[align=left][font='times new roman'][size=16px]SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]-DMOA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱分离磷脂[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]标准品[/size][/font][/align]不同类别的磷脂结构上的差异主要表现为头部基团极性的差异,在分离时主要采用正相色谱模式。基于SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱具有反相/亲水混合模式保留特性,首先采用不同类别的磷脂标准品考察SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对混磷脂样品的分离选择性。如图示,以具有相同烷基侧链的磷脂DPPG、DPPE和DPPC为样品,能够在10 min内实现共洗脱,其出峰顺序依次为DPPG、DPPE和DPPC。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302316003138_968_5887186_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][size=13px] [/size][size=13px]混磷脂标准品在[/size][size=13px]SiO[/size][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][size=13px]-DMOA[/size][size=13px]色谱柱上的色谱分离图[/size][/align]进一步将SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱应用于不同PC种类的分离。如图所示,以甲醇/乙腈(40/60,v/v)为流动相,DMPC、DPPC和DSPC在17 min内实现基线分离,且峰形良好,并没有明显拖尾现象。DMPC、DPPC和DSPC的差异主要表现为两条酰基侧链含碳数目的不同,它们尾部含碳数目分别为13、15和17。因此3种PC在SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱上的洗脱顺序依次为DMPC、DPPC和PSPC。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302316021382_7179_5887186_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][size=13px] [/size][size=13px]混[/size][size=13px]PC[/size][size=13px]在[/size][size=13px]SiO[/size][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][size=13px]-DMOA[/size][size=13px]色谱柱中的分离谱图[/size][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px] SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]-DMOA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱分离大豆卵磷脂和肺腺癌细胞膜磷脂提取物[/size][/font][/align]基于SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对磷脂大类和磷脂类别的良好分离性能,以大豆卵磷脂提取物为实际样品,进一步探究SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对复杂磷脂样品的分离性能。以A/甲醇(50:50,v/v)为流动相的色谱分离图,大豆卵磷脂的分离是采用正相色谱条件下进行,从图中可以观察到在12 min内,可以观察到10个色谱峰,显示了良好的分离性能。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302316006230_4359_5887186_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][size=13px] [/size][size=13px]大豆卵磷脂在[/size][size=13px]SiO[/size][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][size=13px]-DMOA[/size][size=13px]色谱柱上的色谱分离图[/size][/align]此外,以肺腺癌细胞膜磷脂提取物为样品,对其分离的色谱条件与大豆卵磷脂一致,考察了SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对肺腺癌细胞膜磷脂提取物的分离性能。如图所示,肺腺癌细胞膜磷脂提取物在12 min内大致可观察到11个色谱峰。上述结果证实SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]-DMOA色谱柱对复杂磷脂样品也同样具有良好的分离选择性。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302316024767_1277_5887186_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][size=13px] [/size][size=13px]肺腺癌细胞磷脂提取物在[/size][size=13px]SiO[/size][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][size=13px]-DMOA[/size][size=13px]色谱柱上的色谱分离图[/size][/align]
[align=center][font='times new roman'][size=16px]磷脂分离分析[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]方法[/size][/font][/align] 2003年,Han等正式提出了脂质组学的概念,即对生物样品中脂质进行全面的系统分析,并以此为依据推测其他与脂质作用的生物分子的变化,进而阐明脂质在各种生命现象中的作用机制。脂质尤其是磷脂,是细胞膜的关键组分,磷脂代谢的改变对细胞膜结构有深远的影响,尤其是癌细胞需要更多的膜来实现快速增殖。因此,膜磷脂的含量、磷脂代谢物水平和磷脂谱的变化[font='times new roman'][sup][size=16px][99][/size][/sup][/font]通常被确定为癌症发展进程的标志,此外,磷脂代谢的改变也与糖尿病、人体衰老与肥胖有关。基于磷脂重要的生理与病理功能,需要快速、准确的分离分析手段实现对其的定性与定量分析,进而阐明其组分变化对机体的影响,为临床诊断和治疗提供重要依据。 磷脂分子是由亲水性头基和亲脂性/疏水性尾基组成,根据亲水性头基的取代基团的不同又可分为PC、PE、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰甘油(PG)等。目前,磷脂分离分析面临的主要挑战包括两方面,一方面是磷脂本身复杂和多样的结构信息,包括类别、脂肪酰基种类、脂肪酰基sn-位置和脂肪酰基中的C=C位置/几何形状(即顺式/反式)等,导致其识别与鉴定的难度很大。另一方面是分离分析工具与技术的限制。最初用于脂质组学的分析方法是基于质谱的鸟枪法,即直接将样品注入到质谱仪中,尽管该方法具有简便高效的优点,但是会导致样品中的杂质包括盐、极性代谢物和蛋白质等对脂质的电离造成影响,影响信号的稳定,最终会影响质谱的检测结果。此外,这些杂质也会污染质谱仪。近年来,高灵敏度和特异性的高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱(HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])法成功弥补了鸟枪法的缺陷。由于在质谱分析之前增加了色谱分离过程,一方面可以有效减少样品中杂质的影响,另一方面基于其分离能力,可以将磷脂按照类别与种类进行初步的分离,减少了后续质谱分析的基质效应和离子抑制效应,大大改善了磷脂的分离分析效果。 色谱固定相作为HPLC的核心组成,发挥着至关重要作用。开发新型色谱固定相是脂质组学的重要研究方向之一。例如,Liang等以半胱氨酸为衍生化试剂,合成了苯乙烯马来酸共聚物色谱固定相Sil-SMA-amino acid,填充Sil-SMA-amino acid色谱柱对于亲疏水性的小分子具有良好的分离性能,同时该色谱柱具有RPLC/HILIC/IEC的混合模式保留机制,成功实现了部分PC和PE标准品的种类分离,并成功应用于胃癌细胞脂质提取物的分离分析,表现出了一定的应用潜力。Liu等以三辛基膦和烯丙基溴为原料合成了膦基离子液体三辛基(烯丙基)溴化膦([P[font='times new roman'][sub][size=16px]888Allyl[/size][/sub][/font]]Br)。以[P[font='times new roman'][sub][size=16px]888Allyl[/size][/sub][/font]]Br为聚合单体,通过点击化学反应合成了聚膦离子液体功能化二氧化硅球(PIL@SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font])。PIL@SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]填充色谱柱表现出RPLC/HILIC混合模式分离特点,可在较短的时间内实现核酸碱基与核苷类、磺胺类、酰胺类和苯胺类物质的快速分离,具有良好的分离选择性。其对于磷脂标准品的分离效果优于商业化的氨基柱,并可用于磷脂类别与种类的同时分离分析。此外,也实现了大豆卵磷脂的快速分离分析。
[align=left][font='times new roman'][size=18px]磷脂的结构与[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]功能[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]磷脂是一[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]种[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]脂类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]物质[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],是植物和动物细胞中生物膜[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]组织的基本成分。它们同时是具有亲水性和亲脂性的两亲[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]性分子[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。如图所示,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的分子结构[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]包含一个极性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]“[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]头[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]”[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]同时[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]连接着两个[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]有时只有一个[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不同长度和不同饱和度的非极性链。一般对于极[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]头,磷酸基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]酸性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pKa≈0[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],胺基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]胆碱、乙醇胺和丝氨酸的基本官能团[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pKa≈9[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],羧基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]R[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]1[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]或[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]R[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]=H[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的甘油磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pKa≈3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。从图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以看出,磷脂有许多亚类,根据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]骨架[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的不同可分为两个亚群,鞘磷脂和甘油磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px];[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]其他亚[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以根据脂肪链的数量进行分类[/size][/font][font='宋体'][size=16px],例如溶血卵磷脂是一类只含有一个非极性尾部的磷脂,[/size][/font][font='宋体'][size=16px]要么在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]sn-1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]位置[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溶血[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]卵[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],要么在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]sn-2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]位置[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]血卵[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]);[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]还可以根据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]修饰[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在磷酸基上的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]R[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]3[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]基团来分类,最常见的磷脂是磷脂酰胆碱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],占血浆磷脂总量的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-70%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。几种[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]常见磷脂及其亚类的分子结构[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]如图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]所示。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308012156432272_6764_5389809_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1 [/font][font='times new roman']磷脂分子的结构图[/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig.1 Structural diagram of phospholipid molecules[/font][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308012156435665_2656_5389809_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']常见磷脂及其亚类的分子结构[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][4][/size][/sup][/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig[/font][font='times new roman'].2 Molecular structure of common phospholipids and their subclasses[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]2 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px] [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]生理[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]功能[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]磷脂是生命[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]基础物质,细胞膜中脂质含量高达[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]50%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],其中大部分为磷脂。磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]卵磷脂、脑磷脂和肌醇磷脂等,分别对人体的不同器官起着[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不同[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的生理作用。磷脂的三种主要生理功能分别是乳化作用、增殖作用和活化细胞作用。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂的乳化作用主要体现在对心脑血管疾病的防治上,例如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]糖尿病和肥胖代谢综合征[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]研究表明[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂可以分解体内过高的血脂和胆固醇,使血管通畅,有[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]“[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]血管清道夫[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]”[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]之称。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂具有活化细胞的作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]——[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]线粒体存在于大多数细胞中,是由两层磷脂双分子膜包被的细胞器,它是哺乳动物细胞的动力源[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在细胞代谢、细胞凋亡、类固醇合成、信号转导等生理活动中发挥着关键作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],磷脂作为线粒体膜的主要成分,肩负着重要使命。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308012156436790_9940_5389809_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']3 [/font][font='times new roman']哺乳动物细胞线粒体(大鼠肝脏)膜的磷脂[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][25][/size][/sup][/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']Phospholipids of the mitochondrial membranes in mammalian cells (rat liver)[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]合理利用磷脂可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]防治疾病[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],而体内磷脂代谢失衡也会[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]致[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]疾病的发生[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。值得注意的是,有研究表明,人体内磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]代谢[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]多种[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]癌症密切相关。除此之外,磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]复合物[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]还被用于药物递送,包括经皮药物递送、细胞内药物递送、透皮贴片给药、眼部给药和中枢神经系统靶向给药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]为鼻给药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]之[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]后,脂质纳米颗粒复合药物对中枢神经系统进行靶向治疗的可能途径。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]由于磷脂在生化和临床方面的重要性,需要快速和可靠的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分离[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分析方法来识别和定量生物样本中的磷脂。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308012156437338_2831_5389809_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']4 [/font][font='times new roman']鼻给药后药物转运的可能途径示意图[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][34][/size][/sup][/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig.4 Possible routes of drug transport after nasal administration[/font][/align]
[align=left][font='times new roman'][size=16px]磷脂分离分析方法[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]及难点[/size][/font][/align]磷脂的极端复杂性和低丰度问题使其可靠的分离带来了一定的困难,进一步深入研究其生物学功能,磷脂仍然是一个重要研究目标。早期的磷脂分析方法常采用络合光度法和比色法对磷脂总量进行检测和质量分析,该方法不能实现单一组分的分析检测。近年来,薄层色谱法(TLC)、高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法(HPLC)和质谱法(MS)等新型分离分析技术用于磷脂的分离分析研究。TLC是最早应用于磷脂分离分析的一种方法,由于具有操作简便和样品处理量大等优势特点一直使用至今。TLC的主要缺点是其仅对同一类别的磷脂具有分离效果,无法对单一类别磷脂中分子种属进行分离分析。在TLC分析过程中,磷脂分子完全暴露在空气中,会导致部分不饱和脂肪酸氧化,使结果产生偏差。HPLC是近年来广泛采用的磷脂分离分析技术,这种分离分析技术能够实现对不同类别和种属关系磷脂的分离,进而对复杂磷脂具有很好的分离效果。在HPLC分离磷脂时,对于不同类的磷脂多采用正相色谱(NPLC);对于同一类不同种属关系的磷脂往往采用反相色谱(RPLC)进行分离。随着HPLC技术的不断发展,二维高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]在磷脂的分离分析中的优势越来越明显,可以通过色谱柱的选择对磷脂的分子类别和种属实现双重分离。例如,Zhang等建立了一种离线二维混合模式结合反相高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法分析复杂样品中脂质的方法。在第一维色谱中,按照中性脂类到极性脂类的洗脱顺序,22种不同的脂类可成功被硅胶色谱柱分离;在第二维色谱中,根据脂酰基链的长度和不饱和程度,采用反相C30色谱柱分离,从而进一步提高了分离效率。HPLC虽然是目前最常采用的磷脂分离技术,但对于磷脂的定性鉴别还存在较大的困难。HPLC与MS联用技术是目前磷脂鉴定最常用的技术,电喷雾电离技术(ESI)是磷脂质谱分析中最常用的离子源。HPLC-ESI-MS技术联用可以有效降低复杂样品中基质的干扰,提高磷脂的定性鉴别能力。例如,Kim等利用二醇基正相色谱柱建立了NPLC-ESI-MS定量和定性分析新方法,可从大鼠心脏和骨骼肌线粒体中检测到7类磷脂,包括PE、PC、PA、PI、PS、心磷脂(CL)和单溶血心磷脂(MLCL),并对除PS以外的所有磷脂进行定量分析,显示出良好的重现性和准确性。[align=left][font='times new roman'][size=16px]1.1.[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂分离分析的难点[/size][/font][/align]首先,磷脂在细胞功能中发挥着细胞屏障、信号传递和能量库等多种功能,细胞脂质非常复杂,有着数以百计的分子物种。细胞脂质在生命活动中也是高度动态的,细胞膜将细胞彼此分离,包围细胞器,并将细胞器细分成更小的隔间。以这种方式,细胞膜在细胞内产生了许多不同的环境,这些环境中发生着不同的生化反应,因此细胞脂质随着细胞所处的环境不断发生着变化。最后,磷脂分子具有多种多样的异构体,这进一步增加了磷脂分离鉴定的挑战性。如图所示,以PC([color=#000000]36:1[/color])为例介绍磷脂可能存在的异构体。PC存在的主要异构体形式包括sn位置同分异构体、双键位置异构体、双键顺反同分异构体和R/S手性对映体。此外,生物样品中磷脂成分复杂、种类多样且含量极低以及磷脂结构中很少存在易电离基团等特性使得磷脂的定量分析存在困难。利用衍生化技术对磷脂进行后修饰,可提高磷脂的离子化效率,使得定量分析效率提高。[align=center][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211162152007402_7183_5389809_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]图[/size][size=13px] [/size][size=13px]脂质分子异构体形式[/size][/align][align=center][/align]
食品中磷脂的检测和分析马心茹一、磷脂的结构和功能磷脂(phospholipids)是一类含有磷酸基团的脂质,其广泛存在于植物油、大豆、蛋黄、乳制品、肉类和鱼类中。磷脂也是一类被熟知的极性脂类(polarlipids),根据其主体碳链结构的不同,可主要分为甘油磷脂(glycerophospholipids)和鞘磷脂(sphingolipids)两大类。甘油磷脂主要包含了磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)和磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS),鞘磷脂则主要为神经鞘磷脂(sphingomyelin,SM)。除了以上常见的五种磷脂外,学者们还发现了一些微量磷脂成分,如磷脂酸(phosphatidicacid,PA)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol,PG)、溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(lysophosphatidylethanolamine,LPE)、缩醛磷脂(plasmalogens)、葡糖神经酰胺(glucoceramide,GluCer)和乳糖神经酰胺(lactoseceramide,LacCer),其中GluCer和LacCer都属于鞘磷脂,LPC和LPE分别为PC和PE的代谢产物。磷脂在乳中的存在形式为乳脂肪球滴(milkfatglobule),是乳脂肪球膜(milkfatglobulemembrane,MFGM)的主要组成物质,由于其两亲性(amphiphilic)特征,磷脂在乳中起到了维持乳脂物理稳定性的作用,也通常被用作乳化剂添加到食品中。磷脂种类繁多,因拥有多种同分异构体和异形物,使得其检测方法异常复杂。磷脂是细胞和某些活性酶的重要组成成分,能调节机体膜功能,促进和改善胃肠功能,保护和增强肝脏功能,调整血脂、防止动脉粥样硬化,消除大脑疲劳、改善记忆力等。磷脂具有良好的乳化、润湿、分散等作用,在食品、医药、化妆品等行业具有广泛的应用,磷脂作为食品添加剂,能够提高加工过程中食品的稳定性 精制磷脂添加在化妆品中,可以改善皮肤状态、润滑受损毛发 牲畜或水产饲料中加入磷脂,可以改善它们的生长状况 磷脂也是注射液乳剂中常用的材料,可以制备药物复合物,提高药物的利用度。二、磷脂的提取磷脂的提取方法包括有机溶剂提取法、超临界CO2萃取法、柱层析法、酶解法、复合盐沉淀法等方法。(1)有机溶剂萃取法有机溶剂萃取法是根据各磷脂组分和杂质在有机溶剂中的溶解度不同,来实现磷脂与杂质的分离,常用的有机溶剂有乙醇、丙酮、甲醇、氯仿等,提取时常常是几种溶剂联合使用以提高磷脂的提取率和纯度。有机溶剂提取法常与超声波萃取、超高压萃取、微波萃取等方法联用以提高萃取效率(2)超临界萃取法超临界萃取(supercriticalfluidextraction,SCF)技术是利用超临界状态下的CO2具有气体和液体的双重特性,通过改变温度和压力来调整流体的性质,从而对样品中的目标物质进行萃取的方法。为了获得更好的提取效果,使用超临界CO2提取磷脂时通常会加入夹带剂,最常用的夹带剂是乙醇,也有研究者使用丙烷等作为夹带剂。超临界CO2具有高扩散性、可重复利用、无污染以及选择性好等特点,但该方法所用设备价格昂贵,且样品处理量少,不适合商业化生产。(3)柱层析法柱层析法是根据样品混合物中各组分在吸附剂和洗脱剂中分配系数的不同,通过多次反复洗脱将磷脂与其它组分分离。柱层析法常用硅胶、氧化铝、硅藻土等作为吸附剂,氯仿、甲醇、乙醚、丙酮等作为洗脱剂。柱层析法分离效果好,操作简单,是目前高纯度磷脂制备的重要方法,但是处理量有限,而且要使用一些具有毒性的有机溶剂,从而限制了该方法在工业上的推广应用。(4)无机盐复合沉淀法无机盐复合沉淀法主要用来萃取卵磷脂,利用某些无机盐与卵磷脂结合可形成络合物沉淀,使卵磷脂与其他物质分离开,从而除去蛋白质和脂肪等杂质,再利用适当的溶剂把无机盐从磷脂复合物中萃取出来,从而获得较高纯度的磷脂。该方法提取率较高,但是最后需要将金属沉淀剂从磷脂中分离出来,操作较复杂。三、磷脂的定性和定量分析(1)钼蓝法钼蓝比色法分析原理是将植物油中的磷脂经灼烧成为五氧化二磷,被热盐酸变成磷酸,遇钼酸钠生成磷钼酸钠用硫酸联氨还原成钼蓝。然后按照国标方法绘制磷标准曲线用分光光度计在波长650nm对标准溶液进行吸光度的测定,并以此绘制标准曲线,计算样品中磷含量。具体操作:取六支比色管,编成0、1、2、4、6、8六个号码。按号码顺序分别注人标准溶液0mL、1mL、2mL、4mL、6mL、8mL,再按顺序分别加水10mL、9mL、8mL、6mL、4mL、2mL。接着向六支比色管中分别加人硫酸联氨溶液(6.9)8mL,钼酸钠溶液2mL。加塞,振摇3次~4次,去塞,将比色管放人沸水浴中加热10min,取出,冷却至室温。用水稀释至刻度,充分摇匀,静置10min。移取该溶液至干燥、洁净的比色皿中,用分光光度计在650nm处,用试剂空白调整零点,分别测定吸光度。以吸光度为纵坐标,含磷量(0.01mg、0.02mg、0。04mg、0.06mg、0.08mg)为横坐标绘制标准曲线。根据试样的磷脂含量,用坩埚称取制各好的试样,成品油试样称量10g,原油及脱胶油称量3.0g~3.2g(精确至0.001g)。加氧化锌0.5g,先在电炉上缓慢加热至样品变稠,逐渐加热至全部炭化,将坩埚送至550℃~600℃的马弗炉中灼烧至完全灰化(白色),时间约2h。取出坩埚冷却至室温,用10mL盐酸溶液溶解灰分并加热至微沸,5min后停止加热,待溶解液温度降至室温,将溶解液过滤注人100mL容量瓶中,每次用大约5mL热水冲洗坩埚和滤纸共3次~4次,待滤液冷却到室温后。用氢氧化钾溶液中和至出现混浊,缓慢滴加盐酸溶液使氧化锌沉淀全部溶解,再加2滴。最后用水稀释定容至刻度,摇匀。制备被测液时同时制备一份样品空白。用移液管吸取被测液10mL,注人50mL比色管中。加入硫酸联氨溶液8mL,钼酸钠溶液2mL。加塞,振摇3次~4次,去塞,将比色管放人沸水浴中加热10min,取出,冷却至室温。用水稀释至刻度,充分摇匀,静置10min。移取该溶液至干燥、洁净的比色皿中,用分光光度计在650nm下,用试样空白调整零点,测定其吸光度。(2)重量法植物油中的磷脂吸水膨胀,密度增大,使其由絮状悬浮物转变为沉淀物。将试样水化后,用丙酮反复洗涤过滤,由于磷脂不溶于丙酮,油溶于丙酮,从而可使得磷脂与油分离。称量磷脂的质量,计算其含量。该方法所得到的沉淀过滤物不完全是磷脂,还有其他不溶于丙酮的类脂物质。(3)薄层色谱法(thinlayerchromatography,TLC)TLC是根据展开剂中磷脂各组分与薄层板上吸附剂之间作用力不同、比移值(Rf)不同而达到分离磷脂组分目的的一种检测手段,TLC通常用于磷脂的定性和半定量测定,是最早应用于磷脂检测的方法之一。TLC的优点是操作简单、快速、直观、专业要求低、前期设备资金投入少,但其自动化程度低,多数情况下适用于实验室规模的检测,难以应用到工业界大规模样品的批检中。Morrison等、Christie等和Weihrauch等在上世纪60-80年 开始研究TLC及2D-TLC对乳及乳制品中磷脂含量的检测方法,检测基质包括母乳、牛乳、水牛乳、羊乳、山羊乳、骆驼乳、驴乳和奶酪等,报道列出了5大类磷脂分量(PE、PI、PS、PC、SM)在各动物基乳中的组分,其含量和其他检测手段得出的结果基本属于同一范围。Sanchez-Juanes等在2009年报道使用一种更先进的高效薄层色谱(high-performancethinlayerchromatography,HPTLC)技术对生牛乳进行磷脂组分分析。近年来,随着仪器的革新和技术的发展,TLC在国内外磷脂类化合物的检测中已较少使用,取而代之的是更少受人为因素影响的色谱、质谱和核磁共振等精密仪器(4)液相色谱-蒸发光散射法(high-performanceliquidchromatography-evaporativelightscatteringdetector,HPLC-ELSD)HPLC用于磷脂检测的技术在近些年得到飞速进步,并获得了广泛的认可和应用。HPLC法的突出优点在于其能使非挥发性的、热敏感的磷脂在常温得到分离,且其封闭系统能最大限度地减少磷脂在分析过程中被氧化的程度,确保实现磷脂快速、灵敏、准确、可重复的定量分析。HPLC可配置多种检测器,包括紫外检测器(ultraviolet,UV)、蒸发光散射器(ELSD)、电荷气溶胶探测器(chargedaerosoldetector,CAD)和质谱仪(massspectrometer,MS)等,其中,ELSD和MS应用最为广泛。ELSD的检测原理是把挥发性高的流动相喷入带热气流的检测器中,待其蒸发后,不挥发的磷脂形成微小液滴,这些液滴散射的光进入光电倍增器后产生电流,依据不同质量的磷脂引起电流大小的差异来达到检测的目的。ELSD是一种相对新型的检测器,它与UV、CAD和MS相比拥有诸多优点,如适用范围宽、检测时不存在基线漂移、对溶剂流速不敏感、能消除流动相梯度洗脱对结果带来的不良影响等,其在乳制品等复杂基质领域有很强的应用,正在逐渐成为磷脂分析检测的主流方法[5,34]。国际卵磷脂和磷脂协会(ILPS)于2003年推荐HPLC-ELSD法用于测量卵磷脂中的磷脂组分[51],美国分析化学家学会(AOAC)也在2007年将HPLC-ELSD法收录为分析卵磷脂的标准检测方法。(5)核磁共振磷谱(31phosphorus-nuclearmagneticresonance,31P-NMR)31P-NMR用于磷脂检测是二十世纪七十至九十年代发展成熟的技术,其在分析生理组织(大脑、肝脏、细胞膜等)和食品(植物油、肉类等)中磷脂含量的领域展现出了很强的应用。31P-NMR拥有很高的灵敏度,能检出样品中低浓度含量的磷脂,近年来,该方法也被开发应用于乳制品等复杂基质。31P-NMR的优势在于不需要对样品进行大量的化学处理,且定量分析时不需要标准品,只需在总脂肪中加入内标。然而,31P-NMR仪器普及度不高,仪器运营费用昂贵,对实验员操作的熟练程度也要求较高,所以在资金、人员、设备上投入相对较大。31P-NMR的基本原理是检测磷脂分子中的每个磷原子,基于各组分在不同的化学环境中会呈现出不同的31P化学位移,利用其31P核磁共振效应来确定不同组分。Andreotti等使用31P-NMR对牛乳和水牛乳中的磷脂进行了定量分析,结论表示两种乳中磷脂种类的分布大体一致。Carcia等采集了不同种类哺乳动物(牛、骆驼、马)乳中磷脂的指纹图谱,并与人乳比对。结果显示,人乳和骆驼乳中富含对婴幼儿发育起到重要作用的神经鞘磷脂(分别为7.83mg/100mL和11.8mg/100mL)和缩醛磷脂(分别为2.7mg/100mL和2.4mg/100mL);磷脂总量在四类乳中的排序为骆驼乳(0.503mmol/L)母乳(0.324mmol/L)牛乳(0.265mmol/L)马乳(0.101mmol/L)。Murgia等鉴别和定量分析了羊乳乳脂和牛乳乳脂中的磷脂组分,文中引进了单相二甲基甲酰胺/三乙基胺/盐酸胍作为溶剂体系,相比于传统的氯仿/甲醇/EDTA-水溶剂体系,新法能显著提高谱图峰的分辨率并降低化合物信号位移。MacKenzie等[51]对奶油和磷脂原料(PC700,BPC60)中的PC、PE、PS、PI、SM含量进行了检测,并与2D-TLC法做出对比,两种方法得出的磷脂组分基本属于同一范围。其中,奶油中磷脂总量分别为0.14%w/w(TLC法)和0.16%w/w(31P-NMR法);PC700分别为53.2%w/w(TLC法)和60.6%w/w(31P-NMR法);BPC60分别为72.9%w/w(2D-TLC法)和75.8%w/w(31P-NMR法)。MacKenzie的结果显示2D-TLC法灵敏性更高,能检出31P-NMR无法检出的低含量组分,但31P-NMR更适合高效率地规模化运作,因其自动化程度更高且耗时更短。(6)液相色谱-质谱检测器(high-performanceliquidchromatography-massspectrometer,HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])MS最大的优势在于其拥有更好的精密度、灵敏性、特异性和更强的定性能力,它不仅可以检测磷脂总量和分量,更可以精确到各分子种类进行定性和结构分析。目前,MS被认为是测定磷脂分量及分子种类最精确的手段,其结合三重四极杆或飞行时间质谱仪将成为此领域新的发展方向。然而,MS的购买、运行和维修费用非常昂贵,且存在同位素峰间干扰和结果再现性不稳定等问题,故而其全面推广受到限制。即便如此,磷脂检测技术结合MS仍具有广阔的前景,近些年涌现出大量针对乳制品应用的报道。与液相、核磁共振方法不同的是,质谱仪通常串联离子源(ESI、EI、ICP等)、质量分析器(四极杆、四极杆离子阱、飞行时间等)和检测器(电子倍增器、感应电荷检测器等)共同使用,多种仪器组件的叠加增加了其检测方法的复杂性。通常,质谱类检测器使用的色谱柱多为反向柱(如C8、C18柱)或亲水作用色谱柱(hydrophilicinteractionliquidchromatography/HILIC柱),使用的流动相体系通常为氯仿:甲醇:缓冲液/水或乙腈:甲醇:缓冲液/水。此处值得一提的是HILIC柱的应用,HILIC柱是一类既非正向柱也非反向柱的特殊色谱柱,其采用了类似正向柱的固定相,但具备反向柱的部分特征。HILIC柱是一类高效的极性物质保留柱,通过亲水性作用力(hydrophilicinteraction)实现对极性物质的分离和洗脱,它能有效地改善反向色谱柱极性物质保留性差的缺点,并能有效提高电喷雾离子源的灵敏度,近些年受到了越来越广泛的关注。除此之外,质谱类检测器因能精确定量到磷脂分子种类,其在数据分析时结合主成分分析(PCA)能对磷脂进行指纹图谱的绘制,这一技术近年来发展快速。四、结语磷脂在食品、医药等行业中有广泛应用,优化和改进磷脂的提取和检测方法具有重要意义。目前在磷脂的提取和检测方面还存在许多挑战,在提取方面,多采用有机溶剂提取法,但存在溶剂残留等问题,超临界萃取法具有环保节能的优势,该方法主要用于实验室,在工业方面的应用有待增加 在检测方面,主要是HPLC-UV、HPLC-ELSD方法,由于磷脂的种类较多,脂肪酸组成差异较大,对于来源不同的磷脂,UV检测器不能准确定量,ELSD检测器是质量通用型检测器,可以比较准确地对磷脂进行定量分析,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]和NMR法对人员和设备要求比较高,目前还无法实现广泛应用。随着磷脂提取和检测技术的成熟,关于磷脂结构的分析会越来越多,可以更加全面的了解磷脂,使其更好地应用于生产和生活中。就磷脂提取而言,如何有效地去除杂质、提高萃取效率、确保检测结果的稳定性和重复性仍是目前存在的技术难点。SPE固相萃取小柱的应用,能有效且定向地对检测基质进行除杂,因其填料的多样性和创新性,SPE小柱在未来的应用或将逐步增加,但检测人员仍需考虑过柱带来的回收率上的损失。就定量方法而言,其未来发展趋势应根据需求进行划分:如针对企业进行相关产品检测,液相色谱-蒸发光散射器足以满足批检和抽检的需求;但从科研角度考虑,质谱类仪器无疑拥有更大的优势,这一点从近5年磷脂检测技术的发文趋势上可以看出。质谱类仪器因其精密性和高通量,现有技术已能对磷脂上百种分子种类进行定量分析,未来还能对更多未知的种类进行筛查及鉴别。除此之外,配合主成分分析手段,科研人员能对磷脂进行指纹图谱的绘制,这项技术在食品的真实性和溯源性鉴定上拥有巨大潜力。从表1汇总的数据来看,各文献报道的磷脂含量差异性较大,实验数据间难以互相做比,检测人员在参考数据时需对照所使用的检测方法和仪器条件。一点重要的启示是,新方法在开发时需经过缜密的方法学验证,需从精密度、检出限、定量限、回收率和线性关系等几个维度对方法进行综合评估,以得到最接近真值、有对比意义且重复性好的结果。参考文献[1]胡雪,段国霞,刘丽君,李翠枝,吕志勇,唐烁.乳及乳制品中磷脂的含量、功能、分离及检测技术研究进展[J/OL].食品科学:1-24[2021-07-06].[2]罗鑫,孙万成,罗毅皓.食品中鞘磷脂的检测及功能研究进展[J].食品研究与开发,2020,41(15):211-218.[3]刘黔霞,吴雪君,杨坤,张红,刘美霞,王凤霞.植物油中磷脂含量的测定[J].云南化工,2020,47(04):134-135.[4]文艺晓,彭吉星,郭莹莹,王婧媛,左红和,王联珠.HPLC-ELSD检测南极磷虾油中磷脂含量[J].南方农业学报,2019,50(10):2293-2299.[5]文艺晓,王联珠,彭吉星,郭莹莹,朱文嘉,王婧媛.食品中磷脂提取及分析方法的研究进展[J].食品安全质量检测学报,2019,10(07):1877-1883.[6]韩智,龚蕾,王会霞,江丰,朱晓玲,黄宗骞,曹琦.定量核磁共振磷谱在食品分析检测中的研究进展[J].食品与机械,2021,37(03):207-212.[7]工标网(www.csres.com)
请问各位大侠做过大豆卵磷脂中的磷脂酰胆碱吗?我们的批文用的是以下的方法,一定要用下面的方法做 我用的流动性为正己烷:异丙醇:磷酸:水=45:48:0.15:7.5 色谱柱为默克的SI60长柱标准品中检所的,标准的锋出现4个叠在一起的锋,不知道是什么原因? 柱子是新 是否跟流动相的PH值有关,还是我的标准品有问题?请各位大霞指教一下?
[align=center][img=,200,169]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241553490031_9213_932_3.png!w157x133.jpg[/img] [img=,200,158]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241553556447_8021_932_3.png!w162x128.jpg[/img] [img=,200,150]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241554573919_1110_932_3.png!w162x122.jpg[/img][/align]我们今天做的是磷脂酰类混合物的测定,本次的磷脂酰类混合物主要包括磷脂酰胆碱。磷脂酰胆碱是细胞膜和肺部表面活性物质的重要成分,在磷脂双分子层的外叶上更为常见。磷脂酰胆碱转移酶是将磷脂酰胆碱在膜与膜之间运输的载体。磷脂酰胆碱还在细胞的信号通路中扮演重要的角色。[b]色谱条件[/b]色谱柱:月旭UltimateSiO2(4.6×150mm,5μm);流动相:A相:正己烷(含0.04%三乙胺)/异丙醇/13%乙酸溶液=40/57/3;B相:正己烷(含0.04%三乙胺)/异丙醇/13%乙酸溶液=40/50/10; [table=216][tr][td=1,1,72]时间[/td][td=1,1,72]A相[/td][td=1,1,72]B相[/td][/tr][tr][td=1,1,72]0[/td][td=1,1,72]100[/td][td=1,1,72]0[/td][/tr][tr][td=1,1,72]10[/td][td=1,1,72]0[/td][td=1,1,72]100[/td][/tr][tr][td=1,1,72]18[/td][td=1,1,72]0[/td][td=1,1,72]100[/td][/tr][tr][td=1,1,72]18.1[/td][td=1,1,72]100[/td][td=1,1,72]0[/td][/tr][tr][td=1,1,72]25[/td][td=1,1,72]100[/td][td=1,1,72]0[/td][/tr][/table]检测器:漂移管线温度:110℃;载气压力:3.0L/min;柱温:35℃;流速:1.5mL/min;进样量:20μL;[b]谱图和数据[/b]1、混合对照溶液:[align=center][img=,600,180]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241557004352_3211_932_3.jpg!w690x207.jpg[/img][img=,600,165]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241557052047_1308_932_3.jpg!w690x190.jpg[/img][/align]2、溶血磷脂酰胆碱(LPC):[align=center][img=,600,180]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241557353787_1508_932_3.jpg!w690x208.jpg[/img][img=,600,83]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241557424334_9174_932_3.jpg!w690x96.jpg[/img][/align]3、磷脂酰胆碱(PC):[align=center][img=,600,182]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241558067938_7383_932_3.png!w690x210.jpg[/img][img=,600,65]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241558129164_2317_932_3.jpg!w690x75.jpg[/img][/align]4、磷脂酰丝氨酸(PS):[align=center][img=,600,180]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241558412593_3750_932_3.jpg!w690x207.jpg[/img][img=,600,61]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241558542836_3244_932_3.jpg!w690x71.jpg[/img][/align]5、 溶血磷脂酰乙醇胺(LPE):[align=center][img=,600,180]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241559251577_5909_932_3.png!w690x207.jpg[/img][img=,600,68]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241559299151_4402_932_3.jpg!w690x79.jpg[/img][/align]6、 磷脂酰肌醇(PI):[align=center][img=,600,181]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241559521594_4721_932_3.jpg!w690x209.jpg[/img][img=,600,67]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241559574909_3120_932_3.jpg!w690x78.jpg[/img][/align]7、磷脂酰乙醇胺(PE):[align=center][img=,600,180]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241600236465_2058_932_3.png!w690x207.jpg[/img][img=,600,64]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241600285700_5504_932_3.jpg!w690x74.jpg[/img][/align]8、鞘磷脂(SM):[align=center][img=,600,180]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241600512503_3567_932_3.jpg!w690x207.jpg[/img][img=,600,67]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909241600558827_1744_932_3.jpg!w690x78.jpg[/img][/align][b]结论[/b]月旭UltimateSiO2(4.6×150mm,5μm),在此条件下测定,可以达到测试要求。
问题: 有做磷脂正己烷不溶物的吗,用多大孔径滤膜?还是直接用G3砂芯
色谱法同时分析磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱和游离脂肪酸 磷脂容易被氧化和水解从而降解(如下图),这就限制了有磷脂的药物制剂(脂质体、乳剂)的稳定性及保质期.http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281025_525018_2204138_3.jpg 溶血磷脂和脂肪酸的产生量是判断药物制剂适宜性的关键参数,如随着脂质水解程度变化脂质体分子组成由层状变为胶束就会伴随着药物释放速度的改变。有报道称大量LPC的形成会导致油滴变大导致磷脂与肠胃液稳定相的聚合和破裂,从而导致毒副作用。 美国FDA要求制药企业对于脂质体药物建立适当的储存条件,并在进行稳定性研究时对脂质体药物进行脂质成分分析。这就要求合适的方法对不同化合物的准确定性及定量分析。由于分子中缺乏足够的发色团,以至于紫外和荧光检测不适于对于脂质体的直接分析。蒸发光散射检测器(ELSD)并不需要衍生化,可作为磷脂检测的快速灵敏的手段。蒸发光散射通过测定溶剂蒸发后被检测物散发光的强度进行分析。该方法允许梯度洗脱并对流速不敏感,且相对于LC-MS更方便和便宜。 材料和方法:L-α磷脂酰胆碱、L-α溶血磷脂酰胆碱、亚油酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、甲醇(色谱纯)、氯仿(色谱纯)、氢氧化铵(分析纯)、去离子水。旋转蒸发仪、超声仪、沃特斯2695配低温政法光检测器、Allsphere硅胶色谱柱(150mm×4.6×5um)、Millennium32色谱工作软件。 磷脂酰胆碱脂质体悬浮液通过蒸发-水化法制备,称取0.224g PC溶解于50ml氯仿中,转移至250ml圆底烧瓶中,使用氮气流蒸发氯仿而形成薄的脂质膜,最后通过旋转蒸发仪除去痕量的氯仿,脂质膜用50ml的0.9%NaCl溶液于40℃进行水合,将脂质体浓缩至4.48mg/ml,得到的多层囊泡悬浮液经超声30分钟以获得单层脂质体,脂质体用0.1 N NaOH 调节PH在9-10之间。121℃高压灭菌15分钟。室温保存备用。 标准和样品溶液的制备: 以氯仿:甲醇(50:50%,体积/体积)为溶剂分别制备PC,LPC和亚油酸含量为5mg / mL的储备液,冷冻避光保存备用。 标准曲线系列浓度配制范围PC为82–816 μg/mL,LPC为30–250 μg/mL,亚油酸为55-290μg/mL。 混合标准为同浓度的PC、LPC亚油酸酸,油酸,硬脂酸,和棕榈酸。 FFA的样品是由相等浓度的油酸,亚油酸、硬脂酸和棕榈酸制备。 样品溶液是通过将0.5毫升脂质体加入氯仿:水(50:50%,体积/体积)的溶剂体系。 液相分析:梯度洗脱情况如下http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281026_525019_2204138_3.jpgA 氯仿B 氯仿:甲醇(70:30%,体积/体积)C 氯仿:甲醇:水:氢氧化铵(45:45:9.5:0.5%,体积/体积/体积/体积)流速:1.0ml/min 柱温 28度进样量20ul.ELSD条件包括:漂移管温度的40℃,增益6,雾化气体压力3.2bar. 结果与讨论: 标准的色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281027_525020_2204138_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281027_525021_2204138_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281027_525022_2204138_3.jpg 由标准色谱图得知混合游离脂肪酸的出峰时间在6.7min,PC出峰时间为12.2min,LPC出峰时间为14.7min. 脂质体HPLC-ELSD色谱图:[a
大豆磷脂是一种混合磷脂,它是由磷脂酰胆碱(卵磷脂,简称PC,高等级为PPC)、磷脂酰乙醇胺(脑磷脂,简称PE)、磷脂酰肌醇(肌醇磷脂,简称PI)、磷脂酰丝胺酸(丝胺酸磷脂,简称PS)等成分组成,其中最典型的是前三种。磷脂是人体细胞(细胞膜、核膜、质体膜)的基本成分,并对神经、生殖、激素等功有重要关系,具有很高营养价值和医用价值。现代人生活节奏紧张,磷脂营养大量流失,因此补充完整磷脂(PC、PE、PI…)对现代人而言是绝对必要。鉴于大豆磷脂类保健品是一种功能性的健康食品,虽然不是立即见效,但有著全面、长远、稳定的效果,同时又没有药物的副作用,医学家们也开始重视卵磷脂在预防疾病发生方面的积极作用。背景介绍:对于我们的项目来讲,很多原料的检验是要用到GC的。GC到位后,很多以前自己无法解决的检验项目,现在都是自己做了。六月初到货了一批大豆磷脂,就需要检验其中乙醇的溶剂残留。大豆磷脂为中国药典2010年版已经收载的药用辅料,在正文第二部分的1183-1184页上。我们的检验,就是按照这个药典标准进行的。实验步骤:对照品溶液的制备:先向25ml的容量瓶中加入适量的水,然后用微量注射器精密量取15.8μL乙醇对照品(密度按0.79g/ml计,15.8μL的乙醇的质量为12.48mg),然后用水稀释并定容至刻度。精密量取5ml置顶空瓶中,密封。供试液制备:取供试品约0.5g,精密称定,置顶空瓶中,精密加入水5ml使其分散,密封。色谱条件:月旭WEl-PEG20M气相色谱柱,30m*0.32mm*0.25μm(Cat. NO:01918-32001;Ser. NO:GC201311
哪位知道卵磷脂或二棕榈酰磷脂酰胆碱的折射率,测定粒度,但Mastersizer2000上没有相关数据。急用,谢谢!
按照GB5009.272-2016,测磷脂酰胆碱和磷脂肌醇。waters的紫外检测;默克硅胶柱;(标准上用的硅胶柱Si60,不知道有没有影响)流动相是:正己烷+异丙醇+乙酸水溶液(8+8+1);检测波长205;流速:1ml/min;柱温:30°C;进样量:10ul。标准上是30分钟内出的峰,但是我跑了60分钟还是没出峰,不知道怎么回事,有大神懂的吗,指点一下,谢谢??[img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709251137_01_2953034_3.png[/img][img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709251137_02_2953034_3.png[/img][img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709251137_03_2953034_3.png[/img]
大家好!在磷脂核磁(定量)过程中,用什么形式的去耦方式最好。我看了许多文献,有的是用宽带质子去耦,有的是反转门控去耦。相对于定量的采取哪种形式的去耦方式更好。本人在前几次核磁过程中,磷脂没有像文献中分的那么好,几个峰连在一起,这样对于磷脂的定量,是否可以采用峰高定量的方式,并且这种定量方式是否足够准确?谢谢大家!
各位大虾,有哪位有磷脂的脂肪测定的方法吗,不知道是否有磷脂脂肪测定这个项目???
请问磷脂在丙酮中是不溶的,那么有机酸对丙酮中的磷脂是否有助溶作用啊?
按照GB5009.272-2016,测磷脂酰胆碱和磷脂肌醇。waters的紫外检测;默克硅胶柱;(标准上用的硅胶柱Si60,不知道有没有影响)流动相是:正己烷+异丙醇+乙酸水溶液(8+8+1);检测波长205;流速:1ml/min;柱温:30°C;进样量:10ul。标准上是30分钟内出的峰,但是我跑了60分钟还是没出峰,不知道怎么回事,有大神懂的吗,指点一下,谢谢??[img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709250952_01_2953034_3.png[/img][img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709250952_02_2953034_3.png[/img][img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709250952_03_2953034_3.png[/img]
有没有人做过磷脂酰胆碱的测定啊?本人要检测大豆磷脂里面的磷脂酰胆碱按GB/T 21493-2008方法检测高效液相法,正相Si 60柱子,250mm*4.6mm,5μm流动相:正己烷:异丙醇:1%冰醋酸=8:8:1流速1ml/min,柱温30度,波长205但是走了两个小时对照都没有出峰因为之前很少做正相找不到问题的原因请各位前辈指点一下!万分感谢!
求助,有哪位按2010版药典检验大豆磷脂或者蛋黄卵磷脂含量的?PC、LPC给我留个言,有问题请教。谢谢
一般常见情况是pc(8:0/10:0) ,但也有其它情况比如:磷脂酰胆碱pc(8:0p/10:0)中8:0p的p是什么意思呢 在结构中有什么影响?还有pc(8:0e/10:0)这种e又代表什么么?
化妆品中卵磷脂的测定方法卵磷脂为黄色到棕色半透明蜡状物。具有吸湿性,在空气中色变深,能溶于醇、醚等,在任何pH下均以两性离子状态存在,所以具有表面活性作用。卵磷脂广泛用作化妆品的乳化剂及颜料的悬浮剂。(一)钼蓝定性法1 适用范围本方法适用于化妆品中卵磷脂的测定。2 原理(1)卵磷脂通过层析柱与无机磷和油类杂质等分离后,将卵磷脂无机化,用钼蓝法测定其中的无机磷。3 试剂3.1 硅胶(SiO2·χH2O):100目,层析用。3.2 二氨基酚溶液:称取1g2,4-二氨基酚(2,4-Diaminophenol Dihydrochloride)盐酸盐及30g亚硫酸氢钠溶于水中,并稀释至100ml,过滤,保存于暗处,可使用一周。3.3 8.3%钼酸铵溶液:称取8.3g钼酸铵溶于14ml水和6ml氨水的混合溶液中,并加水至100ml。3.4 1%氯化胆硷标准溶液:取0.1g氯化胆硷,加水至10ml。3.5 显色剂:取1ml10%氯铂酸(H2PtCl6)加25ml4%KI溶液,混匀,并加水至50ml。4 仪器层析柱:内径20mm、长110mm附有刻度的玻璃管,底部有No.1半熔玻板及活栓,并联接减压瓶及减压泵。5 分析步骤5.1 样品预处理取5g样品于水浴上加热融化,加20ml氯仿+甲苯(4+1),加温溶解。取2g硅胶于层析管中,于硅胶上复盖少量玻璃棉,用10m1石油醚淋洗柱子。待石油醚几乎全部流出时,将上述氯仿-甲苯样品溶液乘热过柱,调节活栓及减压泵,使溶液流出量保持在4~6ml/min。继续以20ml、20ml、10ml分次淋洗柱内残存油分。
大家好。本人刚接手磷脂核磁共振这方面的东西,请高手帮忙。 磷脂做核磁时,一定要加重水,或氘代氯仿进行匀场吗,不加是否可以?并且如果加的话,重水和氘代氯仿对磷脂的化学位移有不同影响吗? 前几次做的P核磁,有几个峰连在一起,是否浓度太大了?对于磷脂的核磁共振,是否浓度越高越好? 谢谢大家!
[align=center][img=,600,313]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909051428323304_8193_932_3.jpg!w690x360.jpg[/img][/align]大豆磷脂中的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺检测向来对硅胶柱的要求比较高,市面上的很多硅胶柱的分离度都达不到要求。今天为您带来月旭科技Topsil (拓谱)Silica色谱柱对大豆磷脂中的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺的测定,我们一起来看一下,月旭科技的色谱柱能不能达到要求![align=center][b]色谱条件[/b][/align]色谱柱:Topsil (拓谱)Silica,5μm, 4.6×250mm。流动相:流动相A:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺=85-15-0.45-0.05;流动相B:正己烷-异丙醇-流动相A=20-48-32;检测波长:ELSD检测器,漂移管温度72,气流速2.0L/min;柱温:40℃;流速:1.0ml/min;进样量:20μl。[b]样品溶液的配置混合对照溶液[/b]:精密称取磷脂酰乙醇胺,磷脂酰肌醇,溶血磷脂酰乙醇胺,磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰胆碱对照品各适量,加三氯甲烷-甲醇(2-1)溶解,制成每1ml中含上述对照品分别为50μg,100μg,100μg,200μg,200ug的混合溶液。样品溶液:精密称取样品15mg至50ml容量瓶,加三氯甲烷-甲醇(2-1)溶解稀释至刻度,摇匀,即得。[align=center][b][b][b]谱图和数据[/b][/b][/b][/align][align=center][b][b][b][/b][/b][/b][/align][align=center][b][b][b][b][color=#333333]1、空白溶液:[/color][/b][/b][/b][/b][/align][align=center][b][b][b][img=,600,192]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909051430465702_5953_932_3.png!w690x221.jpg[/img][/b][/b][/b][/align][b][b][b][/b][/b][/b][align=center][b][b][color=#333333][color=#333333]2、混合对照溶液:[/color][/color][/b][/b][/align][align=center][b][b][color=#333333][color=#333333][img=,600,200]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909051431457362_8213_932_3.png!w690x231.jpg[/img][/color][/color][/b][/b][/align][align=center][color=#333333][color=#333333][color=#333333][img=,600,232]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909051432144016_7862_932_3.png!w690x267.jpg[/img][/color][/color][/color][/align][align=center][color=#333333][color=#333333][color=#333333][/color][/color][/color][/align][align=center][color=#333333][color=#333333][color=#333333]3、供试品溶液:[/color][/color][/color][/align][align=center][color=#333333][color=#333333][color=#333333][img=,600,186]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909051432522704_3642_932_3.png!w690x215.jpg[/img][/color][/color][/color][/align][align=center][color=#333333][color=#333333][color=#333333][img=,600,130]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909051433090482_5351_932_3.png!w690x150.jpg[/img][/color][/color][/color][/align][color=#333333][color=#333333][color=#333333][b][/b][/color][/color][/color][align=center][color=#333333][color=#333333][color=#333333][b]结论[/b][/color][/color][/color][/align][color=#333333][color=#333333][b][b]色谱柱:[/b][color=#8e2828][b]Topsil (拓谱)Silica, 5μm, 4.6×250mm[/b][/color][b]磷脂酰乙醇胺与磷脂酰肌醇分离度(R≥1.50):[/b][color=#8e2828][b]4.07[/b][/color][b]磷脂酰肌醇与溶血磷脂酰乙醇胺分离度(R≥1.50):[/b][color=#8e2828][b]2.35[/b][/color][b]溶血磷脂酰乙醇胺与磷脂酰胆碱分离度(R≥1.50):[/b][color=#8e2828][b]29.34[/b][/color][b]溶血磷脂酰胆碱与磷脂酰胆碱分离度(R≥1.50):[/b][color=#8e2828][b]14.52[/b][/color][b]磷脂酰胆碱理论塔板数(N≥1500):[/b][color=#8e2828][b]12855[/b][/color][b]磷脂酰乙醇胺理论塔板数(N≥1500):[/b][color=#8e2828][b]10158[/b][/color][b]磷脂酰肌醇理论塔板数(N≥1500):[/b][color=#8e2828][b]7824[/b][/color][b]是否符合要求:[color=#8e2828]符合[/color]Topsil (拓谱)Silica, 5μm, 4.6×250mm色谱柱更适合检测该项目。[/b][/b][/color][/color][align=center][color=#333333][color=#333333][color=#333333][b][b]中国药典检测方法[/b][/b][/color][/color][/color][/align][align=center][color=#333333][color=#333333][color=#333333][b][b][img=,600,542]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909051433552326_8874_932_3.png!w409x370.jpg[/img][/b][/b][/color][/color][/color][/align][align=center][color=#333333][color=#333333][color=#333333][b][b][img=,600,674]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909051434131964_7694_932_3.png!w396x445.jpg[/img][/b][/b][/color][/color][/color][/align]
各位好:请问谁做过蛋黄卵磷脂含量测定?我需要含量图谱,(磷脂酰乙醇胺,磷脂酰肌醇,溶血磷脂酰乙醇胺,磷脂酰胆碱,鞘磷脂,溶血磷脂酰胆碱)共六种物质。谢谢!
各位老师好!我拟分析细胞中的磷脂组分,文献较多的提到HPLC-ELSD,可是我在武汉地区,还没有了解到可以用的检测器(武汉化工学院有一台,可是不让做正相?)我想问问大家有没有其他的办法?我尝试够TLC,但是只能检测到三种磷脂谢谢大家
[align=left][font='times new roman'][size=18px]磷脂的分离分析方法[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]近年来磷脂类物质的分离分析方法发展迅速。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HPLC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]结合质谱法([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])成为了当今脂质种类鉴定和定量最重要的技术之一。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]例如,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Siyam[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等开发并验证了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HP[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]方法分离和定量了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Visudyne[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]脂质体配方中的磷脂和相应降解产物[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]该方法能够分离结构异构体,如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PG 18:1–18:1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PG 18:0–18:2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],以及分离[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PG[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]立体异构体,例如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PG 18:1-18:1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]顺式和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PG 18:1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]18:1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]反式[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Visudyne[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的主要脂质降解产物包括溶血磷脂酰胆碱、少数饱和不饱和溶血磷脂酰甘油以及游离的脂肪酸,每种降解产物含量均小于磷脂总量的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]w/w[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sun[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等开发了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]超高压[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-四[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]极[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]杆-飞行时间质谱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]法来分析人乳、牛奶和羊奶中的磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]大[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]类和分子种类,共鉴定出[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]个磷脂类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],包含[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]229[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]种磷脂。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]赵等[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]建立了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PLC-ELSD[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]法,对水产品中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]种磷脂进行定性和定量分析,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]并对方法的回收率及精密度进行了验证。结果表明,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不同种类水产品[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]中磷脂含量丰富,但[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]其含量与组成各异[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],其中含量最高的磷脂均为磷脂酰胆碱,其次为磷脂酰乙醇胺[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]P[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]E[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],其[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]它[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]种磷脂即溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]P[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]I[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和鞘磷脂仅在部分样品中检出,且含量较少。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HPLC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分离磷脂常用的固定相[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]包括[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]二醇柱、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]C18[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]柱、氨基柱以及一些其[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]它[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]新型的固定相[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][12, 39-41][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Liu[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][42][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]设计合成了一种新型离子液体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]键合硅球[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]固定相[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PIL@SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]其制备流程如图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]所示[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。作者首先[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以三辛基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]膦[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和烯丙基溴化铵为原料,合成了磷基离子液体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]——[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]三辛基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]烯丙基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溴化[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]膦[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px][P[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]888Allyl[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]]Br[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]),[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]P[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]888[/size][/sub][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]Allyl[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]]Br[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]为可聚合单体,通过点击化学反应进一步合成了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]固定相材料[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PIL@SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px],与商品化氨基柱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]S[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]i[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]O[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]-NH[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]相比,填充[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PIL@SiO[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱对于核苷[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]核酸碱基类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、酰胺类、磺胺类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]苯胺[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]多种[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]小分子物质的分离选择性能更好。作者进一步将制备的色谱柱用于磷脂标准品的分离,结果显示可[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]同时实现磷脂类和种的分离,并[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]且[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]成功应用于大豆卵磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]胶囊[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]提取物的分离。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Liang[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等以十二醇和半胱氨酸为改性剂,设计合成了苯乙烯[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]马来酸[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]酐[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]共聚物衍生物色谱固定相[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-amino acid[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],填充[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-SMA-amino acid[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱对于亲水性和疏水性小分子物质均具有良好的分离效果,并且实现了胃癌细胞膜脂提取物中磷脂组分的分离与分析。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]李新庭等[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][44][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]制备了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-VDI[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱固定相[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]其制备过程如图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]所示。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]该固定相[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以离子液体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]—[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溴化[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙烯基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]十二烷基咪唑[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]为单体,并通过点击反应接枝[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在硅球表面[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。填充[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-VDI[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]柱可实现[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]烷基苯、多环芳烃、苯胺[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]苯衍生物[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]类疏水类小分子物质以及三种无机阴离子的分离,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]具有[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]典型的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]反相[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]离子交换混合模式保留机制,并且[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]成功[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]用于肺癌细胞和鸡蛋黄磷脂样品提取物的分离分析[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309010008081579_6357_6147260_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1 [/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']PIL@SiO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']固定相制备流程[/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig.1 Preparation process of PIL@SiO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2 [/size][/sub][/font][font='times new roman']stationary phase[/font][/align][align=center][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309010008085530_7381_6147260_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman'] S[/font][font='times new roman']il[/font][font='times new roman']-VDI[/font][font='times new roman']固定相合成示意图[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][44][/size][/sup][/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']S[/font][font='times new roman']chematic[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']demonstration[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']for[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']synthesis[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']of[/font][font='times new roman'] S[/font][font='times new roman']il[/font][font='times new roman']-VID [/font][font='times new roman']stationary[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']phase[/font][/align]
最近在做磷脂复合物,查了许多文献,大部分都是用氯仿溶解计算复合率,想问一下计算复合率,洗脱溶剂只能氯仿吗可以用别的吗,选择的要求是什么,还有如果用液相检测磷脂复合物药物的含量,需要用什么溶剂将它溶解,才能保证测的是磷脂复合物中药物含量,麻烦帮助解答一下,谢谢
大豆磷脂、卵磷脂有检验含量的?我们这边做PC的含量高于100%,可能是什么原因?求教
那位测过植物组织中的磷脂含量,用什么方法?我查到有用三氯醋酸沉淀法的,但在期刊网和实验指导书中都没查到,请知道的告诉一下,谢谢!!!
我做实验要测 肺表面活性物质(主要成分是磷脂酰胆碱)含量,我看文献用的有:YWG SIO2(4mm*300mm),Lichrospher5-SIO2 (4.6mm*250mm)。不知道有没有了解 磷脂酰胆碱(卵磷脂)检测过程的 老大, 抽时间给指教指教应该选 什么型号柱子和配套的滤过膜 ,非常感谢!!要毕业做实验刚接触高效液相色谱法,对设备和技术都不了解,别笑话我啊!
现在要弄磷脂,想问一下有没有适合分析磷脂用的色谱柱?