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溶菌酶

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溶菌酶相关的资讯

  • 借助Integrity 10平行结晶系统分析溶菌酶结晶介稳区
    #Integrity 10 平行结晶系统#结晶介稳区是指溶解度平衡曲线与超溶解度曲线之间的区域。溶解度曲线和超溶解度曲线将溶液浓度-温度相图分割成三个区域,分别是稳定区、介稳区和不稳定区。一个特定的物系,只有一条明确的溶解度曲线,而超溶解度曲线的位置却受到很多因素的影响,如有无搅拌、搅拌速度、有无晶种、晶种的大小种类、杂质,超声波、电磁场等。介稳区理论对API结晶工艺过程控制至关重要。在一个结晶过程中,当过饱和度超过介稳区进入不稳定区域时,溶液中就会自发成核。为了使得产品具有较高的纯度和理想的粒度分布,通常将结晶过程控制在介稳区内进行。介稳区宽度越大,说明结晶物质的过饱和溶液越稳定。图1:介稳区示意图介稳区宽度的测定对于工业结晶有着非常重要的意义,它不仅是结晶操作时选取适宜过饱和度的依据,也是进行过夜结晶器设计的重要参数,也就是说,要求的较为准确的最大过饱和度或最大过冷却度,作为设计中选择适宜的过饱和度的依据。目前使用经典技术测量样品溶液的溶解度点和成核点可能需要很长时间。在蛋白质的应用中,这是一个特殊的问题,因为不能用一种方法同时进行测定。 本应用简报介绍了一种快速、可靠且可重复的测定方法,用于测定乙酸钠缓冲溶液中溶菌酶的介稳区宽度。该方法使用配备红外透射检测器的 STEM Integrity 10 平行结晶系统,使用浊度测量技术进行检测。图2:STEM Integrity 10 平行结晶系统相关实验及结果 实验方法:溶液在 STEM Integrity 10 平行结晶系统中以 0.1°C/min 的控制方式加热和冷却,以确定成核点和溶解度点。使用可选的浸入式 IR 探头(货号:ATS10230)收集浊度测量值。 实验结果:溶解度点定义为透射率百分比达到稳定平台的点,形核点定义为透射率百分比持续下降的第一个点,如下图所示。图3: 溶菌酶溶液浊度随温度的变化(15mg/ml)下图确定了许多溶液浓度下的成核点和溶解度点。图4:12mg/ml和20mg/ml溶菌酶溶液浊度随温度的变化根据浊度测量确定的成核点和溶解度点与下图所示伪相图中溶菌酶溶解度的文献数据一起绘制。图5:溶菌酶蛋白假相图(4%NaCl,0.1M醋酸钠缓冲液pH 5.0)这种类型的图表的构造使得介稳区很容易被识别。结论:通过使用浊度测量技术确定具有不同蛋白质浓度的溶液的成核点和溶解度点。该方法的特点是重现性好、可信度高。结合文献报道的已知相图,本研究中获得的数据显示了良好的相关性。与其他经典方法相比,使用这种技术可以在几个小时内确定介稳区宽度,并且精度极高。Integrity 10 应用及配置一、Integrity 10应用方向:介稳区宽度测定快速获取溶解度曲线测定成核诱导时间API晶型高效率筛选API溶解度筛选化学反应条件筛选二、Integrity 10为您提供:1. 多管平行结晶系统10个完全独立的反应池,行业领先每个反应池独立控温和搅拌温度范围: -30°C~150°C搅拌速度: 350rpm~1200rpm2. 精确的温度控制变温速度可以在0.1°C/min至5°C/min之间选择反应池间可承受温差高达180℃温度均一性: ±0.5℃分辨率: 0.01℃3. 强大的软件功能直观,易于操作,由您指尖随心完全控制6’高清微处理触摸屏PC软件可快速获取溶解度曲线,用于溶解度/结晶评价4. 宽广的样品体积1ml试管适合珍贵药物的筛选3ml试管适合常规筛选25ml试管适合化学合成筛选5. 灵活的配置可选非浸入及浸入式IR探头,分析样品浊度(可搭配多重红外探头盒进行平行实验)可选外置温度探头及多重温度控制单元,使温度监控更加精确可选惰性气体接口可选冷凝回流装置可选集成机器人自动化工作站三、我们的客户众多行业用户选择了我们的Integrity 10 平行结晶系统,这些用户中不乏知名药企巨头。联系我们,获取行业用户应用案例。
  • 稀释溶液的SAXS测量
    对溶解酵素溶液进行SAXS测试,可计算其回转半径(Rg) 和粒子间距离分布函数(PDDF)。 介绍 小角X射线散射(SAXS)是目前用来研究生物体系和更具体蛋白质溶液的众所周知的技术。SAXS能够测定大分子的形貌结构 ,即通过对所研究的蛋白质进行包膜重建。采集标准溶菌酶蛋白数据,来定义其Rg 和 PDDF。 测量&结果 利用Xenocs毛细管流动样品池测量浓度分别为1.5、3.0 和 5.0 mg/ml样品溶液,缓冲液为40 mM醋酸和50mM pH 4.0的NaCl。 表1. 溶解酵素的回转半径取决于浓度及曝光时间。 利用PRIMUS1软件计算得到结构参数Rg。表1记录了不同曝光时间下得到的各浓度样品的数据。数据与同步辐射得到的Rg = 1.43 nm2高度一致。短短10分钟的曝光时间就足以确定这些基本的结构参数。 PRDF p(r)是使用GNOM1软件计算得到。从图1中可以看到,不同浓度下得到的曲线重叠,这证明了低浓度样品测试可以采集到一致的数据。图1. 浓度为1.5, 3.0和5.0 mg/ml样品的PDDF。曝光时间为30分钟。图2. 浓度为5mg/ml样品的PDDF。曝光时间为10分钟和30分钟。 图2显示了浓度为5mg/ml时两种不同曝光时间的比较结果。这些曲线基本重合,说明了10min的曝光时间足以提供相关数据。 深入研究 Nano-inXider完全集成了Xenocs纯净光技术,可以对高度稀释体系进行精确的生物大分子研究。此外,Xenocs低噪音流动样品池的使用降低了容器散射,进一步推动了BioSAXS在实验室中测量的极限。
  • Nature:X射线晶体学技术迎来里程碑式的新革新
    蛋白的结构直接决定着它们的功能,蛋白结构分析能够为人们提供重要信息,帮助人们开发高度靶向性的治疗药物。迄今为止,人们所了解的蛋白结构,大多离不开 X 射线晶体学技术。一个世纪以来,许多诺贝尔奖成果都得益于这一技术。然而,倘若科学家利用 X 射线晶体学技术研究蛋白质结构,需要用许多已知数据,来填补数据的缺口。   现在,来自马克斯普朗克医学研究所的科学家与美国SLAC国家加速器实验室合作,开发出了一种 X 射线新技术,从头解析了蛋白质的准确结构,构建了该蛋白的完整 3D 模型,这是蛋白结构分析的一个重要里程碑。   溶菌酶(lysozyme)是一种已经被广泛研究的蛋白。研究人员使用直线加速器相干光源 LCLS (Linac Coherent Light Source)和复杂的计算机分析工具,从头生成了溶菌酶的准确模型。   一直以来,由于许多重要蛋白的结晶体太小,传统的 X 射线技术难以对其进行分析。而 LCLS 的特殊性质能够帮助人们解析更小的结晶体,揭示更多重要的蛋白质结构。   在用 X 射线技术确定蛋白结构时,需要综合海量数据以获得足够准确的信号,对于缺乏参考数据的蛋白来说,并不那么实用。而这项最新实验显示,新 X 射线技术可以从头展现未知生物结构的确切信息。   早在数十年前,人们就解析了溶菌酶的结构。现在,研究人员利用这一蛋白,来考量新 X 射线技术的准确性。他们将溶菌酶晶体浸泡在含有钆的溶液中,这种金属与溶菌酶结合,能够在 X 射线的照射下产生强信号。研究者们利用钆原子的这种信号,对溶菌酶分子的结构进行了准确的重建。   研究人员计划进一步调整和改善这一技术,将其应用于更多更复杂的蛋白质,如膜蛋白。膜蛋白承担了大量的重要细胞功能,是新药研发中的重要靶标,然而人们目前只知道少数膜蛋白的结构。   令科学家备受鼓舞的是,由于这项极具里程碑意义的研究,X 射线技术将迎来新的机遇,可以解析更小样本的3D结构。   LCLS 在短短几年的应用中就获得了如此成就,这让研究人员相信 X 射线检测设备、相关软件、以及结晶技术的进一步发展,会在不久的将来催生更多的新成果。
  • 祝贺Robert教授荣获美国质谱会杰出贡献奖
    v\:* {behavior:url(#default#VML) } o\:* {behavior:url(#default#VML) } w\:* {behavior:url(#default#VML) } .shape {behavior:url(#default#VML) } 800x600 Normal 0 7.8 磅 0 2 false false false EN-US ZH-CN X-NONE MicrosoftInternetExplorer4 已经提前公布在本届质谱会上获奖的各位科学家,其中, 约翰斯霍普金斯大学医学院药理与分子科学教授Robert J. Cotter荣获杰出贡献奖(The Award for a Distinguished Contribution in Mass Spectrometry)。该奖项用于奖励在质谱基础和应用研究领域做出独一无二的成果,并且在质谱领域有重要影响的科学家。对于长期以来在科学研究领域与岛津公司有着密切合作关系的岛津老朋友Robert J. Cotter教授表示热烈的祝贺! 约翰斯霍普金斯大学Robert J. Cotter教授 在Robert教授与2002年诺贝尔化学奖获得者岛津公司的田中耕一之间有着这样一段佳话。田中先生发明的质谱离子化新方法在1985年向日本专利局递交了申请,1987年,岛津公司决定将采用这一新方法的新型质谱仪正式上市,为了起到产品宣传作用,公司派遣包括田中先生在内的五位研发小组成员通过5月份在京都举行的日本质谱学会年会首次对外宣布这一成果。他们的实验结果在会议期间只是略有反响。接着是1987年9月第二届中日质谱学研讨会在日本宝塚市召开,由于这是一个国际性会议,吸引了一些西方学者前来参加。与会的美国专家中有一位就是来自著名的霍普金斯大学医学院(Johns Hopkins University)的Robert J. Cotter教授。当Cotter教授看到田中的LDI-MS居然能检测到100KD的溶菌酶七聚体后大为惊叹,在征得田中的同意后,他就将田中海报的摘要、离子化方法的细节和其中关键的几张质谱影印件通过传真发往欧美几家主要的质谱学实验室。事后证明,Cotter教授的这一热心宣传为默默无闻的田中在欧美确立了其LDI离子化新方法的原创性。最终, 于2002年诺贝尔化学奖委员会正式宣布,最早实现LDI离子化技术的田中耕一获得该年度的诺贝尔化学奖。 众所周知,在分子结构鉴定过程中,串联质谱(MS/ MS)是非常关键的工具。Robert J. Cotter利用高能量碰撞(达20keV)进行诱导解离,并在1993年率先发明和成功设计了第一个串联飞行质谱(TOF/TOF)。该质谱使用了两个双级反射器(rTOF/ rTOF)。为了在更广的质量范围内聚焦更多的离子,这种设计后来被单级反射器取代,之后又发展了出了弯曲场反射器,可以同时聚焦产生的所有离子。弯曲的场反射器后来在源后衰变质谱仪器中有广泛应用,岛津克雷斯托公司获得了该技术的授权,并先后推出了Kompact IV, AXIMA CFR和AXIMA CFR+
  • 代谢组学进展|多团队成果揭示肠道调控中枢神经自身免疫性疾病易感新机制
    中枢神经系统的自身免疫性疾病,如多发性硬化、视神经脊髓炎谱系障碍,以慢性、进行性神经炎症、脱髓鞘和神经变性为特征。这些疾病在发病率和临床特征上都表现出强烈的女性倾向,其患者多为中青年女性。随着疾病的进展逐渐失去自主活动能力。已有的治疗药物多为对症治疗,选择品种有限且价格昂贵,无法得到根治,给家庭和社会带来巨大的负担。因此,迫切需要开发能够有效延缓这类疾病进展的药物,而目前对这类疾病认识有待更新,拓展研究思路是建立新的治疗方法的重要基础。  2023年11月21日,中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心(神经科学研究所)、神经科学国家重点实验室周嘉伟研究组、中国科学院分子细胞科学卓越创新中心宋昕阳研究组、中国科学院上海有机化学研究所生物与化学交叉研究中心朱正江研究组与上海交通大学医学院附属瑞金医院神经内科陈晟团队合作在Immunity上发表了文章Intestinal epithelial dopamine receptor signaling drives sex-specific disease exacerbation in a mouse model of multiple sclerosis(肠道上皮细胞多巴胺受体信号驱动雌性多发性硬化小鼠疾病进展),利用基因修饰小鼠和药理学实验方法以及多组学联合分析,他们发现,肠道上皮细胞多巴胺D2受体(IEC DRD2)过度激活可以选择性地在雌性小鼠中改变肠道菌群的组成及其代谢物水平,从而促进多发性硬化的发病。此研究聚焦中枢神经系统自身免疫性疾病研究前沿,独辟蹊径,通过跨系统研究,揭示了肠道远程调控中枢神经系统自身免疫性疾病易感性的新机制,为建立具有性别选择性的中枢神经系统自身免疫性疾病干预手段开辟了一条新途径。    已知,肠道微生物群失调促进多发性硬化的发展。在多发性硬化动物模型中,肠道微生物群在疾病的起始阶段、效应阶段和调节阶段以及个体对药物治疗的反应中都起着关键作用。然而,由于个体之间,肠道微生物群组成的差异很大,迄今,国内外医学界未能建立起具有广泛代表性的“核心微生物群表型”。肠道上皮细胞为胃肠道构筑了一条防线,不仅可以隔绝肠腔及其内容物,还可以整合肠腔内的多种菌群信号,以维持胃肠道正常生理功能。据报道,有多种与多发性硬化相关的肠道细菌可以产生多巴胺受体激动剂,因此,作者设想,肠道上皮细胞多巴胺受体介导了菌群和宿主相互联系,并且这种联系在多发性硬化发病过程中发挥重要作用。  为对上述设想予以验证,作者分别构建了在肠道上皮细胞分别特异性敲除多巴胺D2、D3、D4受体的小鼠,同时根据文献提供的肠道细菌产生大量的多巴胺受体激动剂苯乙胺这一线索,利用实验性自身免疫性脑脊髓炎作为多发性硬化动物模型,观察在上述基因缺失的情况下,小鼠行为学、病理学的变化,并作多组学分析,之后,使用小胶质细胞系和野生型小鼠对所发现的差异代谢物进行筛选,寻找和鉴定可以减轻动物模型发病严重程度的代谢物。同时收集多发性硬化患者和健康对照的粪便样品用于靶向代谢物检测,验证苯乙胺含量与多发性硬化发病之间的相关性及性别差异。  首先,通过代谢组学检测,作者发现,多发性硬化患者粪便中苯乙胺含量显著高于健康对照,且存在性别差异。通过条件性基因敲除等实验方法,观察到只有肠道上皮细胞多巴胺受体D2,而不是D3和D4基因缺失,可显著缓解多发性硬化小鼠模型发病的严重程度。通过与野生型对照组转录组的对比,发现DRD2敲除的多发性硬化小鼠模型中,肠道溶菌酶等抗菌肽表达量显著减少 同时通过16s rRNA测序,发现在造模前和发病高峰期肠道菌群组成出现显著差异 通过同笼饲养和抗生素处理,发现DRD2在多发性硬化小鼠模型的作用是肠道菌群依赖的 通过非靶向代谢学检测和代谢精准分析术 MetDNA,鉴定了47种只在雌性小鼠脊髓中存在差异的代谢物。之后,利用小胶质细胞细胞系BV2细胞和野生型小鼠对这些差异代谢物进行筛选,确定了N-乙酰赖氨酸可以在整体动物和体外培养细胞水平显著抑制炎症反应,从而缓解自身免疫性脑脊髓炎的发病。  为了进一步探究N-乙酰赖氨酸抑制炎症的分子机制,利用磁珠分选、流式细胞分选等方法,将脊髓中的小胶质细胞分离并进行转录组测序及单细胞测序。发现N-乙酰赖氨酸显著降低了多发性硬化相关小胶质细胞的比例,提高了增殖性小胶质细胞和稳态小胶质细胞的比例。表明N-乙酰赖氨酸有利于恢复多发性硬化小鼠模型失衡的中枢神经系统免疫稳态。  传统观点认为,性激素等在中枢神经系统自身免疫性疾病发病过程中发挥重要作用。本研究显示,肠道的苯乙胺-多巴胺D2受体-溶菌酶信号轴是决定雌性动物或中青年女性群体对多发性硬化发病易感性的重要因素,这是对传统观点的新的延伸和拓展。作者还揭示了肠道—微生物群——脑的相互作用是如何调控中枢神经系统免疫稳态,这一调控方式突出了宿主肠道细胞本身对肠道菌群的核心作用,为发展基于肠道上皮细胞活动调控的脑疾病干预方法提供了新的分子和细胞基础。N-乙酰赖氨酸的抑炎作用的发现为研发适用于女性多发性硬化患者的神经炎症治疗方法提供了新的机会。  该项工作由彭海蓉博士、邱佳倩、周勤明博士和博士研究生张彧锴在周嘉伟研究员、宋昕阳研究员、朱正江研究员和陈晟教授的指导下完成,课题组的其他成员积极参与,并得到了中国科学院上海营养与健康研究所肖意传、邱菊研究员的大力协助,因此,是众多课题组通力合作的结果。  在雌性小鼠中,粪便中较高的苯乙胺浓度会引起肠道上皮细胞中的DRD2过度激活,促进溶菌酶和防御素表达量增加。这些过量的抗菌肽,对细菌的杀伤力增强,因此,乳酸杆菌等对溶菌酶敏感的菌种在雌性小鼠体内减少。而乳酸杆菌产生的N-乙酰赖氨酸对小胶质细胞介导的炎症具有很强的抑制作用,是缓解中枢神经系统自身免疫性疾病,如多发性硬化的物质基础之一。  原文链接:https://doi.org/10.1016/j.immuni.2023.10.016
  • 施一公研究组在《自然》发表论文报道人体γ-分泌酶3.4埃冷冻电镜结构
    p   2015年8月18日,清华大学生命学院施一公教授领导的研究团队于《自然》(Nature)在线发表题为《人源γ-分泌酶的原子分辨率结构》(An atomic structure of human γ-secretase)的文章,报道了分辨率高达3.4埃的人体γ-分泌酶的电镜结构,并且基于结构分析研究了γ-分泌酶致病突变体的功能,为理解γ-分泌酶的工作机制以及阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease, AD)的发病机理提供了重要基础。 /p p   阿尔兹海默症是一类神经退行性疾病,又称老年痴呆症,是当今世界面临的最为严峻的老年神经退行性疾病之一。临床表现为脑组织切片中出现淀粉样斑块,神经元逐渐死亡,认知和记忆能力受损,病人逐渐丧失独立生活能力,最后脑功能严重受损直至死亡。美国前总统里根和英国前首相撒切尔夫人都罹患该疾病。统计结果表明,在65岁以上人群中,其发病率高达10%,在85岁以上人群中,发病率更是达到30-50% 我国目前患该病的人口高达500万,约占世界患者总数的四分之一,并且由于预防治疗手段不足,缺乏特效药物,该疾病逐渐有发病年龄提前,发病人数增加的趋势,不但给病人及家属造成极大痛苦,也同时为社会带来沉重负担。 /p p   尽管如此,阿尔兹海默症的发病机理尚有待揭示。目前研究已知β-淀粉样沉淀(β-amyloid)是该病的标志性症状之一。而β-淀粉样沉淀的产生是APP蛋白经过一系列蛋白酶切割产生的短肽聚集而来。在此切割过程中,最关键的蛋白酶是γ-分泌酶(γ-secretase)。γ-分泌酶由四个跨膜蛋白亚基组成,分别为Presenilin(PS1)、Pen-2、Aph-1和Nicastrin。其中,编码PS1蛋白的基因中有200多个突变与AD病人相关,而PS1正是行使酶切功能的关键活性亚基。这些突变有可能导致PS1功能异常而引起阿尔兹海默症的发生。γ-分泌酶在阿尔兹海默症的发病中扮演着重要角色,很多药物的研发直接以γ-分泌酶作为靶点,希望通过调节其活性来治疗疾病。三维结构信息的缺失和突变致病机理的不明使得药物研发受到很大限制,所以获取其三维结构至关重要。但是γ-分泌酶是一个膜整合蛋白复合体,此前预测跨膜螺旋达到19个,其三维结构研究一直存在很多困难,瓶颈是获得性质良好适合结构生物学研究的重组蛋白复合体。 /p p   施一公教授2006年在清华大学建设实验室之初,就将揭示阿尔兹海默症的发病机理作为重点研究方向,其中一个主要环节是解析γ-分泌酶的高分辨率结构,揭示Presenilin突变体的致病机理。他们经过长期不懈的努力,积累了大量经验教训,终于在近年取得一系列重要突破: /p p   2012年12月,施一公研究组在《自然》(Li et al, Nature)报道PS1细菌同源蛋白PSH的晶体结构,并根据同源性首次构建了PS1的结构模型,揭示了PS1的结构折叠,并在结构上初步分析了在阿尔茨海默症病人中发现的PS1突变位点 /p p   2014年6月,施一公研究组与英国MRC分子生物学实验室白晓晨博士和Sjors Scheres研究员合作在《自然》报道了分辨率为4.5埃的γ-分泌酶复合物电镜结构,观察到了其跨膜区域呈马蹄形排布的结构,但是受限于分辨率,无法准确区分各个亚基的具体排布(Lu et al, Nature) /p p   2014年9月,施一公研究组在《美国科学院院刊》(PNAS)发表文章,报道了其中一个亚基Nicastrin同源蛋白胞外结构域的高分辨率晶体结构,推测了Nicastrin在底物招募过程中可能的机制,并且根据同源性构建了人源Nicastrin 胞外结构域的结构,结合该结构与此前解析的PSH晶体结构和4.5埃分辨率电镜结构,他们在γ-分泌酶跨膜区辨认出了PS1,并进一步推测了该复合物近20个跨膜螺旋的组装模式,但该结论仍需高分辨率的结构验证(Xie et al, PNAS) /p p   2015年3月,施一公研究组在PNAS发表论文,报道PS1的细菌同源蛋白PSH具有与γ-分泌酶类似的底物切割活性,并且其酶活也受到γ-分泌酶小分子抑制剂的抑制,并解析了该抑制剂与PSH的复合物结构,揭示了其抑制位点,从而使得PSH可以作为一个研究成本相对低廉的替代品来进行γ-分泌酶调控小分子的初步筛选(Dang et al, PNAS) /p p   2015年4月,施一公研究组在PNAS发表论文,报道人源γ-分泌酶4.3埃的冷冻电镜三维结构。与一年之前的4.5埃结构相比,尽管分辨率只提高0.2埃,但是跨膜区密度质量有了极大提高。此外他们在PS1的N端连接T4-溶菌酶蛋白,从而准确定位出PS1的第一个跨膜螺旋,并在此基础上判断出四个亚基,验证了在2014年PNAS文章中推测的组装方式。此外,他们利用性质非常缓和的去污剂制备样品,证明电镜观察到的结构并未因蛋白纯化和冷冻制备而受到影响。这个结构也是清华大学电镜平台的K2电子探测相机自2014年暑期正常运转之后解析出的最小分子量的结构(Sun et al, PNAS) /p p   最新发表的Nature论文是施一公研究组与英国研究组合作的延续,在获得纯度好、性质均一的蛋白样品的基础上,通过收集更多的数据、大量的计算和升级的分类方法,计算构建出了3.4埃的原子分辨率的γ-分泌酶的三维结构,可以观察到绝大部分氨基酸的侧链以及胞外区部分糖基化修饰和结合的脂类分子。在高分辨结构的基础上,施一公研究组对PS1上的致病性突变体进行了研究,发现这些突变主要集中在两个较为集中的区域内,分别为跨膜区TM2-5以及TM6-9。他们对于其中一些突变体进行了生化性质的研究,发现这些突变会影响γ-分泌酶对于底物APP的酶切活性,然而对切割活性的影响却有所不同,因此对于已有的阿尔兹海默症的发病机理提出了一些新的探讨。 /p p   这项新的研究结果首次在世界上展示了γ-分泌酶的原子分辨率结构,并且在结构信息的基础上分析了人们关心的γ-分泌酶中催化亚基PS1上的致病性的突变,研究了突变体的生化活性,对于更进一步了解γ-分泌酶切割底物的机制以及研究阿尔兹海默症的发病机理具有极为重大的意义,也为开发潜在的治疗阿尔兹海默症的高效药物提供了重要的分子基础。 /p p   在清华大学生命学院隋森芳院士指导下获得博士学位后在英国MRC分子生物学实验室从事博士后研究的白晓晨博士、清华大学生命学院博士后闫创业与博士生杨光辉为本文共同第一作者。本工作获得了科技部、国家自然科学基金委以及生命科学联合中心的经费支持。 /p p   相关论文链接: /p p   http://www.nature.com/nature/journal/v493/n7430/abs/nature11801.html /p p   http://www.nature.com/nature/journal/v512/n7513/full/nature13567.html /p p   http://www.pnas.org/content/111/37/13349.short /p p   http://www.pnas.org/content/112/11/3344.short /p p   http://www.pnas.org/content/112/19/6003.long /p p   http://www.nature.com/nature/journal/vaop/ncurrent/full/nature14892.html /p p style=" text-align: center " img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201512/noimg/fee42244-dc1a-40b8-9ec8-5cc5f99ec51b.jpg" title=" 图1:人体γ-secretase3.4埃三维结构.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图1:人体γ-secretase3.4埃三维结构 /p p style=" text-align: center " img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201512/noimg/b3509646-2d0a-4abf-a2f4-48693029778e.jpg" title=" 图2: PS1与阿尔茨海默病相关突变的结构和生化分析.jpg" / /p p /p p style=" text-align: center " 图2: PS1与阿尔茨海默病相关突变的结构和生化分析 /p p style=" text-align: center " img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201512/noimg/9562dd10-55db-4e59-8b1e-9078925d812b.jpg" title=" 图3:γ-secretase四个亚基跨膜区间的相互作用.jpg" / /p p /p p style=" text-align: center " 图3:γ-secretase四个亚基跨膜区间的相互作用 /p
  • 表面改性纳升电喷雾针提高质谱灵敏度
    大家好,本周为大家分享一篇发表在J. Am. Soc. Mass Spectrom上的文章,Surface Modified Nano-Electrospray Needles Improve Sensitivity for Native Mass Spectrometry [1] 。该文章的通讯作者是来自美国亚利桑那大学的Michael T. Marty教授。非变性质谱(NMS)和电荷检测质谱(CD-MS)已成为表征各种蛋白质和高分子复合物的多功能工具。两者通常使用硼硅酸盐针进行纳米电喷雾电离(nESI)。但由于蛋白质在中性pH值下通常带正电荷,可能会吸附在带负电荷的玻璃nESI针表面,从而降低灵敏度,影响数据分析。为了提高NMS和CD-MS的灵敏度,作者用惰性表面改性剂修饰了nsEI针的表面。通过将聚乙二醇(PEG)共价连接到硅烷醇表面,钝化了玻璃表面,以减少非特异性吸附。首先,为确定表面改性是否能提高质谱灵敏度,作者团队采用PEG涂层的玻璃nESI针检测了两种非特异性吸附玻璃的蛋白:牛血清白蛋白(BSA)和溶菌酶。结果发现,相比于对照组,BSA和溶菌酶的信号强度均提高了2倍左右(图1)。PEG 涂层显着提高了nESI针头对标准蛋白质的MS灵敏度。图1.(A) 未涂层对照针和 (B) PEG 涂层针的 BSA 原始质谱显示信号强度。(C) 溶菌酶和 (D) BSA的PEG涂层(浅蓝色)和对照(灰色)nESI针的信号强度。接下来,作者利用搭载PEG表面涂层nESI针的CD-MS检测完整腺病毒 (AAV) 衣壳。结果发现,与采用未改良针的对照组相比,在较低浓度下,PEG改良针所收集的离子总数高出8倍以上(图2)。相比于一般的CD-MS检测,采用改良针的CD-MS检测的样品浓度更低,采集时间缩短。图2. AAV2 衣壳的 CD-MS 分析。(A) 对照组; (B) PEG 涂层针。 (C) 从空AAV2衣壳的5分钟 CD-MS 采集中收集的单个离子总数。接下来,作者研究了nESI针尖端尺寸和几何形状变化对实验结果的影响。实验发现,虽然改良针在较低浓度下显著提高了信号强度,但其针间差异很大。作者团队假设信号强度的偏差是由人工修剪nESI针的尖端直径差异引起的。为了最大限度地减少nESI针尖端尺寸和几何形状的变化,作者开发了一个针头拉拔器程序,以重复生产具有2 μm吸头直径的nESI针头。结果发现,PEG修饰的2 μm针的可明显提高检测信号强度,并且每次运行差异较小。相比于人工修剪的针头,2 μm针信号提升幅度更大。0.1 μm nESI针与2μm针两者检测到的蛋白的信号强度相似(图3)。基于以上结果,作者推测2 μm针检测到的信号值更高的原因可能是2 μm针的锥度更短。较短的锥度可能会在针尖附近产生更高的涂层密度。而手动剪断的针头具有较长的锥度,在拉拔过程中在尖端附近损坏PEG涂层,因此检测到的信号值偏低。而0. 1μm和2μm针尖上的锥度都比较短,涂层在接近针尖表面时可能完好无损,因此两者检测到的信号强度相似。图3. 具有 2 μm(左)和 0.1 μm(右)尖端直径的PEG涂层(浅蓝色)和未涂层对照(灰色)nESI 针的 BSA 最丰富电荷状态的信号强度。通过以上实验,作者已证实了PEG 修饰nESI可提高NMS与CD-MS的灵敏度。接下来,作者对其作用机制进行深入研究。首先,作者测试了灵敏度的提高是否是由于减少了对玻璃的非特异性吸附引起的。作者采用两种化学性质不同的涂层:PEG与多氟分子PFDCS修饰针头,两者均可减少蛋白的非特异性吸附,理论上均可改善质谱灵敏度。但结果发现,仅有PEG涂层针头可改善信号强度。之后,作者采用两种针头检测了泛素信号值。泛素在中性条件下不与玻璃发生吸附作用,理论上两者信号值无统计学差异,但结果发现,相比于PFDCS 修饰针头,PEG修饰针头组检测到的信号值提高了3倍。由此得出结论,PEG涂层针头不是通过减少蛋白与玻璃之间的非特异性吸附来提高质谱信号值的机制。最后,作者研究了表面改性针的毛细管作用,发现无修饰的硼硅酸盐毛细管毛细管作用最强,PEG毛细管具有中等强度的毛细管作用,而PFDCS毛细管几乎没有毛细管作用(图4A)。然后,在没有流体泵送或施加压力的静态条件下研究了不同nESI针的流速(图4B)。结果发现,PEG修饰的nESI针流速最高,而PFDCS修饰和对照nESI针的流速没有统计学差异。作者假设灵敏度的提高可能是由nESI针的流速增加导致的。由于传统针头中较高的毛细力,液体会紧紧地附着在玻璃上,降低给定ESI电压下的液体流量。而PEG修饰降低了毛细阻力,可能会增加流向尖端的液体,从而增加信号。而PFDCS修饰针头虽然具有较低毛细作用,但其流速较小,原因可能是需要一定强度的毛细作用才能获得最佳的流动速度。作者未来的实验将进行深入探索这一假设。ESI针的毛细作用照片。 (B) PFDCS修饰 (深蓝色)、PEG修饰 (浅蓝色)和未修饰 (灰色) 针的流速。总而言之,作者证明了PEG修饰的nESI针增加了多种分析物的质谱信号强度和灵敏度,展示了一种可以在较低浓度下提高难分析物的灵敏度、相对快速且成本低廉的方法。作者推测表面改性通过提高nESI针尖端流速以发挥提高质谱检测灵敏度的作用,但该推测仍需进一步证明。[1]Kostelic MM, Hsieh CC, Sanders HM, Zak CK, Ryan JP, Baker ES, Aspinwall CA, Marty MT. Surface Modified Nano-Electrospray Needles Improve Sensitivity for Native Mass Spectrometry. J Am Soc Mass Spectrom. 2022 Jun 1 33(6):1031-1037. doi: 10.1021/jasms.2c00087. Epub 2022 May 19. PMID: 35588532.
  • 上海市畜牧兽医学会批准发布《动物病原微生物基因扩增实验室技术要求》等九项团体标准
    各有关单位:根据《上海市畜牧兽医学会团体标准管理办法》(沪牧医学[2022]第17号)规定,上海市畜牧兽医学会现批准发布《动物病原微生物基因扩增实验室技术要求》、《动物源细菌耐药性监测实验室建设规范》、《猫呼吸道病原检测 微流控芯片法》、《犬呼吸道病原检测 微流控芯片法》、《犬瘟热病毒抗体检测 酶联免疫吸附法》、《犬细小病毒抗体检测 酶联免疫吸附法》、《混合型饲料添加剂 酸度调节剂中甲酸钙、乳酸、柠檬酸、富马酸、丙酸钙的测定—高效液相色谱法》、《混合型饲料添加剂 甜味剂中糖精钠、纽甜、新甲基橙皮苷二氢查耳酮的测定—高效液相色谱法》、《饲料添加剂 蛋清溶菌酶寡聚体》九项团体标准。标准于2024年4月10日发布,自2024年4月10日起实施。现予以公告。附件:团体标准编号、名称一览表。标准发布公告.pdf
  • 心相印五月花等品牌湿巾含禁用防腐剂CIT
    上海消保委近日公布:抽检50件湿巾样品,21件检出国际禁用防腐剂CIT,25件婴幼儿用湿巾中12件检出CIT。心相印、五月花、妮飘、启初婴儿洁肤湿巾等均榜上有名。CIT对肌肤与粘膜有刺激性,浓度过高还可能造成化学灼伤。上海齐明生物科技有限公司安全提醒,我司现货供应常规毒素检测ELISA试剂盒。产品物美价廉,欢迎咨询。角鲨烯环氧化酶(SE)ELISA试剂盒金黄色葡萄球菌A型肠毒素(SEA)ELISA试剂盒金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)ELISA试剂盒羧甲基赖氨酸(CML)ELISA试剂盒摇蚊金属硫蛋白(MT)ELISA试剂盒摇蚊热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒摇蚊乙酰胆碱酯酶(AchE)ELISA试剂盒摇蚊谷胱甘肽转移酶(GST)ELISA试剂盒摇蚊过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒摇蚊细胞色素P4501A1(CYP4501A1)ELISA试剂盒摇蚊羧酸酯酶(CES)ELISA试剂盒大菱鲆Turbot热休克蛋白70(HSP70)ELISA试剂盒苯甲酸(carboxybenzene)ELISA试剂盒河豚毒素(TTX)ELISA试剂盒螃蟹几丁质酶(chitinase)ELISA试剂盒展青酶素ELISA试剂盒莱克多巴胺(Ractopamine)ELISA试剂盒螃蟹雌二醇(E2)ELISA试剂盒螃蟹睾酮(T)ELISA试剂盒虾溶菌酶(LYS)ELISA试剂盒真菌1-3-β-D葡聚糖(1-3-β-D glucosidase)ELISA试剂盒喹乙醇原药ELISA试剂盒猫胰腺脂肪酶(PL)ELISA试剂盒
  • 141批次洋食品不合格 乐天巧克力铜超标
    近日,国家质检总局发布最新一批进境不合格食品、化妆品信息(2009年12月)显示,141批次洋食品和化妆品被处退货或销毁处理。这次公布的名单显示,部分进口乳制品被指不合格。   记者看到,这份不合格名单上的产品包括全脂奶粉、奶酪、蜂蜜、燕窝、糖果、鱼胶原蛋白等,来自美国、日本、加拿大、新西兰、澳大利亚等多个国家。   其中,一部分不合格食品来自进口的乳制品。例如,广州一家进口商从新西兰Fonterra公司进口的一批22.35吨的全脂奶粉被指检出阪崎肠肝菌 来自2家意大利制造商合共2个批次的奶酪、奶酪粉则分别被指酵母菌超标、违规使用溶菌酶。   此外,深圳一家进口商从日本进口的3个批次合共0.18吨的优之良品油炸紫菜酥被指砷超标,进口自韩国的一批0.81吨乐天牌梦之巧克力被指铜超标,进口自韩国的3个批次ACE夹心熊仔饼被指细菌总数超标。   “这批奶粉是原料粉,在黄埔新港码头发现问题后已经立即退货,并没有制成罐装品牌奶粉销售。”Fonterra公司在华一名联系人昨日对本报回应表示,阪崎肠肝菌存在于空气中,属于条件性致病菌,可能会对早产和低体重等不是很健康的婴幼儿有不良影响。   国家质检总局强调,所公布批次食品、化妆品的问题是入境口岸检验检疫机构实施检验检疫时发现的,都已依法做退货、销毁或改作他用处理,未在国内市场销售。
  • WTO:9月关于各国标准修订的通报
    新西兰制定鱼食及鱼饵的进口健康标准   新西兰近日发出G/SPS/N/NZL/425号通报,新西兰生物安全局对鱼食及鱼饵制定进口健康标准。内容主要涉及:规定了无论产地国或出口国在签发商品准许入境新西兰的生物安全检验许可证书前必须执行的过境或检疫期间动物卫生要求。在进口风险分析的基础上,制定了适用于所有产地国的鱼食及鱼饵的进口健康修订标准。   该标准的拟批准日期为2009年10月19日。   新西兰修订谷物等进口植物卫生要求   新西兰近日发出G/SPS/N/NZL/295/Add.1号通报,对用于消费、饲料或加工的谷物或种子的进口卫生标准进行了修订。内容涉及:(1)罂粟新计划。罂粟进口要求以前书面写在内部程序里,现在已纳入进口卫生标准,还没有明确的生物安全要求。罂粟种子进口商在进口前必须获得新西兰卫生部的书面批准。(2)修订小麦计划。明确将出口国对监管的真菌进行检测的选项纳入植物卫生要求和补充声明中。   该修订要求无须再征求意见。   新西兰对进口中国食用鲜洋葱头制定植物卫生风险草案   新西兰近日发出G/SPS/N/NZL/42号通报,新西兰农林部生物安全局对进口中国产食用洋葱头制订了植物卫生风险的风险分析草案。   该草案的拟批准日期为2009年8月。   美国修订瓶装水法规   美国近日发出G/SPS/N/USA/1869/Add.1号通报,美国FDA公布了一项最终法规,修订了FDA瓶装水法规,以保证按排泄物指标大肠埃希杆菌显示,瓶装水未受排泄物污染。新法规包含以下要求:(1)瓶装厂家每周对水源的大肠菌总数进行微生物检测 (2)如水源或成品瓶装水中发现任何大肠菌,瓶装厂家必须确定大肠菌生物体是否是大肠埃希杆菌(E.coli.) (3)含E.coli的水源的水质被认为是不安全、不卫生,将禁止用于瓶装水生产 (4)在瓶装厂家使用E.coli检验结果为阳性的水源之前,必须采取适当措施纠正或根除使用水源受E.coli污染的原因,必须保存对该措施的记录 (5)含E.coli的成品瓶装水将被认为掺假。   该最终法规已经公布。   加拿大制定多项农药最高残留限量标准   加拿大近日发出G/SPS/N/CAN/362、364、365、368、369、370/Add.1号多项通报,对农药咪唑菌酮、稀禾定、甲霜灵、吡虫啉、氟酮磺隆以及赛座灭分别制定了最高残留限量。   上述法规均已生效。   韩国制定食品标准规范修订案   韩国近日发出G/SPS/N/KOR/331号通报,韩国食品药物管理局拟修订食品标准规范,涉及产品包括食品仪器、容器及包装。主要内容:(1)规定苯甲酮用作印刷油墨成分的迁移限量及测试方法。   (2)加严以下成分的迁移标准:聚乙烯对苯二酸酯(PET)中的锑(Sb)、-烯-苯乙烯树脂、聚甲基丙烯酸酯(MS)及甲基丙烯酸甲酯-丙烯腈(acrylonitrile)-丁苯(butadiene-styrene)共聚合(MABS)异丁烯酸甲酯内的(Methylmethacrylate)及木材内二氧化硫、邻苯基苯酚(ortho-phenylphenol)、噻苯咪唑(thi?鄄abendazole)、联苯(biphenyl)及戴挫霉(i?鄄mazalil)。   另外,对纸或加工纸内多氯联苯(PCBs)的残留限量及测试方法提出更高要求。该修订案目前正在征求意见中。   韩国拟修订食品添加剂标准规范   韩国近日发出G/SPS/N/KOR/329号通报,韩国食品药物管理局拟修订食品添加剂标准规范,修订内容包括:强化重金属规范,或规范以下30种食品添加剂的成分:微晶纤维素、瓜尔胶、蛋黄素、刺槐豆胶、溶菌酶、万寿菊萃取物、蜂蜡、高岭土、纤维素粉、甜菜红、黄原胶、虫胶、环糊精、阿拉伯树胶、胭脂树萃取物、藻酸、液体石蜡、蔗糖酶、葛兰胶、巴西蜡棕蜡、焦糖色、卡拉牙胶、卡德兰凝胶、胭脂虫提取物、塔拉胶、鞣酸、浓缩微生物E(混合物)、浓缩生育醇(d-a-toco?鄄pherol)、黄蓍胶、辣椒油。   (1) 规定以下5种残留溶剂的规范:瓜尔胶、刺槐豆胶、黄原胶、环糊精、鞣酸。规定以下12种微生物标准:瓜尔胶、刺槐豆胶、溶菌酶、高岭土、黄原胶、环糊精、藻酸、蔗糖酶、葛兰胶、卡拉牙胶、卡德兰凝胶、黄蓍胶。   (2) 修订环糊精和浓缩d-生育酚(混合物)含量的规范。   该法规还规定了转基因食品添加剂的生产标准。修订了次氯酸水、环糊精及浓缩d-生育酚(混合物)的定义以及修订了烟熏味香料的使用标准。修订规范的拟批准日期待定。   韩国拟定修改食品添加剂标准规范   韩国近日发出G/SPS/N/KOR/333号通报,韩国食品药物管理局拟定修改食品添加剂标准,内容涉及:(1)加强重金属包括铅、镉、汞的规范、以及对30种食品添加剂的成分进行规范:稀释过氧苯甲酰、过氧化氢、果胶、葡萄皮萃取物、乙烷、红花油、红花黄色素、活性碳、酶催分解蛋黄素、葡甘露聚糖、皂树萃取物、印度树胶、番红花色素、叶红素、小烛石、叶绿素、甜蛋白、支链淀粉、达玛树脂、番茄红素、月桂酸、硬脂酸、棕榈酸、蓖麻油、肉豆蔻酸、油酸、癸酸、辛酸、尼生素、游霉素 (2)规定6项微生物标准: 葡甘露聚糖、印度树胶、甜蛋白、支链淀粉、尼生素、游霉素 (3)加强果胶溶剂残留规范 (4)制定活性碳内氰化合物的规范 (5)制定乙烷及活性碳内多环(或更高)芳香烃的规范。另外,还修订了食品添加剂法规一般测试方法内原子吸收光谱测定法及制定汞电感耦合等离子体原子发射光谱测定法。   该修订标准目前正在征求意见中。
  • 刘淑莹研究员:利用MALDI-MS研究含有二硫键的蛋白质和多肽问题
    仪器信息网讯,2009年11月7日,由中国质谱学会有机质谱专业委员会与中国分析测试协会联合举办的“2009年中国有机质谱年会”在北京成功召开,会议为期三天,出席会议人数达300人。仪器信息网作为特邀媒体也应邀参加。   此次质谱年会为与会代表准备了丰富的报告内容,内容涉及生命科学、医学、药学、环境科学、食品安全、毒物分析中的质谱应用研究以及质谱仪器研发的新技术、新进展等。仪器信息网将进行系列报道。   中科院长春应化所的刘淑莹研究员选取了含有二硫键的蛋白质和多肽为研究对象,详细研究了其测定分析的问题。二硫键是一种常见的蛋白质翻译后的修饰,文献报道的研究方法有:NMR、部分还原与烷基化、Edman降解与MS相结合(FAB、ESI-MS、MALDI-MS),但是NMR方法需要相当多的被拆分物,部分还原与烷基化需要耗费相当长的时间,因此课题组选择Edman降解与MS相结合中的MALDI-MS方法进行研究。 中科院长春应化所的刘淑莹研究员   课题组利用MALDI-MS研究了胰岛素、β2-微球和溶菌酶的二硫键断裂,发现MALDI线性和反射模式下均观察到了二硫键的快速裂解,并且这些裂解碎片是在气相中产生的,而不是来源于样品制备时在液相中的分解。在上述研究的基础上,课题组建立含有二硫键蛋白/多肽的新方法——还原后巯基与特定基质加成反应。实验中发现了样品与某些基质发生了加合反应,并进一步研究了基质、pH等对加合反应的影响,确定了其反应的机理,最后用于实际样品的研究。   最后,刘淑莹研究员与大家相约长春,邀请大家参加明年在长春举办的第三届世界华人质谱大会。
  • 质检总局公布6月进境不合格食品、化妆品
    近日,国家质检总局公布2010年6月进境不合格食品、化妆品信息(见附件)。澳大利亚婴幼儿配方奶粉、印度尼西亚红牛牌饮料等上黑榜。   说明:本表所列进口不合格食品、化妆品信息仅指所列批次食品、化妆品,表中所列批次食品、化妆品的问题是入境口岸检验检疫机构实施检验检疫时发现的,都已依法做退货、销毁或改作他用处理。这些不合格批次的食品、化妆品未在国内市场销售。   附件:进境不合格食品化妆品信息(2010年6月).xls 序号 产品名称 产/地 制造商名称 重量(吨) 不合格原因描述 处理措施 1 冻猪脚 丹麦 Danish Crown14 22.66 货证不符 销毁 2 冷冻猪杂皮 加拿大 OLYMEL S.E.C./L.P. 90.533 检出莱克多巴胺 退货 3 冷冻猪头 加拿大 LARSEN PACKERS LTD 48.794 货证不符 退货 4 冷冻猪筒骨 加拿大 OLYMEL S.E.C./L.P. 102.580 货证不符 退货 5 冰鲜皇帝鱼 澳大利亚 708 0.0037 检出结晶紫 销毁 6 冻鲭鱼 日本 NAGASAKIUOICHI CO.,LTD / IMARI TOYO CO., LTD 132.596 检出隐性孔雀石绿 退货 7 冻整条鲭鱼 日本 NAGASAKIUOICHI CO.,LTD./ YOKOHAMA REITO CO.,LTD 49.3 检出隐性孔雀石绿 退货 8 冻鲭鱼 日本 NAGASAKIUOICHI CO.,LTD/ NIHON ENYO MAKIAMI GYOGYO KYODO KUMIAI MATUURA SEIHYOREITO KOJO 148.5 检出隐性孔雀石绿 退货 9 冻鳀鱼 日本 Kyoto Prefecture of Fisheries Cooperative Associations Big Factory 23.25 镉超标 退货 10 冻竹荚鱼 韩国 MIKWANG INDUSTRY CO.LTD 55.39 检出单增李斯特菌 退货 11 鲜大目金枪鱼片 马绍尔群岛 Marshall Islands Fishing Venture, Inc. 0.035 甲基汞超标 召回 12 全脂奶粉 新西兰 FONTERRA LIMITED 25.25 货损事故 销毁 13 全脂奶粉 新加坡 ANBROS INDUSTRIES(S)PTE LTD. 149.875 检出阪崎肠杆菌 退货 14 牛初乳粉 美国 GLANBIA FOODS INC. 1 亚硝酸盐超标 退货 15 爱博布里芝士 丹麦 EMBORG FOODS A/S 0.12 检出阪崎肠杆菌 销毁 16 酒浸山羊奶酪 西班牙 PALACARES ALIMENTACION,S.L 0.028 违规使用溶菌酶 销毁 17 酒浸山羊奶酪 西班牙 PALACARES ALIMENTACION,S.L 0.028 违规使用溶菌酶 销毁 18 山羊奶酪 西班牙 PALACARES ALIMENTACION,S.L 0.025 违规使用溶菌酶 销毁 19 山羊奶酪 西班牙 PALACARES ALIMENTACION,S.L 0.025 违规使用溶菌酶 销毁 20 白霉奶酪 丹麦 ARLA FOODS AMBA 0.00099 违规入境 销毁 21 燕窝(血燕盏) 马来西亚 PURE CAVE NEST ENTERPRISE 0.002 检出亚硝酸盐 退货 22 燕窝(白燕燕窝) 马来西亚 BFC FOOD CENTRE 0.03 1、检出亚硝酸盐;2、霉菌和酵母菌超标 退货 23 燕窝(白燕燕碎) 新加坡 SUMBER WALLET BAHARI TRADING 0.025 检出亚硝酸盐及亚硫酸盐 退货 24 燕窝 马来西亚 EAST OCEAN RESOURCES 0.005 亚硝酸盐和霉菌超标 退货 25 帕姆帕高麦特芥末蜂蜜酱/帕姆帕高麦特水果酸辣蜂蜜酱 阿根廷 elab.y fracc.por argentina speciality s.r.l 0.1353 1、超过保质期;2、违规使用化学物质食用酒磺色素 销毁 26 冻鸡胗 美国 Tyson foods Inc 24.5 尼卡巴嗪超标 退货 27 洋葱粉 西班牙 VEGENAT,S,A. 4 大肠菌群超标 销毁 28 椰蓉 新加坡 FAIRTECK HOLDING PTE LTD 12.247 大肠菌群超标 退货 29 干椰丝 菲律宾 SUPERSTAR COCONUT PRODUCTS CO.,INC. 24.4944 菌落总数超标 退货 30 薘蔓虞美人草冰茶包 法国 Dammann Frsres S.A.S. 0.014 无官方批准证书 退货 31调味料/虾味粉(2款) 日本 香港淘大 0.108 标签不合格 退货 32 葛根原料粉 泰国 T.O.P COSMETIC &MANUFACTURE CO.,LTD. 0.1 菌落总数超标 销毁 33 花生米 印度 MBM TRADE-LINK PVT.LTD 96.525 镉超标 退货 34 日正牌黑麻油 中国台湾 日正食品工业股份有限公司 0.0162 酸价超标 退货 35 黑枣烧酒鸡 中国台湾 日正食品工业股份有限公司 0.0315 无官方批准证书 退货 36 味一海苔芝麻鲔鱼松/鲔鱼松/旗鱼松/海苔芝麻鱼松(金枪鱼松) 中国台湾 味一食品有限公司 0.5295 违规使用化学物质亚硝酸盐 销毁 37 味一海苔芝麻鲔鱼松/旗鱼松/海苔芝麻鲔鱼松(金枪鱼松) 中国台湾 味一食品有限公司 0.04575 违规使用化学物质亚硝酸盐 销毁 38 莱菲酸苹果味软糖 美国 NESTLE USA, INC. 0.00274 柠檬黄超标 退货 39 莱菲香蕉味软糖 美国 NESTLE USA, INC. 0.00274 柠檬黄超标 退货 40 REDVINES牌红蜡烛型软糖 美国 AMERICAN LICORICE CO. 0.00846 诱惑红超标 退货 41 益果牌山竹味果冻 马来西亚 KEE WEE HUP KEE FOOD MFT.PTE.LTD 0.528 霉菌超标 退货 42 盛香珍牌优酪果园果冻(综合口味) 中国台湾 成伟食品股份有限公司 0.24 违规使用化学物质柠檬黄 退货 43 Puni Puni超Q软糖 活乳酸菌 中国台湾 台湾粉红股份有限公司 0.0216 违规使用菌种芽孢乳酸菌 销毁 44 金仕优质新鲜无糖达芙妮黑巧克力 比利时 金仕朱古力公司 0.01312 违规使用化学物质麦芽糖醇 销毁 45 金仕优质新鲜无糖维纳斯巧克力 比利时 金仕朱古力公司 0.0043 违规使用化学物质麦芽糖醇 销毁 46 黑巧克力(含85%可可) 法国 Lint& Sprangli SAS (france) 0.006 铜超标 销毁 47 蜜思杂锦巧克力 德国 Diethecm Singapore Pte Ltd 0.003 感官检验不合格 销毁 48 混合粉 日本 ROYAL FOODS CO.,LTD. 1.540 铝超标 销毁 49 杏仁黄油酥(冷冻面团) 英国 Marks and Spencer 0.13398 超过保质期 销毁 50 黄油蛋糕(冷冻面团) 英国 Marks and Spencer 0.02232 超过保质期 销毁 51 芝士洋葱条(冷冻面团) 英国 Marks and Spencer 0.01728 超过保质期 销毁 52 婴幼儿配方奶粉 澳大利亚 TATURA MILK INDUSTRIES LTD. 171.775 锌超标 退货 53 有机婴儿配方奶粉 澳大利亚 TATURA MILK INDUSTRIES LTD. 26.97吨 磷不符合国家标准要求 退货 54 有机婴儿配方奶粉 澳大利亚 TATURA MILK INDUSTRIES LTD. 26.03吨 磷不符合国家标准要求 退货 55 妈妈奶粉 中国台湾 台湾菜篮子生物科技有限公司 0.11 细菌总数超标 退货 56 煎饼粉 日本 MORITA FOODS INC. 0.022 铝超标 销毁 57 五谷粉 中国台湾 协力志业股份有限公司 0.512 无官方批准证书 退货 58 无糖五谷粉 中国台湾 协力志业股份有限公司 0.464 无官方批准证书 退货 59 五谷粉(随身包) 中国台湾 协力志业股份有限公司 0.0812 无官方批准证书 退货 60 西灵子干脆面 印度尼西亚 PT.SIANTAR TOP TBK 0.25416 大肠菌群超标 退货 61 虾饼 泰国 HUA TAI TRADE CORPORATION LIMITED 2.00铝超标 销毁 62 多西特谷牌多种果实早餐麦片 英国 D B RAMSDEN & CO.LTD.T/A RAMSDEN INTERNATIONAL 0.1575 霉菌超标 销毁 63 麦吉香酥巧克力牛奶夹心饼干 菲律宾 台湾易而善股份有限公司 0.1800 检出阪崎肠杆菌 退货 64 奥利华柠檬杏仁饼干 意大利 / 0.018 山梨酸超标 销毁 65 杰克牌方形威化酥可可味 马来西亚 Oriental 0.15 霉菌超标退货 66 阿波罗夹心酥威化 马来西亚 THOMYAM FOOD WDUSTRIES SDN BHD 0.726 大肠菌群超标 退货 67 义美牌新浪派黑巧克力威化饼 中国台湾 I-MEI FOODS CO.LTD 0.043 霉菌超标 销毁 68 许家班饼铺茶叶酥 中国台湾 万通食品厂股份有限公司 0.011 超过保质期 销毁 69 威威草莓味蛋卷 马来西亚 WIN WIN FOOD INDUSTRIES SDN. 0.672 大肠菌群超标 退货 70 英式生姜曲奇 英国 Grandma wilds 0.072 细菌总数超标 销毁 71 威威斑斓味脆果 马来西亚 WIN WIN FOOD NINDUSTRIES SDN.BHD. 0.72 大肠菌群超标 退货 72 威威草莓味蛋卷 马来西亚 WIN WIN FOOD INDUSTRIES SDH.BHD. 1.4112 违规使用化学物质赤藓红 退货 73 噢哩噢牌营养饼干 韩国 韩国噢哩噢株式会社 0.1242 检出硼酸 退货 74 烧烤香脆薯饼 马来西亚 双赢食品工业有限公司 0.2160 菌落总数超标 退货 75 蔬菜香脆薯饼 马来西亚 双赢食品工业有限公司 0.2160 菌落总数超标 退货 76 黑与白牛奶夹心蛋卷 马来西亚 双赢食品工业有限公司 0.1555 大肠菌群超标 退货 77 芝士味面包 马来西亚 双赢食品工业有限公司 0.2293 大肠菌群超标 退货 78 伦敦郑蛋糕(巧克力味) 马来西亚 伦敦食品制造厂有限公司 1.45 山梨酸超标 退货 79 全麦比得包 细包装-10个装 中国香港 集堡有限公司 0.01800 霉菌超标 退货 80 全麦比得包 细包装-5个装 中国香港 集堡有限公司 0.04500 霉菌超标 退货 81 低脂比得包 2个装 中国香港 集堡有限公司 0.10200 霉菌超标 退货 82 雪之恋麻薯糕点(阿萨姆红茶口味) 中国台湾 石城实业股份有限公司 0.18 霉菌超标退货 83 凯莉牌烧烤味洋葱圈 奥地利 KELLY GMBH 0.02816 违规使用化学物质喹啉黄 销毁 84 冷冻太妃酱布丁 英国 Marks and Spencer 0.0189 超过保质期 销毁 85 鲜虾饼干 英国 Marks and Spencer 0.0024 超过保质期 销毁 86 天新发即食草菇干 越南 越南天新发食品有限公司 0.06 菌落总数超标 退货 87 金兰牌莴苣菜心罐头 中国台湾 TAIWAN HANDERSON MFG CO.,LTD 0.02376 检测为非商业无菌 销毁 88 德诚牌甘薯条 越南 越南德诚贸易有限公司 0.095 菌落总数超标 退货 89 德诚牌芋头条 越南 越南德诚贸易有限公司 0.095 菌落总数超标 退货 90 盒装开胃梅 马来西亚 Nicecuit 0.04 铅超标 退货 91 瓶装川贝梅饼 马来西亚 Nicecuit 0.06 铅超标 退货 92 瓶装开胃梅饼 马来西亚 Nicecuit 0.06 铅超标 退货 93 瓶装润喉梅饼 马来西亚 Nicecuit 0.06 铅超标 退货 94 草莓富多果 美国 BAKEMARK WESTCO 1.2528 苯甲酸超标 销毁 95 中越泰芝士花生 越南 越南金山有限公司 0.172 菌落总数超标 退货 96 葱香绿豆 泰国 HERITAGE SNACK &FOODS CO.,LTD. 0.0612 细菌总数超标 销毁 97 天新发综合蔬果干 越南 越南天新发食品有限公司 0.05 菌落总数超标 退货 98 海苔 韩国 GEOSAN TRADING CO., LTD 1.27 细菌总数超标 退货 99 上豪牌芒果干 越南 shanghao agricultural products processing co., ltd 1.9425 细菌总数超标退货 100 上豪牌菠萝蜜干 越南 shanghao agricultural products processing co., ltd 1.575 菌落总数超标 退货 101 甘醇芒果粒 泰国 WORAPORN FRUIT AND FOOD PROCESSING CO.LIT 0.54 苯甲酸超标 销毁 102 甘醇芒果粒 泰国 WORAPORN FRUIT AND FOOD PROCESSING CO.LIT 0.378 苯甲酸超标 销毁 103 地门牌菠萝橙子混合果汁 英国D B RAMSDEN & CO.LTD.T/A RAMSDEN INTERNATIONAL 0.06 检测为非商业无菌 销毁 104 精选综合咖啡 越南 越南中原咖啡厂 0.5 大肠菌群超标 退货 105 特辣山葵辣根酱 美国 palmetto food service,llc 0.18144 违规使用化学物质焦亚硫酸钠 销毁 106 巴生肉骨茶香料 马来西亚 林纳果食品工业有限公司 0.756 违规使用药物成分 退货 107 袋鼠精提取物软胶囊 澳大利亚 AURORA PHARMACEUTICALS PTY LTD 0.014 无官方批准证书 销毁 108 奶蓟草复合营养软胶囊 澳大利亚 AURORA PHARMACEUTICALS PTY LTD 0.014 无官方批准证书 销毁 109 辅酶Q10复合营养软胶囊 澳大利亚 AURORA PHARMACEUTICALS PTY LTD 0.014 无官方批准证书 销毁 110 牛樟芝胶囊 中国台湾 台湾菜篮子生物科技有限公司 0.01 1、细菌总数、霉菌和酵母菌超标;2、铅超标 退货 111 水果米粉 中国台湾 台湾菜篮子生物科技有限公司 0.05 检出转基因成分 退货 112 丽多胶囊美国 KANG LONG GROUP CORP.(美国康龙集团) 0.02 检出日落黄 退货 113 番木瓜酵素颗粒 日本 MIYATOU 野草研究所股份有限公司 0.013 菌落总数超标 销毁 114 麦卢卡蜂蜜 新西兰 API HEALTH NZ LIMITED 0.030 细菌总数超标 退货 115 蔬果粉 中国台湾 J&P BIOTECHNOLOGY CORP. 0.0882 菌落总数超标 退货 116 百维灵多维矿物质综合营养牌 美国 美国未来生物科技有限公司 0.043 无官方批准证书 退货 117 百维灵小米草营养胶囊 美国 美国未来生物科技有限公司 0.017 无法提供相关官方要求资料 退货 118 黄大目川味辣腐乳(罐头) 中国台湾 黄大目食料品(股)公司 0.504 检出邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二异壬酯 销毁 119 黄大目麻油辣腐乳(罐头) 中国台湾 黄大目食料品(股)公司 1.368 检出邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二异壬酯 销毁 120 金燕牌有机即冲燕麦片 中国香港 Sun Fung Health Products(HK) Ltd.0.10896 水分超标 退货 121 金燕牌有机五谷麦片 中国香港 Sun Fung Health Products(HK) Ltd. 0.10896 水分超标 退货 122 蔬菜片 日本 小林制药株式会社 0.021 违规使用中药成分郁金 销毁 123 迷迭香茶 中国台湾 协力志业股份有限公司 0.012 无官方批准证书 退货 124 罗汉果茶 中国台湾 协力志业股份有限公司 0.0025 无官方批准证书 退货 125 竹炭台湾烧仙草 中国台湾 晨鸿有限公司 0.054 违规使用竹碳粉 退货 126 甜菜根植物纤奶 中国台湾 有机园生物科技(股)公司 0.009 违规使用菌种芽孢乳酸菌 销毁 127 脱脂冷冻酸奶 美国 FLAVOR RIGHT FOODS 0.68267 标签不合格 销毁 128 百吉乐猕猴桃甜品酱 意大利 JAS JET AIR SERVICE SPA 0.06 违规使用化学物质专利蓝 销毁 129 新嘉利元气汽水 日本 日本 1.5 无官方批准证书 退货 130 芦荟苹果味饮料 韩国 TAEWOONG FOOD CO., 4.5升 无法提供相关官方要求资料 销毁 131 芒果番石榴饮料 韩国 TAEWOONG FOOD CO., 4.5升 无法提供相关官方要求资料 销毁 132 凯牌草莓味饮料 马来西亚 KAMPAI ASIA PACIFIC(M) SDN BHD 0.198 违规使用化学物制品偶氮玉红 退货 133 凯牌能量饮料 马来西亚 KAMPAI ASIA PACIFIC(M) SDN BHD 0.132 违规使用化学物质咖啡因 退货 134 凯牌维C500饮料 马来西亚 KAMPAI ASIA PACIFIC(M) SDN BHD 0.108 违规使用化学物质咖啡因 退货 135 阿宝凌娜牌柠檬味含气矿泉水 德国 BEST GMBH 0.2 亚硝酸盐超标 销毁 136 榛名活力天然植物混合饮料 日本 榛名生态股份有限公司 0.042 无官方批准证书 销毁 137 斯特明运动饮料 澳大利亚 STERIV TRADING PTD LTD 1.28 1、违规使用化学物质苯甲酸;2、钠超标 销毁 138 超牛能量活力饮 中国台湾 苗荣食品股份有限公司 3.0000 1、无官方批准证书;2、违规使用化学物质咖啡因 退货 139 红牛牌饮料 印度尼西亚 PT. Asia Health Energi Beverages Babakan Pari. Sukabumi, Indonesia 10.0800 违规食用化学物质咖啡因 退货 140 芦荟小麦草汁 中国台湾 E.S.TIEN ENTERPRISE CO.,LTD. 4.698 标签不合格 退货 141 奇异椰果汁 中国台湾 E.S.TIEN ENTERPRISE CO.,LTD. 4.1962 标签不合格 退货 142 酸梅汁 中国台湾 E.S.TIEN ENTERPRISE CO.,LTD. 4.8024 标签不合格 退货 143 仙楂乌梅汁 中国台湾 E.S.TIEN ENTERPRISE CO.,LTD. 1.7664 标签不合格 退货 144 鲜蔓越红莓综合果汁 中国台湾 E.S.TIEN ENTERPRISE CO.,LTD. 1.8216 标签不合格 退货 145 芦荟柠蜜 中国台湾 E.S.TIEN ENTERPRISE CO.,LTD. 1.932 标签不合格 退货 146 豪富庄园白葡萄汁 南非 KOELENHOF WINES 0.04500 二氧化硫超标 退货 147 豪富庄园红葡萄汁 南非 KOELENHOF WINES 0.04500 二氧化硫超标 退货 148 豪富庄园起泡白葡萄汁 南非 KOELENHOF WINES 0.04500 二氧化硫超标 退货 149 豪富庄园起泡红葡萄汁 南非 KOELENHOF WINES 0.04500 二氧化硫超标 退货 150 ITAL LEMON牌柠檬汁饮料 意大利 ITAL LEMON S.p.A 0.00300 二氧化硫超标 退货 151 依润特红葡萄酒 葡萄牙 / 0.8235 包装不合格 销毁 152 福克森红葡萄酒 西班牙 ViniGalicia S.L. 4.32 检出甜蜜素(环己基氨基磺酸钠) 退货 153 加乐酷红葡萄酒 西班牙 ViniGalicia S.L. 6.48 检出甜蜜素(环己基氨基磺酸钠) 退货 154 波尔多利威酒庄特其斯白葡萄酒 法国 VIGNOBLES LAVILLE EARL 0.59400 铁和铜超标 退货 155 意大利葡萄格拉怕酒 意大利 ARGAS ITALY C/O AGE/SA SNC 0.04 甲醇超标 销毁 156 意大利格拉怕烈酒, 意大利 ARGAS ITALY C/O AGE/SA SNC 0.06 甲醇超标 销毁 157 麦歌安迪烈酒 意大利 / 0.2814 甲醇超标 销毁 158 麦歌-巴里烈酒 意大利 / 0.15 甲醇超标 销毁 159 芭卡白兰地 法国 芭卡 0.00924 酒体混浊,有悬浮物 销毁 160 堂瑞门龙舌兰酒, 墨西哥 INDUSTRIALI-ZADORA DE AGAVE SAN ISIDRO S.A DE C.V 9.72 甲醇超标 销毁 161 西班牙格萨葡萄白兰地、西班牙格萨咖啡味配制酒、西班牙格萨奶油味配制酒、西班牙格萨香草味配制酒 西班牙 HIJOS DE RIVERA,S.A. 0.12 甲醇超标 销毁 162 食用盐 塞浦路斯 M.G.P CYPRUS SALT COMPANY LTD 0.064 含外来异物 销毁 163 乳酸菌-罗伊氏乳杆菌 中国台湾 丰华生物科技有限公司 0.00002 违规入境 销毁 164 蔬菜香精 波兰 Agro Food Spolka Akcyjna 0.1 菌落总数超标 销毁 165 爱可登舒缓清新眼膜 法国 OTB DPT ALGOTHERM 0.007 菌落总数超标 销毁 166 新安怡香薰保湿润肤油 英国 PHILIPS ELECTRONICS UK LTD 欧榄柔亮护发乳 希腊 普丽爱斯有限公司 0.0054 标签不合格 销毁 176 欧榄柔润磨砂沐浴乳      希腊 普丽爱斯有限公司 0.01358 1、无生产批号;2、包装不合格 销毁 177 欧榄洁手液  希腊 普丽爱斯有限公司 0.00041 标签不合格 销毁
  • 如何制备*单细胞悬液,几个小TIPS包教包会
    时下细胞研究很火的科研技术当属单细胞测序,但此技术对细胞悬浮液的总量以及活性都有一定的要求,因此制备高质量的单细胞悬浮液成为实验成功的关键点。单细胞测序涉及的细胞类型多种多样,如肠、肺、PBMC、胚胎、神经、乳腺、干细胞等,而其中样本的处理消化亦是重中之重,样本前处理与后续的分析结果有着莫大的关联。如何在上机前得到最*的悬液呢?这里和大家分享一些制备*单细胞悬液的小tips。1、在样本采集过程中,建议采用无菌样品处理方式,包括使用不含核酸酶的试剂和耗材;2、实体组织需要先处理,传统组织处理方法有机械法,包括网搓法、研磨法。机械法一般适用样本类型为脾脏、淋巴结、胸腺;另外较温和的方法有酶解法(使用胰蛋白酶类、胶原酶、溶菌酶、弹性蛋白酶以及一些商业化包装的组合酶),适用样本类型有肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脊髓、脑、肠道、皮肤、肿瘤等。3、如果您使用的是10x Genomics相关仪器和平台,可以从官网查看10x Genomics不同样本单细胞悬液制备官方建议或者利用关键词查询与自己样本类型相同的已发表的单细胞测序文献。对于如何获得高质量的样品,10X公司建议在单细胞悬液制备过程中,细胞重悬的缓冲液选用无Ca2+、Mg2+和EDTA的1× PBS,并用0.04% non-acetylated BSA清洗两次(300rcf,5min),选择其他缓冲液或培养基可能会对结果产生不同程度的影响。4、细胞在处理过程受到外界环境影响,其基因表达谱可能会出现一些变化;有些细胞对环境极为敏感,可能会死亡裂解,造成RNA降解从而造成检测中的背景细胞升高,进而影响所获得的数据质量。实验过程中需要尽量避免细胞死亡,不断优化细胞处理条件,加快实验流程的进度,减小对细胞的影响。5、单细胞悬液制备过程中出现的细胞团、细胞碎片或纤维等杂质会增加微流体芯片的堵塞风险。如果存在细胞碎片和大团块,请将样品通过40 µm Flowmi 细胞过滤器,细胞悬液体积损失小。 图源:10x Genomics 的Protocol《 Fresh Frozen Human Peripheral Blood Mononuclear Cells for Single Cell RNA Sequencing》图源:《10x Genomics® Single Cell Protocols——Cell Preparation Guide》相关产品Bel-Art Flowmi 40微米 细胞过滤器,适用于1000微升移液管(50个/包)
  • 【研究应用分享】蛋白质分离纯化技术及具体步骤
    蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质,必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。 蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤——01 材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有:1. 机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。2. 渗透破碎法这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。3. 反复冻融法生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。4. 超声波法使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。5. 酶法如用溶菌酶破坏微生物细胞等。02 蛋白质的抽提通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。03 蛋白质粗制品的获得选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法:1. 等电点沉淀法不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。2. 盐析法不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。3. 有机溶剂沉淀法中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作,选择合适的有机溶剂浓度。04 样品的进一步分离纯化用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。05 蛋白质的分析测定通过物理或化学方法对蛋白质含量进行测定。蛋白质的分析纯化,不仅仅是选择合适的方法,必备的工具,例如微量均质器、干燥器、抗体保存盘等,也很重要。Bel-Art蛋白质分析纯化工具推荐本篇我们根据不同耗材在蛋白质分析纯化过程中的不同作用,分类为大家推荐几款合适的耗材。细胞裂解 热门优选 微量均质器-手持式货号:F65000-0000研磨组织和破碎细胞层析 热门优选 磁珠分离架货号:F19900-000分离结合在磁珠上的蛋白质以快速纯化透析热门优选 透析袋夹持器货号:F18237-0000测定热门优选贝塔盾货号:F24976-0001在进行C14分析时减少接触电泳热门优选 Spindrive&trade 轨道摇床平台货号:F37041-0001提供彻底、温和的凝胶混合,同时*限度地扩大实验室空间
  • 盒子替代色谱柱,制备色谱法的新选择
    如果您想鉴定复杂样品中可能有的多种分析成分,那么你对色谱柱的主要要求就是高分辨率。另一方面,如果你想将大量的感兴趣的蛋白质(如生物反应器中产生的基于蛋白质的生物制药)与不需要的化合物分离,那么你对色谱柱的主要需求是产量。  这就是为什么分析柱倾向于高而薄,而用于大规模分离分析物的制备柱则倾向于更宽,以允许高流速。但是,虽然分辨率对于制备色谱柱的重要性不如对分析柱那样重要,但它仍需要足够高的分辨率,才能将感兴趣的蛋白质与不需要的化合物清晰分离。  不幸的是,实现所需的分辨率有时可能是相当大的挑战,因为宽的直径允许感兴趣的蛋白质采取各种不同长度的路线通过色谱柱。这将导致蛋白质洗脱成宽带,可能与一些不需要的化合物重叠。  科学家已经开发了各种技术来提高制备色谱的分辨率。现在拉戈什(Raja Ghosh)和他在加拿大麦克马斯特大学(McMaster University)的同事们提出了一种完全不同的方法,其中包括完全废除色谱柱并用一个盒子替换它。  他们的想法是用制备色谱中使用的常规离子交换颗粒填充特制的长方形盒子,体积为5mL至50mL。样品和流动相从一端引入盒子的顶部,而被分离的分析物则在相对端流出盒子的底部。这种安排使盒子具有与相同体积的制备柱相似的通量,但感兴趣的蛋白质通过盒子的路径都是相似的长度。  这是因为蛋白质都需要沿着盒子向下移动相同的距离以达到远端的出口,从而提高分辨率。它们可以先向前然后向下,或先向下然后向前,或沿着任何变化路径迁移,但它们都行进相同的距离,并在窄带中同时洗脱。  这种新型色谱盒,称为长方体填充床装置,Ghosh和他的团队的对其进行了测试,试图用它分离三种蛋白质的混合物。为了使其具有挑战性,他们选择了三种具有相似等电点的蛋白质:核糖核酸酶A,细胞色素C和溶菌酶,这些都很难分离。事实上,传统的制备柱很难做到这一点,而立方体填充床装置将蛋白质分离成三个清晰的峰。  他们的立方体填充床装置,所测试的每种效率指标都超过了制备柱。例如,对于分辨率的测量,计算出他们的装置,当流速为每分钟0.5mL时,每单位床高度的理论塔板数为8636 / m,而制备柱的则为1480 / m。  所以,相当有意味的是,Ghosh和他的团队通过思考如何改进制备色谱的方法,却想出了一个实际上可以取代制备色谱的应用生物制药纯化的盒子。  原文请参阅:  Thinking inside the box:A novel alternative to preparative chromatography   Published: Apr 9, 2018   Author: Jon Evans   Channels: Ion Chromatography,separationsNOW.com  符斌供稿
  • 美国怀雅特技术公司参展2010 Pittcon并发布新产品
    (SANTA BARBARA, CALIFORNIA-March 1, 2010)美国怀雅特技术公司,世界领先的绝对大分子表征仪及其软件制造商,于2010年2月28日~3月1日在美国Orlando举办的Pittcon展会上推出两款新产品:MÖ BIUζ™ 大分子迁移率测定仪;Optilab T-rEX示差折射率测定仪。 关于MÖ BIUζ™ 大分子迁移率测定仪 MÖ BIUζ™ 大分子迁移率测定仪主要用于如脂质体、病毒粒子(VLPs)、抗体、蛋白质等生物大分子迁移率的测定。该仪器融入Wyatt多项创新专利技术,使得样品测定结果的精度、重复性得到极大保障。与传统的迁移率测定仪或zeta电位仪宽范围的样品测定不同,MÖ BIUζ™ 基于以激光为光源而专门针对于生物大分子迁移率表征。因其能快速、准确、可靠的测定大分子物质迁移率而在Pittcon展会上备受关注。 带电性是所有大分子物质非常重要的基本性质。在胶体悬浮液中,大分子所带电荷的多少以及粒子与界面间的相互作用是关系溶液稳定性的极为重要因素。对于众多生物大分子如蛋白质而言,分子静电间的相互作用直接影响分子构象和性能。由于直接测定界面间电位的方法几乎不可行。因此,利用电泳迁移率表征大分子带电荷性质的测定方法已被越来越多的人们接受。 此外,作为非破坏性检测方法,光散射法还因其全部采用物理学第一原则测定大分子迁移率而备受赞赏。然而,对蛋白质类生物大分子而言,由于其分子尺寸小(98%。此外,使用MÖ BIUζ™ 另一优势,如将2mg/mL溶菌酶或0.5 mg/mL牛血清蛋白测试,其灵敏度较市场上同类产品至少高出2倍。 不仅如此,您还可以选择WyattQELS动态光散射配件同步测定大分子平移扩散系数、流体力学半径以及迁移率。而进样方式您可以任意选择,如手动进样、自动进样、注射泵进样,甚至自动滴定方式。MÖ BIUζ™ 独有的先进智能化温控系统,为试验研究、产品监控提供极大便利性和可操作性。 关于Optilab T-rEX示差折射率测定仪 Optilab T-rEX示差折射率测定仪是美国怀雅特技术公司开发的新一代示差折射率型检测仪。与Optilab rEX相比,其内嵌2GHz处理器(提高~7倍);新一代激光光源,其能量高出近50倍;其独特的双温控制系统,使得温度系统控温能力大幅提高。毫不夸张的说,Optilab T-rEX是目前世界上灵敏度最高的示差折射率型检测仪。此外,其最高检测浓度高达:蛋白质180mg/mL,右旋糖酐220 mg/mL。 详情请登陆网站:www.wyatt.com;www.wyatt.com.cn 电话:010-82292806, 传真:010-82290337 E-Mail:info@wyatt.com.cn
  • CBIFS:过敏原及其检测方法研究进展
    仪器信息网讯 2012年3月27-28日,由北京食品学会及北京食品协会联合主办,太平洋国际展览有限公司承办的“第五届中国北京国际食品安全高峰论坛(CBIFS)”在中国国家会议中心召开 。本次高峰论坛旨在为食品行业及食品安全检测部门提供更加广泛的学习和交流机会,针对当前重要的食品安全热点难点问题展开深入探讨,发布最新的食品安全前端技术和应用解决方案。论坛吸引了800余名业内人士参加、60余家企业参展,仪器信息网作为合作媒体亦参加了本次会议。   在“食品检测的创新技术与产品”主题论坛报告中,中国检验检疫科学研究院农产品安全研究中心陈颖研究员以“过敏原及其检测方法研究进展”为主题做报告,现对其作概要报道,内容如下: 报告人:中国检验检疫科学研究院农产品安全研究中心主任 陈颖研究员 报告题目:过敏原及其检测方法研究进展   陈颖研究员以“吾之美食,汝之鸩毒”这句名言开篇,点出过敏原性食品安全不确定性的特点。进入21世纪以来,食物过敏性疾病的发病率明显上升,已成为影响人类健康最常见的全球性疾病。食品类的过敏原一般为蛋白质类物质,主要的过敏反应为呼吸系统、胃肠道系统、中枢神经系统及皮肤等不同形式的临床症状。   食物的种类成千上万,致敏性并不相同,约有90%的食品过敏是由花生、牛奶、蛋、鱼、甲壳类、坚果、大豆和谷物八类引起。报告中列举了几类食品的过敏蛋白如:1、牛乳中的α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白;2、蛋中的卵类粘蛋白、卵白蛋白、卵转铁蛋白和溶菌酶;3、鱼中的小清蛋白;4、甲壳类中的原肌球蛋白。   食物过敏原检测技术分为基于蛋白质的检测技术、基于核酸的检测技术和其他检测技术。由于基于核酸的检测技术直接检测致敏原基因而非致敏蛋白,故对致敏蛋白发生变化的产品的检测结果有误差。   陈颖研究员报告中详细介绍了目前其领导的团队采用不同技术对过敏原检测的情况:   1、ELISA方法检测。在对腰果的检测中,制备单克隆抗体,建立夹心ELISA检测方法,最低检测限可达18.25ng/mL。   2、多重PCR方法。可16种过敏原检测。   3、恒温扩增检测方法。建立的甲壳类过敏原交叉引物恒温扩增检测方法及研制的试纸条,反应速度快,成本与技术难度低,适于一线或基层单位使用。   4、实时荧光PCR检测方法。建立的芥末、芹菜、鱼虾和蟹等样品的实时荧光PCR检测方法,采用自行设计的引物、探针。该方法灵敏度高,检测限达10mg/kg。   5、可视薄膜生物传感器检测法。将PCR检测和基因芯片检测两种检测技术的优点有效的结合,将检测结果转变为肉眼可见的颜色反应,该方法具有快速、准确、高通量和高特异性等特点。   6、椭偏成像生物传感器检测法。与传统的检测方法比较,该方法具有无需标记、检测速度快、结果直观等优势。
  • 中国学者解读2012年诺贝尔化学奖
    10月10日,69岁的美国科学家罗伯特莱夫科维茨和57岁的布莱恩科比尔卡因进一步揭示了G蛋白偶联受体的内在工作机制,分享了2012年诺贝尔化学奖。   而18年前,G蛋白和G蛋白偶联受体(GPCRs)就曾令他们的发现者——两名美国科学家获得了诺贝尔生理学或医学奖。   看清G蛋白激活过程   莱夫科维茨从1968年便开始利用放射性碘来寻找细胞接受信号的物质,这种物质后来被称为“G蛋白偶联受体”。他找到了多种受体,并将其中的“β-肾上腺素受体”从细胞壁抽出。上世纪80年代,年轻的科比尔卡加入了莱夫科维茨团队。   2007年,科比尔卡首次用T4溶菌酶融合法解析了β-肾上腺素受体的结构,该方法后来成为获取G蛋白偶联受体三维结构的常规手段。2011年,他又在这个受体被激活并向细胞发送信号时获得了三维图像。   “在此之前,一直没有人了解G蛋白偶联受体究竟如何激活G蛋白。”清华大学生命科学学院院长施一公评价,“这是一项划时代的工作。”   中科院院士、同济大学校长裴钢指出,G蛋白偶联受体是细胞表面的信号接收器,是细胞生物学、分子药理学等学科里最基础的一类传导分子。同时,很大一部分药物都以该受体为作用靶点,激活机理研究将对未来药物研发有所助益。   早就被看好的研究   获奖者的名字被公布后,《中国科学报》记者拨通北京大学生命科学学院院长饶毅的电话,他称自己曾在今年4月就非常看好G蛋白偶联受体研究。他分析,诺贝尔化学奖委员会不时地肯定化学和生物交叉的工作。鉴于G蛋白偶联受体本身及其结构解析的重要性,他认为,对于该受体的结构生物学研究,几乎肯定会获得诺贝尔奖。   中科院生物物理所研究员王江云曾在与科比尔卡合作过的斯克利普斯研究所工作,他也在第一时间告诉《中国科学报》记者:“几个月来我一直向我的同事表示,G蛋白偶联受体研究非常有可能获得诺奖。”   今年4月,科比尔卡受聘清华大学医学院客座教授。当时,施一公曾给同事们写了一封邮件,在介绍完科比尔卡的工作后,他提到:“我个人认为,他今后5年之内很可能得诺贝尔奖。”   从他们身上学做真正的科学家   裴钢和山东大学医学院教授孙金鹏都曾在莱夫科维茨研究组里做过博士后,整个实验室都亲切地称莱夫科维茨为Bob。   “Bob是一个非常率真的科学家。”裴钢说,“争论时,整个走廊都能听到我们的声音,不过他从来不以老师自居。”孙金鹏则认为:“Bob拿奖是实至名归,他多年的努力进取和一丝不苟的科学态度终究得到了认可。”   施一公与科比尔卡则在两年前结识。“他是一个非常低调、非常认真的人,来清华的时间里,从早到晚都在实验室指导自己的博士后、博士生做实验。”   据裴钢介绍,近年来我国G蛋白偶联受体研究越来越多,但由于起步较晚,仍在努力追赶先进水平。“我们的物质条件已经很好,更需要文化和精神上的建设,应从他们身上学做真正的科学家,孜孜不倦、默默无闻地工作。”   此外,施一公还透露,科比尔卡的妻子田东山是一名出生于马来西亚的华裔,两人“夫妻档”配合默契。“他的妻子称得上是幕后英雄,管理实验室、组织人员等工作都由她承担。”
  • 岛津推出《蛋白质测序仪PPSQ在生物药N-末端氨基酸序列分析的应用》方案
    —抗体药、蛋白质药、N-末端甲硫氨酸缺失或焦谷氨酸环化封闭等—? 目前,在制药领域,生物药得到越来越多的关注。生物药是利用DNA重组、细胞融合、细胞培养等生物技术开发出的蛋白质药物、抗体药物等。几乎所有蛋白质合成都起始于N-末端,其序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着重要的影响力,因此蛋白质的序列分析对于生物药效果非常关键。 2015版《中国药典》三部人用重组DNA技术产品总论对生物药的生产及质量控制方面,,针对其蛋白质结构提出技术要求,应测定目标产品的氨基酸序列,并与其基因序列推断的理论氨基酸序列进行比较。因此,N-末端氨基酸序列分析是很多已上市生物药的年检项目,如重组人促红素注射液(CHO细胞) 、重组人粒细胞刺激因子注射液等。此外,国际法规中也有对于生物药N-末端氨基酸序列测定的要求。药品注册的国际协调组织颁布的指导法规ICH-Q6B规定,生物药进行申报时,必须提供N-末端氨基酸序列信息。《欧洲药典》中规定,生物仿制药申报也必须提供N-末端序列。 Edman降解法是蛋白质N-末端测序的常用方法,岛津公司的蛋白质测序仪(Protein Sequencer)PPSQ以Edman降解法为基础,将蛋白质从N-末端顺次切断进行序列分析。此方法具有直接测定、可靠性高的优势。近期,岛津推出新型的蛋白质测序仪PPSQ 51A/53,配备SPD-M30A高灵敏度检测器、软件满足FDA 21 CFR Part 11数据完整性的要求。PPSQ 51A/53梯度系统更是在等度系统基础上,提高检测灵敏度,适合微量样品的氨基酸序列分析。我们应用岛津PPSQ 51A/53A开发了单克隆抗体药、重组蛋白药的N-末端氨基酸序列分析方法,另外,也开发了具有特殊结构的生物药N-末端氨基酸序列分析方法,如甲硫氨酸缺失、焦谷氨酸环化封闭等样品,编写了《蛋白质测序仪PPSQ在生物药N-末端氨基酸序列分析的应用》文集:包括经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离轻链和重链,从而测定N-末端氨基酸序列的单克隆抗体药贝伐单抗和曲妥珠单抗等;含有特殊结构的如N-末端部分甲硫氨酸缺失的重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子注射液原液、N-末端焦谷氨酸环化封闭类单克隆抗体帕尼单抗、含有二硫键的溶菌酶和催产素;用自制的脱盐装置分析具有高浓度盐的蛋白质药物重组人促红素原液(CHO细胞)和重组人粒细胞刺激因子注射液。关于岛津 岛津企业管理(中国)有限公司是(株)岛津制作所于1999年100%出资,在中国设立的现地法人公司,在中国全境拥有13个分公司,事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心,并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站,已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念,始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务,为中国社会的进步贡献力量。
  • 日研究人员制成植物人工染色体有助开发新品种
    日研究人员制成植物人工染色体有助开发新品种 日本冈山大学资源植物ELISA试剂盒研究所教授村田稔率领的研究小组25日宣布,他们成功在植物细胞内人工制造出了带有遗传信息的染色体。这一成果将有助于开发新的作物品种。 ELISA试剂盒研究小组使用拟南芥,利用“自顶向下分析法”,通过操控细胞内原有的染色体,并进行改编,制作出了比通常染色体要小的环状人工染色体。即使是自花授粉的种子,也有40%以上继承了这种人工染色体。 ELISA试剂盒研究小组说,利用植物制作出能被下一代继承的人工染色体,这在世界上尚属首次。通过向这种染色体植入特定的基因,就可培育出能抗病虫和抗倒伏的新植物和作物品种。 村田稔说:“利用这种技术,还可以只在水稻生长期间,植入抗病虫和抗倒伏的基因。”Mouse Linker for activation of T cell,LAT ELISA Kit 小鼠T细胞活化连接蛋白(LAT)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse lipoprotein lipase,LPL ELISA Kit 小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse lipoprotein α,Lp-α ELISA Kit 小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA Kit 小鼠脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL ELISA Kit 小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse L-phenylalanine,LPA ELISA Kit 小鼠苯丙氨酸(LPA)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse L-Selectin ELISA Kit 小鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse Luteinizing Hormone-Releasing Hormone,LHRH ELISA Kit 小鼠黄体生成素释放激素(LHRH)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse luteotropic hormone,LH ELISA Kit 小鼠促黄体激素(LH)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse lymphocyte factor ELISA Kit 小鼠淋巴细胞因子ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 小鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse lymphotactin,Lptn/LTNELISA Kit 小鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse Lysozyme,LZM ELISA Kit 小鼠溶菌酶(LZM)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA Kit 小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse Macrophage Inflammatory Protein 1β,MIP-1β ELISA Kit 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA试剂盒 规格: 96T/48TMouse Macrophage Inflammatory Protein 1δ,MIP-1δ ELISA Kit 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA试剂盒 规格: 96T/48T
  • 河南研发“无线传输分体式PCR检测仪校准装置” 为战“疫”增添利器
    在感染性疾病的诊断方面PCR技术在感染性疾病中尤其适用于检测一些培养周期长或缺乏稳定可靠检测手段的病原体。PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象,可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。标本处理的基本要求是除去杂质,并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以破碎的细菌,可用溶菌酶加EDTA处理。所得到的粗制DNA,经酚、氯仿抽提纯化,再用乙醇沉淀后用作PCR反应模板。PCR检测仪是用于新冠病毒核酸检测的关键设备,核酸检测是根据病毒的基因序列配制出相对应的引物和探针,利用PCR检测仪对待测样本进行扩增。近日,河南计量院研制出无线传输分体式PCR检测仪校准装置,基于自行设计的多通道温度检测模块,应用无线传输技术实现数据采集分析,设计指标满足《JJF 1527-2015 聚合酶链反应分析仪校准规范》的要求。只需将该装置的检测模块置入待校准的PCR检测仪中,工作人员无需进入实验室内部,即可对仪器进行校准,不但能够节约PCR检测实验室的管理运行成本和宝贵的防护资源,还能极大降低计量人员本身的感染风险,具有较好的推广应用价值。 无线传输是利用无线技术进行数据传输的一种方式。无线传输和有线传输是对应的。随着无线技术的日益发展,无线传输技术应用越来越被各行各业所接受。无线图像传输作为一个特殊使用方式也逐渐被广大用户看好。其安装方便、灵活性强、性价比高等特性使得更多行业的监控系统采用无线传输方式,建立被监控点和监控中心之间的连接。无线传输分为:1、模拟微波传输就是把视频信号直接调制在微波的信道上(微波发射机,HD-630),通过天线(HD-1300LXB)发射出去,监控中心通过天线接收微波信号,然后再通过微波接收机解调出原来的视频信号。2、数字微波传输就是先把视频编码压缩(HD-6001D),然后通过数字微波(HD-9500)信道调制,再通过天线发射出去,接收端则相反,天线接收信号,微波解扩,视频解压缩,临了还原模拟的视频信号,也可微波解扩后通过电脑安装相应的解码软件,用电脑软解压视频,而且电脑还支持录像,回放,管理,云镜控制,报警控制等功能;存储服务器,配合磁盘阵列存储;这种监控方式图像有720*576、352*288或更高的的分辨率选择,通过解码的存储方式,视频有0.2-0.8秒左右的延时。数据采集分析过软硬件结合,可以记录、显示和分析众多生命科学相关信号,可以完全代替传统的纸带记录仪、绘图仪、XY绘图仪、示波器和电压计。把信号变成便于数字处理的形式,以减少数字处理的困难。无论计算机的容量和计算速度有多大,其处理的数据长度总是有限的,所以要把长时间的序列截断。在截断时,会引入一些误差,所以有时要对截取的数字序列加权,如有必要,还可用专门的程序进行数字滤波。然后把所得到的有限长的时间序列按照给定的程序进行运算。例如作时域中的概率统计、相关分析,频域中的频谱分析、功率谱分析、传递函数分析等。数据采集分析应用领域包括:血流动力学、离体组织灌流、离体器官、灌流、微血管张力测定系统、微循环血流测定(激光多普勒)、新陈代谢研究(运动生理学、心肺功能测定)、电生理系统(细胞内、细胞外、电压钳)、超声血流量测定、植入式生理信号(血压、生物电、神经干放电、体温等)无线遥测、心理学、清醒动物血氧饱和度测定、人体无创血压、心输出量测定。PCR检测仪是利用聚合酶链反应技术对特定DNA扩增的一种仪器设备,PCR技术的原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物,由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。PCR的三个反应步骤反复进行,使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA扩增量可用y=(1+X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数,X表示平均每次的扩增效率,n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为百分百,实际反应初期,靶序列DNA片段的增加呈指数形式,随着PCR产物的逐渐积累,被扩增的DNA片段不再呈指数增加,而进入线性增长期或静止期,即出现“停滞效应”,使平均效率达不到理论值。PCR扩增仪通常由热盖部件、热循环部件、传动部件、控制部件和电源部件等部分组成。被广泛运用于医学、生物学实验室中,例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制以及亲子鉴定等。PCR检测仪分类PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定量PCR仪四类。荧光定量PCR仪光学校准方法实时荧光定量PCR仪特异性更强,自动化程度更高,且有效地解决了PCR污染的问题,应用领域及应用量都不断增加。但其设计更为复杂,温度模块和光学系统设计同时影响其性能和实验准确性,为定量PCR仪校准带来了巨大挑战。采用生物试剂等方式对定量PCR仪荧光部分校准缺乏溯源性,无法分析误差来源,存在较大缺陷。采用Cyclertest 3D optical定量PCR仪光学校准系统对ABI 7500 Fast Real-Time定量PCR仪的温场部分和荧光系统进行了检测并对检测结果进行了分析,结果表明对温度模块和光学系统共同进行检测并分析相关性能够更科学全面地评估定量PCR仪性能,满足定量PCR仪校准需求。
  • 鲜奶检出β-内酰胺酶 长期进服易产生超级细菌
    继三聚氰胺之后,老百姓又要从牛奶行业里学习到一个全新的名词了--β-内酰胺酶。   日前,有网友在宁波的论坛里贴出一份"2012年宁波奶制品抽检不合格清单",此份清单实为"宁波市食品安全委员会办公室"《关于2012年宁波市乳制品评价性抽检结果的通报》。其中,有宁波牛奶、新希望、光明和涌优这4个牛奶品牌的标本检出大肠菌群超标或β-内酰胺酶。   那么β-内酰胺酶到底是什么东西?含有β-内酰胺酶的牛奶有什么危害?市民平时又如何做到健康饮用牛奶?   鲜奶检出β-内酰胺酶   去年,宁波市食安办、市食品药品监管局委托宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心对宁波市2012年下半年市场上销售的乳制品进行了评价性抽检。在《关于2012年宁波市乳制品评价性抽检结果的通报》中指出,全年共抽检鲜奶(巴氏杀菌乳)、酸奶、纯奶(超高温灭菌奶)、婴幼儿配方奶粉4个品种乳制品608批次,不合格63批次,合格率89.64%.4个品种中,酸奶、婴幼儿配方奶粉、纯奶的合格率均为100%.乳制品中的不合格样品均是鲜奶 共抽检鲜奶201批次,63批次不合格,合格率为68.66%.   《通报》中指出,鲜奶合格率较低,原因是部分样品检出大肠菌群超标和β-内酰胺酶阳性。63批次不合格鲜奶中,大肠菌群超标41批次、β-内酰胺酶阳性40批次。大肠菌群超标会引起呕吐、腹泻等症状,危害人体健康安全。而β-内酰胺酶被列入食品中可能违法添加的非食用物质名单,是不能在牛奶中添加的。   检测部门分析,造成鲜奶大肠菌群超标的可能原因包括:生乳在采集、贮存或运输过程中被污染 生产加工过程中消毒杀菌不严 运输、贮存、销售鲜奶过程中冷链断裂导致微生物繁殖。常温下乳制品很容易导致微生物生长,家庭订奶户取奶不及时造成冷链断裂是鲜奶大肠菌群超标的主要原因。   企业质疑检测过程   昨天,宁波牛奶集团在微博上发出声明,当时的抽查是在酷暑时对宁波市整个乳制品市场进行的,在抽检过程中,有可能脱离了2-6℃的保存温度条件而影响了产品的质量。这并不能代表公司2012年全年产品的整体质量。2012年,质监部门共对公司进行鲜奶出厂检验335批次,合格率100%.   针对此次抽检的β-内酰胺酶为阳性,宁波牛奶集团回应称一定为内源性,属于奶牛本身产奶过程带入的,"我们绝对不会添加β-内酰胺酶".   声明中分析,导致鲜奶β-内酰胺酶阳性的主要原因有两个,一个是内源性的即由奶牛体内的耐药菌株产生的 二是为降解牛乳中残留的抗生素而外源性加入的。对内源性β-内酰胺酶的监测方法和判定标准从2009年至今尚无国家标准,也无科学的检验鉴定方法,因此该指标只能作为参考指标,不能直接作为牛奶质量判定标准。而公司的奶源是100%自控化的,无任何中间贩卖环节,自己不会进行添加,那么只可能是内源性的。   杭州新希望双峰乳业有限公司赵总昨天告诉记者,目前还未收到宁波有关部门的通知,但对检测的过程和结果存在疑义。他表示,针对大肠菌群超标的结果,在检测报告的分析中就指出有可能是运输、销售等过程中冷链断裂的原因。以往的现场抽查都是要用冰块保证牛奶的温度,再送到抽检中心进行检测。"最重要的冷链不能断。"赵总说,2012年,公司对大肠菌群的检测上万多次,都是符合标准的。β-内酰胺酶则是奶牛自己产生的,而且去年,公司对β-内酰胺酶也自检过上千次,都未呈现阳性。赵总表示,由于目前未收到任何通知,公司还是正常进行乳制品的生产。   光明乳业股份有限公司华东区帅经理则表示,对有关部门的抽检从头到尾不清楚,目前总部准备对此事进行核实。   β-内酰胺酶可分解抗生素   在这次检测报告中,大肠菌群超标可以用冷链断裂来解释,而β-内酰胺酶从何而来却没有定论。   浙江大学生物化学研究所所长李永泉告诉记者,β-内酰胺酶是一种细菌所特有的分解抗生素的酶,这种酶能分解β-内酰胺类的抗生素,比如青霉素、头孢等都属于β-内酰胺类的抗生素。而β-内酰胺类抗生素是在牛乳生产中应用最广泛的抗生素,用于治疗牛乳腺炎和其他细菌感染性疾病。因此,牛奶中检测出β-内酰胺酶有可能是奶牛体内自身产生的,也有可能是牛奶在加工过程中感染了一些细菌所产生的。   另一种可能就是在加工过程中,人为加入β-内酰胺酶,因为它能分解牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素,为抗生素打掩护。《食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留检验》标准中,对青霉素、链霉素、庆大霉素等抗生素都设定了标准。李永泉说,β-内酰胺酶可以从细菌中进行提炼,这一技术并不复杂。记者在某电子商务网站上看到,有企业在销售β-内酰胺酶,价格在158元到500元不等。   杭州市畜牧兽医局的有关负责人则表示,在对乳制品进行检测时,并未对β-内酰胺酶进行检测,而是会对部分抗生素进行检测。该负责人表示,一些企业为了增加牛奶中蛋白的含量就添加三聚氰胺,当然也有为了减少抗生素而添加β-内酰胺酶的可能。   β-内酰胺酶存在一定危害   记者查阅相关资料,发现《医药前沿》2012年第17期上有一篇《细菌的耐药性与超广谱β-内酰胺酶》的论文。论文作者于源认为:"自1929年发现青霉素,1940年将其研制成功并用于临床至今,β-内酰胺类抗生素经历了半个多世纪的发展,为治疗人类感染性疾病起了重要作用。目前,用于临床的各类抗生素近200种,其中仅β-内酰胺类抗生素就达130多种。然而随着抗生素的应用,细菌的耐药性随之产生,细菌产生耐药性的原因很多,如产生各种各样的酶,水解、钝化相应抗生素 细胞壁通透性下降或排泄力提高 抗生素作用的靶位发生改变等等。但是β-内酰胺酶仍是细菌对抗生素耐药的主要原因。"   昨天记者还就此采访了浙江大学药理毒理与生化药学研究所所长楼宜嘉,她告诉记者:"微量的β-内酰胺酶对人体不会产生明显的危害。β-内酰胺酶的本质是一种蛋白,摄入体内之后,会被分解,不会长期存在体内。"   李永泉则认为,在偶然的情况下,还是会对人体产生危害的。"假设,病人在服用β-内酰胺类抗生素后,再喝下含有β-内酰胺酶的牛奶,那么抗生素的作用就会减弱,从而影响疾病的治疗。"时间久了,临床上将无药可用,即产生所谓的超级细菌。
  • 溶媒脱气仪和传统脱气仪的对比
    溶媒脱气仪和传统脱气仪的对比 在做溶出试验时,溶出介质中如果含有溶解的空气,在测定样品时,样品无论是片剂、胶囊的粉末或颗粒都具有孔隙率,孔隙中的空气就是气化中心,溶解的空气会在这些气化中心大量析出,限制药物的溶出和水分进入片剂、颗粒的内部,大幅度降低溶出度,从而影响整个溶出过程。所以必须对溶出介质进行脱气。那么传统脱气方式和溶媒脱气仪的脱气方式有什么区别呢?传统煮沸的脱气方式1操作复杂,需要多人配合。体积大,移动困难。储液罐体积大,移动困难,功能单一。2无法预先配置处理对象只能处理水先对水进行脱气,配置溶出介质后加入溶出杯中时容易导致溶氧值上升,影响实验数据的准确性。3处理溶出介质的体积受储液罐体积限定4处理溶出介质的体积受储液罐体积限定,而且储液罐一般均为密封仓,易生菌,清洗困难。在保质期内,厂家负责免费清洗。超过保质期,清洗以及储液罐的更 换都需高昂的费用。5无法预加热需在对溶出介质脱气时进行加热,等待时间长,降低脱气效率。6无定量供液功能需人工手动完成溶出介质的加注 工作,自动化程度低。7无法对供液进行定量分配1设计紧凑:通过手柄供液,方便对溶出杯直接加注2操作简便:液晶屏显示和触控操作,交互界面简单直观。同时还支持手柄直接操作和控制,单人即可独立完成溶出介质脱气和加注工作。3在线加热:溶出介质在脱气前进行预加热(可达45°C),提高了脱气效率。同时节约了溶出介质在溶出仪中的加热等待时间。4高精度供液:溶出介质加注体积精度为设定体积的±1%(250~1000ml)。5可变的分配体积:进行系统校准后,可在250ml到1000ml范围内进行快速设定。6可处理多种溶出介质:溶出试验常用的水、盐酸溶液、磷酸盐缓冲溶液溶出介质均可进行脱气。7可变的温度设定:温度调节范围为室温到45°C。8多杯供液:在1000ml体积下大杯数可达14杯9溶出介质处理能力:单次15L 综上可以看出,溶媒脱气仪对比传统的脱气方式优势明显。可以多种溶出介质进行脱气,操作简便,有预约功能,可多杯定量供液,是实验室药品研究的更明智的选择。
  • 溶出仪机械验证——六姐妹,齐上阵
    最近有很多同学来跟小编咨询机械验证工具包,看来大家的溶出仪,六个月期限都要到了呢。那小编今天就跟大家聊聊,溶出仪机械验证工具包产品和使用方法。 小伙伴们看这密密麻麻的图,影响溶出度结果的,有辣么辣么多因素。如果我们溶出度仪都已经不符合要求了,那费了九牛二虎之力控制好了其他因素,也不可能测出准确的结果。所以指导原则要求我们每6个月就要进行一次机械验证,是很有必要滴~ 对溶出仪进行机械验证,不仅是为保证体外溶出试验数据的准确性和重现性,确保溶出度方法开发、转移,样品检测中的一致性,也是药品一致性评价的法规要求。机械验证工具包 小编手上,有两款机械验证工具包,分别是这样的: (标准款)和这样的: (全能款) 标准款能满足市面上绝大多数溶出仪的要求,小编就重点介绍一下这款。 下面有请一号选手:数显倾角仪这身躯,一看就是稳稳的,不管是横摆,还是竖摆,都准的很。测量参数有溶出度仪水平度、篮(桨)轴垂直度、溶出杯垂直度。溶出度仪水平度 :在溶出杯的水平面板上从两个垂直方向上测量,两次测量的数值均不得超出1°。篮(桨)轴垂直度:紧贴轴测量垂直度,再沿轴旋转90°测量,每根轴两次测量数值不得超出90.0°±0.5°。溶出杯垂直度:沿溶出杯内壁(避免触及溶出杯底部圆弧部分)测量垂直度,再沿内壁旋转90°测量,每个溶出杯两次测量的数值均不得超出90.0°±1.0°。 二号选手:同轴度测量仪使用说明书:通过在溶出杯圆柱体内的篮(桨)轴上下各取一个点,以篮(桨)轴为中心旋转一周,测量篮(桨)轴与溶出杯内壁距离的变化,来表征溶出杯垂直轴与篮(桨)轴的偏离。适用的溶出杯直径:96~106mm。 三号选手:摆度仪摆度仪由三部分组成,固定脚、支架和百分表。轴摆动应在篮(桨叶)上方约20mm处测量,篮(桨)轴以每分钟50转旋转时,连续测量15秒。篮摆动应在篮下缘处测量,篮轴以每分钟50转旋转时,连续测量15秒。 四号选手:深度测量仪测量每个溶出杯内篮(桨)下缘与溶出杯底部的距离,均应25mm±2mm。 五号选手:转速表将篮(桨)轴的转速设定在每分钟50(100)转,连续记录60秒,篮(桨)轴的转速均应在50(100)±4%转范围内。 最后一位选手了,都等着急了,让我们欢迎数显温度计。 使用方法:设定溶出度仪的水浴温度,取规定体积的水,置各溶出杯中,待温度恒定后,测量各溶出杯内溶出介质的温度,均应为37℃±0.5℃。 小编是个雨露均沾的人,这里也要给全能款一点名分,全能款的同轴度,深度和摆度测量仪器有所不同。 同轴度测量仪 摆度仪 深度测量仪全能款适用于天大天发RC8MD等翻盖式的溶出仪。同时,我们也可以提供上门机械验证服务、上门培训服务和代检定服务。
  • 迅数菌落仪荣膺国产好仪器
    在刚刚结束的第四届国产好仪器评选活动中,迅数科技Icount33型全自动菌落计数仪成功入选生命科学仪器品类。 迅数icount33型全自动菌落计数仪 国产好仪器活动由权威媒体仪器信息网主办,本届活动本着“仪器好不好,用户说了算,用户说好才是真的好”的宗旨,经过历时两个多月的用户走访调研,对分析仪器、物性测试仪器、实验室常用设备和生命科学仪器四大品类的优秀国产仪器进行评选。 国产好仪器代表着当今中国科学仪器的“顶级殿堂”。此次斩获殊荣充分显示和说明了迅数品牌的公信力与产品价值,既是对迅数科研团队多年心血凝结和辛苦付出的最好褒奖与最佳赞许,也是广大用户和业界人士对迅数产品质量与服务高度认可的综合体现。 迅数科技作为国内领先的微生物仪器生产企业,持续推动和引领全自动菌落计数仪相关技术的改进与革新。迅数全自动菌落计数仪由iCount、Czone、Supcre、HD四大系列组成,用户遍及全国各省区和直辖市,覆盖食品、药品、日化、科研、教育、医疗、疾控、检测等诸多领域。 荣誉已成既往,未来值得期许。国产仪器腾飞任重而道远。迅数科技将继续毫无保留、不遗余力地研发创新,制造好的产品,把“客户使用便捷、使用安全、使用满意”的原则放在首位,一以贯之,在追求“质量服务最好中国仪器”的道路上栉风沐雨、砥砺前行,助力国产仪器展翅高飞。
  • 新型高效液相色谱手性固定相可高效分离手性分子
    p style=" line-height: 1.5em " & nbsp & nbsp  化学界中,有一大类分子存在手性异构体,它们就像左右手,虽然看上去一模一样,但完全不能重叠,这类分子被称为“手性分子”。 /p p style=" line-height: 1.5em "   一些药物中的手性分子在生物活性、代谢过程和毒性等方面存在显著差别,有的差异甚至如“治病”和“致病”这样,是天壤之别。因此,如何更为经济、高效、便捷地将手性分子的“左右手”分开,获取其中有益部分,成为化学界竞相攻关的课题。 /p p style=" text-align: center line-height: 1.5em " img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/e33f45e4-27e0-4e3c-ae08-784ed71a581e.jpg" title=" 20181119203959326.jpg" alt=" 20181119203959326.jpg" / /p p style=" text-align: center line-height: 1.5em " 生物分子COF 1作为手性固定相用于手性拆分(南开大学供图) /p p style=" line-height: 1.5em "   南开大学药学院研究员陈瑶课题组与该校化学学院教授张振杰、美国南佛罗利达大学教授马胜前合作,利用生物分子诱导的策略设计合成了一类手性共价有机框架材料,并将其成功应用于多种药物、氨基酸等小分子的手性分离。该材料具有造价低、效率高、普适性强等特点,具有完全自主知识产权,作为新型“分手”利器,它将大幅降低手性药物的生产成本。相关研究结果日前在线发表于《德国应用化学》。 /p p style=" line-height: 1.5em "   液相色谱技术是获取手性分子单一构型对映体的重要手段之一,具有高手性分离性能的手性固定相是这一技术的关键。含有手性分子的混合物流经分离柱时,由于作用力大小不同,不同的异构体分别在不同的时间流出,进而实现手性分离的目标。 /p p style=" line-height: 1.5em "   “简单来说,液相色谱仪中的分离柱就像一个隧道。外观、型号看起来完全一样的汽车一起驶入,交警允许有牌照的汽车可以顺利地快速通过,没有牌照的就会因为被交警调查而落后通过。这样,隧道出口先出现的都是有牌照的汽车,后出现的都是没有牌照的汽车。”陈瑶说,这其中最关键的部分就是“交警”,也就是“手性固定相”,需要识别能力强、稳定且高效。 /p p style=" line-height: 1.5em "   为创造高效的新型手性固定相,陈瑶课题组将一系列生物分子(溶菌酶、三肽、氨基酸)引入到共价有机框架材料(COFs)材料中,非手性COFs通过继承生物分子的手性特征从而变成手性COFs,进而可应用于手性分子的拆分。 /p p style=" line-height: 1.5em "   陈瑶表示,研究结果发现,通过新策略得到的BiomoleculeÌ COF 1手性固定相性能明显优于传统吸附法固定生物分子得到的手性固定相性能。“隧道中,高效、敬业的‘交警’—— 一种新型的高效液相色谱手性固定相被我们合成出来了。” /p p style=" line-height: 1.5em "   进一步研究发现,COF1材料作为手性固定相具有优异的手性分离效果,可用于正相和反相等多种分离模式,分离度Rs均达到1.3以上。连续使用2个月,反复进样120余次后,该材料仍具有和初始状态一样的分离效果。 /p p style=" line-height: 1.5em "   “这一研究为发展高效、耐用型的手性固定相,及拓宽共价有机框架材料在手性分离、手性催化方面的应用提供了巨大的潜力。”陈瑶介绍,新材料具有完全自主知识产权,它的应用可大幅降低分离柱的造价,打破进口依赖,也将大大降低手性药物的生产成本。 /p p style=" line-height: 1.5em "   论文链接:https://doi.org/10.1002/anie.201810571 /p p br/ /p
  • 关于成立《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃 希氏菌酶底物法水质自动分析仪》团体标准起草工作组的通知
    p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 12月24日,中国仪器仪表行业协会官网发布关于成立《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪》团体标准起草工作组的通知。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202012/uepic/e78d99c1-dbec-4bcb-8492-91f5fba8d214.jpg" title=" 企业微信截图_20201225104600.jpg" alt=" 企业微信截图_20201225104600.jpg" / /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202012/uepic/18138437-6b45-4d90-87a8-ec28a2cba009.jpg" title=" 通知.jpg" alt=" 通知.jpg" / /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 各有关单位: /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 根据《关于& lt 菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪& gt 团体标准项目建议书的批复》(中仪协[2019] 017号),《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪》项目已经列入中国仪器仪表行业协会的团体标准制定计划。该团体标准由中国仪器仪表行业协会归口管理,青岛佳明测控科技股份有限公司牵头起草。主要参与单位有吉林市光大分析技术有限责任公司等。现征集参与标准起草单位并成立标准起草工作组,请有关单位指派熟悉相关标准内容的技术人员参加,报名表(见附件)签字盖章后于2020年12月30日前扫描电子版发送至中国仪器仪表行业协会。 !--菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪-- /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 联系人:马雅娟 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 电话:13611013933 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 地址:北京市西城区百万庄大街16号1号楼6层 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 电子邮箱:mayj@cima.org.cn /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 附件: /p p style=" line-height: 16px " img style=" vertical-align: middle margin-right: 2px " src=" /admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_doc.gif" / a style=" font-size:12px color:#0066cc " href=" https://img1.17img.cn/17img/files/202012/attachment/ce9bdb3e-7cf9-4497-a3c3-3a4140fe9054.doc" title=" 《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪》起草工作组报名表.doc.doc" 《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪》起草工作组报名表.doc.doc /a /p p style=" line-height: 16px " img style=" vertical-align: middle margin-right: 2px " src=" /admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif" / a style=" font-size:12px color:#0066cc " href=" https://img1.17img.cn/17img/files/202012/attachment/d365221d-896f-4078-b98f-c6d531851c2a.pdf" title=" 关于成立团体标准起草工作组的通知.pdf.pdf" 关于成立团体标准起草工作组的通知.pdf.pdf /a /p
  • RapiGest SF试剂:促进溶液中蛋白酶解的有利工具
    Ying Qing Yu与Martin Gilar 美国马萨诸塞州米尔福德沃特世公司 简介 本应用纪要中,我们介绍了沃特世专利RapiGest&trade SF试剂的物理化学性质及其应用领域。2002年,我们首次推出RapiGest SF,这一创新产品是帮助酶消解的有利工具,可促进溶液中蛋白的消解,它能够改善样品制备过程中蛋白的溶解度。 RapiGest SF提高酶解速率与完全程度的机理详见图1。温和的蛋白变性可打开蛋白结构并暴露酶切位点,以供酶切。在RapiGest SF溶液中,酶对变性的耐受性优于普通蛋白,并能保持活性。在加入酶之前高温加热RapiGest SF溶液可使球蛋白更为完全变性,之后需将酶与样品一起进行37 ° C的孵育。 图1 蛋白底物在RapiGest SF溶液中变性􀉼 之后对蛋白酶切更为敏感 超过200多家行业内杂志引用了使用RapiGest SF进行样品溶解的案例,大部分为蛋白组学的应用。最近,许多制药实验室使用RapiGest SF用于蛋白药物的确证。因为酶消化的速度的提高并在LC、MS分析前极易清除,RapiGest SF已被多个应用领域广泛接受,其中包括高级序列研究的LC/UV/MS蛋白药物的肽图分析。 讨论 什么是RapiGest SF? RapiGest SF是酸性不稳定表面活性剂,在酸性条件下极易水解。1这种独特的性质,在需要的时候,可用于从溶液中清除表面活性剂。RapiGest SF的结构及其水解副产物见图2。酸性不稳定的性质可在pH2条件下,45分钟内达到完全降解。 该表面活性剂可降解为两个产物:dodeca-2-one和3-(2,3-二羟基丙基)丙磺酸钠。前者与水不能互溶,可通过离心清除。后者在水溶液中溶解度很高,而在反相LC模式下不保留。酶消解后的水溶液可直接进行HPLC、LC/MS或MALDI-TOF MS进行分析。 消解后的清除 样品分析前无需额外去清除表面活性剂(如透析)。在分析前,酶消解后通常经过酸(如甲酸、三氟乙酸(TFA)或盐酸(HCl))的酸化,降解RapiGest SF。建议降解条件pH &le 2。 胰蛋白酶消解的兼容性 胰蛋白酶是最常见的蛋白水解酶,可用于肽图分析和蛋白组学的应用。我们研究了在添加RapiGest SF的情况下胰蛋白酶的活性作用,并与文献中最常见的变性剂的作用做了对比。本检测基于胰蛋白酶诱导N-&alpha -苯甲酰-L-精氨酸乙基乙酯(BAEE)在50 mM重碳酸胺(pH 7.9)中的室温水解。胰蛋白酶活性的变化通过UV 253 nm下测量BAEE水解率进行计算。在选择的变性溶液中,胰蛋白酶活性与对照样品进行对比(非变性剂)。结果见于表1。 表1中的数据说明低浓度下(0.1%) RapiGest SF不抑制胰蛋白酶的活性。这与结构上类似的表面活性剂SDS不同,SDS是很强的变性剂,可会使胰蛋白酶失活。尿素、乙腈或盐酸胍也是胰蛋白酶消化的变性剂。但是乙腈是强洗脱剂会干扰消解样品进行反相LC分析。正如我们所知,尿素可使蛋白共价修饰,盐酸胍也和SDS一样可以使酶失活。 本实验说明蛋白酶的活性受到蛋白溶液中所用变性剂的影响。RapiGest SF在从低到高的浓度下均不改变酶活性,因此,最佳的蛋白消解条件是无需过量酶即可达到酶解的结果。 快速蛋白消解 对蛋白酶解存在抗性的蛋白使用RapiGest SF试剂,可在数分钟内消解完全。完全消解球蛋白、马肌红蛋白只需要5分钟内即可完成。该试剂辅助的消解结果与对照见图3。由于肌红蛋白是球蛋白,众所周知,若没有表面活性剂将难以消解。在对照反应中,与胰蛋白酶孵育9小时后只有少量的蛋白可以消化。使用了RapiGest SF试剂,总体的消解的效率显著提升。 在蛋白药物肽图中的序列覆盖范围更大 RapiGest SF在蛋白组学的样品前处理中广泛使用,是有效的蛋白溶解变性剂。最近越来越多的生物制药实验室在肽图分析中采用了RapiGest SF。一些发表的论文记录了使用RapiGest SF进行蛋白药物消解的优势。4,5经报导的RapiGest SF浓度范围为0.05 -1%,取决于蛋白疏水性与浓度。 我们发现浓度范围为0.05 -1%的RapiGest SF足以使各种大小的蛋白变性,高浓度RapiGest SF适合全细胞蛋白提取的实验。 单抗(mAbs)肽图分析一直以来都因为难以消解这些大疏水蛋白而难以实现。肽图分析的目的是确认蛋白序列并发现所有存在后翻译修饰(PTMs)的蛋白。图4举例说明了RapiGest SF辅助的人单抗消解的实例。样品制备与分析的参数以UPLC® 和四级杆Tof质谱分析的参数已列表作为指导。 图4显示实验中总序列覆盖率为98%。数据分析通过BiopharmaLynx&trade v.1.2软件得到。高序列覆盖率(98%)说明单抗完全消解。LC/MS分析中没有发现错误酶切的多肽或完整未被酶切的蛋白。剩下的2%未确认的序列为少数二个氨基酸的肽或单个氨基酸(R或K),而无法在反相柱上保留。 样品制备 人单抗样品(10 &mu L, 21 mg/mL)在含有0.1% (w/v) RapiGest SF 的50 &mu L 50 mM重碳酸铵中溶解。将2 &mu L 0.1 M的二流苏糖醇(DTT)加入样品,样品在50 ° C加热30分钟,加入4 &mu L 0.1 M的碘代乙酰胺,在样品冷却至室温后样品在黑暗中静至40分钟。 样品中加入8 &mu g胰蛋白酶(胰蛋白酶浓度= 1 &mu g/&mu L),样品在37 ° C孵育过夜。消解样品与1%甲酸与10%乙腈混合(1:1,v:v)。用Milli-Q水(Millipore)稀释至5 pmol/&mu L后进行LC/MS分析。 LC 条件 LC 系统 沃特世 ACQUITY UPLC® 系统 色谱柱 ACQUITY UPLC BEH 300 C18 肽分离专用柱, 2.1 x 100mm (P/N = 186003686) 柱温 40 ° C样品进样 2 &mu L (10 pmol) 溶液A 0.1% 甲酸水溶液 溶液B 0.1% 甲酸乙腈溶液 流速 200 &mu L/min 梯度 0-2分钟:2%B 2 &ndash 92分钟:2 -35% B 92 -102分钟:35 - 50% B 102.1 -105 分钟:90% B 105.1-110分钟:2% B MS条件 MS系统 沃特世SYNAPT&trade MS (V型) 毛细管电压 3.2 kV 源温度 120 ° C 去溶剂温度 350 ° C 去溶剂气 700 L/hr MS 扫描速率 1 秒/次 锁定质量通道 100 fmol/&mu L Glu-Fib多肽(m/z 785.8426, z = 2),流速20 &mu L/min 与其他的蛋白酶合用 我们测试了RapiGest SF与多种蛋白酶的适配性,如Asp-N, Lys-C与Glu-C。在酶解前使用RapiGest SF变性蛋白获得了有效的消解结果。 蛋白去糖基化的用途 RapiGest SF也用于测试其它酶,如PNGase F,该酶用于酶切糖蛋白N-连接的糖基。2图6说明了去糖基化鸡蛋卵清蛋白。在RapiGest SF介质中PNGase F消解2小时后观察到了完全的去糖基化反应。 结论  RapiGest SF促进了蛋白酶解的速度与完全程度,能够得到蛋白药物序列覆盖率很高的肽图分析。  RapiGest SF是适用于蛋白组学、糖蛋白与生物制药应用的领域  几乎无需消解后样品处理,简单样品酸化,足以从溶液中去除RapiGest SF。多种情况下LC/MS分析前只需简单稀释。  RapiGest SF简化了样品制备方法,可提高分析通量;使用该方法提高实验室工作效率并提高数据质量。 参考文献 1. Yu YQ, Gilar M, Lee PJ, Bouvier ES, Gebler JC. Enzyme-friendly, mass spectrom- etry-compatible surfactant for in-solution enzymatic digestion of proteins. Anal. Chem. 2003 75: 6023-6028. 2. Yu YQ, Gilar M, Lee PJ, Bouvier ES, Gebler JC, A complete peptide mapping of membrane proteins: a novel surfactant aiding the enzymatic digestion of bacteriorhodopsin. Rapid Commun.Mass Spectrom. 2004 18: 711-715. 3. Yu YQ, Gilar M, Kaska J, Gebler JC. A rapid sample preparation method for mass spectrometry characterization of N-linked glycans. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2005 19: 2331-2336. 4. Bailey MJ, Hooker AD, Adams CS, Zhang S, James DC. A platform for high- throughtput molecular characterization of recombinant monoclonal antibodies, J. Chrom. B. 2005 826: 177-187. 5. Huang HZ, NicholsA, Liu DJ. Direct identification and quantification of aspartyl succinimide in an IgG2 mAb by RapiGest SF assisted digestion. Anal. Chem. 2009 81 (4): 1686-1692.
  • “嗜血”的质谱——关于流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的鉴定问题
    p   卫生部临检中心组织的2018年第一次临床微生物室间质评已经结束,但关于流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的鉴定问题,在微信朋友圈里谈得正热烈 (见文《溶血 or 流感?傻傻分不清?》)[1]。主要是因为在这次质评中,生化鉴定仪和有些品牌的质谱仪的鉴定结果出错了。令小布自豪的是,布鲁克MALDI Biotyper质谱的鉴定结果与标准答案完全相符!所以小布在这里来一段点评。 /p p   流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌虽然同属,但属于两个不同的种,致病性和临床意义也大不相同,前者是上呼吸道感染的常见致病菌,而后者是上呼吸道的正常定植菌。小布认为要认真、仔细地把它们区分开,千万不要混淆! /p p   可是这两种菌的亲缘关系很近,用传统的形态学和生化方法难以区分。虽然产荚膜的流感嗜血杆菌可以通过荚膜肿胀实验区别于溶血嗜血杆菌,但有些流感嗜血杆菌是不产荚膜的,通常被认为是无法分型的。同样,虽然有的溶血嗜血杆菌能够通过卫星试验观察到溶血环,但不是所有的溶血嗜血杆菌都能观察到明显的溶血环。 /p p   难道就没有好办法了吗?当然不是! /p p    span style=" color: rgb(31, 73, 125) " strong 质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的好方法 /strong /span /p p   早在2013年中国CDC的研究人员就通过质谱图的聚类分析,发现质谱可以把流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌清楚地分成两类,甚至可以把不同地区来源的菌株进一步细分(见图1)[2]。 /p p style=" text-align: center" strong img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/dfbc448c-6829-4363-bbc8-eb80e5161d6e.jpg" title=" 1.jpg" width=" 450" height=" 409" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 409px " / /strong /p p strong   ▲图1. 流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的聚类分析树状图(MALDI Biotyper结果) /strong /p p   2014年荷兰公共卫生区域实验室、荷兰医学中心与布鲁克微生物研发中心共同发表了MALDI Biotyper能够正确鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的文章 [2],专家们通过分析不同来源的277个菌株,发现质谱法与测序法鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的结果几乎完全一致(见表1)。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/5e7cf664-5cee-4464-b1b3-ac63e6d76a51.jpg" title=" 2.jpg" / /p p    strong ▼表1.流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的MALDI Biotyper质谱法与测序法鉴定结果比较 /strong /p p   另外,布鲁克公司在美国FDA注册进行临床试验的结果显示:通过对74个流感嗜血杆菌和31个溶血嗜血杆菌的检测MALDI Biotyper质谱法鉴定100%正确!(结果摘自布鲁克公司提交美国FDA的报告) /p p   可见,质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌可以信赖的方法!有些老师不免心生疑问:既然布鲁克质谱的鉴定结果都是正确的,那为什么其它品牌的质谱鉴定错了呢? /p p    strong span style=" color: rgb(31, 73, 125) " 质谱法的数据库和鉴定结果的算法非常重要 /span /strong /p p   原来呀,质谱鉴定微生物时,需要通过软件拿采集到的样品“蛋白指纹图”到数据库里进行逐个比对,因此,数据库建立与比对时所采用的理念与算法,以及数据库的容量,是影响鉴定结果非常重要的因素。 /p p   布鲁克MALDI Biotyper的建库理念是以菌株为单位,数据库中每个条目都是一个独立的菌株。它的比对算法是采用指纹识别中的“模式识别”算法,就是把样品的“蛋白指纹图”与数据库中所有菌株的“蛋白指纹图”快速自动地进行逐个图逐个峰的比较,看看每对比对的“蛋白指纹图”之间有哪些峰是匹配的,哪些峰是不匹配的,以及匹配的谱峰之间相对强度的相关性,从而得到一个综合的匹配分数,并根据分数值告诉我们鉴定的可信程度。 /p p   MALDI Biotyper的算法看上去通俗、简单,正可谓“大道至简”吧,不仅非常实用!而且最大程度上避免了误判!就像警察通过指纹比对来识别罪犯一样,只要数据库里有罪犯的指纹,它就能正确地识别出罪犯 即使数据库里没有罪犯的指纹,它也不会找错,只是告诉我们当前数据库里没有匹配的指纹,只要扩大搜索数据库的范围,定会让罪犯无以循形,不会造成冤假错案! /p p   有些老师可能会问:我们是做菌种鉴定,MALDI Biotyper的数据库为什么不以菌种为单位,而是以菌株为单位建立的呢?难道它能鉴定到菌株吗? /p p   大家知道,微生物种类繁多,每种微生物又包含丰富多样的不同菌株,而同一菌种内不同菌株之间的差异是天然存在的,并和微生物的种类有关,有的种内差异大,有的种内差异小。所以,布鲁克决定在菌株水平上建库,并在选择每个菌种的建库菌株时,尽可能包含差异大的菌株,而剔除差异小的菌株。MALDI Biotyper在菌株水平建库,具有以下优势: /p p    span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 给代表性菌株预留了充分的覆盖范围 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) "   避免了数据库不必要的冗余 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) "   容易实现数据库的扩充和更新 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) "   能快速适应分类学的改变 /span /p p   充分发挥了质谱技术分辨能力远远高于传统方法(如生 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " /span 化方法)的特点,不丢失种水平之内菌株之间的差异。 /p p   正是由于上述优势,美国CDC、加拿大国家微生物实验室和美国NIH等多家机构也在采用布鲁克的仪器和理念建立数据库并对外开放。 /p p   通过以上对布鲁克MALDI Biotyper质谱的数据库与软件算法的简单介绍,相信各位老师就能理解为什么这次卫生部的质评中,布鲁克质谱的鉴定结果是正确的,也就很好理解为什么美国FDA批准Bruker MALDI Biotyper CA系统作为首个鉴定新型致病菌耳念珠菌(C. auris) 的新方法了[4-6]。 /p p   参考文献 /p p   1. 溶血 or 流感?傻傻分不清? /p p   2. B. Q. Zhu, D Xiao et al. MALDI-TOF MS Distinctly Differentiates Nontypable Haemophilus influenzae from Haemophilus haemolyticus.PLoS One. 2013 8(2): e56139 /p p   3. J. P. Bruin, M. Kostrzewa et al. Identification of Haemophilus influenzae and Haemophilus haemolyticus by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2014, 33:279–284 /p p   4. https://www.fda.gov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm605336.htm /p p   5. FDA首次批准质谱方法鉴定新型致病菌耳念珠菌 (Candida auris) /p p   6. “布”下天罗地网,防止“耳念”侵袭 /p
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