培养过程培养条件

哺乳动物细胞培养过程哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各个过程进行简述：原代培养：从动物机体取出组织后切碎，经过各种酶（常用胰蛋白酶），螯合剂（常用EDTA）结合机械方法（吸液管反复吸吹）处理，分散成单细胞，置于合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。一般把从动物有机体内取出细胞开始培养，到繁殖十代以内的细胞培养称为原代细胞培养。经过原代细胞培养，细胞分裂繁殖，培养物逐渐增多长满培养空间，继而相互之间接触，发生接触抑制现象，生长速度逐渐减慢甚至停止。需要重新接种到新的培养瓶内进行传（继）代培养。传（继）代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传（继）代培养。细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如果细胞系的生存期有限，则称为有限细胞系。已获得无限繁殖能力，能持续生存的细胞系称为连续细胞系或无限细胞系。细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系，用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增值形成的细胞群，称为细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原珠形状不同的细胞群，成为亚株。哺乳动物细胞培养条件不同哺乳动物细胞在各个阶段的培养，都需要有基础的培养条件，归纳如下：1、无菌无毒的环境：对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。2、营养：液体合成培养基包含糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等；通常还需加入血浆、血清等天然成分3、适宜的温度和pH：人和哺乳动物细胞最适宜温度大多为36±0.5℃。适宜的酸碱度为pH 7.2-7.4。4、气体环境：气体环境一般为“95% 空气+5% CO2”混合气体。氧气是细胞代谢必须气体，CO2维持培养液pH。德国WIGGENS CO2培养箱，为细胞生长提供最佳环境，为您的细胞培养保驾护航。

细胞培养也叫细胞克隆技术，在整个生物工程技术领域，细胞培养都是一个必不可少的过程。目前主要有两种基本的细胞培养体系，一种是细胞在人工基质上单层生长（贴壁培养），另一种是细胞在培养基中自由漂浮生长（悬浮培养）。贴壁培养和悬浮培养的细胞无论在细胞形态和培养条件上有诸多不同。第一来源和形态不同： 悬浮细胞的生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，细胞大体呈球形或椭球型（见下图）。这类细胞一般为淋巴细胞等血液系统来源的细胞。悬浮细胞 贴壁细胞生长必须有可以贴附的支持物表面，依靠自身分泌的或培养基中提供的黏附因子才能爱表面生长和繁殖。细胞在未贴附于底物之前一般似球体样，当与底物贴附后，细胞将逐渐延伸展形成一定的形态（见下图）。贴壁培养细胞主要包括正常细胞和肿瘤细胞，比如成纤维细胞，骨骼组织（骨及软骨），心肌与平滑肌、肝、肺、肾、乳腺皮肤神经胶质细胞，内分泌细胞，黑色素细胞及各种肿瘤细胞等。 上皮细胞型 成纤维细胞型 贴壁细胞与悬浮细胞在显微镜下的区别贴壁细胞分为两种，上皮细胞型和成纤维细胞型，在显微镜下观察时，贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形，而且晃动培养液时，细胞不动。悬浮细胞漂在培养液中，呈圆形，晃动培养液时细胞也随着漂动。 第二培养条件和方式不同： 贴壁细胞一般使用滚屏或T瓶进行培养。如果使用微载体，也可以用微载体培养瓶或生物反应器进行培养。 培养过程中的温度/湿度/CO2的环境条件控制，可由培养箱提供。 滚瓶机 微载体培养瓶 T瓶 悬浮细胞培养，可以使用小型细胞工厂、飞旋瓶、生物反应器进行培养。 细胞工厂和飞旋瓶培养中需要的温度/湿度/CO2的环境条件控制，可由培养箱提供。生物反应器自带条件控制功能。 小型细胞工厂Celline 飞旋瓶生物反应器 WIGGNS培养箱在设计之初就考虑了培养箱内部兼容用电设备。在具有传统培养箱的所有功能之外，WIGGENS CO2培养箱系列，采用了高效的循环系统保证了温度、CO2、湿度的均匀性。内置电源插孔设计，箱体内可以直接使用磁力搅拌器，摇床等用电设备。箱体右侧中部开孔，带硅胶塞，方便培养过程监控及对设备进行验证。箱体底部的导轨设计，可用于大型滚平机的推进和推出操作。加固隔板设计，实现了一机多能，灵活使用的特点。WIGGENS 二氧化碳培养箱

上一篇推文，介绍了WIGGENS的CGQ生物量在线监测系统，在微生物（细胞）效能评价/菌种筛选的应用。 本期介绍生物量监测在微生物（细胞）培养条件优化中的应用。培养基为微生物（细胞）的生长提供环境条件以及碳源，氮源，生长因子等。培养基具有通用性，但每种培养物都有特殊性。在通用培养基的基础上针对培养物的特性做适当的调整或成分添加，对目的产物的高效产出，具有重要正作用。 下图是德国法兰克福歌德大学，使用CGQ生物量监测系统对Saccharomyces cerevisiae (一种酿酒酵母)在不同碳源组分中的生长曲线。 三种碳源Glc（葡萄糖）、Gal（半乳糖）、Mal（酰胺）不同浓度对酿酒酵母的生长有着明显的影响，对迟缓期和对数期的影响显著。碳源各组分浓度不同，对酿酒酵母进入平台期的时间甚至有超过6小时的差距影响。这对注重效率的工业发酵来说，减少迟缓期的时间段，有着重要的参考意义。 下图是，在M9培养基中，通过加入不同浓度的甘油，Escherichia coli (大肠杆菌)的生长曲线 从上图大肠杆菌的生长曲线可以看出，在M9培养基中，甘油浓度是对大肠杆菌最终生长量的最大影响因素。0.4%的甘油浓度对比0.1%的甘油浓度，对数生长期有明显提升，最终得到的生物量也是低浓度甘油的4倍以上。 下图是通过培养过程的摇瓶补液，CGQ进行的实时生物量监测。 在大肠杆菌培养中，通过LIS摇瓶补液系统，在摇瓶培养过程中进行在线补入缓冲液，缓冲液对pH值进行了调节。在使用LB培养基培养大肠杆菌的过程中，对生物量的限制的最大因素不是培养基组分，而是pH值，持续的进行pH调节，可以有效的增加生物量，提高培养基的利用率。更多的CGQ生物量监测应用，请参考如下文献：[1]Tripp et al (2017):Establishing a yeast-based screening system for discovery of human GLUT5inhibitors and activators (Nature – Scientific Reports)[2]Bruder, S. &Boles, E. (2017): Improvement of the yeast based (R)-phenylacetylcarbinol productionprocess via reduction of by-product formation (Biochemical EngineeringJournal).[3]Gottardi et al. (2017):De novo biosynthesis of trans-cinnamicacidderivatives in Saccharomycescerevisiae (AppliedMicrobiology and Biotechnology).[4]Bracharz et al. (2017):The effects of TORC signal interference on lipogenesis in theoleaginous yeast Trichosporonoleaginosus (BMCBiotechnology). [5]Bruder et al. (2016):Parallelised onlinebiomass monitoring in shake flasks enables efficient strain and carbon sourcedependent growth characterisation of Saccharomycescerevisia (MicrobialCell Factories).

一说到培养箱，自然而然会浮现生化培养箱、恒温培养箱系列产品，它具有制冷和加热双向调温系统，温度可控的功能，是植物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等科研，教研`教育部门不可缺少的实验室设备，广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等等。??生化培养箱和恒温培养箱是常使用的两种，同是培养箱，有什么不同之处？??一、产品特点不同??(一)生化培养箱的产品特点：??适用于环境保护、卫生防疫、药检、农畜、水产等科研、院校和生产部门。是水体分析和BOD测定，细菌、霉菌、微的培养、保存、植物栽培、育种试验的专用恒温设备。??1、带定时功能键的数显微电脑温度控制器，控温可靠；??2、采用镜面不锈钢内胆，半圆弧四角易清洁，箱内搁板间距可调；??3、采用玻璃观察窗，观察方便明了；??4、设有限温报警系统，超过限制温度即自动中断，保证实验安全运行，不发生意外； (二)恒温培养箱的产品特点：??恒温培养箱(电热恒温培养箱)适用于医疗卫生、医药工业、化学和农业科学等科研和工业生产部门做细菌培养、发酵及恒温试验用。??1、外壳采用冷轧钢板制作，表面使用静电喷塑工艺。??2、工作室采用不锈钢板或冷轧钢板加工成型，并经防锈防腐处理。??3、可选装指针式控温仪或微电脑智能控温仪，智能控温仪采用PID控制程序、大屏幕数码显示屏，轻触型操作按键，具有超温报警功能。??4、门中间设有双层钢化玻璃观察窗，便于直接观察培养物的变化。??5、磁性胶条密封，启闭方便、密封良好。二、控温精度不同：??1、生化培养箱主要用于生化反应的孵化，所以它们的门主要由玻璃组成，用于在特定温度孵化反应，操作者可在不破坏反应条件的前提下在外观察反应的变化；亦可用于细菌霉菌与控制菌的培养。??2、恒温恒湿培养箱主要用于培养细菌和控制菌，正如其名，其密封性好，温度和湿度都是可控恒定的，但不便于在外观察。 上海沪净医疗器械有限公司是华东地区净化设备行业中的公司之一，其凭借雄厚的实力，综合科技，完善的服务，敏锐的市场洞察力开发了一系列净化设备产品。我们拥有强大的销售团队、众多技术人才，良好的售后服务。可按ISO14644-1标准、GB50073-2001国家标准及国家GMP规范要求为微电子、生物医药、医院手术室、光纤光缆、食品饮料、精密仪器、半导体及新材料应用等行业的空气净化系统工程设计、施工、检测及技术服务。本公司可根据客户的现实要求和实际需要设计，定做安装洁净室系统及专用设备。 公司生产的净化工作台系列、风淋室系列、通风柜系列，生物安全柜系列一上市就受到了广大消费者和经销商的青睐和厚爱，沪净净化产品被广泛应用于医疗卫生、电子、制药、生物、食品、农林、畜牧兽医、检验检疫、航空航天、汽车制造、精密仪器、大专院校和各科研机构，在和东南亚市场享有的声誉。 经营理念：重诚信、重质量、重售后。企业精神：质量为先，信誉为重，管理为本，服务为诚。

p 　　初夏时节，万物并秀， 在这繁花盛开的时节，Infors中国和美国YSI公司联合举办了亚太区生物培养及过程监测技术培训会。来自双方亚太地区的合作伙伴参加了本次技术培训会，本次会议上通过Infors生物反应器与YSI生化分析仪的连接操作应用，展示了如何在生物培养过程中，监测多个生化参数，并反馈控制生物培养进程。YSI的产品经理Will和技术支持经理Chritopher详细介绍了最新代的生化分析仪的特点，以及与生物反应器连接使用的案例。与会的亚太代理商都表示了对生物培养过程监测有了全新理解，相信YSI最新的生化分析仪能更好地帮助客户进行生物培养，能继续强化YSI在生化分析领域的市场地位。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201706/insimg/6aa70fb1-0250-4e91-8240-185e796794ce.jpg" style=" " title=" 1.jpg" / /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201706/insimg/3769d73e-701b-40c2-9446-99d991236eb0.jpg" style=" " title=" 2.jpg" / /p p 　　1948年，在美国Yellow Springs一家名为Yellow Springs Instrument Company成立了，这就是YSI Inc.公司的前身。从成立之日起，YSI就致力于液体温度、血液溶解氧测试，并于1972年率先推出了全球第一套固定化酶极谱法传感器，开始谱写自己在生化分析领域的绚丽篇章。通过多年的努力，YSI因其高灵敏度的探头，固定化酶技术和快速可靠的检测结果而享誉全球，在全球知名的食品和制药企业、研究机构、医院、医疗机构、运动训练研究都可以看到YSI的身影。 /p p 　　1965年，在莱茵河湾德国和瑞士两国交界处的巴塞尔市，Infors AG成立了，并陆续推出了第一套振荡培养摇床和生物反应器。半个世纪以来INFORS AG 秉承了这座城市创新文化的基因和人文精神，孜孜不倦专注于生物培养技术的研究与探索，不断推出富有最新科学理念和技术的新产品。2008年，Infors AG和北京桑翌实验仪器研究所共同投资成立了Infors中国，以Infors生物培养产品为核心，致力向中国客户提供全套的生物培养解决方案。此次与YSI公司生化分析仪的合作，能更好地监控整个生物培养的过程参数，优化培养过程，为中国客户提供更完善的解决方案。 /p p style=" text-align: center " img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201706/insimg/cb1c2daa-f32c-413f-83d1-e33dfd55b4af.jpg" title=" 3.jpg" style=" width: 600px height: 384px " width=" 600" vspace=" 0" hspace=" 0" border=" 0" height=" 384" / /p

p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 简介 /span /strong /p p 　　用于重组蛋白和单克隆抗体(mAb)生产的细胞培养工艺有不同的方式。补料分批(Feb-Batch)工艺由于操作简单，且较易规模放大，被临床和商业化生产广泛采用，目前的技术发展已可在18天内获得20-30x10^6cells/mL的细胞密度，同时获得& gt 10g/L的滴度水平。 /p p 　　灌流工艺以往更多用于生产不稳定的产品，如血液凝集因子和酶类产品，但也有用于生产 mAb产品，如Remicade(英利昔单抗)。在灌流培养中，通过培养基置换，降低产物在反应器内的滞留时间，而灌流速率取决于特异性的产物和/或工艺需求。 /p p 　　近几年，在上游工艺中，基于灌流的工艺强化获得了极大的发展，驱动力主要来自于对降低成本和占地的需求，以及提高设备灵活性。随着细胞系、培养基和细胞截留设备的发展，现在的灌流工艺已可获得较高的细胞密度和产量，使其成为一个非常有吸引力的选择，包括mAb的生产。例如，在mAb生产中，结合2vvd的培养基置换速率，通常可达到50-60x10^6cells/mL的稳态细胞密度，以及高达4g/L/day的生物反应器产率。此外，浓缩补料分批(CFB)也可以通过培养基置换，维持高细胞密度，而将产物截留在生物反应器内。 /p p 　　灌流和CFB的差异在于所用的中空纤维膜的孔径。对于抗体，使用Per.C6细胞系，可在12-13天内，达到21.4g/L的终产物滴度(峰细胞密度& gt 150x10^6cells/mL)，而使用CHO细胞系时，可在16天内达到25.3g/L的滴度，峰细胞密度& gt 180x10^6cells/mL。随着生物反应器产率的提高，可使用占地更小、成本更低的一次性设备，来替代大规模的不锈钢设备(10,000-25,000L)，通过增加设备轮转或连续工艺，生产等量的产物。 /p p 　　尽管灌流工艺可使用基于过滤的细胞截留设备，如TFF和ATF，在生物反应器内获得并维持高细胞密度，但通常会要求使用较高的培养基置换速率，以将高密度细胞的活性维持在可接受的水平。与不同工艺相关的培养基成本是评估其生产等量产物时经济性的关键因素。而即使单位培养基成本适当，较高的培养基置换速率也会显著影响生产产品成本(CoG)，亦即，上游操作成本与培养基成本紧密相关。 /p p 　　生产单位产品的总生产CoG和上/下游成本的比重会随产物滴度和设备尺寸的变化而变化。在分析CoG的所有输入值中，一旦工艺确定，培养基用量及其成本是固定的，不管设备、设施等是否发生改变。细胞培养工程师的一个主要目标是降低培养基成本，同时获得高产量。本文使用相同的基础(basal)和补料(feed)培养基，稍作优化，开发了具有高生物反应器产率的不同细胞培养工艺(补料分批、灌流和CFB)，并比较了不同操作模式的生物反应器产率及其相关的培养基成本。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 实验 /span /strong /p p 　　实验使用生产单克隆抗体的重组CHO细胞系，不同工艺使用相同的3L生物反应器，培养基使用专利的基础(basal)和补液(feed)培养基，后者又分为两种补液-A和补液-B，均富含葡萄糖、氨基酸、维他命等。详细细胞系和种子扩增、生物反应器操作信息请参看原文。 /p p 　　对于补料分批培养，反应器起始工作体积1.5L，接种密度为0.5或2x10^6cells/mL，后者通过3天的N-1灌流来达到目标密度。生物反应器补液以每日葡萄糖水平为基础进行。 /p p 　　对于CFB工艺，使用50kD PS中空纤维过滤器的灌流设备，对于灌流，使用0.2μm PES中空纤维过滤器的灌流设备。接种密度1x10^6cells/mL，工作体积1.3L，一般第2天开始培养基置换，最大置换速率1vvd。灌流培养在第8天开始进行细胞废弃(cell bleeding)，以维持所需细胞密度和活性。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/b370cbae-a09d-4aad-901e-9998bacb5c16.jpg" title=" 1_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 不同细胞培养模式图解(xu et al, 2017) /span /strong /p p 　　细胞培养每日取样分析，详细分析内容和方法，请参考原文。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 讨论 /span /strong /p p 　　不同操作模式的细胞培养性能 /p p 　　实验测试操作模式包括：补料分批、灌流和CFB，使用相同的3L生物反应器规格以及基础和补料培养基组合，以便比较细胞/生物反应器产率和培养基成本。 /p p 　　补料分批模式 对于补料分批模式，接种密度为0.5或2x10^6cells/mL，后者通过N-1灌流，可使对数生长期降低2天，所以8天就可达到峰密度，而前者需要10天。两种条件达到的峰细胞密度范围均为20.2-26.2x10^6cells/mL。两种接种密度在第14天分别达到5.4± 0.1g/L和6.8± 0.2g/L的滴度。生物反应器单位体积产率(VPR)按最终生物反应器滴度除以培养周期计算。2x10^6cells/mL接种密度条件，相比0.5x10^6cells/mL，可获得更高的VPR(0.49± 0.01g/L/day vs. 0.39± 0.01g/L/day)，主要是由于前者降低了起始生长阶段的时间，延长了生产期。 /p p 　　灌流模式 在灌流培养中，使用了2种不同的培养基组成：1种只使用基础培养基，另一种为基础加补液-A。在培养过程中，通过合适的cell bleeding，维持较高的活性& gt 85%。只使用基础培养基时，平均细胞密度为44± 4.1x10^6cells/mL，从第8天至32天的日产量为0.7± 0.04g/L/day。在基础+补液条件中，随细胞密度的增加，补液-A作为培养基置换的一部分，逐渐引入，而总培养基置换率保持为1vvd，平均细胞密度增加至73.9± 5.4x10^6cells/mL，日产量增加至2.29± 0.28g/L/day。细胞特异性产率从16.0± 1.2pg/cell/day增加至30.1± 2.3pg/cell/day，从而使反应器产量增加~230%。 /p p 　　浓缩补料分批模式(CFB) 与灌流相似，评估了只使用基础培养基和使用基础+补液培养基的条件。与灌流工艺相比，CFB不需要进行cellbleeding，细胞质累积至更高的水平。当只使用基础培养基时，在第18天达到峰细胞密度72.0± 9.6x10^6cells/mL，上清液滴度为12.2± 0.6g/L。使用基础+6%补液-A+2%补液-B时，峰细胞密度为117.4x10^6cells/mL，第18天上清液滴度为21.4g/L，使用基础+8% 补液-A +8% Feed-B时，峰细胞密度为83.4x10^6cells/mL，第18天上清液滴度为36.7g/L。可见，增加补液-A和补液-B的量，可显著提高细胞特异性产率至45.1pg/cell/day。 /p p 　　细胞特异性产率、生物反应器产率和产物质量 /p p 　　当只使用基础培养基时，批次、灌流和CFB工艺可达到相似的qP，范围为14.7-17.1pg/cell/day。在此条件下，累积的细胞数量会直接影响产物滴度和单位体积产率。正如预期，批次培养的VPR显著较低，仅为0.08g/L/day，而灌流和CFB工艺由于可维持更高的细胞密度，可获得相当的VPR，0.68-0.70g/L/day。 /p p 　　浓缩补液培养基通常用于补料分批工艺，以提高细胞生长和细胞特异性产率。在此研究中，补加补液培养基，可显著提高qP和VPR。对于补料分批培养，qP提高至29.4-32.0pg/cell/day，VPR达到0.39g/L/day(接种密度0.5x10^6cells/mL)或0.49g/L/day(接种密度2x10^6cells/mL)。N-1灌流获得的更高的接种密度可提高VPR，因为缩短了生长期的时间，延长了生产期，提高产量。但是，即使与只使用基础培养基的灌流和CFB相比，补料分批培养的VPR仍较低，因为细胞密度差别显著。 /p p 　　相比补料分批工艺，只使用基础培养基以1vvd的速率进行培养基置换时，可轻松地将细胞密度提高2-3倍。而与只使用基础培养基的条件相比，在灌流培养中补充10%补液-A可使VPR提高~230%，qP提高~90%。相似的，在CFB工艺中，补充不同比例的补液-A和补液-B可将VPR提高至1.19-2.04g/L/day。 /p p 　　最近有报道显示，长寿命的人浆细胞可在体外维持120pg/cell/day的IgG分泌率，对于基因工程哺乳动物细胞，最高生产速率估计为~100pg/cell/day。qP的提高将来自于细胞系和培养基的优化。所以，理论上，在灌流工艺中，如稳态细胞密度维持为100x10^6cells/mL时，每日产量可高达10g/L/day。 /p p 　　实验同时评估了不同操作模式的产物质量特征，结果显示，CFB会形成更高水平的HMW和稍高的酸性异构体，主要是由于产物所暴露的细胞培养环境。在补料分批和浓缩补料分批中，产物滞留时间为整个培养周期。此外，在仅使用基础培养基的CFB工艺中，HMW最高，说明培养基组成可能在HMW形成中扮演了重要的角色。但是，产生的HMW仍低于5%，且大部分可在纯化步骤中去除。另一方面，即使是相同的高细胞密度环境和相似的培养基组成，灌流培养的酸性异构体和HMW更低，可能是由于产物在罐内更低的滞留时间。 /p p 　　培养基成本分析 /p p 　　由于细胞系或培养基组成的变化会显著影响产物滴度/产率，所以对不同操作模式的比较需使用相同的细胞系和培养基条件才有意义。本文使用从小规模生物反应器获得的细胞培养性能，来比较不同操作模式的培养基成本，并假定在规模放大时，不同工艺没有显著的产率下降。需要指出的是，实验中的灌流速率没有在对数生长期，以细胞特异性为基础，进行良好的优化。相反，在整个培养周期中，将灌流速率固定为1vvd。在不同的培养阶段，对细胞特异性灌流速率进行精细调节，应可进一步降低培养基用量和成本。 /p p 　　当只使用基础培养基时，生产每克抗体的培养基成本在批量和灌流工艺中都很高。加入适量的补料培养基，可降低每克mAb的培养基成本，且即使补料培养基相对较贵，细胞密度和qP的增加相比培养基成本的增加更加显著。 /p p 　　使用N-1灌流的补料分批的培养基成本比常规补料分批工艺低，N-1灌流需要3x基础培养基置换，但因接种密度的提高，继而获得的滴度的增加，抵消了培养基用量的增加。N-1灌流的补料分批和灌流的培养基成本相当，~$10/g mAb。这说明，虽然往常认为由于较高的灌流速率，灌流的培养基用量更高，继而培养基成本更高，但只需要生物反应器产率达到一定的阈值，从培养基成本上来看，还是相当有竞争力的。 /p p 　　CFB工艺的培养基成本与其它操作模式的趋势不同。在只使用基础培养基的条件中，成本与批量和灌流工艺相当，但CFB培养基成本会随补料培养基的使用而增加，其相对较高的培养基成本(& gt $17/g)可能是因为需要较长的细胞生长时间，在培养中，直到第10天，细胞密度达到峰水平，才开始出现显著的产物滴度增加。降低CFB培养基成本的一种方法是优化细胞寿命，延长批次时间，但更长的罐内滞留时间，可能会影响产物质量属性，或是进一步优化培养基，如替换昂贵的成分和优化其滴度。 /p p 　　总生产COG /p p 　　除了培养基成本的不同，使用诸如灌流和CFB之类的工艺，结合一次性设备，在小规模上进行生物制品生产，可显著降低成本投入，从而获得更加灵活的生产策略，当产品需求增加时，可以快速地进行规模扩展(scale out)，而不是规模放大(ScaleuP)。与传统不锈钢设备相关的固定成本，可以转变为“可变”的成本结构。基于此处的案例，灌流工艺的培养基成本实际上低于补料分批工艺。 /p p 　　进行总成本分析时，如下游均以批量模式进行，且认为不同工艺的劳动力成本相当，则本文建模分析结果显示，N-1灌流的补料分批和灌流工艺的下游CoG/g相当，分别为$63/g和$59/g，而标准补料分批和CFB工艺的下游CoG/g稍高，分别为$71/g和$81/g。对于mAb和不稳定的产品，基于灌流的连续工艺都可以提供显著的经济优势。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 总结 /span /strong /p p 　　在本研究中，比较了不同操作模式下，生物反应器的产率，包括补料分批、灌流和CFB工艺。对于研究的细胞系，qP高度取决于所用的培养基，不管采用哪种操作模式，这使得累积细胞密度成为决定产物滴度和生物反应器产率的主要因素。结果显示，补料分批培养生物反应器产率最低(0.39-0.49g/L/day)，而基于灌流的培养方式，由于可维持更高的细胞密度，产率相对较高，灌流为2.29g/L/day，CFB为1.19-2.04g/L/day。灌流的一个显著优势是可以达到并维持极高的细胞密度，用于产物形成。 /p p 　　灌流工艺一个经常观察到的缺点是培养基用量较高，因为需要进行连续的培养基置换，以维持所需的高活细胞密度。这里的研究显示，高产率灌流培养的培养基成本实际上低于补料分批工艺。CFB工艺的培养基成本最高，虽然在18天内达到了36.7g/L的极高滴度，为降低CFB工艺的培养基成本，建议可以精调培养基置换率，以在起始的生长阶段获得更好的培养基利用，或通过培养基优化，提高细胞特异性产率。 /p p 　　 i 小编出于交流目的编译此文，由于水平有限，不当之处，敬请谅解，详细内容，请参看原文。 /i /p p i 　　原文：S.Xu, J.Gavin, R. Jiang, et al., Bioreactor Productivity and Media Cost Comparison for Different Intensified Cell Culture Processes. Biotechnol. Prog., 2017, Vol. 00, No.00. /i /p p br/ /p

生物培养分为静态培养和振荡培养。振荡培养，亦称悬浮培养，是指把微生物细胞接种于液体培养基中，并放置在摇床或振荡器上不停振荡的一种培养方法。广泛应用于菌种筛选和微生物扩大培养，是微生物生理、生化、发酵和其他生命科学研究领域中常用的培养方式。振荡培养不适用于含有易挥发性化学溶剂，低浓度爆炸气体和低燃点气体的物质以及有毒物质的培养。那静态培养与振荡培养有什么区别呢？CO2培养箱为细胞培养模拟了一个适宜的培养环境，包括温度，CO2浓度和湿度等外部条件。如干细胞在静态培养条件下，细胞贴附在底部瓶壁，溶解氧和营养物质会形成浓度梯度。然而悬浮细胞在温和的振荡培养条件下，消除了浓度梯度，增加了溶解氧浓度，更有利于生长。在细菌和细胞培养时，振荡培养可改善与培养基成分的接触和氧的供应，特别是对真菌的培养，不会形成菌膜或者菌团。霉菌静置培养得到的菌体能明显看到是有菌丝的，形态与平板上生长状态有些类似；而摇床培养得到的菌体是球形的，即菌丝聚集成团。所以在微生物工业上与振荡培养具有同样效果的搅拌培养也已被广泛应用。组织培养中的旋转培养法也是振荡培养的一种。摇床振荡培养的作用：1、传质，就是底物或代谢产物更好在体系内转移和发挥作用。2、溶氧，在好氧培养过程中，空气是滤过开放的，所以通过振荡可以让更多空气中氧气溶解于培养基中。3、体系均一，有利于对不同参数的取样测定。

现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的。正在倍受重视的基因治疗、细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了关键的核心作用。开发合适的培养基配方与优化细胞培养条件是保证产品质量、产量以及批次之间一致性的重要因素，尤其是抗体药物偶联物、双靶点/特异抗体类药物、抗体片段融合蛋白等相对分子量大、结构复杂的抗体类药物，对其重要性不言而喻。而对于生物类似药的研发与质量控制来说，尽可能通过优化工艺缩小差异，更有利于生物类似药与原研参比品的质量对比研究，提高生物类似药的质量研究结果与参比品之间的相似性，从而使各项质量属性达到预先设置的可接受范围。目前生物制品公司的生物过程工艺开发与优化偏重于监测常规的温度、搅拌、溶解气体、OD值等理化条件和少数培养基成分与代谢物等的变化，缺乏对于细胞培养上清液组分直接、全面且快速的客观动态数据分析，因此无法精准优化细胞培养工艺条件，甚至影响抗体类药物等的产品品质；而培养基生产商为了开发高效低成本培养基配方，并且要保证批次间一致性，则需要投入大量的人力物力，配备不同检测功能的仪器来实现培养基成分的全方位检测。 为满足快速全面分析细胞培养上清液组分和培养基组分，将基础碳源、氮源、核酸、维生素和其他主要代谢物同时检测分析的需求，我们开发出“细胞培养上清液方法包”。该技术平台采用超快速三重四极杆液质联用仪，仅需17分钟，即可同时监测95种细胞培养上清液营养成份和代谢物等的相对丰度变化 。无需用户自行开发方法，即装即用。所有目标化合物信息与实验方法全内置，且根据需要可增加，可拓展。为增进用户对“细胞培养上清液方法包”的深入了解和方便使用，岛津企业管理（中国）有限公司分析中心整理编写了本册《细胞培养上清液及培养基组分分析应用文集》。本册文集介绍了“细胞培养上清液方法包”在不同培养基组分分析以及细胞培养过程监控中的应用，共收录应用文章 10 篇，为相关领域的客户使用该系统提供参考。 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。

人类诱导多能干细胞 (hiPSC) 是一类通过基因编辑技术（如 CRISPR-Cas9）对已经高度分化的人体细胞重新逆分化得到的多能性干细胞。hiPSC的出现为科学家构建复杂的疾病模型和推进药物发现提供了有利的工具。 然而，传统的hiPSC细胞系的构建与培养过程往往操作复杂且耗时耗力。特别是从异质编辑细胞池中构建的克隆hiPSC系的培养受到了传统细胞培养方法的桎梏，很难构建一个高效的hiPSC构建与培养工作流程。此外，现有的单细胞分离和培养方法通常对细胞的处理条件苛刻，操作步骤繁琐，不能充分保证单克隆性。 为应对hiPSC细胞系构建与培养过程中的诸多挑战，IotaSicences公司采用了以GRID技术为核心的高度自动化的单细胞可视化分选培养系统isoCell来构建 hiPSC系的分选与培养平台，并在不同培养基条件下对hiPSC进行了单细胞分选与培养研究。图1 单细胞可视化分选培养系统isoCell实物图 以isoCell为核心的hiPSC细胞分选与培养平台 isoCell是一款基于GRID技术的高度自动化细胞分选与培养平台。GRID是指在细胞培养基上采用FC40液体分隔出的网格小室，体积小，光学透明度高，可以容纳细胞在内生长，且各个小室之间物质不流通。isoCell系统配备了荧光和成像系统，用于在整个克隆工作流程中记录 GRID 小室的图像（见下图）。isoCell 可自动执行所有液体处理步骤，包括构建 GRID、将单细胞注射到GRID小室中以及交换培养基和收获单克隆集落。并且，isoCell可在整个工作流程中自动检测每一个 GRID 小室，并确保每一个单克隆hiPSC细胞系来源于单个细胞。 图2 GRID实物图 材料与方法 在分别铺了Laminin-521、Vitronectin-N和iMatrix 细胞培养基质的60毫米培养皿上制备的GRID网格以待使用。制备hiPSC的单细胞悬浮液，并使用 isoCell全自动地将细胞铺在GRID上（种植）。 使用isoCell自带的显微镜鉴定每个GRID室并标记每个包含单个细胞（第 0 天）的室，将该培养皿放入培养箱培养。在第3天，将标记的含有单个细胞的GRID小室加满600 nl培养基。从第5天开始，每天观察标记单细胞的GRID小室，并对选中的GRID小室补充培养基。最后，使用isoCell观察并标记构成了hiPSC单细胞群落的GRID小室，使用isoCell全自动收获标记的GRID小室中的hiPSC细胞（通常在 6-8 天之间）。 图3 以isoCell为核心的hiPSC细胞分选与培养平台工作流程图 高效的hiPSCS细胞分选与培养平台 按照上述的工作流程，利用三种不同的培养基质（包括 VTN-N、LMN-521 和 iMatrix）构建并培养了两个独立的hiPSC细胞系，并评估所得细胞的克隆效率。如图4所示，两个不同的hiPSC测试系在不同培养基质条件下，均在GRID室中显示出非常高的克隆效率，这表明采用GRID小室低容量培养方法和细胞的自动化温和处理可产生非常适合单细胞高效生长的培养环境。 图4 GRID中的单细胞 hiPSC 克隆效率（克隆效率表示培养第5天时单细胞长成细胞群落数占第0天单细胞数的百分比） 结论 以isoCell构建的hiPSC细胞分选与培养平台可以对hiPSC细胞进行全自动化且温和地单细胞分选与培养。通过isoCell特有的GRID小室网格技术与可视化分选相结合，可以确保每一个单克隆hiPSC细胞系均来自单个细胞，且isoCell的分选与培养条件温和，hiPSC单克隆细胞系成活率高。 单细胞可视化分选系统isoCell的优势：- 全自动化流程- 操作条件温和，对单细胞无损伤- 全培养、分析流程可追踪- 单细胞分离效率高达100%- 单克隆细胞系构建成活率高- 直接转移到PCR管或96孔板- 结构紧凑，体积小 单细胞可视化分选培养系统-isoCell已在Cell、Advanced Science、Small Methods、Nature Communications等知名期刊发表多篇文章，如下摘引了近年五篇具有代表性的文献和大家分享。 Soitu C, Stovall‐Kurtz N, Deroy C, et al. Jet‐Printing Microfluidic Devices on Demand[J]. Advanced Science, 2020, 7(23): 2001854.Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell, 2021, 184(9): 2454-2470. e26.Deroy C, Nebuloni F, Cook P R, et al. Microfluidics on Standard Petri Dishes for Bioscientists[J]. Small Methods, 2021, 5(11): 2100724.Deroy C, Wheeler J H R, Rumianek A N, et al. Reconfigurable microfluidic circuits for isolating and retrieving cells of interest[J]. ACS Applied Materials & Interfaces, 2022, 14(22): 25209-25219.Oliveira N M, Wheeler J H R, Deroy C, et al. Suicidal chemotaxis in bacteria[J]. Nature Communications, 2022, 13(1): 7608. 样机体验 为更好地服务中国科研工作者，Quantum Design 中国也建立了样机演示实验室，将为大家提供为专业的售前、销售、售后技术支持，欢迎各位老师垂询！ 用户名单 用户评价 路易莎埃姆斯，研究科学家：The Native Antigen Company（LGC 临床诊断集团旗下公司） “使用 isoCell 进行单细胞克隆工作从一开始就简单可靠，并且已无缝地融入我们的流程中。 该程序对细胞很温和，我们看到非常好的存活率，可以筛选大量克隆。 我们收到的客户服务是优质的。”

1、细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史，细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。1.1 平衡盐溶液（balanced salt solution，BSS）BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank' s与Hank' s的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank' s常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份，参与细胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液，前者缓冲能力较弱，适合于密闭培养；后者缓冲能力较强，适合于5% CO2的培养条件。表1-1 几种常用的BSS配方（g/L）名称PBS（无Ca2+、Mg2+）PBS（含Ca2+、Mg2+）Earle’sHank’sD-Hank’sKrebs-RingerNaCl8.008.006.808.008.007.00KCl0.200.200.400.400.400.34CaCl2--0.200.14-MgCl2• 6H2O-0.10---MgSO4• 7H2O--0.20.2-Na2HPO41.151.15-0.0480.0480.10Na2HPO4• 2H2O--0.14--0.207KH2PO40.200.20-0.060.06NaHCO3--2.200.350.35-葡萄糖--1.001.00-1.80酚红--0.010.010.01-目前用于细胞培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。此外，血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。目前，血清多作为一种添加成分与合成培养基混合使用，使用浓度一般为5~20 %，最常用是10 %。1.2 合成细胞培养基合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。最早开发的基础培养基（minimal essential medium, MEM），其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上，DMEM、IMDM、HAM F12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍，其特性及应用的范围见下表：哺乳动物细胞培养基：培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后，可广泛用于多种细胞培养，并用于病毒学、疫苗生产等MEM细胞培养基MEM（Minimal Essential Medium）培养基有含Earle' s平衡盐的类型，也有含Hanks' 平衡盐的类型；有高压灭菌型的，也有过滤除菌型的；还有含非必需氨基酸的类型。是最基本、适用范围最广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM（Dulbecco’s modified Minimal Essential Medium）是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的，各成分份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM（Iscove’s modified DMEM ）是由Iscove在DMEM基础上改良，增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交瘤细胞培养，以及无血清培养的基础细胞培养基。GMEM细胞培养基Glasgow’s MEM培养基是MEM的改进型，用于支持BHK-21细胞的生长。原配方以BME为基础， 加入10%磷酸胰蛋白(月示)肉汤，氨基酸和维生素浓度加倍。RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计，含有BSS、21种氨基酸、维生素等，广泛适于多种正常细胞和肿瘤细胞的培养，也用做悬浮细胞培养。HamF12细胞培养基含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F12适用于CHO细胞，也是无血清细胞培养基中常用的基础细胞培养基。DMEM/F12细胞培养基将DMEM和F12按照1:1比例混合，混合后营养成份丰富，血清使用量也减少，常作为开发无血清细胞培养基时的基础细胞培养基。McCoy' s5AMcCoy' s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)原代细胞的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。William' s Medium E适用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。神经元基础培养基可为神经元生长提供基础营养物质。昆虫细胞培养基：培养基名称特性及应用范围Grace' s昆虫培养基Grace昆虫培养基（Grace' s Insect Medium）最初设计为支持澳大利亚白星橙天蚕蛾 (Antherea eucalypti) 细胞 的生长，是对Wyatt培养基的改良，以更接近 Antherea 血淋巴。Grace用这种培养基建立了第一个连续细胞系。适当补充添加剂后，该基本培养基已用于培养各种昆虫细胞，包括多种鳞翅类以及一些双翅类昆虫。Grace昆虫细胞培养基主要作为 培养基基础，用于培养Sf9 和Sf21细胞系，也用于其它鳞翅类昆虫细胞系的生长和维持。Grace' s培养基(Grace’s Insect Cell Culture Medium) 是无血清培养基，使用时需要补充血清，从而为细胞提供必要的营养因子。添加5 -20%胎牛血清后，Grace昆虫细胞培养基可以用于培养多种昆虫细胞。IPL-41 昆虫培养基 IPL-41昆虫培养基（IPL-41 Insect Medium）旨在用于大规模扩增草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）细胞系，也常用于通过杆状病毒表达系统（BEVS）进行蛋白表达。 IPL-41培养基是对原始IPL配方的改良，由美国农业部昆虫病理实验室Weiss等人开发，用于大规模扩增草地贪夜蛾衍生细胞系。Weiss向基础培养基中加入了胎牛血清和TPB培养基（Tryptose Phosphate Broth），成功地实现了IPL-21 AE (III)细胞系的大规模连续培养。该培养基主要用于培养和维护鳞翅类衍生细胞系和扩增这些细胞系的病毒。IPL-41培养基基础也以用于无血清夜蛾细胞的杆状病毒重组蛋白表达。Shield' s & Sang Insect向Sheilds-Sang M3昆虫培养基中添加10%胎牛血清后广泛用于培养各种果蝇细胞系。Sheilds-Sang M3昆虫培养基（Sheilds and Sang M3 Insect medium） 基于D22培养基。该培养基支持黑腹果蝇衍生细胞的生长。Sheilds和Sang将原配方中的氯化物除去，用谷氨酸盐提供钠和钾离子，并用游离氨基酸替代乳白蛋白水解物。Bis-Tris作为缓冲剂放置pH变动。Schneider' s 果蝇培养基 很多昆虫组织培养基的配方是模拟特定昆虫体液的主要物理化学性质。针对相同物种的不同培养基成分的相似度可能比针对不同物种的培养基之间更低。有多种培养基用于果蝇细胞和组织的体外培养。应用最多的是Schneider 培养基、D-22 培养基。果蝇细胞用于研究各种生物化学过程，包括遗传学、内分泌学、生理学和细胞生物学等方面，以及重组蛋白的表达。加入5-20% 胎牛血清后Schneider培养基能够支持黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）原代细胞和建立的细胞系的快速生长。该培养基用于培养和维护果蝇胚胎衍生的细胞系以及其它双翅目昆虫细胞培养物细胞培养基常用几种重要的添加成分及使用过程中应注意的问题酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。一般情况下，可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值，但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响，也可通过纯化技术去除，但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 ～7.4范围内具有较好的缓冲能力，在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34 g /L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10～25 mmol/L。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖的条件下，细胞也可以代谢丙酮酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4 ℃下放置1周可分解50 %，使用中最好单独配制，置-20 ℃冰箱中保存，使用前加入细胞培养液中。赖氨酸（L-lysine）：分子量大于70,000的多聚赖氨酸可以用于促进细胞贴壁生长，也可以用于组织学(Histology)分析时的粘片剂。Poly-L-lysine和Poly-D-lysine都可以用于促进细胞的贴壁生长。Poly-L-lysine可以被某些细胞所消化并吸收，摄入过多的Poly-L-lysine会产生一定的细胞毒性。如果遇到Poly-L-lysine有细胞毒性的情况，可以考虑选用Poly-D-lysine，因为右旋的聚赖氨酸是不会被生物吸收利用的，所以毒性更低。远慕生物致力于生物技术和生命科学等行业领域，专注于植物生物学技术研究，以满足全球不断增长的食品，能源、医药日益增长的需求和发展。目前远慕生物制造和提供的产品主要有动物细胞培养产品（包括细胞培养基、FBS、缓冲溶液、抗菌剂和其他试剂）和植物生物学产品（包括植物组织培养基、凝胶系列产品、植物生长调节剂、抗生素&抗菌剂、生化试剂以及植物组培容器和耗材）。

微生物已经在工业、农业、能源、环境、医药等诸多领域发挥着无可替代的作用。筛选获得优良的菌种是提升相关产业技术水平的重要途径。通常，微生物的液体培养筛选需要同时在数十上百个培养瓶或试管中进行。这使得整个筛选过程劳动强度大，效率较低。 　　最近，中科院苏州纳米技术与纳米仿生研究所国际实验室的甘明哲博士设计开发了一种用于细菌平行悬浮培养的多通道微流控芯片(图1)，可以一次进行多个细菌培养实验。该芯片在7.5×5 cm2面积上集成32个独立平行的细菌培养单元，每个单元的培养液需求量极少，仅为50nL。在集成的气动微泵驱动下，培养单元内的液体能够循环流动，带动细菌在培养液中悬浮生长，且液体流速基本一致，适合进行平行实验。由于整个芯片材料透明，可以随时观察芯片内细菌的生长情况。在此芯片上，分别进行了大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、施氏假单胞菌、运动发酵单胞菌等重要工业细菌的悬浮培养测试，证实了该芯片对于不同细菌培养的通用性。该芯片制作工艺简单、制作成本低，是一种高效的细菌悬浮培养解决方案。该芯片结构已申请专利，相关研究测试结果发表在Lab on a chip上。 　　在此基础上，研究人员进一步开发了第二代微生物悬浮培养芯片(图2)。与前代芯片相比，该芯片的集成度更高，在相同的面积上培养单元数量提高到120个，且单元内的液体循环流速更高，这拓展了该芯片的微生物适用范围。该芯片不仅可用于培养细菌，也可用于培养体积更大的酵母菌。同时，芯片的制作工艺更加简化，这为以后芯片的低成本批量化生产提供了可能。该芯片设计已申请专利，相关结果已在Small上发表。 　　此项工作是“高效菌筛选检测系统”项目的一部分，该项目旨在运用微流控技术，开发用于微生物菌种高通量筛选和条件优化的芯片化系统，加速微生物高效、高产菌株选育及配套工艺的开发。后续工作将进行微生物代谢物微量快速检测模块的设计构建。 　　该项目工作得到了中科院百人计划项目、中科院知识创新工程重要方向项目的大力支持。 　　图1 第一代32通道细菌悬浮培养芯片 　　图2 第二代120通道微生物悬浮培养芯片

IKA控温箱产品线新增两个新成员：培养箱 INC 125 F digital 和振荡培养箱 INC 125 FS digital。培养箱主要应用于生科领域，如微生物培养，稳定性研究或细胞培养。INC 125 FS digital 是一款具有可拆卸摇板的振荡培养箱。移除摇板，INC 125 FS digital 可用作普通培养箱。精确控温培养箱 INC 125 F digital 在 RT+8℃-100℃、振荡培养箱 INC 125 FS digital 在RT+8℃-80℃ 都有很高的温度稳定性。优良的箱体绝热性能和强制空气对流保证快速加热和精确、均匀控温。打开门后可迅速再次达到初始温度。快速清洗和去污 耐腐蚀材质的内腔易于清洁。使用去污模式，可有效降低培养箱中的交叉污染风险。用户友好的操作 通过清晰的数显显示屏，可以方便地使用计时器、定时器和定时器自动模式。培养箱的外门都可以打开 180°。振荡培养箱配有内部照明。节省空间 培养箱选配合适配件可进行堆叠放置。大大节省实验室空间。振荡培养箱 INC 125 FS digital 规格可选摇板具有通用设计，可配套容器固定夹或 STICKMAX 粘垫使用。摇板上有标记可安全放置样品。振荡培养箱 INC 125 FS digital 有两个机型可选，周转直径20 mm 或 25 mm 周转直径的摇板包含在交货清单中。 关于 IKA IKA 集团是实验室前处理、分析技术、 工业混合分散技术的市场领导者。电化学合成仪、磁力搅拌器、顶置式搅拌器、分散均质机、混匀器、恒温摇床、移液器、研磨机、旋转蒸发仪、加热板、恒温循环器、粘度计、量热仪、实验室反应釜等相关产品构成了IKA 实验室前处理与分析技术的产品线；而工业技术主要包括用于规模生产的混合设备、分散乳化设备、捏合设备、以及从中试到扩大生产的整套解决方案。IKA 还与全球知名大学和科学家进行着密切的合作, 支持其在科研道路上不断探索。我们致力于为客户提供更好的技术, 帮助客户获得成功。IKA 成立于1910年，集团总部位于德国南部的Staufen，在美国、中国、印度、马来西亚、日本、巴西、韩国、英国、波兰等国家都设有分公司。

党的二十大报告指出：“实现碳达峰碳中和是一场广泛而深刻的经济社会系统性变革。”当前，在推进这场系统性变革的过程中，如何充分发挥高校基础研究深厚和学科交叉融合的优势，加快构建“双碳”科技创新体系和人才培养体系，对于如期实现“双碳”目标至关重要。高校发展现状与“双碳”目标存在一定错位人才培养。当前，培养具备科学素养、创新意识、跨界能力的“双碳”人才，将给高校人才培养工作带来一定挑战。一是认知不足。尽管相关部门已经对“双碳”进行了一定普及和宣传，但不少教师、管理者对“双碳”所关注的核心要义仍然没有形成清晰的认识，无法深刻理解其在人才培养活动中的价值。二是融合困难。基于“双碳”目标的实现，一些高校对人才培养目标、课程体系及学科设计的调整速度相对较慢，针对创新型人才的培养重视程度不足，对于如何将“双碳”有机融入相关人才培养活动，也没有形成可操作的方案。师资力量。当前，“双碳”相关专业逐渐增多，对高校教师队伍建设的挑战会越来越明显。一是基础性专业师资不足。推动“双碳”是一项复杂的系统工程，要求基础师资量大而面广。然而，各高校中涉及“双碳”的教师数量较少，且没有接受过系统培训，很多教师自身不具备“双碳”教育的经验和经历。二是高水平创新人才缺乏。局限于以往的学科、专业设置，我国尚未设置专门的“双碳”学科领域，与之相关的高水平创新型专业人才相对缺乏。专业和课程建设。专业方向定位是否科学、合理、准确，直接关系到“双碳”人才培养目标的达成度及培养质量。尽管我国已提前布局，不少高校与“双碳”相关的专业和课程建设也取得了一定成效，但专业和课程的内涵建设仍有待加强。一是专业建设质量。目前，国家主要通过修订本科专业类教学质量国家标准、实施一流专业建设计划、推进“保合格、上水平、追卓越”三级专业认证体系等方式，开展专业内涵建设。接下来，如何在专业内涵建设中适度体现“双碳”目标，将成为一个亟待解决的问题。二是课程建设水平。高校课程内涵建设主要包括内容体系设计、课程思政等诸多方面，如何有机地将“双碳”目标嵌入高校课程内涵建设的各个方面，进一步提升课程建设水平，提高创新策源能力，必将成为另一个亟待解决的问题。协同治理落实。“双碳”目标的实现，需要气象、能源、环境、材料、建筑、经济、管理及法律等相关专业学科协同参与、共同推进，这给我国高校落实学科协同治理带来了一定挑战。一是顶层设计问题。“双碳”具有鲜明的交叉融合特点，需要各学院、各部门之间落实协同工作，而当前我国的大多数高校在顶层设计、协同治理方面还存在很大的提升空间。二是协同创新问题。推动实现“双碳”目标，既要探索科学认知，探究最前沿的科学问题，也要推动科学传播，凝聚全社会共识。这就需要优化协同治理体系，强化交叉学科建设，目前不少高校在这方面也存在较大的提升空间。加快构建“双碳”科技创新体系和人才培养体系加强专业人才培养。当前，相关高校须将“双碳”目标融入人才培养活动，强化国家目标、市场需求与人才培养之间的内在联系，加快培养低碳行业专业人才。一是提高教师思想认识水平。通过各种形式的学习、交流及培训等活动，促使教师在思想上认可“双碳”目标的重要性，将其内化为教书育人的动力。二是加强通识教育。鼓励开设与“双碳”相关的通识课程，引导学生学习负碳、零碳、低碳和脱碳知识，树立绿色低碳理念，加深对“双碳”的了解，真正让“双碳”融入课堂和生活。三是强化实践教学。通过德育、思政及专业课程实践环节，引导学生从身边做起，传播绿色低碳育人文化，践行绿色低碳发展理念。强化师资队伍建设。专业化和高水平的师资队伍建设是实现“双碳”目标的关键。为此，高校须加强“双碳”领域所需人才的培养、引进等工作。一是提升基础师资水平。可以通过举办各种类型的高级研讨班、进修班等形式，培养“双碳”领域的基础性师资人才；还可以集中选择部分教师，开展以知识普及、业务传授等为主要内容的培训活动，以补充基础性师资。二是加强人才引进和交流。高校需要提前布局，对我国“双碳”领域所需的高层次人才，加大引进力度。尤其要借鉴相对成熟的欧盟碳交易人才培养经验，加大对海外碳金融、碳管理领域优秀人才的引进力度，支持碳金融、碳管理师资队伍建设。三是实施人才特区政策，推进师资队伍高端化。在“双碳”领域排筛出一批世界级名家和杰出领军人物，从而有针对性地寻求合作。有条件的高校，还可以布局、建立一批“双碳”科学家工作室，为高端人才量身定制发展平台，促进我国“双碳”科学研究尽快跻身“世界舞台”。深化专业和课程内涵建设。锚定“双碳”目标，高校需要继续深化专业和课程的内涵建设。一是构建专业内涵建设评价体系。参考一流专业建设方案，高校要构建“双碳”相关专业内涵建设的评价体系，如专业目标、师资队伍、支撑条件、教学改革、培养质量、专业特色等，并设计出量化指标。二是推动专业优化与调整。高校需要深化人才培养供给侧结构性改革，通过关、停、并、转等形式，进行专业优化与调整，培育建设新能源、储能、智慧能源等新兴专业学科，并开设与“双碳”有关的专业方向。三是注重开展专业交叉融合。相关高校可以依托既有资源和优势，设立碳金融、碳管理等方向的人才培养和培训基地，增设碳金融、碳管理专业和研究生培养二级学科或交叉学科，推进碳金融、碳管理专业建设，加快培养碳金融、碳管理等领域紧缺人才；以能源、环境、经济、管理及法律等专业为基础，突破专业壁垒，开展交叉融合创新，支持多专业协同，培养复合型低碳人才。推进协同治理活动。为实现学校发展与治理体系、治理能力现代化的要求相匹配，高校要努力构建协同治理体系。一是倡导多方协同培养，进一步完善高校产教融合与校企协同育人机制，如推广政产学研用融合发展制度，推动校企在创新驱动等领域开展合作，并通过专业共办等多种形式与手段，构建协同发展模式，打造协同治理体系。二是打造多元协同治理体系。从顶层设计、部门协同现实出发，打造出各方主体深度参与的多元协同治理体系，从而推进“双碳”领域教育教学活动的顺利有效开展，形成我国高等教育领域人才培养“多主体、强合作、共发展”的多元协同运行系统。（作者姚山季系南京工业大学经管学院教授、教务处副处长，韩雪媛系南京工业大学经管学院硕士研究生）

选择CO2培养箱主要从几个方面来考虑：CO2浓度、温度、湿度控制，污染物控制和操作便捷，以下就从这几个方面来概述CO2培养箱的功能。CO2浓度控制 通过培养箱内置的红外或热传导传感器进行监控CO2浓度。 CO2浓度检测传感器主要分成两种：热传导（TC）传感器和红外传（IR）感器 热传导（TC）传感器工作原理是检测两个热敏电阻的阻抗值，其中一个位于培养室环境中，另一个被封闭。CO2浓度通过测量阻抗值而测得。热传导系统的缺点是温度和相对湿度的变化会影响传感器的精度。 红外（IR）传感器是通过光学传感器来检测CO2浓度，培养室内的气体流经红外发射器和传感器之间。由于气体中的CO2吸收红外线，传感器检测到红外线衰减。红外线的衰减量与气体中的CO2浓度成相关性。红外传感器不会受到温度和湿度变化的影响，所以IR传感器的精度比TC传感器要高，特别是培养箱门开启时。红外传感器的价格比热传导传感器的价格要昂贵一些。WIGGENS的 CO2培养箱系列采用红外（IR）双光束传感器， 保证了CO2浓度控制的精准性。 温度，湿度控制 温度控制对培养细胞的健康和生长非常关键。CO2培养箱主要有两种温控类型：水套式和气套式。 水套式培养箱通过一个独立隔套中的水环绕在内腔体周围维持温度。气套式培养箱通过安装在培养室周围的腔体的加热器进行进行加热，并将热量传递到培养室内。 气套式加热系统在培养箱门开启或者温度设置变化时，可以更快的恢复设定温度。气套式加热系统对于用户而言，更简单，无需诸如，监测和清空水套夹层中的水等操作。在培养区域外安装一个风扇，可以帮助培养室内的空气循环，而不会干扰细胞培养，当箱门开启，关闭时，这种温和的循环可以加快内部温度，CO2浓度和湿度的恢复。 湿度控制有助于减少培养液的蒸发，对体积小，时间长的培养有重要意义。 WIGGENS的 CO2培养箱系列采用，六面内腔加热方式，空气循环系统保证箱体内温场环境均匀，无温度死角。加湿水盘直接放置在加热面上，配合循环系统保证了箱体内饱和湿度控制。污染控制 污染是细胞培养失败的主要原因之一。CO2培养箱应具备良好的污染控制，防止培养过程中的细胞污染。 WIGGENS的 CO2培养箱系列，通过HEPA过滤，紫外灯在线除菌，对循环空气进行灭菌处理，铜制内腔的有良好的抑菌效果；弧形转角设计，让清洗不留死角。120℃自动消毒循环，有效杀灭箱体内微生物。WIGGENS培养箱的多重抑菌，杀菌污染控制，让细胞培养更高效。 操作简单 WIGGENS的 CO2培养箱系列，简单操作即可实现培养条件的设置，并进行自动化运行，实现“设定后不管”的操作模式。如果出现非正常工况，机器自动对CO2浓度和温度偏离报警。Biomix for CO2 IncubatorsCO2 培养箱增值功能

使用厌氧培养箱不可忽略的几点厌氧培养箱亦称厌氧工作站或厌氧手套箱。采用紧凑式筒状设计，实现单人单手轻松转移样品。一般由恒温培养室、厌氧操作室、取样室、气路及电路控制系统、箱架、瓶架、熔蜡消毒器等部分组成。内腔机械强制对流与内腔正压，实现恒温、控湿、除氧、生物脱毒四方面状态稳定均一，并且快速恢复，操作培养同室进行。是一种可在无氧环境下进行细菌培养及操作的专用装置，可培养最难生长的厌氧生物，又能避免往厌氧生物在大气中操作时接触氧而死亡的危险性。因此本装置是厌氧生物检测科研的理想工具。是一种在无氧环境条件下进行细菌培养及操作的专用装置。它能提供严格的厌氧状态恒定的温度培养条件和具有一个系统化、科学化的工作区域。相关技术人员表示，使用厌氧培养箱不可忽略下列的几个细节：　　1、厌氧培养箱培养物放入必须是在操作室内达到绝dui厌氧环境后放入。　　2、调换气瓶时，注意要扎紧气管，避免流入含氧气体　　3、真空泵按要求使用，定期检查加油。　　4、整机应安放在温度温差较小，操作方便的位置，应避免阳光直晒和远离采暖设备，放置要平稳。　　5、停止使用，关闭总电源键，及设备后部的电源开关。　　6、开机前应全面熟悉和了解各组成配套仪器、仪表的说明书、掌握正确的使用方法。　　7、仪表尽可能地安装于空气清静，温度变化较小的地方。　　8、如发生故障（停气等原因）操作室内仍可保持12小时厌氧状态。（超过12小时则根据需要把培养物取出另作处理）。　　9、厌氧培养箱经常注意气路有无漏气现象。

细胞在体外能够成功生长，培养基的选择及培养方法的优化十分关键。细胞在单纯的培养基中不能存活，各种类型的细胞培养中必须提供某些生长因子、黏附和伸展因子、微量元素等营养物质。传统培养基中一般会添加动物血清如牛血清等。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。其中胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 血清培养的优势与局限采用天然来源的血清作为细胞培养添加物，优势在于提供丰富全面的细胞生长必需的营养，并且提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，调节其活性。结合蛋白还能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。血清还是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。但血清的使用也存在一定局限性。(1)血清可能含有细胞生长抑制因子和毒性因子，存在潜在毒性；(2)血清的获取成本高，价格较为昂贵；(3)血清由于成分不完全明确，给细胞培养的标准化带来困难，同时也给细胞表达目的产物纯化等下游操作带来困难。 无血清培养优势由于常规血清培养基存在上述问题，近年来无血清培养基越来越受到重视，其开发和应用渐成趋势。无血清培养基不含动物血清或其他生物提取液，仍可使细胞在体外较长时间生长、增殖或维持。无血清培养基可以针对特定的细胞类型配制专用的培养基，如爱必信生物研发推出的人间充质干细胞培养基，可以帮助精确地控制细胞的增殖和分化过程等。无血清培养基尤其应用于哺乳动物细胞的大规模工业培养。同时，它也是研究细胞生长、增殖、分化及基因表达调控的有力工具。无血清培养基具有以下优点：(1)其组成明确，可避免血清不同批次带来的质量变动，提高可重复性。(2)避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染风险。(3)避免血清不明组分对实验研究的影响。(4)有利于体外培养细胞的分化。(5)可提高细胞产物的表达水平并易于纯化。 所以，说了这么多，您是在进行细胞的常规有血清培养还是无血清培养呢？您更看好哪一方呢？爱必信生物提供优质、高性价比的血清产品，降低您的常规细胞培养成本！ 货号 品名 规格 价格 abs972 胎牛血清(优级) 500ml 3465 abs973 胎牛血清(优级),辐照 500ml 3675 abs974 胎牛血清(标准级) 500ml 2541 abs975 胎牛血清(标准级),辐照 500ml 2751 abs993 无外泌体胎牛血清 50ml 2478 abs976 新生牛血清(超级) 500ml 2268 abs980 澳洲新生牛血清 500ml 1155 abs981 BHK细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs983 Vero细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs985 二倍体细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs987 CHO细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685针对现今越来越旺盛的无血清培养需求，爱必信生物特研发推出无血清干细胞培养的全面解决方案：！ 产品用途 货号 品名培养基 abs9401 Xeno-Free人间充质干细胞培养基（无酚红） abs9402 Xeno-Free人间充质干细胞培养基 abs9403 人多能干细胞条件培养基 abs9404 人多能干细胞完全培养基 abs9405 人多能干细胞分化培养基 abs9419 人脐带间充质干细胞无血清培养基(无酚红） abs9420 人脂肪干细胞无血清培养基(无酚红）基质胶 abs9410 即用型基质胶潜能分化 abs9406 人间充质干细胞成软骨分化试剂盒 abs9407 人间充质干细胞成脂分化试剂盒 abs9408 人间充质干细胞成骨分化试剂盒分化鉴定 abs9414 成脂检测染液 abs9415 成骨检测染液 abs9416 成软骨检测染液消化液 abs9409 人多能干细胞消化液 abs9411 Xeno-Free细胞消化液冻存液 abs9417 无血清细胞冻存液（科研级） abs9412 ES/iPS细胞冻存液 abs9413 无血清细胞冻存液（治疗级）添加物 abs9120 B27 NeuroMix (50x) abs44077956 Recombinant Human Transferrin重组人转铁蛋白更多细胞培养产品： 产品用途 货号 品名血清 abs972 胎牛血清(优级) abs973 胎牛血清(优级),辐照 abs974 胎牛血清(标准级) abs975 胎牛血清(标准级),辐照 abs976 新生牛血清(超级) abs980 澳洲新生牛血清 abs993 无外泌体胎牛血清抗生素 abs9245 青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗) abs9246 青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液(100×三抗) abs9244 青霉素-链霉素溶液(100×双抗) abs47014828 Hygromycin B(潮霉素B)消化液 abs47047375 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红 abs47014935 Accutase Cell Detachment Solution abs47014937 Trypsin (0.25%), Phenol Red abs47014938 Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol RedDMSO abs9187 二甲基亚砜(DMSO)(细胞培养级)添加物 abs9156 BSA（细胞培养级） abs42019847 Insulin重组人胰岛素 abs9169 Insulin, from Bovine Pancreas abs9119 Bovine Pituitary Extract (BPE) abs80002 鸡胚提取物Absin特色产品线（全部现货）：WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)... 爱必信(上海)生物科技有限公司联系邮箱：info@absin.cn公众平台：爱必信生物

变异链球菌的菌落特征与使用范围及培养方法！ 变异链球菌属于甲型溶血性链球菌类，菌体较小，呈圆形或卵圆形，常成双或以短链状排列，革兰染色呈阳性。它在胰蛋白胨培养基中和含有95％氮气及5％二氧化碳混合气体的环境下生长良好。 一、菌种简介平台编号：Bio-53150规格：冻干物拉丁属名：Streptococcus Mutans菌株名称：变异链球菌其他编号：ATCC700610培养基编号：116或114,5% CO2 or 厌氧培养温度：37培养时间：48 小时用途：对红霉素、利福平、利福霉素AMP、壮观霉素、链霉素敏感。血清型C。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）保藏条件：斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。甘油请置于-80°C。 二、培养基TSA+5%脱纤维蛋白羊血（血琼脂平板） 三、菌落特征变异链球菌在血平板培养基上呈旺溶血，菌落较小，呈灰白色、圆形，表面突起，菌落质地较硬，有嵌入培养基内生长的趋势。 四、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

干细胞分化成肝类器官并且进行串联培养方案1 实验目的 该 SOP 描述了由肝癌细胞系（HepaRG）和原代人肝星状细胞 （SteCs） 组成的肝球体的培养，形成肝脏类器官。此外，还描述了将肝脏类器官整合到 MOC 中，可以与其他类器官串联起来共培养。肝球体的生长大约需要 3 小时。从 384 孔微孔板中去除肝球体大约需要 2~5 小时，具体取决于所需的肝球体数量。将肝球体整合到 MOC 中至少需要 1 小时，这也取决于所需 MOC 的数量及所需的肝球体数量。应计算准备细胞培养的额外时间（约 1 周）以及 MOC 的交付时间。 本 SOP 深入描述了 Corning® Spheroid Microplate 384 孔板（参考号 3830）的装载、这些肝球体的后续收集和计数以及它们与 MOC 的集成以进行进一步的动态培养。 所有描述的工作步骤都应在无菌操作条件下执行。应特别遵循正确洗手以及始终使用手套。 2 负责人 主要负责人：Alexandra Lorenz SOP 作者：Naomia Sisoli-Sambo、Juliane Hübner 与本 SOP 中描述的工作步骤的偏差必须立即报告给 Alexandra Lorenz 女士。如果更改获得批准，则必须相应地修改 SOP。 3 多器官芯片（MOC） 的无菌处理 为避免污染，必须遵守无菌实验室工作的通用准则。在将 MOC 放入生物安全柜之前，应先喷洒经批准的杀菌剂（例如 80% 乙醇）对其进行消毒，然后用无菌纸巾擦拭（建议使用浸泡在消毒剂中的市售纸巾）。必须特别注意引入的任何部件（注射器适配器、组织培养小室支架和泵连接端口）它们的连接和盖子。掉在地上的部件必须用无菌、高压灭菌的备件更换。因此，在运行 MOC 时，必须始终提供适当数量的无菌备件。 除离心、细胞计数和培养（37°C，5% CO2）外，所有工作步骤均应在超净工作台中进行。 4 所需材料 名称备注分化的HepaRG细胞8 mio cells/vial HPR116NS, Biopredic星状细胞 （SteCs）SC-5300 （Provitro）ScienCellSteCs培养基SC-5301 （Provitro）ScienCell80%乙醇消毒组织例如 Bode Chemie GmbH（德国）的 Bacillol AF 纸巾HepaRG 培养基Williams E基础培养基（500 ml） 不含酚红，含 2.24 g/L NaHCO3），例如PAN-Biotech P04-29510 或 HIMEDIA AL240-500ML 10% FCS （50 ml）；5 x 10-5mol/L 氢化可的松半琥珀酸盐（500 µ l 来自 25 mg/ml 原液）；5 µ g/ml 胰岛素（250 µ l 来自 10 mg/ml 储备液），例如PAN P07- 04300 2mM 谷氨酰胺（5 ml 来自 200 mM 原液）；5 µ g/ml 硫酸庆大霉素（50 µ l 来自 50 mg/ml 原液）；0.25 µ g/ml 两性霉素 B（500 µ l 来自 250 µ g/ml 原液）；分化培养基含 2% DMSO 的 HepaRG 培养基Trypsin/EDTA 5x用于收集 HepaRGs0.25% 胰蛋白酶/2.21mM EDTA，例如康宁 25-053-CITrypsin/EDTA 1x用于收集 SteCs0.05% 胰蛋白酶/0.53mM EDTA，例如康宁 25-052-CIPBSw/o Ca 和 Mg，例如康宁 21-031-CVR Gilson Platemaster 96 道移液器用于 384 孔板的 Gilson Platemaster 适配器移液器吸头试剂容器灭菌Axygen RES-SW96-HP-SI 或 RES-SW12-HP-SI用于 15/50ml 管的离心机二氧化碳培养箱显微镜细胞计数装置泵控制单元TissUse 有限公司泵管2 毫米 x 1.6 毫米聚氨酯泵管，SMC（美国）扳手 1扳手尺寸 7 毫米 （ISO 272）扳手 2扳手尺寸 10 毫米 （ISO 3318）内六角扳手扳手尺寸 1.5 毫米 （ISO 4762）泵连接端口来自 SMC（美国）的 KJS02-M3 型，内六角，端口尺寸 M3微孔板384 孔黑色透明圆底超低吸附肝球体微孔板康宁 3830大口径提示康宁 TF-205-WB-R-S24孔超低吸附板康宁3473细胞培养处理的培养瓶和培养皿例如康宁定轨振荡器PS-M3D Grant Instruments灰色和斜体字部分由 TissUse GmbH 提供 5 实验操作5.1 样品准备在肝球体形成前 5 天，根据实验需要解冻尽可能多的分化 HepaRG 细胞。一个循环需要 40 个肝球体（每个由 24,000 个 HepaRG 细胞和 1,000 个星状细胞组成）。每个接种满的 384 孔微孔板将提供大约 300 个肝球体。要完全接种满一个 384 孔微孔板，需要 921.6 万个分化的 HepaRG 细胞。由于一瓶分化的 HepaRG 细胞含有大约 800 万个活细胞，因此应计算每个接种满的 384 孔板需要两瓶。请注意：细胞是在完全融合时接种的，以避免去分化。因此，在接种过程可以丢掉一些细胞，因为准备有富余。 每个小瓶 500 µ l 分化的 HepaRG 细胞（订单号 116NS）应在 9.5 ml HepaRG 培养基中稀释，以将 DMSO 降低至0.5%的终浓度。以0.2 x 106/cm2的密度将活细胞计数后种到适当的细胞培养皿中（例如，800 万个细胞种到60 mm 2培养皿上，2个培养皿；或1600 万个细胞种到一个 T75 培养瓶上）。5-12 小时后必须在无菌条件下将培养基更换为 10 ml 分化培养基（2% DMSO）。随后，每两到三天将培养基更换为 10 ml 新鲜分化培养基。 SteCs 应在肝球体形成前约 2 天解冻并放入培养物中。一个装有 SteCs 的 T175 培养瓶将提供至少五个 384微孔板。首先需要预热SteCs 的培养基，一个小瓶约 1-2 x 106 SteCs 需用 9 ml 培养基，离心，重悬于 1 ml 新鲜培养基中，然后接种到含有 24 ml 温热的星状细胞培养基的 T175 细胞培养瓶中。第二天更换培养基以去除死细胞。 对于扩大培养，SteCs 可以生长到 70% 的融合，然后细胞开始增殖。无菌条件下的培养基更换必须每两到三天进行一次。不应使用通道数高于 P8 的 SteCs。 图 1 单层分化的 HepaRG 细胞和 HHSteC 的相差显微镜。 （A） HHSteC 在第 9 代的相差图像和（B） 在接种后 4 天分化的 HepaRG 细胞。比例尺 100 µ m。 5.2 细胞的收集准备 HepaRG 细胞进行收集，用 10 到 20 ml PBS 冲洗两次。洗涤后，使用胰蛋白酶/EDTA（5x；0.25% 胰蛋白酶/2.21mM EDTA；室温）从细胞培养瓶底部分离细胞。为此，将培养皿中的适量胰蛋白酶/EDTA 涂抹在细胞上，并在 37°C 下孵育 5 至 10 分钟。开始 HepaRGs 的胰蛋白酶消化后，使用胰蛋白酶/EDTA（1x；0.05% 胰蛋白酶/0.53 mM EDTA）收集星状细胞，并在 37°C 下孵育 5 至 10 分钟。通过这种方式，几乎可以同时收集细胞。用显微镜检查细胞的溶解情况并轻轻敲击细胞培养瓶的侧面以加速该过程并脱壁仍贴壁的细胞。一旦所有细胞从培养容器底部脱离，通过添加相同量的胰蛋白酶抑制剂或两倍量的培养基来抑制反应。将细胞溶液转移到 50 ml 离心管中， 然后用 10 ml PBS 冲洗培养容器两次，并将 PBS 添加到离心管中。细胞团块可以通过溶液的重复再悬浮来分散。此时可以合并来自多个培养容器的相同类型的细胞。 一旦进入溶液，将细胞以 300 x g 离心 5 分钟，然后吸出上清液并将细胞沉淀重悬于 1 至 2.5 ml 细胞培养基中。对 SteCs 和 HepaRG 细胞都使用 HepaRG 培养基（不含 DMSO）。用细胞计数跟踪细胞的再悬浮。请彻底混合细胞溶液（HepaRG 和 SteCs）。用 40 µ l HepaRG 培养基（1:5 稀释）稀释 10 µ l HepaRG 细胞溶液。彻底混合新溶液并用 10 µ l 台盼蓝工作溶液（1:2 稀释，总共 1:10 稀释）稀释 10 µ l HepaRG 溶液。彻底混匀 StesCs 细胞悬液，并用 10 µ l 台盼蓝工作溶液（1:2 稀释）稀释成 10 µ l 细胞悬液。在室温下孵育计数溶液 2 至 3 分钟。计数前充分混合。 将计数溶液加载到先前准备好的血细胞计数板中，并在计数室的四个大方格内对每种细胞类型的活细胞和死细胞进行计数。计算每个细胞类型的每个大方块的活细胞的算术平均值。 每毫升的细胞计数计算如下： 或者根据操作说明使用 SOL Counter （半导体式全自动细胞计数仪） 自动确定每毫升的细胞计数。 5.3 在384 孔微孔板中培养肝球体5.3.1 细胞悬液的制备每个肝球体需要 50 µ l 细胞悬液。这相当于每个微孔板 19.2 ml （50 µ l x 384）。由于移液过程中的波动，每板应制备至少 22 ml（最好是 23 ml）的细胞悬液。要在 50 µ l 的体积中生成具有 1,000个 SteCs 和 24,000 个HepaRGs（1:25 比例）的肝球体，细胞悬浮液的浓度应为 20,000个 SteCs/ml 和 480,000 HepaRGs/ml。 使用 （1） 中计算的每毫升细胞计数生成肝球体细胞悬液所需的收集 HepaRG 细胞和 SteCs 的确切体积，具体取决于所需的肝球体细胞悬液体积： HepaRG 和 SteCs 悬浮液的计算体积用于球状细胞悬浮液，添加培养基以达到所需的体积（例如，一个 384 孔球状板为 23 ml）。 5.3.2 将细胞种到 384 孔微孔板中移液器和所有其他设备需要用乙醇 （80%） 擦拭，并在使用前放置在无菌细胞培养工作台下。先前制备的肝球体细胞悬浮液应彻底混合，并将加载一个微孔板所需的大致量填充到试剂储液罐中（推荐储液罐：RES-SW12-HP-SI，Rillenreservoir）。使用 Gilson Platemaster 96 通道移液器和 384 孔板适配器将 50 µ l 细胞悬液种到 384 孔微孔板的每个孔中。 注意：- 将 50 µ l 细胞悬液直接放在每个孔的底部- 确保所有移液器吸头都牢固地推到 96 通道移液器上。- 对于没有气泡的精确移液，推荐使用反向移液技术。- 为确保细胞在悬浮液中均匀分布，在每次移液步骤前轻轻摇动悬液管。 应将接种满的微孔板短暂离心（250 g，1-2 分钟），以确保孔壁上没有细胞悬浮液，并将细胞收集在孔底。肝球体在 37 °C 和 5% CO2 条件下连续 3 天。图 2 肝球体形成的光学显微镜。 HepaRG 细胞和 SteCs 在肝球体形成的第 1 天和（B）第 3 天的 384 孔超低吸附板（A）的孔中。比例尺 100 µ m。5.4 从 384 孔微孔板中取出肝球体为了收集肝球体，将 384 孔微孔板放在层流罩下。使用 200 µ l 移液器和大口径移液器吸头，小心地将肝球体从 384 孔微孔板中取出。可以在一个移液器吸头中收集多个肝球体。在平底 24 孔低吸附板的每个孔中收集 40 个肝球体。计数肝球体，并将 40 个肝球体放入每个孔中。可用深色背景（例如黑色铝箔纸）更容易看到 24 孔低吸附板中的肝球体。将 40 个肝球体转移到一个孔中后，小心取出旧培养基并加入约 1.5 ml 新鲜 HepaRG 培养基。之后，在显微镜下对每个孔中的肝球体进行计数。丢弃任何看起来太小或聚合不良的肝球体，类似于薄层而不是肝球体。 注意：用移液器吸头收集肝球体时不要吸入任何空气。肝球体应始终悬浮在培养基中。空气的吸入会导致肝球体卡在移液器尖端。应该习惯于在拿起肝球体之前用培养基润湿移液器尖端。此外，使用移液器的时候使用超过所需的程量。这两点都可以降低肝球体粘附在内移液器吸头表面或肝球体漂浮在培养基表面上的风险。 为避免融合并进一步提高肝球体的圆度，将 24 孔低吸附板置于振荡器上，直到 MOC 实验开始（12 至 48 小时）。为此，用乙醇彻底消毒振荡器，并将其放入培养箱（37 °C；5 % CO2）中。将超低吸附板放在振荡器上，使用以下设置并确保培养基不会因摇晃而溢出： 轨道式往复式Vibrio循环式模式4030°5°00时间25OFF5ON 5.5 将肝球体转移到多器官芯片平台（MOamily:宋体 "用新鲜培养基填充培养小室时，不要超过培养小室内盖的螺纹。

美国先进仪器制造商 908Devices 公司于 2019 年 8 月上线的一款全新的自动化细胞培养液分析仪，仪器型号为 REBEL, 英文中有颠覆传统的寓意，旨在重新定义培养基的分析流程。REBEL分析仪基于独创的微芯片毛细管电泳串联质谱联用技术，在无需复杂前处理的情况下（稀释和过滤即可），结合配套的 REBEL 试剂盒，可以在 7 分钟内一次性分析包含所有氨基酸在内的 33 种组分，成为当前细胞培养基开发技术的变革者。 908Devices，化学和生物分子分析装备的先驱制造商，2019年8月宣布推出他们的新的生物过程分析仪REBEL。 这种首创的微型毛细管电泳-质谱联用（CE-MS）分析仪，让生物制药研究人员加速流程开发周期，可以实现在线、实时的细胞培养基成分分析，最大限度地利用生物反应器。 REBEL在8月12日至16日波士顿生物处理峰会上首次展示反叛组织。 生物治疗药是由活细胞产生的，并需要合适的培养基培育。 培养基作为动物细胞培养技术的重要元素之一，在提供必要的营养支持以外，也是决定整个动物细胞生理状态的外在条件。细胞的增长是动态的并需要定期的监测。培养基的分析通常均是由中心分析实验室或第三方分析服务提供商进行，但普遍的2-3周的等待时间，阻止了生物工艺开发研究人员的实时决策。 REBEL分析仪的出现将改变这一局面，将控制权掌握在生物过程开发的研究人员手中。 REBEL紧凑的尺寸、独立的构型可以直接安装在过程开发和细胞培养实验室中，并置于生物反应器附近。培养基样品可以在不到7分钟的时间内完成分析，完全省去了送样至中心分析实验室等待数据的时间。 REBEL 将仪器校准和数据处理分析过程完全自动化，在无需复杂前处理的情况下（稀释和过滤即可），结合配套的 REBEL 试剂盒，可以在 7 分钟内一次性分析包含所有氨基酸、生物胺、维生素在内的 33 种组分，成为当前细胞培养基开发的变革者。 REBEL同时基于cGLP/cGMP环境构建，集成了分析报告，自动化的性能认证（Performance Qualification, PQ）和支持 21 CFR Part 11-compliance的数据格式。 908Devices公司首席执行官兼联合创始人Kevin Knnop 博士谈到REBEL时说到:“我们一直致力于制造颠覆性的分析设备，帮助用户在做出重要决定时提供有力的支持。REBEL分析仪正是扮演着这样的角色，装配在制药公司的PD实验室，几乎所有从事培养细胞和使用细胞培养基的从业人员，无需过多专业仪器的操作技能和背景知识，即刻可以通过REBEL获取所需要的答案。 REBEL分析仪为所有早期生物治疗药候选项目的筛选提供了一个解决方案，并帮助它们更快地将有希望的治疗方法推向市场。” 目前REBEL 分析仪已经全面进入中国市场，如有兴趣了解更多REBEL分析仪的技术特点和应用，欢迎来电咨询。

【精彩掠影】 　　1、获得过”百篇博士论文”的导师和社会公认的优秀导师应当有权利选择学生，对导师看中的学生我们也应当给予特殊的放行 　　2、给博士上课，应当更多地采取“讲座”的形式，让同个学科不同方向的博士生导师分别来给学生上课 　　3、如果一个教授不能很好地从事教学，对教学没有热忱和冲动，他就不能算是一个优秀的教授 　　4、中国的博士培养模式目前来说确实是“不伦不类”的，既不完全是“导师制”，也不完全是“老板制”，但这是有中国特色的、高水平的“不伦不类” 　　5、女博士把全部精力都放在学习上固然可爱，但也要注意培养社会交往能力，特别是和异性朋友的相处能力，这对以后的发展帮助很大。 　　【光明网】：光明网的网友大家好!欢迎您收看由光明日报社和光明网共同策划的博士生教育讨论专题。针对目前社会上对博士质量的质疑之声越来越大。光明日报社和光明网将陆续邀请各大高校的教育专家，就博士生培养质量问题，进行广泛的讨论。今天来到我们演播现场的嘉宾是武汉大学的校长、博士生导师，顾海良教授。本次节目的讨论主题是从博士生教育的现状出发，谈博士生教育的体制改革与创新。 　　【光明网】：顾教授，您好! 　　【顾海良】：向各位网友问好。 　　【光明网】：顾校长，您好!欢迎做客我们的光明网。我们今天的讨论话题是博士生教育体制改革与创新。在进入这个话题之前我们先来谈一谈轻松的话题，来谈一下武汉大学，您以及您的一些博士们。您在您的学校里面，每一年都要进行一到两次的面对面的谈话。在这个过程当中，您的博士生跟您谈的最多的问题是什么呢? 　　【顾海良】：高校中博士生这个群体，已经成为学校一个非常重要的组成部分了。我们现在每年录取的博士生都达到1500到1600，这个数量应该说非常大的。假如按三年或者四年学制来计算，武汉大学校园内就有6000多个在读的博士生。作为校长，当然非常关心这个群体。 　　从另外一个角度看，我自己也是博士生导师，我自己带着经济思想史和马克思主义发展史两个学科的博士生。同时作为学校的校长，同他们接触的可能更多一些。我对自己的学生主要是作为博士生导师，履行我的职责，对他们进行指导。至于学校博士生这个群体，是作为学校的重要组成部分，我经常同他们进行交流，经常同他们交换意见。 　　【光明网】：那他们跟您交流最多的是什么样的问题? 　　【顾海良】：谈的最多的当然是，他们希望学校能为博士生提供更好的学习条件、生活条件，使他们在武汉大学三年到四年的学习中能够得到很好的成长。他们也经常提出一些建设性的意见，希望学校各方面工作做得更好一些。 　　其中最关心的是两个问题，一个希望我们的导师们能够在学科发展的前沿性、科学性等等方面给予他们更多的指导，他们确实希望在博士生学习期间，能够接触他们这个学科最前沿的一些问题，最有拓展性的一些问题。这可能是谈得最多的问题。 　　第二个谈得比较多的问题，就是怎么使他们能够安心地完成三到四年的博士生的学习。希望学校在给他们的经费支持上，生活条件上，能够更好一些。这两个问题，我觉得是谈得比较多的。 　　【光明网】：武汉大学在这两个方面有什么举措吗? 　　【顾海良】：主要是两个方面，一个是我们要求尽力提高导师带博士生的水平和素质，这个也是现在博士生教育和培养的一个很重要的问题，因为博士生教育的成功，可能与导师的水平和素质有着很大的、直接的关系。 　　【光明网】：所以你们对博导的要求应该挺高的。 　　【顾海良】：大家都说“名师出高徒”，“名师”的要求达不到，我们学校博士生的培养质量就难以达到。我们经常跟导师们谈这个问题，每年举行的博士生导师工作会议上也强调这个问题。在生活方面，我们经常利用各方面的条件，使得博士生能够享有更高的生活待遇和各方面的资助科研经费的支持。这和教育部和学校的几次研究生培养改革同步，使他们能够享受到更好的待遇。 　　但是现在从总的情况来讲，武汉大学的博士生待遇和中科院的各个所的博士生待遇之间，还存在着一定的差距，这也是我们学校努力想改进的一个方面。另外，随着博士生培养体制的改革，比如说硕—博连读方式的推行，我们试点“1+4”的硕—博连读，就是硕士一年，硕士第二年经过遴选就进入博士阶段学习，博士生就是四年。比如说“1+4”，同学们就提出，到第二年，也就是博士生第一年，是不是应该享受博士生的待遇了。我们同意这个建议。“1+4”中“4”的第一年，就开始享受博士生的待遇。像这些，学校是可以想办法加以改进和完善的。 　　但是，因为博士生教育和高等教育一样，就像你刚才提到的，是一个不断地改革、不断地发展的过程。我们还有很多很多的事情，要尽力做得更好一些。 　　【光明网】：那说到这个博士生教育的体制改革与创新，很多网友首先想知道的一点是，现在博士生教育的总体状况应该是怎么样的?这个也是现在社会上广泛讨论的一个话题，那从您的角度，您觉得我们现在的博士生教育总体上乐观吗? 　　【顾海良】：从总的来讲，我认为，这几年博士生教育和整个高等教育一样，是一个以规模扩张为主要特征的时期，规模发展得很快。我们有个数字，比如说1999年，我们全国博士生的录取数字只有1.83万。那么，到2010年，全国博士生录取的规模已经达到6.2万的，这个增长的规模应该说非常大。当然，这也是我国研究生教育发展的一种需要。 　　【光明网】：那规模增长的同时，是不是势必会造成质量上的问题? 　　【顾海良】：这个问题应该全面地看待。从博士生规模扩大来看，国务院学位委员会和教育部每年要评百篇优秀博士论文。从各高校送来得优秀博士论文中，每年遴选一百篇。这个应该说遴选越来越严格，当年只有一万多的博士生选一百篇，可谓“百里挑一”，现在五六万博士生中也是选一百篇，已经是“千里挑二”了。 　　我们从选全国优秀博士论文的角度来看，这一百篇博士论文的水平是在提高的，一年一年，有明显的提高。这是博士生质量提高的一个重要标志。但是，毕竟在不断增大的博士生人数中，一百篇的数量并不是很大。就整体的来讲，原来一万多博士生，现在五六万博士生，这个总体的质量应该怎么评价?我觉得要全面地看待，好的、质量高的应该说比以前更好、更高一些。那么，中等和偏下的是有一些培养质量上的问题的。我认为，从总的百篇博士论文，甚至更多的千篇博士论文来说是比较好的，应该说质量在不断地提高。中等和偏下一点的质量下滑的现象也是存在的。在整个高等教育中，一个时期数量增长后的质量问题，确实是一个非常突出的问题。 　　【光明网】：那我们下面来谈一下关于博士生体制改革的一些具体情况。首先我们先看一看选拔制度。关于选拔制度，有的人就说，优秀博士的培养，最重要的是在于生源的选择。那高校在选取生源的时候，有什么样的标准呢? 　　【顾海良】：就像你讲的，博士的生源可能是我们博士生培养最重要的一个问题，就是选苗子，苗子选好了很重要。 　　现在，从整个高等教育来讲，在本科生、硕士生和博士生的录取选拔中，我认为博士生的录取选拔，学校的自主权可能更大一些。我们现在希望博士生录取过程中，导师能够发挥更大的主导作用。所以我们把考试中面试的权重增大，因为笔试固然能够考出博士生水平的差异，但是通过面试更能够检验出这个学生有没有进入博士生培养的基本条件，因为面对面的谈话，主要考察学生的逻辑思维能力，主要考察他对科学的兴趣，主要考察他对研究问题的敏感性和敏锐性。这个是比知识多少更重要的事情。这通过面试是可以解决的。 　　这几年，武汉大学博士录取工作中，面试权重也在逐步地提高，以前我们权重是八和二，笔试占80%，面试占20%。从去年开始，已经到六和四，今后我们想一半对一半，就是笔试能够占到50%的分数，面试也占到50%的分数。面试着重考察的不是考生的知识面，而是考察他的逻辑思维能力，考虑他对科学的兴趣，具备的科学的敏锐性和敏感性，这对博士生培养来说是非常重要的。 　　除此之外，我们一个重要的改革就是，对导师看中的学生给予特殊的放行。比如说学中国哲学或者是学中国古典文学的。考生整体素质和能力都非常好，但外语考试分数比较低，就这些专业来讲，导师认为非常有前途的，我们可以放行。实际上，我们很多年来已经是这样做了。 　　哪些导师享有这些权利呢?所培养的学生获得过百篇优秀博士论文的导师，就可以最自由地、最大限度地挑人，甚至笔试不甚理想，面试很好的，也可以选。还有大家公认的优秀教师，如国家级教学名师，或者是在社会上评价比较高的导师，如国务院学位委员会学科评议组成员，也可以享受这个权利，我们还想把这个导师的范围逐步地扩大。 　　另外，在考生方面，除了笔试、面试之外，还有其他可以证明他有科学研究能力的，比如说获得过国家科研科技发明奖，或者人文社会科学的奖，通过他已有的成果证明他的能力了，我们也可以破格录取。 　　除了这个之外，我们还对一些优秀的考生，很多学生是念完硕士以后走向社会的，经过社会的检验，在社会上证明这些人具有很强的能力，具有进一步培养的潜力，我们也可以进行一些破格的录取。这些改革，还是着重于对考生研究能力的检测，对于他的潜在的素质的发现是非常重要的。 　　【光明网】：所以尽可能多地把这些优质的生源招收进来。 　　【顾海良】：对。 　　【光明网】：有人就说有了生源之后可能还不够，到了我们的高校里面，肯定还需要我们高校有好的培养机制。那很多人就提到学科建设，以及我们的课程建设，很多人也会有这样的质疑，说我们现在学科建设以及课程建设不能够适应整个社会的需要。因为觉得现在我们社会不仅要求学生具有学术研究能力，可能很多看重的还是他的创新能力，以及实际的操作能力。那您觉得应该有怎样的学科建设以及怎样的课程，才能够适应社会的需要呢? 　　【顾海良】：你讲的这个问题呢，我觉得是现在博士生培养中非常关键的问题。因为我们现在的学科目录已经是1998年制定的学科目录，就是我们讲的按门类，按一级学科，按二级学科来培养。那么现在有些二级学科，一些新的，相当于二级学科的新兴学科，交叉学科，边缘学科，并没有进入我们的学科目录。也就是讲，我们不能按这些新的交叉学科、新兴学科来招学生，还是要按原来的目录，这样新的学科要求的学生不能招生，更不能培养。另外和这个学科相适应的就是你刚才讲的培养方案、课程设置。这两个与经济、社会、科学发展相比也是存在一定滞后的现象，现在我们强调学生解决实际问题的能力，从问题出发来进行科学研究等等的要求。随着新学科的发展，有些课程落后了，有些课程需要更新，都存在一些问题。 　　应对这个问题，我们采取了一些措施，比如说，在武汉大学，有的获得一级学科授权的博士点，学校有权进行新的二级学科的设定。比如讲新闻学，原来新闻学只有两个二级学科，一个是新闻学，一个是传播学。现在我们可以增设新媒体等二级学科，新媒体是新闻学，又是传播学，更是两者的综合，而且新媒体也结合了其他一些计算机学科、信息管理学科等一些交叉学科，那么对新媒体，设为新的二级学科后，有了新的专业学科设置和培养方案，就可以招博士生和培养博士生了。有一级学科授权博士点的学校，都可以做这项工作。我们现在很多学科，都新设了一些学科发展，新的方向。这对博士生培养来说可能是一个极其重要的变化。 　　即使这样，在培养方案的制定和课程设置上，也许还要花很大工夫。我们现在培养方案上是做了，培养方案根据新的人才培养的要求调整了。但是，接着的就是导师的问题，导师有没有能力按新的培养方案来实施，这是一个关键。这几年来，武汉大学每年都要对导师进行各种培训，包括请一些优秀的导师来讲自己怎么适应新的培养方案的，自己怎么在新的培养方案中进行创新性工作的，进行经验的交流。同时也请国外同行专家来介绍，他们在本国怎么能够按照新的要求来培养学生。 　　其次涉及到更为直接的一些问题，就是课程设置问题。博士生尽管课程的数量不是很多，但是课程的前沿性、科学性、精要性和新颖性，以及教授方法和方式的改进和创新问题等等，都是需要认真讨论，需要不断完善的。 　　【光明网】：对，说到这个课程的问题，现在还有一个网友有一个这样的问题：他觉得现在的课程很多就形同虚设，因为在整个的培养过程当中，很多博士生只是跟导师做课题。那博士生课程的意义到底有多大? 　　【顾海良】：对，你讲得非常对，我们现在博士生的课程，实际上就不是很多。为了达到课程中学科专业的前沿性，我们基本上采取专题讲座的方式。比如世界历史的研究，这个学科专业有不同的方向，我们请世界历史各个学科中很多博士生导师都来讲，采取讲座的方式。讲座的方式和硕士、本科的教育就不一样，不是把一本教科书从头讲到尾，而是把研究的前沿问题，研究的最重要的一些核心问题跟你讲清楚。而后要研读一系列的参考书，让你把导师们讲的，只是做一个引导，还要通过博士生自己的研读，通过自己的研究来掌握这些新的前沿问题。现在博士生的一些前沿课程，博士生的一些新的课程，我们都采取讲座的方式，这个可能比较有效果，博士生也能够接受。 　　更重要的是，能够通过这种讲座式的课程，能够调动博士生学习的自觉性，提高他们阅读和研究问题的能力。所以这方面我们和传统的本科生授课的方式是不一样的。采取专题讲座的方式，提出问题，让他们在课程学习中掌握这个研究问题、解决问题的方法和路径，在这些方面我们做了许多有益的探索。 　　【光明网】：武汉大学有博士淘汰制吗? 　　【顾海良】：我们是有博士淘汰制度的，所谓的博士淘汰制度是这样两个方面。一个就是在学习中不能胜任学习任务、无力达到培养方案要求的，是要淘汰的。有的学生感觉学习压力太重，他自愿退出的，也有导师认为不适合培养的，提出退出意见的。 　　【光明网】：就是在整个学习过程当中可能也会被退的。 　　【顾海良】：但是，现在来讲，这个数量并不是很多。对于淘汰学生强制性的做法基本没有，大多是导师提出来，跟学生商量，你学习难以继续下去，是不是按硕士毕业，或者找个适合于自身禀赋和能力的工作。通过导师与学生的协商，管理部门与学生的协商，很多学生都接受这样的事实。 还有一种是，说不上是淘汰制，比如讲三年的学习，不能如期毕业的，可以延长一年，延长个四年，甚至五年，甚至最多到六年。也可以三年学习完以后，博士论文没做出来，先找工作，你学习了三年，出去找工作，两三年内，有博士论文做完了以后，还可以再来答辩。前提是你要把博士生培养要求的课程，把一些开题报告都做完。当然，你不找工作也行，留在学校继续做博士论文，这个和淘汰出局不一样。武汉大学博士生平均的学习时间大约在三年半多一点。 　　【光明网】：很人性化。还有个问题，是关于博士生能否顺利毕业的问题，是由导师说了算?还是由一个委员会来决定的? 　　【顾海良】：博士生能否顺利毕业，可能会出现两种情况。有的如导师认为学生不能如期毕业，可以和学生协商，一般来说，学生会认可导师的判断的，学生可能不会愉快地接受，但还是会接受的。有些导师是非常好的，不仅同学生讲清不能如期毕业或者不能毕业的原因，同时还协助他找到一份工作，不耽误他继续的发展，这不失为一种解决问题的办法。 　　还有一种就像你讲的，有争议性的。导师比如认为“儒子不可教也”，不能再继续培养了，但是学生不买账，还坚持要读下去。这就要经过院里的学位委员会来作出判断。要充分听取导师的意见，导师讲他不行，肯定有一些根据，比如考试课程没通过，综合考试(中期考试)没通过，或者哪个开题报告没通过，一个一个关口可以检验。经过学位委员会的检测，可能也会做出是留还是去的决定。大概方式主要是导师提出为主，不能协商解决的由院的学位委员会来判断。学生对院的学位委员会判断还感到不满意，也可以提交学部或学校学位委员会进行裁决。应该讲，在这个方面，我们还是会充分听取学生的意见。但是，学生在一定的时候也会理解的，可能是有利于他长远发展的。何必在这儿不断地学，但是又没有更大的进取，还不如选择适合自己能力和特长的工作，可能对他长远来讲，会更好一些。 　　【光明网】：现在博导的年轻化也是高校里面的一个问题，应该说是一个现象。这样的导师，很多人会认为他的教学经验可能不太足，等他当了博导之后，可能也会花很多的精力去申请课题，申请经费。那么他在培养学生方面，是不是花的心思会比较少一点? 　　【顾海良】：你讲的这个问题也是我们现在教师队伍建设，包括博士生导师队伍建设，一个最令人棘手的问题。因为我们现在的高校教师队伍确实存在一个不足，这个不足就是把学位制度和职称制度这两个不同系列完全混同了。比如讲，一个博士生毕业以后，两年评副教授，再过几年就要评教授，有的学校为了“吸引”人才，博士一毕业就聘为教授。但是教授、副教授作为教师职称的系列，涉及到不仅是科研能力、学术水平问题，还是教学能力和教学水平问题。学位制度只是对学术水平的一个评价。硕士学位或博士学位，只是说达到硕士或博士的学术水平和研究能力，是对专业的研究能力和水平的认定。而职称，如讲师、副教授和教授得系列，并不应该与学位系列完全一一对应的。但是我们现在形成的这个制度，博士毕业，28岁毕业以后，要很快争取副教授，成为教授。这时候的副教授和教授，完全是根据他的研究能力，根据他的学术水平来定的。这就是你刚才讲的容易出现一种片面追求研究能力和学术水平，而忽略他的教学能力和教学水平。这个现象是较为普遍地存在的。 　　所以我们有些年轻的副教授、教授，实际上，上课的时数并不多，不仅上课时数不多，上课积累的经验也不多。而且最重要的就是对教学的兴趣不是很大。你想，一个教授假如不能很好地从事教学，对教学没有满腔热忱，没有这种尽心尽力的热情，或者讲是一种冲动，你就很难成为一个优秀的教授。但是我们现在存在把学位制度和职称制度两个挂上之后，确定产生了您讲的一些弊端。 　　现在，武汉大学强调，作为一个副教授和作为一个教授，要有一定的教学工作量，不仅要有教学量，而且要达到一定的教育教学的水平。我们想提高博士生在获得副教授和教授这个过程中的教学能力、教学水平的培养，更重要的是这个教学的责任感和责任性的培养，改变你刚才讲的存在的这些弊端。 　　【光明网】：那么我们下面谈一下，关于博士生的培养机制的问题。有很多人说我们现在整个中国的博士生培养机制是不伦不类的。说我们既不像北美的“老板制”，又不像欧洲的“导师制”，但是我们都有这两者的特点。您是怎么来看待“导师制”和“老板制”的? 　　【顾海良】：这个概括实际上不是完全准确的，因为你看美国各大学的博士生的培养，并没有一个统一的模式，不能简单地认为美国所有的大学，都是老板制或导师制，欧洲也是这样。因为对国外的大学，我们对它们的理解多少有点误读，喜欢谈诸如美国大学的培养模式这样的问题。实际上，美国的大学，有着不同的培养模式和方式。在欧洲也是这样，所以假如说既不像美国又不像欧洲，或者不像其他。我想这个可能正是我们正在形成中的中国特色的培养模式，我们这个培养模式，应该充分地吸收一些发达国家著名高校培养过程的一些好的地方。最后形成的可能就是“不伦不类”，但却是高水平的、具有中国特色的培养模式。 　　由于学科的不一样，可能工科的学生更容易把导师称为“老板”。 　　【光明网】：对，这也是目前社会上讨论很多的，说博士变成了博士工。 　　【顾海良】：博士工，成为导师的简单的实验员。这个部分是学科使然，由于学科的原因造成的。比如说工科，肯定要有以实验为主体的大量的工作。导师接受了项目科研任务以后，学生肯定是围绕着导师这个课题来做。那么导师可能会把一些实验、一些有点打杂的工作让学生来做。我觉得作为博士生，也有这样一个必要性。但是，导师应该非常注意在这个过程中不断提高学生的水平和能力，不要把学生当成一个简单的试验或操作工具，当作简单的实验员。这是导师的责任所在。 　　但是，假如把这个就称为老板制，我觉得不准确，因为这个实验室主任是导师，同时也起到了导师的作用，因为除了实验之外，他还要给他们上一些课程，进行一些讲座。而文科、理科，可能体现的更多的是导师制，你看一个老师对几个学生，竭尽全力地同他们交谈，进行讲授，进行问题的探讨。但是，实际上，对文理科来讲也不尽然。在文科中，如搞产业经济学的，可能会经常带着学生出去做一些产业规划，也可能会接受比较多的科技经费，来进行科学研究。比如现在做十二五规划，我自己就有一帮学生跟着我做，湖北省某个地区的一个十二五规划，那么是否给人感觉也是老板制一样的? 　　我总认为，我们现在的这个导师制度要根据学科形成的不同方式，还要根据各个学校的历史和文化的传统，学风和校风来形成自己一些独特的方式。但是，现在的基本事实是，我们导师辅导的方式可能比较单一、也比较传统。我们现在正在推广“双导师制”。比如讲现在有些结合经济社会与发展现实的一些重大课题，就是用这种方式来指导完成的。“双导师制”，就是学校的科学导师和相关部门的这些工程类，或者其他实践类的导师，两个导师的结合可能会形成有中国特色的一些做法。如果研究的主题是三峡水库建立以后造成的生态问题，造成的三峡各种效率、技术问题。那么我们就主张，学校有一个研究水利方面的专家，加上三峡工程方面的一个高级的技术人员或者研究人员，他们的研究院的或者研究所的这些人组成一个双导师制，我们很希望我们和经济社会发展现实结合得十分密切的这些论文，能够有双导师制。 　　另外可以采取导师指导小组。因为我们现在导师对学生做的论文题目，不可能完全都知道。一个导师假如说指导这个学生，你对他所研究的课题不是很清楚的时候，我们主张组成导师组，导师组用集体的力量来对学生进行指导和辅导。 　　我们想建立这种具有中国特色的导师制度，实际上也会有多种方式和多种样式。在各个学校里面，因为学校的原因，因为学科的原因，可能也会有差异，我们希望有一种多样性的，就是在一个学校有一些多样性的指导方式。但是检验这种方式的合理性，应该是你培养的学生的质量和标准，而不是我们自己说了算。所以我倒赞成这些“不伦不类”，能够转换成高水平的、具有中国特色的博士生导师制度。 　　【光明网】：刚刚我们提到美国的老板制度，美国应该是现在的博士生教育第一大国。那您是不是认为它有一些比较好的地方值得我们借鉴? 　　【顾海良】：我觉得美国大学在博士生的培养上有很多好的地方值得我们借鉴，我们考察过美国一些很著名的高校，考察过他们博士培养的情况。这里我觉得有三个方面很值得我们学习。 　　一个就是他注重博士生培养中的，不管研究什么问题，注重基础理论的学习和培养。假如说基础理论达不到要求，可以在进入博士生阶段以后再补习。你研究再现实的问题，基础理论总是一个支撑。不能因为研究现实问题就忽视基础理论研究。所以美国很多大学既是对博士生的培养，依然很注重对基础理论的研究。美国许多大学的博士生的资格考试，是比较严格的，或者叫中期

细胞体外培养用水中水的质量要求提起细胞体外培养实验，每个经历过的实验者都会有这样的领悟吧，细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。明明小心翼翼的操作，细胞总会莫名其妙的被污染了！莫名其妙的挂掉啦！到底怎么回事呢？其实造成细胞污染的因素不单单是微生物，培养环境中所掺杂的物质也可能会影响细胞的生长。水是细胞赖以生存的主要环境，营养物质和代谢产物都必须溶解在水中，才能为细胞吸收和排泄。对于体外培养的细胞来说，水是细胞培养液和试剂中简单而重要的组分。所以，细胞培养对水的质量要求较高，培养用水中如果含有一些杂质，即使含量极微，有时也会影响细胞的存活和生长，甚至导致细胞死亡。水中的杂质对水质有不同影响：1.离子——平衡渗透压；一些重金属 (Cadmium)对细胞毒害大，即便剂量很低 (衡量实验室用水导电性能的指标，单位为MΩ• cm，随着水内无机离子的减少电阻数值逐渐变大。2. 异体菌落数（Heterotrophic bacteria count，HBC）衡量实验室用水微生物的指标，单位为cfu/mL。3. 有机物（Total Organic Carbon ，TOC）水中碳的浓度，反映水中可氧化的有机化合物的含量，可间接反映出水中细菌和内毒素含量的高低。单位为ug/L或ppb。4. 内毒素（Endotoxin）革兰氏阴性细菌的脂多糖细胞壁碎片，又称之为“热原”，单位EU/mL。参考国际标准化组织的实验室纯水规范ISO3696，美国CLSI和ASTM D1193的试剂纯水规范，我国GBT6682和GBT 30301的试验用水指导，《实验细胞资源的描述标准与管理规范》用水指导，结合多年的实验操作经验，总结出细胞培养用水对水质的要求。细胞培养对水质的要求：1.一定要无菌：HBC 3.阻碍细胞生长的有机物含量要低：TOC等纯化后达到二级纯水，储存于水箱中以满足日常的清洗应用；水箱中的水再经过U Pack超纯化柱去离子，紫外灯照射杀菌并降低有机物含量，最后经终端滤器RephiBio过滤，以获得无菌、无热源、无核酸酶的超纯水。Genie G 水路图要想达到细胞培养用水的水质要求，纯水机的配置非常关键，带有消毒模块的纯水水箱、终端过滤器、取水水质的实时监测等配置都关系着产水水质是否达标。纯水的储存对保持纯水的质量是至关重要的，由于周围环境和空气中的二氧化碳更容易使水污染改变其pH，所以储存水的容器要尽量密封，避免和外界过多接触，抑制微生物生长。如Genie纯水设备可以提供的纯水水箱带有紫外消毒模块和去除二氧化碳的过滤器，能够尽量的保证水箱内的纯水水质。水箱空气过滤器（含CO2吸附剂）200/350L 水箱空气过滤器主控屏显示水箱水循环状态终端滤器可用于去除纯水中特定类型的污染物，满足不同实验的应用需求。对于细胞体外培养可以选用RephiBio Filter 纯水终端过滤器，安装在乐枫超纯水系统的出水口，可有效去除水中的热原（内毒素）、核酸酶、细菌等杂质，制备符合细胞培养用水要求的超纯水（无热原、无DNase、无RNase、无菌）。对于超纯水而言需要格外注意终端水质的TOC、电阻率、细菌和内毒素的含量，必须做到即取即用，因此取水的远程监控和水质实时监测就显得尤为重要。目前已有厂家可以提供与手柄通过无线连接的实验室纯水机（如上面提到的Genie），将水机和取水手柄分别放在洁净间的内外，通过无线控制取水手柄达到超纯水的取用和实时检测水的电阻率和TOC数值，非常适合无菌环境下的操作，尽量减少污染。无线 自由局域网无线通信技术 各单元摆脱信号线羁绊主机，主控屏，手柄摆放可自由组合 手柄触屏信息? 系统运行状态：待机，泄压，循环，产水? 水箱液位：0%或者L? 纯水（超纯水）水质参数：电阻率、TOC、温度 终 端 水 质 实 时 监 测结合上述用水要求，为大家推荐两款制备超纯水的水机，Genie G一体化纯水仪和Genie PURIST 超纯水仪。 Genie G一体化纯水仪以自来水为进水制备超纯水和 EDI 二级纯水性能指标Genie PURIST 超纯水仪以纯水（EDI 纯水，RO 水或蒸馏水等）为进水，制备实验室超纯水。性能指标【注意事项】1.超纯水应当注意使用时间，应该“即取即用”。防止超纯水吸收外界的杂质导致水质下降。2.在合适的环境使用超纯水。环境中的VOC（挥发性有机物），细菌等都会影响细胞培养。3.培养细胞的容器应当洁净无污染。 4.配制离散细胞用的消化液和细胞洗涤液时，宜采用钙、镁离子含量低的缓冲液，缓冲液用水可以选用装配乐枫低镁型纯化柱的纯水机，避免钙、镁离子促使细胞凝聚作用的产生。不同细胞体外培养用水选择指南细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养的整个流程中实验用水贯穿每一个环节：1.取材：组织的清洗和灌注试剂用水，如PBS缓冲液、Hanks液的配制；2.原代培养：1640、DMEM等培养基用水，明胶等支持物的配制，添加药物、检测试剂的配制；3.传代培养：胰酶等消化液的配制；4.冻存：细胞冻存液DMSO的配制。细胞体外培养的细胞类型一般分为动物细胞培养、植物细胞培养和微生物培养，其中极难的是动物细胞的培养。动物细胞的培养除了需要无菌、温度、气体、渗透压、pH等基本条件，它还需要血清、支持物等特殊物质，其中原代细胞的培养是很难的。植物细胞的培养需要光照和激素，而且培养条件和培养技术比较成熟。微生物培养多为单细胞生物，微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多，蛋白胨、麦芽汁、酵母膏等培养基即可满足微生物的营养要求，其中厌氧微生物培养比好氧微生物复杂，需要维持CO2等非氧惰性气体的浓度。由于细胞的种类和培养条件不同，对培养环境中杂质的含量要求也不同，那么配制培养基或试剂用水的选择大有讲究，不同细胞体外培养用水的指标如下：细胞体外培养用水选择细胞类型纯水等级电阻率(MΩcm)TOC(ppb)微生物(cfu/mL)内毒素(Eu/mL）核酸酶(pg/mL)动物细胞超纯水181810各种细胞培养用水的比较细胞培养用水制备方法优点缺点商品化细胞培养用水纯水或超纯水进行多效蒸馏制成，严格控制热源、无菌、内毒素、pH、渗透压等指标水质标准程度化高，可保证实验结果的重复性价格昂贵DEPC水DEPC处理过并经高温高压灭菌的MiliQ纯水，无RNase、DNAase和proteinase。完全去除核酸酶价格昂贵，未去除内毒素终端滤器过滤超纯水采用0.22μm的过滤膜，可有效去除水中的热原（内毒素）、核酸酶、细菌等杂质。性价比高，供水量大对取水环境要求高乐枫 RephiBio 终端过滤器采用0.22μm带正电荷的双层尼龙66过滤膜，可制备符合生物领域应用要求的超纯水（无热原、无DNase、无RNase、无菌），纯水中内毒素含量低于0.001 Eu/mL，核酸酶的含量低于可检测范围，微生物的含量低于0.1 cfu/mL，可以满足动物细胞和植物细胞的需求。Tips: 通常情况下乐枫RephiBio 终端过滤器的更换周期为3 个月，以达到好的使用效果。

生物反应器的应用生物反应器在生物技术，工艺开发和研究中发挥着至关重要的作用，其主要应用包括：1. 细胞株开发：台式生物反应器可用于评估各个细胞株的性能，包括生长和表达效率，这有助于确定最适合进行进一步工艺开发和放大的候选细胞株。2. 工艺开发：台式生物反应器广泛应用于工艺开发的早期阶段，包括了参数优化和工艺放大两方面，首先在较小规模上优化温度，pH，DO等工艺控制参数，然后再进行工艺放大研究，降低放大至较大体积的生物反应器中可能存在的成本和风险。更复杂的工艺开发包括了增强型工艺，例如灌流培养和连续培养。3. 培养基优化：台式生物反应器可以用于优化培养基和补料策略，以改善细胞生长、活力和蛋白质表达，有助于实现高效，稳定且成本可控的大规模细胞培养。4. 工艺表征：台式生物反应器可进行工艺缩小研究，在较小规模上模拟较大生物反应器的条件，有助于了解和解决工艺放大过程中可能出现的限制性因素，如氧气传质、混合效率、CO2分压和剪切力。5. 质量源于设计（QbD）：可以在台式生物反应器规模实施QbD开发原则，系统地研究和优化关键工艺参数，以确保产品质量的一致性。6. 临床样品制备：符合GMP要求的台式生物反应器系统，可用于临床前研究或早期临床试验中的小规模生产，以快速、经济地生产小批量的治疗性产品。Reference:cell culture bioprocess engineering, second edition细胞生长所处的生理压力生物制药中，CHO细胞作为常用的重组蛋白的表达体系，优化其生长和产物表达效率至关重要，然而生物反应器中CHO细胞却面临着多方面的生理压力，包括培养条件、营养供应和环境参数有关的各种因素，因此需要反应器提供良好的工艺参数控制，以维持合适的细胞生长微环境。 营养限制：CHO细胞的能量和生物合成严重依赖葡萄糖，葡萄糖浓度过低会导致细胞新陈代谢压力和活力降低；氨基酸是蛋白质合成所必需的，特定氨基酸含量不足会影响细胞生长和蛋白表达；细胞培养基中的生长因子、维生素和微量元素的不足也会影响 CHO 细胞的生理机能。 温度：温度波动会影响细胞的新陈代谢，对于细胞生长和蛋白表达通常所需最适温度不同，需要制定针对性控制策略。 pH值波动：pH 值的变化会导致培养基的酸化，影响分子的电离状态，并影响细胞的新陈代谢，维持pH值在最佳范围内对细胞活力和表达至关重要。 溶解氧浓度：溶解氧浓度过低会导致供氧不足，造成细胞应激，影响细胞生长和蛋白质表达。 二氧化碳分压：二氧化碳分压影响了pH控制，细胞代谢和生理功能，需要加以及时的检测和有效的控制策略。 渗透压：代谢物积累或营养浓度过高导致的高渗透压会对细胞造成压力，这会影响细胞体积大小调节和整体细胞功能。 剪切力：生物反应器中的搅拌和通气产生的能量耗散会对细胞造成剪切应力，过大的剪切应力会损伤细胞结构并影响其生产率。 代谢副产物：细胞新陈代谢产生的有毒副产物（如乳酸、氨）的积累会对细胞活力和蛋白表达产生不利影响。 细胞密度：高细胞密度和细胞聚集会导致营养和氧气的限制，造成压力，有效的混合和充分的氧气供应对防止这些问题至关重要。理解细胞所处的生理压力环境对于工艺条件优化，增强细胞活率，获得高表达产物和目标质量属性非常关键。工艺过程参数的控制在了解了细胞所处的生理压力之后，遵循质量源于设计（QbD）的指导原则，通过风险评估的方式确定关键工艺过程参数（CPP）, 重要工艺过程参数（KPP）及非重要过程控制参数（Non-KPP），制定参数各自的设定空间（DS），并在操作范围内进行控制，这整体上需要工艺过程分析技术（PAT）及生物反应器所配置过程控制策略，以提供一致的工艺性能和产品质量（CQA）。图片来源于网络生物反应器常用控制策略 开环控制：开环控制系统应用一组预定义的控制输入或设定点，而不连续测量实际输出，系统假定输入将实现所需的输出，而无需实时反馈。该控制策略的准确度依赖于高精度及快速响应的硬件配置。 闭环（反馈）控制：闭环控制使用传感器持续监测系统输出，将其与所需设定点进行比较，并实时调整控制输入以保持所需的条件。这种方法能更好地适应过程中的变化和干扰。该控制策略的准确度依赖于控制器模式，参数的预设和调节。 前馈控制：前馈控制可预测系统中的干扰，并在干扰影响输出之前调整控制输入。它是对反馈控制策略的补充。生物反应器控制器策略的应用 PID控制：PID 控制是一种闭环控制策略的实现形式，通过比较设定值和实际值（误差），使用比例、积分和微分项来计算控制输出。比例部分使用增益（Gain）乘以误差进行输出；积分部分累积 CV（控制输出）随时间变化的程度，以纠正误差；微分部分分析参数过去的变化率，并将其推断到未来，其动作单位为秒（你想推断多远），可以让回路在发生突发事件时迅速做出反应，但很容易受到测量噪音的影响。 PID同时可以结合死区（DB, Dead Band）来使用，例如pH的PID控制，细胞对于pH有一个适应范围，设定合适的DB值，避免酸，碱的反复添加和渗透压的升高。 级联控制：级联控制涉及主控制器与子控制器，主控制器的输出作为子控制器的设定值，从而更好地抑制干扰；子控制器可以为一个或多个，通过顺序级联或同时级联，以满足不同复杂程度工艺的需求。例如DO控制中，主控制器为DO PID控制器，子控制器为Air，O2，搅拌等控制器。 Profile控制：为控制器的设定值设定随时间变化的程序，控制器接受该设定值进行开环或闭环控制。例如补料泵的控制中，根据预测的细胞密度增加情况调整补料速度供给率，从而实现对营养物质浓度的前瞻性控制。复杂工艺应用需求常见的细胞培养方式为补料分批工艺（Fed Batch），需要多级的种子扩增步骤，主反应器中也需生长至稳定期进行蛋白表达，因此所需设备成本高，占地空间大，生产效率较低且产品质量一致性存在差异。随着灌流培养基，细胞截留设备及PAT技术等方面的发展，增强型工艺（Process Intensification）在生物制药中逐渐得以应用。根据对细胞和蛋白的截留，增强型工艺分为Concentrate Fed Batch, Dynamic perfusion及Continuous Perfusion等不同形式。Reference：Perfusion Cell Culture Processes for Biopharmaceuticals灌流工艺的开发通常在台式反应器中进行，相比Fed Batch系统具有如下组成及特点： 反应器从结构设计到工艺验证上应能支持系统长时间无菌培养的要求。 反应器的通气及搅拌系统配置应当满足高细胞密度培养对于传质和混合的要求，并进行充分的表征，以评估放大过程中的限制性因素。 细胞截留装置：支持切向流或声学细胞截留装置的无菌连接，截留装置控制器可选择接受生物反应器控制，细胞在截留装置中所受的生理压力（剪切力，温度变化，溶解氧浓度等）应当加以控制。 PAT整合：系统应当支持额外的电极整合，实时监控细胞密度、活力、二氧化碳分压等关键参数。 外置设备的拓展：可拓展外置天平等设备。 自动化控制系统：系统应配置自动化灌流程序或配方，实现高精度自动化的灌流速率，反应器液位及细胞密度控制，减少灌流工艺长时间培养过程中复杂的人为操作所带来的风险。英赛斯NestoBR台式生物反应器NestoBR是一款基于生物工艺进行设计和研发的先进型台式生物反应器系统，应用于生物制药及生物技术等方向的工艺研究和开发，系统设计满足生物行业对于反应器的高性能及法规方面的要求，可降低用户实验的批次失败风险，提高工艺开发能力，加速生命科学的研究发现，实现稳健化的技术转移。NestoBR产品特点紧凑化的结构设计：集成式工业控制器，直观的用户界面与交互；减少设备空间需求，易于使用。严格的材料选择及处理：高硼硅玻璃，耐高温，耐腐蚀；316L不锈钢，表面抛光及钝化处理，，易清洗，易清洁；垫圈采用EPDM材质，符合cGMP要求。基于工艺理解的产品设计：从细胞生所处的生长微环境出发，进行功能设计，拓展工艺可操作空间，保障批次稳定。丰富的高性能硬件配置：灵活的硬件配置方案，满足不同细胞或工艺在培养体积、温度控制、搅拌控制、通气控制等工艺方面的差异化要求。高级自动化软件架构：ISA88批处理控制高级自动化软件架构，将物理硬件、操作程序和个性化工艺的紧密的结合，为控制系统提供安全性，稳定性保障。符合cGMP法规要求： 根据用户需求，提供从设计、测试、验证、文件等一系列技术服务；系统设计与验证遵循ISPE GAMP5。快速稳定的自动化参数控制：控制系统配置不同的控制策略，实现快速，稳定，灵活的工艺过程参数自动化控制完善的批次过程监控与管理：系统配置趋势图，批次报告，用户管理，审计追踪功能满足复杂工艺应用需求：NestoBR提供长时间运行的无菌保障，完善的设备表征数据，可集成PAT，外置设备与灌流装置，可新增控制回路实现自动化灌流工艺操作。全面的安全性保障：提供生物反应器在使用，批次，软件，数据，工艺等方面全方位的安全保障。

有关省、直辖市教育厅（教委）、发展改革委、能源局，北京市城市管理委，有关部门（单位）教育司（局），部属有关高等学校，有关企业：为贯彻习近平总书记关于“四个革命、一个合作”能源安全新战略和我国“二氧化碳排放力争于2030年前达到峰值，努力争取2060年前实现碳中和”的重要讲话精神，落实中央人才工作会议精神和《加快推进急需高层次人才培养行动方案（2021—2025年）》有关要求，充分发挥研究生教育对储能技术急需高层次人才培养的支撑作用，加快培养卓越工程师，经研究，决定选取部分研究生培养单位（名单见附件1）会同有关企业（名单见附件2）实施储能技术国家急需高层次人才培养专项。现将有关事项通知如下。一、重要意义储能行业是高科技战略产业，是国家构建新型电力系统、达成“双碳”战略目标的重要技术保障，对于确保能源安全、实现绿色转型、推进创新发展具有不可替代的作用。近年来，国际科技和人才竞争加剧，我国经济社会发展的外部环境发生重大变化，对我国储能领域关键核心技术突破提出严重挑战。研究生教育要深入贯彻习近平总书记重要指示精神，落实关于加快培养国家急需的高层次人才的决策部署，服务党和国家事业发展迫切需要，不忘初心，勇担使命，加快培养一批支撑储能领域核心技术突破和产业发展的高层次紧缺人才，为提升国家储能领域自主创新能力和战略核心科技作出更大贡献。二、工作目标聚焦我国对储能领域核心技术领军人才的迫切需求，创新产学研协同人才培养模式，为我国储能领域核心技术突破培养和储备一批创新能力强、具备国际视野和引领产业快速发展的领军人才，形成储能领域高层次人才辈出新格局，为实现我国储能领域高水平科技自立自强和关键核心技术自主可控的战略目标奠定基础。三、工作方式实施本专项的高校根据企业需求，以电气工程、动力工程及工程热物理、化学工程与技术、材料科学与工程等相关一级学科和专业学位类别的拟录取博士新生和在读博士生为对象，每个高校每年选拔20名左右优秀博士生进入专项，实行学科交叉、产教融合培养，加强培养过程管理，实行校企双导师（导师组）指导，确保培养质量。专项实施周期为4年（2022—2025年），由研究生培养单位会同有关企业（可不局限于附件2），按照工作指南（附件3）要求，从工作基础、专项设计、培养目标、重点举措、联合培养等方面制定专项实施方案（样表见附件4）。项目双方要签订完善的合作协议，明晰各方权责。四、支持保障（一）专项实施单位成立由校领导任组长的专项实施领导小组，统筹推进专项实施工作，积极配置资源，加大条件保障，确保专项高质量实施。（二）教育部将承担专项任务高校纳入国家关键领域急需高层次人才培养专项招生计划支持范围，根据培养能力、实施情况等实际予以专门支持。承担任务高校也要通过增量倾斜和存量调整予以配套安排。（三）能源局在试点示范、实证实训基地建设中，组织有关企业探索创新机制，加强与专项任务高校对接，为高校成果转化验证和高层次人才培养提供配套支撑。（四）中央财政将中央部门所属高校纳入专项的学生人数作为各校专项资金分配因素安排经费予以支持。（五）联合培养企业要设置面向专项博士生的科研课题，并提供科研条件和科研经费。（六）鼓励有关企业设置专项奖学金，支持专项人才培养。（七）专项人才培养质量作为“双一流”建设高校和建设学科成效评价的重要指标，以及动态调整专项引导资金支持力度的重要依据。五、其他事项（一）请相关研究生培养单位高度重视专项实施工作，将专项实施方案于2022年9月20日前、校企联合培养协议于2022年11月20日前报教育部（学位管理与研究生教育司）。（二）教育部学位管理与研究生教育司将会同国家发展改革委社会发展司、国家能源局能源节约和科技装备司加强对各单位专项遴选、培养工作的指导和支持。联系人及联系方式：教育部学位管理与研究生教育司，刘冬，010-66097848，xwbpyc＠moe.edu.cn，北京市西城区西单大木仓胡同37号；国家发展改革委社会发展司，王达，010-68502468，wangda＠ndrc.gov.cn，北京市西城区月坛南街38号；国家能源局能源节约和科技装备司，张倩，010-81929226，nengxiaochuneng@nea.gov.cn，北京市西城区三里河路46号。教育部办公厅 国家发展改革委办公厅 国家能源局综合司

类器官这项1980年代出现的概念沉寂了三十余载，直到近十年才迎来飞速发展。其应用前景远比我们想象的广阔，从精准医疗、疾病建模、药物筛选到再生医学，都是这个“迷你器官”所能发挥价值的领域。 现阶段，类器官技术用于肿瘤伴随诊断已取得不错成果，在肩负患者精准诊疗重任的道路上有望越走越远。同时，随着动物保护主义呼声不断、实验动物价格水涨船高，类器官及器官芯片替代动物试验势在必行，引发众多跨国制药巨头及投资机构的关注。美国在2022年发布FDA Modernization Act 2.0，取消新药临床前进行动物实验的强制要求，并推荐了以类器官技术为代表的非动物的检测手段。✦ 什么是类器官？✦ 类器官（Organoids）一词最早出现于上世纪80年代的学术论文中，这项技术直到2009年才迎来快速发展。类器官是指利用成体干细胞（ASC）或多能干细胞（PSC）进行体外3D培养，形成类似体内器官结构和功能的“微器官模型”，是对早期2D培养细胞的技术革新。2D细胞培养由于无法实现细胞间交流或细胞与细胞外基质的相互作用，存在应用的局限性。类器官培养突破这一难题，高度模拟原始器官的结构，甚至一定程度还原其过滤、排泄、神经链接、收缩功能等。 2009年是类器官技术元年，荷兰科学家Hans Clevers成功从LGR5+的小肠干细胞中培养出了小肠类器官。随后研究不断深入，多种类器官被成功培养，并广泛覆盖各个实体瘤癌种。Hans Clevers成立的Hubrecht Organoid Technology (HUB)是类器官最早的研发中心，HUB技术授权促进了Epistem、Cellesce、Crown Biosciences、STEMCELL Technologies在内的一批类器官公司的涌现。 类器官技术近十年快速发展 类器官技术经过十余年的发展，目前广泛用于癌症患者的个体化用药指导、基础科研、药物开发等。 类器官培养的应用领域非常广泛。首先，它可以用于精准医疗，即通过培养患者自身的细胞或组织来实现个体化的诊断和治疗。例如，在肿瘤研究中，可以通过类器官培养技术对患者的肿瘤细胞进行体外药物敏感性测试，从而为临床治疗方案的选择提供依据。类器官技术应用场景✦ 类器官的发展前景✦ 2021年起我国出台一系列政策推动类器官产业发展。国家科技部把“基于类器官的恶性肿瘤疾病模型”列为“十四五”国家重点研发计划中首批启动重点专项任务，提出类器官技术在未来将有非常大的应用价值和发展前景。我国高度重视类器官行业发展 当前类器官建模成本较高。培养类器官需要基质胶等支持介质、成体干细胞等组织来源、以及细胞因子等生长耗材。✦ 如何培养类器官？✦ 类器官的培养是指在体外培养一组细胞，使其能够自组织形成类似于原始器官的结构和功能。这种培养方式可以用来研究器官发育、疾病模型以及药物筛选等方面。类器官培养的成功与否，不仅取决于培养技术和条件的优化，还取决于培养箱的质量和性能。 兰伯艾克斯生物的LAB-MI二氧化碳培养箱是类器官培养中的一项重要设备。该培养箱能够提供稳定的培养环境，包括恒定的温度、湿度和二氧化碳浓度等，有利于类器官的生长和发育。与传统的培养箱相比，LAB-MI二氧化碳培养箱具有更高的稳定性和可靠性，可以提高类器官的培养成功率。LAB-MI二氧化碳培养箱 在运用类器官培养知识的基础上，结合LAB-MI二氧化碳培养箱的优势，可以进一步提高类器官的生长和分离培养成功率。通过合理调控培养条件，例如细胞密度、培养基成分和培养时间等，可以促进类器官的生长和分化。同时，LAB-MI二氧化碳培养箱的稳定环境可以提供良好的细胞培养环境，保证细胞的健康和活力，从而增加类器官培养的成功率。 类器官培养技术在精准医疗、疾病建模、药物筛选和再生医学等领域具有广阔的应用前景。兰伯艾克斯生物的LAB-MI二氧化碳培养箱作为培养设备，通过提供稳定的培养环境，可以提高类器官的生长和分离培养成功率。进一步结合类器官培养知识，可以更好地应用该技术，推动类器官培养领域的发展和应用。

细胞生长曲线测定，这些问题你遇到过么？下图是一个典型的细胞生长曲线图 细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8，MTT等方法。其中测定细胞生长曲线是检测细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是细胞生物学特性的基本参数之一。因为细胞太小，无法测单个细胞的生长状态，所以测细胞群体的生长曲线。在做细胞生长曲线测定过程中，我们经常遇到以下几个问题：1、如何选择细胞接种数？答：可根据细胞传代培养过程中接种数及细胞生长周期进行计算，细胞接种数因细胞的不同而不同。2、细胞生长曲线测定时为什么要做重复孔？答：测定细胞生长曲线细胞计数时选择 3 个复孔，每孔分别计三次，取其平均值，目的是减小操作误差。3、细胞生长曲线测定周期是几天？答：一般是一个星期。4、为什么绘制的细胞生长曲线没有达到平台期？答：可能有以下原因：一是细胞接种密度过低；二是细胞培养时间过短；三是细胞生长状态不好，使其不能正常增殖。5、为什么细胞计数第一天，细胞数没有增加反而减少？答：一般细胞传代后，会有一个生长缓慢的潜伏期，细胞不增殖，而细胞会有正常的死亡，故细胞数不增加反而减少。6、细胞生长曲线还有其他方法绘制吗？答：当然有。我们提到最多的是直接计数的方法，除此以外还有相对计数的方法，该类方法首先要绘制标准曲线，标定细胞数和某个变量的函数关系，然后我们只需要测定每天这个变量的值便可以计算出细胞数。常用的是 MTT、CCK8 等比色的方法实验室细胞培养 ——桑翌向您推荐全尺寸多功能CO2培养箱 WIGGENS全尺寸CO2培养箱。培养箱内设置多层活动托板，可用于T瓶，培养皿，微孔板等静态培养；培养箱内有电源插口，可以放置摇床，磁力搅拌器等用于细胞的动态培养。底部有专用的滚瓶机滚轮槽，方便使用滚瓶机进行细胞培养。WIGGENS 的下列产品，可以放在CO2培养箱中使用，拓展CO2培养箱功能和提高利用效率：1、 WIGGENS二氧化碳培养箱专用振荡器，解决了二氧化碳培养箱内的振荡问题。独创的防腐蚀，分体式设计等，满足二氧化碳培养箱动态培养解决方案。 振荡器在培养箱中的摆放位置2、CELLine微型细胞工厂专用于连续，超高密度培养。既可以用于悬浮细胞培养或贴壁细胞培养。CELLine二室技术示意图3、滚瓶机用于贴壁细胞培养 4、飞旋瓶用于悬浮细胞和贴壁微载体细胞培养，专用磁力搅拌器提供飞旋瓶搅拌动力。

奥豪斯作为一家百年历史的仪器厂商，拥有多系列实验室设备产品。近日，奥豪斯隆重推出了生命科学实验室设备。在前两期微信中，小编已经为大家做了新产品的概览和部分产品的介绍。今天着重为大家探秘的是奥豪斯培养摇床和混匀器！ 为什么说这些产品是走心的呢？一款好的产品，不仅仅是依托于品牌的价值，更多的是背后的研发工艺和产品独一无二的特点。奥豪斯给您带来走心产品，让您获得更多走心的体验，帮助您一站式获得最全的产品信息，保证您的应用需求。 进口电机，品质保证本次带来的培养摇床和混匀器均为美国制造、原装进口，大部分配备源自瑞士、德国、美国的高品质电机，其中圆周式摇床采用高端三偏心轴驱动电机，2D/3D摇床采用精准控制步进电机。 全球标准，精益求精全系列产品不仅是美国制造原装进口，而且都通过了严苛的CE、UL测试并经德国TUV认证。奥豪斯始终秉持“精益求精、臻于至善”的态度与理念，确保能为全球用户提供精致、可靠的用户体验。 明星产品，所向无敌 2D/3D 恒温培养摇床，拥有超凡且与众不同的产品特性，作为一款极其走心的产品，它是全球唯一一款可在运行过程中自动调整倾斜角度的摇床，不需要停机，不需要任何工具。精准控制的步进电机，即使有外界因素影响到摇床的运作，它也会根据实际情况进行自动调整并恢复正常运行。 除了2D/3D恒温培养摇床这一款明星产品外，本次上市的培养摇床和混匀器还有很多值得称赞的特点，让小编为您一一介绍：恒温混匀器 完美应用于需在恒温、摇荡速度高的条件下培养的样品*模块自动识别，自带1.5毫升温度模块，共有11个不同温度模块可选择*机器可存储5个程序，每个程序最多5步*USB端口轻松存储更多程序，并可传输数据及软件升级*多年先进的电子设计研发经验，确保机器温度控制准确度绝佳恒温培养轻负载圆周式摇床节约实验室空间的圆周式摇床*微处理控制器可实现持续一致的摇荡动作*三偏心轴平衡驱动提供可靠服务和持续负载*安全功能包括缓慢升速设计和过载保护冷冻恒温培养圆周式摇床节约培养箱的冷冻恒温圆周式摇床*微处理控制器可实现持续一致的摇荡动作*三偏心轴平衡驱动提供可靠性能和持续负载*安全功能包括缓慢升速设计和过载保护2D摇摆恒温培养摇床、3D波动恒温培养摇床台式2D摆动摇床、3D波动摇床可节约培养箱空间*操作面板带有独立显示温度、速度、倾斜角度与时间的LED屏*带有PID温度控制的微处理控制器，可实现温度精确控制*设备正在运行时倾斜角度可电动调节 看了这么多新系列产品，您是否有心动呢？目前更有大力促销等您来购！快随小编继续看下去哦！ 大力促销，势不可挡活动内容凡在活动期间购买实验室设备（列表单价人民币6000元及以上）的终端用户，即可获赠STARBUCKS随行杯一个 活动时间即日起至2017年12月31日 奥豪斯提供的走心培养摇床和混匀器系列产品，能够让您在实验室应用环节做到持续有效的工作状态，提高您的实验室效率、确保人员安全。

培养箱是一种用于培养微生物、植物或动物细胞的箱体设备，能够通过控制箱内的温度、湿度、光照、二氧化碳水平、酸碱度等环境条件来模仿培养物的生长环境，广泛应用于生物、医药、农业、食品和环境等领域。目前国内应用广泛的培养箱设备类型有恒温培养箱、恒温恒湿培养箱、二氧化碳培养箱、植物培养箱、生化培养箱、厌氧培养箱、霉菌培养箱、低温培养箱等十余种。为了方便大家能够快速分辨这些培养箱，笔者特别绘制了十一种培养箱的功能对比图，如下：同时，笔者认真遴选出一些靠谱品牌型号，希望能够帮助正在苦苦寻觅培养箱的同学们。01 恒温培养箱恒温培养箱属于培养箱中最简单的一种，只具有加热功能不具备制冷功能，通常控温范围在室温+5℃至60℃。根据加热方式分为隔水式恒温培养箱（又称水套式恒温培养箱）和电热恒温培养箱（又称气套式恒温培养箱），常用于普通微生物发酵、细菌培养等。特点：加热控制隔水式恒温培养箱：加热管通过对夹层内的水进行加热，利用水的对流形成四面加热，有效的保证加热均匀性。优点在于断电时能较长时间保持箱内温度稳定，而不足之处是需要定期更换和补充水，同时有一定渗水风险。水套式腔室构造(图源网络)电热恒温培养箱：通过遍布箱体气套层内的加热器，对箱内气体进行加热。与水套式相比，此类培养箱具有加热快，温度的恢复比水套式培养箱迅速的特点，特别有利于短期培养以及需要箱门频繁开关的培养。另外，也有采用六面加热设计，重量更加轻便，方便移动。气套式腔室构造(图源网络) 直热式腔室构造(图源网络）仪器推荐(排名不分先后) WIGGENS 电热恒温培养箱WH-15（点击查看） Lab Companion气套式培养箱 IB-05G（点击查看） 兰杰柯 电热恒温培养箱 HI-80V（点击查看）更多恒温培养箱尽在《 电热恒温培养箱 》 和《 隔水式恒温培养箱 》 专场。02 低温培养箱较其他培养箱，低温培养箱能实现更低温度控制，制冷方式主要包括压缩机制冷和Peltier半导体制冷，通常控温范围为0℃（或者更低）至60℃，主要用于细菌、霉菌、真菌等菌群的低温培养，或生物制品、化学品、药品等低温储藏。特点：加热控制、制冷控制（温度更低）仪器推荐(排名不分先后)WIGGENS WH-01迷你低温培养箱（点击查看）BINDER低温培养箱KB ECO 240（点击查看） 赛默飞 Heratherm™ IMP低温培养箱 IMP400（点击查看）更多低温培养箱尽在《 生化 /低温培养箱 》 专场03 生化培养箱生化培养箱在电热恒温培养箱的基础上添加制冷装置（常见的方式为压缩机制冷），通常温度范围为0℃至60℃。一般带玻璃观察窗，主要用于生化反应的孵化，比如水体分析BOD测定等。特点：加热控制、制冷控制、一般带玻璃观察窗仪器推荐(排名不分先后)永生仪器 生化培养箱 SHH-L系列（点击查看） 上海力辰 生化培养箱LC-SPX系列（点击查看）爱安姆 生化培养箱（升级款）NIB260（点击查看）更多低温培养箱详见《 生化 /低温培养箱》 专场04 霉菌培养箱霉菌培养箱是专门针对霉菌培养的一种培养箱，大部分霉菌适合在室温（25℃）下生长，且在固体基质上培养时需要保持一定的湿度，因此，霉菌培养箱具备双制式冷热控制和湿度控制功能。此外，还具有紫外灯灭菌功能，用于杀灭孢子。特点：加热控制、制冷控制、湿度控制和紫外灭菌仪器推荐(排名不分先后)JeioTech 恒温恒湿霉菌培养箱 TH3-E-200（点击查看）永生仪器 霉菌培养箱 SHH-J系列（点击查看）菲斯福 霉菌培养箱MJX-70BL（点击查看）更多霉菌培养箱尽在《 霉菌培养箱 》 专场05 恒温恒湿培养箱恒温恒湿培养箱是由箱体、加热器、制冷机、循环风扇、控制器、温度传感器、湿度传感器、加湿器等组成，具有更精确的温度和湿度控制系统，能够模拟和调节不同的温度和湿度条件，可作用于实验室微生物培养、物体的物理性能试验、昆虫和小动物的饲养、植物发芽等。通常温度范围为0℃至70℃（控湿时10℃至60℃），通常湿度范围为10%至95%RH。特点：加热控制、制冷控制、湿度控制仪器推荐(排名不分先后)东京理化 EYELA恒温恒湿箱KCL-2000（点击查看）喆图ZHS-100SC恒温恒湿培养箱（点击查看）上海力辰LC-HSP系列恒温恒湿培养箱（点击查看）更多恒温恒湿培养箱尽在《 恒温恒湿培养箱 》 专场06 厌氧培养箱厌氧培养箱亦称厌氧工作站或厌氧手套箱，它由恒温培养室，厌氧操作室、取样室、气路及电路控制系统、箱架、瓶架、熔蜡消毒器等部分组成，是一种在无氧环境条件下进行细菌培养及操作的专用设备。气体供应分为单气（无氧混合气体，组成为10%H2+10%CO2+80%N2）和双气（一瓶为纯N2，另一瓶为无氧混合气体）特点：加热控制、湿度控制、气体控制、杀菌功能（HEPA过滤、高温灭菌等）仪器推荐(排名不分先后)华端生物 HD-AN300型智能微生物厌氧微需氧培养系统（点击查看） 兰杰柯 厌氧培养箱AI-TS-10（点击查看）川恒仪器 厌氧培养箱 YQX-II（点击查看）更多厌氧培养箱详见《 厌氧培养箱 》 专场07 二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境，培养箱要求稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%)，来对细胞/组织进行体外培养的一种设备。CO2检测方式主要包括红外（IR）和热导（TC）两种，控制范围为0至20%Vol。二氧化碳培养箱是普通恒温培养箱不可替代的新型培养箱。由于增加了二氧化碳浓度控制，并且使用微控制器对培养箱温度进行精确控制，使生物细胞，组织等的培养成功率、效率都得到改善，广泛应用于细胞动力学研究、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精（IVF）、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。特点：加热控制、湿度控制、气体控制、PH控制、杀菌功能（HEPA过滤、高温灭菌等）仪器推荐(排名不分先后)贝茵 being CO2培养箱 BIO-150RHP（点击查看）Eppendorf CellXpert C170i CO2培养箱（点击查看）BINDER CO2培养箱 CBS 170（点击查看）PHCbi普和希 CO2 培养箱 MCO-170ML-PC（点击查看）海尔 云育 CO2培养箱 HCP-168（点击查看）力康 CO2培养箱 HF90（点击查看） 润度生物 RADOBIO CO2培养箱 Herocell 80H（点击查看） 更多二氧化碳培养箱尽在《 二氧化碳培养箱 》 专场08 三气培养箱在二氧化碳培养箱的基础上添加对氧气、氮气浓度控制，并以21%的氧气浓度为分界点分为低氧环境三气培养箱和富氧环境三气培养箱。特点：加热控制、湿度控制、气体控制（O2、N2、CO2）、PH控制、杀菌功能（HEPA过滤、高温灭菌、UV杀菌等）仪器推荐(排名不分先后)WIGGENS WCI-180T三气培养箱（点击查看）川恒仪器 三气培养箱CH-SQ80B（点击查看） 中科都菱 三气培养箱MCP-170G（点击查看）更多三气培养箱尽在《 三气培养箱 》 专场09 光照培养箱光照培养箱是具有光照功能的高精度恒温培养设备，具有双制式冷热控制，常用于微生物培养（如蓝藻、绿藻等）、植物生长、种子发芽等研究。特点：加热控制、制冷控制、光照控制（可见光或紫外光）仪器推荐(排名不分先后)博迅 BXG-250 层照培养箱（点击查看）爱安姆 光照培养箱 IFI300（点击查看）喆图 ZGC-250光照培养箱（点击查看）更多光照培养箱尽在《 植物 /人工气候/光照培养箱 》 专场10 植物培养箱植物培养箱是带有光照控制和湿度控制的恒温培养箱，保证光照、温度、湿度满足植物生长的需求，市面上部分植物培养箱还可控制光照按不同的时间自动变化光照强度，模拟自然变化，主要用于植物生长、种子发芽、植物生态现象和生理机制研究等。特点：加热控制、制冷控制、湿度控制、光照控制（可见光或紫外光）仪器推荐(排名不分先后)Lab Companion 植物生长箱 GC-300TL（点击查看）贝茵 being 植物生长箱 PGC系列（点击查看）锦玟红蓝白三色光植物培养箱JLRX-800B-FB（点击查看）更多光照培养箱尽在《 植物 /人工气候/光照培养箱》 专场11 人工气候培养箱人工气候培养箱可人工控制光照、温度、湿度、气压和气体成分等环境因子，为科研人员提供一个理想实验环境。特点：光照控制，湿度控制，冷热控制，气压控制，气体成分控制仪器推荐(排名不分先后)喆图 ZRQ-150人工气候培养箱（点击查看）博迅 BIC-250 人工气候箱（点击查看） 爱安姆人工气候箱 ICH 300（点击查看）更多光照培养箱尽在《 植物 /人工气候/光照培养箱》 专场

公司近日获得Celartia公司的Petaka细胞培养板的中国区代理权！ Petaka细胞培养板对于国内的用户来讲，或许是一个比较陌生的产品。单是却已经风靡欧美等国，受到各国科学家的一致追捧！甚至有专家预言，它的出现，将改变大家的细胞培养观念！ Petaka细胞培养板为什么会如此之大的影响力呢？ 首先，基本性能优于传统的细胞培养； 其次，高仿真的体外模拟环境； 最后，多功能用途，一板多用； 更多的信息请查看http://premedlab.com/productshow.aspx?id=92&proid=300或者查询www.celartia.com。 更多的操作显示，请观看v.youku.com/v_show/id_XNDQ5ODkyNjky.html 简而言之， Petaka细胞培养系将改变研究人员传统的培养观念！为细胞培养提供更加真实的体外模拟环境，为获得更加精确的数据提供有理的保证。

细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，为促进细胞生长增殖提供物质基础，是培养细胞生长和繁殖的生存环境。合成细胞培养基是用化学成分明确的试剂配制的培养基，是目前常用的一类培养基，其组分稳定，主要包括糖类、必需氨基酸、维生素、无机盐类等。培养基组分的变化，对细胞生长会产生一定影响，如细胞生长形态、分裂速度等。同时，适宜的培养基组成与优选的细胞培养工艺对于提高蛋白类药物的产率，保证细胞培养批次之间的一致性、稳定关键质量属性等因素至关重要。因此，寻求一类合适的培养基组成，对细胞培养具有重大意义。细胞生长状态的分析，除形态学观察外，还可对细胞培养上清液中细胞代谢物进行分析，通过考察细胞上清液中营养物和代谢物的变化，判断细胞在生长增殖过程中状态的优劣。鉴于此，我们开发了“细胞培养上清液方法包”，该技术可在 17 分钟内同时分析 95 种细胞培养上清液营养成份和代谢物的相对丰度变化。本文使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱 LCMS-8060 联用，结合“细胞培养上清液方法包”建立了细胞培养上清液中营养物质和细胞代谢物的液相色谱-串联质谱的同时分析方法，为相关研究人员评估细胞生长状态、改进培养基组分提供参考。岛津三重四极杆质谱 LCMS-8060 了解详情，敬请点击《利用LC-MS/MS 考察不同培养基对 CHO 细胞株培养的影响》关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。

霉菌培养箱的清洗消毒如何处理？作为一款毒菌培养箱，超温保护、传感器异常保护、掉电记忆、掉电时间自动补偿等基础性智能功能是必须要有的。毒菌培养箱的功能和用途比较多，其中温度传感器和湿度传感器是用来维持培养室内的温度和湿度稳定的，以满足毒菌生长的条件，快速培养出目标毒菌。1、培养箱消毒:先用纯水擦洗，再用95的酒精擦洗，再照紫外就可以拉!注意周围环境的清洁就不会那么容易污染的拉!2、我的经验是在补充水时最好把水加热一下，达到培养箱的温度3、这么早就养细胞了,我们这里一般是用70%的乙醇擦洗，然后再用0。1%的新洁尔灭擦洗,不放心的话再用高猛酸钾加甲醛1:1比例重一遍。注意要是重的话千万注意混合之后马上离开,然后密闭细胞培养室,味道很刺激的。最好在养细胞前消毒，否则，确实没地方放细胞.4、我们的方法比较简单，先用75%酒精擦拭内壁，通风10分钟,紫外线照射30分钟即可。5、我们的通常处理是先用75%的酒精擦拭内,然后用甲醛+高酸钾蒸一个晚上，然后通风一整天(同时打开紫外线照射)。6、我们是把培养箱里的板层拿出来高压一下，箱壁用75%酒精擦一遍 换用诗乐氏擦一遍，再紫外照一夜，效果很好，其他的请高手指教。熏蒸后吹一天是绝对不够的，最起码要一个星期才可以让甲醛散尽，要不细胞长不好的。霉菌培养箱的使用标准是？霉菌培养箱是一种重要的检测设备。它在高校、科研院所、化工、生物等领域发挥着重要作用。广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等试验。它是水分析、COD/BOD测量、嗜热细菌、菌株和低温微生物培养和保存、植物培养、育种试验和生物培养的专用设备,1、接通电源，开启电源开关，黄色指示灯亮，表示电源已接通，加热器工作。2、当培养箱达到设置温度时，绿色指示灯亮，加热器断电。3、将调节器反复调整至黄绿灯自动继息点，即能自动控制所需温度，箱内温度按内置温度计所指示为准。4、按下温度按钮，此时数字显示即为设定值，旋转温度调至所需温度值，数字显示即为培养室内的实际温度。例如培养箱内的实际温度比设定温度小，加热指示灯亮，加热器开始加热,如毒菌培养箱内的实际温度比设定温度大，制冷指示灯亮，制冷系统开始制冷,如加热指示灯与制冷指示灯均暗，则培养箱处干恒温状态。当温度设定好之后，不要将控温旋来回多次旋转，压缩机启动频繁，则会造成压缩机出现过载现象，直接影响压缩机的使用寿命。在使用温度较低时，应定期清理掉箱内底部积水盘内的积水。湿度长期不用时，请将盒内水倒尽。5、试验物放置在箱内不宜过挤、使空气流动畅通，保持箱内受热均匀，内室底板因靠近电热器,故不宜放置试验物6、应定期检查温度调节器之银触头是否发毛或不平，如有，可用细砂布将触头砂平后再使用。并应经常用清洁布擦净，使之接触良好(注意必须切断电源)7、每次使用完毕后，须将电源全部切断，经常保持箱内清洁。如您对于霉菌培养箱有更多想了解的内容，欢迎咨询 https://www.instrument.com.cn/netshow/SH103298/C202516.htm