大家有没有做过毛细管液相的?毛细管液相色谱柱150*0.5 mm,色谱柱太细会不会影响物质的分离?探讨一下!
毛细管电泳是一个新的研究课题,通过毛细管为分离柱,用电色谱的方法进行分离分析,价格低廉。但是液相色谱法是当今社会色谱分析的基本方法。希望大家积极讨论,毛细管电泳替代液相色谱的可能性又多大?毛细管电泳的发展方向是什么?
现在我想做液相毛细管整体柱但是,毛细管如何连接到液相色谱仪上呢?
毛细管电泳是毛细管色谱吗?它和高效液相色谱在功能上有什么区别?(问个外行问题)
毛细管核磁探头与液相色谱连用应注意什么?
毛细管电泳有可能会取代高效液相色谱吗?
毛细管电泳与液相色谱在分离方面有哪些异同?
提高分离能力和改进分离的选择性一直是分离科学中具有挑战性的研究工作,而高效液相色谱和高效毛细管电泳则是分离科学中最重要的两个工具。高效液相色谱由于具有较高的分离能力和很好的重现性,已成为生命科学、药物科学等领域不可缺少的分析手段。但是,近十年来,高效毛细管电泳以其分离效率高、分析速度快、所需样品少以及消耗低等优势,展示了其在分析领域中巨大的应用潜力,已成为高效液相色谱的有力补充和竞争对手。 本论文即选择高效毛细管电泳和高效液相色谱这两种旨在提高分离能力的工具,对中草药山豆根中的有效成分和乌拉尔甘草叶中的营养物质进行了优化分离。此外,将高效液相色谱也成功地应用于敦煌壁画的颜料分析。 本论文共由以下五章组成: 第一章 对高效毛细管电泳的理论、技术以及在中草药分析方面的最新应用进行了综述,共引用了142篇参考文献。 第二章以0.04M含50%甲醇的柠檬酸(PH=4.5)作为缓冲溶液,在电压为25kV、检测波长为208nm的条件下,用毛细管区带电泳(CZE)方式对山豆根中的有效成分进行了分离实验。在这种优化的条件下,其时间和峰面积的精密度分别为1.39%-2.14...[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=31318]毛细管电泳和高效液相色谱在中药分析中的应用[/url]
[color=#DC143C]区别一:驱动力不一同,柱内流型不同。[/color]高效液相色谱是以高压为驱动,依据和组分在两相中的分配比例不同,进而达到分离的目的,正事因为是高压为驱动力,致使柱子内流体是以抛物线形式向前移动的,如图1所示。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/01/201001081633_195282_1631848_3.jpg[/img]图1 高效液相色谱柱内流型图高效毛细管电泳是以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。在毛细管内液体流行时塞型,如图2所示。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/01/201001081639_195289_1631848_3.jpg[/img]图2 高效毛细管电泳柱内流型图图1和2给出了在电驱动和压力驱动情况下的流型。图中可以看出,在电渗流驱动下,整个流型呈塞子型平推流;在压力驱动下,整个流型则为抛物线型分布。也正是因为高效液相色谱和毛细管区带电泳柱内的液体流型不同,致使高效液相色谱的图谱比电泳的图谱的色谱带要宽。高效液相色谱通常为如图3所示的图谱谱带,而电泳通常为如图4所示的色谱图谱带,可以清晰的看出,液相色谱的色谱图谱带药比电泳的宽许多,这也是电泳分离效率高的原因之一。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/01/201001092124_195451_1631848_3.jpg[/img]图3 液相色谱图[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/01/201001092124_195452_1631848_3.jpg[/img]图4高效毛细管电泳谱图[color=#6495ED][color=#FFF8DC][color=#DC143C][size=1]区别二:分离原理不同,致使分离物质不同。[/size][/color][/color][/color]高效液相色谱适合分离沸点高的大分子物质,各物质在柱内随着流动相运动,而各物质和固定性之间的作用力不同,也就是说各组分在流动相和固定相之间的分配比不同,进而达到分离的目的。而毛细管区带的电泳不能分离在缓冲溶液中的中性分子,只能分离在缓冲溶液中带点的物质如图5所示。这是因为电泳柱子内壁形成了双电层,致使电泳柱子内壁带有负电荷,可以吸附阳离子,在电场力的作用下,阳离子整体向阴极移动,形成了电渗流,从而使各物质之间分离开来。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/01/201001081640_195290_1631848_3.jpg[/img]图5电泳分离带点物质的原理图以上介绍了高效液相色谱和高效毛细管的电泳之间的几点区别,只要从原理上分析了液相和电泳分离化合物之间的区别,同事介绍了液相色谱图和电泳色谱图的谱带情况,希望对各位版友能有所帮助,同时也希望大家能提出自己的宝贵意见,供大家一同交流,一同学习,一同进步!
本人以前接触的液相色谱多一点,对毛细管电泳了解甚少,恳请指点![em09511]
毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE):以高压电场为驱动力,以电解质为电泳介质,以毛细管为分离通道,样品组分依据淌度和分配行为的差异而实现分离的色谱方法。它有多种分离模式,可以采用液相色谱中的各种检测方法。CE既可以分离带电荷的溶质,也可以通过毛细管胶束电动色谱等分离模式分析中性溶质,CE的高分离效率、高检测灵敏度,样品用量极少等特点使它在生物医药样品的分析中显示出突出的优越性。 毛细管电色谱(capillary electrochromatography, CEC):毛细管电色谱结合了毛细管电泳的高柱效和高效液相色谱的高选择性,已成为近年来色谱领域研究的热点之一。是以电渗流(或电渗流结合高压输液泵)为流动相驱动力的微柱色谱法。CEC是液相色谱与毛细管电泳相结合的产物,它的分离机理包含有电泳迁移和色谱固定相的保留机理,一般而言,溶质与固定相间的相互作用对分离起主导作用。所用色谱柱为填充了HPLC填料的填充型毛细管柱和管内壁涂渍了固定相功能分子的开管毛细管柱。CEC还处在发展阶段,主要应用在药物、手性化合物和多环芳烃的分离分析。另外CEC与质谱联用既可解决LC/MS的分离效率不高的问题,又可克服CE/MS中质量流量太小的缺陷。
[color=#444444]如题,我用的安捷伦液相色谱型号是1260,手动进样器到排气阀连接的毛细管线用的时间久了有些漏液,我用了一根岛津的配件换了一下,不漏液了,但是换之后的管线比原来的粗一些,不知道对将来的样品分析是否会造成影响?[/color]
毛细管电色谱及其应用 毛细管电色谱 ( Capillary Electrochromatography,简称CEC ) 是毛细管电泳和液相色谱的融合技术,它是在毛细管中填充或在毛细管壁涂布、键合色谱固定相,依靠电渗流(EOF)推动流动相,使样品分子根据它们在色谱固定相和流动相之间吸附、分配平衡常数的不同和电泳速率不同而达到分离分析的一种电分离模式。由于毛细管电色谱是采用电渗流来推动流动相,不仅克服了高效液相色谱中压力流本身流速不均匀引起的峰扩展,而且柱内无压降,使得峰扩展只与溶质扩散系数有关,因而使毛细管电色谱的理论塔板数远远高于高效液相色谱。同时由于引入了高效液相色谱的固定相,使毛细管电色谱具备了高效液相色谱固定相所具有的选择性,使它不仅能分离带电物质,也能分离中性化合物。用毛细管电色谱进行手性分离时,既能避免高效毛细管电泳操作中频繁更换手性选择剂的缺陷,又能达到高效率及降低操作费用。毛细管电色谱是微柱分离分析技术,很容易实现与其他分析技术如质谱、核磁共振等的联用。......下载链接:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/155610.shtml
气相色谱和液相色谱、离子色谱、毛细管电泳在分离原理和分离效果上有什么区别与联系?
开管毛细管电色谱进展毛细管电色谱(capillary electrochromatography, 简称CEC)是近年发展起来的一种高效、 快速的新型微柱分离方法。它在毛细管柱内填充液相色谱固定相或在柱壁键合固定相, 以电渗流驱动流动相, 溶质根据它们在固定相和流动相之间分配及其电泳淌度的不同而得以分离的一种电分离模式 。CEC以具有塞子流型的电渗流代替了具有抛物线流型的压力流, 因而具有毛细管区带电泳(CZE)的高效性。 CEC采用液相色谱的固定相和流动相, 因而还具有高效液相色谱(HPLC)的高选择性。 由此可见, CEC既克服了CZE选择性差和分离中性化合物困难的弱点,又克服了胶束电动色谱 (MEKC)的胶束选择有限的缺点, 因此, 从1974年Pretorious等第一次实现CEC分离以来,CEC已受到越来越广泛的关注,尤其是进入90年代以后,这一领域的论文呈指数增长 ,并于1997年8月在美国California召开了第一届毛细管电色谱会议。
其他讲座资料看[url=http://www.instrument.com.cn/bbs/detail.asp/threadid/1679222/forumid/25/year/2009/query/search] 学习[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]跟yuen72老师入门[/url]液相固定相主要有聚硅氧烷类、聚乙二醇类等。聚硅氧烷类是通过在聚甲基硅氧烷上引入不同的基团,得到了不同极性和特点的各种色谱柱。带ms的商业毛细管柱,如HP-5ms,意味着键合交联型毛细管柱,具有低流失长寿命的特点。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903012305_136087_1641581_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903012306_136090_1641581_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903012307_136091_1641581_3.jpg[/img]
毛细管电色谱是结合了毛细管电泳和高效液相的优点,所以发展非常迅速,大家说说制备毛细管电色谱柱子的方法都有哪些,优点和缺点格式什么!
毛细管[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]简单知识 一、毛细管柱与填充柱的区别 与填充柱相比,毛细管柱的特点为: 1.分离效能高 2.分析速度快 3.样品用量少 可在几十分钟内分离出包含几百种化合物的汽油馏分,然而样品用量仅有数微克 在快速分析方面,可在几秒钟内分离含十几个组份的样品。 其独特的特点在于: 渗透性大,分析速度快 传质阻力小,可用长柱,并得高的总柱效。 色谱动力学认为:填充柱可看作是一束长毛细管的组合,其内径约等于粒子粒度,因其弯曲,多径扩散严重,故理论板数少。 毛细管柱完全没有这些缺陷,故理论板数可高大106数量级。 用毛细管柱,有利于: 提高色谱分离能力, 加快色谱分析速度, 促进色谱的应用都是十分必要的: 二、毛细管色谱法的相关理论 在毛细管柱,柱内只有一个流路,故多径项2ldp为0,弯曲因子g=1,且用其液膜厚代替了填充柱中载体的颗粒直径dp。 2.毛细管柱的最小理论板高 毛细管柱的H—U图也是一个双曲线,在U值是最佳值时,H值最小。 式中Cg、C1的大小取决于分配系数及柱的几何性(以相比β为代表),但一般毛细管柱液膜薄,β值较大,液相传质阻力C1项不起控制作用。 当被测物质的k﹥10时,如果每米理论板数大于1000/d时,则所用柱子的性能较好 表中为K值很大时最好柱效(每米板数)值,其值由H/L = 1000 / d 一般认为直径在0.1—0.7mm较好 小于0.1mm,入口压力增加,柱负荷减少 大于0.7mm,虽柱负荷增大,但柱效下降 目前流行0.53mm的大口径管,不必分流。 3.载气线速 从速率方程可知,最小板高时的最佳线速为: 如果Cl很小,则有: 可见,细管径,轻载气更适合于快速分析。 4.样品容量 一根色谱柱的最大允许进样量,约为一块理论板的有效体积。 可见最大允许进样量与柱半径、柱长、分配比成正比,与塔板数成反比 比较填充柱和毛细管柱的柱容量 一根长20米,内径为0.25毫米的毛细管柱,一般可涂上6 mg的固定液,柱内体积 而一根长两米,内径3毫米的不锈钢填充柱,柱内体积 按12:100的液载比,可涂上800mg固定液。 可见,一根2米长的填充柱中固定液的含量是一根20米长毛细管柱中固定液含量约150倍,故允许进样量也在一百倍以上。 5、柱效能 毛细管柱每米塔片数通常在2000-5000之间,长20米的毛细管柱总柱效为4万至10万。 填充柱每米塔片数在1000-1500之间,长2米的填充柱的柱效为2000-3000 所以毛细管柱的总柱效可以比填充柱高10-100倍。 根据上式,分离度正比于总塔片数N。即 毛细管柱色谱总效高,其分离效能也高。 如果柱效高,K值也大是最理想的,目前流行大孔厚膜毛细管柱可望具有这两重性质。 6、分析时间 根据公式,样品的保留时间正比于柱长,在以氮为载气时,毛细管柱的线速可达16厘米/秒,而填充柱在4厘米/秒 毛细管柱可采用很高的载气线速来缩短保留时间。且毛细管柱的K值比填充柱小,因此保留时间小。 故:毛细管柱上可实现快速分析。 三、毛细管柱的色谱系统 与填充柱系统基本一样。 因毛细管柱内径细,柱容量小,出峰快、峰形窄,因此对色谱仪本身(如进样系统、检测器、记录器等)有些特殊的要求。 1、进样系统 毛细管柱进样量必须极小(一般液样10—2~10—3微升,气样约1微升)。 要引进如此微量样品,可采用分流法进样。即在气化室出口分两路,绝大部分放空,极小部分进柱子,这两部分比例叫分流比。分流法又分为动态法和静态法两种。 对分流器的要求 为使分流后的样品不改变组成: 1、分流后样品混合物中各峰的相对大小应与未分流的严格一致。 2、分析不同浓度的混合物时,峰面积必须正比于浓度。 3、当柱温、分流比、流速改变时各色谱峰的相对大小要保持恒定。 A.动态分流法 是目前毛细管柱进样系统最常用的分流方法,不同仪器上的分流有不同的形式。 对分流器设计要求: 整个分流器要保持在气化室的温度下,防止样品冷凝; 分流前要有一定的混合体积,使试样、载气完全混匀, 放空管体积至少要等于样品气化后的体积加载气体积。 A为气化样品与载气混合部分,B为分流点, C为喷嘴 ,引起放空部分与进入部分在分流过程中进一步混合,确保宽沸程样品分流后不失真。然后通过放空阀调节分流比。这种分流器只是在进样时才打开开关阀,几秒钟后就关闭大部分载气,而留下一点出气,防止试样反扩散进柱中。 简易分流器 在一般填充柱气化室出口,并排插入两根同内径不同长度的不锈钢毛细管,垫上硅橡胶构成,其长度比即分流比。 注意 在分流前要有一段混合体积,内装硅烷化玻璃球,可保证分流后组成不失真。 2、尾吹 毛细管柱内流动相流速低,流量小,组分会因柱后死体积突然增加而发生严重的纵向扩散,从而导致峰形展宽,有可能使在柱中以分离的组分在柱后再次重叠,影响分离。 也可在使用FID时受阻于引入的H2压力而出柱困难。 增加尾吹气将改善这一状况。 3、检测器 因流速低,且内径细,只能分析小量样品,约10―5~10-6克,有的组份如占1.0%,则相当于10―7~10-8克,要求高灵敏度检测器。 快速分析时因峰宽只有几秒或少于1秒,要求检测器、记录器响应时间快,则检测器和记录器的时间常数,应少于最早峰峰宽的流出时间的1/20。 适用的检测器有: 高灵敏度的离子化检测器,常用FID。(灵敏度高,死体积趋近于零,响应时间快等。) 也可用氩离子化和电子捕获检测器,此时需在毛细管出口外加吹洗气以降低检测器死体积。 也可应用特制的微型热丝检测器,微型热敏电阻检测器,但因其属于非商品化检测器,使用频率不高。 4、记录系统 因毛细管色谱峰很窄,应配备快速记录系统。 曾经用示波仪或电流计型记录器记录,其满刻度笔速0.1秒。 目前的各种色谱数据处理机和色谱工站已完全能满足记录系统的要求。 5、 毛细管柱的种类 经典的毛细管柱为壁涂开管柱(WCOT——Wall Coated Open Tubular Column)。因其制备难、柱子的重复性差、内表面小、涂渍量小和β值大,将导致有效塔板数和实际分离能力不高,且热稳定性也较差,故已几无人使用。其他的几种柱子及其性能如下。 多孔层壁涂柱(PLOT——Porous Layer Open Tubular Column):先涂上吸附剂或惰性固体于柱壁,再涂渍固定液。 载体壁涂柱(SCOT——Support Coated Open Tubular Column):把载体和固定液同时涂于壁上制备而成。 必须注意,以上两种柱子中的载体只是涂布于毛细管柱的壁上,而非充满整根柱子。 熔融石英毛细管柱(FSOT——Fused Silica Open Tubular Column) :其表面惰性度好,能耐高温,最主要的是有弹性,不易折断。 交联毛细管柱(CLOT——Cross-Linked Open Tubular Column):涂好固定液后再用偶联剂交联键合,柱子性能有很大改善,能耐高温,抗水、抗溶剂。 大口径毛细管柱:一般口径在0.53毫米,液膜厚度为0.88~2.65微米,负载大,可不经分流而直接进样分析。 微型填充柱(Micro-packed Column):制备过程和填充柱基本相似,知识所填的载体粒度很小。微填充柱宽有很高的柱效,最低板高可达0.2~0.3毫米
自制的毛细管柱怎么通过纳升液相分离样品获得到毛细管柱内流速?实验室的纳升液相是会先分流的,所以不能直接用仪器显示的分流前流速计算柱效。这是我们的仪器型号(纳升高效液相色谱系统:岛津纳流泵(LC-10A),纳升流)
[b]毛细管色谱柱固定液的涂渍方法[/b](1)壁开管柱(wall coated open tubular, WOCT)将固定液直接涂在毛细管内壁上,这是戈雷最早提出的毛细管柱。由于管壁的表面光滑,润湿性差,对表面接触角大的固定液,直接涂渍制柱,重现性差,柱寿命短,现在的WCOT柱,其内壁通常都先经过表面处理,以增加表面的润湿性,减小表面接触角,在涂固定液。(2)多孔层开口柱(porous layer open tubular, PLOT)在管壁上涂一层多孔性吸附剂固体微利,不再涂固定液,实际上是使用开管柱的气固色谱。(3)载体涂渍开管柱(support coated open tubular, SCOT)为了增大开管柱内固定液的涂渍量,现在毛细管内壁涂上一层很细的(<2μm)多孔颗粒,然后在多孔层上涂渍固定液,这种毛细管柱,液膜较厚,因此柱容量较WCOT柱高。(4)化学键合相毛细管柱 将固定相用化学键合的方法键合到硅胶涂敷的柱表面和径表面处理的毛细管内壁上。经过化学键合,大大提高了柱的热稳定性。(5)交联毛细管柱 由交联引发剂将固定相交联到毛细管管壁上。这类柱子具有耐高温、抗溶剂抽提、液膜稳定、柱效高、柱寿命长等特点,因此得到迅速发展。
毛细管电色谱用于手性药物分离的研究魏霞蔚(浙江大学药学院 杭州 310058)摘要:毛细管电色谱(CEC)是一种新型的微分离技术,结合了高效液相色谱(HPLC)和高效毛细管电泳(HPCE)两者的优势。本文主要以色谱柱的类型对CEC分类,一方面介绍了为了使手性药物更好地分离,人们在各类毛细管电色谱柱的优化中所做的一些工作;另一方面,对近几年开管柱-CEC、填充柱-CEC和整体柱-CEC在手性药物分离中的具体应用实例进行了总结。关键字:毛细管电色谱 对映体 手性拆分 药物分析下载链接:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/155613.shtml
今天看到一个网络课堂,讲毛细管离子色谱。很好奇这是神马神器,于是搜了一下,了解了一下大概。有篇中文文献说,“离子色谱( IC) 是一种分离分析无机阴阳离子以及可电离小分子物质的重要分析技术。近年来,仪器微型化的研究热潮也将微型化离子色谱或者毛细管离子色谱推向研究领域的前沿,其具有样品和淋洗液消耗少、环境友好、质量灵敏度高、易与质谱( MS) 、原子发射光谱( ICP) 联用等优势。”(见附件)又看了一下网络课堂的内容简介,说:“与毛细管液相色谱相似”。好吧,我觉得我们应该这样理解:这个神器是“毛细管型离子色谱”,与电泳一毛钱关系都没有。也就是说,不会有高压,不会有阴阳两极,只是把离子色谱的那个很粗的柱子换成了毛细管而已。可能了解得不全面,看看大家有啥意见。另外,有兴趣大家可以去听一下这个讲座:http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/915
在做毛细管电泳手性药物拆分的时候,电泳谱带总是很宽,很像液相色谱图,有什么好办法,谢了!
整体柱在毛细管电色谱中的应用 毛细管电色谱(CEC)是近年来建立在电泳技术不断发展和液相色谱理论日趋完善的基础上,利用电渗流或电渗流结合压力来推动流动相移动的微分离法。由于它结合了毛细管电泳及高效液相两种分离机制,因而具有快速,高效,使用范围广等特点,不管是中性物质还是带电物质都可以达到理想的分离效果。 CEC的毛细管柱主要有3种类型:填充柱、开管柱和整体柱。填充柱是发展最快使用最多的一类,95%的据报道都是使用填充柱进行分析,灵敏度高,重现性好。但填充柱需要在柱尾制作塞子,由此带来柱塞效应,引入了非均匀性因子引起气泡的产生,进而使谱带展宽。同时,塞子的制备具有一定的难度,条件控制不好将影响填充的均匀性,孔隙若太大流动相渗出,太小则易被污染甚至被样品中的“脏物”阻塞。开管柱虽没有塞子问题,固定相均匀,可使用较高的电压,但相比小,柱容量低,检测困难。整体柱不需要封口,避免了塞子制作的困难以及产生的气泡问题,且具有更好的多孔性和渗透性,即具有流动相的流通孔又有便于溶质进行传质的中孔,利于实现生物大分子的快速分离。 溶胶-凝胶技术是指溶胶的凝胶化过程,光聚合法制备溶胶凝胶整体柱有许多优点,如可控制孔径,柱渗透性好,低温制备避免柱体变形,柱效高等。光聚合整体柱的进一步修饰,对于生物大分子而言具有更强的分析能力。Kato等采用两种方法修饰光聚合溶胶-凝胶整体柱,分离氨基酸混合物。一是与二甲基十八烷基氯硅烷反应,二是与二甲基十八烷基氯硅烷反应后,用氯三甲基硅烷进行封端反应。为提高检测灵敏度,将氨基酸衍生化,4-氟-7-硝基-2,1,3苯并二唑为荧光试剂。用第二种方法修饰的封端整体柱在流动相为 50 mmol·L-1醋酸铵(pH2.5)-水-乙腈(1:1:8)条件下,天冬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸在7 min内得到了很好的分离,柱效在每米58000~105000,亮氨酸与异亮氨酸具有相同的相对分子质量,在此条件下也得到了很好的分离。而使用未封端的整体柱由于吸附氨基酸,柱效比封端柱低 50%~67%。 微型化是未来分析仪器的发展方向,由于微芯片具有分析速度快,携带方便等优点越来越受到人们的关注,学者们已开始将整体柱制备技术应用于微芯片中。Daniel等将丙烯酸酯有机整体柱通过光聚合作用蚀刻到微芯片通道中作为固定相分离肽和氨基酸。整体柱技术与微芯片技术的结合将为生物大分子的分离分析带来极大的便利。
请问液相柱有毛细管柱吗,谢谢
近来看到有不少提问有关[url=javascript: ][u][b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url][/b][/u][/url]毛细管[url=javascript: ][u][b]色谱柱[/b][/u][/url]的问题。根据一些文献和多年的使用经验,对毛细管柱的性质和使用进行了一个归纳总结。希望能对刚刚接触这一工作的初学者有一点点帮助。[b][size=3]1 简介[/size][/b] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]毛细管柱因其高分离能力、高灵敏度、高分析速度等独特优点而得到迅速发展。随着弹性石英交联毛细管柱技术的日益成熟和性能的不断完善,已成为分离复杂多组分混合物、及多项目分析的主要手段,在各领域应用中大有取代填充柱的趋势。现在新型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联用仪基本上都是采用毛细管色谱柱进行分离分析。但是,毛细管色谱柱柱内径较小,固定液的膜薄,用于[url=javascript: ][u][b]食品[/b][/u][/url]中残留物分析时,若使用不当,色谱柱性能很快就会下降。本文旨在向初次接触[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]毛细管柱的操作者介绍不同类型的毛细管色谱柱的性质、选择、使用方法及注意事项等。 毛细管柱只能安装在配有专用毛细管柱连接装置的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]上。现在购买[url=javascript: ][u][b]仪器[/b][/u][/url]时最常规的配置是配毛细管分流/不分流进样口。[b][size=3]2 毛细管色谱柱的类型[/size][/b] 毛细管色谱柱的类型有很多种,但目前最常用和商品化的,是[color=#0000ff]开口熔融石英交联毛细管色谱柱[/color]。本文仅介绍此类毛细管色谱柱的性能特点。[b]2.1 熔融石英毛细管柱 2.1.1 熔融石英毛细管柱材料[/b]现在市售商品化的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]用毛细管柱几乎都是由熔融石英制作的,简称石英毛细管柱。制作毛细管柱用的石英纯度非常高,几乎无其它杂质。它具有熔点高(近2000℃)、热膨胀系数低、[url=javascript: ][u][b]化学[/b][/u][/url]稳定性好和抗张强度高等特点,是制备毛细管柱的理想材料。毛细管柱内壁存在有许多具有吸附活性的基团,这些基团的存在直接影响固定相涂渍效果,所以,在涂渍固定相之前,柱表面必须经过适当预处理,以期得到较高的柱效和对称的色谱图形。[b] 2.1.2 石英毛细管柱的聚酰亚胺外涂层[/b]石英毛细管柱很脆,只有在毛细管柱外涂一层聚酰亚胺保护材料后才具有很好的弹性,在使用这样的色谱柱时应十分小心,[color=#0000ff]避免将聚酰亚胺涂层损坏[/color],导致毛细管柱易折断。通常商品毛细管柱出厂时都固定在一个金属丝制作的柱架上,柱架的直径与毛细管柱的直径成正比,即:毛细管柱的直径越大,固定架的直径也就越大。对于[color=#0000ff]0.53mm内径的毛细管柱[/color],过度弯曲很容易折断,使用安装时要格外小心。石英毛细管柱外涂层还有采用镀铝膜的,这类柱子适用于高温分析。但日常分析工作中使用较少,这里不作详细介绍。[b]2.2 液体固定相[/b]将固定相均匀涂渍在毛细管柱的内壁,制成[color=#0000ff]壁涂型[/color]毛细管柱,这类毛细管柱属[color=#0000ff]非交联型[/color]毛细管柱。现在只有少部分的非交联固定相的毛细管柱在使用。非交联毛细管柱的固定相容易流失,不能清洗,因此使用寿命较短,但制作成本较低,涂渍相对较容易,往往在[color=#0000ff]毛细管柱研制前期[/color]过程中采用此方法。在使用这类毛细管色谱柱时,应注意使用温度不要超过液体固定相的最高使用温度。建议[color=#0000ff]不要在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联用仪上使用。[/color][b]2.3 交联固定相[/b]现在市售的商品毛细管色谱柱基本上均采用交联技术,将固定相与石英表面结合起来,在毛细管柱表面形成一层不溶的类似橡胶的非常稳固的涂层。被交联的固定相与涂渍的固定相相比,流失低,抗[url=javascript: ][u][b]污染[/b][/u][/url],热稳定性好,使用寿命长。如果交联固定相色谱柱被污染,可以用适合溶剂来清洗(见第5节)而基本不会对涂层造成损伤。而且此类[url=javascript: ][u][b]毛细柱[/b][/u][/url]在色谱分析时可以通过柱上进样和不分流进样模式实现大体积进样,最多可注入50~250μL液体溶剂。当然,这需要仪器上配有相应的装置。[b]2.4 最高操作温度[/b]可以通过不同的方法来确定一个特定的毛细管柱的最高操作温度。作为商品化的交联固定相毛细管色谱柱,[color=#0000ff]使用时应注意不要超过说明书或标识牌上规定的最高温度[/color]。如超过规定的最高温度,特别是恒定持续的超高温操作,会造成毛细管色谱柱不可逆的损伤,轻则使柱效下降、使用寿命减少,重则使毛细管柱损坏。对于相同型号毛细管色谱柱而言,固定相涂层薄的比涂层厚的允许使用的最高温度可以稍高一些。[b]2.5 最低操作温度[/b]色谱柱[color=#0000ff]操作温度的低限[/color]是由固定相从液体变为固体的温度所决定的。如果色谱柱在其最低温度以下工作,就可能出现峰展宽并且有些被测物难于分开。表1中列出各种不同固定相和膜厚的色谱柱推荐使用温度。表中给出的温度值可作为参考值。[align=left][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/06/201006212137_226183_1643329_3.jpg[/img][color=#0000ff]注:[/color]前面为等温操作最高温度,后面为程序升温操作最高温度。色谱柱的操作温度应以公司产品说明书规定为准,表中的值仅供参考。[/align]
整体柱在毛细管电色谱中的应用 毛细管电色谱(CEC)是近年来建立在电泳技术不断发展和液相色谱理论日趋完善的基础上,利用电渗流或电渗流结合压力来推动流动相移动的微分离法。由于它结合了毛细管电泳及高效液相两种分离机制,因而具有快速,高效,使用范围广等特点,不管是中性物质还是带电物质都可以达到理想的分离效果。 CEC的毛细管柱主要有3种类型:填充柱、开管柱和整体柱。填充柱是发展最快使用最多的一类,95%的据报道都是使用填充柱进行分析,灵敏度高,重现性好。但填充柱需要在柱尾制作塞子,由此带来柱塞效应,引入了非均匀性因子引起气泡的产生,进而使谱带展宽。同时,塞子的制备具有一定的难度,条件控制不好将影响填充的均匀性,孔隙若太大流动相渗出,太小则易被污染甚至被样品中的“脏物”阻塞。开管柱虽没有塞子问题,固定相均匀,可使用较高的电压,但相比小,柱容量低,检测困难。整体柱不需要封口,避免了塞子制作的困难以及产生的气泡问题,且具有更好的多孔性和渗透性,即具有流动相的流通孔又有便于溶质进行传质的中孔,利于实现生物大分子的快速分离。 溶胶-凝胶技术是指溶胶的凝胶化过程,光聚合法制备溶胶凝胶整体柱有许多优点,如可控制孔径,柱渗透性好,低温制备避免柱体变形,柱效高等。光聚合整体柱的进一步修饰,对于生物大分子而言具有更强的分析能力。Kato等采用两种方法修饰光聚合溶胶-凝胶整体柱,分离氨基酸混合物。一是与二甲基十八烷基氯硅烷反应,二是与二甲基十八烷基氯硅烷反应后,用氯三甲基硅烷进行封端反应。为提高检测灵敏度,将氨基酸衍生化,4-氟-7-硝基-2,1,3苯并二唑为荧光试剂。用第二种方法修饰的封端整体柱在流动相为 50 mmol·L-1醋酸铵(pH2.5)-水-乙腈(1:1:8)条件下,天冬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸在7 min内得到了很好的分离,柱效在每米58000~105000,亮氨酸与异亮氨酸具有相同的相对分子质量,在此条件下也得到了很好的分离。而使用未封端的整体柱由于吸附氨基酸,柱效比封端柱低 50%~67%。 微型化是未来分析仪器的发展方向,由于微芯片具有分析速度快,携带方便等优点越来越受到人们的关注,学者们已开始将整体柱制备技术应用于微芯片中。Daniel等将丙烯酸酯有机整体柱通过光聚合作用蚀刻到微芯片通道中作为固定相分离肽和氨基酸。整体柱技术与微芯片技术的结合将为生物大分子的分离分析带来极大的便利。
最早的毛细管柱亦称空心柱,是一种又细又长,形同毛细管的开放式管柱,固定液涂在毛细管内壁上。(柱长:5-100m,内经:0.1-0.7mm) 一.毛细管柱的类1. 涂壁空心柱 (wall-coated open tublar column,WCOT柱) 固定液直接涂在毛细管内壁上,最早的毛细管柱。2. 多孔层柱(porous-layer open tublar column,PLOT柱) 吸附型多孔层柱:在管壁上涂一层多孔材料,如分子筛、氧化铝、熔融石英及高分子多孔微球等。分配型多孔层柱:将普通的载体沉于表面,在涂布合适的固定液二.毛细管柱[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url] 与普通色谱仪的不同处: 气路系统:加一尾吹装置——减少柱后死体积,改善柱效; 进样系统:进样量的准确性(分流、不分流、冷柱头等)。 三. 毛细管柱的优缺点1. 总柱效高 毛细管柱内径一般为 0.1~0.7mm, 内壁固定液膜极薄 , 中心是空的 , 因阻力很小 , 而且涡流扩散项不存在 , 谱带展宽变小 .由于毛细管柱的阻力很小 , 长可为填充柱的几十倍 , 其总柱效比填充柱高得多 . 2. 分析速度快 毛细管柱的相比约为填充柱的数十倍。由于液膜极薄 , 分配比 k 很小,相比大,组分在固定相中的传质速度极快 , 因此有利于提高柱效和分析速度。它可在1小时内分离出包含一百多种化合物的汽油成分;可在几分钟内分离十几个化合物。3. 柱容量小 毛细管柱的相比高 , k 必然很小 , 因此使最大允许进样量受到限制 , 对单个组分而言 , 约 0.5ug 就达到极限 .为将极微量样品导人毛细管柱 , 一般需采用分流进样法。此法就是将均匀挥发的样品进行不等量的分流 , 只让极小部分样品 ( 约几十分之一或几百分之一 ) 进入柱内。进入柱内的样品量占注射样品量的比例 称为“分流比 ”。
液相柱子前面一般会接已小段保护柱。那么毛细管色谱柱呢?请问您用过毛细管色谱柱的保护柱吗?还是每次切已小段柱子来消除污染?
3的情况下,其内表面带负电,与缓冲液接触时形成双电层,在高压电场作用下,形成双电层一侧的缓冲液由于带正电而向负极方向移动,从而形成电渗流。同时,在缓冲溶液中,带电粒子在电场作用下,以各自不同速度向其所带电荷极性相反方向移动,形成电泳。带电粒子在毛细管缓冲液中的迁移速度等于电泳和电渗流的矢量和。各种粒子由于所带电荷多少、质量、体积以及形状不同等因素引起迁移速度不同而实现分离。 目前,毛细管电泳的分离模式有以下几种。 (1)毛细管区带电泳,用以分析带电溶质。为了降低电渗流和吸附现象,可将毛细管内壁涂层。 (2)毛细管凝胶电泳,在毛细管中装入单体,引发聚合形成凝胶,主要用于测定蛋白质、DNA等大分子化合物。另有将聚合物溶液等具有筛分作用的物质,如葡聚糖、聚环氧乙烷,装人毛细管中进行分析,称毛细管无胶筛分电泳,故有时将此种模式总称为毛细管筛分电泳,下分为凝胶和无胶筛分两类。 (3)胶束电动毛细管色谱,在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷基硫酸钠,形成胶束,被分离物质在水相和胶束相(准固定相)之间发生分配并随电渗流在毛细管内迁移,达到分离。本模式能用于中性物质的分离。 (4)亲和毛细管电泳,在毛细管内壁涂布或在凝胶中加入亲和配基,以亲和力的不同达到分离目的。 (5)毛细管电色谱,是将HPLC的固定相填充到毛细管中或在毛细管内壁涂布固定相,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程,此模式兼具电泳和液相色谱的分离机制。 (6)毛细管等电聚焦电泳,是通过内壁涂层使电渗流减到最小,再将样品和两性电解质混合进样,两个电极槽中分别为酸和碱,加高电压后,在毛细管内建立了pH梯度,溶质在毛细管中迁移至各自的等电点,形成明显区带,聚焦后用压力或改变检测器末端电极槽储液的pH值使溶质通过检测器。 (7)毛细管等速电泳,采用先导电解质和后继电解质,使溶质按其电泳倘度不同得以分离。 以上各模式以(1)、(2)、(3)种应用较多。 电极槽和毛细管内的溶液为缓冲液,可以加入有机溶剂作为改性剂,以及加入表面活性剂,称作运行缓冲液。运行缓冲液使用前应脱气。电泳谱中各成分的出峰时间称迁移时间。胶束电动毛细管色谱中的胶束相当于液相色谱的固定相,但它在毛细管内随电渗流迁移,故容量因子为无穷大的成分最终也随胶束流出。其他各种参数都与液相色谱所用的相同。 一、对仪器的一般要求 所用的仪器为毛细管电泳仪。正文中凡采用毛细管电泳法测定的品种,其所规定的测定参数,除分析模式、检测方法(如紫外光吸收或荧光检测器的波长、电化学检测器的印加电位等)应按照该品种项下的规定外,其他参数如毛细管内径、长度、缓冲液的pH值、浓度、改性剂添加量、运行电压或电流的大小、运行的时间长短、毛细管的温度等,均可参考该品种项下规定的数据,根据所用仪器的条件和预试验的结果,进行必要的调整。 二、系统适用性试验 同高效液相色谱法项下,按各品种项下的要求,进行预试验,并调节各运行参数使达到规定指标,方可正式测定。 三、测定法 同高效液相色谱法项下。目前毛细管电泳仪的进样精度较高效液相色谱法低,定量分析时以用内标法为宜。