全连续合成

请问做天然产物全合成的学长们：对于含复杂手性中心的分子，表征的时候除了普通的氢谱和碳谱，常用的还有那些手段？

群蛀虫内酯(Clavulactone)是我国科学家在文革结束之后分离获得并完成鉴定的一例结构独特的生理活性海洋二萜。生命有机化学国家重点实验室经过多年的努力，最近成功完成了该天然产物的首次全合成，为中科院上海有机化学研究所自上个世纪70年代后期以来围绕这一海洋天然产物进行的综合研究工作画上了一个新标记。 1987年，上海有机所李金翠、张志明、倪朝周、夏宗芗、吴毓林等研究人员于从中国南海软珊瑚中首次分离获得并成功鉴定了一种具有跨环内酯单元的新颖复杂中环二萜，并命名为群蛀虫内酯；这也是我国利用X-衍射单晶技术进行复杂天然产物结构鉴定的早期例子之一。群蛀虫内酯具有较强的抗肿瘤作用，它能成倍提高癌细胞的cAMP水平，从而抑制癌细胞的分裂。 随着我国研究生制度的恢复和健全，上海有机所吴毓林研究员领导的研究组于1993年秋天最早开始制定群蛀虫内酯的全合成计划，先后有博士生乔立新和朱强（现为广州健康与医药研究院研究员）等相继参与并开展了有关研究工作，在J. Org. Chem.和 Org. Lett.上发表了第一批关于此天然产物某些结构单元（五元环、六元环、十一元环）的合成方法。许杏祥研究员领导的研究组于1995年之后也开始独立开展群蛀虫内酯的全合成研究，先后有多名博士生发展并发表了具有参考价值的区域合成新方法。2000年之后，这个领域不断被重视，包括美国哈佛大学Corey研究组和波士顿学院的Hoveyda研究组相继开展具有类似十一元中环特点的海兔烷型（dolabellane）海洋二萜的全合成研究，并先后报道了其它三例天然产物的全合成。 姚祝军研究员指导的研究组于2005年制定了两条新的群蛀虫內酯合成路线。最近完成并发表的群蛀虫內酯首次全合成就是其中的一条路线（Angew. Chem., Int. Ed. 2012, 51, 6484-6487）。与以往报道的环系处理方式不同，该路线先立体控制地构建五元/六元并环结构，从而控制中环形成前的中间体构象，有利于实现十一元环的闭合，最后对其进行官能团修饰而完成全合成。实践证明这一思路是成功的。在报道的群蛀虫内酯首次全合成中，他们发展并应用了多个高效率的立体控制反应，包括利用Lewis酸促进的手性环氧醇重排构建季碳；发展并使用SmI3催化的可放大的分子内Ene反应构建五元环；使用手性磷酸催化的区域与立体选择性氧杂Diles-Alder反应引入六元环，从而锁定中环形成前的侧链空间伸展方向；运用吴毓林组最先发展使用的分子内SN2取代形成C-C键完成高效率的中环形成；利用甲基铜锂试剂的高立体选择性共轭加成引入中环上的孤立甲基；最后使用区域/化学选择性烯丙基sp3 C-H直接氧化获得跨环内酯结构，完成全合成。 群蛀虫內酯的首次全合成成果发表之后，获得众多化学界同行的关注，发表首月（2012年6月）即位列德国《应用化学》杂志Most Accessed Articles的第二名；新近又被英国化学家Steven Ley推荐收录于今年第九期的Synfacts杂志（Synfacts 2012, 8, 937）。 从上世纪70年代后期开始群蛀虫内酯的分离工作，到1987年群蛀虫内酯结构的鉴定，再从1993年群蛀虫内酯全合成工作的启动，到2012年完成了群蛀虫内酯的全合成，中国科学院上海有机化学研究所的三代化学工作者，在国家自然科学基金委、科技部、上海市科委以及中国科学院的持续资助下，历经三十年的艰苦工作和不断积累，最终完成了群蛀虫内酯的分离、鉴定与全合成的所有环节，成为我国天然有机化学不断发展、取得进步的又一例证。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201209/W020120905366675342749.gif群蛀虫内酯首次全合成关键技术剖析

是全氮类高能材料中重要的前体物质。从N3至N13一系列全氮衍生物一直是科学家们追求的高能材料，这种材料的爆炸能量达到TNT炸药的3-10倍，爆速从9000米每秒提升到14000米每秒以上，爆压从30至40吉帕提升到90吉帕。1998年美国合成的N5+盐材料以不到0.2克的质量（一各盐粒）炸烂了一个通风橱，把实验室炸的跟被鬼子扫荡过一样。但是因为形成的化合物氮含量下降，还是不够完美，而此次的N5-盐若与氮阳离子合成纯氮材料，威力将更上一层楼.南京理工大学化工学院胡炳成教授团队此次合成的全氮阴离子盐分解温度高达116.8 ℃，具有非常好的热稳定性。最为可贵的，在发布在《科学》杂志上的论文中表现的合成路径看来，N5-其合成原料价格相当低廉。选用的材料中最贵的也不过就是甘氨酸亚铁。

萜类天然产物(−)-Terpestacin可以抑制导致HIV病灶的细胞合胞体（syncytia）的形成（ID50 0.46 µg/mL），同时也能抑制血管增生作用，而且其生物活性具有较好的选择性。该化合物被认为是一种非常有前景的抗癌和抗HIV的先导化合物。 (−)-Terpestacin的主体结构是五员环和十五员大环反式稠合（即双环骨架体系）而成的萜类化合物，大环上有三个反式三取代双键。共有四个手性中心（即C1, C11, C15, C23），其中C1位是季碳手性中心。五员环为官能团密集的1,2-双酮结构，其中一个羰基呈现烯醇式结构。以上结构特征使得该分子进行全合成具有较大的挑战性。鉴于上述生物活性和结构特点，该分子已成为许多世界著名大学（包括哈佛大学、斯坦福大学、麻省理工学院等）的著名学者的研究对象。目前文献中已有六个研究组完成了该分子的合成（含四条不对称合成路线），但合成步骤较长。 中科院广州生物医药与健康研究院邱发洋实验组以廉价的商业原料(R)-Carvone和(E,E)-Farnesol为起始原料，实现了(−)-Terpestacin的全合成。在构建该分子的关键位点如1位的季碳手性中心、11位手性羟基和23位的手性甲基时，所用方法巧妙简洁，使全合成效率大大提高。 该合成路线仅涉及简单试剂和常规反应，便于实验室较大规模合成，为针对该化合物的进一步结构改造奠定基础。 相关论文已经发表在Organic and Biomolecular Chemistry杂志上。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201208/W020120830534179236716.jpg反应过程图

A201A是一个结构独特的核苷类抗生素，其中含环外烯醚的呋喃糖单元从未在其它天然产物中出现过。该抗生素由美国礼来公司于1976年从链霉菌Streptomyces capreolus NRRL 3817中分离得到，对革兰氏阳性菌和大多数厌氧性革兰氏阴性菌显示出强烈的抗菌活性。由于该化合物含有模拟tRNA末端的3’－酰胺基核苷片段，推测其作用于核糖体A位从而抑制蛋白质的合成。2012年，中国科学院南海海洋研究所鞠建华课题组从南中国海海底获取的放线菌株Actinomycetes thermotolerans中又意外地分离得到A201A，并对其独特的生物合成途径开展了研究。　　中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室俞飚课题组近期完成了A201A的首次全合成（J. Am. Chem. Soc. 2014, 136, 4157−4160）。该合成采用线性合成策略，通过对5个砌块的糖苷化和酰胺化完成拼接。其中通过Mitsunobu糖苷化高立体选择性地实现了呋喃糖1,2-顺式糖苷键的构建；通过优化条件立体选择性地实现了E式烯醇甲醚的合成；通过该课题组发展的一价金促进的糖苷化反应实现了嘌呤的N－糖苷化；并实现了对含有酸性敏感基团和碱性氮原子的复杂底物的糖苷化。这种线性和模块化的合成策略也为A201A类似物的发散性合成以进行构效关系的研究提供了可能。 该工作得到了国家自然科学基金委、科技部和中国科学院的资助。 http://www.cas.cn/ky/kyjz/201406/W020140619321207956891.jpgA201A分子结构文章来源：上海有机化学研究所 发布时间：2014-06-19

[color=#444444]最近在做3-羟基丁醛的合成，需要用到[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]定量分析产率，没有标样的前提下，用内标法能测出来吗？合成物中含有聚乙醛，丁烯醛，乙酸等副产物，要用什么物质做内标物呢？[/color]

Q1.引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种,无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。(1) 去保护：加入Deblocking脱去碱基上5'- OH的保护基团DMT，获得游离的5'- OH；(2) 耦合：同时加入活化剂和新的碱基，新的碱基5'-OH仍然被DMT保护，3'端被活化与溶液中游离的5'-OH发生耦合反应；(3) 封闭：耦合反应中极少数5'- OH没有参加反应，用封闭试剂终止其后继续发生反应；(4) 氧化：加入氧化剂使其由核苷亚磷酸酯形成更稳定的核苷磷酸酯。Q2.引物合成后如何处理？切割与脱保护基：将合成好的寡核苷酸链从支持物上化学切割下来。常用新鲜的浓氨水来裂解CPG与初始核苷之间的酯键。断裂下来的寡核苷酸带有自由的3'羟基。纯化：根据所合成寡核苷酸的组成和应用来选定纯化的方法。常用的纯化方法有：C18、OPC、PAGE和HPLC。定量：根据寡核苷酸在260nm处的紫外吸收来定量。储存：分装抽干。Q3.需要什么级别的引物？根据实验需要，确定订购引物的纯度级别。应用引物长度要求纯度级别要求一般PCR扩增60 basePAGE诊断PCR扩增 40baseHEPD, PAGEDNA测序20base左右HEPD亚克隆，点突变等根据实验要求定HEPD, PAGE，HPLC基因构建（全基因合成）根据实验要求定HEPDPAGE反义核酸根据实验要求定HEPDPAGE修饰引物根据实验要求定PAGE, HPLC Q4.引物的质量是不是跟序列有关？四种碱基的性质和各自保护基的性质都有差别。所以合成难度是不一样的。难度最大的当属GC重复多的和序列中还有多个连续的G的引物。尤其对于后者，国内公司一般都做不了20个G以上的引物。实验证明，如果引物中有超过三个连续G的结构，传统方法得到的产物质量就会开始下降。而且目前通用的脱盐、OPC和PAGE方法都无效。鼎国昌盛生物公司拥有的HEPD专利技术能够克服高GC或者高G含量引物的合成和纯化障碍，对普通引物、高GC引物和无论长短的oligo d（G）都能得到同样的非常好的结果。Q5.需要合成多少OD数？根据实验目的确定。一般PCR扩增，2 OD引物，可以做500-1000次50ul标准PCR反应。如果是做基因拼接或退火后做连接，1 OD就足够了。Q6.如何计算引物的浓度？引物保存在高浓度的状况下比较稳定。一般情况下，我们建议将引物的浓度配制成100pmol/ul，称为保存浓度，而引物的工作浓度一般配制成10-50pmol/ul。加水的体积（微升）可直接参照合成报告单上推荐的体积，也可按下列方式计算：V (微升)= OD数x 33 x 10000 /引物的分子量引物的分子量可以从合成报告单上获得。注意：1 OD260= 33 ug/ml。Q7.如何计算引物的Tm值？引物设计软件都可以给出Tm，与引物长度、碱基组成及所使用缓冲夜的离子强度有关。长度为25base以下的引物，Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = 81.5 + 16.6 x Log10 + 0.41 (GC%) - 600/size＊＊公式中，Size =引物长度。

[size=14px] [/size] [size=14px]骨质疏松症是一种全身性代谢性骨病，其高发病率和致残率已成为全球关注的主要公共卫生问题。目前市场上防治骨质疏松的药物包括双磷酸盐类、降钙素类、激素类等。然而，这些药物尚存在副作用明显、疗效不稳定或价格高昂等问题。中药在治疗骨质疏松症等与年龄有关的疾病方面具有独特优势，已经提供了许多具有优异疗效和安全性的潜在药物。当归（Angelica sinensis）是著名的传统中药，被用于治疗妇科疾病、心脑血管疾病和骨质疏松。然而当归中仍存在大量未被充分认知的成分，制约着当归药效物质基础和科学内涵的全面阐明。[/size] [size=14px]2024年2月21日，暨南大学中药及天然药物研究所高昊联合中国科学院深圳先进技术研究院王新峦团队在ACS Central Science（IF = 18.2）发表题为“Discovery of a Potent Antiosteoporotic Drug Molecular Scaffold Derived from Angelica sinensis and Its Bioinspired Total Synthesis”的文章，研究遵循中医骨疾病理论，以临床高频使用的中药当归为研究对象，从中发现一类新型分子骨架的苯酞“法卡林苯酞” Falcarinphthalides A-B（1-2），并在其结构解析、生源机制、抗骨质疏松活性和机制，以及化学全合成等方面进行研究。最终发现Falcarinphthalide A（1）表现出显著的体外抗骨质疏松活性，是一种非常有前途的先导化合物。[/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]1、新结构类型的苯酞“法卡林苯酞”的结构解析[/size] [size=14px]首先，作者从当归中分离出了两种新型苯酞Falcarinphthalides A-B（1-2）及其生源前体(3R,8S)-Falcarindiol（3）和(Z)-Ligustilide（4），并核磁共振技术鉴定了该类化合物的平面结构[/size] [size=14px]随后作者以化合物1（falcarinphthalide A）为例，通过简化结构计算电子圆二色谱（ECD）推断其绝对构型为（3'R,8'S）-1，并通过振动圆二色谱（VCD）进行了验证。化合物2（falcarinphthalideV）的结构解析解析为（3′R,8′S），化合物3和4鉴定为(3R,8S)-Falcarindiol和(Z)-Ligustilide（图2）。[/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图2 ECD和VCD曲线确定化合物1的立体构型[/size] [size=14px]2、新结构类型的苯酞“法卡林苯酞”的生源推测[/size] [size=14px]结合四种化合物的结构特点，作者推测Falcarinphthalides A-B（1-2）可能的生源机制，以化合物3和4为前体，通过Diels?Alder和retro-Diels?Alder级联反应合成。进一步通过对LC-HR-ESI-MS对法卡林苯酞标准品（falcarinphthalide A-B）和新鲜当归95%乙醇冷提液进行分析，发现这两种新型苯酞Falcarinphthalides A-B（1-2）并发现非人工产物。接着通过DFT计算模拟研究该Diels?Alder/retro-Diels?Alder级联反应过程，整体反应能垒较高，暗示着该反应过程需要酶参与（图3）。[/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图3 新型苯酞及其前体的生源推测[/size] [size=14px]3、新结构类型的苯酞“法卡林苯酞”的体外抗骨质疏松活性及机制[/size] [size=14px]接着作者体外检测了化合物1-4的抑制破骨细胞活性的能力，发现化合物1、3和4能够抑制破骨细胞分化，破坏破骨细胞F-actin环的形成，最终抑制破骨细胞的骨吸收。而化合物2没有表现出上述任何活性，表明Falcarinphthalide的不同连接方式对其抑制破骨细胞活性至关重要（图4）。[/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图4 体外抗骨质疏松活性[/size] [size=14px]随后，作者对上述化合物抗破骨细胞的机制进行初步研究，发现化合物1、3和4有效降低与破骨细胞生成有关的转录因子c-Fos和NFATc1以及下游相关蛋白Integrin-β3的表达，下调DC-STAMP、OSCAR和TRAP的基因表达。此外，化合物1和4还能有效抑制NF-κB p65的核易位。与前面结果一致，化合物2在这些通路中未表现出任何抑制作用。结果表明Falcarinphthalide A（1）通过抑制NF-κB和c-Fos通路，进而抑制RANKL诱导的破骨细胞分化（图5）。[/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图5 体外抗骨质疏松活性的机制[/size] [size=14px]4、新结构类型的苯酞“法卡林苯酞”的化学全合成[/size] [size=14px]由于化合物1显示良好的抗破骨活性，作者对其进行了全合成。由于法卡林二醇作为亲双烯体的反应活性较低，作者根据生源机制通过3和4直接进行Diels?Alder反应均失败，故而设计了设计了化合物5和7两种硅烷亲双烯体，通过DFT计算发现化合物7能够高效的与藁本内酯发生逆电子Diels-Alder/retro-Diels-Alder反应。最后，在IEDDA量子化学计算结果的指导下，作者通过10步反应实现了对Falcarinphthalide A（1）的克级全合成（图6）。[/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图6 新结构类型的苯酞“法卡林苯酞”的化学全合成[/size] [size=14px]总结[/size] [size=14px]该研究从传统中药当归中分离鉴定的一类具有全新碳骨架的苯酞类化合物Falcarinphthalides A-B（1-2），体外实验表明，Falcarinphthalide A（1）及其生源前体（3和4）显示出显著的抗破骨体外活性，主要通过抑制NF-κB和c-Fos通路干预RANKL诱导的破骨细胞生成。在生源机制启发和DFT计算驱动下，我们以Diels-Alder/retro-Diels-Alder级联反应为关键步骤，通过10步反应实现了法卡林苯酞A的克级全合成。研究不仅为骨质疏松防治提供了全新药物分子骨架，凸显了中药活性分子在骨质疏松防治方面的巨大潜力，也为传统中药药效物质解析和科学内涵阐明奠定了基础。[/size]

DHG-9070A，上海一恒出产的电热恒温鼓风干燥箱，仪器说明书上说使用温度上限200度，有没有人在180度温度下连续使用3天啊？本人需要在180度的条件下连续3天使用用来合成催化剂。

1. waters aquilty UPLC-SQD，之前都正常2. 前几天打过一针合成的物质(可能含盐)，用甲醇配成1.5ppm浓度，过滤后进样，信号高达10的9次。且点任何地方，出来都是m/z 242。打下一针样品，出来也是242，但还是连续的色谱图。系统已污染。3. 因引起污染的样品溶于甲醇，以为是强保留物质，就用甲醇在小长假间小流量冲洗了3天(怕停电，质谱关掉)。因担心含盐，又用水冲洗了4小时。4.今天进样，发现打空白样基线不连续，有些时段TIC为0，打标曲，没有目标峰(成熟的方法)。5. 该仪器流动相基本为乙腈和纯水。观察喷雾状态，是连续喷雾的。SQD没提示错误，参数也都能达到设置状态。用的ESI+， scan模式6. 洗过一级锥孔未解决，重启软件、电脑、SQD，均未解决。7.仪器的Masslynx console界面最近一直显示local，在被污染前就这样。是否软件有问题，造成通信出错？还是硬件的某部件堵了？有遇到类似情况吗，如何解决呢

Q1.引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种,无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。(1) 去保护：加入Deblocking脱去碱基上5'- OH的保护基团DMT，获得游离的5'- OH；(2) 耦合：同时加入活化剂和新的碱基，新的碱基5'-OH仍然被DMT保护，3'端被活化与溶液中游离的5'-OH发生耦合反应；(3) 封闭：耦合反应中极少数5'- OH没有参加反应，用封闭试剂终止其后继续发生反应；(4) 氧化：加入氧化剂使其由核苷亚磷酸酯形成更稳定的核苷磷酸酯。Q2.引物合成后如何处理？切割与脱保护基：将合成好的寡核苷酸链从支持物上化学切割下来。常用新鲜的浓氨水来裂解CPG与初始核苷之间的酯键。断裂下来的寡核苷酸带有自由的3'羟基。纯化：根据所合成寡核苷酸的组成和应用来选定纯化的方法。常用的纯化方法有：C18、OPC、PAGE和HPLC。定量：根据寡核苷酸在260nm处的紫外吸收来定量。储存：分装抽干。Q3.需要什么级别的引物？根据实验需要，确定订购引物的纯度级别。应用引物长度要求纯度级别要求一般PCR扩增60 basePAGE诊断PCR扩增 40baseHEPD, PAGEDNA测序20base左右HEPD亚克隆，点突变等根据实验要求定HEPD, PAGE，HPLC基因构建（全基因合成）根据实验要求定HEPDPAGE反义核酸根据实验要求定HEPDPAGE修饰引物根据实验要求定PAGE, HPLCQ4.引物的质量是不是跟序列有关？四种碱基的性质和各自保护基的性质都有差别。所以合成难度是不一样的。难度最大的当属GC重复多的和序列中还有多个连续的G的引物。尤其对于后者，国内公司一般都做不了20个G以上的引物。实验证明，如果引物中有超过三个连续G的结构，传统方法得到的产物质量就会开始下降。而且目前通用的脱盐、OPC和PAGE方法都无效。鼎国昌盛生物公司拥有的HEPD专利技术能够克服高GC或者高G含量引物的合成和纯化障碍，对普通引物、高GC引物和无论长短的oligo d（G）都能得到同样的非常好的结果。Q5.需要合成多少OD数？根据实验目的确定。一般PCR扩增，2 OD引物，可以做500-1000次50ul标准PCR反应。如果是做基因拼接或退火后做连接，1 OD就足够了。Q6.如何计算引物的浓度？引物保存在高浓度的状况下比较稳定。一般情况下，我们建议将引物的浓度配制成100pmol/ul，称为保存浓度，而引物的工作浓度一般配制成10-50pmol/ul。加水的体积（微升）可直接参照合成报告单上推荐的体积，也可按下列方式计算：V (微升)= OD数x 33 x 10000 /引物的分子量引物的分子量可以从合成报告单上获得。注意：1 OD260= 33 ug/ml。Q7.如何计算引物的Tm值？引物设计软件都可以给出Tm，与引物长度、碱基组成及所使用缓冲夜的离子强度有关。长度为25base以下的引物，Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = 81.5 + 16.6 x Log10 + 0.41 (GC%) - 600/size＊＊公式中，Size =引物长度。Q8.引物（含修饰）的分子量是如何确定的？非修饰的引物的分子量（MW）在随引物提供的报告单上可以找到。如果需要估计一个引物的分子量按每个碱基的平均分子量为324.5，引物的分子量=碱基数 x碱基的平均分子量，或按下列公式计算MW= (NA * WA) + (NC * WC) + (NG * WG) + (NT * WT) +(Nmod * Wmod)＋(Nx * Wx)+( NI* WI) +16* Ns-62.NA, NG, NC, NT, NI分别为引物中碱基A或G或C或T或I的数量，WA, WG ,WC, WT, WI分别为引物中碱基A或G或C或T或I的分子量，Nmod，Wmod分别为修饰基团的数目和分子量。对于混合碱基的分子量为混合碱基的分子量总合除以混合数，例如G+A混合的分子量为（313.21+329.21）/2 = 321.21。Ns为硫代数目，硫代每个位置增加分子量16。常规碱基分子量BaseMolecular WeightA313.21C289.18G329.21T304.19I314.2U290.17常规修饰基团分子量5’-Biotin405.453’-TAMARA623.605’-(6 FAM)537.463’-Dabsyl498.495’-HEX744.133’-(6 FAM)569.465’-TET675.243’-Amino Modifier C3153.075’-Cy5533.633’-Amino Modifier C7209.185’-Cy3507.593’-Thiol Modifier C3154.12Q9.如何溶解引物？干燥后的引物质地非常疏松，开盖前最好瞬时离心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或TE(pH8.0)缓冲液，室温放置几分钟，振荡助溶，离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水，因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5）,引物在这种条件下不稳定。Q10.如何保存引物？引物合成后，经过一系列处理和纯化步骤，旋转干燥而成无色或白色絮状干粉。干 粉：运输时常温运输，-20℃可以保存一年。储存液：配好后分装成几管，避免反复冻融，-20℃可以保存半年。工作液：常规使用，4℃保存，也可-20℃保存，但应避免反复冻融。修饰荧光引物：需要避光保存，尽快使用为宜。Q11.最长可以合成多长的引物？我们合成过100base的引物，但是产率很低。除非需要，建议合成片段长度不要超过80base。引物越长，出现问题的概率就越大，按照目前的引物合成效率，大于80base的粗产品，全长引物的百分比不高，后续处理还有丢失很多，最后的产量很低。Q12.为什么修饰引物的产量要比一般引物低，价格要高?主要因为是修饰单体稳定性较差，偶连时间长，效率低，最后得到的产量自然低于一般的引物。修饰引物通常需要PAGE或HPLC纯化，纯化过程损失大。修饰引物使用的原料是一般引物原料的几百倍，所以产品的价格也高。Q13.引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题？连接反应需要引物的5'磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，需要检查载体的酶切效果，需要改善引物退火的条件。SiRNA分子具有特殊的对称结构，退火的难度较大，退火时需要提高退火温度。Q14.为什么引物的OD260/OD280小于1.5？需

[align=center][font='宋体'][size=18px]流动注射测定阴离子合成洗涤剂优势和操作心得[/size][/font][/align][align=left][/align][align=left][font='仿宋'][size=18px]1[/size][/font][font='仿宋'][size=18px]、[/size][/font][font='仿宋'][size=18px]阴离子合成洗涤剂[/size][/font][/align][align=left][font='仿宋'][size=16px]阴离子合成洗涤剂的主要成份就是阴离子表面活性剂。表面活性剂是一种能降低水和其他溶液体系的表面张力或界面张力的物质，表面活性剂常按活性剂部分所处的状态分类，活性部分是阴离子的就称为阴离子表面活性剂，其主要成分是烷基磺酸盐、烷基硫酸盐、烷基羧酸盐和烷基磷酸盐。水体中表面活性剂主要来源于生产过程的污染和使用性污染，包括洗涤剂生产的废水、洗衣工厂的废水以及大量家庭污水的排放。直链的烷基磺酸不易氧化和生物分解，污染的程度较为严重，因而阴离子表面活性剂已成为当前水污染的重要指标之一。我国生活饮用水水质标准中规定阴离子合成洗涤剂不得超过0.3 mg/L。[/size][/font][/align][align=left][font='仿宋'][size=18px]2[/size][/font][font='仿宋'][size=18px]、[/size][/font][font='仿宋'][size=18px] 阴离子合成洗涤剂的检测方法[/size][/font][/align][font='仿宋'][size=16px]阴离子合成洗涤剂在国家生活饮用水卫生标准（GB5750-2006）中的检验方法为亚甲蓝分光光度法和二氮杂菲萃取分光光度法。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]2.1[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]亚甲蓝分光光度法[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]亚甲蓝分光光度法的原理是亚甲蓝染料在水溶液中与阴离子合成活性剂形成易被有机溶剂萃取的蓝色化合物。未反应的亚甲蓝则仍留在水溶液中。根据有机相蓝色的强度，测定阴离子合成活性剂的含量。推荐的曲线范围：0.1-1.0μg/mL检出限[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.050mg/L（取样量为100mL）。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]2.2[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]二氮杂菲萃取分光光度法[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]二氮杂菲萃取分光光度法的原理是水中阴离子合成活性剂与Ferroin（Fe[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]2+[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]与二氮杂菲形成的配合物）形成离子缔合物，可被三氯甲烷萃取，于510 nm波长下测定吸光度。推荐的曲线范围：0.025-0.5μg/mL,检出限[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.025mg/L（取样量为100mL）。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]2.3国标[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]方法的特点：[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]两种方法[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]均需使用三氯甲烷进行萃取。三氯甲烷是一种易挥发的有机试剂，为可疑致癌物，具刺激性，遇光照会与空气中的氧作用，逐渐分解而生成剧毒的[/size][/font][url=http://baike.baidu.com/view/62695.htm][font='仿宋'][size=16px]光气[/size][/font][/url][font='仿宋'][size=16px]（碳酰氯）和[/size][/font][url=http://baike.baidu.com/view/77508.htm][font='仿宋'][size=16px]氯化氢[/size][/font][/url][font='仿宋'][size=16px]。在分析测定过程中会对实验人员产生危害。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]在比色时需要通过塞脱脂棉的漏斗将三氯甲烷过滤，目的是干燥三氯甲烷，但是过滤时脱脂棉不仅会吸附三氯甲烷中的有色成分而且脱脂棉塞得松或紧都会影响比色结果。[/size][/font][align=left][font='仿宋'][size=18px]3、流动注射测定阴离子合成洗涤剂[/size][/font][/align][font='仿宋'][size=16px]连续流动分析技术Continuous Flow Analysis Technology（简称CFA）是将检测中生成有色化合物过程中的各个化学反应步骤设计成相互串联的化学反应器具，使样品及反应试剂进入此流路，自动完成反应，最终形成的有色化合物进入比色计进行比色，再通过数据处理器自动计算出结果。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]目前国标方法中并没有连续流动分析仪测定阴离子合成洗涤剂的方法。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]连续流动分析仪测定阴离子合成洗涤剂的检出限小于0.05mg/L。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]3[/size][/font][font='仿宋'][size=16px].[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]1 [/size][/font][font='仿宋'][size=16px]连续流动分析技术的特点[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]连续流动分析技术作为一种新的分析技术，不仅具有操作简便、快捷高效的优势，而且简化了水样的处理过程，通过泵管来控制试剂与样品的使用量，比国标方法的检出限低，精密度好，提高了结果的准确度，在水质分析中发挥了重要作用，实现了自动在线测定水中阴离子合成洗涤剂，与国标方法相比较不仅降低了劳动成本，而且分析速度快，准确度和精密度高，试样和试剂的用量少，显著提高了工作效率，适合于大批量的水质分析工作。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]特别是连续流动分析技术在分析阴离子合成洗涤剂时，是在一个相对封闭的环境中进行，这样减少了实验人员与有害试剂长时间的接触，避免了三氯甲烷对实验人员的的健康损害。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]3.3[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]、连续流动分析仪在测定阴离子合成洗涤剂的注意事项[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]连续流动分析仪在测定阴离子合成洗涤剂时，需要对所用试剂：碱性亚甲蓝、酸性亚甲蓝、三氯甲烷进行脱气，否则在实验中会出现干扰的气泡峰，故厂家推荐的脱气方法是用超声波脱气2-3 h，或者用氦气脱气10min。由于氦气是进口的，价格较高，在实验中发现，临用前将碱性亚甲蓝、酸性亚甲蓝用超声波脱气约1h即可，三氯甲烷用0.22μm的有机滤膜进行抽滤，这样不仅缩短了超声时间，而且实验结果也是令人满意的。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]连续流动分析技术的缺点是甭管一定要压好压紧，否则会出现管路不进样，基线走不稳的情况。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]连续流动分析仪的操作与使用的方便程度主要由操作软件决定，操作系统应体现出操作方便的特点，但不同厂家的操作系统却不尽相同。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]测定阴离子合成洗涤剂时，需要用三氯甲烷进行萃取，有的厂家选择的是重力分层来分离有机相与水相，有的是选用有机滤膜分离，有机滤膜分离较重力分层效果要好些。[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]总之，虽然流动注射尚未写入国标，但它具备的优势和对实验带来的便捷性和安全性，值得我们去优化推广，期待早起写入国标，发挥在阴离子[/size][/font][font='仿宋'][size=16px]测定中更大的优势。[/size][/font]

1.多肽合成的基本原理?多肽固相合成法是多肽合成化學的一個重大的突破。它的最大特點是不必純化中間產物，合成過程可以連續進行，進而為多肽合成的自動化奠定了基礎。目前全自動多肽的合成，基本都是固相合成。其基本過程如下：基於Fmoc化學合成，先將所要合成的目標多肽的C-端氨基酸的羧基以共價鍵形式與一個不溶性的高分子樹脂相連，然後以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點，同其他的氨基酸已經活化的羧基作用形成肽鍵，不斷重複這一過程，即可得到多肽。根據多肽的氨基酸組成不同，多肽後處理方式不同，純化方式也有差異。2.做免疫用的多肽多長為合適?答：一般約10-15個氨基酸，當然長一些免疫效果好一些，不過合成費用也會增加。MAP多肽則希望長度在15aa以上，效果較好。另外，10aa以下的多肽免疫效果比較差。3.免疫用多肽的純度需要很高嗎?答：一般而言， 免疫用Peptide，70-85%即可。4.我們合成的多肽溶解性不好，多肽就有問題對嗎?答：很難準確預測一個多肽的溶解性及合適的溶劑是什麼。如果多肽難以溶解就認為多肽合成有問題這個觀念並不正確。5.多肽狀態是如何?如何保存儲存?答：我們提供的多肽是粉末狀，一般為灰白色，組成不同，多肽粉末的顏色有差異，多肽一般長期保存需要避光保存，並應保存在-20度，短期可以保存在4度。可以短時間的話是以室溫運輸。6.如何溶解多肽?答：溶解多肽是非常複雜的事情，一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點試驗，在沒有確定合適的溶劑前千萬不要合部溶解。下列方法有助於您選擇合適的溶劑：(1)判定多肽的電荷特定，設定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH為-1；鹼性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2為+1,其他氨基酸的電荷為0。計算出將電荷數。(2)如果淨電荷數 0，多肽為鹼性，用水溶解：如果不溶解或溶解性不大，加入醋酸(10%以上)；如果多肽還不能溶解，加入少量TFA(25ul)溶解，然後加入500ul水稀釋。(3)如果淨電荷數0，多肽為酸性，用水溶解；如果不溶解或溶解性不大，加入氨水(25ul)溶解，然後加入500ul水稀釋。(4)如果淨電荷數=0，多肽為中性，一般需要用有機溶劑如乙腈，甲醇或異丙醇，DMSO等溶解。還有人建議需要尿素來溶解疏水性很大的多肽。7.非HPLC純化的多肽中有哪些雜質?答：粗品和脫鹽級別的多肽中多肽和非多肽類雜質：如非全長多肽和多肽後處理的一些原料如DTT、TFA等8.HPLC純化的多肽有哪些雜質?答：經過HPLC純化的多肽，仍會有一些一些雜質存在，其中的雜質主要是短肽和微量TFA。9.多長的多肽為合適?答：多肽合成需要考慮多肽的長度，電荷，親疏水性等因素。長度越長，合成粗品的純度和產率都隨著降低，純化的難度和無法合成的幾率就會大些。當然多肽功能區的序列是無法改變的，但是為了多肽的順利合成，有時不得不在功能取的上下游增加一些輔助氨基酸，以改善多肽的溶解性和親疏水性。如果多肽太短，合成也可能有問題，主要問題是合成的多肽在後處理過程中有一定的難度，5肽以下的多肽，一般要有疏水的氨基酸，否則後處理難度加大。15個氨基酸殘基以下的多肽一般都可以得到滿意的產率和得率。10.如何從多肽序列中判定多肽的溶解性?(1)多肽中如果含有高比例的疏水性很強的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，多肽很難溶解與水性溶液中或根本不可能溶解。這些氨基酸無論是純化或合成，都有可能有問題。(2)一般情況下疏水性氨基酸的比例50%，不能連續5個連續aa為疏水性，帶電荷的氨基酸的(正電荷K,R,H,N-terminus,負電荷D,E,C- terminus)的比例達到20%，在多肽的N或C短如果能增加極性氨基酸，也可以改善溶解性。11.為什麼含有Cys,Met,或Trp的多肽難合成?答：含有Cys, Met,或Trp的多肽難以合成，同時難以獲得高純度的產品。主要因為這些基團不穩定，易氧化。這些多肽的使用和儲存都需要特別注意，避免反復開啟蓋子。12.為什麼有些多肽的合成產率或純度會比較低?答：多肽合成與引子合成有比較大的區別，不能合成的引子很少，但是不能合成的多肽經常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr這些氨基酸比鄰或重複時，多肽鏈在合成過程中不能完全舒展溶解，合成效率下降。以下幾種情形，合成效率和產物的純度都比較低，如：重複Pro,Ser-Ser，重複Asp，4個連續Gly等.13.多肽是如何純化的?答：多肽純化一般使用反相柱(如C8，C18等)，214nm。緩衝體系通常為含TFA的溶劑，pH 2.0 。Buffer A為含0.1%TFA in ddH2O，Buffer B為1%TFA/ACN/ pH 2.0。純化前用Buffer A溶解；如果溶解不好，用Buffer B溶解後，然後用Buffer A稀釋；對疏水性強的多肽，有時還需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析多肽粗產物，如果多肽不長(15aa以下)，一般會有主峰，主峰通常為全長產物；對於20aa以上的長肽，如果沒有主峰，HPLC需搭配Mass來判定分子量，進而確定哪個峰是所要合成的多肽。

1727年英国的牧师、化学家哈尔斯（Hales,S.1677－1761），用氯化铵与石灰的混合物在以水封闭的曲颈瓶中加热，只见水被吸入瓶中而不见气体放出。177４年化学家普利斯德里重作这个实验，采用汞代替水来密闭曲颈瓶，制得了碱空气（氨）。他还研究了氨的性质，发现它易溶于水、可以燃烧，还发现在氨气中通以电火花时，其容积增加很多，而且分解为两种气体；一种是可燃的氢气；另一种是不能助燃的氮气。从而证实了氨是氮和氢的化合物。其后戴维等化学家继续研究，进一步证实了2容积的氨通过火花放电之后，分解为1容积的氮气和３容积的氢气。 　　19世纪以前，农业生产所需氮肥的来源，主要是有机物的副产物和动植物的废物，如粪便、种子饼、腐鱼、屠宰废料、腐烂动植物等。那时哨石的产量很有限，而且主动用于军工业生产。1809年，智利的沙漠地区发现了一个巨大的硝酸钠矿床，很快就开发利用。到1850年世界上硝盐的供应，主要是智利。随着农业的发展和军工生产的需要，迫切要求建立规模巨大的探索性的研究。他们设想，能不能把空气中大量的氮气固定下来。于是开始设计以氮和氢为原料的合成生产氨的流程。 　　尤其是在18４7年，德国发生了农业危机，首都柏林爆发了抢夺粮食的“土豆革命”，引起了政府重视生产粮食，因而开展了对土壤的研究。在土壤的肥料问题上，曾经流行一种腐殖质理论，认为作物是依赖土壤中的腐殖质为养料的。而腐殖质这种东西只能来源于腐败的动植物体，因此肥料的来源是有限的。当时德国的著名化学家李比希致力于研究植物所需要的碳和氢的来源问题。为此，他对稻草和其它许多干草的分析中发现，植物中含碳的量不是因土壤的条件不同而有所不同，因此他支持植物中的碳来自大气的观点。他在分析各种植物的汁液时，发现其中都含有氨，同时发现雨水中也有氨。大气中的氮很不活泼，也不能直接被植物所吸收，而氨却容易被植物吸收，因此他判断植物是通过吸收氨来获得含氮养料的。李比希的实验结论，第一，指出腐殖质理论的局限性，把植物氮的来源限制于腐殖质；第二，指出了腐殖质理论的表面性，只知道植物氮来源于腐殖质，而不知道氮是怎样被植物吸收的；第三，指明了开辟新的氮肥源的重要性。 　　1900年法国化学家勒夏特利是最先研究氢气和氮气在高压下直接合成氨的反应。很可惜，由于他所用的氢气和氮气的混合物中混进了空气，在实验过程中发生了爆炸。在没有查明发生事故的原因的情况下，就放弃了这项实验。德国化学家能斯特（Nernst,W.1864-1941），对于研究具有重大工艺价值的气体反应有兴趣，民研究了氮、氢、氨的气体反应体系，但是由于他在计算时，用了一个错误的热力学据，以致得出不正确的理论，因而认为研究这一反应没有什么前途，把研究停止了。 　　虽然在合成氨的研究中化学家遇到的困难不少，但是，德国的物理学家、化工专家哈伯（Haber,F.1868－1934）和他的学生勒罗塞格诺尔（LeRossignol,R.）仍然坚持系统的研究。起初他们想在常温下使氨和氢反应，但没有氨气产生。又在氮、氢混合气中通以电火花，只生成了极少量的氨气，而且耗电量很大。后来才把注意力集中在高压这个问题上，他们认为高压是最有可能实现合成反应的。根据理论计算，表明让氢气和氮气在600℃和200个大气压下进行反应，大约可能生成8％的氨气。如果在高压下将反应进行循环加工，同时还要不断地分离出生成的氨气，势必需要很有效的催化剂。为了探索有效的催化剂，他们进行了大量的实验，发现锇和铀具有良好的催化性能。如果在175－200个大气压和500－600℃的条件下使用催化剂，氮、氢反应能产生高于6％的氨。 　　哈柏把他们取得的成果介绍给他的同行和巴更苯胺纯碱公司，并在他的实验室做了示范表演。尽管反应设备事先做了细致的准备工作，可以实验开始不久，有一个密封处就受不住内部的压力，于是混合气体立即冲了出来，发出惊人的呼啸声。 他们立即把损坏的地方修好，又进行几小时的反应后，公司的经理和化工专家们亲眼看见清澈透明的液氨从分离器的旋塞里一滴滴地流出来。但是，实验开始时发生的现象确实是一个严重的警告，说明在设计这套装置，必须采取各种措施，以避免不幸事故发生。哈伯的那套装置，在示范表演后的第二天发生了爆炸。整个设备倾刻之间变成一堆七歪八扭的烂铁。随后，刚刚安装好的盛着催化剂锇的圆柱装置也爆炸了。这时金属锇粉遇到空气又燃烧起来，结果，把积存备用的价值极贵的金属锇几乎全部变成了没有多用处的氧化锇。尽管连续出了一些爆炸事故，但巴登公司的经理布隆克和专家们还是一致认为这种合成氨方法具有很高的经济价值。于是该公司不惜耗巨资，还投入强大的技术力量、并委任德国化学工程专家波施（Bosch,C.1874－1940）将哈伯研究的成果设计付诸生产。波施整整花了5年的时间主要作了两项工作。第一，从大量的金属和它们的化合物中筛选出合成氨反应的最适合的催化剂。在这项研究中波施和他的同事做了两万多次实验，才肯定由铁和碱金属的化合组的体系是合成氨生产最有效、最实用的催化剂，用以代替哈伯所用的锇和铀。第二，是建造了能够高温和高压的合成氨装置。最初，他采用外部加热的合成塔，但是反应连续几小时后，钢中的碳与氨发生反应而变脆，合成塔很快地报废了。后来，他就将合成塔衬以低碳钢，使合成塔能够耐氢气的腐蚀。第三，解决了原料气氮和氢的提纯以及从未转化完全的气体中分离出氨等技术问题。经波施等化工专家的努力，终于设计成了能长期使用的操作的合成氨装置。1910年巴登苯胺纯碱公司建立了世界上第一座合成氨试验工厂，1913年建立了大工业规模的合成氨工厂。这个工厂是第一次世界大战期间开始为德国提供当时其缺少的氮化合物，以生产炸药和肥料。

众所周知，紫杉醇是重要的抗癌药物，其作用机制是抑制癌细胞的有丝分裂。紫杉醇对包括乳腺癌在内的多种癌症有很好的治疗效果，其最高销售额曾超过10亿美元。虽然随着专利的到期，其售价有了较大幅度的降低，但是其价格仍然相当昂贵，一个疗程的价格超过1万美元。 紫杉醇是植物来源的抗癌药物，最初治疗一个病人需要4-5棵太平洋红豆杉的树皮。由于太平洋红豆杉数量非常有限，生长周期很长，并且剥去红豆杉树皮后回导致红豆杉的死亡，因此使用红豆杉树皮来提取紫杉醇治疗癌症病人面临很强的伦理困境。面对此两难境地，科学家发挥科学创新精神，开发出了红豆杉植物细胞培养技术来获取紫杉醇，随着研究是深入，科学家发现可将使用decorative yew的树叶提取紫杉醇的前体，使用化学合成的方法合成紫杉醇。由于decorative yew树叶来源很广，使用树叶也不会杀死树木本身，加之后续合成的高效性，这种提取加合成的方法称为紫杉醇的主要来源。化学全合成是获得化合物的主要手段之一，科学家经过努力也成功地合成了紫杉醇，由于紫杉醇结构复杂，化学合成需要35-50步，得率很低，因此紫杉醇的化学全合成科学意义很大，实际应用的价值不大。　　微生物具有底物利用广泛，生长速度快，研究深入，大规模生产容易等优点，非常适合药物的生产，与紫杉醇同为萜类化合物的青蒿素已经通过精确的途径改造和优化，已经实现了工业化生产，这表明通过代谢工程和合成生物学手段在微生物中合成宿主本身不产生的复杂小分子是可行的，也为后续的相关研究提供可供借鉴的策略和经验。 美国麻省理工大学和Tufts大学科学家沿着这个思路，合成紫杉醇的前体taxadiene和 taxadiene-5-alpha-ol。虽然大肠杆菌并不能够产生这两种物质，但是合成他们的前体IPP是大肠杆菌生理代谢过程中的一个中间产物，IPP能够通过两部的酶促反应合成taxadiene。催化后续两部反应的酶类已经从植物中克隆出来。　　美国科学家首先优化了IPP的生物合成，以大量生成IPP为后续的酶促反应提供底物。 IPP的生物合成有8个步骤，研究发现其中的四个步骤是限速步骤，通过提高限速步骤的酶量，控制整个催化的效率，大量的合成了IPP。接着讲植物的催化酶引入到工程菌株中，优化催化酶的密码子和表达水平，产生了大量的taxadiene。与只加入催化酶没有进行相关优化相比，其产量提高了1500倍，也比已有的文献报道的产量提高了1000倍。接着科学家有加入能够催化taxadiene合成 taxadiene-5-alpha-ol的酶类，将合成紫杉醇的途径有往前迈了一步。　　虽然离合成能够化学转化的前体浆果赤霉素(baccatin III)还有比较远的距离，但是本研究表明在弄清楚紫杉醇的合成途径后，使用大肠杆菌合成紫杉醇很有潜力。 本研究中使用的平台技术和手段对合成其他化合物具有通用性，因此使用代谢工程结合合成生物学手段将开启动植物来源的活性小分子微生物表达的大门。　　Source: “Isoprenoid Pathway Optimization for Taxol Precursor Overproduction in Escherichia coli” by Parayil Kumaran Ajikumar, Wen-Hai Xiao, Keith E. J. Tyo, Yong Wang, Fritz Simeon, Effendi Leonard, Oliver Mucha, Too Heng Phon, Blaine Pfeifer, Gregory Stephanopoulos. Science, 1 October, 2010. Funding: Singapore-MIT Alliance, National Institutes of Health and a Milheim Foundation Grant for Cancer Research

3月26日下午，北京市政府召开常务会议，研究《北京市加快医药健康协同创新行动计划（2024-2026年）》等事项。会议强调，医药健康产业是推动北京创新发展的“双发动机”之一。要在连续两轮三年行动计划实施效果良好的基础上，充分发挥本市医药健康产业发展的显著优势，围绕新一轮三年行动计划明确的发展目标、重点任务，强化创新驱动，持续加力推动医药健康产业发展取得新的更大成效，为促进首都高质量发展提供有力支撑。要强化“三医”联动协同，加大改革创新力度，做好创新药、创新器械研产用全流程服务，打通临床试验、注册申报、入院应用等方面堵点。要加强细胞基因治疗、数字医疗、合成生物制造等新兴领域前瞻性布局，加大政策支持力度，加快形成新优势，培育新的增长点。要持续用好产业投资基金，促进医药健康产业发展。全力抓好医药健康研发机构、创新平台、科创企业等服务工作，以更大力度吸引和利用外资，推动更多优质项目在京落地发展。要完善市医药健康统筹联席会机制，加强统筹调度、督促落实，优化目标体系，健全项目调度机制，以清单化管理、项目化推进方式推动产业项目尽快落地见效，确保三年行动计划重点任务落地实施。[来源：北京日报][align=right][/align]

[b]微波有机合成反应的新进展[/b][i]王静，姜凤超[/i]摘 要：综述了近年来微波辐射技术在有机合成应用中的新进展。 着重介绍了微波有机合成反应技术及其在重要有机合成反应中的应用。关键词：微波化学，有机反应，微波辐射　　微波最早被人们认识并应用在军事通讯领域，本世纪 40 年代后期逐渐应用于工业、农业、医疗、科学研究等各种领域。 在有机合成应用中的研究始于1986 年，当年加拿大化学家 Gedye 等发现微波辐射下的 4-氰基苯氧离子与氯苄的 SN2 亲核取代反应可以使反应速率提高 1 240 倍，并且产率也有不同程度的提高。 这一发现得到人们的高度重视并引起化学界的极大兴趣。 自此，在短短的十几年里，微波辐射促进有机化学反应的研究已成为有机化学领域中的一个热点，并逐步形成了一门引人注目的全新领域——MORE 化 学 (Microwave Induced Organic Reaction Enhancement Chemistry) 。 我国近年来关于MORE化学的研究也越来越多，发表的综述文章已有多篇,现仅就最近的进展作一综述。 　1. 基本原理 微波(microwave， MW)即指波长从 1 mm～1 m，频率从 300 MHz～300 GHz 的超高频电磁波，广泛应用于雷达和电子通讯中。 为避免相互干扰，国际上规定工业、科学研究、医学及家用等民用微波频率一般为 900( ±15) MHz 和 2450( ±50) MHz。 微波加速有机反应的原理，传统的观点认为是对极性有机物的选择性加热，是微波的致热效应。 极性分子由于分子内电荷分布不平衡，在微波场中能迅速吸收电磁波的能量，通过分子偶极作用以每秒 4. 9 ×109 次的超高速振动，提高了分子的平均能量，使反应温度与速度急剧提高。 但其在非极性溶剂(如甲苯、正己烷、乙醚、四氯化碳等) 中吸收 MWI 能量后，通过分子碰撞而转移到非极性分子上，使加热速率大为降低，所以微波不能使这类反应的温度得以显著提高。实际上微波对化学反应的作用是复杂的，除了具有热效应以外，还具有因对反应分子间行为的作用而引起的所谓“非热效应”,已有文献报道此观点。2. 微波有机合成反应技术 与一般的有机反应不同，微波反应需要特定的反应技术并在微波炉中进行。 微波有机合成反应技术一般分为密闭合成反应技术和常压合成反应技术等。随着对微波反应的不断深入研究，微波连续合成反应新技术逐渐形成并得到发展。[color=red]最后有全文下载[/color]

[align=center][size=18px]含氟富氮多孔有机聚合物的合成及其对水中全氟辛酸的去除[/size][/align][size=18px][font=&]摘要[/font][font=&]全氟辛酸(PFOA)在自然环境中难以降解,会通过富集渗透污染水体和土壤,从而对自然环境和人体健康造成影响。开发成本低、效率高、环保的吸附剂实现环境水体中PFOA的高效吸附去除是解决PFOA污染的有效途径之一。[/font][font=&]本研究采用无溶剂一锅法设计、制备了一种含氟富氮多孔有机聚合物(POP-3F),通过引入氟原子增加了材料的疏水性,增加了主客体分子间的疏水作用、氟-氟相互作用,提升了材料对PFOA的吸附效果。使用扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、X-射线衍射仪(XRD)、固体核磁(ssNMR)、X射线光电子能谱仪(XPS)、热分析系统(TGA)等对POP-3F进行了表征。[/font][font=&]结合[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱法([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS),研究了POP-3F在不同pH、盐浓度和腐植酸条件下对PFOA的吸附性能。在pH值为2时,POP-3F对PFOA的去除率最高达到98.6%,可用于去除酸性工业废水中的PFOA。[/font][font=&]并且POP-3F对于PFOA的去除率几乎不受NaCl和腐植酸浓度的影响,在加入NaCl后,POP-3F表面会形成双电层,可以削弱POP-3F与PFOA之间的静电相互作用,去除率仅下降了1%。腐植酸与PFOA存在竞争吸附,在高浓度腐植酸条件下,POP-3F对PFOA的去除率仅下降了0.73%。在最佳pH条件下考察了吸附等温线和吸附动力学,通过数学模型拟合了实验结果,探究了吸附机理。[/font][font=&]结果显示,POP-3F的理论容量为191 mg/g,高于活性炭和其他多数吸附剂,表现出较高的吸附容量。此外,POP-3F对PFOA的吸附去除几乎不受基质种类的影响,在模拟自然水中吸附效果略有降低(仅降低0.1%),经过5次吸附-解吸循环后,对PFOA的去除率仅微幅下降(降低0.67%),表明其具有循环使用和可再生性,在实际PFOA污染废水处理中具有广阔的应用前景。[/font][font=&]1、材料制备[/font][font=&]将1,4-双(2,4-二氨基-1,3,5-三嗪)-苯(BDTB,1185.2 mg, 4 mmol)、对三氟甲基苯甲醛(3F-TMA,1393 mg, 8 mmol)和二甲基亚砜(DMSO,60 mL)置于100 mL双颈圆底烧瓶中混匀。[/font][font=&]在氮气气氛下180 ℃加热反应24 h,将产物用10 mL DMSO和甲醇在10000 r/min条件下各离心洗涤3次,用甲醇索氏提取24 h后在120 ℃下真空干燥,得到的POP-3F为凝胶状固体,研磨后为白色粉末,收率为40.22%。POP-3F的合成路线见下图。[/font][font=&] POP-3F的合成示意图[/font][font=&]2、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS方法[/font][font=&]Atlantis T3色谱柱(100 mm×2.1 mm, 3 μm,美国Waters公司) 流动相5 mmol/L乙酸铵(A)和甲醇(B) 柱温40 ℃ 流速0.2 mL/min,进样量2 μL。[/font][font=&]梯度洗脱程序:[/font][font=&]0~14 min, 80%A~10%A 14~16 min, 10%A 16~16.01 min, 10%A~80%A 16.01~20 min, 80%A。[/font][font=&]电喷雾电离(ESI),负离子模式 多反应监测模式(MRM) 离子源温度:500 ℃ 离子源电压:-4500 V 气帘气压力:2.41×105 Pa 雾化气压力:2.76×105 Pa 辅助器压力:2.76×105 Pa。其他质谱参数见原文表1。[/font][font=&]3、PFOA标准曲线绘制[/font][font=&]PFOA的定量采用外标法,首先用去离子水配制质量浓度为100 mg/L的PFOA储备液,再用去离子水稀释为100、50、10、5、1、0.1 μg/L的标准工作液。用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS分析上述标准工作液,以PFOA的质量浓度为横坐标(x, mg/L),峰面积为纵坐标(y),绘制标准曲线。[/font][font=&]在最优条件下,PFOA在0.1~100 μg/L范围内线性关系良好,回归方程为y=2.04×106x-1.13×106,相关系数(r2)为0.999。方法的检出限(LOD, S/N=3)为0.004 μg/L,定量限(LOQ, S/N=10)为0.013 μg/L。[/font][font=&]4、吸附实验[/font][font=&]取50 mL 1 mg/L的PFOA溶液,将溶液pH调节至2,再加入10 mg POP-3F,超声1 min使POP-3F固体分散开。然后在25 ℃下以200 r/min恒温振荡吸附24 h,吸附后经过滤将POP-3F与上清液分开,得到的上清液经聚醚砜针式过滤器(0.22 μm×13 mm)过滤后进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS分析。吸附实验所需器具均由聚丙烯(PP)材质制成,整个过程避免接触聚四氟乙烯和玻璃材质的物品。[/font][font=&]5、脱附实验[/font][font=&]根据参考文献,选择甲醇为洗脱剂进行脱附实验,稀释储备液配制质量浓度为1 mg/L的PFOA溶液(pH=2),再加入10 mg的POP-3F超声1 min。在25 ℃下以200 r/min恒温振荡6 h后通过0.2 μm的针式过滤器(聚醚砜膜)过滤,将所得固体分散在50 mL甲醇中,超声30 min,过滤后在24 h内进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS分析。[/font][font=&]6、材料的吸附性能[/font][font=&]吸附动力学[/font][font=&]采用上述方法进行吸附实验,在振荡间隔时间为5、10、20、30、60、120、240、360、720、1440 min时分别用注射器取300 μL的溶液,用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS测定。t时间下的吸附量(qt, mg/g)和去除率(R)的计算公式如下:[/font][font=&]式中：[/font][font=&]C0和Ct分别表示吸附前和t时间时溶液中PFOA的质量浓度(mg/L) V表示溶液的总体积(L) m表示吸附剂的质量(g)。[/font][font=&]吸附等温线[/font][font=&]取50 mL一定浓度(1、3、5、7、9、12、15、20 mg/L)的PFOA溶液,采用上述方法进行吸附实验,并根据下式计算平衡吸附量qe(mg/g)。[/font][font=&]式中：[/font][font=&]Ce表示吸附平衡时溶液中PFOA的含量(mg/L)。[/font][font=&]结论[/font][font=&]本文通过无溶剂一锅法成功合成了一种含氟富氮多孔有机聚合物POP-3F,在POP-3F中引入三氟甲基可有效提高材料与PFOA之间的静电相互作用和氟-氟相互作用,进而提高POP-3F对PFOA的吸附亲和力。利用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS进行吸附实验,发现在酸、盐和腐植酸存在的情况下,POP-3F对PFOA仍有很好的去除效果,且具有良好的可循环使用性能。本文提出的POP-3F材料合成过程简单,具有作为经济、环保、高效的PFOA吸附剂的潜力。[/font][font=&]1.郑州大学化学学院, 河南 郑州 450001[/font][font=&]2.郑州大学风味科学研究中心, 中原食品实验室, 河南 郑州 450001[/font][font=&]文章信息[/font][font=&]色谱, 2024, 42(6): 572-580[/font][font=&]DOI: 10.3724/SP.J.1123.2024.04006[/font][/size]

合肥国肽生物科技有限公司（简称：国肽生物TM）成立于2014年，是一家专业从事多肽产品的研发、生产和销售以及多肽技术转让的国家级高新技术企业。BP公司成立之初，便成功收购了国内几家多肽、抗体公司，是目前国内最大的专业多肽合成、抗体制备、蛋白表达的规模型生产企业。　　国肽生物专长于荧光标记肽、同位素标记肽、人工胰岛素、药物肽、化妆品肽、长肽困难肽等产品的合成与研发，致力于学术水平的科研提升，搭建学术交流平台，促进前沿、专业的学术知识推广，推动多肽在生物医学材料等领域的研究与应用。公司产品广泛应用于药物研发，抗体的制备（包括单抗与双抗），荧光分子探针的构建以及细胞透膜研究、活体成像、新型材料研发和质谱分析等研究领域；目前我们已经与军科院、天津药物研究所、中科院物理研究所等研究机构，清华、北大、复旦等高校，以及国外著名药企建立了长期友好的合作交流关系。　　国肽生物以科技创新为动力，提升企业核心竞争力。公司拥有一支由行业内领军人才组成的研发创新团队，硕士研发人员占企业员工总数的15%以上，同时公司还邀请国内外顶级生物医学科学家担任科学顾问。公司成立首年，通过多肽生产设施的精细改良、多肽研发工艺的自主创新，突破了多肽产品快速化、规模化生产技术瓶颈，获得了7项实用新型专利和2项发明专利。　　国肽生物公司配备了一流的多肽合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，从美国、日本等国引进了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]、超高压液相色谱、紫外分光光度计等专用设备，以多肽合成与研发为核心，搭建起全产业链产品分析检测平台，为广大客户提供专业可靠的多肽及相关产品理化性质分析，纯度分析，质谱分析，CHN元素含量分析，红外，紫外光谱分析等分析检测服务。　　国肽生物的创立，源自于公司对多肽行业未来发展的认同，公司秉承“质量第一，服务至上”的经营理念，带着行业责任感与使命感，立志于在全球范围内树立一个民族品牌，重新引领肽行业的健康、快速发展。

按GB/T5009.35第一法（高效液相色谱法）做合成着色剂检测时用到200目聚酰胺粉（尼龙6），不知哪里有卖？哪里生产的？我找了好久都没找着。此外，糕点类淀粉含量高的食品经吸附剂吸附后用G3漏斗根本无法过滤，甚至G2都无法过，滤孔全被糊状淀粉堵塞了。请教各位高手们，如何是好？

对结构独特、活性显著的天然产物进行生物合成研究是从基因簇、生物合成途径及酶催化反应角度理解自然界“全合成”的生物-化学过程。中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室唐功利课题组多年来致力于复杂抗肿瘤天然产物的生物合成研究，经过几年的努力，该课题组最近在两个课题上均取得突破。 抗生素谷田霉素（Yatakemycin，YTM）可以抑制致病真菌，且对肿瘤细胞表现出极强的毒性（比抗肿瘤药物丝裂霉素的活性高约1000倍）；该家族化合物属于DNA烷基化试剂，典型的结构特征是吡咯吲哚环上的环丙烷结构。为了阐明其独特的生物合成机制，课题组利用全基因组扫描技术定位其生物合成基因簇，通过基因敲除结合生物信息学分析确定了基因簇边界。在对突变株的发酵检测中成功分离鉴定了中间体YTM-T的结构，并结合体外生化实验揭示了一类同源于粪卟啉原III-氧化酶（Coproporphyrinogen III oxidase）的甲基化酶以自由基机理催化YTM-T发生C-甲基化（J. Am. Chem. Soc., 2012, 134, 8831-8840），这是此类蛋白催化自由基甲基化反应的首例报道。这一阶段性结果为下一步阐明YTM结构中最重要的环丙烷部分生物合成途径奠定了基础。 萘啶霉素(Naphthyridinomycin，NDM)、奎诺卡星(Quinocarcin，QNC)及Ecteinascidin 743 (ET-743)均属于四氢异喹啉生物碱家族化合物，它们都具有显著的抗肿瘤活性，其中ET-743已发展为第一例海洋天然产物来源的抗肿瘤新药。这三种化合物都具有一个独特的二碳单元结构，其生物合成来源问题一直没有得到解决。为了揭示这一谜团，唐功利课题组在克隆了NDM和QNC生物合成基因簇的基础上，通过前体喂养标记、体内相关基因敲除-回补以及体外酶催化反应等多种实验手段相结合的方式，阐明了二碳单元的独特生源合成机制：NapB/D及QncN/L在催化功能上均属于丙酮酸脱氢酶及转酮醇酶的复合体，它们负责催化二碳单元由酮糖转移至酰基承载蛋白（ACP）上，而后经过非核糖体蛋白合成（NRPS）途经进入到最终的化合物中。这一结果发表在《美国国家科学院院刊》(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2012, 109, 8540-8545)上。这种将基础代谢中的酮糖直接转化为次级代谢所需要的二碳单元在非核糖体肽合成途经中是首次报道，该研究结果也有助于揭示海洋药物ET-743独特的二碳单元生物合成来源，为非核糖体聚肽类天然产物的组合生物合成带来新的前体单元。 上述研究工作得到国家自然科学基金委、科技部和中国科学院的资助。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201207/W020120704343205531340.pngYTM合成机制http://www.cas.cn/ky/kyjz/201207/W020120704343205536236.gif四氢异喹啉生物碱化合物的独特生源合成机制

1月17日，北京市合成生物制造产业创新发展工作推进会日前在北京昌平未来科学城举办。会上，[b]北京市合成生物制造技术创新中心和中关村合成生物制造产业集聚区揭牌并启动建设，旨在打造全市合成生物制造产业发展的“样板间”[/b]。北京市把合成生物制造产业作为未来产业的重要支撑，依托昌平区等重点产业承载区，大力推进合成生物制造产业创新发展，为服务北京国际科技创新中心建设，参与全球生物经济产业合作与竞争发挥支撑作用。据了解，筹建中的北京市合成生物制造技术创新中心落地昌平未来科学城，[b]重点布局[color=#0070c0]生物催化剂设计[/color]、[color=#0070c0]生物制造原料开发[/color]、[color=#0070c0]生物制造过程强化[/color]、[color=#0070c0]生物制造产品工程[/color]四大分中心[/b]，将围绕生物制造产业链、创新链、价值链开展全流程技术攻关，实现更多“从0到1”的突破，为引领生物制造产业创新发展筑牢基础。中关村合成生物制造产业集聚区以昌平全域为基底，以未来科学城为重点，分步规划建设创新孵化区、转化加速区、高端制造区、总部办公区“四大功能区”，有序串联“生命谷”和“能源谷”两大创新组团，衔接医药健康、先进能源、先进制造三大主导产业，更好地服务北京未来产业布局。近期将启动15万平方米起步区建设，打造集“总部办公+研发平台+孵化加速+小试中试”于一体的创新孵化空间，满足各类生物制造产业需求。会上，昌平区围绕创新驱动、金融赋能、生态搭建等方面签署系列合作协议。昌平区政府与北京化工大学签署合作协议，依托驻昌高校在合成生物制造领域的深厚积淀和引领优势，筹建北京合成生物制造技术创新中心。[来源：科技日报][align=right][/align]

引物篇1.引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3'端向5'端合成的，相邻的核苷酸通过3'→5'磷酸二酯键连接。第一步是将预先连接在固相载体CPG上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其5'-羟基的保护基团DMT，获得游离的5'-羟基；第二步，合成DNA的原料，亚磷酰胺保护核苷酸单体，与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3'端被活化，5'-羟基仍然被DMT保护，与溶液中游离的5'-羟基发生缩合反应。　第三步，带帽(capping)反应，缩合反应中可能有极少数5'-羟基没有参加反应(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应，这种短片段可以在纯化时分离掉。第四步，在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。经过以上四个步骤，一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。再以三氯乙酸脱去它的5'-羟基上的保护基团DMT，重复以上步骤，直到所有要求合成的碱基被接上去。合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。通过氨水高温处理，连接在CPG上的引物被切下来，通过OPC, PAGE等手段纯化引物，成品引物用C18浓缩,脱盐，沉淀。沉淀后的引物用水悬浮，测定OD260定量，根据定单要求分装。2.引物纯化方式有哪些，如何选择？◆　C18柱脱盐：有人称其为简易反相柱，它对DNA有特异性的吸附，可以被有机溶解洗脱，但不会被水洗脱，所以能有效地去除盐分。它不能有效去除比目的片段短的小片段。实际上，它是一种脱盐的作用。这种方法一般不会对普通PCR反应产生影响。对于需要用于测序、克隆的引物不能使用这个级别。 ◆　OPC纯化： OPC纯化是根据DNA保护基（DMTr基）和Cartridge柱中树脂间的亲合力作用的原理进行纯化目的DNA片段。OPC法纯化的DNA纯度大于95%。适用于40mer以下引物的纯化。◆　PAGE纯：PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对DNA片段进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA的方法。PAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法，纯化后的DNA纯度大于95%，对长链Oligo DNA (大于50mer)的纯化特别有效。 ◆　HPLC纯化：HPLC纯化是使用高效液相色谱的原理，对DNA片段进行纯化。纯度可以大于99%。主要用于短链和修饰引物的纯化。该法的弱点是成本较高，批量生产效率不高。3.引物的OD数如何定量？答：引物合成引物OD数是这样测定的：用紫外分光光度计，波长260nm，石英比色杯，光程为1厘米，测定溶液的光密度。测定时溶液的光密度最好稀释到0.2-1.0之间。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，用1ml水稀释测OD值。需要根据稀释倍数换算出母液的OD值。4.需要什么级别的引物？答：引物常用的纯化方式C18脱盐，OPC纯化，PAGE纯化，HPLC纯化。根据实验需要，确定订购引物的纯度级别。应用 引物长度要求 纯度级别要求一般PCR扩增 45 base PAGE诊断PCR扩增 40base OPC, PAGEDNA测序 20base左右 OPC亚克隆，点突变等 根据实验要求定 OPC, PAGE，HPLC基因构建（全基因合成） 根据实验要求定 PAGE反义核酸 根据实验要求定 PAGE修饰引物 根据实验要求定 PAGE, HPLC5.最长可以合成多长的引物？答：引物越长，出现问题的概率就越大。我们合成过120base的引物，但是产率很低。除非需要，建议合成片段长度不要超过80mer,按照目前的引物合成效率，80mer的粗产品，全长（还不一定正确）引物的百分比不会超过40%，后续处理还有丢失很多，最后的产量是很低。6.需要合成多少OD数？答：根据实验目的确定。一般PCR扩增，2 OD引物，可以做200-500次50ul标准PCR反应。如果是做基因拼接或退火后做连接，1 OD就足够了。但是有些研究人员，就做几次PCR，但是却要5-10 OD。做全基因构建的引物都比较长，但是我们有些研究人员也要求高OD数。片段越长, 最后全长得率就越低，出错的几率就越大。超出需要之外的OD数要求，其实也是对社会资源的一种浪费，同时也从一个侧面反映了部分研究人员，特别是新手的自信心不足，总觉得需要重复多次才能成功。7.如何检测引物的纯度？答：实验室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳。取0.2-0.5OD的引物，用尿素饱和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到饱和，上样前加热变性(95℃,2mins)。加入尿素的目的一是变性，二是增加样品比重，容易加样。600V电压进行电泳，一定时间后(约2-3小时)，剥胶，用荧光TLC板在紫外灯下检测带型，在主带之下没有杂带，说明纯度是好的。如果条件许可，也可以用EB 染色或银染方式染色。8.如何计算引物的浓度？答：引物保存在高浓度的状况下比较稳定。引物一般配制成10-50pmol/ul。 溶解前您需要核对合成报告单和引物标签上的引物OD数是否一致。如果不一致，请和我们联系。我们可以根据生产记录查到实际产量是多少。一般情况下，我们建议将引物的浓度配制成50pmol/ul，加水的体积（微升）按下列方式计算：V (微升)= OD数*（乘）33 *（乘）*（乘）20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以从合成报告单上获得。如果需要配制成其他浓度，按上述公式换算。注意：1 OD260= 33 ug/ml.9.如何计算引物的Tm值？答：引物设计软件都可以给出Tm，引物长度，碱基组成，引物使用缓冲的离子强度有关。长度为25mer以下的引物，Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm = 81.5 + 16.6 x Log10 + 0.41 (%GC) – 600/size 公式中，Size = 引物长度。Tm的定义：Tm = Temperature at which 50% of a given oligonucleotide is hybridized to its complementary strand. In the absence of destabilizing agents, like formamide or urea, Tm will depend on 3 major parameters: The sequence: a GC-rich sequence has a higher melting temperature. The strand concentration: high oligonucleotide concentrations favor hybrid formation, which results in a higher melting temperature. The salt concentration: high ionic strength results in a higher Tm as cations stabilize the DNA duplexes. 10.引物（含修饰）的分子量是如何确定的？答：非修饰的引物的Molecular Weight在随引物提供的报告单上都有明确的标示。如果需要估计一个引物的分子量按每个碱基的平均分子量为324.5，引物的分子量=碱基数 x 碱基的平均分子量。或按下列公式计算MW= (NA * WA) + (NC * WC) + (NG * WG) + (NT * WT) +(Nmod * Wmod) ＋（Nx * Wx）+( Ni* Wi) +16* Ns– 62. NA, NG, NC, NT, Ni分别为引物中碱基A或G或C或T或I的数量，WA, WC, WG, W, Wi分别为引物中碱基A或G或C或T或I的分子量，Nmod，Wmod 分别为修饰基团的数目和分子量。对于混合碱基的分子量为混合碱基的分子量总合除以混合数，例如G+A混合的分子量为（313.21+329.21）/2 = 321.21。Ns为硫代数目，硫代每个位置增加分子量16。常规碱基分子量Base Molecular Weight A 313.21C 289.18G 329.21T 304.19I 314.2U 290.17常规修饰基团分子量5’-Biotin 405.45 3’-TAMARA 623.605’-(6 FAM) 537.46 3’-Dabsyl

[u][color=#fe2419]连续光源第一季：[/color][/u]连续光源——[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]大势所趋？！[url=http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100413/2496584/]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100413/2496584/[/url]“连续光源”[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光谱技术[url]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100521/2569216/[/url]【权威解读】连续光源[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]技术[url=http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100522/2570604/]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100522/2570604/[/url][u][color=#fe2419]连续光源第二季：[/color][/u]自德国耶拿推出连续光源AAS以来，又一款新的连续光源产品现世，不过这次轮到我们中国的产品了！[url]http://www.instrument.com.cn/show/news/20100628/044166.shtml[/url]2010年6月25日，上海市科委通过了由上海光谱仪器有限公司承担的“连续光源原子荧光光谱仪的研制”项目(编号071422004)的验收。该项目研制的连续光源原子荧光光谱仪，采用了先进的光源技术，解决了连续光源的能量强度难题，具有瞬时能量大、节能、使用寿命长的特点。仪器在专用工作站的控制下，具有自动波长校正、多元素荧光发射光谱扫描、自动校正曲线、定量数据处理功能。此项目还研制了高效雾化装置，以及低发射背景、低光散射的火焰系统，建立了原子荧光光散射校正方法，实现了连续光源原子荧光光谱仪的定性、定量检测功能。另外，此项目申请了2项发明专利和获得1项实用新型专利授权。　　通过用户使用反馈以及专家组的测评，一致认为该项目研发的连续光源原子荧光光谱仪操作简便、快速，在多元素测定时不需要更换HCL灯，测量数据稳定，具有良好的应用价值。此次，将连续光源与光栅色散同时引入到原子荧光光谱仪中，在技术应用上体现了新颖性，在综合技术达到了国内领先水平。　　上海光谱仪器有限公司 市场部 2010年6月28日[color=#f10b00][size=3][u]讨论：[/u][/size][/color][color=#fd1289]不知道连续光源的原子荧光和连续光源的AAS有什么不同呢？连续光源的原子荧光是否真正具有上述之优点，我们不得而知！你愿意做第一个吃螃蟹的人呢？[/color][img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09510.gif[/img]

Embed™ 通用 CPG Frits 合成柱http://www.biocomma.cn/email/email-images/universal%20CPG%20Frits%20Column.jpgEmbed™ 通用 CPG Frits 合成柱 是DNA合成的换代技术。逗点生物是中国Embed™ 技术的持有人和唯一供应商。 Embed™ 通用 CPG Frits 合成柱适合长链引物合成（40-150bp），引物纯度高，无杂带。筛板(Frits)和滤芯(Filter)专家逗点生物是全球的生物用筛板(Frits)和滤芯(Filter)专家，每年销售数亿筛板/滤芯。我们把最好的原料和技术用于Embed™ 技术产品，为合成生命贡献自己的智慧。全球代工(OEM)模式逗点生物Embed™ 技术采用全球代工(OEM)模式,极大地降低了您的成本，您可以用自己的品牌销售Embed™ 产品。普通CPG和Embed™ 通用 CPG Frits 合成柱的对比项目合成介质性能优点缺点应用范围普通CPGCPG粉末适合短链引物合成（30bp）性价比高，通用性高，稳定杂带多，合成引物纯度低短链引物合成Embed™ 通用 CPG Frits 合成柱CPG Frits适合长链引物合成（40-150bp）引物纯度高，无杂带合成产率比CPG略低长链引物合成，全基因合成，siRNA合成，高纯度引物合成通用 CPG Frits 合成柱规格列表货号规格筛板尺寸柱子规格CPG 规格Loading 值孔径DS3005-U5nmolΦ 3.0mmH 2.0mm3mm30-401000ÅDS3010-U10nmolΦ 3.0mmH 2.0mm3mm30-401000ÅDS3025-U25nmolΦ 3.0mmH 4.0mm3mm30-401000ÅDS3050-U50nmolΦ 3.0mmH 4.0mm3mm30-401000ÅDS3050-U50nmolΦ 3.0mmH 4.0mm3mm80-90500ÅDS3100-U100nmolΦ 3.0mmH 4.0mm3mm80-90500ÅDS3100-U100nmolΦ 4.0mmH 4.0mm4mm80-90500ÅDS3200-U200nmolΦ 4.0mmH 4.0mm4mm80-90500Å Customer made Embed™ 通用CPG Frits合成柱的特点和第一代的DNA合成柱比较，Embed™ CPG Frits合成柱是一个进步，主要表现在以下几个方面：1、高效率，纯度更高，突变率更低第一代的合成过程，试剂进入CPG孔隙主要靠渗透作用，效率很低，时间较长。每个步骤加试剂的动作，会使CPG不断旋转，降低了合成试剂在孔隙中流动的效率。我们的嵌合技术使合成溶剂流道固定，试剂和linker接触更稳固，反应更充分，清洗更彻底，每个合成步骤更高效，提高了合成产物的纯度，突变率更低。在大多数情况下，合成的引物不经过纯化就能直接用于后续实验。2、节省合成试剂，更环保。经典的第一代DNA合成柱容纳试剂的空间较大，而第二代Embed™ CPGFrits只有孔隙的体积是容纳试剂的体积。当试剂流过时，第一代是通过渗透作用到达CPG孔的内部与外部，试剂耗损率大，第二代是固定通道，大大节省了试剂，保护了环境。Embed CPGFrits优化了设计，体积进一步减小。3、合成总体成本低Embed™ CPG frits要节省30%-50%的成本。在试剂（尤其是单体）耗损上，第二代CPGFrits比第一代产品要少；进一步降低试剂损耗需要降低CPG的使用 量。我们发现在微克的水平要把CPG分配均匀非常困难，批内和批间差异很大，低规格LOADING值很难通过减少CPG用量来实现。第二代 CPGFrits很好解决了这个问题。4、提高可靠性，减少出错概率第一代产品分为A\T\C\G四种，第二代为通用合成柱，用Universallinker，只有一种，库存上，第二代减少4倍，且操作上，不会因区分颜色而产生出错率。5、提高合成速度，节省了总体时间Embed™CPG frits， 在第一个循环去掉了DMT的保护，从而减少了这一步骤的反应时间，提高了合成速度。且Embed™CPGfrits，由于体积小，能够将CPG含量降到最 低，仅为0.5-1mg，偶合时，单体用量仅为15-20μL，耦合时间在30秒内完成，从而缩短了整个合成的时间。合成的引物不经过纯化就能直接用于后 续实验，也大大节约了总体时间

如何在从事有机合成工作时避免毒物的侵害( 转）大家都知道有机化合物很毒,尤其是对女性!但是既然我们选择了有机合成工作就无法避免在工作同这些有毒的有机物接触。所以我们必须懂得在工作中保护自己，尽量减少这些毒物对我们的伤害，那么如何在工作中保护自己呢？本人从事有机合成十余年，自己总结出一些经验和大家一起分享，希望能对大家有所帮助。首先；千万不要麻痹！不要认为这个有机物料毒性小就可以疏忽大意，因为有的毒物是可以日积月累的！如果你要长期从事这项工作最好尽量减少同它们接触的机会，所以在实验室中要注意的有如下几点；1；环境很重要，实验室中尽量不要放太多的药品，特别是挥发性强的物料，无特殊要求每次实验尽量少投料。实验室每天都要打扫，对洒落的化学药品更要及时清理。2；实验室必须保持空气流畅，除需要强力排风外进风也很重要，无论是夏天还是冬天，即使在使用空调和暖气的情况下，宁可热一点和冷一点，实验室窗户也不要关严。3；尽量不使用一些很毒的化学品。所有操作在通风橱里进行，包括物料转移、旋蒸。注意吸入和透皮吸收特别是呼吸器官，在实验室里剧烈运动会加大对有机物的吸收，千万要注意这几点。4；勤洗手，对于有腐蚀的物质，取用要戴手套，必要时还要有全套保护，避免沾到皮肤上，取完要及时洗手和裸露的皮肤。做到气体不通过呼吸道，固体、液体不接触皮肤，实验服、手套勤洗，使用剧毒物时要天天洗。另外告诉一点的是平时大家最好擦点防护油或者化妆品，它们可以封闭毛细孔减少皮肤对有机物的吸收，这点对女性作起来比较有利。5；要培养好的操作习惯，防止事故发生，同时要学习事故的处理方法，防止小事酿成大祸；要养成时刻要注意实验室卫生和安全的习惯，在使用未用过的试剂前要查清楚其物化性质，对物料的理化常数做到心中有数 。另外平时保养也很重要，做有机合成工作的无论你在工作中如何注意都不可避免的吸入一些毒物。如何排毒也就成了重中之重了，这里首先告诉大家的是；尽量不要连续加班，人是有排毒功能的，一般的试剂还是不用怕，但必须注意休息减少蓄积，疲劳会使我们的免疫系统成倍减低，降低排毒能力。每年都要体检，如血常规、尿常规检查，及时了解自己的健康状况。肝脏是人体最大的解毒器官一定要保护好，最好注射甲肝、乙肝疫苗，有肝病的同人更要注意肝脏的保养。另外平时要做到；1；多喝水，最好要多喝茶，我的许多同行都这么做，多出汗可以通过皮肤排毒，然后就是多排泄。2；对从事化工行业的人尤其重要是要多喝牛奶,另外要多吃猪血、海藻、鸡蛋、果汁、水果、豆类、木耳之类的东西，这些东西都可以在一定程度上解毒。 3；做完工作后，运动一下，多运动或许能把肺里的有机物呼出来，有条件再冲一下澡，把皮肤上附着的有机物也洗掉，少沾染不良的饮食和生活习惯，酒可以少喝，但是绝对不能抽烟!!!总之，我觉得做有机合成千万牢记：每天少吸点毒！使用易挥发药品时一定要带戴面具，在实验时手套不离手！不要总是待在实验室！多运动，多出汗可以排毒，游泳、爬楼梯、散步是首选！如果没有锻炼的时间可以在上下班时以步代行

石油和合成液水分离性测定仪适用标准：GB/T7305 GB/T7605，是测定石油合成液与水分离的能力。液晶屏幕中文显示界面，菜单提示式输入；电脑控温，自动定时，精度高，准确度好；显示年月日及当前时钟等多种参数提示；恒温浴采用小缸体，人性化设计；操作简便，测量准确，外型设计美观；自动搅拌，自动定时，试管搅拌电机大臂自动升降；配有时钟等多种参数提示。仪器特点1.浴缸可随时拆卸，便于清洗和更换2.仪器结构优化，试验过程不损坏试管3.长寿命搅拌电机，机械传动无噪声，稳定可靠4.可同时分离三个样品，提高工作效率5.高清液晶彩屏，全触摸屏操作6.嵌入式linux操作系统7.采用微计算机控制及PID自整定控温技术，控温精度高8.搅拌装置自动升降，减轻了操作人员的劳动强度[font=&]得利特涉及[/font][font=&]多种燃料油分析仪器、绝缘油分析仪器、润滑油分析仪器 （石油和合成液水分离性测定仪、氧化安定性测定仪、密度测定仪、自燃点测定仪、氯含量测定仪、微量残炭测定仪、表观粘度测定仪、机械杂质测定仪）,水质分析检测仪器、气体检测仪器，型号多，质量保证，可定制。[/font]