本人遇到了很难的一个问题,不知有没有人做过这方面的,急求赐教。仪器为ICS-5000,柱子为CarboPac MA1,检测器脉冲安培检测。待测物质为某表达蛋白里的卡那霉素残余!目前标准曲线建立好了,但是样品处理遇到困难。蛋白不能进柱子,会对柱子造成不可逆转的损坏(柱效降低),为了除去蛋白使用了下列方法,但无效。方法一 3K的膜过滤以除去分子量为6oooo多的蛋白,但是Lowry法检测发现流穿里蛋白浓度仍有十几ug/ml,这个浓度仍不适合上样。方法二,水解蛋白为氨基酸后,分析柱前加氨基酸捕获柱。但发现卡那霉素在我们的水解条件下会降解。这样检测就没有意义了,还是舍弃。注:卡那霉素在0.5N HCl 100度 1h即水解,我们的条件比这还要激烈,否则不能完全水解蛋白为氨基酸。请大家讨论讨论,给些建议。谢谢。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif
请大家讨论一下水产加工中庆大霉素、卡那霉素、链霉素的检测。是否必须检测?出口哪些国家需要检测?采用什么方法检测?是否有快速筛选方法?是否采用金标法检测?
(一)食品中氯霉素的限量1999年9月我国农业部发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》,规定了氯霉素在所有食品动物的可食用组织中不得检出。2002年3月被我国农业部关于发布《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》列为禁止使用的抗生素。欧盟、美国等国家规定动物源性食品中氯霉素的残留限量标准为“零容许量”,即不得检出。(二)测定氯霉素残留的方法①酶联免疫法。采用间接竞争ELISA筛选法,在酶标板微孔条上包被偶联抗原,样本中残留的氯霉素和微孑L条上包被的偶联抗原竞争抗氯霉素抗体,加入酶标二抗后,加入底物显色,样本吸光度值与其残留物氯霉素的含量成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中氯霉素的含量。该方法测定低限为氯霉素0.05/g/kg。⑦GB/T 22338--2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定——气相色谱一质谱法和液相色谱一质谱法测定水产品、畜禽产品和畜禽副产品中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素残留量。气相色谱一质谱法是样品用乙酸乙酯提取,4%氯化钠溶液和正己烷溶液液分配净化,再经弗罗里硅土(Florisil)柱净化后,以甲苯为反应介质,用N,O-I双(三甲基硅烷)三氟乙酰胺一三甲基氯硅烷(BSTFA+TMCS,99+1)于70℃硅烷化,用气相色谱/负化学电离源质谱测定,内标工作曲线法定量。该方法测定低限为氯霉素0.1/μg/kg,氟甲砜霉素和甲砜霉素0.5μg/kg。液相色谱一质谱法是针对不同动物源性食品中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素残留量,分别采用乙腈、乙酸乙酯一乙醚或乙酸乙酯提取,提取液用固相萃取柱进行净化,液相色谱一质谱/质谱仪进行测定,氯霉素采用内标法定量,氟甲砜霉素和甲砜霉素采用外标法定量。该方法对氯霉素的测定低限为0.1μg/kg;氟甲砜霉素和甲砜霉素为O.1/μg/kg。
现在在做土霉素的残留检测,参照农业部和CAC的标准,残留标示物是parent drug,而欧盟标准残留标示物是Sum of parent drug and its 4-epimer,那么有两个问题1、parent drug指的是原药,那么就是土霉素吧?2、如果按照欧盟标准,做残留检测,不仅要做土霉素本身的检测还要做土霉素的异构体,4-差向土霉素的检测吗?请各位大大发表下意见,谢谢!
我现在急需一篇关于春雷霉素残留量的分析方法,一定要是残留的分析的,当然一般都是在食用作物中的残留分析。
请问测定尿样中的氯霉素残留量时,氯霉素残留量稳定吗?哪位可以告知呀
如何测定蜂蜜中氯霉素的残留量?
而最近为防止蚊虫叮咬使用了利康液,但单位禁止使用氯霉素成分的东西,请问谁知道怎么么消除涂在体表氯霉素残留啊
想做一个多氧霉素在马铃薯上的残留试验,但是多氧霉素在无机相的溶解度很大,想用甲醇和水提取,请教如何浓缩或者更好的提取方法。
请问谁有动物性食品中氯霉素残留量的测定,谢谢
有谁做过关于井冈霉素残留的实验,能否将你查的资料传我看看!
求助:酶联免疫法测定鸡肝中氯霉素残留 该文章在《中国兽药杂志》2004 年10 月38 卷10 期
肉制品中土霉素、金霉素、四环素的残留检测,哪个回收率比较高,哪个比较较易检测?
有谁做过井冈霉素的残留分析试验,能提供检测方法也行,或相关类似维生素、蛋白质检测方法 谢谢
求《SC/T3015-2002 水产品中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定》哪位大虾有这份标准,发给小弟一份啊,谢谢!!邮箱:tinaly0888@sina.com
有人用液相做过甲砜霉素残留吗?能详细地说说吗?净化是如何做的吗?检测限是多少?
我在做畜禽肉中金霉素残留量的测定,可金霉素的谱图前总是有个小峰,这个小峰也是金霉素物质吗,没法确定啊
鸡体内氯霉素残留的检测方法及消除规律研究[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=83715]鸡体内氯霉素残留的检测方法及消除规律研究[/url]
马杜霉素在鸡组织中的残留检测现在有哪些标准?
气相色谱-串联质谱检测水产品中氯霉素残留量关键词:氯霉素;气相色谱-串联质谱;残留量;水产品 氯霉素 ( Chloramphenicol,以下简称CAP),是1947年从委内瑞拉链霉菌的培养滤液中分离出的结晶性抗菌素,是第一个采用化学合成法生产的抗生素,具有广谱抗生素的特点,对多种病原菌有较强的抑制作用。在水产养殖业中,常用氯霉素治疗各种传染性疾病, 但同时也带来了水产品中氯霉素残留的严重问题。研究表明,氯霉素有严重的毒副作用,能抑制人体骨髓造血功能,引起人类的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症、新生儿、早产儿灰色综合症等疾病,低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性。因此,氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视,欧盟、美国等均在法规中规定CAP残留限量标准为“零允许量”,即不得检出。目前常用GC-ECD、HPLC-UV、ELISA、GC-MS等仪器进行氯霉素残留量的检测,本实验采用串联质谱作为检测器,是最为先进的技术,可提高氯霉素定性与定量的准确性,二级质谱相对于一级质谱,其抗干扰能力更强,可有效消除单级质谱的离子信息少的问题,对样品前处理的要求教低,可准确反映样品中氯霉素的残留量。本次实验采用气相色谱-串联质谱法测定鱼肉中氯霉素,其灵敏度、稳定性、准确度均较高。1材料与方法1.1 材料1.1.1 试验对象:鱼肉组织。1.1.2 主要试剂与材料:乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈(Fisher Scientific公司,色谱纯);BSTFA(衍生化试剂-Supelco);C18固相萃取柱(安捷伦公司);氯霉素标准(SIGMA-ALDRICH)1.1.3 主要仪器:气相色谱—质谱联用仪(配电子轰击离子源,安捷伦公司);均质机(IKA);离心机(天美);固相萃取装置([font
据欧盟网站消息,4月25日欧盟发布(EU)No 418/2014号委员会实施条例,修订伊佛霉素(ivermectin)在动物肌肉组织中的最大残留限量。 新法规将动物肌肉组织中伊佛霉素的最大残留限量设置为30μg/kg。对于猪而言,伊佛霉素在脂肪中的残留限量涉及天然部分的皮与脂肪,不能用于产人消费类乳的动物。本法规自发布之日起第20天生效,并于2014年6月24日实施。
研究食品中金霉素残留的胶体金免疫层析法的快速检测方法。采用戊二醛交联法制备金霉素-BSA 免疫抗原,按照常规的免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗金霉素多克隆抗体。纯化后的抗体用ELISA 法检测其特异性和效价。采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为15nm 的胶体金,并制备抗体- 胶体金复合物,以组装检测试纸。通过可见的颜色深浅,检测样品中金霉素的残留量。结果表明:试纸条法的金霉素检测限为0.7μg/mL,在四环素质量浓度大于1.0μg/mL 时,与金霉素存在交叉反应性,其结果与高效液相色谱法测定的结果一致。本方法检测时间仅需5min,适用于食品中金霉素残留的快速检测。
各位老师: 水产品中氯霉素残留量的测定,采用液相色谱-串联质谱法,具体参考什么标准开展实验?
一、实验目的掌握GC—MS检测蜂蜜中氯霉素残留量的原理和方法。二、实验原理蜂蜜样品用水溶解后,用乙酸乙酯提取样品中残留的氯霉素,提取液浓缩后再用水溶解,经Oasis HLB固相萃取柱净化并硅烷化后,以GC—MS仪测定,外标法定量。三、仪器与试材1.仪器与器材气相色谱质谱仪(配有化学源)、固相萃取装置、自动浓缩仪、氮气吹干仪、振荡器、液体混匀器、真空泵(真空度应达到80kPa)、离心机等。2.试剂除特别注明外,实验中所用试剂均为分析纯,水为去离子水或蒸馏水。(1)常规试剂与溶液:甲醇、吡啶、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、六甲基二硅氮烷、三甲基氯硅烷、乙腈水溶液(1+7,体积比)。(2)Oasis HLB固相萃取柱(60mg,3mL):使用前分别用3mL甲醇和5mL水预处理,保持柱体湿润。(3)硅烷化试剂:将9份吡啶、3份六甲基二硅氮烷和1份三甲基氯硅烷混合。(4)氯霉素标准储备溶液(0.1mg/mL):称取适量的氯霉素标准物质(纯度≥99%),以甲醇配制,于4℃储存,可使用两个月。(5)氯霉素标准工作溶液:用空白样品提取液将氯霉素标准储备溶液分别配成氯霉素浓度为0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、l0ng/mL、50ng/mL和l00ng/mL的标准工作溶液,于4℃保存,可使用1周。3.买验材料2~3种蜂蜜,各l00g。四、实验步骤1.样品提取(1)取5.00g蜂蜜样品,置于50mL具塞离心管中,加入5mL水,于液体混匀器上快速混合lmin,使蜂蜜完全溶解。(2)加入15mL乙酸乙酯,在振荡器上振荡l0min,以3000r/min离心10min,吸取上层乙酸乙酯12mL,转入自动浓缩仪的蒸发管中,用自动浓缩仪在55℃减压蒸干,加入5mL水溶解残渣,得样品提取液。2.样品净化(1)将样品提取液以小于等于3mL/min的流速通过Oasis HLB固相萃取柱,待溶液完全流出后,用l0mL水分两次洗蒸发管和储液器并过柱,再用5mL,乙腈一水溶液洗柱,弃去全部淋出液,在65kPa的负压下减压抽干5min。(2)再以5mL乙酸乙酯洗脱,收集洗脱液于l0mL刻度离心管中。于50℃用氮气吹干仪吹干,待硅烷化。3.硅烷化处理加50μL硅烷化试剂于上述净化样品中,混合0.5~lmin,立即用正己烷定容至lmL。4.测定(1)将氯霉素标准工作溶液硅烷化处理后,于GC—MS仪上分析,以m/z 466为定量离子,以工作溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线。(2)同时,对样品净化液进行分析,并根据标准曲线查出样品净化液中氯霉素的浓度。(3)参考气相色谱一质谱条件:色谱柱为DB一5MS石英毛细管柱(30m×0.25mm,0.25μm);载气为氮气,纯度≥99.999%;流速为1.0mL/min;柱温,初始温度为70℃,然后以25℃/min程序升温至250℃,保持5min;进样量为lμL;进样方式为无分流进样;进样口温度为280℃;接口温度为280℃;负化学源为150eV;离子源温度为150℃;反应气为甲烷,纯度≥9.99%;反应气流量为40%。(4)平行试验和空白试验(除不称取试样外,均按上述步骤进行)。5.计算按下式计算样品中氯霉素的残留量:x=cV/m式中,x为样品中氯霉素的残留量,μg/kg;c为样品净化液中氯霉素的浓度,ng/mL;V为样品净化液的定容体积,mL;优为样品净化液所代表样品的质量,g。五、注意事项1.计算结果应扣除空白值。2.在用标准工作曲线对样品进行定量时,样品溶液中氯霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内,否则应对样品溶液进行稀释或浓缩。3.实验步骤中的色谱一质谱条件仅供参考,实际分析过程中应根据仪器的型号和实验条件,依据说明书,通过预备实验进行调整。4.在本实验的参考色谱条件下,氯霉素衍生物的保留时间为12.31min。
我最近在用LC/MS/MS做氯霉素类残留检测,包括氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考,但所有的样品中均出现了氟苯尼考的峰,面积有6000~10000左右,实在不明白问题出在哪?
甲砜霉素(Thiamphenicol,TAP)是一种广谱抗菌素,其结构类似于氯霉素,能抑制革兰氏阳性细菌、阴性细菌和一些厌氧微生物,广泛应用于水产养殖当中并且会造成残留。因此,研究和建立检测方法成了当务之急。本研究以多克隆抗体和免疫分析技术为基础,根据酶联免疫原理,建立了快速简便的水产品中的酶联免疫检测方法。另外,还建立了相应的仪器检测方法。首先通过混合酸酐法合成甲砜霉素与牛血清蛋白偶联物,构建甲砜霉素完全抗原。通过紫外扫描、SDS-聚丙烯凝胶电泳和免疫动物实验,证明了产物合成成功。通过免疫新西兰白兔,得到抗 TAP 的抗血清,抗血清效价高达 1×106。此抗血清分别经过饱和硫酸铵沉淀法、离子交换法和反向免疫亲和层析法纯化后,得到单一特异性的抗体,平均亲和常数为 7.8×10-9mol/L。以此抗体为基础,设计了间接竞争两步酶联免疫检测方法,并优化了缓冲液浓度、pH、吐温 20 浓度等参数。此酶联免疫检测试剂盒检测限为 0.06 ng/mL,血液和组织回收率为 80~110%。通过重复性、检测灵敏度、准确性等指标来评估此方法,并与气相色谱法进行了比较,结果表明,此间接竞争酶联免疫检测方法各项参数均能满足实际检测的需要。建立和优化了甲砜霉素残留的高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱-质谱法(HPLC/MS)和气相色谱-质谱法(GC/MS)的检测方法。方法的回收率分别为:HPLC 为78.6~95.4%;HPLC/MS 为 72.6~99.8%;GC/MS 为 85.6~101.5%,相对偏差均小于10% ,检出限分别为:HPLC 为 8.3μg/kg;HPLC/MS 为 0.1μg/kg;GC/MS 为 0.1μg/kg。结果表明,这些方法都能满足实际检测的需要。以高效液相色谱法(HPLC)为检测方法,研究了甲砜霉素在鲈鱼血液和可食性组织里的消除规律。鲈鱼单次口服 5 mg/kg(鱼体)和 30 mg/kg(鱼体)的甲砜霉素药物后,药物在血液中的达峰时间分别为 6 小时和 8 小时,药物平均滞留时间的分别为 11.1 小时和 11.9 小时;甲砜霉素在鲈鱼血液中的经时过程符合一级吸收二项指数方程:C=10.812(e-0.087t– e-0.274t),药物在鲈鱼血液中的吸收半衰期为 1.997 h,消除半衰期为 5.589h;连续 5d 口服 15 和 30 mg/kg(鱼体)的甲砜霉素,药物的吸收速率是一个常数,它在血液中的消除速率也是一个常数,这和单次口服结果一致,其消除速率方程分别为C血液=0.849e-0.494t ;C肌肉=1.461e-0.682t,药物在鲈鱼血液和组织中的的消除半衰期分别为1.016d 和 1.403d;通过 EMEA/CVMP/036/95 所规定的统计方法计算休药期,根据 95%的忍受限和最大残留限量,确定了5d和6d分别作为服用低剂量和高剂量药物的休药期。缩写符号说明ELISA 酶联免疫吸附测定法TAP 甲砜霉素TMS 四甲基硅烷BSTFA N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺TMCS [
求助标准一份:sn/t 0350-2012出口水果中赤霉素残留量的测定
一、实验目的 掌握氯化三苯四氮唑(TTC)法测定牛乳中抗生素残留的原理和方法。 二、实验原理 本法以氯化三苯四氮唑(TTC)作为抗生素残留量测定的指示剂。当乳中加入嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)后,如果乳中不含抗生素,则嗜热链球菌生长繁殖,可将无色的氧化型TTC变为红色的还原型TTC,所以乳变红色。相反,如果乳中有抗生素存在,则嗜热链球菌不能生长繁殖或生长繁殖受到抑制,无色氧化型的1vrC不能转化成红色还原型的TTC,乳不变色。 三、仪器与试材 1.仪器与器材 恒温培养箱、恒温水浴锅等。 2.菌种 嗜热乳酸链球菌(Streptococcus thermophilus)。 3.试剂与溶液 TTC溶液(4%):称取1g TTC,溶于5mL灭菌蒸馏水中,装入褐色无菌瓶内于4℃避光保存,临用时用无菌蒸馏水稀释5倍。如遇溶液变为黄色或淡褐色,则不能再用,需重新配制。 4.实验材料 2~3种鲜乳,各50mL。 四、实验步骤 1.菌液的制备 将菌种接种于灭菌脱脂乳(113℃无菌20rain)中,于(36±1)℃培养15h后,以灭菌脱脂乳1:1稀释,待用。 2.样品测定 (1)取鲜乳液样品9mL置于试管(18mm×180mm)中,80℃水浴加热5min,取出冷却至36℃。 (2)加入菌液1mL于乳液中,于(36±1)℃水浴培养2h后,再加0.3mL TTC溶液,(36±1)℃水浴培养30min后,观察颜色变化。 (3)如果样品变为红色,则表明抗生素残留为阴性;如果样品颜色不变,则应于水浴中保温继续培养30min后,观察,仍不变色者,则为阳性。 (4)在实验过程中,可以做阴性和阳性对照各一份。阳性对照管以8mL无抗生素的乳,添加1mL一定浓度的抗生素(如青霉素、庆大霉素)溶液、菌液和TTC溶液;阴性对照管为9mL无抗生素乳、菌液和TTC溶液。 3.结果报告 综合上述测定结果,并与对照管进行比较,分析样品中抗生素是否超标。 五、注意事项 1.嗜热乳酸链球菌菌种在脱脂乳培养基或在10%脱脂乳粉培养基中保存,并且不得含抗生素,每次转接间隔时间不能超过20d,否则可能会绝种。 2.在观察结果时,应该迅速并避免长时间光照。 3.TTC法对几种抗生素的检出限见表1。 表1 TTC法对几种卢一内酰胺类抗生素残留的检出限┏━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┓┃ 抗生素名称 ┃ 最低检出量/U ┃ 抗生素名称 ┃ 最低检出量/u ┃┣━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 青霉素 ┃ 0.004 ┃ 庆大霉素 ┃ O.4 ┃┃ 链霉素 ┃ 0.5 ┃ 卡那霉素 ┃ 3 ┃┗━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┛
在线求助:GB/T 23409-2009 蜂王浆中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法非常感谢!
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法定量分析水产品中的氯霉素(CAP)残留量[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=22826][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法定量分析水产品中的氯霉素(CAP)残留量[/url]