mg/100 mL~50 mg/100 mL 的鸡蛋[/size][size=12px]溶菌酶效果最好。张明江[/size][size=12px]等关于婴幼儿配方奶粉中[/size][size=12px]溶菌酶的添加工艺的研究也得出了相似的结论，既奶粉喷雾干燥后添加[/size][size=12px] 500 mg/L 的溶菌酶抑菌效果最好。[/size][size=12px]3[/size][size=12px].4 在水果保鲜上的应用[/size][size=12px]水果经过溶菌酶处理，其表面的细菌被有效的抑制或杀灭，从而延长水果的保鲜期。胡晓亮等[/size][size=12px]采用溶[/size][size=12px]菌酶与溶菌酶复合保鲜剂对马陆葡萄进行涂膜保鲜，结果表明：溶菌酶单独使用有一定的保鲜效果，但将溶菌酶（[/size][size=12px]0.1 %）和海藻酸钠（1 %）复合使用对抑制马陆[/size][size=12px]葡萄的感官品质下降效果更为显著，在（[/size][size=12px]4±1） ℃条件下[/size][size=12px]贮藏[/size][size=12px] 25 d 后，仍保持果实的硬度和组织形态，质量损[/size][size=12px]失率仅为[/size][size=12px] 9.34 %。[/size][size=12px]溶菌酶本身作为一种天然蛋白质，能在胃肠内作为营养物质被消化和吸收，对机体无毒性，也不会在体内残留，安全性很高，加之有效的防腐特性，溶菌酶已受到了食品行业的青睐。但目前实际应用的且已商品化的是鸡蛋清溶菌酶，它的抗菌谱较窄，只对[/size][size=12px] G+细菌起作用，底物特异性[/size][size=12px]强，且投入[/size][size=12px]/效率低，这限制了它们的广泛使用。为了扩[/size][size=12px]大溶菌酶使用领域及防腐效果，可以将鸡蛋清溶菌酶与其他天然保鲜剂（如海藻糖、茶多酚、[/size][size=12px]Nisin、溶菌酶、[/size][size=12px]壳聚糖等）配合使用。[/size][size=12px]此外，随着科学技术的发展，人们还可以采用一些高科技手段（如采用微生物发酵法生产溶菌酶，采用酶修饰法合成溶菌酶复合物如溶菌酶[/size][size=12px]-环糊精、溶菌酶-半乳甘露聚糖等）生产并改良溶[/size][size=12px]菌酶。经过改良的溶菌酶不仅抗菌活性稳定，而且具有良好的乳化性能。当这些杀菌谱广、成本低、安全性高溶菌酶复合剂以及人工合成溶菌酶商品化时，溶菌酶的使用范围定会越来越广，将会在各行业发挥不可估量的作用。[/size][font='宋体'][size=14px]4. [/size][/font][font='宋体'][size=12px]溶菌酶的限量，检测与标准[/size][/font][size=12px]溶菌酶可水解细菌的细胞壁[/size][size=12px], 造成藤黄微球菌的溶解而引起溶液吸光度值的降低。[/size][size=12px]一个溶菌酶活力单位定义为[/size][size=12px]25 ℃ ,pH 6.2 条件下, 使用藤黄微球菌悬浊液在450 nm 处每分钟引[/size][size=12px]起吸光度变化为[/size][size=12px]0.001 所需溶菌酶的量。[/size][size=12px]试剂和材料[/size][size=12px]藤黄微球菌:ATCC4698 或 CICC10680。[/size][size=12px]0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液:pH 6.2。[/size][size=12px]称取[/size][size=12px]11.70 g 磷酸二氢钠(NaH[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]PO[/size][font='宋体'][size=12px]4[/size][/font][size=12px] 2H[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]O) 、7.86 g 磷酸氢二钠(Na[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]HPO[/size][font='宋体'][size=12px]4[/size][/font][size=12px]12H[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]O) 及0.372 g[/size][size=12px]乙二[/size][size=12px]胺四乙酸二钠 (EDTA-[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]Na)于无菌水中并稀释定容至1000mL。调整缓溶液pH至6.2±0.1。[/size][size=12px]注[/size][size=12px]: 用小份缓冲溶液检查pH, 以避免缓冲溶液被污染。如果需要, 通过加入更多的磷酸二氢钠溶液或磷酸氢二钠[/size][size=12px]溶液调整[/size][size=12px]pH。[/size][size=12px]溶菌酶标准品: 蛋清溶菌酶。[/size][size=12px]底物溶液: 用磷酸盐缓冲液制备50 mL 藤黄微球菌悬浊液。 使用前, 底物于37 ℃ 培养30 min。[/size][size=12px]该底物溶液室温下可稳定[/size][size=12px]2 h。 以磷酸盐缓冲液调分光光度计零点, 然后测定底物溶液的吸光度,450 nm 下读数应为0.70±0.1。[/size][size=12px]仪器和设备[/size][size=12px]分光光度计: 精度±0.001。pH 计。[/size][size=12px]注[/size][size=12px]: 所用的器皿应保持无菌, 保证工作环境的清洁。[/size][size=12px]分析步骤[/size][size=12px]试样溶液的制备[/size][size=12px]准确称取[/size][size=12px]100 mg±0.1 mg 试样, 置于50 mL 容量瓶中, 用约25 mL 磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释[/size][size=12px]定容[/size][size=12px], 充分混匀。 再转移3 mL 上述试样制备溶液至100 mL 容量瓶中, 用磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀[/size][size=12px]释定容。[/size][size=12px]标准溶液的制备[/size][size=12px]精确称取[/size][size=12px]50 mg 蛋清溶菌酶标准品于50 mL 容量瓶中, 用约25 mL 磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释[/size][size=12px]定容[/size][size=12px], 充分混匀(如果需要, 冷冻该溶液以备后续测定)。转移3 mL 上述标准制备溶液至100 mL容量[/size][size=12px]瓶中[/size][size=12px], 用磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容。测定[/size][size=12px]取[/size][size=12px]3 份标准溶液和3 份试样溶液进行测定。[/size][size=12px]25 ℃ 室温下, 将1 cm 比色皿放入分光光度计, 用磷酸盐缓冲液调整吸光度零点。 吸2.9 mL 底物[/size][size=12px]溶液于比色皿[/size][size=12px], 最初450 nm 处吸光度应为0.70±0.10,3 min 之内初始吸光度值变化应小于或等于0.003 时, 方可开始测定。 吸取0.1 mL 标准溶液加入底物溶液, 充分混合。 记录3 min 吸光度值的变[/size][size=12px]化[/size][size=12px], 每15s 记录一次吸光度值。 每分钟吸光度值变化应在0.03~0.08, 若不在要求范围需调整试样溶液[/size][size=12px]的浓度。[/size][size=12px] 重复操作测定试样溶液。[/size][size=12px]反应[/size][size=12px]1 min 后稳定, 计算时忽略最初1 min 的读数。[/size][size=12px]结果计算[/size][size=12px]酶活力[/size][size=12px] X , 按式计算:[/size][align=center][size=12px]X =(A[/size][font='宋体'][size=12px]1[/size][/font][size=12px] -A[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px])[/size][size=12px]/([/size][size=12px]2 × m ×0.001[/size][size=12px])[/size][/align][size=12px]式中[/size][size=12px]:[/size][size=12px]A1 ———[/size][size=12px]试样在[/size][size=12px]450 nm [/size][size=12px]处反应[/size][size=12px]1 min [/size][size=12px]时的吸光度[/size][size=12px] [/size][size=12px]A2 ———[/size][size=12px]试样在[/size][size=12px]450 nm [/size][size=12px]处反应[/size][size=12px]3 min [/size][size=12px]时的吸光度[/size][size=12px] [/size][size=12px]m ———用于分析的试样制备溶液中的溶菌酶质量, 单位为毫克(mg) [/size][size=12px]2 ———获得1 min 和3 min 吸光度读数所用的时间, 单位为分钟(min) [/size][size=12px]0.001———由单位溶菌酶每分钟引起的吸光度降低的值。[/size][size=12px]试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。[/size][size=12px] 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差[/size][size=12px]值不大于算术平均值的[/size][size=12px]10%。[/size][size=12px]最终对于溶菌酶的检测要求罗列如下：[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081546089787_7027_1608728_3.png[/img][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081546090379_7253_1608728_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081546091326_4621_1608728_3.png[/img][/align][size=12px]注：本标准适用于以鸡蛋清为原料[/size][size=12px], 经提取、精制等工艺制得的食品添加剂溶菌酶。[/size][size=12px]溶菌酶作为一种天然球状蛋白质，[/size][size=12px] 能促进营养物质被人[/size][size=12px]体消化吸收，[/size][size=12px] 对人体无毒性， 也不会在体内残留， 是一种安[/size][size=12px]全性很高的食品保鲜剂、[/size][size=12px] 营养保健品和药品。 由于每一类型[/size][size=12px]的溶菌酶都有其最适的作用条件，[/size][size=12px] 而且底物特异性强， 因[/size][size=12px]此，[/size][size=12px] 在应用溶菌酶时， 必需注意以下几个事项： ①充分掌握[/size][size=12px]溶菌酶的酶学特性，[/size][size=12px] 掌握食品中的营养成分、 pH 值、 食盐[/size][size=12px]浓度等影响溶菌酶效果的因素以及造成某种食品腐败的主要微生物群体，[/size][size=12px] 采用适当的添加量和添加方法才能收到应有的[/size][size=12px]防腐效果。[/size][size=12px] ②为了有效的发挥溶菌酶作用效力， 可以考虑与[/size][size=12px]其它物质配伍使用。[/size][size=12px] 如将溶菌酶与甘氨酸混合使用， 其防腐[/size][size=12px]效果则远远高于单独使用溶菌酶。[/size][size=12px] 因为甘氨酸含量达到一定[/size][size=12px]程度时，[/size][size=12px] 能抑制微生物细胞壁的合成， 这种作用对革兰氏阳[/size][size=12px]性菌和阴性菌均有效，[/size][size=12px] 从而增了溶菌酶效力的发挥。 也可[/size][size=12px]以考虑与植酸、[/size][size=12px] 聚合磷酸盐等配伍使用， 以增强溶菌酶革兰[/size][size=12px]氏阴性细菌的抑菌作用。[/size][size=12px] 不管与哪种物质配伍使用， 使用之[/size][size=12px]前都要进行小试。[/size][size=12px]参考文献：[/size][font='宋体'][size=14px][1] [/size][/font][font='宋体'][size=12px]GB 1886.257-2016,食品安全国家标准 食品添加剂 溶菌酶[s].[/s][/size][/font][font='宋体'][size=14px][2] [/size][/font][font='宋体'][size=12px]范林林[/size][/font][font='宋体'][size=12px], 林楠, 冯叙桥,等. 溶菌酶及其在食品工业中的应用[J]. 食品与发酵工业, 2015, 41(003):248-253.[/size][/font][font='宋体'][size=14px][3] [/size][/font][font='宋体'][size=12px]冯棋琴[/size][/font][font='宋体'][size=12px], 周立梅, 高文功,等. 溶菌酶在食品工业中的研究进展[J]. 食品研究与开发, 2015, 000(005):134-136[/size][/font][font='宋体'][size=14px][4] [/size][/font][font='宋体'][size=12px]张新宝[/size][/font][font='宋体'][size=12px], 陈红兵. 溶菌酶的性质及其在食品防腐中的应用[J]. 江西食品工业, 2008(4):42-45[/size][/font]
[color=#444444]实验需要定量牛血清白蛋白（BSA）和溶菌酶（LYZ）混合溶液中各自的含量是多少，用的是安捷伦1260高效液相，色谱柱C-18，25cm，300A，流动相A 0.1%三氟乙酸水溶液。流动相B 0.1%三氟乙酸乙腈溶液，但是怎么走梯度都分不开啊，总是在间隔不到1分中出峰。求大神指点[/color]
关于批准溶菌酶等物质为食品添加剂及部分食品添加剂和营养强化剂扩大使用范围、用量的公告（2010年 第23号）中华人民共和国卫生部 www.moh.gov.cn 2011-01-05 17:17:58 根据《中华人民共和国食品安全法》和《食品添加剂新品种管理办法》的规定，经审核，现批准溶菌酶等8种物质为食品添加剂，批准环己基氨基磺酸钠等22种食品添加剂和叶酸等3种营养强化剂扩大使用范围及用量。特此公告。附件: 1. 溶菌酶等8种食品添加剂.doc 2.环己基氨基磺酸钠等22种扩大使用范围、用量的食品添加剂.doc 3.叶酸等3种扩大使用范围、用量的食品营养强化剂.doc 二○一○年十二月三十一日
关于批准溶菌酶等物质为食品添加剂及部分食品添加剂和营养强化剂扩大使用范围、用量的公告（2010年 第23号）.pdf
各位大哥、大姐：谁有简易灵敏度高的方法请告知小弟，不甚感激！！！
常用酶的配制 1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。 2．蛋白水解酶类 贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理 0.01mol/L Tris(pH7.8) 链霉蛋白酶a20mg/ml-20℃（溶于水）1mg/ml0.01mol/L EDTA37℃自消化b 0.5% SDS 0.01mol/L Tris(pH7.8) 蛋白酶Kc20mg/ml-20℃（溶于水）50μg/ml0.005mol/L EDTA37～56℃无须预处理 0.5% SDS a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸
如果靶基因亚克隆在含有T7启动子的表达载体（如质粒载体pET-22b和pET-15b等）上，那么重组质粒应转化入λDE3溶源菌菌株 中，以进行靶基因的表达。 （一） 溶菌酶-DNase I-反复冻融裂解菌体法1. 单菌落接入4ml LB培养液中，过夜培养。再以1:20转接至2管4 ml LB培养液中，当OD600为0.6-0.8时，一管加IPTG诱导，另一管不加IPTG作对照。2. 离心收集菌体，每管加Binding buffer 100 μl，DNase I (2,000 u/ml) 10 μl，溶菌酶 (2 mg/ml) 5 μl。菌体充分悬浮后，在-20℃放置20分钟，室温融化，如此反复冻融8-10次。3. 吸取20 μl加入一洁净的EP管中，12,000 rpm离心10分钟，上清和沉淀分别进行SDS-PAGE电泳，以判断靶蛋白质主要以溶解形式还是以包涵体形式存在。 （二） 超声波裂解菌体法1. 单菌落接入4 ml LB培养液中，过夜培养。其中2 ml过夜培养物用于菌种保存和DNA测序，另
据美国全国广播公司财经频道报道，近日，美国加州大学欧文分校和澳大利亚弗林德斯大学的研究人员在实验中成功将煮熟的鸡蛋变回生鸡蛋。这一创新将极大地减少全球生物科技行业里癌症治疗、食物生产和其他部分的成本，总额约1600亿美元。这项研究被发表在期刊《ChemBioChem》上。还原只要几分钟据悉，该研究团队在实验中采用了多种不同的蛋白质材料，尝试将它们转化成可用的蛋白质，如溶菌酶。众所周知，鸡蛋的蛋清在煮熟的时候会变成白色，它富含蛋白质，加热后蛋白质长链展开，失去活性，然后重新组合成一种更紧密、更复杂的结构。因此，蛋清才从透明的粘液状变成白色有弹性的固体。该项目的研究人员发现了一种拆解复杂蛋白质链以使其恢复到原本结构的方法：首先，他们用一种化学物质液化熟鸡蛋的蛋白，然后用涡旋射流装置切断紧密缠结的蛋白质分子链以使它们正常重构。“是的，我们发明了一种不煮熟鸡蛋的方法。”加州大学欧文分校的化学分子生物学和生物化学教授格里戈·韦斯这样说道，“在文章里我们描述了一种可以分开纠缠的蛋白质使得它们可以再折起的设备。我们将鸡蛋蛋白在90摄氏度的温度下煮了20分钟，再将鸡蛋的一个关键蛋白质恢复到正常运转状态。”和其他研究人员一样，韦斯一直致力于有效地产生和回收有价值的分子蛋白质，这类蛋白质具有广泛的应用，但它们常常在形成时未进行正确的折叠，从而形成结构错误的形状，这导致它们几乎成为废物。“我们感兴趣的并不是处理鸡蛋的过程，而是演示这个过程有多强大。”韦斯说道，“真正的问题是你花了太多时间从试管上刮去胶性蛋白，而你需要某种回收这一材料的方法。”但常用方法非常昂贵也耗时：分子水平的透析大约要进行4天，“而新的过程只需要几分钟，它加速了上千倍。”很快会投入市场韦斯说道：“我们的研究不仅会省很多钱，更重要的是会省下大笔的时间，因为时间就是金钱。”对于该技术在癌症治疗方面的应用，他尤其乐观。癌症治疗技术中有一种是用实验室制成的抗体附着在癌细胞的蛋白质上，这样免疫系统就能摧毁这些癌细胞。在实验室制作抗体蛋白相当耗时且费用昂贵。韦斯说，这项技术可以大大减少制作抗体蛋白的时间和成本。例如，制药公司目前正在昂贵的仓鼠卵巢细胞上创造癌症抗体，这类细胞的蛋白质一般不会发生错误的折叠。快速而廉价地促进蛋白质的流水线加工，使得癌症治疗更能负担得起。工业奶酪的制造者、农民以及其他使用重组蛋白质的人，也可以因此获取更高利润。目前，加州大学欧文分校已经为该技术申请了专利，并将很快投入市场。加热蛋白溶菌酶能杀灭诺如病毒日本东京海洋大学的一个研究小组日前宣布，在实验中发现，加热处理鸡蛋蛋白含有的溶菌酶，能灭活诺如病毒。这是由于溶菌酶能破坏包裹诺如病毒基因的外壳。诺如病毒会引发急性肠胃炎和食物中毒。这种病毒具有强大的感染力，只要有10至100个病毒体进入人体，就会导致感染，目前还没有有效的抗病毒剂。研究小组利用实验鼠的诺如病毒替代人类诺如病毒进行了实验。他们将蛋白中含有的溶菌酶在100摄氏度下加热40分钟，使其变性。接下来，将含有1％加热处理过的溶菌酶的溶液与实验鼠诺如病毒混合在一起，并观察了1分钟之后的变化。溶菌酶是蛋白等含有的一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。研究人员发现，诺如病毒基因量大幅减少，以致无法检出，并观察到病毒体出现膨胀。他们认为这是由于包裹病毒基因的外壳被破坏导致的。研究人员指出，实验鼠诺如病毒和人类诺如病毒从遗传学上来看非常类似，所以这种加热变性处理的蛋白溶菌酶对人类诺如病毒应该也有效果。他们希望将其制成消毒喷雾剂，在下一年度达到实用化。
【序号】：1【作者】：【题名】：我国溶菌酶防腐剂的研究与应用进展【期刊】：【年、卷、期、起止页码】：【全文链接】：http://www.docin.com/p-348043793.html【序号】：2【作者】： 王曼曼【题名】：整体柱用于体内药物固相萃取及溶菌酶纯化的研究【期刊】： 河北大学， 【年、卷、期、起止页码】：分析化学， 2007， 硕士【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=1&recid=&filename=2010045365.nh&dbname=CMFD2011&dbcode=CMFD&pr=&urlid=&yx=&v=Mjc4OTJGeS9nVUwzSlYxMjZIck84RzlMS3FwRWJQSVI4ZVgxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkwrZlpPUnE=【序号】：3【作者】： 李静； 陈欢林； 柴红【题名】：金属螯合亲和膜吸附分离与纯化溶菌酶的研究(Ⅲ)混合酶和蛋清(壳)中的溶菌酶提取及纯化新工艺【期刊】：膜科学与技术 , 【年、卷、期、起止页码】：2001年04期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=2&recid=&filename=MKXY200104001&dbname=CJFD2001&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MTk4MTVGWllSOGVYMUx1eFlTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVJMK2ZaT1JxRnkvZ1ZyekFLQ2JUZDdHNEh0RE1xNDk=【序号】：4【作者】： 陈慧英； 吴晓英； 林影【题名】：溶菌酶分离纯化方法的研究新进展【期刊】：广东药学院学报【年、卷、期、起止页码】：2003年04期【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=3&recid=&filename=GDYX200304024&dbname=CJFD2003&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MzE0MjYrZlpPUnFGeS9nVjd6SklpblNkckc0SHRMTXE0OUhZSVI4ZVgxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkw=【序号】：5【作者】： 李静； 陈欢林； 柴红【题名】：金属螯合亲和膜吸附分离与纯化溶菌酶的研究(Ⅱ)──不同金属螯合亲和膜对溶菌酶的吸附性能【期刊】：高等学校化学学报【年、卷、期、起止页码】：1999年08期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=4&recid=&filename=GDXH199908033&dbname=CJFD9899&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjI2NDg3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkwrZlpPUnFGeS9nVmIvSklpblRackt4RjlqTXA0OUdaNFI4ZVgxTHV4WVM=
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达，使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体，另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。 超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100。切记冰浴超声！
【序号】：1【作者】： 廖问陶； 刘源岗； 王云起【题名】：溶菌酶活性的AFM研究【期刊】：食品工业科技【年、卷、期、起止页码】：2007年02期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=4&CurRec=1&recid=&filename=SPKJ200702031&dbname=CJFD2007&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MTg0NjdmWk9Sb0Z5emhWN3pPTmozQVpMRzRIdGJNclk5R1pZUjhlWDFMdXhZUzdEaDFUM3FUcldNMUZyQ1VSTCs=【序号】：2【作者】： 刘源岗【题名】：溶菌酶分子活性长效性研究【期刊】：食品工业科技【年、卷、期、起止页码】：2007年10期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=4&CurRec=2&recid=&filename=SPKJ200710062&dbname=CJFD2007&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MTY4MjdTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVJMK2ZaT1JvRnl6aFdyek1OajNBWkxHNEh0Yk5yNDlEWm9SOGVYMUx1eFk=【序号】：3【作者】： 刘慧； 王凤山； 楚杰【题名】：蛋清溶菌酶部分酶学性质及酶活性的影响因素研究【期刊】：中国生化药物杂志【年、卷、期、起止页码】：2008年06期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=4&CurRec=4&recid=&filename=SHYW200806008&dbname=CJFD2008&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MTU3MjRlYkc0SHRuTXFZOUZiSVI4ZVgxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkwrZlpPUm9GeS9rVXIzS05pWFM=【序号】：4【作者】： 宋纯艳； 张拓； 侯利平【题名】：溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用【期刊】：分析测试学报【年、卷、期、起止页码】：分析测试学报【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=4&CurRec=9&recid=&filename=TEST201408013&dbname=CJFDLAST2014&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjY1MDBGckNVUkwrZlpPUm9GeS9rVWJ6UE1Talllckc0SDlYTXA0OUVaNFI4ZVgxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTE=【序号】：5【作者】： 朱伶俐； 朱明捷； 杨严俊【题名】：溶菌酶酶解物的抗菌活性研究【期刊】：食品工业科技【年、卷、期、起止页码】：2012年13期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=24&recid=&filename=SPKJ201213010&dbname=CJFD2012&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjkzNThSOGVYMUx1eFlTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVJMK2ZaT1JvRnkva1Zyck9OajNBWkxHNEg5UE5ySTlFWkk=
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达，使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体，另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。超声破碎的条件一般是300 w，10 s/10 s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。 超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：50 mMTris-HCl, pH8.0, 2 mM EDTA，100 mM NaCl，加溶菌酶至100 ug/ml，0.1%Triton X-100。切记冰浴超声！ 如何判断是否超声完全：根据网友的经验，一般有以下几个方面： 1. 外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。2. 液体的粘滞性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。3. 高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点）。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。 4. 染色：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟，镜检。超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。一些需要注意的问题： 1. 蛋白以包涵体形式表达，追求的是高破碎率，要求细胞碎片很小，而另一种蛋白是可溶形式表达，所以细胞碎片不能很小，两种情况要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分离。2. 如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率太强。3. 超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。4. 尽量防止泡沫的产生。
【序号】：1【作者】：罗引珍； 沈伟； 王臻【题名】：百蒂芬皮肤抗菌凝胶对幼儿手去污染效果的观察【期刊、年、卷、期、起止页码】：中国消毒学杂志2007年04期 【全文链接】： http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=8&recid=&filename=ZGXD200704021&dbname=CJFD2007&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MDI5OTVsVXJ6TlB5clRhckc0SHRiTXE0OUhaWVI4ZVgxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkwrZlpPZG9GeXo=【序号】：2【作者】： 陈志泉【题名】： 市场细分理论在医疗器械类产品营销中的应用【期刊、年、卷、期、起止页码】：商业经济 2014年06期 【全文链接】： http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=7&recid=&filename=JJSY201406028&dbname=CJFDLAST2014&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjcwODg3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkwrZlpPZG9GeXpsVTd6QUx5ZllkN0c0SDlYTXFZOUhiSVI4ZVgxTHV4WVM=【序号】：3【作者】： 陆锦春； 陈华鹏； 马怀彦【题名】： 重组溶葡萄球菌酶在患子宫内膜炎奶牛体内的药代动力学与残留研究【期刊、年、卷、期、起止页码】：中国乳业 2012年02期 【全文链接】： http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=6&recid=&filename=LMKF201202012&dbname=CJFD2012&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MzA5MzJUM3FUcldNMUZyQ1VSTCtmWk9kb0Z5emxVTDNLS1NEQWFMRzRIOVBNclk5RVpvUjhlWDFMdXhZUzdEaDE=【序号】：4【作者】： 黄青山； 陆婉英； 励俊；【题名】： 生物溶菌酶在口腔病防治中的应用【期刊、年、卷、期、起止页码】：临床口腔医学杂志 2002年06期 【全文链接】： http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=5&recid=&filename=LCKY200206037&dbname=CJFD2002&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjY5MjRSTCtmWk9kb0Z5emxVYnpLS1M3QWQ3RzRIdFBNcVk5R1k0UjhlWDFMdXhZUzdEaDFUM3FUcldNMUZyQ1U=
【序号】：1【作者】： 林亲录； 马美湖； 金阳海【题名】：鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化【期刊】：食品科学【年、卷、期、起止页码】：2002年02期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=5&recid=&filename=SPKX200202008&dbname=CJFD2002&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MzEyODZZUzdEaDFUM3FUcldNMUZyQ1VSTCtmWk9ScUZ5L2hVcnpPTmozQWRyRzRIdFBNclk5RmJJUjhlWDFMdXg=【序号】：2【作者】： 赵昕； 任光文； 屠晓平【题名】：灰色链霉菌RX-17溶菌酶R1的纯化及性质研究【期刊】：微生物学报【年、卷、期、起止页码】：2003年06期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=9&recid=&filename=WSXB200306011&dbname=CJFD2003&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjI5Mjl0TE1xWTlFWllSOGVYMUx1eFlTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVJMK2ZaT1JxRnkvaFVMek1NajdUYkxHNEg=【序号】：3【作者】： 凤权； 汤斌【题名】：溶菌酶分离纯化方法的研究进展【期刊】：生物学杂志【年、卷、期、起止页码】：2006年01期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=11&recid=&filename=SWXZ200601001&dbname=CJFD2006&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MTYxMDV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkwrZlpPUnFGeS9oVjcvT05qclRkTEc0SHRmTXJvOUZaWVI4ZVgxTHU=【序号】：4【作者】： 李蓉； 陈国亮【题名】：高效阳离子交换色谱法分离纯化蛋清中的溶菌酶【期刊】：色谱【年、卷、期、起止页码】：2002年03期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=14&recid=&filename=SPZZ200203019&dbname=CJFD2002&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MDYzNTlJTmozUmRMRzRIdFBNckk5RWJZUjhlWDFMdXhZUzdEaDFUM3FUcldNMUZyQ1VSTCtmWk9ScUZ5L2hWTHI=【序号】：5【作者】： 郑宇； 陈欢林； 李静【题名】：金属螯合亲和膜吸附分离与纯化溶菌酶的研究(Ⅰ)──低温氧等离子体改性条件对亲和膜结构与吸附性能的影响【期刊】：高等学校化学学报【年、卷、期、起止页码】：1999年08期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=15&recid=&filename=GDXH199908032&dbname=CJFD9899&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MzI2MDlEaDFUM3FUcldNMUZyQ1VSTCtmWk9ScUZ5L2hWYnJOSWluVFpyS3hGOWpNcDQ5R1pvUjhlWDFMdXhZUzc=
【序号】：1【作者】： 朱莲莲； 江明锋； 王永【题名】：溶菌酶的分离纯化与活性测定方法的研究进展【期刊】：黑龙江畜牧兽医【年、卷、期、起止页码】：2012年19期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=28&recid=&filename=HLJX201219008&dbname=CJFD2012&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjY5NjIxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkwrZlpPUm9GeS9sVUx2SUxTSEJkckc0SDlQTnBvOUZiSVI4ZVg=【序号】：2【作者】： 刘源岗； 邓倩莹； 廖问陶【题名】：溶菌酶的活性测定【期刊】：食品科技【年、卷、期、起止页码】：2005年10期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=96&recid=&filename=SSPJ200510023&dbname=CJFD2005&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjkzNThSOGVYMUx1eFlTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVJMK2ZaT1JvRnkvbFdyN0tOajdiWkxHNEh0VE5yNDlIWjQ=【序号】：3【作者】： 洪潇； 余若黔【题名】：溶菌酶的活性测定方法【期刊】：生物技术通报【年、卷、期、起止页码】：2004年05期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=106&recid=&filename=SWJT200405010&dbname=CJFD2004&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MDQ4MjdTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVJMK2ZaT1JvRnkvbVVyek9OanJCZXJHNEh0WE1xbzlFWklSOGVYMUx1eFk=【序号】：4【作者】： 程建军； 张辉； 刘滨城【题名】：蛋壳溶菌酶的稳定性研究【期刊】：食品科学【年、卷、期、起止页码】：2004年11期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=1&CurRec=1&recid=&filename=SPKX200411056&dbname=CJFD2004&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MjgxNDVyRzRIdFhOcm85QVlvUjhlWDFMdXhZUzdEaDFUM3FUcldNMUZyQ1VSTCtmWk9Sb0Z5L21VTDdPTmozQWQ=
询问溶菌酶的液相分离条件 我做了跟整体柱， 想分离下蛋白， 溶菌酶，可试了几种盐浓度，，洗不下来，请高手指教，最好是等度的
90年代初，复旦大学生命科学学院在世界著名生物学家谈家桢院士的领导下，发展生物工程，经十年潜心努力，研制成功了一种具有抗菌、溶菌、抗感染，修复组织，提高机体免疫力等功能的纯天然生物酶，以复旦（Fudan）和酶（Enzyme）英文的首个字母命名为“FE”。 科研人员又应用FE技术针对口腔溃疡，牙龈出血，牙本质敏感，刷牙作呕等口腔问题，攻克了多项技术难题，延伸研发成功“FE生物酶牙膏”。面市的不同款式的FE牙膏标注着2.5-9.8不等的“酶指数”，表示其生物酶含量的高低，“酶指数”越高即活性含量越高，效果越好，价格也就越高。 2009年9月16日 人民网等发布的《改变传统牙膏概念 中国首款“干刷牙膏”面世》称，FE牙膏通过临床验证，对400多种细菌具有抑杀作用。FE牙膏是不含氟的纯天然生物产品，无任何副作用。 2009年9月23日 新华网等发布的《刷牙牙膏不蘸水?“FE”干刷牙膏通过医学鉴定》称，FE牙膏具有抗菌、抗牙结石、防龋、减轻口臭、抑制牙菌斑、显著改善牙龈出血，减轻牙龈炎等功效，值得推广。口腔内不洁物多为蛋白质，很容易被FE牙膏溶解，拥有自主知识产权，技术处于世界领先地位，被誉为天然的“金典牙医”。 据了解，FE生物酶牙膏由“生物溶菌酶”和“生物蛋白酶”等多种生物酶应用现代科技配伍而成，美国一家著名的跨国公司曾以重金要求购买FE牙膏的生产技术，但这是我国的高科技产品，婉言谢绝了美国公司的要求。 FE牙膏投放市场后为消费者口腔健康提供了新的选择。
【序号】：1【作者】： 朱莲莲； 江明锋； 王永【题名】：溶菌酶的分离纯化与活性测定方法的研究进展【期刊】：黑龙江畜牧兽医【年、卷、期、起止页码】：2012年19期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=19&recid=&filename=HLJX201219008&dbname=CJFD2012&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MDM0ODc0SDlQTnBvOUZiSVI4ZVgxTHV4WVM3RGgxVDNxVHJXTTFGckNVUkwrZlpPUnFGeTdrVTd6TkxTSEJkckc=【序号】：2【作者】： 张新宝【题名】：鸡蛋蛋清溶菌酶分离纯化及其抗原性评估【期刊】：【年、卷、期、起止页码】： 南昌大学， 食品科学， 2010， 硕士【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=20&recid=&filename=2010247727.nh&dbname=CMFD2011&dbcode=CMFD&pr=&urlid=&yx=&v=MDEyMDBWMTI2SHJHOEdkYk9xSkViUElSOGVYMUx1eFlTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVJMK2ZaT1JxRnk3a1VMdkI=【序号】：3【作者】： 孙淑清； 陈代梅； 季怡萍【题名】：在线纯化技术应用于MALDI-TOFMS测定溶菌酶的分子量【期刊】：质谱学报【年、卷、期、起止页码】：2004年01期 【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=25&recid=&filename=ZPXB200401006&dbname=CJFD2004&dbcode=CJFQ&pr=&urlid=&yx=&v=MTg5MzVUcldNMUZyQ1VSTCtmWk9ScUZ5N2tWNy9LUHozVGJMRzRIdFhNcm85RllvUjhlWDFMdXhZUzdEaDFUM3E=【序号】：4【作者】： 雷根虎； 赵敏； 唐小辉【题名】：四唑配体高效亲合色谱色谱固定相分离纯化鸡蛋清溶菌酶的研究【期刊】： 西北大学化学系,西北大学合成与天然功能分子化学教育部重点实验室【年、卷、期、起止页码】：2010-06-20【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=55&recid=&filename=ZGHY201006013040&dbname=CPFD0911&dbcode=CPFD&pr=&urlid=&yx=&v=MjMyODF1TnZGU3ZoVTduSUlWOGNQeXJEZDdHNEg5SE1xWTlFWitzTERCTkt1aGRobmo5OFRuanFxeGRFZU1PVUtyaWZa【序号】：5【作者】： 王利娟【题名】：重组大鼠溶菌酶多肽的原核表达、纯化及其生物活性研究【期刊】：【年、卷、期、起止页码】： 暨南大学， 生物化学与分子生物学， 2008， 硕士【全文链接】：http://www.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?QueryID=0&CurRec=51&recid=&filename=2009010118.nh&dbname=CMFD2009&dbcode=CMFD&pr=&urlid=&yx=&v=MjA2NDl0RE5wNUViUElSOGVYMUx1eFlTN0RoMVQzcVRyV00xRnJDVVJMK2ZaT1JxRnk3bFU3M09WMTI3RjdPNUg=
中文名称: 亚历山大弗莱明 外文名: Alexander Fleming 生卒年: 公元1881-1955年 洲: 欧洲 国别: 苏格兰 省: 亚尔郡 亚历山大弗莱明，英国细菌学家,1881年生于苏格兰亚尔郡。1908年毕业于英国圣玛丽学院获得医学学士和理学学士学位。翌年，他又通过考试，成为皇家外科学会的正式会员。早在1906年，他就开始跟随当时英国著名传染病学家赖特从事传染病的预防研究，并先后发表了很多医学论文。第一次世界大战爆发后，弗莱明服兵役并从事创伤病的研究。一战以后，他于1919年又回到了圣玛丽医学院，重新开始了他的细菌研究工作。弗莱明有两次在实验室里获得意外发现的故事已广为人知。第一次是1922年，患了感冒的弗莱明无意中对着培养细菌的器皿打喷嚏。后来他注意到，在这个培养皿中，凡沾有喷嚏黏液的地方没有一个细菌生成。随着进一步的研究，弗莱明发现了溶菌酶——在体液和身体组织中找到的一种可溶解细菌的物质，他以为这可能就是获得有效天然抗菌剂的关键。但很快他就丧失了兴趣：试验表明，这种溶菌酶只对无害的微生物起作用。1928年夏季的一天，弗莱明在准备用显微镜观察培养皿中的葡萄球菌时，发现培养皿中的葡萄球菌由于被污染而长了一大团霉，而且霉团周围的葡萄球菌被杀死了，只有在离霉团较远的地方才有葡萄球菌生长。他把这种霉团接种到无菌的琼脂培养基和肉汤培养基上，结果发现在肉汤里，这种霉菌生长很快，形成一个又一个白中透绿和暗绿色的霉团。通过鉴定，弗莱明推断这种霉菌一定产生了某种具有强大杀菌作用的物质。于是，他把经过过滤所得的含有这种霉菌分泌物的液体叫做“青霉素”。接着弗莱明又把这种霉菌接种到各种细菌的培养皿中，发现葡萄球菌、链球菌和白喉杆菌等都能被它抑制。这一结果极大地鼓舞了正急于找到一种治疗化脓性感染药物的弗莱明。经过一系列试验和研究，弗莱明认为青霉素可能成为一种可以全身应用的抗菌药物。于是，他又和助手们进行了更广泛的试验和实验性研究，获得了令人振奋的结果。 弗莱明把这一重大发明写成一篇论文发表在1929年的英国皇家《实验病理季刊》上，并把这种由青霉菌产生的物质命名为青霉素。由于当时艾利希的六O六药正名声大噪，多马克的磺胺也举世瞩目，加之弗莱明的实验还没有完结，青霉素还不能大量很快分离出来，所以他的发现被人们忽略了。 1939年，正在牛津工作的德国生化学家钱恩和澳大利亚病理学家弗洛里继续了弗莱明的研究，他们重新研究了青霉素的性质、分离和化学结构，终于解决了青霉素的浓缩问题。两年后制成首批青霉素。第一个采用此药的病人是个警察，他的头部，脸部，肺部受到严重的细菌感染，接受治疗仅仅5天，病情大为好转，康复之快令人惊异。不幸的是，由于没有足够的青霉素继续治疗，一个月后终于死亡。第二次世界大战促使青霉素大量生产，1943年，已有足够青霉素治疗伤兵，1950年，产量可满足全世界需求。 青霉素的发现与研制成功，成为医学史上一项奇迹。1945年，弗莱明与弗洛里和钱恩共同获得诺贝尔生理学和医学奖。 青霉素的发现是人类发展抗菌素历史上的一个里程碑。直到今天，它仍是流行最广、应用最多的抗菌素。青霉素能杀灭各种病菌，还可以治疗各种炎症。而且它对人体几乎没有毒性。因此除了极少数对青霉素过敏的人，大多数病人都能借助青霉素恢复健康。亚历山大弗莱明于1955年3月11日逝世，终年74岁。相关研究领域：细菌学医学
细菌DNA的提取2006-10-24 17:19这里提供的是由Marmur于1961年建立，经Dale等人简化和发展，此方法略加修改后可用于其他细菌种类。主要原理是：采用去垢剂破碎细菌细胞，酚－氯仿萃取蛋白，使用核糖核酸酶和蛋白酶K进行进一步的纯化，所提取的DNA无RNA和蛋白质污染，可用于限制性内切酶消化，分子克隆。⑴材料①20倍SSC缓冲液：3mol/l NaCl; 0.3mol/l 醋酸钠；pH 7.0(高压灭菌后，4摄氏度保存可长期使用)②酚/氯仿（1：1）：一般市售的酚需要重蒸处理，市售的酚常含有杂质而呈粉色和淡黄色，需要重蒸二次，收集沸点160℃部分，小瓶分装，瓶内空腔充氮气，－20℃密封保存，以免氧化，用前从冰箱中取出，68℃蒸馏水饱和，加入8—羟基喹啉（100g酚加0.1g），酚变为黄色。8—羟基喹啉是抗氧化剂，并能部分抑制核糖核酸酶，含8—羟基喹啉的酚用等体积1.0mol/L pH 8.0Tris 缓冲液抽提，再用0.1mol/L pH 8.0含0.2％β－巯基乙醇的Tris缓冲液抽提数次，酚溶液的pH应大于7.6。此酚溶液在平衡缓冲液覆盖下4℃可保存一个月，纯化和制备酚溶液都要带手套，以免损伤皮肤。③核糖核酸酶：无DNA酶污染，将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/LTris－Cl(pH 7.5)15mmol/L Nacl 溶液中，浓度为10mg/ml.于100℃加热15分钟，缓慢冷却至室温，分装后于－20℃保存。④蛋白酶K ⑤TES缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, pH 8.0; 10mmol/L NaCl;1mmol/l EDTA⑵方法①取单菌落接种于5mlLB培养液中，37℃振荡培养过夜。（使用试管）②将上述菌液接种于200mlLB培养液中，37℃振荡培养过夜。（使用500ml或1000ml三角瓶）③离心，收集沉淀（5000r/m,10分钟）④将沉淀悬浮于20ml 20倍SSC缓冲液中，混匀。⑤加入200mg SDS，室温下振荡过夜，使细菌细胞充分裂解，裂解液呈粘稠状⑥加入等体积的酚/氯仿溶液，温和地混匀，细心地回收上层水相（注意不要触及二相之界面），重复萃取三次⑦加入2倍体积无水乙醇，此时可见到絮状DNA沉淀或用玻璃棒绕取收集⑧将DNA溶于15ml 2倍SSC溶液中，加入核糖核酸酶（最终浓度50ug/ml），37℃保温1小时⑨加入蛋白酶K（50ug/ml）,继续保温1小时⑩加入等体积苯酚萃取一次，在回收的水相中加入2.5倍体积的无水乙醇，－20℃静止过夜25000g，4℃，离心15分钟，收集沉淀，用－20℃无水乙醇洗涤一次；将DNA在真空干燥器中抽干，溶于10mlTES缓冲液中，4℃保存备用。⑶说明①本方法可用于其他种类细菌，但是溶菌条件需略加修改，对革兰氏阳性菌（如葡萄球菌），在SDS处理前需要使用溶菌酶裂解细胞壁，对于另外一些细菌（如分枝杆菌），在加入SDS后，将溶液加温至65℃是可取的。②一些种类的细菌含大量核酸酶，去垢剂不能完全抑制其活性，用TES缓冲液代替SSC缓冲液可通过EDTA的作用抑制核酸酶活性，必须注意的是，TES缓冲液离子强度较低，在加入乙醇之前需用醋酸钠调节DNA溶液的离子强度（醋酸钠的最终浓度为0.3mol/L）③DNA溶液中残留少量酚和氯仿，可在乙醇沉淀之前用水饱和乙醚萃取去除④比较纯净的DNA溶液的Ａ260/A280及A260/A235大于1.7
世界上第一个人工合成的酶是①牛胰核糖核酸酶； ②胰蛋白酶； ③溶菌酶； ④羧肽酶A。
G＋菌由溶菌酶处理后所得到的缺壁细胞是： A 支原体 B L型细菌 C 原生质体 D 原生质球正确答案：C答案公布后请勿继续作答，谢谢合作!
本文引用自发酵《在发酵工艺角度看蛋白表达》引用发酵 的 在发酵工艺角度看蛋白表达在分子生物学角度讲，找到或合成外源蛋白基因，构建质粒，并导入细胞以表达具有生物活性的折叠正确的蛋白，是一种成熟的常规技术。目前，包括酶，抗原，抗体，激素，其他小分子调节蛋白在内的很多蛋白，都已经用这种技术实现了工业化生产。在具体的工艺选择上，历史沿袭习惯和表达体系的选择，对工艺稳定性，成本，有巨大的影响。 目前，常用的蛋白表达系，有3个类别：1，大肠杆菌表达系。大肠杆菌的遗传背景十分清楚，代谢相对简单，发酵副产物少，在不是很严格的情况下，是表达蛋白的首选。通过按经验选择合适的菌株及合适的质粒，既可以以包涵体的形式得到大量的目标蛋白，又可以在细胞外得到可溶性蛋白，是常见的一种表达系。2，酵母菌表达系。用酵母做表达系，理由之一，也是遗传背景清楚，而且，当蛋白分子量过小，不能形成包涵体时，或蛋白的二硫键过多，不易体外复性时，酵母菌就成了合适的选择。另外，酵母对蛋白也会有一个简单的修饰，近似于高等动物的蛋白糖基化过程。这样，在合成在体液中发挥作用的蛋白，而且，又不能（技术水平限制）用动物细胞时，就可以退而求其次的选用酵母菌表达。一般是用信号肽把蛋白导出细胞，在发酵液中以可溶性蛋白的形式存在。这也是一个常见的表达系。3，动物（或说，人的）细胞表达系。这种情况，在纯度或毒性方面有较高要求的产品应用。一般国外产品应用较多，国内还没有用动物细胞表达蛋白实现商业化生产的报道。由于技术限制，国内工业化生产用这个方法目前还有较大难度。这3种表达系，各自有自己的优缺点。首先，在潜在的毒性影像方面讲，由于和真核生物亲缘关系太远，大肠杆菌就最不合适。其次是酵母菌。而在表达量和代谢控制成本上来讲，酵母菌和动物细胞又是差强人意的。现在，很多蛋白习惯性的选用酵母菌做表达系，就是因为早期提取蛋白技术低下，而动物细胞培养技术又不过关的原因所致。目前，虽然提取工艺提高了，但作为蛋白这种高附加值产品，运作成本集中在销售而不是生产，所以，降低生产成本的诉求很低。站在降低开发难度的角度讲，一方面，质粒构建和质粒与菌株的匹配方面依赖大量经验，另一方面，发酵工艺策略选择与发酵工艺优化又需要很大的投入，所以，技术开发部门沿用自己熟悉的，已经积累了大量经验的表达系，是合理的。不过，随着分子技术进一步的发展，分子技术进入低附加值的产品领域又是必然的，降低生产成本就变的越来越必要了。 大肠杆菌表达系有两种得到外源蛋白的方法：1，缓慢的表达，得到可溶性蛋白，这种方法产量和酵母菌表达类似，与酵母菌比，不具有明显的优势，一般是有做大肠杆菌传统的研究机构生产小分子蛋白的一种沿袭性做法。2，使用T7启动子表达蛋白，这样，高速的蛋白表达速率使蛋白来不及折叠，在细胞内形成非水溶性的包涵体。最后目标蛋白可以达到总细胞质量的15%-25%，这样，就为降低成本提供了一种可能。不过，在使用T7启动子表达时，也存在两个难点：1，蛋白的复性技术，如果形成可溶性蛋白，那利用（使用分子技术加载在目标蛋白上）信号肽，只要过一遍柱子就能分离得到纯度非常高的，具有生物活性的产品，而形成包涵体，对提取，复性就有较高的要求，特别是二硫键的存在，会对复性产生很大的影响。在目前国内和国际流行技术看，并不是所有的蛋白都能在预定成本下复性的。2，任何情况下，高产都是代谢网络互相依赖与作用的结果。在如此高的表达量下，甚至细胞的形态都已经发生很大变化，正常代谢受到严重干扰，以至于放大时，摇瓶工艺对发酵工艺几乎没有任何参考价值。发酵工艺策略的选择将直接依赖于工程人员在生化，生理水平对菌株的理解，而匮乏可资参考的数据资料。发酵工艺的优化要离开摇瓶经验在发酵罐上逐步进行，这样，整个发酵工艺的确立就需要比想象中要大得多的人员与时间的投入。另外，再说一下糖基化的问题。在动物细胞内合成的折叠正确的蛋白，在分泌入体液前会有一个糖基化的过程，加上一个糖链就不会很快被蛋白酶当做折叠错误的蛋白水解掉。但是以微生物为表达系表达的蛋白，不具有动物细胞的修饰过程，用大肠杆菌表达的目标蛋白，很快会在血液中被降解。解决或回避这个问题，有两种方法：1，用动物细胞表达，一般，是用癌化的人类细胞。由于动物细胞培养技术要求过高，在国外比较昂贵的医药中有应用，国内不常见。2，由于酵母菌也有一个对蛋白的粗略的修饰过程，可以用酵母菌表达目标蛋白。这个技术，国内国外都在用，可以是一个权宜之计。主要难点集中在对合适菌株的分子水平的改造，以达到尽可能接近满意的修饰效果。这样，就可以在不同目标蛋白上表达系和发酵工艺上做出选择。如果是小分子，无糖基化修饰或不在体液中发挥作用的蛋白，可以选择大肠杆菌和酵母菌表达系，得到可溶性蛋白，然后提取。如果分子量合适，并对生产成本有诉求，而且可以比较方便的复性，则选用大肠杆菌表达系，得到包涵体，然后复性。如果是需要在体液中发挥活性并有糖基化要求的 蛋白，则选用经过分子生物学改造的酵母菌表达系。当然，并不是任何一个实验室都同时拥有或擅长所有的方向的。而难点，往往集中在以下3个方面：1，大肠杆菌蛋白包涵体复性。2，糖基化修饰。3，发酵工艺（工程菌株的工业水平）的确定。做工程一般是理科实验室的弱项，而工科实验室做基础又很少，在把工科和理科结合方面，我们实验室还是有经验和成功先例的。下面，以溶菌酶为例，阐述一下蛋白表达系的选择和工艺的确定。溶菌酶是一类具有种属差异的非特异性免疫物质，在动物界中普遍存在，种类繁多，其实，在植物和微生物中也有发现。但研究最多的还是动物。开发兽用溶菌酶，主要是想作为抗生素的替代物，作为添加剂使用。因此是一个低附加值的产品。下面一切的工作，都会围绕“兽用”和“低附加值”展开。首先，比较几种常见和认为有效的溶菌酶，杀菌效果最好的是人的溶菌酶，但考虑到潜在的危险（具有对人溶菌酶产生抗性，并使抗性基因扩散），舍尔求其次，用了鸟类蛋清溶菌酶，作为表达对象。然后，在得到溶菌酶蛋白的一级结构后，对此进行了分析。此蛋白不会用于体液内，故没有糖链修饰的问题。分子量不是很大，但也不太小，130左右的氨基酸构成，足以形成包涵体，这就为用大肠杆菌表达系高效表达提供了可能。讨厌的是有4个二硫键，其中有两个在结构复杂区域，折叠正确有一定的困难。但是，如果用酵母菌做，可能没法解决成本问题，即便优化工艺现在过去了，也不会是最终版本----肯定会有人用大肠杆菌做。所以，结论就是必须知难而进，拿下复性工艺。另外，由于是低附加值产品，发酵吨位就不能太小。以往分子生物学流行的50升，100升小罐发酵，肯定是不行的。发酵罐的放大，除了溶氧，剪切力发生变化，更重要的是搅拌线速度改变了胞外酶以及包括细胞本身的代谢方式和速度。在胞内体现就是氧化还原电势的改变，这在工艺上会带来很多麻烦。虽然说，一般是放大后产量往往提高，但放大过程中，小罐的经验就不能照搬了。同时，也因为是低附加值产品，发酵过程中诸如质粒丢失等稳定性要求，就很高了，应为只有稳定，才能控制成本。这样，工艺就成了第二个难点。明白这些之后，按照大肠杆菌的喜好，合成了溶菌酶的基因。然后构建质粒，导入细胞。在摇瓶水平表达溶菌酶。在筛选复性条件的同时，就同时在发酵罐水平对工艺稳定性进行了优化。首先，为了进一步提高质粒稳定性，对初始培养基进行了重新设计。并改动发酵工艺策略，由于是胞内产物，我们应用高细胞密度发酵控制法延长限制性生长时间（不能用经典发酵的延长对数期生长时间的办法，对工程菌不适合，会造成质粒丢失，代谢紊乱等一系列问题），提高细胞量，并改变了诱导时机，得到了稳定的高产，具体数据比较枯燥，就不在此展开了。提取方面，经过不懈的努力，我们也掌握了比较成功的复性条件（具体由另外人员负责，也不做详细介绍了）。这样，工艺才基本拼凑好。进一步优化，在试生产多次重复时在进行。以上，是外源蛋白表达的粗略的技术和工艺的过程。
近来我想分析下溶菌酶， 希望朋友们给些分析条件， 流动相的成分，ph 浓度等，谢谢交流
Proteonavi S5的溶出行为 ～与他社色谱柱的比较～ Proteonavi S5是一款以孔径为30 nm的硅胶作为基材、键合C4基团的蛋白质・肽类化合物分析色谱柱。本次，以6种蛋白质（核糖核酸酶A、细胞色素C、溶菌酶、牛血清白蛋白、肌血球素、卵清蛋白）作为分析目标，与键合C8基团的CAPCELL PAK C8 SG300 S5、键合联苯基的色谱柱（孔径45nm，粒径3.5 μm），以及大孔径核壳型C18色谱柱（粒径3.6μm）进行对比，对Proteonavi S5的溶出行为进行了考察。 表1列出了实验所用的样品。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704200900_01_2222981_3.png 图1为实验所得色谱图。流动相中添加了0.1 vol%TFA，在水-乙腈系统下进行梯度洗脱，将各款色谱柱的溶出行为与Proteonavi S5进行对比。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704200900_03_2222981_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704200900_02_2222981_3.png 由图1可知，键合C4官能团的Proteonavi S5的保留能力与键合联苯基、C8及C18基团的色谱柱几乎相同，而键合联苯基的色谱柱对于酸性蛋白质白蛋白（pI= 4.7）、核壳型大孔径C18色谱柱对酸性蛋白质卵清蛋白（pI= 4.5）的回收率均较低，基本没有溶出。 另外，一般情况下，官能团烷基链越短，蛋白质的回收率越高，因此，与CAPCELL PAK C8SG300 S5相比， Proteonavi S5所得色谱峰略高。同时， CAPCELL PAK C8 SG300 S5和Proteonavi S5对于酸性蛋白质白蛋白和卵清蛋白均能得到良好溶出。
感觉标准里的描述不是特别清楚动力试验提到了蕈状芽孢杆菌溶血试验提到了苏云金，蕈状，炭疽，巨大根状生长试验明确提到用蕈状芽孢杆菌做阴性对照溶菌酶耐性试验提到了巨大蛋白质结晶试验提到了苏云金那有两个问题，一个是方法里提到的这四株菌株（苏云金，蕈状，炭疽，巨大芽孢杆菌）都要购买吗？目前我们实验室只有蜡样再者，每种生化试验，都要全部把这四株菌拿来做阴性对照吗？
鸡蛋含有丰富的蛋白质，是人们理想的既经济又必不可少的天然食品。近年来，关于“人造鸡蛋”“橡皮蛋”的传言愈演愈烈，导致市民在购买鸡蛋时难免有隐隐的担忧。那么，究竟是否有假鸡蛋的存在呢？真假鸡蛋又如何鉴别呢？市检测院食品检测所专家称，“假鸡蛋”多由饲养或保存不当产生鸡蛋含有丰富的蛋白质，仅次于母乳，是人们理想的既经济又必不可少的天然食品。据统计，每年我国人均鸡蛋消耗量超过100个。但近年来，关于“人造鸡蛋”“橡皮蛋”的传言愈演愈烈，导致市民在购买鸡蛋时难免有隐隐的担忧。那么，究竟是否有假鸡蛋的存在呢？真假鸡蛋又如何鉴别呢？专家检测并未发现人造鸡蛋网络上有传言称，人造鸡蛋使用碳酸钙制造外壳，用海藻酸钠和明胶伪造蛋清。一颗人造鸡蛋的成本仅为0.1元，长期食用会造成白血病、孕妇难产、老年痴呆症等严重后果。而橡皮蛋则指蛋黄非常有弹性、用双指用力挤压仍不裂开的鸡蛋。有网友称，把它往地板一扔，如橡皮球一样蹦起半米多高。针对这些传言，深圳市计量质量检测研究院食品检测所（以下简称“食品检测所”）近年来对此进行了深入研究，并组织检测人员在深圳的市场里，随机购买了80个鸡蛋样品进行检测，未出现数据异常样品。同时，检测人员对鸡蛋样品的构造进行了观察。80个鸡蛋样品均具有蛋壳、蛋壳膜、蛋白、蛋黄、系带和胚盘的典型结构，未发现疑似人造鸡蛋的情况。没有检测出人造鸡蛋，并不代表人造鸡蛋就不存在。那到底有没有人造鸡蛋呢？对此，专家没有给出绝对的答案，只是表示人造鸡蛋成本会非常高，如果有人想以制售人造鸡蛋来谋利可能性不大。专家解释称，鸡蛋中天然含有活性较高的溶菌酶，所以溶菌酶活性是辨别鸡蛋真伪的重要指标之一。虽然溶菌酶是一种食品添加剂，但作为添加剂使用的溶菌酶较为昂贵，一公斤大约需要2000元，因此，如果人造鸡蛋想靠添加溶菌酶蒙混过关，在成本上是行不通的。那为何会屡屡出现“假鸡蛋”的传言呢？食品检测所的专家说，传言中所谓的假鸡蛋，大多是由于饲养或保存不当产生的。就拿“橡皮蛋”来说，由于饲料中使用了棉籽饼，若棉酚含量过高，就会导致“橡皮蛋”产生，其次也有可能是储存温度过低，导致水分流失。三种方法鉴定真假鸡蛋据专家介绍，深圳食品检测所成功研发了三种鉴定真假鸡蛋的方法。方法一：蛋白质组学鉴定蛋白质是生命的重要组成部分，每个生命机体包含有成千上万种蛋白质。专家说，把这些蛋白质使用双向电泳技术呈现出来，就构成了这个生命的蛋白质指纹图谱，和这个物种一一对应，犹如时下流行的“二维码”。食品检测所的检测人员通过广泛收集不同产地、不同品种的鸡蛋样品，绘制了鸡蛋的蛋白质组鉴别模型，即鸡蛋的生命“二维码”。专家介绍道，若市民对购买的鸡蛋真假存有怀疑，可将鸡蛋送至食品检测所进行检验。市面上销售的鸡蛋均可和该生命“二维码”进行比对，从而判定真伪。方法二：卵白蛋白定量据了解，卵白蛋白是鸡蛋中主要的营养物质，内含人体生长发育必需的氨基酸，且种类齐全、数量充足。卵白蛋白是鸡蛋中最主要的蛋白质，约占鸡蛋蛋白质含量的55%，鸡蛋去壳全重的2.7%（27mg/g）以上。据专家透露，鉴于卵白蛋白在蛋类中的特征性，而且按照传言中的说法，人造鸡蛋中是不含有卵白蛋白的，因此食品检测所研发了卵白蛋白的定量方法，可以快速鉴定鸡蛋的真伪。方法三：溶菌酶活性测定鸡蛋中天然含有活性较高的溶菌酶，所以溶菌酶活性也是辨别鸡蛋真伪的重要指标之一。据悉，食品检测所建立了溶菌酶活性测定方法，并已获批国家标准，可判定鸡蛋样品是否为人造。专家支招：如何挑选鲜鸡蛋目前市场上鸡蛋的品种众多，如何挑选才能安全放心地食用呢？对此，深圳市计量质量检测研究院高级工程师张世伟建议，市民要到正规的超市和店铺去购买鸡蛋。此外，真正的鸡蛋应具有包括卵壳、卵壳膜、卵白（即蛋清）卵黄（即蛋黄）、胚胎等典型生物学结构。因此，市民可将完整的鸡蛋对着光源照射，能看到鸡蛋一头有气室，将鸡蛋打破后，可以看到蛋黄、蛋白和白色的系带，同时可闻到淡淡的腥味，无臭味。若具备以上特点的，就可判定为真鸡蛋。很多市民认为，比起普通鸡蛋，土鸡蛋的营养价值更高。因此，市面上比普通鸡蛋价格高一到两倍的土鸡蛋颇受市民欢迎。而研究结果表明，土鸡蛋和普通鸡蛋的营养价值相似，其风味主要是由于土鸡蛋含有更高的脂类所致。除此以外，挑选鸡蛋应选择外壳完整无裂缝的。鸡蛋在运输、储存及包装等过程中，由于震动、挤压等原因，有的鸡蛋会造成裂缝、裂纹，容易被细菌侵入，若放置时间较长就不宜食用。专家建议，食用鸡蛋应完全煮熟以后再吃。鸡蛋的保质期受气温、湿度的影响较大。通常来说，温度在2～5℃时，鸡蛋的保质期为40～60天；在15℃以下，保质期为30天左右；当夏季温度高于25℃时，鲜鸡蛋保质期为7～10天。专家建议，市民购买鸡蛋后应尽快食用并冷藏保存，保障鲜鸡蛋的安全和营养。（来源：深圳晚报）
骆驼奶被誉为“沙漠软白金”，奶中贵族，蛋白质含量远高于牛羊奶，并富含大量的维生素、钙铁锌硒等营养元素。尤其是钙的含量接近牛奶的5倍，更为关键的是驼奶中含有一些特殊的物质如：乳铁蛋白，免疫球蛋白、类胰岛素蛋白及溶菌酶，对人体大有裨益。
分离蛋白样品，常用的盐种类有哪些啊，还有浓度 注意事项， 我知道的有磷酸氢二钠，磷酸二氢钠 浓度常用0.1~0.05mol/ml 别的那， 近来我分离溶菌酶，和牛血清白蛋白 可怎么着到洗不下来啊 我是反相柱 还有，若是用水能把某种蛋白洗下来，(在保留时间)，我怎么把峰后推啊
我要推广仪器
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