片段分析

我的一个朋友学生物的，最近正发愁如何对DNA片段进行液相分析。问了下，DNA片段是人工合成的，所以基体并不复杂，目的是通过对目标物的测定，表征之前的生物过程效果（内切什么的），分子量3000左右。由于自己对生物学方面知识薄弱（早已忘记了DNA分子化学结构为何、有何基团），没有提出意见。回来查了一下。首先看到的是Transgenomic公司wave商品名的DNA分离分析系统。看了下介绍，原来所谓的“分子桥”就是离子对色谱法。对于阴离子（磷酸基团PKA1为1-2）的核酸片段，通过加入三乙基胺醋酸盐，与之形成离子对，通过三乙基胺的疏水性与C18作用，形成保留，然后用乙腈洗脱，似乎没什么专利的内容。后来发现，关键在于那根特别的C18链的DNA分析柱，“无孔多苯乙烯-二乙烯基苯 (PS-DVB)共聚物微球(3微米)与C18形成稳定的固相”。疑问1：这种非硅胶基质的C18柱有何神奇之处？硅胶基质的C18为能不能做（估计不能，要不就不是专利了）？（硅胶表面的硅羟基会不会和DNA有什么反应）疑问2：有孔与无孔，对于这种大分子有何不同？孔径方面要选多大的，120A的会堵柱子么？疑问3：wave仪器的柱温为50-80度之间，分别应对非变性，部分和全部变性。这里的变性为何？一般柱温箱和C18的柱子柱温上限为多少？文献方面，看到一些用强阴离子交换（SAX）做的。tris-HCl缓冲系统，pH控制在9。此时DNA片段挂在SAX柱上。然后通过NaCl梯度淋洗（Cl-竞争?），洗脱下DNA分子片断。自己并不懂离子色谱。疑问1：SAX柱怎么使用和维护？需要注意什么？硅胶基质的和聚合物基质相比除了pH耐受性外有何不同？疑问2：为何选用NaCl淋洗？淋洗完后，挂在柱上的季胺上的Cl-怎么办？疑问3：此方法与那个wave相比，优点和缺点为何？其实疑问有很多，就不一一列出了，希望有经验的前辈多多发言，不吝赐教，小生感激涕零。

我的一个朋友学生物的，最近正发愁如何对DNA片段进行液相分析。问了下，DNA片段是人工合成的，所以基体并不复杂，目的是通过对目标物的测定，表征之前的生物过程效果（内切什么的），分子量3000左右。我问了下他现在怎么做的，回答流动相是三乙胺醋酸盐、乙腈。由于自己对生物学方面知识薄弱（早已忘记了DNA分子化学结构为何、有何基团），没有提出意见。回来查了一下。首先看到的是Transgenomic公司wave商品名的DNA分离分析系统。看了下介绍，原来所谓的“分子桥”就是离子对色谱法。对于阴离子（磷酸基团PKA1为1-2）的核酸片段，通过加入三乙基胺醋酸盐，与之形成离子对，通过三乙基胺的疏水性与C18作用，形成保留，然后用乙腈洗脱，似乎没什么专利的内容。后来发现，关键在于那根特别的C18链的DNA分析柱，“无孔多苯乙烯-二乙烯基苯 (PS-DVB)共聚物微球(3微米)与C18形成稳定的固相”。疑问1：这种非硅胶基质的C18柱有何神奇之处？硅胶基质的C18为能不能做（估计不能，要不就不是专利了）？（硅胶表面的硅羟基会不会和DNA有什么反应）疑问2：有孔与无孔，对于这种大分子有何不同？孔径方面要选多大的，120A的会堵柱子么？疑问3：wave仪器的柱温为50-80度之间，分别应对非变性，部分和全部变性。这里的变性为何？一般柱温箱和C18的柱子柱温上限为多少？（我印象中柱温箱好像就是50度）文献方面，看到一些用强阴离子交换（SAX）做的。tris-HCl缓冲系统，pH控制在9。此时DNA片段挂在SAX柱上。然后通过NaCl梯度淋洗（Cl-竞争阴离子？），洗脱下DNA分子片断。疑问1：SAX柱怎么使用和维护？需要注意什么？硅胶基质的和聚合物基质相比除了pH耐受性外有何不同？疑问2：为何选用NaCl淋洗？淋洗完后，挂在柱上的季胺上的Cl-怎么办？疑问3：此方法与那个wave相比，优点和缺点为何？其实疑问有很多，就不一一列出了，希望有经验的前辈多多发言，不吝赐教，小生感激涕零。

最近做了两个液体样品的GC/MS数据，得到了一些片段，但帮忙分析的老师只是给了两组样品的处理结果，我们想要获得更多的信息，在网上下载的AMDIS没有数据库可以查看，无从下手，不知道有没有朋友可以帮忙看看我的数据，非常感谢

中国科技网讯 据物理学家组织网8月29日（北京时间）报道，美国能源部劳伦斯·利弗莫尔国家实验室（LLNL）研究人员最近开发出一种核酸（DNA和RNA）快速扩增技术，使聚合酶链式反应（PCR）的速度大大加快，可在3分钟内将基因组片段扩增10亿倍，迅速识别出病原菌。疾病快速诊断有望很快成为现实。相关论文发表在最近出版的《分析师》杂志上。 PCR技术能让研究人员把一段DNA或RNA复制上百万副本，然后用于基因组测序、基因分析、遗传病诊断、亲子鉴定、法庭鉴定、确定疾病感染等。该过程一般需要1小时到几天时间。然而，快速诊断、应急反应或传染病监控往往要求PCR技术缩短到几分钟。 领导这项研究的工程师雷金纳德·比尔和同事克服酶动力学和热动力学方面的限制，用多孔材料和绝热薄膜制造出一种设备，实现了极速热循环，能每秒钟加热或制冷45℃，一次热循环不超过2.5秒。比尔特别指出：“这种设备的独特之处还在于，它制冷的速度和加热一样快。” 开发出这种设备后，比尔和同事从10种商用酶中选出了2种，这2种酶的链式反应速度非常快，将一些参数略作调整，就能使反应更快。 他们用一种肠杆菌属的细菌测试了新的PCR设备迅速扩增DNA片段的能力，然后用一段严重急性呼吸道综合征（SARS）DNA片段演示了设备处理威胁公共健康病毒方面的效果。该设备完成对目标DNA30个周期（10亿倍）的PCR扩增，用时仅为2分18秒。 目前，研究小组正在开发一种实时探测设备。按照他们的设想，将来一台PCR仪器就能完成整个测试，从样本到结果只需10分钟。市场对这种设备的需求将是巨大的，除传统的公共卫生和医疗研究领域，一台简单实用的实时PCR设备在养殖、农业以及食品加工行业都非常有用，可用来保障食品安全。（记者 常丽君） 总编辑圈点 随着人类基因组逐渐被破译，一张生命之图将被绘就，我们对人类自身的了解也会迈上新的台阶，很多疾病的病因将被揭开，药物就会设计得更好，治疗方案也能“对因下药”，生活起居、饮食习惯有可能根据基因情况进行调整，人类的整体健康状况将会提高。然而，病来如山倒，为了尽快找到病因，疾病的快速诊断就显得异常重要。而文中提到的技术，可在三分钟内识别病原菌，无疑为很多急症患者的生存争取了宝贵的时间。 《科技日报》（2012-8-30 一版）

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]教学视频片段，不是很清但也能看，是在学校里拍的。

一、实验目的 本实验目的了解PCR反应用来扩增DNA 特异性片段实验的的基本原理、实验方法和操作步骤，熟练掌握PCR反应基本体系配制和实验条件的设定。 二、实验原理 PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域，它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分析，还可用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病诊断，肿瘤机制探查，法医鉴定等方面。PCR技术已成为方法学上的一次革命，它必将大大推动分子生物学各学科的研究发展。PCR是一种利用两种与相反链杂交并附着于靶DNA两侧的寡核苷酸引物经酶促合成特异的DNA 片段的体外方法，由高温变性，低温退火和适温延伸等几步反应组成一个循环，然后反复进行，使目的的DNA 得以迅速扩增，主要过程如图6。置待扩增DNA 于高温下解链成为单链DNA 模板;人工合成的两个寡核苷酸引物在低温条件下分别与目的片段两侧的两条链互补结合;DNA聚合酶在72 ℃将单核苷酸从引物3"端开始掺入，沿模板5"—3"方向延伸，合成DNA 新链。由于每一循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，所以PCR 产物以指数方式增加，经25—30次周期之后，理论上可增加109倍，实际上可增加107倍。PCR技术具有操作简便、省时、灵敏度高特异性强和对原始材料质量要求低等优点，但由于所用的TaqDNA 聚合酶缺乏5"—3"核酶外切酶活性，不能纠正反应中发生的错误核苷酸掺入，估计每9000个核苷酸会导致一个掺入错误，不过Innis M·A 发现，错误掺入的碱基有终止链延伸的作用倾向，使得错误不会扩大。PCR技术应用广泛，不可能有这样一套条件满足所有的实验，但本实验所介绍的方法可适应于大多数DNA 扩增反应，即使有的不适应，至少也确定了一个共同的起点，在此基础上可以作多种变化。不过下列因素在实验应用时应予以特别注意，以求取得满意结果。1. 模板：单、双链DNA 和RNA都可以作为PCR样品，若起始材料是RNA，须先通过逆转录得取第一条cDNA。虽然PCR 可以仅用极微量的样品，但为了保证反应的特异性，一般宜用ng 量级的克隆DNA，ug 级的染色体DNA，待扩增样品质量要求较低，但不能混合有任何蛋白酶、核酸酶，Taq DNA聚合酶的抑制剂以及能结合DNA 的蛋白质。2. 引物：引物是决定PCR 结果的关键，下列原则有助于引物的合理设计。(1)尽可能选择碱基随机分布，GC 含量类似于被扩增片段的引物，尽量避免具有多聚嘌呤、多聚嘧啶或其它异常序列的引物。(2)避免具有明显二级结构(尤其是在引物3"—末端)的序列。(3)防止引物间的互补，特别要注意避免具有3"末端重叠的序列。(4)引物的长度约为20个碱基，较长引物较好，但成本增加，短引物则特异性降低。(5)引物浓度不宜偏高，过高易形成二聚体，而且扩增微量靶目标或起始材料是粗制品，容易产生非特异产物。3. 缓冲液：PCR缓冲液的变化通常会影响扩增结果，特别是MgCl2，其浓度对专一性和扩增量有重大影响，通常最适浓度为1.5 mM左右(每种dNTP 的浓度为0.2 mM时)，浓度过高，使反应特异性降低;浓度过低，使产物产量降低。四种dNTP 浓度通常每种都是0.05 mM—0.2 mM。过高的浓度会导致错误掺入，浓度过低，则影响反应产物的产量。四种dNTP浓度应大体相同，其中一种若偏高，会诱发错误掺入，降低合成速度，过早终止延伸反应。另外dNTP 能与Mg2+结合，使游离Mg2+浓度降低，所以如果dNTP 的浓度有很大改变，MgCl2浓度也要改变。Taq聚合酶是一种耐高温聚合酶，用量通常是1—4 单位/100 ul，浓度过高，产生过多的非特异片段。4. 循环参数：PCR 循环是把起始材料加热到90—95 ℃，保持短时间使双链DNA 解链;然后冷却至37—55 ℃，使引物与模板退火;再升温至70—75 ℃，在TaqDNA聚合酶的作用下掺入单核苷酸，使引物沿模板延伸。解链不完全是导致PCR 失败的最主要原因。用DNA扩增仪时，94 ℃保持1 分钟可使模板的起始物完全变性。若用低于94 ℃的条件，则应适当延长时间。引物与模板退火温度由引物的长度及G+C含量决定。适时间退火(1—2)分钟有利于产物的特异性。引物延伸在70—75 ℃保温的时间可根据扩增DNA片段的长短来调节。正常情况下，每分钟可延伸1 Kb 的长度，常规PCR 一般为25—40个循环，若循环加长，则由于酶活性降低，聚合时间延长，引物及单核苷酸减少等原因，反应后期容易产生错误掺入，所以在满足产物得率前提下，应尽量减少周期次数。三、材料(一)仪器与器皿PRC 扩增仪(PE2400)，琼脂糖凝胶电泳设备，微量取样器，一次性指形管，凝胶成像仪 玻片(二)试剂与材料1. 琼脂糖凝胶电泳试剂1)电泳缓冲液：Tris—乙酸0.04 mol/L PH8.0 0.002 mol/L EDTA2)加样缓冲液：0.25%溴酚兰40% w/v蔗糖3)溴化乙锭溶液：0.05 mg/ml溴化乙锭/水4)琼脂糖2. TaqDNA 多聚酶3. 5′反应缓冲液：125 mmol/L Tris-HCl pH8.2;10 mmol/L MgCl2;0.5 mg/ml gelatin;125 mmol/L(NH4)2SO4; Formamide 25%4. 混合dNTP 液(dATP dGTP dTTP dCTP各2 mmol/L)5. DNA 模板(每2 ml 中含有10 fg 待扩增DNA)6. 引物 1 (25 pmol/L)，5’加入EcoRI 粘性末端碱基7. 引物 2 (25 pmol/L)，5’加入HindIII 粘性末端碱基8. 无菌水四、实验步骤1. 按顺序在200 ml 指形管中加入以下试剂与样品：(因购入的试剂批次不同，加样时有 所差别，以预实验结果为准。)1) ddH2O 74 ml2) 10′Buffer 10 ml3) MgCl2 6 ml(10′Buffer 如已加入MgCl2，则不必加)4) dNTP 2 ml5) 引物1 2 ml6) 引物2 2 ml7) 模板 2 ml8) Taq DNA聚合酶2 ml总体积共100 ml(也可以配成40 ml 的反应体系)2. 在PCR 扩增仪上按以下反应条件编入程序：(以下为参考值，因扩增的DNA片段不同，各类PCR 扩增仪程序设定各不相同，编程过程视扩增的DNA 片段的要求及仪器而定参数，见示范。)预变性 94 ℃ 2 分种循环条件(30 次)变性 94 ℃ 40 秒复性 55 ℃ 35 秒延伸 72 ℃ 2 分10 秒延长延伸 72 ℃ 7 分钟编完反应程序，置反应管于PCR扩增仪的反应孔中，开动机器，扩增循环反应开始。3. PCR 扩增完毕，配2%琼脂糖凝胶，取15 ml 反应液及相适应的PCR mark 分别点样， 加样缓冲液应为40%W/V 蔗糖，电泳观察结果。4. 凝胶成像仪或紫外灯下观察实验结果，是否已扩增到实验设计的DNA 片段。注意事项： 要想得到预期的实验结果，PCR的反应条件和很多参数有着密切的关系，都应引起注意。在实验设计中我们要考虑到模板浓度的大小，设计引物时也要主要引物长度适当以及恰当的GC含量，在PCR体系中引物浓度，dNTPs浓度相对要均衡，选取的taq enzyme，缓冲液的离子含量也是影响产物的结果，另外就是要根据产物大小设定适当的变性时间，退火温度及时间，延伸的时间。

纱条不均种类和产生原因，不同片段长度的不匀对面的影响是怎样的？ 种类：长片段不匀，短片段不匀 长片段不匀，主要由清棉和前纺工序造成，若长片段周期性不匀率高，在织物上会出现明显的横条竖纹，对布面影响较大。 短片段不匀，主要由细纱的牵伸机构所造成，短片段不匀周期性不匀率严重时，几个粗节或细节在布面在布面上并列汇聚的概率较多，容易形成阴影或云斑，对布面影响很大。

用高效液相色谱法分离DNA片段用什么柱子

第一章 连续流动化学分析理论第一节：系统组成连续流动化学分析方法采用的是自动湿化学分析方法，多数的液体样品可用此方法分析。它采用连续流动的原理，用均匀的空气气泡将样品分开，标准样品与未知样品通过同样的处理和同样的环境，所以通过对吸光度的比较，获得结果并自动打印报表。一个简单的连续流动化学分析器示意图每一个模块完成一特定功能，如进样，测量，混合，保温等，信号输出是代表样品浓度的系列峰第二节：化学分析模块功能化学分析模块能完成混合，加热高至150摄氏度，延时到反应完全，透析膜排除杂物干扰，在线蒸馏，在线紫外消化，在线溶剂萃取，镉还原（柱或螺旋管），离子交换等几乎所有实验室经典手段。它是该技术的核心。它完成对样品的全自动预处理，样品再进入检测器连续比色。第三节：检测器比色计, 340 - 900 nm，紫外分光, 190 - 900 nm，荧光光度计或火焰光度计。应用广泛第四节：湍流1. 层流当液体在管道中慢速流动时，中间比两边流动快这种浓度的差异（扩散）会很难达到稳态，降低分析速度和引起样品相互覆盖2，片段流片段流用气泡降低了扩散 气泡必须填满管道以分开气泡两边的样品. 每一片段通过系统时在同一环境状态下反应，气泡还帮助系统去除沉集物 气泡间断造成系统很快达到稳态， 分析速率加快"BOLUS"-流上述流动模式保证每一个片段内样品，试剂的快速混合均匀.第五节：气泡的作用降低扩散和样品的重叠，清洁管道内侧表面，保证每一片段的一致均匀性，混合均匀可肉眼观察流动状态，蓄纳样品或试剂的气体释放及反应过程中的气体释放第六节：气泡片段流技术的优点低流速和低试剂消耗，可延时很长时间使反应完全，极高的重现性，极低的检测极限，反应状态的微小变化，不会影响结果。很多方法获得 EPA, AOAC, DIN，ISO论证第七节：稳态片段流的一个重要特点是测量时反应达到稳态，吸光度不随时间而变化。当一个样品被吸出2分钟后，通常输出如下图形的信号. 在 t1 和 t2间浓度是稳定的并且吸光度达到最大值。当流速，试剂浓度或流速，透析速度，或温度变化，通常会影响灵敏度和稳态吸光度高度，但标准试剂和样品在同样状态下测量，所以不会影响精度 在稳态输出信号不随时间改变，且同一样品的不同片段浓度相同. 理想的进样时间是比达到稳态所需时间长5秒钟第八节：流动的稳定性在稳态平台没有噪音对保证高精度非常重要 这就要求同一样品的不同片段的化学组成相同. 异常有很多原因, 包括不稳定的流动，样品之间的气压，样品取样针或别的地方部分堵塞蠕动泵的输出是不稳定的, 是以脉冲的方式进行的. 随着泵的运转，同时打入空气气泡，可消除由于脉冲造成的负面影响, 同时的意思是在每一片段: 同样体积的样品 同样的样品和试剂比例第九节：测量原理比色测量是建立在有色化合物浓度及其吸光度与样品浓度成正比的基础上绝大多数方法是比较标准物质与样品在同样环境下反应最后的吸光度测量是在最灵敏的波长下进行的.LAMBERT-BEER 定理是其最原始的基础:第十节：比色计B+L 采用的是双光束的比色计. 参比光补偿光源输出变化，温度，电压和别的波动光路结构精度非常高或低的吸光度可能引起错误因为噪音及检测器灵敏度限制 第十一节：结果计算方法比较标准物质与样品在同样环境下反应最后的吸光度建立校准曲线（线性）:计算结果:第二章：多通道连续流动化学分析技术的历史，发展和趋势第一节：简单历史1954 连续流动化学分析技术发明1957 AutoAnalyzer 产品推向市场1966 湍流技术的发展1966 - 75 新技术急速发展1975 - 85 湍流技术新发展* 实现计算机控制 * 流动注射技术1985 - 95 多功能化学分析盒 * 试剂自动排序 * 自动稀释技术 *1996 - 机器自检 遥控 标准方法 软件技术的进步 * Bran+Luebbe / Technicon 发明第二节：湍流技术的进步1，内径 2.4 / 2.0 / 1.6 / 1.0 毫米减少试剂消耗2，高速气泡注入频率更低的扩散危险，更快的分析速度3，内径更稳定，管道部件质量更好更低的扩散危险，更好的重复性4，更规则的气泡注入, 与蠕动泵蠕动同步每一个液流片段的试剂和样品的体积是一样的-保证重复性5，流动检测池中 物理除气泡----电子除气泡-----气泡可通过流动检测池，不用电子除气泡更低的扩散危险，更高的分析速率，更好的稳定性和重复性第三节：湍流技术的进步- 优点1，进样速率 30 = 60 =120 /每小时2，每100个样品试剂消耗 500 ml = 200 ml = 100 ml = 40 ml(流动注射 = 200 ml)3，标准偏差1% = 0.4%第四节：多功能化学分析盒 同一化学分析盒分析几个参数， 更快，更简单地改变分析项目投资少样品量不大时，非常实用第五节：双量程方法两个样品线透析膜可帮助测量比较脏的样品自动量程转换比稀释快，简单第六节：自动品质控制适时检查，与CLP 一致，质控图自动生成，自动检查:- 高浓度校准，低浓度校准，重复性，准确度，样品空白自动重复校准第七节：计算机控制1，顺序进样----随机取样更长运行时间每一个标准只需一个样品杯自动重复取样适宜自动稀释2，可变泵速清洗时速度加快，节省时间分析结束降低速度以节省试剂自动启动和关闭3，比色计的基线和增益每一次分析自动设置4，结果处理和其它自动补偿由于基线，灵敏度，扩散等原因引起的误差重新计算屏幕显示校准曲线和结果峰形存储结果和原始数据5，LIMS（实验室信息管理系统）- 输入样品名称- 输出样品结果6，遥控

搞到一个[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分离过程视频教学片段给大家分享，不知道有重复没？[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=159836][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分离过程视频教学片段[/url]

关于热分析的一个问题最近一篇文章被拒，他给我提的问题是 你用氩气流做热分析，怎么可以检测到有CO2？不可以吗？我明明找到里面有分子量为44的片段啊？求高人解答。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/download/search.asp?sel=admin_name&keywords=zjzxwwl2a][b]《实验室录像片段-1.rar》[/b][/url]

资料中心的《ROHS检测现场演示》的很多片段怎么都没有了？？

[font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段，又叫做抗原结合片段，是指抗体的抗原结合区域，包含一条完整的轻链和一条重链的可变区和恒定区的[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]结构域。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段可进一步分为两部分：由轻链可变区和重链可变区组成的[/font][font=Calibri]Fv[/font][font=宋体]片段、由轻链恒定区[/font][font=Calibri]CL[/font][font=宋体]和重链恒定区[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]组成的[/font][font=Calibri]Fb[/font][font=宋体]片段。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段含有[/font][font=Calibri]440~450[/font][font=宋体]个氨基酸，其分子量约为[/font][font=Calibri]55kDa[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]与完整的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]相比，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体片段缺乏糖基化的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]恒定区，具有组织渗透强、半衰期短、免疫原性较低和生产成本低等优势，在诊断、临床治疗等领域展现出广阔的应用前景。目前，至少有[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]款治疗性[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体药物获得美国[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]的批准并上市，另外，还有众多[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体处于临床开发和临床前研究阶段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]作为一家专注于抗体开发领域的公司，义翘神州可提供从免疫原合成、动物免疫、[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体库构建与筛选、鉴定等的一站式抗体服务。另外，我们也提供高效的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体表达纯化服务，以[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞为表达宿主，最终交付高质量的重组[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体片段。更多详情，请咨询我们的技术团队。[/font][/font][font=宋体][b][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体的区别[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段之间的差别是什么？[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]片段由抗体的重链和轻链可变区通过一条短肽（[/font][font=Calibri]15-20[/font][font=宋体]个氨基酸）连接而成。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段由完整的轻链以及部分重链结构（可变区和第一个恒定区）组成。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体具有[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CL[/font][font=宋体]区域，两者通过一个二硫键连接，不需要短肽。而[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]片段缺乏该区域，需要通过短肽将重链可变区（[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]）和轻链可变区（[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]）连接在一起。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][/font][font=宋体][font=宋体]构成：[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CL[/font][/font][font=宋体][font=宋体]分子量（[/font][font=Calibri]kDa[/font][font=宋体]）：[/font][font=Calibri]55[/font][/font][font=宋体]肿瘤渗透性：良好[/font][font=宋体]稳定性：长期储存时稳定性高[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]scFv[/font][/font][font=宋体][font=宋体]构成：[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]VL[/font][/font][font=宋体][font=宋体]分子量（[/font][font=Calibri]kDa[/font][font=宋体]）：[/font][font=Calibri]28[/font][/font][font=宋体]肿瘤渗透性：较强[/font][font=宋体]稳定性：存储时间较长时不稳定[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/fab-antibody-production][b][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体片段制备[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体片段可通过构建噬菌体展示抗体文库筛选获得。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体库具有多项优势。首先，它可以快速有效地筛选出难以用杂交瘤技术获得的理想抗体。其次，和[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]抗体一样，它可以轻松制备出高亲和力的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用自主开发的[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞瞬时转染技术，义翘神州成功完成多个[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段抗体的表达和制备项目。并且这些高质量的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段，可用于抗原[/font][font=Calibri]-Fab[/font][font=宋体]共结晶等应用。与酶解法制备抗体片段相比，利用哺乳动物细胞瞬时转染技术制备的重组[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体的质量更优。如果客户要求，我们也可以在大肠杆菌表达系统进行[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由于很多抗体[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段不能很好地结合蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、蛋白[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]或蛋白[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]亲和树脂，我们通常在抗体重链的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端添加[/font][font=Calibri]poly-histidine[/font][font=宋体]标签，以便于纯化。在设计构建载体时，可在[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签和[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]之间加上蛋白酶识别位点，这样抗体纯化后可通过蛋白酶切去除标签，得到无标签的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果您之前已在义翘神州订购过[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/custom-services-cro][b]CRO[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/custom-services-cro][b]服务[/b][/url]项目，一般情况下，您不需要为抗体制备订单支付预付款。义翘神州会根据抗体制备项目的具体费用进行报价，您在收到纯化抗体和发票后付款即可。但是，对于风险性较大的抗体制备项目，例如，制备恒定区有修饰的抗体，义翘神州需要收取少量的成本费用，用于可行性试验和工艺开发（如需）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：抗体[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段表达与纯化[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/fab-antibody-production[/font][/font]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/download/search.asp?sel=admin_name&keywords=zjzxwwl2a][b]《实验室录像片段-2.rar》[/b][/url]

分析肥料中的氮磷钾，有用到连续流动分析仪，说到“采用空气脾片段连续流动分析技术”，请问这个仪器的原理是什么？什么牌子比较好？价格大概是多少？

[color=#444444]请问有一化合物 分子量大约2500， 分子极性比较小，脂肪链较长，含有（OCH2CH2）n个片段，这样的化合物怎么测定分子量？[/color]

质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理，主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物，所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快速的发展，是当前生物药物领域增长最快的一类药物.1.抗体药物发展新趋势在生物药物领域，抗体药物占据着越来越重要的地位，全球销售排名前10位的药物中有6个为抗体药物，抗体药物按来源分类可以分为：鼠源单克隆抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。目前，批准的单克隆抗体药物中，人源化单抗和全人源单抗数量已占据大多数。1.1 抗体药物偶联物（ADC）抗体药物偶联物（ADC）由单克隆抗体和小分子化合物两部分组成。通过抗体的靶向作用，ADC 的抗体部分和肿瘤细胞表面抗原特异性识别并结合，通过细胞内吞作用，将抗体和小分子化合物一起带进肿瘤细胞内部，释放出小分子化合物。这样既可以降低小分子药物的毒性，同时具有靶向结合的作用。已经上市的两个ADC 是Kadyla 和Adcetris。1.2 双特异性抗体（BsAb）双特异性抗体（BsAb）是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子（细胞）之间架起桥梁，由于基因工程的发展，目前双特异性抗体已经研发出多种类型，主要类型有三功能双特异性抗体、IgG-scFv、三价双特异性分子、串联单链抗体（串联scFv）、DVD-Ig 等多种形式。2.质谱技术近年来质谱仪性能的显著改进主要基于开发出的两种离子化技术：一种是介质辅助的激光解吸/离子化技术。另一种是电喷雾离子化技术。由于这两种电离技术的出现，使原本只能检测小分子的质谱技术，可以运用于检测生物大分子。在过去质谱技术主要运用于对一级结构和序列的表征，而现在质谱技术越来越多地运用于高级结构的分析，而高级结构对于抗体药物的生物活性至关重要。3.质谱技术在抗体药物一级结构分析中的应用3.1 完整抗体药物精确分子量测定当得到抗体药物时，可以直接通过高分辨率的MALDI-TOF或者ESI-MS进行分子量的检测。通过对于脱糖后分子量的检测，可以对于抗体药物进行初步定性分析，并将可以作为药物常规放行的分析方法。对于脱糖前的抗体药物进行分析，可以得到抗体药物的糖基化类型的信息及糖基化水平的分布，对于快速了解生产工艺与药物质量的关系具有十分重要的意义。3.2 药物抗体偶联比（DAR）对于赖氨酸链接的抗体偶联药物，采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析，根据偶联不同数目药物分子的质量数增加判断偶联数目。对于质谱测定的结果，不仅可以给出确切的药物抗体偶联比值，更能够给出链接不同个小分子药物的分布情况，及反应过程副产物空链接头的分布情况。3.3 肽图谱分析蛋白被特异酶切后的蛋白酶水解后得到的肽片段质量图谱。由于不同的抗体药物具有不同的氨基酸序列，蛋白质被酶水解后，产生的肽片段也各不相同，肽混合物的质量数具有唯一特征。可以通过LC-ESI-MS进行肽片段的一级质量数的鉴定，也可以通过LC-ESI-MS/MS对于每个肽片段进行进一步确证，提高肽图谱的准确性。3.4 翻译后修饰研究蛋白质的翻译后修饰（PTM）对于抗体药物的生物学功能十分重要。常见的翻译后修饰有：磷酸化、脱酰胺、甲硫氨酸氧化、糖基化修饰、N端焦谷氨酸环化，C端赖氨酸切除等。质谱分析仪检测蛋白和肽片段的分子量偏差，可以实现高灵敏、高通量和高精确地鉴别蛋白质的翻译后修饰的种类。3.5 N端氨基酸序列检测常规N端氨基酸检测用Edman降解法进行检测，但是抗体药物有时候会出现N 端环化的现象，在这种情况下用Edman降解法需要先对抗体进行去封闭处理，而直接使用质谱可以直接测出N端的氨基酸序列，同时可以检测出N端环化的相对比例。4.质谱技术在抗体药物高级结构分析中的应用4.1 氢/氘交换质谱（HDX-MS）常规的质谱只能获得蛋白的一级结构信息。氢/氘交换质谱（HDX-MS）可以进行蛋白质构象，溶液动力学和表位映射进行分析。在能够调查的蛋白质的高阶结构和动态结构技术中，HDX-MS已经证明适合单克隆抗体和单克隆抗体-抗原复合物的构象分析。4.2 离子淌度质谱法（IM-MS）离子淌度是根据蛋白的电荷和形状选择性分离的方法，可以区分相同分子量的蛋白和肽段，可用于检测蛋白的简单高级结构。4.3 高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱（FTICR-MS）高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱（FTICR-MS）能够检测最高质量数的质谱仪器，并且有着很高的分辨率。FTICR-MS 是目前被公认为是蛋白质组学研究的有力工具，特别是和完整的蛋白质鉴定和上/下调翻译后修饰（PTM）蛋白质的鉴定。

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]山东日照一医生疑似在网上直播妇科手术片段。警方通报，涉事医生厉某已被抓获。[/size][/font]

请教一下：谁能告诉我，有什么型号的色谱柱可用于分离大小在100bp到500bp的DNA 片段？我有30多个组分要分离。有公司向我推荐 Amersham公司凝胶过滤预装柱 ，但是价格都近两万，有朋友向我推荐岛津，等公司的c18柱子（ODS柱），便宜，不知道效果会不会差一些呢？如果可以，有没有国产的也能解决问题呢？有那些型号的可有用？请高手指点，谢谢！

虽然最近非常忙，但还是要赶在今天写这个帖子，怕等到过了8月就记不起来了。这是我参加的第一个年会，前两届没有去成，甚憾！在大巴里坐在月版的旁边，小于让每个斑竹做介绍，我摆手势说自己不说话了。满眼的未谋面的斑竹，北没见到老虎老米老皮，南没见到老谢happy红狐王子，心里真是有说不出的滋味。好象热闹都是人家的，我在坐满人的大巴里还是感到刻骨的孤独。（跑题了）好在有几个精彩片段让我难忘，不虚此行。1 calfstone 小于让他用话筒，他就是不用，说：“我不习惯用话筒，我喜欢用真实的声音面对大家！”是个有个性的老师。2 怪侠一枝梅 他笑的时候让我想到老谢了，感到眉眼之间有那么几分神似。他居然成为仪器网的官方人员之一了，打个不恰当的比喻，4077好象是agilent，怪侠只能是varian了！我非常满意他对我的几句评价，他说，看我的帖子以为我是个男的，因为很大气，但是有时候又觉得是个女的写的，因为很细腻，得意啊！我自以为确实是个粗中有细的人，而且性格里有男儿的豪爽大气，心胸宽广，谁叫我出生在海边呢？3 李小侠？李小霞？ 在大巴上小于让大家做游戏，他报一个斑竹名字，让大家辨别是男是女，结果，李小侠两次被认为是女的，看来取名不光要看文字，也要讲究读音，未来的父母们要注意！其实想到的还有很多，但一向是个喜欢精简的人。明天要考试，搁笔了！祝仪器论坛官方民方一派和谐，其乐融融！又及：看到环保的儿子康复状况很好，甚慰！

如题，我是做海水营养盐(氮、磷、硅)分析的，以前用的是Bran+Luebbe的AA3，SFA系统，感觉比较慢，1小时30个样品。后来改用新出的QuAAtro，速度上去了1小时90个，但是片段流之间的带过大了不少，尤其是硝酸盐。听说还有用FIA系统的，各位同行谈谈这方面的感受吧！

各位高手：我们现用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]将常规有机溶剂萃取样品进样，目的初步定性分析其中各部位中有无新结构或是较新颖的化合物，以为指导下一步提取分离，以及活性研究。根据全扫描的质谱图看，有很多成分NIST中没有，相似度只有20-30。是否图谱中检索出的相似化合物是这些未知成分的片段呢？我们能否根据此就做该部分的分离提取呢？还能通过做哪些工作为我们进一步分离提供可行依据呢？有无较简便快捷的方法辅助我们对化合物鉴别呢？谢谢！[em09511]

[align=center][size=11pt]SEC分析进阶---稳定的分辨率和快速的分析速率[/size][/align][align=center][size=11pt]会议时间[/size][size=11pt]：[/size][size=11pt]2020年2月28日10:00[/size][/align][b][size=10.5pt]内容[/size][size=10.5pt]介绍：[/size][/b][size=10.5pt]尺寸排阻色谱（[/size][size=10.5pt]SEC）是广泛使用的聚集体及片段的重要分析手段。在SEC分析的方法开发中，如何获得最优的分离度，保证方法的稳定耐用，以及尽可能提升分析速度，是开发者持续思考的关键问题。本次讲座系统概括了影响以上关键问题的要素并给出了有效建议。[/size][b][size=10.5pt]讲师[/size][size=10.5pt]介绍：[/size][/b][size=10.5pt]米健秋[/size][size=10.5pt]:2004年毕业于北京大学，获得生化分析博士学位。在安捷伦工作12年之久，具有非常丰富的液相色谱，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]，毛细管电泳的应用经历及生物大分子的分析经验。在安捷伦期间作为主要成员参与了2005,2010,2015年版中国药典应用图谱集的工作，主导了多个色谱应用方法开发项目。对于生物制药行业主流应用有着深刻的理解。[/size][size=10.5pt]报名地址[/size][size=10.5pt][font=等线]：[/font][url]https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_10425.html[/url][/size]

引言: 嗅味物质是水环境受到污染后产生的一类具有特殊结构的物质。这类物质所产生的异味严重影响水质的感官评价,近年来已逐渐成为水质改善研究的热点。土臭素和2-甲基异茨醇的阈值浓度很低,为10～20ng/L，我国颁布的《生活饮用水卫生标准》(GB5749—2005)中建议自来水厂出水的土味素和2-甲基异茨醇的标准阈值均为10ng/L,这对嗅味物质的检测提出了较高的要求,需将检测限提高至ng级,因而提高检测的灵敏度检测成为一个很关键的问题。通过优化色谱分离条件和质谱扫描方式 ,改进了气相色谱 -质谱测定水中土味素和2-甲基异崁醇的方法。采用梯度升温 ,缩短了色谱运行时间,可在25 min内完成检测;采用片段分割选择离子扫描方式 ,提高了方法的灵敏度 ,获得了较低的检出限和较高的回收率。1.材料与方法1.1 仪器与试剂300GCMSMS（美国布鲁克·道尔顿公司），MS Workstation Version7.0工作站;VF-5ms,30M*0.25MM ID DF=0.5;Supelco公司固相微萃取SPME装置、聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯涂层纤维(65μmPDMS/DVB); 60mL带PTFE涂层硅橡胶垫的螺口玻璃瓶; Whatman 25mm,0.45μm PES 针形滤头；Sigma公司2-甲基异茨醇(100mg/L Methylisoborneol甲醇溶液)、土味素(100mg/L Geosmin甲醇溶液)标准液、2-异丁基-3-甲氧基吡嗪(100mg/L IBMP甲醇溶液)；天津光复科技优级纯氯化钠，550度烘烤后备用,固相微萃取专用进样衬管；HH-S数显恒温磁力搅拌水浴锅（金坛市金城国胜实验仪器厂）1.2样品处理与分析将标物和内标稀释为0.2ng/μL的应用标准溶液和内标液,用微量移液针于6只装有40mL25%氯化钠溶液的顶空瓶中各加移取2μl 内标液，同时于各顶空瓶中分别加入0、1、2、4、10、20μl标准液，作为标准系列0、5、10、20、50、100ng/ L[font=