硫氰红霉素

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[color=#444444]最近 我在做猪肉中红霉素、林可霉素、替米考星遇到点问题，想请教同仁一些关键控制点，首先我用的标准是GB 20762 内标用的罗红霉素，发现不过柱内标跑步出来，林可霉素外标法回收率能做到60%多，请教同仁谢谢！[/color]

[color=#444444]最近 我在做猪肉中红霉素、林可霉素、替米考星遇到点问题，想请教同仁一些关键控制点，首先我用的标准是GB 20762 内标用的罗红霉素，发现不过柱内标跑步出来，林可霉素外标法回收率能做到60%多，请教同仁谢谢！[/color]

做依托红霉素中游离红霉素，系统适用性实验，依托红霉素峰难看，或出双头峰，怎么回事？

[size=4]请教各位抗生素发酵过程检测的高手，由于我公司现在在转产，即将上马红霉素。但是由于各方面的原因在红霉素发酵与提炼过程中红霉素效价检测的方法过于繁琐，不太适合批量检测。现在的检测方法大致是根据效价的高低，稀释倍数也就不相同，加入碳酸钾的量也不同，但是发酵液与碳酸钾的总量20ml,再加入乙酸丁酯20ml，摇匀，静置，分层后取上层液10ml，再加入HCL溶液10ml，摇匀，静置，分层后取下层溶液5ml，再加入5ml硫酸。摇匀后放入水浴锅中30min。最后，冷却至室温，利用分光光度计检测吸光度。得出的吸光度带入线性公式计算，再乘以稀释倍数就得到效价。我们也尝试了利用高效液相检测红霉素发酵液的效价，但是杂质峰比较难分开，而且理论值与测定的值相差比较大。[/size] 化学方法很是繁琐，不知道各位高手中有没有做过红霉素的，请教一下各位有没有其他快速的检测方法，能够提供高效液相的方法最好。在此本人深表谢意！

[size=4] 请教各位抗生素发酵过程检测的高手，由于我公司现在在转产，即将上马红霉素。但是由于各方面的原因在红霉素发酵与提炼过程中红霉素效价检测的方法过于繁琐，不太适合批量检测。现在的检测方法大致是根据效价的高低，稀释倍数也就不相同，加入碳酸钾的量也不同，但是发酵液与碳酸钾的总量20ml,再加入乙酸丁酯20ml，摇匀，静置，分层后取上层液10ml，再加入HCL溶液10ml，摇匀，静置，分层后取下层溶液5ml，再加入5ml硫酸。摇匀后放入水浴锅中30min。最后，冷却至室温，利用分光光度计检测吸光度。得出的吸光度带入线性公式计算，再乘以稀释倍数就得到效价。我们也尝试了利用高效液相检测红霉素发酵液的效价，但是杂质峰比较难分开，而且理论值与测定的值相差比较大。[/size] 化学方法很是繁琐，不知道各位高手中有没有做过红霉素的，请教一下各位有没有其他快速的检测方法，能够提供高效液相的方法最好。在此本人深表谢意！

[em09508]本人找了很久，都没有找到硫氰酸红霉素的红外标准图谱，在此请求各位大侠们，看看能否帮在下找找，不胜感激！英文名：Erythromycin Thiocyanate如果哪位大哥大姐能找到该物质的结构鉴定方面的文献，本人必当重谢！

请问红霉素A组分测定德过程中需要注意哪些事项？怎才能获得很哈很好的峰形和分离度。pH值流动相对分离有没有影响？样品中除红霉素A外还有没有其他较大的峰？

1．概述REAGEN™红霉素酶联免疫反应测试盒是用于检测水/尿/肉/鱼/虾中的红霉素的残留量。该试剂盒特点包括：Ø 高回收率（80-105%），快速（10-40分钟），多种样品低成本提取方法。Ø 高灵敏度（0.5ng/g或ppb），牛奶检测下限(2.5 ppb)。Ø 高重现性。Ø 快速的ELISA检测方法（只需不到2小时）。2．试剂盒原理REAGEN™红霉素酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有红霉素的药物抗原已经包被于微孔板上，在分析时，样品中药物特异性地与抗体相结合。如果药品中有药物存在，它将阻止包被于微孔板上的药物与抗体结合。当与样品药物相结合的药物抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，与经酶标记物相结合。反应后颜色深度与样品中红霉素的含量成反比。

中科院上海有机化学研究所刘文领衔的课题组立足于国内生物产业的现实需求，结合该所在化学合成方面的优势，致力于化学的理念促进现代生物技术的合理运用。他们与华东理工大学教授张嗣良等合作，在国家“863”项目“红霉素发酵工业用菌种改造和过程优化控制技术”中取得了重要突破，获得了一批具有自主知识产权、质量和产量得以明显提升的新型红霉素生产重组菌株。目前该成果已在湖北东阳光生化制药有限公司成功地进行了放大和试生产，其潜在经济、社会效益显著。在人类与致病微生物的斗争历史上，以抗生素为代表的微生物药物起到了至关重要的作用。红霉素是一类广泛使用、用于治疗革兰氏阳性菌感染的广谱大环内酯类抗生素。其临床应用领域的扩大和以阿奇霉素、罗红霉素、克拉霉素等为代表的新型半合成红霉素的出现，快速拉动了红霉素原料药的生产需求。过去几年，国际抗生素的市场规模大约在350亿～380亿美元之间，2012年有望达到450亿美元。据西方经济学家预测，2010年红霉素系列产品的全球市场总规模达70亿美元以上，市场前景乐观。抗生素发酵生产本身是高耗能产业，存在环境污染等问题，发达国家近年来正逐步把抗生素原料药的生产转移到中国等发展中国家。目前，我国是世界上红霉素生产和出口的第一大国，年产量超过7000吨。刘文介绍，由于许多抗生素具有十分复杂的化学结构，采用化学方法大量合成往往需要繁杂的工艺途径和苛刻的反应条件，在制药工业上的实际应用价值相当有限。采用微生物发酵是获取药用抗生素原料的主要途径，而我国作为世界上原料抗生素的主要生产大国，发酵单位偏低、产品质量偏低、缺乏自主知识产权的新型抗生素药物等一系列原因却严重制约了这一产业的发展。自红霉素作为一种广谱抗生素药物进入临床以来，以提高其产生菌种发酵单位为目的的遗传育种工作一直未曾停止。由于对微生物次级代谢产物生物合成的机制了解不多，常规诱变选育的方法存在周期长、效率低和随机性大的缺点，近年来在红霉素高产菌株的筛选方面收效不大。随着分子生物学技术的发展，国际上在红霉素产生菌种的基因工程改造方面进行了诸多尝试；然而，这些研究主要集中在与红霉素产生相关的底物供应或限制因素的改进方面，并未就红霉素生物合成的次生代谢途径做特异性的遗传修饰，因此，在解决红霉素生产中经常面临的有效组分偏低等问题时，缺乏有效的针对性。作为中科院“百人计划”、国家杰出青年基金获得者，自2007年以来，刘文带领课题组以包括红霉素、阿维菌素、林可霉素、泰乐菌素和螺旋霉素等大宗抗生素产品为对象，就我国抗生素原料药产业普遍存在的问题进行了分析，提出了以组分优化为切入点、采用遗传操作来控制体内合成的化学反应，从而改善产品质量和产量的研究思路。基于红霉素各组分结构的差异和相互转化的化学本质，他们运用组合生物合成技术的方法和原理对红霉素工业用高产菌株进行了针对性的遗传改良。通过发酵过程中后修饰酶的表达比例调整，他们将无效副产物组分B和C几乎完全转化为有效组分红霉素A，从而在提高了产品质量（基本消除主要的副产物）的同时，有效地提高了产品的产量达25%左右。部分研究成果发表在国际著名学术刊物《应用和环境微生物》上，引起国内外同行的关注。有关重组菌株在华东理工大学的协助下完成了中试，已在湖北宜都东阳光生化制药有限公司进行了放大和试生产，具备了工业化生产的价值。据厂方估计，相关生产技术若能得以推广使用，每年所产生的经济效益将达10亿元以上。这一重要成果还获得了上海市科技进步奖一等奖，并申请国家专利4项。有关专家认为，其在红霉素发酵工业方面的应用，将明显改善产品质量、简化下游纯化工艺；同时，缓解企业在环境污染方面所面临的压力。“抗生素在微生物体内的合成其本质是化学问题，化学过程和机制的解析可以使生物学技术的运用找到合适的目标并发挥更大作用。”刘文表示，“以上是我们构建的第一代红霉素生产重组菌株，主要侧重于品质（组分优化）的提升。目前我们侧重于产量提高的第二代重组菌株已完成中试，结合前两代优势、综合提高质量和产量的第三代重组菌株完成了小试，初步数据表明效果明显。”作为上海有机所开展红霉素菌种遗传改造工作的最初建议者，中国科学院院士戴立信高度关注面向国家重大需求的科学研究。“以汪猷先生为代表的有机所老一辈科学家早在上世纪50年代就开展了抗生素的研究工作，并在实际生产中得到应用，解决了当时有和无的问题。我国现在已经成为红霉素第一生产大国，对于技术创新的需求尤为迫切。”他思路非常清晰，“我听了刘文教授关于生物合成的学术报告后，又了解了一些红霉素生产企业的现状和需求，感觉在生物技术中融入化学的理念，应该有可能解决一些生产中的瓶颈问题并产生不错的效果。”“这是有机所在知识创新过程中，在面向国家需求、立足原始创新方面所做的一件有重要意义的研究工作，充分体现了学科交叉的优势。”中科院上海有机所所长丁奎岭表示，“我们以化学的思想促进生物技术的应用，以提高大宗医药抗生素产品的产量和质量为研究目标，所要解决的关键问题在抗生素生产中具有普遍意义。红霉素工业用生产菌种的遗传改造取得的系列创新技术在生产中成功实施，预示着这样的理念在其他抗生素发酵生产中将有着普遍的推广意义，有利于促进我国传统抗生素生产行业整体技术水平的提升。”

红霉素的红外图谱，单纯的样品的图谱，是跟红外谱库的编号167的谱图对得一致的，可是红霉素标准品的谱图却跟谱库的编号167的谱图对得不是很一致。样品跟标准品均经过前处理之后，两个图谱是一致的，可跟谱库的编号167的谱图对得不是很一致。那是要跟标准品图谱比对呢，还是跟标准谱库比对呢？

有没有在做红霉素液相的大神，最近做红霉素液相一点进展都没有，试了各种液相条件，都没有达到理想的效果，要不然就是不出峰，要不然就是浓度和峰面积不成比例。又跑去分析中心测，最后的结果说在210nm处没有吸收峰。分析中心的用的流动相是：A0.1%的甲酸+10mmol的乙酸铵，B甲醇，以梯度洗提的方式A：B=95：5到5：95.最后在210处没有任何峰了，，问问题可能出在了哪里

有没有专门检测红霉素的设备。

求求大家分享一下林可霉素和红霉素的洗脱液和洗脱梯度吧，我用的20762这个标准，林可霉素的加标回收率一直很低

2010版药典中，罗红霉素的含量检测项下的系统适用性下新增加的红霉素峰与罗红霉素峰的分离度不得小于15.0，我们试做了几次都不成功，请教各位前辈，是否可告知具体操作

在做红霉素肠溶片这批检品的组分A测定时，我是只做出了一个峰，但不能确定就是组分A啊，在22分钟左右出峰，然后我又继续跑了了100分钟，后面还是没有峰，我是按照05版药典配置的标准品溶液，配置好后室温放置了2个小时，咋就没出现峰呢，各位老师有做过的吗？

方法：HPLC基质：药品应用编号：103727化合物：红霉素、依托红霉素固定相：Spursil C18色谱柱/前处理小柱：Spursil C18 5u 250 x 4.6mm样品前处理：供试品：依托红霉素样品，5mg/mL，溶剂为乙腈。对照品：红霉素，0.15mg/mL，溶剂为乙腈。 分离度溶液：样品和红霉素浓度均为0.5mg/mL，溶剂为流动相。色谱条件：2015药典方法： 色谱柱： Spursil C18 250*4.6 mm，5 μm(Cat#：82006) 流动相： 磷酸二氢钾溶液（磷酸二氢钾3.4g+三乙胺2.75mL+水稀释至1000mL）：乙腈=65:35，用稀盐酸调节pH=3.0 流速： 1.0 mL/min 柱温： 30℃ 检测器： 195 nm 进样量： 20.0 uL 调整后方法： 色谱柱： Spursil C18 250*4.6 mm，5 μm(Cat#：82006) 流动相： 磷酸二氢钾溶液（磷酸二氢钾3.4g+三乙胺2.75mL+水稀释至1000mL），取650mL用乙腈定容到1000mL ，再用稀盐酸调节pH=3.0 流速： 1.0 mL/min 柱温： 30℃ 检测器： 195 nm 进样量： 20.0 uL文章出处：天津应用实验室关键字：依托红霉素、Spursil C18、2015药典、红霉素、依托红霉素、HPLC摘要：Spursil C18检测依托红霉素。谱图：2015药典结果http://www.dikma.com.cn/u/image/2016/01/13/1452666540639280.pnghttp://www.dikma.com.cn/u/image/2016/01/13/1452666544570343.pnghttp://www.dikma.com.cn/u/image/2016/01/13/1452666612135089.png调整方法后结果http://www.dikma.com.cn/u/image/2016/01/13/1452666663710368.pnghttp://www.dikma.com.cn/u/image/2016/01/13/1452666616666777.pnghttp://www.dikma.com.cn/u/image/2016/01/13/1452666630275876.png

罗红霉素按《中国药典》2005版分析，峰严重拖尾，拖尾因子在2点几，不知各位有什么经验，交流一下！

大家好，求助红霉素的液相色谱检测方法，急用，谢谢！[em61]

顶空做依托红霉素，按药典中平衡温度90度，平衡时间30分钟，平衡时间指的是加热时间吗？

过柱淋洗是12ml水，洗脱是9ml甲醇，氮吹到剩一点，回收率做出来只有1%，这是什么原因？标曲里面红霉素没有问题。

求红霉素红外光谱,2005年版的.发到我邮件jeskea@163.com或者在论坛附件中,谢谢!!!

如题,我配置了5个红霉素标准品浓度,衍生物是FMOC-Cl, 流动相乙腈：磷酸氢二甲结果HPLC跑出来面积差不多,位置也一样,根本无法算斜率了...配置标品过程没错啊...有谁遇到过这种情况吗？

[color=#ba4b01][size=3]维权声明：本文为[size=2]11093661[/size]原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。[/size][/color]在红霉素发酵过程中，对红霉素发酵液效价的检测，能够起到对红霉素发酵过程起到一定的监督作用，对发酵过程提供参考价值，对生产异常起到眼睛的作用。而传统化学检测法对红霉素的检测不仅程序繁琐，周期长，而且容易受操作者水平，熟练程度等各方面的限制，导致结果误差较大，不利于对生产的监控。红霉素发酵过程中有红霉素A，红霉素B，红霉素C等产生，其中红霉素A成分活性最大，而其它成分活性小，而且有一定副作用，而传统化学吸光度方法的检测并不能准确检测红霉素A的成分，而是有可能是检测出的含有红霉素所有的物质。这样就不能更好的对发酵生产中起到更为准确的数据依据。 红霉素发酵过程中如果应用液相色谱分析，能够准确分离出红霉素A，红霉素B，红霉素C等物质，对红霉素A的效价检测更加准确。但红霉素发酵液中各类物质复杂，如果用蒸馏水定容，再色谱分析，结果发现基线漂移比较厉害，这样就限制了红霉素发酵生产中高效液相色谱仪的应用。本人通过多方查找资料，多次做试验发现，如果在定容过程中能够对发酵液中的各类复杂物质能够分离出来的话，有利于解决色谱分析中基线漂移问题。发酵液中的各类复杂物质容易溶于水，而难溶于有机相中，而红霉素则相反。利于这个原理，在分析定容中如果用有机相定容，各类复杂物质被分离出来，而红霉素溶于有机相中，在将物质摇匀后离心分离，使分离效果更好，基线漂移的问题能够得到相当程度的解决。 这个方法纯属个人自己试验中，查阅资料中摸索得到的，过程中没有依靠任何已有的分析方法，当然传统的吸光度法除外。而本人所在单位因为即将改产才有这个机会做的实验。所以可能有错误之处，或与某些方法雷同。我个人纯属将我自己的经验方法提出与朋友分享，希望广大朋友不吝赐教。 本人所在城市为四川成都。有空多联系。

请问这是峰是啥情况啊，红霉素，50ng 响应值也很低[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/03/202003101700335382_4192_4031315_3.png[/img]

最近用高效液相（C18色谱柱 250mm * 4.6, 5um）做红霉素标准品时检测不到色谱峰。看文献大多数都用磷酸盐缓冲溶液和乙腈作为流动相，之后用紫外(210nm)检测。目前因为缓冲盐干扰其他组员的检测，所以不得不尝试用纯水（或者加了0.5%醋酸的纯水）和乙腈做流动相。但是奇怪的是进样品后即使用100%乙腈冲一个小时都见不到峰。我可以确定标准品，检测器和色谱仪器没有问题。当然样品浓度也够大。。有没有遇到这种情况的啊？？个人感觉是标准品一直留在色谱柱里没出来，但是觉得说不通啊！！晕！！！ 希望大家给指点下，先谢了~~~ 【目前手边没有其它C18色谱柱】再补充的详细些。色谱柱为Thermo scientific BDS Hypersil C18，比较新。楼下“老多”说的不是什么流动相都出峰也是我比较关心的。难道红霉素必须得用缓冲盐？

我做罗红霉素的时候,峰拖尾很严重.大家有什么方法解决啊