人体血浆

【作者】 赵玉婷； 徐世希； 王胜峰； 周彦彬； 田娟； 冉黎灵； 左英； 丁劲松；【Author】 ZHAO Yu-ting, XU Shi-xi, WANG Sheng-feng, ZHOU Yan-bin, TIAN Juan, RAN Li-ling, ZUO Ying, DING Jin-song (School of Pharmaceutical Sciences, Central South University ,ChangSha 410013, China)【机构】 中南大学药学院；【摘要】 目的建立测定人血浆中来曲唑浓度的高效液相色谱法,并研究来曲唑分散片在正常人体中的生物利用度。方法血浆样品经乙醚萃取浓缩后,用DiamonsilC18柱(4.6mm×200mm,5μm)分离,咪唑斯汀为内标,在239nm处波长处检测。采用两周期随机交叉给药方案,18名受试者分别单剂量口服2.5mg来曲唑分散片(受试制剂,T)或来曲唑片(参比制剂,R),不同时间点取血、测定血浆样品中来曲唑浓度,比较二者生物利用度。结果来曲唑和内标色谱峰完全分离,血浆内源性杂质不干扰测定。来曲唑浓度在2.48～99.2μg/L范围内与峰面积比线性关系良好,其定量下限为2.48μg/L。方法回收率在87.88%～104.02%(n=20),批内和批间相对标准偏差(RSD)均0.05)。... 更多还原【Abstract】 Objective To develop and validate a high-performance liquid chromatography (HPLC) method for the analysis of letrozole in human plasma and to study the relative bioavalability of letrozole dispersible tablets versus tablets. Method The liquid-liquid extraction of letrozole from plasma was performed with aether. the letrozole was chromatographed on a Diamonsil C18 column(4.6mm×200 mm, 5μm) with a mobile phase consisting of acetonitrile and phosphate buffer in the ratio of 41∶59v/v, the mobile pha... 更多还原【关键词】 来曲唑； 高效液相色谱法； 相对生物利用度； 【Key words】 Letrozole； High-performance liquid chromatography； Relative bioactivity； http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208201100_384557_2352694_3.jpg

【作　者】田书霞 蒋晔 赵静 任进民 王淑梅【机　构】河北医科大学药学院,河北石家庄050017 河北医科大学第二医院药剂科,河北石家庄050017【刊　名】中国药业, 2006(4): 50-51【关键词】奥美拉唑 反相高效液相色谱法 血药浓度http://www.chemdrug.com/images/space.gif【文　摘】目的 建立反相高效液相色谱法测定血浆中奥美拉唑浓度的方法。方法 血浆经碱化后以乙酸乙酯-氯仿（4：1）为提取溶剂，以液-液萃取法处理血浆样品。采用Diamonsil C18柱（150mm×4．6mm，5μm）为色谱柱，流动相为pH=6．8的甲醇-异丙醇-0．5％三乙胺水溶液（37：10：53），流速为1．0mL／min，内标为硝苯地平，检测波长为302nm。结果 该法血药浓度在7．98～2．024×10^3ng／mL范围内线性关系良好（r=0．9998），最低检测限为2ng／mL，精密度日内RSD〈3．2％，日间RSD＜3．7％，平均提取回收率为84．6％，平均方法回收率为99．6％。结论 该方法快速、准确，适用于奥美拉唑的临床药代动力学研究和血药浓度检测。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208271659_386550_2352694_3.jpg

[align=center][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在肺癌诊断中的应用[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]引言[/size][/font][font='宋体']外泌体作为重要的信息载体，参与肿瘤的发生、进展、转移和化疗耐药等过程，外泌体携带大量的遗传物质，已成为液体活检最理想的分析目标。外泌体也是目前最有前途的非侵入性诊断和预后的生物标志物之一。目前，超速离心法是外泌体分离的金标准。为了实现外泌体的临床价值，本研究以超速离心法富集了人血浆中的外泌体，并对健康人及肺腺癌患者的血浆样品做了区分，用于下游的肺癌诊断[/font][font='宋体']。[/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体用于肺癌诊断的策略[/size][/font][/align]肺癌仍然是世界范围内癌症相关死亡的主要诱因，因为大多数患者被诊断时均为晚期。因此，我们初步评估了超速离心法富集外泌体用于肺癌诊断的潜在适用性。我们收集了6名健康捐赠者和6名肺癌患者的血浆样本。利用超速离心法富集1 mL血浆样本中的外泌体，对比健康捐赠者和肺癌患者的血浆外泌体，结合数据分析，评估血浆外泌体在监测肺癌诊断方面潜在的适用性。[align=left][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]血浆中外泌体表征[/size][/font][/align]测试了超速离心法对复杂血浆样品的适用性。首先，利用纳米颗粒示踪分析对超速离心法得到的血浆外泌体进行了表征。如图（a）所示， 纳米颗粒示踪分析显示分离的外泌体粒径分布同样较窄，平均粒径为128.8 nm。与细胞上清样品类似，Western blot方法验证了分离外泌体的有效性。如图（b）所示，经富集后，典型的低丰度外泌体标记物同样得到了有效检测。以上结果证明，超速离心法能[img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img]够成功的用于血浆中外泌体的富集。[align=center][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px] （a）重悬液中血浆外泌体的[/size][/font][font='黑体'][size=14px]纳米颗粒示踪分析技术[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征，（b）[/size][/font][font='黑体'][size=14px]Western blot方法[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征血浆[/size][/font][font='黑体'][size=14px]外泌体标记物HSC70、TSG101、CD63和CD9[/size][/font][font='黑体'][size=14px]蛋白条带[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体用于肺癌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]诊断[/size][/font][/align][font='宋体']我[/font]们收集了6名健康捐赠者和6名肺癌患者的血浆样本。利用超速离心法富集血浆样本中的外泌体。采用纳米颗粒示踪分析技术对血浆外泌体标进行表征。如图所示，与健康对照组相比，肺癌患者的血浆外泌体显著上调。对比健康捐赠者和肺癌患者的血浆外泌体，结合数据分析，证明血浆外泌体在监测肺癌诊断方面具有潜在的适用性。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310171534194891_9083_6197575_3.png[/img][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px] [/size][/font][font='黑体'][size=14px]健康人与肺癌患者血浆中外泌体的[/size][/font][font='黑体'][size=14px]纳米颗粒示踪分析[/size][/font][font='黑体'][size=14px]技术[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征[/size][/font][/align][align=left][font='黑体'][size=18px]小结[/size][/font][/align]超速离心法可以高效、特异性地从人血浆中富集、纯化外泌体，在此我们评估了超速离心法在复杂血浆样品中的适用性。肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因，因为在原发癌症扩散之前进行早期诊断具有挑战性。以6例肺癌患者(6例健康供者为对照)的人血浆为样本，进一步研究超速离心法富集外泌体在肺癌筛查和诊断中的应用。这些结果证实了血浆外泌体在肺癌筛查和监测中的应用潜力。

[align=center][b][size=16px]沉淀蛋白法结合HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS测定右佐匹克隆在人体血浆中的含量及药物动力学应用[/size][/b][/align]摘要失眠症是一种持续性的身体疾病，睡眠质量或数量都不令人满意。右佐匹克隆（E-ZOP）是一种人工合成的治疗失眠的药物，能有效地维持睡眠质量。本研究建立了一种高效、快速的高效液相色谱-串联质谱（HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS）测定人血浆中E-ZOP的方法，并应用于药代动力学研究。该方法避开了常用的液-液萃取法或固相萃取法，而是用甲醇和二甲基亚砜一步沉淀法进行样品制备。高效液相色谱-质谱/质谱联用技术已完全用于人血浆中E-ZOP的测定，并成功应用于人体药代动力学研究。口服E-ZOP后，峰值时间（Tmax）为0.924 h，半衰期（T1/2）为4.902 h，在人体内表现为快速吸收、缓慢消除，动力学呈线性变化。本研究首次提供了一种高效的E-ZOP蛋白沉淀提取方法，在人体药代动力学研究中显示出明显的优越性。关键词：高效液相色谱-质谱联用；艾司唑匹克隆；蛋白沉淀；药代动力学；1.简介失眠已被强调为主要的公共卫生问题[1,2]。睡眠问题的高发生率和广泛的对精神和身体健康的影响[3]和身体健康[4]，以及功能受损[5]，使得人们越来越意识到获得足够高质量睡眠的重要性[6]。E-ZOP用于治疗不同类型的睡眠障碍[7,8]，研究表明，它是由其GABA受体复合物与苯二氮卓受体[9]耦合而成，通过激活GABA受体增加神经抑制，具有明显的镇静作用[10]。E-ZOP（化学名为（S）-（+）-6-（5-氯-2-吡啶基）-7-氧代-6，7-二氢-5H-吡咯[3,4-b]吡嗪-5-基-4-甲基-1-哌嗪羧酸盐，是一种非苯二氮卓类催眠剂，属于环吡咯啉类[11]，微溶于水/乙醇，溶于磷酸盐缓冲液（pH 3.2）[12,13]。Gary K Zammit[14]评估了E-ZOP的药代动力学，结果表明，R，S-佐匹克隆的清除率是立体选择性的，与活性较低的R-对映体相比，E-ZOP的清除率更低，T1/2更长。在这几十年中，研究发现，受试者在夜间服用3 mg的E-ZOP，第二天早上他们的精神运动功能不同程度地降低，这可能导致诸如驾驶、记忆和协调等不可察觉的活动的减少[15]。为了更好地了解E-ZOP的药代动力学，需要一种灵敏、特异、准确的测定人血浆中E-ZOP的方法，以观察E-ZOP的量效关系。关于使用高效液相色谱-紫外色谱法（HPLC-UV）、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]）、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS和高效薄层色谱法（HPTLC）对生物液中E-ZOP进行定量的论文已经发表[12,16]。N Sharma等人[17]报道2013年采用LC-UV方法在13分钟内定量E-ZOP，曲线范围为0.02-7.2 μg/mL，但分析时间太长，无法实现高通量[18,17,19-22]。Van Bocklaer等人[23]报道了首次采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-串联质谱（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]-MS）测定血液和胃内容物中E-ZOP的方法，方法检测E-ZOP的最低定量限（LLOQ）为2 ng/mL[24]，与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS相比，该方法的灵敏度较低。Gebauer MG等人[22]报道开发了液-液萃取（LLE）相结合的液-液萃取（LLE）[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS方法[22,25,26-29]，该方法仅使用50 μL样品体积，E-ZOP的LLOQ为0.1 ng/mL。Meng等人报道了[15][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法与固相萃取法（SPE）联用测定人血浆中E-ZOP的方法，曲线范围为1.00–100 ng/mL，使用50 μL样品体积是该方法的亮点。在这些技术中，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS的灵敏度最高，这是由于其具有较高的选择性。然而，包括LLE和SPE在内的样品预处理过程相对复杂，例如，用温和的氮气流分离离心后的有机层并在40 ℃下蒸发干燥[30-36]。这种预处理不仅增加了操作的复杂性，降低了处理量，而且还导致了不良的有机污染，这是临床实验室难以接受的。因此，在药代动力学研究中，E-ZOP含量测定中存在的样品制备问题亟待解决，本文提出了一种新的蛋白质沉淀法-高效液相色谱-质谱/质谱联用技术，从特异性、线性、灵敏度、准确度、精密度、基质效应等方面对E-ZOP在人血浆中的测定进行了充分验证，回收率和稳定性，最终应用于口服给药的人体药动学研究，并用DAS 3.0软件通过无室模型计算药动学参数。结果表明，E-ZOP在人体内吸收快，消除慢，动力学呈线性。定量下限（LLOQ）为0.1 ng/mL，R20.99为线性曲线。在0.1～30 ng/mL范围内测定，日内和日间精密度分别小于9.99和8.71 %，平均准确度为95.53 %～109.18 %。该方法回收率高，基质效应可忽略。E-ZOP的药代动力学参数包括Cmax =13.273±2.717 ng/mL，Tmax =0.924±0。446h，AUC0− t =69.308±14.895 ng/mL• h，T1/2 =4.902±0.819 h。本研究用氘化E-ZOP代替卡马西平作为稳定同位素标记内标（SIL-IS）来定量E-ZOP。本文介绍了一种优化的高效液相色谱-质谱/质谱法测定人血浆中E-ZOP的方法，并成功应用于E-ZOP片的临床药代动力学试验。2. 实验2. 1 材料与试剂E-ZOP购自中国食品药品检定研究院（纯度99.8 %）（图1），批号：19120474。E-ZOP-d8（纯度：98.7 %）从多伦多研究化学公司采购，批号：11-PTR-48-1（图1）。甲醇（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]级）从Fisher Chemical购买，流动相的所有水溶液均采用D11951超纯水机（德国赛默飞世尔）制备。甲酸（HPLC级）从MREDA采购，批号095224。醋酸铵（HPLC级）从MREDA采购，批号015966。二甲基亚砜（分析级）购自国药集团化学试剂有限公司，批号20180622。所有其他化学品和试剂均为分析级。2. 2 设备和操作条件2. 2. 1 液相条件分析采用HPLC/MS/MS系统进行，该系统由资生堂HPLC系统（日本）和AB Sciex API 5500串联质谱仪（美国应用生物系统公司）组成。在C18柱（资生堂CAPCELL PAC MGⅢ，2.0×150 mm，5μm）上用甲醇（10 mM醋酸铵，0.1%醋酸）：水（10 mM醋酸铵，0.1%醋酸）=55:45的流动相，流速为0.35 mL/min，实现了E-ZOP和E-ZOP-d8的分离。将样品注入5 μL等分试样中。2. 2. 2 质谱条件采用配有电喷雾电离（ESI）源的API 5500串联质谱仪（Applied Biosystems SCIEX，America）对HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS分析进行多反应监测（MRM）检测。每一个前体离子经过碰撞诱导的离解，以确定产生的产物离子。以高效液相色谱（HPLC）为流动相，通过注射泵，优化了E-ZOP和E-ZOP-d8溶液的界面无关仪器参数。2. 3 储备溶液和工作溶液的制备储备液用甲醇溶解精确称量的标准对照品，E-ZOP的最终浓度为1000 μg/mL。将精确体积的0.10 mL E-ZOP标准溶液移入10 mL容量瓶中，并用甲醇稀释至一定体积，以进一步稀释E-ZOP储备液取10 μg/mL的工作液，用甲醇稀释，得到2、4、10、20、100、200、400和600 ng/mL的工作液。同时，将精确重量的10.00 mg E-ZOP-d8原料药转移到10 mL容量瓶中，然后溶解并用纯品稀释至一定体积甲醇制备1000μg/mL的储备液。E-ZOP-d8的工作液浓度为50 ng/mL。所有药物的储备液在4 ℃的避光容器中储存至少60天，无变化。2. 4 校准标准和质量控制（QC）样品的制备在0.1、0.2、0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、10、20、25、30 ng/mL血浆中制备E-ZOP校准标准。根据FDA关于选择QCs的指南[36]，为了进行准确度和精密度研究，QCs在4个浓度水平下制备为6个重复品，包括定量下限（LLOQ）、低（L：定义为LLOQ的三倍）、中（M：定义为中范围）和高（H：定义为高范围）。而对于其他试验（在志愿者样品分析期间），只使用了3种浓度水平（LQC、MQC和HQC）的复制品。对于E-ZOP，分别在0.1、0.25、2.5和25 ng/mL下制备LLOQ、LQC、MQC和HQC。2. 5 样品准备将190 μL对照人血浆置于2.0 mL离心管中，加入精确体积的10 μL 2-600 ng/mL工作溶液，以获得E-ZOP的0.1-30 ng/mL血浆浓度。添加以下25 μL的IS（50 ng/mL）。然后加入300 μL沉淀蛋白溶剂（MeOH:DMSO=7:3，0.1%甲酸）振荡10 min提取E-ZOP和E-ZOP-d8，在4 ℃下以14000 rpm离心15 min分离上部有机相和下部水相。将100 μL上清液溶解于200 μL水相中，并涡旋混合2分钟。将5 μL等分溶液注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS系统进行分析。2. 6. 方法验证2. 6. 1 专属性通过比较六个人的空白血浆样品、在最后给药后0.5小时从其中一名受试者获得的临床血浆样品、以30 ng/mL的剂量加入E-ZOP的血浆样品和以0.1 ng/mL的剂量加入E-ZOP的血浆样品的色谱图来评估特异性和内源性干扰。通过比较50 %甲醇和添加E-ZOP的三蒸馏水（0.1 ng/mL）的LLOQ和Esopiclone-d8（50 ng/mL）的色谱图来评估特异性和外源性干扰。制备并分析所有空白血浆样品，以确保没有干扰峰。2. 6. 2 最低定量限(LLOQ)采用1/X2加权线性最小二乘回归模型，以E-ZOP/E-ZOP-d8与血浆浓度的峰面积比构建校准曲线。LLOQ表示线性范围内分析物的最低浓度，可以用可接受的精度和准确度进行测定。2. 6. 3 精密度和准确度 在同一天对四种浓度（0.1、0.25、2.5和25 ng/mL）的六个重复的LLOQ和QC样品进行分析，以评估日内精密度和准确度。通过连续三天分析LLOQ和QC样本来评估日间精密度和准确度。方法的精密度和准确度分别用相对标准偏差（RSD）和相对误差（RE）表示。RSD和RE均不得超过15 %。然而，在LLOQ，RE和RSD±20 %是可以接受的。2. 6. 4 基质效应与提取回收率提取回收率是通过比较在6个不同批次血浆中制备的三个水平的QC样品中提取的分析物与IS比的绝对峰面积与空白血浆、高溶血性血浆和高脂肪血浆提取后用相同浓度的分析物纯溶液进行强化LQC、MQC、HQC。通过比较六批样品在LQC、MQC、HQC水平下强化的空白血浆提取物与相同浓度水平分析物强化的空白水提取物中分析物绝对峰面积与IS比值的比较，来评估基质效应。2. 6. 5 稳定性试验对三种不同浓度的QC样品在不同条件下的稳定性进行了分析：（1）连续三次冻融循环（从-20 ℃到23 ℃）；（2）室温（23℃）制备前3h；（3） 冰箱温度（4 ℃）制备后20小时，室温（23 ℃）制备后6小时；（4）自动进样器10 ℃制备后24小时；（5）冰箱温度（− 20 ℃）制备前3、8、31天。通过比较储存的QC样品和新制备的样品的平均浓度来评估溶液的稳定性。样品被认为是稳定的，与标称浓度的偏差在±15.0 %以内。所有稳定性试验样品在6个重复中进行分析，并根据新制备的样品确定偏差。2. 7 药代动力学研究的应用对12名健康男性受试者进行了药代动力学研究。伦理委员会批准了方案，志愿者得到了知情的书面同意。给药前禁食12小时，给药后禁食3小时。口服给药后，在给药前和0时从颈静脉抽取2 mL的血样。后分别于0.083，0.167，0.333，0.5，0.75，1，1.25，1.75，2，2.5、3、4、5、6、8、12和24小时取血。实验期间，可以自由饮水。随后在14000×g转速下离心10分钟制备血浆，并在-80 ℃下立即冷冻。2. 8. 数据分析药代动力学分析采用DAS2非房室模型软件程序（中国数学药理学专业委员会，中国上海）计算AUC、Cmax、Tmax、T1/2和CLz/F。数据以平均值±SD表示。3. 结果与讨论3. 1. 方法优化3. 1. 1. 色谱条件优化为了获得满意的色谱行为和最大限度地提高E-ZOP和IS的电离响应，我们在流动相体系上进行了几次尝试。由于E-ZOP具有酸性，故采用醋酸溶液作为流动相，以提高响应速度。考虑到流动相pH范围的稳定性和消除色谱峰的分裂，在流动相中加入了10mM乙酸铵。以不同比例的甲醇-水和乙腈-水对E-ZOP进行洗脱实验，发现甲醇比乙腈具有更低的背景噪声和更好的分辨率。根据峰形、保留时间、稳定性和灵敏度，甲醇（10 mM醋酸铵，0.1%乙酸）-水（10 mM醋酸铵，以0.1 %乙酸（55:45，v/v）为流动相。资生堂CAPCELL PAC-MGⅢC18柱对E-ZOP有较好的保留作用，10 mM乙酸铵对E-ZOP的反应显著增强。在优化的高效液相色谱条件下，检测到E-ZOP和E-ZOP-d8（IS）在保留时间为1.97和1.90分钟。总运行时间是4.5分钟。结合E-ZOP在水和乙醇中微溶、在磷酸盐缓冲液（ph 3.2）中微溶的特点，Shaikh K[16]利用0.05 M一元磷酸钠缓冲液组成的流动相，建立了一种灵敏的E-ZOP定量方法。N Sharma[15]提出了一种使用0.01 M磷酸盐缓冲液和正磷酸的UPLC方法。在PKa=6.89的条件下，我们设计了一种pH=4.0的流动相，添加了10 mM乙酸铵和0.1%乙酸。3. 1. 2. 质谱条件优化利用ESI-MS分析和MS参数优化正离子模式，提高了MRM测量对ESI源的响应。对于E-ZOP（图2），MRM的碎片化转变为m/z 389.2到245.1（图2），对于E-ZOP-d8（图2）为m/z 397.2到245.1，每个转变的停留时间为300 ms。每个化合物的碰撞能为22ev。分离电位保持在40 V。适用于所有分析物的源参数为15 psi的幕气、介质的碰撞气体（CAD）、温度为650℃、离子喷射电压为5000 V、离子源气体为60 psi。3.1.3 样品处理方法优化在样品制备的优化方面，与乙酸乙酯液-液萃取法相比，蛋白质沉淀法具有精度高、回收率高、操作简单等优点。样品制备采用蛋白质沉淀法。E-ZOP的定量限值可用于人血浆样品中药物动力学的定量分析。最初，沉淀蛋白的溶剂是乙腈和甲醇，但这造成了E-ZOP含量的巨大损失，这可能是由于乙腈和甲醇不能有效地将分析员从蛋白质中解吸出来造成的。影响电荷态分布的因素包括溶剂pH值和药物溶解度。E-ZOP在水中的溶解度很低，在纯乙醇和正丙醇中的溶解度最低，这表明E-ZOP在醇中的溶解性很低，但在乙酸酯和酮中的溶解度较高[9]。因此，一种更易溶解的溶液二甲基亚砜与甲醇和甲酸按3:7:0.1的比例混合，成功地解决了这个问题。二甲基亚砜浓度高于此比值将显著降低仪器灵敏度。3. 2. 方法验证3. 2. 1. 选择性和专属性空白血浆、以2 ng/mL加入E-ZOP的空白血浆、以600 ng/mL加入E-ZOP的空白血浆以及口服E-ZOP后获得的临床血浆样本的代表性色谱图如图3所示。在所建立的色谱条件下，血浆中没有内源性干扰，表明该方法的选择性是可以接受的。3. 2. 2. 线性和标准曲线结果表明，在0.1～30 ng/mL血浆浓度范围内，E-ZOP的八点校准曲线呈线性关系，相关系数大于0.999。校准曲线的典型方程为：y=0.1x+0.00169，R2=0.9996，其中y代表E-ZOP-d8与IS的峰面积比，x代表E-ZOP的血浆浓度。以定量下限（LLOQ）作为校准曲线的最低浓度，其S/N比值均在10以上，精密度和准确度均可接受。3. 2. 3. 精密度和准确度LLOQ和QC样品中E-ZOP的精密度和准确度结果见表1。E-ZOP各样品水平的精密度（RSD）均小于9.99 %。对E-ZOP各样品水平的准确度在1.48 %到8.31 %之间。测定值均在可接受范围内。3. 2. 4. 提取回收率和基质效应在人空白血浆中，E-ZOP内标物均匀化的平均基质效应为101.2-106.0 %，而高溶血性的平均基质效应为99.9-101.4 %。在高脂血浆中，E-ZOP的基质效应为95.5-101.1 %。如表2所示，所有相对标准偏差值在0.75 %到9.17 %之间，这表明血浆基质的影响对于分析来说是可以忽略的。E-ZOP内标物均匀化后的平均提取回收率为96.7-103.8 %，不同浓度下E-ZOP的提取回收率结果准确、重现性好。3. 2. 5. 稳定性考察了E-ZOP在几种条件下的稳定性。E-ZOP在时间零点和室温下放置至少3h后，E-ZOP的CV%（7.35 %）的响应无显著差异（15 %），表明E-ZOP在此条件下是稳定的。血浆样品在至少三个冷冻/解冻循环中的CV值（11.92 %）稳定。处理后的样品在自动进样器中稳定达24小时，在室温托盘中稳定达3小时，CV%值分别至少为6.88 %和7.35 %。血浆样品在-20℃下稳定至少4周，无明显损失（8.43 %）。3. 3. 药动学研究用完全有效的分析方法定量E-ZOP的人血浆PK浓度。口服E-ZOP后的平均血浆浓度-时间曲线如图4所示。药代动力学参数见表5。服用E-ZOP（1 mg）后，0.92±0.446h（Tmax）的最大观察血浆浓度（Cmax）为13.27±2.717 ng/mL。从时间零点到最后可测浓度（AUC0-t）的血药浓度-时间曲线下面积（AUC0-∞）分别为69.31±14.90 ng/mL• h和71.84±16.29 ng/mL• h。CLz/F为14.595±3.356l h，Vz/F为100.26±13.9l h，T1/2为4.90±0.819 h，所得数据表明E-ZOP可快速吸收，缓慢消除。与Hotha等人相比。报道了E-ZOP（3 mg）给药后的药代动力学参数，我们的药代动力学特性与以往文献相似[4]。4. 结论建立了一种简便、可靠的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS法测定人血浆中E-ZOP的生物分析方法，具有选择性、灵敏、准确、准确等特点。与之前报道的样品制备方法相比，蛋白质沉淀法在灵敏度和操作简便性方面更为优越；该方法耗时更少，且具有高通量测试。用于方法验证，遵循FDA生物液分析规程。对12名健康志愿者进行单剂量口服1 mg E-ZOP后的药代动力学研究。计算了E-ZOP的PK数据，并与报告值进行了比较，证明了该方法在PK、生物等效性和生物利用度研究中的成功应用。参考文献[1] Liu, Shiyuan, et al. 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roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Accuracy([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]%)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Precision(RSD%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Accuracy([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]%)[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.1[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4.8[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]109.2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]8.7[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]104.2[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.25[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.8[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]108.2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]6.7[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]104.5[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.5[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.6[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96.7[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3.6[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]98.4[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]25[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.3[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96.8[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.6[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96.6[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][/table][font='times new roman'][size=16px]表[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2 E-ZOP[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的提取回收率和基质效应（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]n=6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）。[/size][/font][table][tr][td=1,2][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Compound[/color][/size][/font][/align][/td][td=1,2][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]plasma types[/color][/size][/font][/align][/td][td=1,2][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Sample Conc.(ng/mL)[/color][/size][/font][/align][/td][td=2,1][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Matrix effect[/color][/size][/font][/align][/td][td=2,1][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Extraction recovery[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Mean[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] (%)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RSD%[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Mean±SD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] (%)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RSD%[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,9][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-ZOP[/color][/size][/font][/align][/td][td=1,3][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]blank plasma[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]0.25[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]104.2±2.6[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]2.5[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px] 93.6±6.0[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]6.5[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]2.5[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]101.4±1.8[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]1.8[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px] 93.4±1.8[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]1.9[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]25[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]94.4±7.0[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]7.4[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px] 108.3±2.9[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]2.7[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]high hemolysis[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]0.25[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]100.5±[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]7.3[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]7.3[/size][/font][/align][/td][td][align=left][/align][/td][td][align=left][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]2.5[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]100.9±1.8[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]1.7[/size][/font][/align][/td][td][align=left][/align][/td][td][align=left][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]25[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]101.0±2.0[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]2.0[/size][/font][/align][/td][td][align=left][/align][/td][td][align=left][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]high fat plasma[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]0.25[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]96.3±3.7[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]3.9[/size][/font][/align][/td][td][align=left][/align][/td][td][align=left][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]2.5[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]100.1±1.4[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]1.4[/size][/font][/align][/td][td][align=left][/align][/td][td][align=left][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]25[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]101.7±1.5[/size][/font][/align][/td][td][align=left][font='times new roman'][size=16px]1.5[/size][/font][/align][/td][td][align=left][/align][/td][td][align=left][/align][/td][/tr][/table][font='times new roman'][size=16px]表[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3 E-ZOP[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的样品稳定性（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]n=6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，以平均值[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]±R.E.%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）表示。[/size][/font][table][tr][td=1,3][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Stability test condition[/color][/size][/font][/align][/td][td=3,1][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Norminal[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] concentration added(ng/mL)[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td=3,1][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-ZOP in plasma[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.25[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.5[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]25[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Long-term stability[/color][/size][/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]7 days at -20[/color][/size][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]℃[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.27±0.01[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]2.56[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±0.05[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]24.75[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±0.45[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]45 days at -20[/color][/size][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]℃[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.27±0.02[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]2.48[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±0.1[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]24.6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±0.45[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Short-term stability[/color][/size][/font][/align][/td][td] [/td][td] [/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Bench-top-3h[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.23±0.02[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]2.31[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±0.03[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]22.10[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±0.38[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Autosampler-24h[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.26±0.02[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]2.45[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±0.03[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]24.25[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±0.53[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Freeze and thaw stability[/color][/size][/font][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3 cycles at -20 [/color][/size][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]℃[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.27[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]±[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.01[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.55±0.06[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]26.21±1.36[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][/table][font='times new roman'][size=16px]表[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4 E-ZOP[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溶液稳定性（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]n=6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）。[/size][/font][table][tr][td=1,2][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Sample Conc.(ng/mL)[/color][/size][/font][/align][/td][td=2,1][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-ZOP-0day[/color][/size][/font][/align][/td][td=2,1][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-ZOP-7day[/color][/size][/font][/align][/td][td=2,1][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]E-ZOP-45day[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Mean±SD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] (%)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RSD%[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Mean±SD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] (%)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RSD%[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Mean±SD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] (%)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RSD%[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.25[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.02±0.00[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]12.33[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.03±0.00[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]9.16[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.02±0.00[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px]5.19[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]25[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.17±0.03[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.4[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.19±0.08[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3.46[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2.19±0.03[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.57[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][/table][align=left][font='times new roman'][size=16px]表[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]口服[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]E-ZOP[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]后的非房室药代动力学参数（平均值[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]±[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]标准差，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]n=12[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）。[/size][/font][/align][table][tr][td=1,3][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Oral admin[/color][/size][/font][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000](mg)[/color][/size][/font][/align][/td][td=6,1][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Parameters[/color][/size][/font][/align][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]T[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1/2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Cmax[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Tmax[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]AUC(0-t)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]AUC(0-∞)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CLz[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/F[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Vz[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/F[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000](h)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000](ng/mL)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000](h)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000](ng/[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mLh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000](ng/[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mLh[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000](L/h)[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000](L)[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4.90±0.819[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]13.27±2.717[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.92±0.446[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]69.31±14.90[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]71.84±16.29[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]14.595±3.356[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]100.26 ± 13.9 [/color][/size][/font][/align][/td][/tr][/table][font='times new roman'][size=16px]亮点[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]• 采用一种新的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]方法，通过简化的蛋白质沉淀进行单步预处理。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]• 高通量和每次进样[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4.5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分钟。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]• 开发并验证了特定且灵敏的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]方法。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]• 根据美国食品和药物管理局的规定，采用可接受的标准对所建立的方法进行了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]验证。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]• 已验证的方法用于测定人血浆中的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]E-ZOP[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]• 该方法可用于临床试验中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]E-ZOP[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的定量和监测。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]• 选定的同位素内标可有效减少基体效应和误差。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008070910213783_612_3255306_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] 1[/size][/font][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008070910220112_2378_3255306_3.png[/img][font='times new roman'][size=16px][b] [/b][/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008070910222846_5486_3255306_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] 2[/size][/font][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008070910224203_4797_3255306_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] 3[/size][/font][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008070910235493_4084_3255306_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=16px]图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] 4[/size][/font][/align][align=center][/align]图1. （A）E-ZOP和（B）E-ZOP-d8的结构（内部标准）图2. A（E-ZOP）和B（E-ZOP-d8）的[M+H]+全扫描产物离子质谱。图3. 人血浆中E-ZOP和E-ZOP-d8的代表性MRM色谱图。（A） 空白血浆样品；（B）加入E-ZOP（2 ng/mL）和E-ZOP-d8的空白血浆；（C）加入E-ZOP（600 ng/mL）和E-ZOP-d8的空白血浆；（D）人体口服E-ZOP（1 mg）0.5h后的血浆样本。图4. 口服1 mg/kg（n=12）后E-ZOP的平均药代动力学曲线

【作者】 阎雪莹； 高宏伟； 唐晓飞； 刁磊； 匡海学；【机构】 黑龙江中医药大学； 黑龙江省哈尔滨市香坊区疾病预防控制中心； 吉林农业科技学院；【摘要】 目的:建立大鼠血浆中胡黄连苦苷Ⅱ的HPLC-UV测定方法,研究在大鼠体内的药代动力学特征,同时测定其血浆蛋白结合率。方法:血浆样品经简单的甲醇沉淀蛋白后,上清液直接进样测定。采用Diamonsil(钻石)C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)流动相为甲醇-水-醋酸(38:62:0.2),检测波长267nm,流速1mL.min-1,采用3p97药动学软件对药时数据进行拟合。结果:大鼠尾静脉注射胡黄连苦苷Ⅱ符合二室开放模型。结论:胡黄连苦苷Ⅱ在大鼠体内分布代谢很快,消除较快。 更多还原【关键词】 胡黄连苦苷Ⅱ； 药代动力学； 血浆蛋白结合率； 【基金】 国家自然科学基金项目资助(30600804)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208071031_382128_2352694_3.jpg

【作者】 胡晓； 张丽芳； 温金华； 蔡军；【机构】 南昌大学医学院临床药理研究所；【摘要】 目的:建立一种同时测定人血浆中对乙酰氨基酚、伪麻黄碱和咖啡因的高效液相色谱(HPLC)法,并用于含上述组分的复方制剂的人体药动学研究。方法:以茶碱为内标,血样经醋酸乙酯提取后,采用高效液相色谱紫外(HPLC-UV)法进行测定。色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相为甲醇-0.05mol.L-1磷酸二氢钾(23∶77,pH2.4);流速1mL.min-1。检测波长210nm。结果:人血浆中对乙酰氨基酚、盐酸伪麻黄碱和咖啡因质量浓度测定的线性范围分别为0.12～11.52mg.L-1,0.008～0.432mg.L-1和0.03～2.16mg.L-1;最低可定量质量浓度分别为0.12,0.008,0.03mg.L-1;各组分日内、日间RSD均小于15%,方法回收率均大于88%。结论:该方法能快速可靠地同时测定人血浆中对乙酰氨基酚、伪麻黄碱和咖啡因的浓度,可用于含上述组分的复方制剂的人体药动学或生物等效性研究。【关键词】 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208142012_383851_1609970_3.jpg

【作者】 李秋红； 张丹丹； 李纯； 韩华；【Author】 Li Qiuhong Zhang Dandan Li Chun Han Hua (Pharmaceutical School Clinical Department,Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040)【机构】 黑龙江中医药大学药学院临床药学教研室；【摘要】 目的:建立测定大鼠体内血浆和唾液中槐果碱含量的HPLC分析方法。方法:采用色谱柱:Diamonsil(R)C18柱150mm×4.6mm,流动相:甲醇-0.1‰三乙胺水溶液(60:40,v:v),检测波长:220nm,柱温:30℃,流速:0.8ml/min。结果:槐果碱血浆和唾液的相对回收率分别为92.7%～96.6%和94.8%～113.0%,日内、日间精密度RSD10%,血浆和唾液中槐果碱浓度在8～160μg/mL和2～40μg/mL范围内相关系数分别为0.9994和0.9995,线性关系良好。结论:首次建立槐果碱唾液样品检测方法以及用HPLC法同时测定大鼠体内血浆和唾液中的含量方法,为槐果碱的临床药动学研究提供了新的方法学基础。 更多还原【Abstract】 This is a study to determine sophocarpine in rats’ plasma and saliva using HPLC approach.We made the study under the following parameters:Diamonsil(R)C 18 Column at 150mm×4.6mm,methanol-water containing 0.1‰triethy- lamine (60:40,v:v) for mobile phase,a detection wave length at 220 nm,a temperature at 30℃,and a flow-rate of 0.8 mL/min.The study has produced the following results:a relative recovery of sophocarpine in plasma and saliva at 92.7%～96.6%,and 94.8%～113.0% respectively;the RSD of intra... 更多还原【关键词】 HPLC； 槐果碱； 血浆； 唾液； 【Key words】 HPLC； Sophocarpine； Plasma； Saliva； http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061030_381710_2352694_3.jpg

作者：果崇慧; 刘德艳; 何国云;（河北省秦皇岛市工人医院; 河北省秦皇岛市山海关区人民医院;）摘要：目的建立一种灵敏、专属的高效液相色谱-紫外检测法,用于测定乌拉地尔在人体内的血药浓度。方法色谱柱为DiamonsilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.5mol/L磷酸二氢铵缓冲液(20∶80,V/V),流速1.0mL/min,检测波长268nm,内标为丁咯地尔。结果测得血浆中乌拉地尔质量浓度的线性范围为10～600ng/mL,最低定量限为10ng/mL。结论高效液相色谱-紫外检测法用于测定乌拉地尔在人体内的血药浓度,方法灵敏、专属、可靠。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208271014_386285_1606903_3.jpg

联合用药血浆样品中抗真菌药物的快速同时测定 真菌感染是临床上表现严重的而且难攻可的难题，而且发病率高可导致死亡。抗真菌药伏立康唑，泊沙康唑，伊曲康唑以其广谱抗菌性是临床上被广泛地用于抗真菌感染的三唑类抗真菌药。伊曲康唑的主要代谢产物羟基伊曲康唑的抗菌活性与伊曲康唑相媲美，三唑类抗真菌药的药理和毒理与其药物浓度存在浓度-效应关系。它们在血液中的浓度以及吸收、代谢、消除以及合并用药均存在差异。所以对这些药物的临床药物监测对于增强临床效果降低毒副作用有很重要的意义。三唑类抗真菌药的临床检测需要快速简便的分析手段来分析血浆中的血药浓度，同时测定人体血浆中伏立康唑，泊沙康唑，伊曲康唑的分析方法多采用液相色谱 - 质谱（LC-MS）或LC-串联质谱法（LC-MS / MS）的方法，LC-MS/MS是近年来用于生物样品中药物定量测定的有力手段，然而，LC-MS/MS系统由于其昂贵价格导致普及性并不高，本实验开发了一种简单、快速、可靠而且普适性的高效液相色谱同时测定伏立康唑，泊沙康唑，伊曲康唑以及代谢产物羟基伊曲康唑的方法，适合普遍的临床及实验室。高效液相色谱法通常需要复杂的样品前处理，如液-液萃取、固液-萃取、以及血浆的处理，这些过程不仅需要试剂更耗时严重，本实验中对方法进行了简化，一步除蛋白，样品离心后可直接上样。材料和方法：伏立康唑，泊沙康唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑标准品及药品，萘普生标准品，甲醇、乙腈（色谱纯）、实验室自制试验用水。色谱条件：安捷伦1200，安捷伦 SB-Phenyl色谱柱(150mm×4.6mm×5μm)，检测波长260nm,流动相A 0.01M的磷酸盐缓冲液（pH3.5）流动相B（95％乙腈的水溶液），梯度洗脱情况如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410281127_520414_2206101_3.jpg标准储备溶液配制：伏立康唑和泊沙康唑均配置成1.0mg/ml（以游离碱计）的甲醇溶液，伊曲康唑制备成0.4mg/ml的甲醇溶液，羟基伊曲康唑配制成0.1mg/ml的甲醇溶液，内标溶液为0.6mg/ml萘普生甲醇溶液，皆4度保存备用。标准曲线：：伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑、羟基伊曲康唑标准曲线绘制通过向空白血清中加入标准溶液来获得，浓度范围0.05-100mg/L。样品制备：取100ul 10ug/ml的内标普萘生溶液分别加入100ul的空白、标准溶液、以及样品血浆中。混匀，加入25ul的1.0M的高氯酸是样品酸化，加入400ul的甲醇使蛋白质沉淀析出，离心2000转/min（5min），取上清液30ul进样。结果与讨论1、本实验建立了一种高效液相色谱法同时快速检测人体血浆中伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑以及伊曲康唑的代谢产物羟基伊曲康唑。2、方法中使用了1.0M的高氯酸和甲醇作为蛋白质沉淀的方法，简单、快速。经过离心后，上层离心液经0.45um滤膜过滤后直接进样分析。3、为了达到最佳的分离效果，我们比较了各种色谱柱，流动相我们对0.01M的磷酸盐缓冲液和不同浓度的甲醇、乙腈进行比较，得到优化的色谱条件：Phenyl色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)上使用0.01M的磷酸盐缓冲液（pH3.5）、乙腈流动相梯度洗脱，波长260nm下进行检测。在该条件下：伏立康唑、萘普生、泊沙康唑、羟基伊曲康唑、伊曲康唑的保留时间及色谱图如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410281128_520415_2206101_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410281128_520416_2206101_3.jpg4、标准曲线在0.05-10mg/L范围内线性良好（r2=0.99，浓度范围0.05-10mg/L）,日内和日间变化系数10%。5 为了找到最简便快速的沉淀方法，对于沉淀剂进行了选择优化（甲醇乙腈高氯酸等），用乙腈和高氯酸沉淀效果皆很好，但综合考虑回收率高氯酸最优。

作者】 陈小陆； 任斌； 李磊； 吴喜英； 陈孝； 【Author】 CHEN Xiao-lu1,REN Bin1,LI Lei2,WU Xi-ying1,CHEN Xiao1(1.First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510080,China;2.Huangpu Division of First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510730,China)【机构】 中山大学附属第一医院； 中山大学附属第一医院黄埔院区；【摘要】 目的建立高效液相色谱法测定人血浆中山莨菪碱的血药浓度。方法色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-10 mmol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH3.0,内含10 mmol·L-1高氯酸)(20∶80);柱温:室温;流速:1.0mL·min-1;检测波长:214 nm。结果标准曲线的线性范围为0.5～50 mg·L-1(r=0.999 7,n=7),低、中、高3种浓度的平均回收率为(87.2±2.2)%,(92.5±1.0)%,(89.3±2.1)%,日内RSD≤2.5%,日间RSD≤5.2%。山莨菪碱的最低检出量为0.1 mg·L-1。结论本方法简单、灵敏、重现性好,适用于山莨菪碱临床血药浓度测定及人体药动学研究。 更多还原http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208271654_386544_2379123_3.jpg

作者：李海珊; 赵旻; 梁晨; 赵春杰;（广东省佛山市第一人民医院药剂科; 沈阳药科大学药学院; 中国医科大学药学院;）摘要：目的建立高效液相色谱(HPLC)法用于测定文拉法辛在人体血浆中的质量浓度和计算药代动力学参数。方法 18名健康志愿者单剂量口服盐酸文拉法辛胶囊6粒,肘静脉取血并分取血浆,血样经液-液萃取,采用Diamonsil(钻石)ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-pH=6.8的磷酸盐缓冲液(32∶68)为流动相,检测波长229 nm,流速1.0 mL/min,检测器灵敏度0.01 AUFS,进样量20μL。结果受试制剂和参比制剂中文拉法辛的主要药动学参数,达峰时间为(2.11±0.21)h和(2.08±0.19)h,达峰时药物浓度为(130.78±27.78)ng/mL和(133.52±32.05)ng/mL,消除相半衰期为(5.11±1.84)h和(5.44±2.12)h,药时曲线下面积AUC0-24为(438.67±70.70)ng/(mL.h)和(449.78±79.96)ng/(mL.h),药时曲线下面积AUC0-∞为(530.34±87.91)ng/(mL.h)和(528.12±81.77)(ng/mL.h)。结论经统计学分析,两种盐酸文拉法辛胶囊具有生物等效性。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208271008_386279_1606903_3.jpg

【作者】 方增军； 张斌； 孙德清； 【机构】 山东大学药学院； 山东大学第二医院药剂科 济南250033； 山东大学第二医院药剂科； 【摘要】 目的建立测定人血浆中氟罗沙星浓度的高效液相色谱方法,并用于其药代动力学研究。方法氟罗沙星血浆样品经甲醇沉淀蛋白后直接进样。色谱柱为Diamonsil C18柱,流动相为1%三乙胺(磷酸调pH至4.8)/乙腈(80/20,V/V),流速1.0mL·min–1。采用荧光检测器,激发波长290nm,发射波长458nm。氟罗沙星药代动力学研究采用双周期交叉试验设计。结果氟罗沙星血浆浓度在0.025~8.00μg·L–1范围内线性关系良好,低、中、高浓度质控样品的日内、日间精密度不超过5.16%,方法精密度99.1%~100.9%,提取回收率86.7%~92.0%。健康志愿者口服400mg氟罗沙星试验及参比制剂后主要药代动力学参数分别为:Cmax5.08±0.78和5.38±1.40μg·mL–1,tmax1.72±0.79和1.82±0.78h,t1/211.68±1.27和11.38±1.51h–1,AUC0-∞78.44±11.44和76.53±13.24μg·mL–1·h。结论该方法灵敏度高、定量准确,适用于氟罗沙星人体药代动力学研究。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207301426_380558_2379123_3.jpg